CN112964810A - 一种格列美脲片剂在pH1.2溶出介质中的溶出曲线的测定方法 - Google Patents
一种格列美脲片剂在pH1.2溶出介质中的溶出曲线的测定方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种格列美脲片剂具有区分力的溶出曲线的测定方法，通过筛选溶出介质、搅拌桨转速等试验，确定了有区分力的溶出曲线的测定方法。并通过专属性、溶液稳定性、滤膜影响因素等方面试验，优化了高效液相色谱法检测溶出度的工艺。本发明所述的溶出曲线测定方法，可以很好地评价仿制制剂与原研制剂的溶出行为差异，考察格列美脲片剂处方或工艺的变化对体外释放的影响，并在生物等效性试验中具有良好的体内外一致性，对于加速仿制药研发、保证药品质量和疗效有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种格列美脲片剂尤其是格列美脲分散片在 pH1.2溶出介质中溶出曲线的测定方法。
背景技术
格列美脲是第三代磺酰脲类口服降血糖药物，化学名称为1-[4-[2-(3-乙基-4-甲基-2-氧代 -3-吡咯啉-1-甲酰胺基)-乙基]-苯磺酰]-3-(反式-4-甲基环己基)-脲，适用于控制饮食、运动疗法及减轻体重均不能充分控制血糖的2型糖尿病，结构式如下所示。
格列美脲片由赛诺菲公司研发，2005年进口至中国，商品名为亚莫利(参比制剂)，亚莫利可降低空腹血糖和餐后血糖，主要作用机理是刺激胰岛β细胞分泌胰岛素，且可增加外周组织对胰岛素的敏感性，即其与β细胞膜上的磺脲类特异性受体相结合，阻断胰岛β细胞膜上ATP敏感性K+通道，引起β细胞膜电位改变而去极化，开放Ca2+通道，导致Ca2+内流，使胞液内Ca2+升高，促使胰岛素分泌；还可通过增加细胞内2,6-二磷酸果糖的浓度抑制肝脏葡萄糖的输出，改善胰外周组织对胰岛素的敏感性并减少肝脏对葡萄糖的输出；增加肌肉和脂肪细胞胞质膜葡萄糖转移分子的数量，从而刺激葡萄糖的摄取；葡萄糖摄取时增加激活糖基-磷脂酰肌醇-特异性磷脂酶C的活性，从而进一步刺激葡萄糖的代谢。
格列美脲的溶解度受pH值的影响较大，经测定，在pH1.2盐酸、pH4.0醋酸盐缓冲液、pH6.8 磷酸盐缓冲液(PBS)和pH7.8磷酸盐缓冲液(PBS)中的溶解度分别为7.0×10-3、2×10-2、1.0、 9.5μg/ml，在pH7.8磷酸盐缓冲液中的溶解度是pH1.2盐酸的1000倍，溶解度与pH曲线如图6所示。美国药典、欧洲药典及中国药典中，对于格列美脲片剂，仅控制其在pH7.8的磷酸缓冲液溶出介质中的溶出度(桨法、75转/分钟)，均要求15分钟的平均溶出量不低于85％。然而，这种快速释放的情形并不能代表产品内在品质，不适合用于仿制制剂处方筛选与工艺开发的过程中评估仿制制剂与原研制剂体外溶出行为的差异性，也难以体现生物等效性试验的体内外相关性。因此，开发具有区分力的溶出曲线，对于指导格列美脲仿制制剂的研发、评价制剂批内批间质量的一致性、评价药品处方工艺变更前后质量和疗效的一致性等有重要意义。
发明内容
本发明的目的是为格列美脲片剂提供一种具有区分力的溶出曲线的测定方法。
格列美脲的溶解度受pH值的影响较大，属于pH值依赖性药物制剂。发明人在研发过程中发现，格列美脲片剂在体外溶出试验常常出现以下情形，在溶解度高的介质中(例如pH7.8 的磷酸缓冲液)15min达85％的快速释放，在溶解度低的介质中(例如pH1.2盐酸溶液、pH6.8 磷酸盐缓冲液)120min都达不到85％的慢速释放。这两种情形因过于快速和过于慢速均不具备区分力。在pH7.2的磷酸盐缓冲液溶出介质中，格列美脲片剂30min的平均溶出度不低于85％，溶出速度也过快，区分度相对较差；制剂在30-45分钟溶出度达到85％的溶出曲线，虽有一定的区分度，但生物等效性试验结果显示体内外相关性仍不理想。发明人经大量研究后偶然发现，当制剂在45～60min溶出达85％，且溶出曲线无拐点和突释，这样的曲线既不慢、又不快，最能代表产品内在品质，不仅能评估仿制制剂与原研制剂体外溶出行为的差异性，也能体现生物等效性试验的体内外相关性，是最具区分力的溶出曲线。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种格列美脲片剂体外溶出曲线的测定方法，包括以下步骤：
步骤(1)溶出介质的配制：以含有十二烷基硫酸钠的pH为1.2的盐酸溶液作为溶出介质。
步骤(2)溶出方法：采用桨法，分别量取步骤(1)中的溶出介质置于干燥溶出杯中，升温，待溶出介质温度35-40℃，转速为40-65转/分钟，于每个溶出杯中投入待测样品，计时，经不同的时间点时分别取溶液，进行溶出度的检测。
在一些实施例中，所述的格列美脲片剂可以为格列美脲片、格列美脲分散片；规格为1-2mg。
