CN113069434A - 一种枸橼酸托法替布控释胶囊及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及药物控释制剂领域，针对枸橼酸托法替布普通制剂使用时血药浓度波动大的问题，提供一种枸橼酸托法替布控释胶囊，胶囊内容物包括速释微丸和缓释微丸，速释微丸与缓释微丸的比例为(1‑4):(6‑9)，速释微丸的填充剂包括微晶纤维素MCC、乳糖和润湿剂水，缓释微丸由丸芯包缓释衣而成。本发明还提供上述枸橼酸托法替布控释胶囊的制备方法。本发明将药物制成骨架型速释微丸与膜控型缓释微丸，按一定比例组合在一起，制成控释胶囊，经大鼠体内药动学试验表明，该控释胶囊与其原料药及其片剂相比，既起效迅速，又延长了药物作用时间，体内血药浓度更平稳，ACU更高，有效降低了血浓波动，利于降低药物毒副作用，提高治疗效果。

Description

一种枸橼酸托法替布控释胶囊及其制备方法
技术领域
本发明涉及药物控释制剂领域，尤其是涉及一种枸橼酸托法替布控释胶囊及其制备方法。
背景技术
枸橼酸托法替布，又名枸橼酸托法替尼，化学名3-[(3R,4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]哌啶-1-基]-3-氧代丙腈枸橼酸盐。由辉瑞制药开发的枸橼酸托法替布片于2012年11月6日被美国食品和药物监督管理局(FDA)批准上市，用于对氨甲喋呤治疗反应不足或不耐受的中度至重度活动性类风湿性关节炎(RA)成人患者的治疗。托法替布以细胞内信号转导通路为靶点，直接作用于细胞因子网络核心部分，是治疗类风湿性关节炎的重要药物。2016年2月23日，美国FDA批准枸橼酸托法替布缓释片上市申请，适应证同其普通片。目前国内有超过40余家药企申报了枸橼酸托法替布片的仿制药。CN104622827A(中国专利申请号201510098064.4，华邦)公开了一种托法替布片剂及其制备方法，所述片剂选用了流动性、压缩成形性好的直压乳糖和微晶纤维素作为稀释剂和干粘合剂，并采用工艺简单的粉末直接压片法制备，工艺简单，省时节能，制备得到的托法替布片组合物质量可控，并确保了产品的稳定性，该文献方法的一个示例性片剂配方中包含：托法替布5份、直压乳糖40份、微晶纤维素50份、交联羧甲基纤维素纳2份、硬脂酸镁2份，该片剂采用粉末直接压片法制备。但是RA的治疗往往需长期用药，甚至终身用药，普通常释制剂及缓释制剂，非恒速释药，血药浓度波动大，副反应大，治疗效果较差。药物控释制剂可以克服这一缺点，但目前对枸橼酸托法替布控释制剂的研究较少。
发明内容
本发明为了克服枸橼酸托法替布普通制剂使用时血药浓度波动大，提供一种枸橼酸托法替布控释胶囊及其制备方法，将枸橼酸托法替布制成控释胶囊，并进行药动学研究，降低血浓波动和副反应，提高治疗效果，提高患者依从性。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种枸橼酸托法替布控释胶囊，胶囊内容物包括速释微丸和缓释微丸，速释微丸与缓释微丸的质量比为(1-4):(6-9)，速释微丸包括填充剂微晶纤维素MCC、乳糖和润湿剂，缓释微丸由丸芯包缓释衣而成。作为优选，速释微丸与缓释微丸的质量比为1:9。
作为优选，速释微丸还包括崩解剂羧甲基淀粉钠CMS-Na，润湿剂为水，速释微丸的处方和质量比为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:羧甲基淀粉钠CMS-Na:水＝(1-1.5):(5-19):(6-12):(0.2-1):(19-30)。作为进一步优选，速释微丸的处方和质量比为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水＝1.24:5.92:11.84:1.00:24.6。
作为优选，缓释微丸的包衣材料选自乙基纤维素EC、Eudragit RL和Eudragit RLPO包衣中的一种，包衣增重7％-22％。作为进一步优选，缓释微丸的包衣材料为乙基纤维素EC，包衣增重7.33％。
作为优选，缓释微丸的丸芯的处方和质量比为枸橼酸托法替布:MCC:水＝(8-12):(180-200):(210-230)。作为进一步优选，缓释微丸的丸芯的处方和质量比为枸橼酸托法替布:MCC:水＝10:190:220。
作为优选，控释胶囊在水及pH1.0-7.5的缓冲液中释放度差异因子f1小于15，相似因子f2大于50。
