CN112946253A - 用于免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂及应用和产品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及免疫诊断领域，具体而言，提供了一种用于免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂及应用和产品。本发明提供的用于免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂，对固相载体封闭后，可以减少免疫检测过程中非特异性反应，显著降低免疫诊断检测中假阳性检出率。
Description
技术领域
本发明涉及免疫诊断领域，具体而言，涉及一种用于免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂及应用和产品。
背景技术
免疫诊断分析中通常都会利用封闭试剂来封闭固相载体上未包被特异性检测物的位点，以减少或消除固相载体上未包被位点与含可检测标记的物质之间发生非特异性结合而引起的可检测信号，从而减少背景值和假阳性率，提高检测特异性。封闭试剂中通常利用无关蛋白(又称惰性蛋白、封闭蛋白)在固相载体包被后，对未包被位点进行封闭，最常用的封闭剂有牛血清白蛋白，小牛血清，明胶，酪蛋白，脱/低脂奶粉等。封闭对于绝大部分免疫检测方法都是很必要的，尤其是间接法检测中封闭是必不可少的，因为间接法方法学本身就会存在较多的非特异性。
此外，实际应用中，封闭蛋白虽然能对固相载体进行封闭，但还是会出现个别假阳性等现象，如何降低假阳性率是现有技术中需要解决的问题。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种用于免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂。
本发明的第二目的在于提供上述封闭阶段处理剂在免疫比浊、ELISA、化学发光免疫分析、免疫层析中的应用。
本发明的第三目的在于提供一种免疫诊断试剂盒，该试剂盒准确性好，假阳性检出率低。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种用于免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂，包括至少一种阴离子表面活性剂。
进一步地，阴离子表面活性剂的浓度为0.005-0.5w/v％，优选为0.01-0.4w/v％，进一步优选为0.01-0.2w/v％。
可选地，所述阴离子表面活性剂选自硫酸酯型阴离子表面活性剂、羧酸盐型阴离子表面活性剂。
可选地，所述阴离子表面活性剂选自脂肪醇硫酸盐、N-酰基氨基羧酸盐。
可选地，所述阴离子表面活性剂选自十二烷基硫酸盐、月桂酰-N-甲基氨基乙酸盐、N-油酰基多羧酸氨基酸盐。
可选地，所述阴离子表面活性剂选自月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠、十二烷基硫酸钠。
进一步的，所述封闭阶段处理剂还包括缓冲试剂。
可选地，缓冲试剂包括组氨酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥缓冲液、氨-氯化铵缓冲液、ADA缓冲液、PIPES缓冲液、MOPSO缓冲液、BES缓冲液、MOPS缓冲液、TES缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液、EPPS缓冲液、Tricine缓冲液、Bicine缓冲液、TAPS缓冲液、BIS-tris缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液或TEA缓冲液。
可选地，缓冲试剂的浓度为5-100mM，进一步优选为10-50mM。
可选地，封闭阶段处理剂的工作pH为7-8.5，进一步优选为7-8，再进一步优选为7.2-7.6。
进一步地，封闭阶段处理剂还包括至少一种金属盐。
可选地，金属盐选自氯化钠、氯化钾。
可选地，金属盐的浓度为100-500mM，优选为100-300mM，进一步优选为150-300mM。
进一步地，封闭阶段处理剂还包括至少一种封闭蛋白。
可选地，封闭蛋白选自酪蛋白、BSA、明胶、水解明胶、胰蛋白胨、鱼明胶、小牛血清、低脂奶粉、脱脂奶粉。
