CN219398361U - 一种引导组织再生的口腔修复膜和相关试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种引导组织再生的口腔修复膜和相关试剂盒。该口腔修复膜包括三层结构，依次为胶原蛋白疏松层、小肠黏膜下层(Small Instestinal Submucosa，SIS)复合层和膀胱基底膜致密层；所述SIS复合层包括多层SIS；所述SIS复合层和所述膀胱基底膜致密层均为脱细胞材料。该口腔修复膜使用方便，机械性能良好，厚度适宜，可降解。本实用新型的口腔修复膜临床用途广泛，可作为常用修补口腔软组织缺损及作为骨缺损区的保护膜。

Description

一种引导组织再生的口腔修复膜和相关试剂盒

技术领域

本实用新型属于生物医用材料技术领域，特别涉及一种引导组织再生的口腔修复膜和相关试剂盒。该引导组织再生的口腔修复膜可用于修复口腔软组织缺损及保护牙缺损区骨床。

背景技术

口腔颌面部外伤或肿癌切除手术会造成口腔黏膜较大面积缺损，口腔黏膜修复方法主要采用局部口腔黏膜瓣移植或断层皮片移植等自体组织修复。局部黏膜瓣移植是目前最理想的修复方法，但存在供区有限的缺点。而断层皮片虽然取材方便，供区充分，但由于缺乏有效的真皮成分，移植区皮片愈合后有不同程度的挛缩：断层皮片移植到口腔内显示了不同的角化过程，只能有效修复，但是达不到有效替代口腔黏膜的功能。另外，口腔内的潮湿环境易诱发皮片供区出现如疼痛、感染或形成肥大瘢痕等病变，甚至造成皮片泡软或因皮片感染而导致移植修复失败。过去曾经采用同种异体皮移植解决上述局部口腔黏膜瓣移植或自体断层皮片移植在口腔软组织缺损修复存在的缺陷，但因存在一定的排斥反应而移植失败。

严重牙槽骨吸收患者可通过引导骨再生技术，有效扩增骨量，恢复牙槽骨高度和丰满度，整个成骨质量的关键因素是生物膜屏蔽对软组织中纤维细胞的阻挡，即引导骨再生技术的核心。在引导骨再生技术植骨后自体软组织不足以包合骨组织的，若采取自体软组织移植，移植的软组织瓣容易因血运不畅而坏死。为避免以上情况的发生，可使用脱细胞材料制得口腔修复膜代替自体软组织填塞于软组织缺损部位，以血管化，屏障等诸多优点作为引导骨再生技术生物材料。

现有技术：

实用新型人张伟的授权公告号为CN 205073351 U中国专利公开了一种脱细胞基质源的口腔补片，它由生物膜基底层和具有一定孔隙的胶原蛋白疏松层组成。

实用新型人韩韦红的申请号201810958659.6中国专利公开了一种引导骨再生的复合膜及其制备方法，它由猪空肠经一系列处理多层横纵叠加的致密层和胶原蛋白溶液采用静电纺丝技术得到的疏松层复合组成。

现有技术的不足：

采用生物膜基底层和胶原蛋白疏松层制备脱细胞基质源口腔补片，由于基底层材料力学性能不足，而采用交联剂进行交联，交联剂的引入，会对人体产生潜在的毒副作用。采用处理后的猪空肠多层叠加作为致密层和胶原蛋白作为疏松层制备的引导骨再生的复合膜，致密层采用猪空肠材料制备的猪小肠黏膜下层(SIS)，SIS往往因含有粘多糖(透明质酸、硫酸软骨素、软骨素、硫酸肝素等)、蛋白多糖、糖蛋白和多种细胞生长因子会促进细胞在材料上的粘附、生长、分化和迁移，而导致不能很好的阻止周围组织如结缔细胞及上皮细胞长入骨缺损区，屏障效果不佳。