一种上述枸橼酸托法替布控释胶囊的制备方法，包括以下步骤：
1)采用挤出-滚圆法制备速释微丸：按处方称取枸橼酸托法替布、填充剂和崩解剂，混合均匀，加润湿剂，混合制备湿软材，将湿软材加入挤出-滚圆微丸机，挤出、滚圆，制得湿微丸，干燥，取出过16-30目筛选丸，得速释微丸；
2)制备缓释微丸：用步骤1)的挤出-滚圆法制备丸芯，对丸芯进行流化包衣，制备成缓释微丸；
3)将速释微丸与缓释微丸按比例混合，填充胶囊，制备枸橼酸托法替布控释胶囊。
作为优选，挤出-滚圆微丸机的操作参数为：气源压力0.1-0.2mpa，挤出频率40.00-60.00Hz、滚圆频率20.00-40.00Hz、滚圆时间2-4min，50-70℃干燥，取出过16-30目筛选丸。
作为优选，所述包衣为EC包衣，制备方法为：取EC加入乙醇中，静置溶胀使其溶解，得EC包衣液，将丸芯置于流化床内，预热至25-35℃，喷包衣液包衣至包衣增重达规定要求，干燥。作为进一步优选，包衣参数为蠕动泵转速0.5rpm、风机频率33Hz、进风温度29℃、雾化压力0.5MPa。
作为优选，枸橼酸托法替布控释胶囊的检测色谱条件为Waters SunFire C18色谱柱(4.6×150mm，5μm)；Phenomenex AJO-4287C18保护柱芯(4×3.0mm，5μm)；流动相为甲醇-水(40:60)；紫外检测器检测；检测波长289nm；体积流量1mL·min-1；柱温30℃；进样量20μL。
因此，本发明具有如下有益效果：(1)选择微丸为胶囊内容物，与片剂相比，微丸具有以下优点：为多单元给药系统，口服胃肠道分布范围广，刺激性小，体内药动学个体差异小，生物利用度高；受消化道输送食物节律影响小，释药速率恒定性好；流动性好，产量大，适合于产业化生产；(2)本发明通过将药物制成骨架型速释微丸与膜控型缓释微丸，按一定比例组合在一起，制成控释胶囊，经大鼠体内药动学试验表明，该控释胶囊与其原料药及其片剂相比，既起效迅速，又延长了药物作用时间，体内血药浓度更平稳，ACU更高，有效降低了血浓波动，利于降低药物毒副作用，提高治疗效果；(3)本发明对制备的枸橼酸托法替布控释胶囊在胃肠道不同pH介质中释放度进行测定，并采用国际上通用的差异因子和相似因子分析，表明本控释胶囊释放不受介质pH的影响，在胃、肠中均可获得恒定释放，并通过体外释放与体内吸收的相关性分析，表明体内-体外相关性好，本试验建立的体外溶出度试验方法有可能预测其体内行为。
附图说明
图1是枸橼酸托法替布对照品溶液(A)、供试品溶液(B)、阴性对照液(C)的HPLC图；
图2是实施例1制备的枸橼酸托法替布控释胶囊体外释放度曲线；
图3是实施例1制备的枸橼酸托法替布控释胶囊在pH介质中的三维释放图；
图4是血浆中枸橼酸托法替布分析物HPLC图；
图5是大鼠口服给药后血药浓度-时间曲线(n＝6)；
图6是枸橼酸托法替布控释胶囊体内外相关性曲线。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案做进一步说明。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的，实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
一、仪器
Waters e2695高效液相色谱仪、2489UV/Vis Detector，美国Waters公司；ZRC-8ST智能溶出度测定仪，上海黄海药检仪器有限公司；JW挤出-滚圆微丸机、DLP-MINI多功能流化造粒包衣机，常州市智阳机械设备有限公司；SQP型电子天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；TGL-16C高速离心机，上海安亭科学仪器厂；2E-179277涡旋振荡器,美国Vortex-Genie公司等。
二、试药
枸橼酸托法替布(批号160109-178146，含量99.6％)，浙江震元制药有限公司；枸橼酸托法替布对照品(批号160322，纯度≥99.0％)，沈阳东星医药科技有限公司；枸橼酸托法替布片(批号X99288，Pfizer Manufacturing Deutschlang GmbH)；Eudragit RL PO、Eudragit RS PO、Eudragit NM 30D，均为Germany Evonik Nutrition and Care GmbH)；甘素钠、EC M70、柠檬酸三乙酯、滑石粉、甲基纤维素(MC)、MCC SH-101、乳糖、CMS-Na、低取代羟丙基纤维素(L-HPC)等均为药用；柠檬黄、乙醇：食用；甲醇：色谱纯。