在一些实施例中，所述的步骤(1)中，所述的溶出介质含有0.04％-0.1％十二烷基硫酸钠。
在一些实施例中，所述的步骤(1)中，含有0.04％-0.1％十二烷基硫酸钠的pH1.2的盐酸溶液的配制方法(以1000ml为例)为：用量筒量取浓盐酸7.65ml用水稀释至1000ml，再加入 0.4-1.0g十二烷基硫酸钠，搅匀。在一些实施例中，当所述的格列美脲片剂的规格为1mg时，步骤(1)中的溶出介质为含有0.04％-0.05％十二烷基硫酸钠的pH1.2的盐酸溶液。
在一些实施例中，当所述的格列美脲片剂的规格为2mg时，步骤(1)中的酸性溶出介质为含有0.09％-0.10％十二烷基硫酸钠的pH1.2的盐酸溶液。
在一些实施例中，所述的步骤(2)中，溶出介质的体积为250ml-1000ml，优选900ml。
在一些实施例中，所述的步骤(2)中，溶出介质的温度优选37℃±0.5℃。
在一些实施例中，所述的步骤(2)中，转速为50-65转/分钟。
在一些实施例中，所述的步骤(2)中，于每个溶出杯中投入6片样品。
在一些实施例中，所述的步骤(2)中，经不同的时间点为经5、10、15、30、45、60、 90分钟。
在一些实施例中，所述的步骤(2)中，分别取溶液，用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液5-7ml，取续滤液作为待测溶液。
在一些实施例中，步骤(2)采用高效液相色谱法检测溶出情况，按照外标法计算溶出度。
其中，所述的高效液相色谱法色谱条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)(50:50)；
检测波长：228nm；
流速：1.0ml/min；
进样量：20-50μL。在一些实施例中，流动相的配制方法为：①称取磷酸二氢钠0.5g置烧杯中，加水溶解并稀释至500ml，混匀，用磷酸调节pH值至2.5，得磷酸盐缓冲溶液；②取磷酸盐缓冲溶液500ml、乙腈500ml(二者比例为50:50))，置1000ml烧杯中，混合均匀，经0.45μm 混合微孔滤膜过滤，并超声2～3分钟脱气。
在一些实施例中，高效液相色谱法进一步包括：
对照品溶液：精密称取格列美脲对照品约20mg，置200ml量瓶中，加80％乙腈溶液适量，超声处理使溶解，放冷后加80％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密移取对照品储备溶液1-2ml，置100ml容量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
溶出度的计算公式为：
式中：P：供试品的溶出度；
A样：供试品溶液的主峰面积；
A对：对照品溶液的峰面积；
W对：对照品称样量，g。
累积溶出度Pi校＝Pi+(P1+P2+......+Pi-1)V2/V1
Pi为第i次测得的相对百分溶出度
Pi校为第i次经校正后的的相对百分溶出度
V1为溶出介质总体积
V2为各时间点固定取样体积
格列美脲片剂溶出曲线的相似性进行评价的方法：采用相似因子法，利用参比制剂与供试品在不同时间点测得的平均溶出度数据，计算相似因子f2，所述相似因子f2用于评价参比制剂与供试品之间的相似性。
参比制剂在不同时间点的溶出度为：步骤(2)以参比制剂为样品，制得参比制剂的供试品溶液，测定5、10、15、30、45、60、90分钟时的格列美脲参比制剂的溶出度；
供试品在不同时间点的溶出度为：步骤(2)以供试品为样品，制得供试品的供试品溶液，测定5、10、15、30、45、60、90分钟时的格列美脲供试品的溶出度。
相似因子f2的计算方法如下：
f2为供试品与参比制剂的相似因子
Rt为参比制剂平均累积释放度
Tt为供试平均累积释放度
n为取样点数。
本发明另一目的是提供一种格列美脲分散片中格列美脲及有关物质的含量测定方法，采用该方法，不仅可以准确地测定格列美脲的含量，还能够准确地测定格列美脲中杂质III、杂质II、杂质I的含量。
一种格列美脲片剂中含量及有关物质的测定方法，采用高效液相色谱法，色谱条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)(50:50)；检测波长：228nm；流速：1.0ml/min；进样量：20-50μL。
在一些实施例中，流动相的配制方法为：①称取磷酸二氢钠0.5g置烧杯中，加水溶解并稀释至500ml，混匀，用磷酸调节pH值至2.5，得磷酸盐缓冲溶液；②取磷酸盐缓冲溶液500ml、乙腈500ml(二者比例为50:50))，置1000ml烧杯中，混合均匀，经0.45μm混合微孔滤膜过滤，并超声2～3分钟脱气。
