CN112957532A - 一种用于牙种植的生物膜制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于牙种植的生物膜制备方法，具有如下步骤：取合格的供体皮肤为原料，去除皮下组织，取一定厚度的断层皮片；将断层皮片放入氯化钠溶液中处理，揭去表皮层以获得真皮基质；将真皮基质在十二烷基硫酸钠(SDS)溶液、胰蛋白酶溶液中进行超声波处理，破碎并去除细胞成分；取去细胞真皮基质，通过乙醇浸泡进行病毒灭活；进行冷冻干燥以获得去细胞真皮基质生物膜；将冻干后的生物膜进行封装，并辐照灭菌。本发明能够获得一种细胞外基质修复材料，克服了来源于异种材料的免疫原性及合成胶原膜的易降解性，为牙种植提供一种细胞外基质生物材料。

Description

一种用于牙种植的生物膜制备方法
技术领域
本发明涉及医学生物材料技术领域，具体的说是一种用于牙种植的生物膜制备方法。
背景技术
在口腔医学领域，修复牙列缺失或缺损的常用方法是牙种植，种植部位的骨量是种植成功的关键，如果种植部位存在牙槽嵴过低，骨组织缺损，影响种植体植入效果。
引导骨再生技术是利用一种生物膜，在骨缺损与牙龈软组织缺损区的骨质得到修复。目前国内使用的修复膜有瑞士的Bio-Gide可吸收生物膜、烟台正海生物科技有限公司的海奥口腔修复膜、国产博特医用胶原修复膜。其中Bio-Gide及海奥口腔修复膜来源于异种材料，存在一种免疫原性；博特医用胶原膜为合成胶原膜，使用中容易提前降解。
因此，目前牙种植中使用的生物膜存在一定免疫源性或易降解的问题，难以保证生物膜稳定作用。
发明内容
针对现有技术中存在的上述不足之处，本发明目的是提供一种用于牙种植的生物膜制备方法，以处理来源于人类组织的皮肤，获得一种细胞外基质修复材料，克服了来源于异种材料的免疫原性及合成胶原膜的易降解性，为牙种植提供一种细胞外基质生物材料。
本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：一种用于牙种植的生物膜制备方法，具有如下步骤：
S1，取皮：取合格的供体皮肤为原料，去除皮下组织，取一定厚度的断层皮片，包括表皮层和部分真皮层；
S2，去表皮层：将步骤S1所得的断层皮片进行裁剪后，放入氯化钠溶液中处理，揭去表皮层以获得真皮基质；
S3，超声波去细胞成分：将步骤S2所得的真皮基质在十二烷基硫酸钠(SDS)溶液、胰蛋白酶溶液中进行超声波处理，破碎并去除细胞成分；
S4，病毒灭活：取经过步骤S3处理后的去细胞真皮基质，通过乙醇浸泡进行病毒灭活；
S5，冷冻干燥：取经过步骤S4处理后的去细胞真皮基质，进行冷冻干燥以获得去细胞真皮基质生物膜；
S6，包装及辐照：将经过步骤S5处理后所得冻干后的生物膜进行封装，并辐照灭菌。
所述步骤S1采用鼓式取皮机或电动取皮刀进行处理，取0.3～0.6mm的断层皮片。
所述步骤S2中所用氯化钠溶液的浓度为1～2mol/L，断层皮片在氯化钠溶液中以30～37℃恒温震荡16～36h。
所述步骤S3在对真皮基质进行超声波处理时，首先将真皮基质放入5～20g/L的十二烷基硫酸钠(SDS)无菌生理盐水溶液中，在超声条件下室温处理0.5～4h，破碎细胞，并将细胞碎片清洗去除；
然后放入1～2.5g/L的胰蛋白酶无菌生理盐水溶液中，超声条件下清洗20～60min，进一步去除细胞成分。
所述步骤S4中对去细胞真皮基质进行病毒灭活时，将去细胞真皮基质用70％的乙醇浸泡30～60min。
所述步骤S5在进行冷冻干燥的具体流程为：
(1)处理温度由室温至-35℃进行调整，每分钟调整2.5℃，至-35℃时维持60min，真空设定为100Pa；
(2)处理温度由-35℃至-23℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至-23℃时维持12h，真空设定为100Pa；