三、动物
雄性SD大鼠，体重范围200～250g[上海斯莱克实验动物有限责任公司，生产许可证号：SCXK(沪)2017-0005]。
四、实施例
总实施例
一种枸橼酸托法替布控释胶囊的制备方法，包括以下步骤：
1)采用挤出-滚圆法制备速释微丸：按枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水＝(1-1.5):(5-19):(6-12):(0.2-1):(19-30)的质量比称取试剂，将橼酸托法替布、MCC、乳糖和CMS-Na混合均匀，加润湿剂水混合制湿软材至“团而不黏，裂而不散”，将湿软材加入挤出-滚圆微丸机，操作参数：气源压力0.1-0.2mpa，挤出频率40.00-60.00Hz、滚圆频率20.00-40.00Hz、滚圆时间2-4min，挤出、滚圆制得湿微丸，50-70℃干燥，取出过16-30目筛选丸，得速释微丸；
2)制备缓释微丸：丸芯处方的组成和质量比为枸橼酸托法替布:MCC:水＝(8-12):(180-200):(210-230)，用步骤1)的挤出-滚圆法制备丸芯；
包衣材料选自乙基纤维素EC、Eudragit RL和Eudragit RL PO包衣中的一种，EC包衣的制备方法为：取EC逐渐加入乙醇中，静置溶胀使溶解，得EC包衣液，将丸芯置于流化床内，预热至25-35℃左右，喷包衣液包衣，至包衣增重达7％-22％，干燥，得缓释微丸，包衣参数：蠕动泵转速0.5rpm、风机频率33Hz、进风温度29℃、雾化压力0.5MPa；
Eudragit RL、Eudragit RL PO包衣的制备方法为：取Eudragit缓慢加入一半体积的乙醇中，搅拌至完全溶解；将抗黏剂、色淀、柠檬酸三乙酯逐渐加至剩余乙醇中，研匀，再以组织捣碎机高速剪切10min，得混悬液；将混悬液缓慢加至Eudragit溶液中，搅拌均匀，过80目筛，得包衣液。将丸芯置于流化床内，预热至30℃左右，喷包衣液包衣，至包衣增重达5％-19％，干燥，得缓释微丸，包衣参数：蠕动泵转速0.5rpm、风机频率33Hz、进风温度30℃、雾化压力0.2～0.3MPa；
3)将速释微丸与缓释微丸按质量比(1-4):(6-9)混合，填充胶囊，制备枸橼酸托法替布控释胶囊。
实施例1
一种枸橼酸托法替布控释胶囊的制备方法，包括以下步骤：
1)采用挤出-滚圆法制备速释微丸：按枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水＝1.24:5.92:11.84:1.00:24.6的质量比称取试剂，混合均匀，加润湿剂水混合制湿软材至“团而不黏，裂而不散”，将湿软材加入挤出-滚圆微丸机，操作参数：气源压力0.1mpa，挤出频率50.00Hz、滚圆频率30.00Hz、滚圆时间3min，挤出、滚圆制得湿微丸，60℃干燥，取出过16-30目筛选丸，得速释微丸；
2)制备缓释微丸：丸芯处方组成和质量比为枸橼酸托法替布:MCC:水＝10.0:190.0:220.0，用步骤1)的挤出-滚圆法制备丸芯；取EC逐渐加入乙醇中，静置溶胀使溶解，得5％EC包衣液，将丸芯置于流化床内，预热至30℃左右，喷包衣液包衣，至包衣增重达7.33％，干燥，包衣参数为蠕动泵转速0.5rpm、风机频率33Hz、进风温度29℃、雾化压力0.5MPa；对丸芯进行流化包衣，制备成缓释微丸；
3)将速释微丸与缓释微丸按质量比1:9混合，填充胶囊，制备枸橼酸托法替布控释胶囊。
实施例2
与实施例1的区别在于步骤1)中枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水的质量比为1.08:5.98:11.94:1.00:20.0。
对比例1
与实施例1的区别在于步骤1)中速释微丸的处方为枸橼酸托法替布:MCC:水的质量比为1.0:19.0:29.2。
对比例2
与实施例1的区别在于步骤1)中速释微丸的处方为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:水的质量比为1.0:13.0:6.0:19.0。
对比例3