可选地，封闭蛋白的使用浓度为足够量的，例如0.05-5w/v％BSA、5-30v/v％小牛血清、0.5-2w/v％鱼明胶、0.1-3w/v％酪蛋白、0.5-4w/v％胰蛋白胨。
进一步地，所述封闭阶段处理剂还包括至少一种糖。
可选地，糖选自蔗糖、葡聚糖、甘露糖醇或普鲁兰多糖。
可选地，糖的浓度为1-10w/v％，优选为2.5-8w/v％，进一步优选为4-6w/v％。
进一步地，所述封闭阶段处理剂还包括至少一种防腐剂。
可选地，防腐剂选自ProClin300、叠氮化钠。
可选地，防腐剂的浓度为0.1-3v/v％，优选为0.1-0.5v/v％。
进一步地，所述固相载体的材质例如是塑料、衍生化的塑料、磁性或非磁性金属、玻璃或硅。
可选地，所述固相载体的类型例如是微粒、珠子、试管、微孔滴定板、比色皿、膜、支架分子、滤纸、圆盘或芯片。
可选地，所述固相载体例如是磁性微粒、微孔滴定板、PVDF膜。
阴离子表面活性剂在制备免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂的用途。
可选地，阴离子表面活性剂的浓度为0.005-0.5w/v％，优选为0.01-0.4w/v％，进一步优选为0.01-0.2w/v％。
可选地，所述阴离子表面活性剂选自硫酸酯型阴离子表面活性剂、羧酸盐型阴离子表面活性剂。
可选地，所述阴离子表面活性剂选自脂肪醇硫酸盐、N-酰基氨基羧酸盐。
可选地，所述阴离子表面活性剂选自十二烷基硫酸盐、月桂酰-N-甲基氨基乙酸盐、N-油酰基多羧酸氨基酸盐。
可选地，所述阴离子表面活性剂选自月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠、十二烷基硫酸钠。
可选地，所述固相载体的材质例如是塑料、衍生化的塑料、磁性或非磁性金属、玻璃或硅。
可选地，所述固相载体的类型例如是微粒、珠子、试管、微孔滴定板、比色皿、膜、支架分子、滤纸、圆盘或芯片。
可选地，所述固相载体例如是磁性微粒、微孔滴定板、PVDF膜。
上述封闭阶段处理剂在免疫比浊、ELISA、化学发光免疫分析或免疫层析中的应用。
一种免疫诊断试剂盒，所述试剂盒包括上述封闭阶段处理剂。
进一步地，所述免疫诊断包括针对感染性病原体的抗体的检测。
可选地，感染性病原体包括病毒、细菌、真菌、衣原体、支原体或寄生虫。
可选地，感染性病原体包括艾滋病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、风疹病毒、人巨细胞病毒、单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型、狂犬病毒、人类T淋巴细胞白血病病毒、登革热病毒、人乳头瘤病毒、西尼罗河病毒、森林脑炎病毒、麻疹病毒、流感病毒、副流感病毒、水痘病毒、艾柯病毒型、柯萨奇病毒、乙型脑炎病毒、柯萨奇病毒、EB病毒、腮腺炎病毒、梅毒螺旋体、包柔氏螺旋体、沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体、解脲脲原体、肺炎支原体、结核分枝杆菌、幽门螺旋杆菌、淋球菌、疟原虫、枯氏锥虫、弓形虫。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供了一种用于免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂，该封闭阶段处理剂包括至少一种阴离子表面活性剂。发明人研究中意外发现阴离子表面活性剂在固相载体封闭过程中的存在，可以有效降低免疫检测中假阳性率。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。
一种用于免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂，包括至少一种阴离子表面活性剂。本发明提供的封闭阶段处理剂可以有效降低免疫检测中的假阳性率。
发明人研究中发现阴离子表面活性剂在固相载体封闭过程中的存在，可以有效降低免疫检测中假阳性率。经研究分析，免疫检测中一些假阳性与封闭蛋白有关，封闭蛋白在接近中性的pH环境中，会带上正电荷，加入带有负电荷的阴离子表面活性剂，可以中和封闭蛋白的正电荷，相互作用下，阻断因电荷作用引起的非特异性结合，从而减少检测过程中假阳的产生。因此，本发明同时提出阴离子表面活性剂在制备免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂的用途。