在一些实施例中，对照品溶液的配制方法为：取格列美脲杂质I、杂质II、杂质III对照品各适量，加80％乙腈溶液溶解并稀释制成每1ml中各约含20μg的溶液，作为杂质对照品贮备液。另取格列美脲对照品约l0mg，置100ml量瓶中，加杂质对照品储备液1ml，用80％乙睛溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
在一些实施例中，供试品溶液的配制方法为：将格列美脲片剂研碎成粉末，精密称取格列美脲片剂粉末，置量瓶中，加80％乙腈溶液适量，超声处理使溶解；取溶液，用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液5-7ml，取续滤液作为供试品溶液。
申请人发现：流动相中0.1％的磷酸二氢钠溶液的pH值影响溶剂乙腈的出峰位置，当0.1％的磷酸二氢钠溶液pH值为3.0时，溶剂乙腈出峰的位置与杂质II出峰位置有部分重合，影响杂质II含量测定的准确性，当0.1％的磷酸二氢钠溶液pH为2.5时，溶剂乙腈的出峰位置提前，与杂质II峰完成分离，不影响杂质II的测定。
与现有技术相比，本发明所取得的有益效果是：
(1)本发明中的方法，解决了现有技术中常规的溶出曲线无区分力，无法准确衡量格列美脲片剂尤其是格列美脲分散片仿制制剂与原研制剂体外溶出行为的差异的缺陷，，能更好的反映格列美脲分散片的内在品质，并具有良好的体内外相关性，对于提高生物等效性试验的效率，加快仿制药研发进程，丰富国内药物供应，降低医疗成本，有重要意义。
(2)该方法具有科学、耐用及可重现等特点，可以有效区分不同处方和工艺变量对格列美脲分散片的体外释放的影响，不仅可以用于仿制药与原研药的质量一致性评价工作，也可以为药品批间质量的一致性提供保证，进而保证药品的质量，达到质量与疗效的一致性。
附图说明：
图1：实施例1溶出曲线示意图。
图2：实施例2溶出曲线示意图。
图3：实施例8中流动相为乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)(50:50)系统适用性色谱图。
图3中：保留时间为4.177峰为杂质III的色谱峰；保留时间为5.614峰为杂质II色谱峰；保留时间为7.023峰为杂质I色谱峰；保留时间为18.062峰为格列美脲色谱峰。
图4：实施例8中流动相为乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.8)(50:50)系统适用性色谱图。
图4中：保留时间为4.314峰为杂质III的色谱峰；保留时间为5.728峰为杂质II色谱峰；保留时间为7.365峰为杂质I色谱峰；保留时间为18.584峰为格列美脲色谱峰。
图5：实施例8中流动相为乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至3.0)(50:50)系统适用性色谱图。
图5中：保留时间为4.141峰为杂质III的色谱峰；保留时间为5.635峰为杂质II色谱峰；保留时间为7.124峰为杂质I色谱峰；保留时间为18.285峰为格列美脲色谱峰。
图6：格列美脲溶解度与pH曲线。
具体实施方式
本发明公开了一种格列美脲片剂在pH1.2溶出介质中具有区分力的溶出曲线的测定方法，本领域技术人员可以借鉴本发明的内容，结合药物分析的相关原理，适当改进工艺参数来实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明范围内。
为了更好地理解本发明而不是限制本发明的范围，在本申请中所用的表示用量、百分比的所有数字、以及其他数值，在所有情况下都应理解为以词语“大约”所修饰。各个数字参数至少应被看作是根据所报告的有效数字和通过常规的四舍五入方法而获得的。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
格列美脲分散片2处方：格列美脲1.18％、乳糖49.41％、羧甲淀粉钠1.29％、羟丙纤维素1.53％、微晶纤维素43.54％、聚乙烯吡咯烷酮2.35％、硬脂酸镁0.70％。
格列美脲分散片3处方：格列美脲1.18％、乳糖86.53％、羧甲淀粉钠10.94％、微晶纤维素0.32％、聚乙烯吡咯烷酮0.54％、硬脂酸镁0.49％。
格列美脲分散片5处方：格列美脲1.18％、乳糖46.00％、羧甲淀粉钠3.53％、羟丙纤维素13.29％、微晶纤维素31.76％、聚乙烯吡咯烷酮3.53％、硬脂酸镁0.71％。
经生物等效性试验验证：格列美脲分散片3和参比制剂1的Cmax的几何均值比值的90％的置信区间为(78.69％-99.09％)，不符合等效范围的要求(80.00％-125.00％)。
试验例1：参比制剂在pH7.2和pH7.8磷酸盐缓冲液中的溶出曲线。
(1)参比制剂：参比制剂1、参比制剂2