与实施例1的区别在于步骤1)中速释微丸的处方为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水的质量比为1.0:9.5:9.5:19.0。
对比例4
与实施例1的区别在于步骤1)中速释微丸的处方为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水的质量比为1.0:9.4:9.4:0.2:21.0。
对比例5
与实施例1的区别在于步骤1)中速释微丸的处方为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水的质量比为1.0:9.3:9.3:0.4:21.0。
对比例6
与实施例1的区别在于步骤1)中速释微丸的处方为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水的质量比为1.0:9.2:9.2:0.6:21.0。
对比例7
与实施例1的区别在于步骤1)中速释微丸的处方为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水的质量比为1.0:9.1:9.1:0.8:21.0。
对比例8
与实施例1的区别在于步骤1)中速释微丸的处方为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水的质量比为1.0:9.0:9.0:1.0:21.0。
对比例9
与实施例1的区别在于步骤1)中速释微丸的处方为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水的质量比为1.0:8.9:8.9:1.2:21.0。
实施例3
与实施例1的区别在于步骤2)中缓释微丸的包衣处方为Eudragit RL(柠檬酸三乙酯:滑石粉:柠檬黄:乙醇＝25g:2.5g:9.0g:3.5g:360g，包衣增重5.19％。
实施例4
与实施例3的区别在于步骤2)中包衣增重6.33％。
实施例5
与实施例3的区别在于步骤2)中包衣增重8.44％。
实施例6
与实施例3的区别在于步骤2)中包衣增重10.44％。
实施例7
与实施例3的区别在于步骤2)中包衣增重14.90％。
实施例8
与实施例1的区别在于步骤2)中缓释微丸的包衣处方为Eudragit RL PO(柠檬酸三乙酯:滑石粉:柠檬黄:乙醇＝25g:2.5g:9.0g:3.5g:360g，包衣增重7.00％。
实施例9
与实施例8的区别在于步骤2)中包衣增重7.51％。
实施例10
与实施例8的区别在于步骤2)中包衣增重10.52％。
实施例11
与实施例8的区别在于步骤2)中包衣增重11.37％。
实施例12
与实施例8的区别在于步骤2)中包衣增重18.00％。
实施例13
与实施例8的区别在于步骤2)中包衣增重19.04％。
实施例14
与实施例1的区别在于步骤2)中包衣增重21.82％。
实施例15
与实施例1的区别在于步骤2)中包衣增重14.26％。
实施例16
与实施例1的区别在于步骤3)将速释微丸与缓释微丸按质量比2:8混合。
实施例17
与实施例1的区别在于步骤3)将速释微丸与缓释微丸按质量比3:7混合。
五、测试方法
1.枸橼酸托法替布控释胶囊色谱条件
Waters SunFire C18色谱柱(4.6×150mm，5μm)；Phenomenex AJO-4287C18保护柱芯(4×3.0mm，5μm)；流动相为甲醇-水(40:60)；紫外检测器检测；检测波长289nm；体积流量1mL·min-1；柱温30℃；进样量20μL。
2.溶液制备
2.1对照品溶液制备：精密称取枸橼酸托法替布对照品10mg，置于50mL量瓶中，加适量甲醇超声使溶解、放冷、稀释至刻度，制成质量浓度为200μg·mL-1的对照品贮备液。取对照品贮备液加甲醇稀释制成质量浓度为20μg·mL-1的枸橼酸托法替布对照品溶液。
2.2供试品溶液制备：精密称取枸橼酸托法替布控释胶囊适量(约相当于含枸橼酸托法替布10mg)，置于50mL量瓶中，加甲醇超声使溶解并稀释至刻度，过滤，取续滤液加甲醇稀释制成质量浓度为20μg·mL-1的供试品溶液。
2.3阴性对照液制备：按处方配制不含枸橼酸托法替布的空白辅料，按2.2方法制备阴性对照液。
3.枸橼酸托法替布控释胶囊HPLC方法学验证
3.1专属性试验：取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照液，按上述色谱条件测定，记录色谱图。结果，供试品溶液在与对照品溶液出峰位置有相同色谱峰出现，阴性对照液无干扰峰出现，枸橼酸托法替布保留时间为7.103min，表明方法专属性好。见附图1。