实用新型内容

本实用新型的目的在于克服现有技术的不足，提供一种使用方便、机械性能良好又不易引发感染，同时又能引导软组织再生和骨再生的口腔修复膜。

本实用新型采用的技术方案为：一种引导组织再生的口腔修复膜，包括三层结构，依次为胶原蛋白疏松层、小肠黏膜下层(Small Instestinal Submucosa，SIS)复合层和膀胱基底膜致密层；所述SIS复合层包括多层SIS；所述SIS复合层和所述膀胱基底膜致密层均为脱细胞材料。即所述SIS复合层夹在所述胶原蛋白疏松层与所述膀胱基底膜致密层之间，为中间层。

在一些实施方式中，所述膀胱基底膜致密层为单层膀胱基底膜。

在一些实施方式中，所述脱细胞材料为猪源性材料。

在一些实施方式中，所述脱细胞材料为牛源性材料、羊源性材料、马源性材料中的任意一种。

在一些实施方式中，所述胶原蛋白疏松层为涂敷在所述SIS复合层上的0.1％～5％浓度的胶原蛋白溶液干燥层，即所述胶原蛋白疏松层通过将0.1％～5％浓度的胶原蛋白溶液涂敷在所述SIS复合层上干燥生成。进一步地，所述干燥为冷冻干燥。

在一些实施方式中，所述SIS复合层中的相邻SIS之间的位置关系为纵横交替叠加连接。

进一步地，所述SIS复合层中的SIS的层数为2～5层。

在一些实施方式中，所述SIS复合层和所述膀胱基底膜致密层的复合方式为直接物理叠加。

进一步地，为物理叠加后，压实，干燥。所述干燥为冷冻干燥。

在一些实施方式中，所述引导组织再生的口腔修复膜为膜片状结构，厚度为0.08～2mm。

进一步地，所述引导组织再生的口腔修复膜的长度为15～100mm，宽度为5～70mm。

另一方面，本实用新型还提供一种如上所述的引导组织再生的口腔修复膜的制备方法，包括以下步骤：

S1、所述SIS复合层和所述膀胱基底膜致密层的制备：取空肠、膀胱，去除粘膜层、浆膜层和肌层，分别得到小肠黏膜下层(SIS)和膀胱基底膜，均裁切成单片；然后，用过氧乙酸-乙醇溶液对所述SIS和所述膀胱基底膜进行病毒灭活；接着依次使用脱细胞溶液、碱溶液、高渗溶液和水，分别在超声条件下处理所述SIS和所述膀胱基底膜；最后，取多片所述SIS以横纵交替的方式叠加铺于所述膀胱基底膜上，压实后，冻干，得到复合在一起的所述SIS复合层和所述膀胱基底膜致密层；所述脱细胞溶液含有蛋白酶；

S2、胶原溶液的制备：将胶原蛋白溶解，配制为0.1％～5％浓度的胶原蛋白溶液；

S3、将所述步骤S2得到的胶原溶液涂敷于所述步骤S1得到的所述SIS复合层上，冻干得到所述引导组织再生的口腔修复膜。

在一些实施方式中，所述步骤S1中用到的蛋白酶为胰蛋白酶；所述碱溶液选自氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钾中的一种或多种；所述高渗溶液为4-8％的NaCl溶液，优选为5％的NaCl溶液。进一步地，所述脱细胞溶液为含有0.05％胰蛋白酶、0.4mmol/LEDTA-2Na的PBS配成的溶液，pH 6.5-7.5。所述碱溶液为0.03-0.05mol/L NaOH溶液，优选为0.04mol/L NaOH溶液。所述水为纯化水。

在一些实施方式中，所述步骤S1中用过氧乙酸-乙醇溶液对所述SIS和所述膀胱基底膜进行病毒灭活具体是：将SIS和膀胱基底膜置于过氧乙酸-乙醇溶液中进行病毒灭活50min到1.5h；所述过氧乙酸-乙醇溶液中含有0.1±0.05％过氧乙酸和8-15％乙醇。进一步地，所述步骤S1中用过氧乙酸-乙醇溶液对所述SIS和所述膀胱基底膜进行病毒灭活具体是：将SIS和膀胱基底膜置于过氧乙酸-乙醇溶液中进行病毒灭活1h；所述过氧乙酸-乙醇溶液中含有0.1％过氧乙酸和10％乙醇。