(2)溶出曲线测定方法：
1、溶出介质的配制：
pH7.2磷酸盐缓冲液：取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾27.22g，加水溶解并稀释至1000ml)250ml与173.5ml的0.2mol/L氢氧化钠溶液(取氢氧化钠8.00g，加水溶解并稀释至1000ml)混合，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。
pH7.8磷酸盐缓冲液：取磷酸二氢钾0.58g与磷酸氢二钠22 34g，加水溶解并稀释至1000ml，用10％磷酸溶液或lmol/L氢氧化钠溶液调pH值至7.80士0.05。
2、溶出方法：
桨法；转速：50转/分钟；介质体积：900ml；温度：37.0℃±0.5℃；取样体积：7ml；
取样时间：(1)溶出介质为pH7.8的磷酸盐缓冲液：5、10、15、30min；(2)溶出介质为pH7.2的磷酸盐缓冲液：5、10、15、30、45min。
3、溶出度检测方法：
采用高效液相色谱法测定，高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(规格：4.6×150mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节 pH值至2.5)(50:50)；检测波长：228nm；流速：1.0ml/min；进样量：50μL；
流动相的配制(以配制1000ml为例)：量取磷酸盐缓冲溶液[称取磷酸二氢钠0.5g置烧杯中，加水溶解并稀释至500ml，混匀，用磷酸调节pH值至2.5]与乙腈500ml(二者比例为 50:50)，置1000ml烧杯中，混合均匀，经0.45μm混合微孔滤膜过滤，并超声2～3分钟脱气。
对照品储备溶液：精密称取格列美脲对照品约20mg，置200ml量瓶中，加80％乙腈溶液适量，超声处理使溶解，放冷后加80％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；
对照品溶液：精密移取对照品储备溶液1ml，置100ml容量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
测定法：取对照品溶液和待测溶液50μl分别注入液相色谱仪中，记录色谱图。
4、计算公式：
式中：P：供试品的溶出度；
A样：供试品溶液的主峰面积；
A对：对照品溶液的峰面积；
W对：对照品称样量，g。
累积溶出度Pi校＝Pi+(P1+P2+......+Pi-1)V2/V1
Pi为第i次测得的相对百分溶出度
Pi校为第i次经校正后的的相对百分溶出度
V1为溶出介质总体积
V2为各时间点固定取样体积
(3)溶出曲线结果
溶出曲线结果见表1。
参比制剂在pH7.2磷酸盐缓冲液30分钟时溶出度不低于85％，在pH7.8磷酸盐缓冲液 15分钟溶出度不低于85％，溶出曲线不具有区分力。溶出过快，难以体现参比制剂与仿制制剂的溶出行为差异。
表1：参比制剂在pH7.2和pH7.8磷酸盐缓冲液中的溶出曲线
试验例2：溶出介质的选择1
(1)参比制剂：参比制剂1
(2)检测方法：
1、溶出介质的配制(均以配制1000ml为例)：
含有0.5％吐温80的pH1.2的盐酸溶液：用量筒量取浓盐酸7.65ml用水稀释至1000ml，再加入5.0g吐温80，搅匀，即得。
按照上述方法分别配制含有0.7％吐温80的pH1.2的盐酸溶液、含有0.9％吐温80的pH1.2 的盐酸溶液。
2、溶出方法：分别量取溶出介质900ml置于干燥溶出杯中，加温，待溶出介质温度升至37℃±0.5℃后，转速为65转/分钟，于每个溶出杯中投入6片样品，开始运行并计时，经5、 10、15、30、45、60、90、120分钟时，取溶液，用滤膜(0.45μm)滤过，弃去初滤液7ml，取续滤液作为待测溶液。
3、溶出度检测方法：同试验例1。
4、计算公式：同试验例1。
(3)溶出曲线测定结果
试验结果见表2。
参比制剂在含有吐温80的pH1.2的盐酸溶液溶解性较差，几乎不溶，溶出2小时仍达不到30％，溶出曲线不具有区分力，根据《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》规定：一般在酸性溶出介质(pH1.0～3.0)中考察时间不超过2小时，因此含有吐温80的pH1.2 的盐酸溶液不适合做格列美脲片剂的溶出介质。
表2：试验例2溶出曲线结果
试验例3：溶出介质的选择2
(1)参比制剂：参比制剂1、参比制剂2
(2)检测方法
1、溶出介质的配制(均以配制1000ml为例)：