3.2线性关系考察：精密量取对照品贮备液适量，加甲醇制成质量浓度分别为0.01、0.05、0.1、0.2、1、2、8、16、20、30μg·mL-1的系列浓度溶液，进样测定(每一浓度均进行双样本分析)，以峰面积Y对浓度X进行线性回归，计算得回归方程Y＝38236X-2068，r＝1(n＝10)，线性范围为0.01～30μg·mL-1。
3.3稳定性、精密度、重复性试验：取对照品溶液，分别于1、2、3、4、8、24h进样测定，结果峰面积RSD为1.45％，表明枸橼酸托法替布在24h内稳定；取对照品溶液，连续进样6次，计算精密度，其峰面积RSD为1.05％，表明仪器精密度良好；取同一批号样品6份，按照2.2方法配制，进样测定，结果样品含量RSD为1.17％(n＝6)，表明方法重复性好。
3.4回收率试验：精密称取适量空白辅料9份，分别精密加入枸橼酸托法替布对照品适量各3份，按2.2方法加甲醇制备0.01、16、30μg·mL-1三种不同浓度溶液，进样测定。结果低、中、高浓度下的平均回收率分别为(99.5±1.22)％、(101.25±0.98)％和(102.56±1.88)％，RSD为0.93％(n＝3)，表明该测定方法准确可行。
4.枸橼酸托法替布控释胶囊的处方筛选、制备
4.1速释微丸
评价指标：药物30min内累积溶出90％以上，溶出越快越好。
速释微丸溶出度测定：分别精密称取速释微丸6份(每份约相当于含枸橼酸托法替布10mg)，置溶出杯中，照溶出度与释放度测定法(2015版《中国药典》四部通则9031第一法—桨法)装置，释放介质：水800mL；温度37±0.5℃；转速75r·min-1，依法操作。定时取样，每次10mL，即时补充同温介质10mL，经0.22μm滤膜滤过，精密量取续滤液，加流动相稀释至适宜浓度，按上述色谱条件测定，记录峰面积，代入标准曲线，计算各时间的溶出度。结果见表1。
表1枸橼酸托法替布速释微丸体外累积溶出百分率/％(n＝6)
Figure BDA0002972195990000091
由表1可知，使用MCC、乳糖作填充剂，制得微丸较仅以MCC为填充剂溶出快，且溶出速度与乳糖用量呈正相关；向MCC、乳糖中加入崩解剂CMS–Na后，溶出速度与CMS-Na用量呈正相关，当CMS-Na用量增加到5％时，继续增加用量，溶出度增加不再显著；增加药物用量，药物溶出加快。最佳速释微丸处方组成为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:CMS-Na:水＝1.24:5.92:11.84:1.00:24.6，15min即释放完全。
4.2缓释微丸
缓释微丸释放度测定：精密称取枸橼酸托法替布缓释微丸6份(每份约含枸橼酸托法替布10mg)，照4.1的方法操作，在规定时间取样测定。结果以Eudragit RL和Eudragit RLPO包衣，随着包衣材料用量增加，释药速度均逐渐减慢，但包各厚度的衣膜开始释药均较快，1h时释放均在65％以上，存在突释现象；24h时释放均在90％以上，释放均较完全。以EC包衣，微丸包衣增重14.26％、21.82％时释药均太慢，24h时分别释放33.76％和8.22％，释放均不完全；包衣增重7.33％时，1h时释放2.34％，12h时释放45.57％，24h时释放94.08％，释放较完全，达到理想的缓释效果，为缓释衣膜最佳处方。见表2。
表2枸橼酸托法替布缓释微丸体外累积释放百分率/％(n＝6)
Figure BDA0002972195990000101
4.3控释胶囊评价标准：参照2015年版《中国药典》四部通则《缓释、控释和迟释制剂指导原则》中“表征体外缓、控释制剂药物释放度时间点”选取原则，以2h累计释放度(记作Q2，考察药物是否有突释)，6、12、16h累计释放度(记作Q6、Q12、Q16，考察释药特性)，24h累计释放度(记作Q24，考察释药是否基本完全)作为指标，设计以释放度为基础的综合评分值，筛选控释胶囊最佳组成。综合评分Y值＝Q24-[(Q2-10)2+(Q6-25)2+(Q12-55)2+(Q16-75)2]1/2，在2、6、12、16、24h内累积释放度应分别满足约5％～15％，15％～35％，45％～65％，65％～85％，90％～100％，[(Q2-10)2+(Q6-25)2+(Q12-55)2]1/2+(Q16-75)2反映了2、6、12、16h时释放度的偏差，此偏差越小越好，24h应释放90％以上，Q24应越大越好，故Y越大越好。