在一些实施方式中，采用已消毒的冻干模具装载需冻干的材料，并置于真空冷冻干燥机中冻干。

在一些实施方式中，所述步骤S1中用到的空肠、膀胱均来自猪、牛、羊、马中的任意一种。

在一些实施方式中，通过所述步骤S1-S3控制所述引导组织再生的口腔修复膜的厚度为0.08～2mm。

在一些实施方式中，还包括步骤S4、将所述引导组织再生的口腔修复膜裁成需要的大小，比如长度为15～100mm，宽度为5～70mm。

在一些实施方式中，在所述步骤S1中将得到的复合在一起的所述SIS复合层和所述膀胱基底膜致密层裁成需要的大小，比如长度为15～100mm，宽度为5～70mm。

第三方面，本实用新型公开了一种试剂盒，包括如上所述的引导组织再生的口腔修复膜。

与现有技术相比，本实用新型具有以下显著优点：使用方便，机械性能良好，厚度适宜，可降解。胶原蛋白疏松层吸液后可以紧密贴附组织；SIS复合层具有天然的三维孔隙结构，含有的VEGF、FGF-2、TGF-p等多种生长因子，可促进诱导细胞的增殖及分化，有利于实现快速血管化，促进缺损区的修复和再生；膀胱基底膜致密层屏障不需要的软组织长入缺陷区。本实用新型的口腔修复膜临床用途广泛，可作为常用修补口腔软组织缺损及作为骨缺损区的保护膜。

以下将结合附图对本实用新型的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本实用新型的目的、特征和效果。

附图说明

图1是本实用新型一种引导组织再生的口腔修复膜的剖面结构示意图。

图2是本实用新型一种引导组织再生的口腔修复膜中间层SIS复合层扫描电镜图。

图3是本实用新型一种引导组织再生的口腔修复膜中间层SIS复合层的脱细胞检测HE染色图。

具体实施方式

为了使实用新型实现的技术手段、创造特征、达成目的和功效易于明白了解，下结合具体图示，进一步阐述本实用新型。但本实用新型不仅限于以下实施的案例。

须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本实用新型可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本实用新型所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本实用新型所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。

实施例1：

一种引导组织再生的口腔修复膜的制备方法，具体步骤包括：

S1、中间层(SIS复合层)和下层(膀胱基底膜致密层)的制备

取猪空肠、猪膀胱，去除粘膜层、浆膜层和肌层，得到猪小肠黏膜下层(SIS)和膀胱基底膜，均裁切长度为160mm，宽度为100mm的单片。

将SIS和膀胱基底膜置于过氧乙酸-乙醇溶液中进行病毒灭活，其中过氧乙酸的浓度为0.1％，乙醇的浓度为10％，灭活1h。

将SIS和膀胱基底膜置于脱细胞溶液中，超声处理30min。脱细胞溶液为含有0.05％胰蛋白酶、0.4mmol/L EDTA-2Na的PBS配成的溶液，pH 6.5-7.5。

将SIS和膀胱基底膜置于0.04mol/L NaOH溶液中，超声处理30min。

将SIS和膀胱基底膜置于5％的NaCl溶液中，超声处理40min。

将SIS和膀胱基底膜置于纯化水中超声处理，每次5min，直至纯化水溶液pH至7.0-7.4。

取已消毒的冻干不锈钢模具(120mm×80mm)，将膀胱基底膜铺于不锈钢模具上。

取3片SIS以横纵交替的方式叠加铺于带有膀胱基底膜的不锈钢模具上，压框、压板压实。

将冻干模具置于真空冷冻干燥机中，冻干，得到复合在一起的SIS复合层和膀胱基底膜致密层。

S2、胶原溶液的制备

将胶原蛋白粉末溶解，配制溶度为1％的胶原蛋白溶液。

S3、复合膜的制备

将步骤S1获得的冻干样品裁切成模具大小，置于模具中，SIS复合层向上，将步骤S2制备好的胶原蛋白溶液均匀涂敷于SIS材料上，转移至冷冻干燥机中干燥，获得引导组织再生的口腔修复膜，如图1所示。