含有0.01％十二烷基硫酸钠的pH1.2的盐酸溶液：用量筒量取浓盐酸7.65ml用水稀释至 1000ml，再加入0.1g十二烷基硫酸钠，搅匀，得到含有0.01％十二烷基硫酸钠(简称：含有 0.01％SDS)的pH1.2的盐酸溶液。
按照上述方法分别配制含有0.03％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.04％SDS的pH1.2 的盐酸溶液、含有0.06％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.07％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.08％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.09％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.11％SDS 的pH1.2的盐酸溶液。
2、溶出方法：分别量取溶出介质900ml置于干燥溶出杯中，加温，待溶出介质温度升至37℃±0.5℃后，转速为65转/分钟，于每个溶出杯中投入6片样品，开始运行并计时，经5、 10、15、30、45、60、90、120分钟时，取溶液，用滤膜(0.45μm)滤过，弃去初滤液5ml，取续滤液作为待测溶液。
3、溶出度检测方法：同试验例1。
4、计算公式：同试验例1。
(3)溶出曲线测定结果
参比制剂1在含有0.01％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.03％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.04％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.06％SDS的pH1.2的盐酸溶液等溶出介质的溶出曲线见表3。
参比制剂1在含有0.01％SDS的pH1.2的盐酸溶液几乎不溶，溶出2小时仍达不到30％，在含有0.03％SDS的pH1.2的盐酸溶液中溶解性较差，2小时溶出不足85％，溶出过慢；在含有0.06％SDS的pH1.2的盐酸溶液中，参比制剂1在15min内达到了85％以上的溶出度，溶出过快。可见，上述三种溶出介质中，溶出曲线都不具有区分力，不能有效的评价原研制剂与仿制制剂在溶出行为上的差异。
在含有0.04％SDS的pH1.2的盐酸溶液中，参比制剂1在45min-60min溶出85％左右，溶出速度适中。
表3：试验例3中参比制剂1的溶出曲线
参比制剂2在含有0.07％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.08％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.09％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.11％SDS的pH1.2的盐酸溶液等溶出介质的溶出曲线见表4。
参比制剂2在含有0.07％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.08％SDS的pH1.2的盐酸溶液溶解性较差，2小时溶出仍达不到80％，溶出过慢；在含有0.11％SDS的pH1.2的盐酸溶液中，参比制剂2在15min内达到了85％以上的溶出度，溶出过快，可见，上述三种溶出介质中，溶出曲线都不具有区分力，不能有效的评价原研制剂与仿制制剂在溶出行为上的差异。
在含有0.09％SDS的pH1.2的盐酸溶液中，参比制剂2在45min-60min溶出85％，溶出速度适中。
表4：试验例3中参比制剂2的溶出曲线
试验例4：转速的选择：
(1)参比制剂：参比制剂1、参比制剂2。
(2)检测方法：
1、溶出介质的配制(均以配制1000ml为例)
含有0.04％SDS的pH1.2的盐酸溶液：用量筒量取盐酸7.65ml用水稀释至1000ml，再加入0.4g十二烷基硫酸钠，搅匀，得到含有0.04％SDS的pH1.2的盐酸溶液。
按照上述方法配制含有0.05％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.09％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.10％SDS的pH1.2的盐酸溶液。
2、溶出方法：转数为75转/分钟，其余同实施例1。
3、溶出度检测方法：同试验例1。
4、计算公式：同试验例1。
(3)溶出曲线结果
溶出曲线结果见表5。
当转数为75转/分钟时，参比制剂1在含有0.05％SDS的pH1.2的盐酸溶液、参比制剂2 在含有0.09％SDS的pH1.2的盐酸溶液、含有0.10％SDS的pH1.2的盐酸溶液等溶出介质中， 30分钟内溶出度达到85％，溶出曲线不具有区分力。