释放度测定：取控释胶囊6粒(每粒约含枸橼酸托法替布10mg)，分别精密称定重量，按4.1的方法操作，在规定时间取样测定。结果枸橼酸托法替布速释微丸与缓释微丸以1:9混合，制得胶囊综合评分Y值最高，为84.70分，在2、6、12、16、24h时分别释放11.72％、31.91％、50.03％、66.64％、96.75％，分别满足5％～15％，15％～35％，45％～65％，65％～85％，90％～100％的设计要求，为最佳比例。见表3。
表3枸橼酸托法替布控释胶囊体外累积释放百分率/％(n＝6)
实施例 1 16 17
速释微丸:缓释微丸(质量比) 1:9 2:8 3:7
0.25h 3.46 12.36 23.38
0.5h 5.36 19.71 35.51
1h 8.68 27.06 38.56
2h 11.72 30.88 41.74
3h 17.59 35.35 46.27
4h 20.82 39.03 51.68
5h 25.95 42.74 54.43
6h 31.91 45.74 57.55
8h 37.98 51.46 69.68
10h 42.41 61.34 73.87
12h 50.03 67.09 77.82
16h 66.64 74.84 84.94
20h 79.42 85.76 93.3
24h 96.75 98.13 98.37
Y值 84.7 66.31 46.54
注：以下5-8的测试，若无特殊说明均以实施例1最佳处方、工艺制备的枸橼酸托法替布控释胶囊为测试对象。
5.拟合释放动力学方程，建立释药数学模型
将最佳处方、工艺制备的枸橼酸托法替布控释胶囊体外释放度数据(见图2)分别按零级、一级、Higuchi、Ritger-Peppas和Hopfenberg方程进行拟合，确定体外释放最佳模型，考察释放机制。结果枸橼酸托法替布控释胶囊以零级方程为最佳拟合模型，在24h内恒速释药；在Higuchi、Ritger-Peppas、Hopfenberg方程中，以Ritger-Peppas方程相关系数r为最大，药物释放机制符合该模型，其n＝0.7265，0.45＜n＜0.89，对于圆柱状骨架，为扩散、溶蚀双重释药机制，也称异常扩散。见表4。
表4释放动力学方程拟合
数学模型 方程 r值
一级方程 ln(1-Q)＝-0.1076t+0.1849 0.9114
零级方程 Q＝3.8588t+4.4994 0.9973
Higuchi Q＝192240t<sup>1/2</sup>-11.4350 0.9742
Hopfenberg Q＝1-(1.0084-0.0298t)<sup>2</sup> 0.9835
Ritger-Peppas Q＝0.0843t<sup>0.726</sup><sup>5</sup> 0.9964
6.枸橼酸托法替布控释胶囊在不同pH介质中释放度测定及相似性分析
为较好表现控释制剂在体内释放、吸收情况，结合人体消化道不同pH特点，模拟缓释制剂在消化道的运转情况，分别以水及pH1.0、3.6、5.0、6.8、7.5的缓冲液为释放介质，取控释胶囊6粒，照4.1的方法测定，绘制三维释放曲线图，并按下式计算控释胶囊在不同介质中释放的差异因子f1和相似因子f2。
Figure BDA0002972195990000121
Figure BDA0002972195990000122
其中n为取样时间点个数，Rt为参比制剂(或变更前产品)在t时刻的释放度值，Tt为试验批次(变更后样品)在t时刻的释放度值。
结果枸橼酸托法替布控释胶囊在不同pH介质中释放度差异因子f1均＜15，相似因子f2均﹥50，表明该控释胶囊在各pH条件下释放行为相似，与胃、肠道pH无关，在胃、肠道中释放行为一致。见图3、表5、表6。
表5枸橼酸托法替布控释胶囊在不同pH介质中释放度差异因子(f1)比较
pH 水 1.0 3.6 5.0 6.8
1.0 8.10
3.6 5.51 6.62
5.0 14.77 14.96 13.75
6.8 13.12 14.92 12.66 4.60
7.5 12.84 11.17 11.46 12.88 12.88
表6枸橼酸托法替布控释胶囊在不同pH介质中释放度相似因子(f2)比较