需要说明的是，阴离子表面活性剂是在水中电离后起表面活性作用的部分带负电荷的表面活性剂。按亲水基团不同，阴离子表面活性剂主要包括硫酸酯(盐)型(R-OSO3 -M+)、磺酸盐型(R-SO3 -M+)、磷酸酯(盐)型(R-OPO3 -M+)、羧酸盐型(R-COO-M+)，R为烃基，M+为阳离子，通常为钠、钾、锂、铵、钙、三乙醇胺等离子形式。示例性硫酸酯(盐)型阴离子表面活性剂包括脂肪醇硫酸盐，不饱和醇的硫酸盐例如脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸酯盐等。示例性磺酸盐阴离子表面活性剂包括烷基磺酸盐例如十二烷基磺酸钠，烷基苯磺酸盐例如直链烷基苯磺酸钠和支链烷基苯磺酸钠，烯基磺酸盐，琥珀酸酯磺酸盐等。示例性磷酸酯(盐)型阴离子表面活性剂包括烷基磷酸单脂盐，烷基磷酸双脂盐，脂肪醇聚乙烯醚磷酸单脂盐，脂肪醇聚乙烯醚磷酸双脂盐，烷基酚聚氧乙烯醚单脂盐，烷基酚聚氧乙烯醚双脂盐等。示例性羧酸盐型阴离子表面活性剂包括高级脂肪酸盐例如肥皂，N-酰基氨基羧酸盐，烷基醚羧酸盐例如脂肪醇聚氧乙烯醚羧酸盐，硬酯酰基乳酸盐例如硬酯酰基乳酸钙。
在可选地实施方式中，阴离子表面活性剂为脂肪醇硫酸盐例如月桂基硫酸盐(即十二烷基硫酸盐)；N-酰基氨基羧酸盐(脂肪酰氯与氨基酸的反应产物)，例如月桂酰肌氨酸盐(即月桂酰-N-甲基氨基乙酸盐)、N-油酰基多羧酸氨基酸盐。
在可选地实施方式中，盐的形式包括钠、钾、锂、铵、钙、三乙醇胺等阳离子。
在可选地实施方式中，阴离子表面活性剂的浓度为0.005-0.5w/v％，优选为0.01-0.4w/v％，进一步优选为0.01-0.2w/v％，阴离子表面活性剂的浓度可以但不限于为0.01w/v％、0.02w/v％、0.05w/v％、0.1w/v％、0.17w/v％、0.2w/v％、0.25w/v％、0.27w/v％、0.3w/v％、0.32w/v％、0.35w/v％、0.38w/v％或0.4w/v％。
需要说明的是，本发明中“w/v％”是指每100mL封闭阶段处理剂中，某物质含有的质量g，例如，阴离子表面活性剂的浓度为0.005-0.5w/v％，表示，每100mL封闭阶段处理剂中，阴离子表面活性剂的含量为0.005-0.5g。
本发明中“v/v％”是指每100mL封闭阶段处理剂中，某物质含有的体积mL。本发明中“mM”是指mmol/L，即每1L封闭阶段处理剂中，某物质含有的mmol量。
在一些实施方式中，阴离子表面活性剂包括月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠和/或十二烷基硫酸钠，其中，阴离子表面活性剂为月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠，或者，为月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠和十二烷基硫酸钠时，月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠的浓度均优选为0.01-0.4w/v％，0.01-0.2w/v％，例如为0.02w/v％；阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠，或者，为月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠和十二烷基硫酸钠时，十二烷基硫酸钠的浓度均优选为0.01-0.4w/v％，0.01-0.2w/v％，例如为0.02w/v％。月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠或十二烷基硫酸钠的浓度均独立地可以但不限于为0.01w/v％、0.02w/v％、0.05w/v％、0.1w/v％、0.17w/v％、0.2w/v％、0.25w/v％、0.27w/v％、0.3w/v％、0.32w/v％、0.35w/v％、0.38w/v％或0.4w/v％。
在可选地实施方式中，封闭阶段处理剂还包括缓冲试剂，缓冲试剂能使封闭阶段处理剂维持在所需的pH缓冲范围内，有些缓冲液存在多种可用缓冲对，例如硼砂缓冲液包括硼砂-硼酸缓冲液、硼砂-氯化钙缓冲液；例如磷酸盐缓冲液主要是磷酸氢根-磷酸二氢根缓冲对。缓冲试剂例如组氨酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥缓冲液、氨-氯化铵缓冲液、ADA缓冲液、PIPES缓冲液、MOPSO缓冲液、BES缓冲液、MOPS缓冲液、TES缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液、EPPS缓冲液、Tricine缓冲液、Bicine缓冲液、TAPS缓冲液、BIS-tris缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液或TEA缓冲液，但不限于此。