当转数为75转/分钟时，参比制剂1在含有0.04％SDS的pH1.2的盐酸溶液溶出介质中， 30-45分钟内溶出度达到85％，溶出曲线区分力较差。
表5：试验例4溶出曲线结果表
实施例1：溶出曲线的测定方法
(1)参比制剂和待测样品：
参比制剂：参比制剂1，规格1mg；
待测样品：格列美脲分散片1、格列美脲分散片2、格列美脲分散片3。
(2)检测方法：
1、溶出介质的配制(均以配制1000ml为例)：
含有0.04％SDS的pH1.2的盐酸溶液：用量筒量取盐酸7.65ml用水稀释至1000ml，再加入0.4g十二烷基硫酸钠，搅匀，得到含有0.04％SDS的pH1.2的盐酸溶液。
2、溶出方法：
采用桨法，分别量取溶出介质900ml置于干燥溶出杯中，升温，待溶出介质温度升至 37℃±0.5℃后，转速为65转/分钟，于每个溶出杯中投入6片样品，开始运行并计时，经5、 10、15、30、45、60、90分钟时，取溶液，用滤膜0.45μm滤过，弃去初滤液5ml，取续滤液作为待测溶液。
3、溶出度检测方法：同试验例1。
测定法：取对照品溶液和待测溶液50μl分别注入液相色谱仪中，记录色谱图。
4、计算公式：同试验例1
(3)溶出曲线结果：
溶出曲线结果见表6、图1。
格列美脲分散片1和格列美脲分散片2与参比制剂的f2因子大于50，溶出曲线相似性，并且体内PK研究显示格列美脲分散片1与参比制剂1生物等效。格列美脲分散片3与参比制剂的f2因子小于50，溶出曲线不相似性，且未能通过生物等效性评价。可见，通过此方法测定仿制药与参比制剂的溶出曲线，不仅具有较好的区分性，而且能很好的体现生物等效性试验的体内外相关性。
表6：实施例1溶出曲线(格列美脲分散片-1mg)
实施例2：溶出曲线的测定方法
(1)参比制剂和待测样品：
参比制剂：参比制剂2，规格2mg；
待测样品：格列美脲分散片4、格列美脲分散片5、格列美脲分散片6。
(2)检测方法：
1、溶出介质的配制(均以配制1000ml为例)：
含有0.1％SDS的pH1.2的盐酸溶液：用量筒量取浓盐酸7.65ml用水稀释至1000ml，再加入1.0g十二烷基硫酸钠，搅匀，得到含有0.1％SDS的pH1.2的盐酸溶液。
2、溶出方法：转速为50转/分钟，其余同实施例1。
3、溶出度检测方法：对照品溶液如下，其余同实施例1。
对照品溶液：精密移取对照品储备溶液2ml，置100ml容量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
4、计算公式：同试验例1。
(3)溶出曲线测定结果：
溶出曲线结果见表7、图2。
表7：实施例2溶出曲线(格列美脲分散片-2mg)
格列美脲分散片4和格列美脲分散片5与参比制剂的f2因子大于50，溶出曲线有相似性，体内PK研究显示格列美脲分散片4符合生物等效性试验一致性评价的要求。格列美脲分散片6与参比制剂的f2因子小于50，溶出曲线不相似，且未通过生物等效性评价。通过此方法测定仿制药与参比制剂的溶出曲线，具有较好的区分性和体内外相关性。
实施例3：溶出曲线的测定方法
(1)参比制剂和待测样品：同实施例1。
(2)检测方法：
1、溶出介质的配制(均以配制1000ml为例)：
含有0.05％SDS的pH1.2的盐酸溶液：用量筒量取盐酸7.65ml用水稀释至1000ml，再加入0.5g十二烷基硫酸钠，搅匀，得到含有0.05％SDS的pH1.2的盐酸溶液。
2、溶出方法：同实施例2。
3、溶出度检测方法：同实施例1。
4、计算公式：同实施例1。
(3)溶出曲线结果：
溶出曲线结果见表8。
表8：实施例3溶出曲线(格列美脲分散片-1mg)
格列美脲分散片1和格列美脲分散片2与参比制剂的f2因子大于50，溶出曲线有相似性，格列美脲分散片3与参比制剂的f2因子小于50，溶出曲线无相似性，通过此方法测定仿制药与参比制剂的溶出曲线，不仅具有较好的区分性，而且能很好的体现生物等效性试验的体内外相关性。
实施例4：溶出曲线的测定
(1)参比制剂和待测样品：同实施例2。
(2)检测方法：
1、溶出介质的配制(均以配制1000ml为例)：
含0.09％SDS的pH1.2的盐酸溶液：用量筒量取浓盐酸7.65ml用水稀释至1000ml，再加入0.9g十二烷基硫酸钠，搅匀，得到含有0.09％SDS的pH1.2的盐酸溶液。
2、溶出方法：同实施例1。
3、溶出度检测方法：同实施例2。
4、计算公式：同实施例1。
(3)溶出曲线测定结果：
溶出曲线结果见表9。
格列美脲分散片4和格列美脲分散片5与参比制剂的f2因子大于50，溶出曲线有相似性，生物等效性试验显示格列美脲分散片4符合一致性评价要求。格列美脲分散片6与参比制剂的f2因子小于50，溶出曲线无相似性，体内PK试验显示与原研制剂不一致。通过此方法测定仿制药与参比制剂的溶出曲线，具有较好的区分性和体内外相关性。