pH 水 1.0 3.6 5.0 6.8
1.0 76.70
3.6 83.54 80.78
5.0 63.14 59.81 65.82
6.8 66.79 61.95 67.76 84.45
7.5 69.57 67.94 70.82 62.90 66.06
7.枸橼酸托法替布控释胶囊在大鼠体内药动学研究
7.1给药方案：取健康雄性大鼠30只，分3组，分别口服给予0.9mg·kg-1枸橼酸托法替尼、枸橼酸托法替尼片、枸橼酸托法替尼控释胶囊。
7.2血样采集：分别于给药前(0h)、给药后0.5、1、4、8、24、48h于大鼠内眼眦静脉采血0.5mL，置肝素钠抗凝管中，4500r·min-1离心5min，取上层血浆，置-20℃贮存，备用。
7.3血浆处理：精密量取7.2项下血浆100μL加甲醇900μL，涡旋5min，10000r·min-1离心10min，取上清液，置-20℃贮存，备用。
7.4工作溶液配制：精密称取枸橼酸托法替布20mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解、稀释得质量浓度为2.0mg·mL-1的对照品储备液。精密量取对照品储备液适量，加甲醇稀释制成质量浓度分别为0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.2、2.0mg·mL-1的系列工作溶液。
7.5质控样品溶液配制：取7.2项下空白血浆(0h时血浆)100μL，加1.0mg·mL-1的工作溶液20μL、甲醇880μL，照7.3项下自“涡旋5min”起操作，得质控样品溶液。
7.6系列校正标样的配制：取7.2项下空白血浆100μL，分别加入7.4项下系列工作溶液20μL、甲醇880μL，照“7.3”项下自“涡旋5min”开始同法操作，得药物质量浓度为1～400μg·mL-1的系列校正标样。
7.7体内药物分析方法学验证：分别取7.3项下处理后的空白血浆及给药4h后血浆样品、7.4项下20μg·mL-1的工作溶液、7.5项下质控样品溶液，按1中所述色谱条件测定，记录色谱图。结果在本实验条件下枸橼酸托法替布峰形良好，内源性物质不干扰测定。见图4。
标准曲线绘制：取“7.6”项下系列校正标样，按“1”色谱条件测定，以峰面积A对校正标样中药物浓度C作线性回归，得回归方程A＝3 111.5C+1 624.4(r＝0.999 9，n＝11)，线性范围为1～400μg·mL-1，最低检出限为1μg·mL-1。
精密度、准确度、提取回收率、稳定性试验：配制质控样品溶液定量下限、低、中、高浓度(1、2、200、300μg·mL-1)各5份，按1中所述色谱条件进样测定，结果定量下限、低、中、高浓度质控样品日内精密度RSD分别为4.65％、3.62％、3.68％、4.91％，日间精密度RSD分别为4.25％、4.02％、4.03％、4.86％；准确度为97.6％～103.9％；低、中、高浓度质控样品提取回收率为(92.6±4.24)％、(91.9±5.54)％、(90.6±3.43)％；低、高质控样品室温放置24h、经3次冻融循环、-20℃保存30d、处理过样品在自动进样温度下放置8h，各浓度均值与标示浓度偏差均≤±6.9％，该分析方法符合生物样品分析要求。
7.8血药浓度测定：取7.3项下处理后的给药血浆样品按1所述色谱条件测定，记录峰面积，根据当日标准曲线计算各时间血浆中药物浓度。平均血药浓度-时间数据经DAS2.0软件处理，采用非房室模型方法计算受试制剂与参比制剂药动学参数。结果枸橼酸托法替布控释胶囊与其原料及片剂相比，起效更快，作用时间更长，血药浓度更平稳，生物利用度更高。见图5、表7。
表7大鼠体内的主要药动学参数(n＝6，
Figure BDA0002972195990000141
)
参数 枸橼酸托法替布 枸橼酸托法替布片 枸橼酸托法替布控释胶囊
AUC<sub>0-t</sub>/μg·mL<sup>-1</sup>·h 105.403±10.21 195.728±17.23 394.016±31.45
AUC<sub>0-￥</sub>/μg·mL<sup>-1</sup>·h 105.453±11.54 205.048±17.65 559.299±58.65
C<sub>max</sub>/μg·mL<sup>-1</sup> 19.10±2.21 39.44±4.43 13.65±1.43