在可选地实施方式中，缓冲剂应以足以实现其预期功能的量存在，即维持所需的pH，缓冲试剂的浓度例如为5-100mM，进一步优选为10-50mM，缓冲试剂的浓度可以但不限于为5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM或100mM。
在可选地实施方式中，封闭阶段处理剂的工作pH为7-8.5，进一步为7-8，再进一步优选为7.2-7.6，可以但不限于为7、7.2、7.3、7.4、7.6、8、8.3或8.5。
在可选地实施方式中，封闭阶段处理剂还包括至少一种封闭蛋白，封闭蛋白能够封闭固相载体上的结合位点。在可选地实施方式中，封闭蛋白选自酪蛋白、BSA、明胶、水解明胶、胰蛋白胨、鱼明胶、小牛血清、低脂奶粉、脱脂奶粉，但不限于此。
在可选地实施方式中，封闭蛋白可以以足够量的形式存在，足够量是指能够完全封闭固相载体的结合位点。在可选地实施方式中，封闭蛋白的使用浓度例如0.05-5w/v％BSA、5-30v/v％小牛血清、0.5-2w/v％鱼明胶、0.1-3w/v％酪蛋白或0.5-4w/v％胰蛋白胨。
在可选地实施方式中，封闭阶段处理剂还包括至少一种金属盐，在可选地实施方式中，金属盐选自氯化钠、氯化钾，但不限于此。
在可选地实施方式中，金属盐的浓度例如100-500mM，优选为100-300mM,进一步优选为150-300mM。金属盐的浓度可以但不限于为100mM、150mM、200mM、250mM、300mM、350mM、400mM、450mM或500mM。
在可选地实施方式中，封闭阶段处理剂还包括至少一种糖，糖作为一种粘度调节剂，主要目的是保护固相载体吸附的蛋白，起到保护剂的作用。
在可选地实施方式中，糖选自蔗糖、葡聚糖、甘露糖醇或普鲁兰多糖，但不限于此。
在可选地实施方式中，糖的浓度优选为1-10w/v％，进一步优选为2.5-8w/v％，进一步优选为4-6w/v％，糖的浓度可以但不限于为1w/v％、2w/v％、2.5w/v％、3w/v％、4w/v％、5w/v％、6w/v％、7w/v％、8w/v％、9w/v％或10w/v％。
在可选地实施方式中，可以根据具体的诊断项目，选择性添加还原剂，以打开抗原的二硫键，充分暴露表位，还原剂为本领域常用的技术方案，在此不做特定的限定，例如可用β-巯基乙醇(BME)、二硫苏糖醇(DTT)或三-(2-甲酰乙基)膦盐酸盐(TCEP-HCl)等等。
在可选地实施方式中，封闭阶段处理剂还包括至少一种防腐剂，防腐剂可以抑制封闭阶段处理剂中微生物生长，防腐剂可根据需要添加，可以但不限于为ProClin300、叠氮化钠。在可选地实施方式中，防腐剂的浓度为0.1-3v/v％，可以但不限于为0.1v/v％、0.3v/v％、0.5v/v％、0.7v/v％、0.8v/v％或1v/v％，优选为0.1-0.5v/v％。
在可选地实施方式中，固相载体的材质例如是塑料、衍生化的塑料、磁性或非磁性金属、玻璃或硅；在可选地实施方式中，固相载体的类型例如是微粒、珠子、试管、微孔滴定板、比色皿、膜、支架分子、滤纸、圆盘或芯片；在一些具体实施方式中，固相载体例如是磁性微粒、微孔滴定板、PVDF膜。
由于本发明提供的封闭阶段处理剂可以解决的是现有封闭处理中封闭蛋白引起的非特异性结合反应从而导致的假阳性问题，所以，在免疫诊断中，涉及对固相载体进行封闭的操作，本发明提供的封闭阶段处理剂均可适用，例如间接凝集反应、ELISA或化学发光等等的检测手段中用到的固相载体，例如胶乳、磁珠、聚苯乙烯(ELISA板、小试管等等)等等。
上述封闭阶段处理剂在免疫比浊、ELISA、化学发光免疫分析或免疫层析ELISA中的应用。
一种免疫诊断试剂盒，包括本发明提供的封闭阶段处理剂。该试剂盒中免疫诊断试剂的准确性得到显著提高，假阳性检出率降低。
在可选地实施方式中，免疫诊断包括针对感染性病原体的抗体的检测；
在可选地实施方式中，感染性病原体包括病毒、细菌、真菌、衣原体、支原体或寄生虫；