表9：实施例4溶出曲线(格列美脲分散片-2mg)
实施例5：高效液相色谱法专属性试验
(1)试验方法：
分别进样空白溶液1、空白溶液2、空白辅料溶液、对照品溶液。
空白溶液1：含0.04％十二烷基硫酸钠的pH1.2盐酸溶液；
空白溶液2：含0.10％十二烷基硫酸钠的pH1.2盐酸溶液；
空白辅料溶液1：称取空白辅料()约0.28g，加溶出介质(实施例1制备)3000ml，超声溶解，摇匀。
空白辅料溶液2：称取空白辅料约0.28g，加溶出介质(实施例2制备)3000ml，超声溶解，摇匀。
对照品溶液：实施例1制备的对照品溶液。
(2)试验结果：
结果见表10，溶剂和辅料对格列美脲分散片溶出度的测定没有干扰。
表10：实施例5专属性试验结果
实施例6、高效液相色谱法溶液稳定性
(1)试验方法：
对照品溶液：制备方法同试验例1。
空白辅料溶液1：制备方法同实施例5。
供试品溶液：称取对照品约20mg，置200ml量瓶中，加80％乙腈适量稀释至刻度，超声溶解，摇匀，放冷置室温，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，用空白辅料溶液1溶解并稀释至刻度，摇匀。
对照品溶液、供试品溶液在室温下密闭放置48小时，间隔进样，计算对照品溶液峰面积的RSD(标准规：RSD≤2.0％)和供试品溶液峰面积的RSD(标准规定RSD≤2.0％)。
(2)试验结果：
溶液稳定性结果见表11，在pH1.2盐酸溶液中，对照品溶液、供试品溶液在室温密闭放置48小时的峰面积的RSD均小于2.0％，说明对照品溶液、供试品溶液在室温密闭放置48 小时内稳定。
表11：实施例6溶液稳定性结果
实施例7：高效液相色谱法滤膜吸附性
(1)试验方法：
对照品储备液：制备方法同试验例1。
对照品溶液：制备方法同试验例1。
空白辅料溶液1：制备方法同实施例5。
分别量取对照品溶液8ml、10ml，置不同20ml量瓶中，加溶出介质(实施例1)稀释至刻度，摇匀，作为40％溶液(对照品溶液)和50％溶液(对照品溶液)。如下处理：(1)溶液不过滤直接进样；(2)经0.45μm微孔滤膜(津腾PES13mm直径)过滤，分别弃去初滤夜 1ml、3ml、5ml、7ml后进样。测定弃去不同体积初滤液后的续滤液与未过滤溶液的格列美脲峰面积的比值(若弃去不同体积初滤液后的续滤液与未过滤溶液测得格列美脲峰面积的比值为95.0％-105.0％，则认为滤膜对格列美脲分散片的含量测定没有影响。)。
精密量取对照品储备溶液2ml，置200ml量瓶中，加空白辅料溶液1稀释至刻度，摇匀，作为100％溶液；分别量取100％溶液8ml、10ml，置不同20ml量瓶中，加溶出介质(实施例1)稀释制刻度，摇匀，作为40％溶液(对照品+辅料溶液)和50％溶液(对照品+辅料溶液)。如下处理：溶液经0.45μm微孔滤膜(津腾PES13mm直径)过滤，分别弃去初滤夜1ml、3ml、 5ml、7ml后，测定弃去不同样品的续滤液与上述1中未过滤溶液的格列美脲峰面积的比值(若弃去不同体积初滤液后的续滤液与未过滤溶液测得格列美脲峰面积的比值为95.0％-105.0％，则认为滤膜对格列美脲分散片的含量测定没有影响。)
(2)试验结果:
滤膜吸附性结果见表12。
40％溶液的检测结果显示，当弃去初滤夜1ml、3ml时，回收率低于95％，提示滤膜对格列美脲有一定的吸附性。
弃去初滤液5-7ml后，回收率为95.6％-100.2％，因此，弃去初滤液5-7ml后对测定结果没有显著影响。
表12：实施例7滤膜吸附性结果
实施例8：高效液相色谱法流动相pH对格列美脲分散片含量及有关物质的影响
(1)色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：228nm；流速：1.0ml/min；进样量：20-50μL。
系统适用性：取格列美脲杂质I、杂质II、杂质III对照品各适量，加80％乙腈溶液溶解并稀释制成每1ml中各约含20μg的溶液，作为杂质对照品贮备液。另取格列美脲对照品约 l0mg，置100ml量瓶中，加杂质对照品储备液1ml，用80％乙睛溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液，取50μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序依次为杂质III、杂质II、杂质I和格列美脲。
(2)试验方法及结果
试验a：流动相：乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)(50:50)；系统适用性图谱见图3。