T<sub>max</sub>/h 1±0.14 1±0.12 0.5±0.042
t<sub>1/2</sub>/h 2.760±0.32 5.358±0.57 10.167±1.21
MRT<sub>0-t</sub>/h 4.634±0.42 4.109±0.39 14.947±1.12
CL/L·h<sup>-1</sup>·kg<sup>-1</sup> 8.535±0.76 4.389±0.37 0.002±0.0001
8.体内外相关性研究
采用Wagner-Nelson法计算控释胶囊各时间点体内吸收分数Fa，以Fa对体外释放度x进行线性回归，得方程Fa＝1.004 3x+1.383 6，r＝0.999 3，表明该控释胶囊体内吸收与体外释放相关性良好。见图6。
六、结果分析
本发明探索枸橼酸托法替布控释制剂，选择微丸为胶囊内容物，与片剂相比，微丸具有以下优点：为多单元给药系统，口服胃肠道分布范围广，刺激性小，体内药动学个体差异小，生物利用度高；受消化道输送食物节律影响小，释药速率恒定性好；流动性好，产量大，适合于产业化生产。本试验通过将药物制成骨架型速释微丸与膜控型缓释微丸，按一定比例组合在一起，制成控释胶囊，经大鼠体内药动学试验表明，该控释胶囊与其原料药及其片剂相比，既起效迅速，又延长了药物作用时间，体内血药浓度更平稳，ACU更高，有效降低了血浓波动，利于降低药物毒副作用，提高治疗效果。
同时，本发明对制备的枸橼酸托法替布控释胶囊在胃肠道不同pH介质中释放度进行测定，并采用国际上通用的差异因子和相似因子分析，表明本控释胶囊释放不受介质pH的影响，在胃、肠中均可获得恒定释放，并通过体外释放与体内吸收的相关性分析，表明体内-体外相关性好，本试验建立的体外溶出度试验方法有可能预测其体内行为。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (8)

1.一种枸橼酸托法替布控释胶囊，其特征在于，胶囊内容物包括速释微丸和缓释微丸，速释微丸与缓释微丸的质量比为(1-4):(6-9)，速释微丸包括填充剂微晶纤维素MCC、乳糖和润湿剂，缓释微丸由丸芯包缓释衣而成。
2.根据权利要求1所述的一种枸橼酸托法替布控释胶囊，其特征在于，速释微丸还包括崩解剂羧甲基淀粉钠CMS-Na，润湿剂为水，速释微丸的处方及质量比为枸橼酸托法替布:MCC:乳糖:羧甲基淀粉钠CMS-Na:水＝(1-1.5):(5-19):(6-12):(0.2-1):(19-30)。
3.根据权利要求1所述的一种枸橼酸托法替布控释胶囊，其特征在于，缓释微丸的包衣材料选自乙基纤维素EC、Eudragit RL和Eudragit RL PO包衣中的一种，包衣增重7％-22％。
4.根据权利要求1或3所述的一种枸橼酸托法替布控释胶囊，其特征在于，缓释微丸的丸芯的处方及质量比为枸橼酸托法替布:MCC:水＝(8-12):(180-200):(210-230)。
5.根据权利要求2所述的一种枸橼酸托法替布控释胶囊，其特征在于，控释胶囊在水及pH1.0-7.5的缓冲液中释放度差异因子f1小于15，相似因子f2大于50。
6.权利要求1-5任一所述的一种枸橼酸托法替布控释胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)采用挤出-滚圆法制备速释微丸：按处方称取枸橼酸托法替布、填充剂和崩解剂，混合均匀，加润湿剂，混合制备湿软材，将湿软材加入挤出-滚圆微丸机，挤出、滚圆，制得湿微丸，干燥，取出过16-30目筛选丸，得速释微丸；
2)制备缓释微丸：用步骤1)的挤出-滚圆法制备丸芯，对丸芯进行流化包衣，制备成缓释微丸；
3)将速释微丸与缓释微丸按比例混合，填充胶囊，制备枸橼酸托法替布控释胶囊。
7.根据权利要求6所述的一种枸橼酸托法替布控释胶囊的制备方法，其特征在于，挤出-滚圆微丸机的操作参数为：气源压力0.1-0.2mpa，挤出频率40.00-60.00Hz、滚圆频率20.00-40.00Hz、滚圆时间2-4min，50-70℃干燥，取出过16-30目筛选丸。
8.根据权利要求6或7所述的一种枸橼酸托法替布控释胶囊的制备方法，其特征在于，所述包衣为EC包衣，制备方法为：取EC加入乙醇中，静置溶胀使其溶解，得EC包衣液，将丸芯置于流化床内，预热至25-35℃，喷包衣液包衣至包衣增重达规定要求，干燥。
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