在可选地实施方式中，感染性病原体包括艾滋病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、风疹病毒、人巨细胞病毒、单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型、狂犬病毒、人类T淋巴细胞白血病病毒、登革热病毒、人乳头瘤病毒、西尼罗河病毒、森林脑炎病毒、麻疹病毒、流感病毒、副流感病毒、水痘病毒、艾柯病毒型、柯萨奇病毒、乙型脑炎病毒、柯萨奇病毒、EB病毒、腮腺炎病毒、梅毒螺旋体、包柔氏螺旋体、沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体、解脲脲原体、肺炎支原体、结核分枝杆菌、幽门螺旋杆菌、淋球菌、疟原虫、枯氏锥虫、弓形虫。
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
封闭阶段处理剂基础液1的制备：磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液10mM，NaCl150mM，胰蛋白胨5g/L，蔗糖50g/L，Procline300 1ml/1000ml，pH调至7.4。
封闭阶段处理剂基础液2的制备：Tris-HCl缓冲液25mM，KCl 300mM，BSA 10g/L，Procline300 3ml/1000ml，待混合后定容至1L的体积，分装4度保存，pH调至7.2。
封闭阶段处理剂基础液3的制备：硼酸-硼酸钠缓冲液50mM，酪蛋白15g/L，Procline300 5ml/1000ml，pH调至7.6。
封闭阶段处理剂基础液4的制备：Tris-HCl缓冲液100mM，KCl 100mM，酪蛋白25g/L，葡聚糖80g/L，Procline300 1ml/1000ml，pH调至8.0。
封闭阶段处理剂基础液5的制备：磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液5mM，胰蛋白胨40g/L，甘露糖醇25g/L，Procline300 3ml/1000ml，pH调至7.0。
实施例1
在基础液1的基础上，添加月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠，浓度为0.02w/v％。
实施例2
在基础液1的基础上，添加十二烷基硫酸钠，浓度为0.02w/v％。
实施例3
在基础液1的基础上，添加十二烷基硫酸钠和月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠，二者的浓度均为0.02w/v％。
实施例4
在基础液2的基础上，添加月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠，浓度为0.01w/v％。
实施例5
在基础液3的基础上，添加月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠，浓度为0.2w/v％。
实施例6
在基础液2的基础上，添加十二烷基硫酸钠，浓度为0.2w/v％,。
实施例7
在基础液3的基础上，添加十二烷基硫酸钠，浓度为0.01w/v％。
实施例8
在基础液4的基础上，添加十二烷基硫酸钠，浓度为0.4w/v％。
实施例9
在基础液5的基础上，添加月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠，浓度为0.4w/v％。
对比例1
在基础液1的基础上，添加非离子表面活性剂TWEEN-20，浓度为0.02w/v％。
对比例2
在基础液1的基础上，添加非离子表面活性剂Tritonx-100，浓度为0.02w/v％。
对比例3
在基础液1的基础上，添加非离子表面活性剂BRIJ-35，浓度为0.02w/v％。
对比例4
基础液1，不添加任何表面活性剂。
对比例5
基础液2，不添加任何表面活性剂。
对比例6
基础液3，不添加任何表面活性剂。
对比例7
基础液4，不添加任何表面活性剂。
对比例8
基础液5，不添加任何表面活性剂。
试验例
以HCV酶免间接法项目为例
1、pH 9.6 50mM CB和150mM NaCl的CBS作为包被液，在包被液中加入1:10000的SDS，混匀后使用；将HCV抗原按照比例加入上述包被液混匀后直接包被，每孔100μl，4℃包被20-24小时；
2、封闭：取出包被板平衡置室温，用洗涤液洗板2次，拍干后进行封闭；每孔加200μl封闭阶段处理剂37℃封闭2小时(或4℃封闭过夜)。甩干置于湿度小于30％的干燥房或者是电子干燥箱中干燥24小时后待用；
3、配置酶标二抗工作液：抗人IgG-HRP按推荐效价用酶稀释液稀释后混匀，待用；