(3)处理温度由-23℃至-15℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至-15℃时维持100min，真空设定为100Pa；
(4)处理温度由-15℃至-5℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至-5℃时维持100min，真空设定为100pa；
(5)处理温度由-5℃至20℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至20℃时维持60min，真空设定为0pa。
所述步骤S6采用双层隔菌袋对冻干后的生物膜进行封装，辐照灭菌的灭菌剂量为15～20KGy。
本发明的有益效果：本申请制备一种由人体组织来源的生物膜，将超声技术引入制备过程，使细胞成分去除彻底，胰蛋白酶能够增加胶原纤维间隙，提高其植入后血管化速度；使用独特的冷冻干燥技术，使制备的生物膜质地柔韧，便于使用；克服了来源于异种材料的免疫原性及合成胶原膜的易降解性，为牙种植提供一种细胞外基质生物材料。
附图说明
图1为本发明制备生物膜的流程示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
请参阅图1，
一种用于牙种植的生物膜制备方法，具有如下步骤：
S1，取皮：取合格的供体皮肤为原料，去除皮下组织，取一定厚度的断层皮片，包括表皮层和部分真皮层；
S2，去表皮层：将步骤S1所得的断层皮片进行裁剪后，放入氯化钠溶液中处理，揭去表皮层以获得真皮基质；
S3，超声波去细胞成分：将步骤S2所得的真皮基质在十二烷基硫酸钠(SDS)溶液、胰蛋白酶溶液中进行超声波处理，破碎并去除细胞成分；
S4，病毒灭活：取经过步骤S3处理后的去细胞真皮基质，通过乙醇浸泡进行病毒灭活；
S5，冷冻干燥：取经过步骤S4处理后的去细胞真皮基质，进行冷冻干燥以获得去细胞真皮基质生物膜；
S6，包装及辐照：将经过步骤S5处理后所得冻干后的生物膜进行封装，并辐照灭菌。
实施例2
请参阅图1，对实施例1作进一步详细说明和补充，所述步骤S1采用鼓式取皮机或电动取皮刀进行处理，取0.3～0.6mm的断层皮片，厚度的严格控制能够保证后续步骤的稳定进行，以获取合格的生物膜材料。
所述步骤S2中所用氯化钠溶液的浓度为1～2mol/L，断层皮片在氯化钠溶液中以30～37℃恒温震荡16～36h。
所述步骤S3在对真皮基质进行超声波处理时，首先将真皮基质放入5～20g/L的十二烷基硫酸钠(SDS)无菌生理盐水溶液中，在超声条件下室温处理0.5～4h，破碎细胞，并将细胞碎片清洗去除；由此能够将细胞破碎，方便将细胞素片清理干净；
然后放入1～2.5g/L的胰蛋白酶无菌生理盐水溶液中，超声条件下清洗20～60min，进一步去除细胞成分，胰蛋白酶能够增加胶原纤维间隙，提高其植入后血管化速度。
所述步骤S4中对去细胞真皮基质进行病毒灭活时，将去细胞真皮基质用70％的乙醇浸泡30～60min，能够有效杀死真皮基质中的病毒。
所述步骤S5在进行冷冻干燥的具体流程为：
(1)处理温度由室温至-35℃进行调整，每分钟调整2.5℃，至-35℃时维持60min，真空设定为100Pa；
(2)处理温度由-35℃至-23℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至-23℃时维持12h，真空设定为100Pa；
(3)处理温度由-23℃至-15℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至-15℃时维持100min，真空设定为100Pa；
(4)处理温度由-15℃至-5℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至-5℃时维持100min，真空设定为100pa；