试验b：流动相：乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.8)(50:50)；系统适用性图谱见图4。
试验c：流动相：乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至3.0)(50:50)；系统适用性图谱见图5。
由图3可知：当流动相为乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)(50:50) 时，溶剂乙腈出峰的位置与杂质II出峰位置能完全分离，不影响杂质II含量测定；由图4可知：当乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.8)(50:50)时，溶剂乙腈出峰的位置与杂质II出峰位置部分重合，影响杂质II含量测定的准确性；由图5可知：当乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至3.0)(50:50)时，溶剂乙腈出峰的位置与杂质II出峰位置完全重合，影响杂质II含量测定的准确性。
因此，流动相优选乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)(50:50)。
Claims (10)
1.一种格列美脲片剂在pH1.2溶出介质中溶出曲线的测定方法，包括以下步骤：
步骤(1)溶出介质的配制：以含有十二烷基硫酸钠的pH为1.2的盐酸溶液作为溶出介质；
步骤(2)溶出方法：采用桨法，分别量取步骤(1)中的溶出介质置于干燥溶出杯中，升温，待溶出介质温度35-40℃，转速为40-75转/分钟，于每个溶出杯中投入待测样品，计时，经不同的时间点时分别取溶液，进行溶出度的检测。
2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述的格列美脲片剂可以为格列美脲片、格列美脲分散片；规格为1-2mg。
3.如权利要求1-2任一所述的检测方法，其特征在于，所述的步骤(1)中，所述的溶出介质为含有0.04％-0.1％十二烷基硫酸钠的pH1.2的盐酸溶液。
4.如权利要求1-3任一所述的检测方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，转速为50-65转/分钟。
5.如权利要求1-4任一所述的检测方法，其特征在于，经不同的时间点为经5、10、15、30、45、60、90分钟。
6.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，当所述的格列美脲片剂的规格为1mg时，步骤(1)中的溶出介质为含有0.04％-0.05％十二烷基硫酸钠的pH1.2的盐酸溶液。
7.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，当所述的格列美脲片剂的规格为2mg时，步骤(1)中的酸性溶出介质为含有0.09％-0.10％十二烷基硫酸钠的pH1.2的盐酸溶液。
8.如权利要求1-7任一所述的检测方法，其特征在于，分别取溶液为分别取溶液，用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液5-7ml，取续滤液作为待测溶液。
9.如权利要求1-8任一项所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)采用高效液相色谱法检测，按照外标法计算溶出度；其中，所述的高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)(50:50)；检测波长：228nm；流速：1.0ml/min；进样量：20-50μL。
10.一种格列美脲片剂中含量及有关物质的测定方法，采用高效液相色谱法，色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.1％磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)(50:50)；检测波长：228nm；流速：1.0ml/min；进样量：20-50μL。
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| CN103006594A (zh) * | 2012-12-15 | 2013-04-03 | 迪沙药业集团有限公司 | 一种格列美脲组合物及其制备方法 |
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