该引导组织再生的口腔修复膜包括三层结构，依次为胶原蛋白疏松层1、SIS复合层2和膀胱基底膜致密层3。SIS复合层2，夹在胶原蛋白疏松层1和膀胱基底膜致密层3之间，为中间层，包括多层SIS。由于经过步骤S1的处理，SIS复合层和膀胱基底膜致密层均为脱细胞材料。该引导组织再生的口腔修复膜的大小根据需要设定，比如：厚度为0.08～2mm，长度为15～100mm，宽度为5～70mm。

实施例2：

采用扫描电子显微镜扫描实施例1中步骤(1)提供的样品SIS面的表面结构。结果：实施例1中步骤(1)提供的样品SIS的三维结构完整，材料表面胶原纤维纵横交错排列，胶原纤维保留完好，未发现明显断裂纤维，有连通孔通入材料内部，如图2所示。

实施例3：

采用苏木素&伊红(HE)染色方法对实施例1中步骤(3)提供的口腔修复膜样品中SIS复合层进行石蜡包埋、沿长轴全层切片、HE染色、显微镜观察。结果：实施例1中步骤(3)提供的口腔修复膜样品的SIS复合层未见完整细胞核，无细胞残留，生物相容性良好，无免疫原性，如图3所示。

实施例4：

除实施例1中脱细胞材料采用猪源性材料——猪空肠、猪膀胱外，还可以是其他动物源性材料，比如牛、羊、马源性材料中的任意一种。胶原蛋白溶液的浓度也不限于实施例1中的1％，可以是其他浓度，比如0.1％～5％浓度的胶原蛋白溶液。

实施例5：

本实施例提供一种带有实施例1制备得到的引导组织再生的口腔修复膜的试剂盒。该试剂盒可能具有多种功能，其中一种功能是通过引导组织再生的口腔修复膜来修复口腔软组织缺损及保护牙缺损区骨床。

以上详细描述了本实用新型的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本实用新型的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本实用新型的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (8)

1.一种引导组织再生的口腔修复膜，其特征在于，包括三层结构，依次为胶原蛋白疏松层、SIS复合层和膀胱基底膜致密层；所述SIS复合层包括多层SIS；所述SIS复合层和所述膀胱基底膜致密层均为脱细胞材料；所述膀胱基底膜致密层为单层膀胱基底膜；所述脱细胞材料为猪源性材料。

2.如权利要求1所述的引导组织再生的口腔修复膜，其特征在于，所述胶原蛋白疏松层为涂敷在所述SIS复合层上的0.1％～5％浓度的胶原蛋白溶液干燥层。

3.如权利要求1所述的引导组织再生的口腔修复膜，其特征在于，所述SIS复合层中的相邻SIS之间的位置关系为纵横交替叠加连接。

4.如权利要求1所述的引导组织再生的口腔修复膜，其特征在于，所述SIS复合层中的SIS的层数为2～5层。

5.如权利要求1所述的引导组织再生的口腔修复膜，其特征在于，所述引导组织再生的口腔修复膜为膜片状结构，厚度为0.08～2mm。

6.如权利要求1所述的引导组织再生的口腔修复膜，其特征在于，所述引导组织再生的口腔修复膜的长度为15～100mm。

7.如权利要求1所述的引导组织再生的口腔修复膜，其特征在于，所述引导组织再生的口腔修复膜的宽度为5～70mm。

8.一种试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-7任一项所述的引导组织再生的口腔修复膜。