(5)处理温度由-5℃至20℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至20℃时维持60min，真空设定为0pa。
所述步骤S6采用双层隔菌袋对冻干后的生物膜进行封装，辐照灭菌的灭菌剂量为15～20KGy。
实施例3
本申请制备一种由人体组织来源的生物膜，将超声技术引入制备过程，使细胞成分去除彻底，胰蛋白酶能够增加胶原纤维间隙，提高其植入后血管化速度；使用独特的冷冻干燥技术，使制备的生物膜质地柔韧，便于使用；克服了来源于异种材料的免疫原性及合成胶原膜的易降解性，为牙种植提供一种细胞外基质生物材料。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (7)

1.一种用于牙种植的生物膜制备方法，其特征在于，具有如下步骤：
S1，取皮：取合格的供体皮肤为原料，去除皮下组织，取一定厚度的断层皮片，包括表皮层和部分真皮层；
S2，去表皮层：将步骤S1所得的断层皮片进行裁剪后，放入氯化钠溶液中处理，揭去表皮层以获得真皮基质；
S3，超声波去细胞成分：将步骤S2所得的真皮基质在十二烷基硫酸钠(SDS)溶液、胰蛋白酶溶液中进行超声波处理，破碎并去除细胞成分；
S4，病毒灭活：取经过步骤S3处理后的去细胞真皮基质，通过乙醇浸泡进行病毒灭活；
S5，冷冻干燥：取经过步骤S4处理后的去细胞真皮基质，进行冷冻干燥以获得去细胞真皮基质生物膜；
S6，包装及辐照：将经过步骤S5处理后所得冻干后的生物膜进行封装，并辐照灭菌。
2.根据权利要求1所述的一种用于牙种植的生物膜制备方法，其特征在于：所述步骤S1采用鼓式取皮机或电动取皮刀进行处理，取0.3～0.6mm的断层皮片。
3.根据权利要求1所述的一种用于牙种植的生物膜制备方法，其特征在于：所述步骤S2中所用氯化钠溶液的浓度为1～2mol/L，断层皮片在氯化钠溶液中以30～37℃恒温震荡16～36h。
4.根据权利要求1所述的一种用于牙种植的生物膜制备方法，其特征在于：所述步骤S3在对真皮基质进行超声波处理时，首先将真皮基质放入5～20g/L的十二烷基硫酸钠(SDS)无菌生理盐水溶液中，在超声条件下室温处理0.5～4h，破碎细胞，并将细胞碎片清洗去除；
然后放入1～2.5g/L的胰蛋白酶无菌生理盐水溶液中，超声条件下清洗20～60min，进一步去除细胞成分。
5.根据权利要求1所述的一种用于牙种植的生物膜制备方法，其特征在于：所述步骤S4中对去细胞真皮基质进行病毒灭活时，将去细胞真皮基质用70％的乙醇浸泡30～60min。
6.根据权利要求1所述的一种用于牙种植的生物膜制备方法，其特征在于：所述步骤S5在进行冷冻干燥的具体流程为：
(1)处理温度由室温至-35℃进行调整，每分钟调整2.5℃，至-35℃时维持60min，真空设定为100Pa；
(2)处理温度由-35℃至-23℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至-23℃时维持12h，真空设定为100Pa；
(3)处理温度由-23℃至-15℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至-15℃时维持100min，真空设定为100Pa；
(4)处理温度由-15℃至-5℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至-5℃时维持100min，真空设定为100pa；
(5)处理温度由-5℃至20℃进行调整，每分钟调整1.5℃，至20℃时维持60min，真空设定为0pa。
7.根据权利要求1所述的一种用于牙种植的生物膜制备方法，其特征在于：所述步骤S6采用双层隔菌袋对冻干后的生物膜进行封装，辐照灭菌的灭菌剂量为15～20KGy。
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