4、反应模式和反应时间：100μl样品稀释液+10μl待测样品37℃恒温箱反应60min，洗板5次，拍干后加入100μl酶标二抗工作液，37℃反应30min，洗板5次，加显色剂A和B各50μl，显色30min，加入终止液50μl，用450nm-630nm双波长读值，读值要求在10min之内读完。
样品稀释液的组份含10mM PB、PH7.4，10％NBS，0.75％Casein-2Na、500mM NaCl，0.2％TritonX-100和0.1％Procline300。
酶稀释液组份含10mM PB、PH7.4，150mM NaCl，30％NBS，0.2％Casein-2Na，5‰Tween-20和0.05％硫柳汞。
上述检测中，分别使用实施例1-3和对比例1-4中的封闭阶段处理剂进行实验，对10份阳性样本、5份阴性样本和1358份临床样本检测，对检出阳性的样本以及可疑假阳的样本均利用夹心法及RIBA法进行验证，结果如下表1所示：
表1
从上述表格结果可以看出，通过对比，阴离子表面活性剂月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠用于封闭阶段处理剂效果最佳，特异性好于其他条件，其次阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠的效果也好于其他三种非离子表面活性剂的效果，可见阴离子表面活性剂在封闭阶段处理剂中能够进一步消除假阳性，使检测结果特异性更高。
收集市场上反馈的假阳性标本分别利用实施例1和2、实施例4-9、对比例4-8进行检测，查看阳性检出率，结果如下表2：
表2
通过对比，阴离子表面活性剂在封闭阶段处理剂中能够进一步消除假阳性。
利用实施例1和对比例1中的封闭阶段处理剂分别做成封闭板，制成配套试剂盒，进行国标盘的对比，结果如下表3所示：
表3
注：“0.5NCU/ml”为康彻斯坦标准品；“CV”是同一精密性血清三个复孔的结果；“L1-L4”为血清盘里的梯度稀释血清的结果。
通过对比：月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠加入到封闭阶段处理剂中做成的试剂盒的效果明显比TWEEN-20加入到封闭阶段处理剂中做成试剂盒好，体现在作为阴离子表面活性剂代表的月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠灵敏度比TWEEN-20好，特异性也比TWEEN-20好。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
Claims (10)
1.一种用于免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂，其特征在于，包括至少一种阴离子表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的封闭阶段处理剂，其特征在于，阴离子表面活性剂的浓度为0.005-0.5w/v％，优选为0.01-0.4w/v％，进一步优选为0.01-0.2w/v％；
可选地，所述阴离子表面活性剂选自硫酸酯型阴离子表面活性剂、羧酸盐型阴离子表面活性剂；
可选地，所述阴离子表面活性剂选自脂肪醇硫酸盐、N-酰基氨基羧酸盐；
可选地，所述阴离子表面活性剂选自十二烷基硫酸盐、月桂酰-N-甲基氨基乙酸盐、N-油酰基多羧酸氨基酸盐；
可选地，所述阴离子表面活性剂选自月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠、十二烷基硫酸钠。
3.根据权利要求1所述的封闭阶段处理剂，其特征在于，所述封闭阶段处理剂还包括缓冲试剂；
可选的，缓冲试剂包括组氨酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥缓冲液、氨-氯化铵缓冲液、ADA缓冲液、PIPES缓冲液、MOPSO缓冲液、BES缓冲液、MOPS缓冲液、TES缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液、EPPS缓冲液、Tricine缓冲液、Bicine缓冲液、TAPS缓冲液、BIS-tris缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液或TEA缓冲液；
可选地，缓冲试剂的浓度为5-100mM，进一步优选为10-50mM；
可选地，封闭阶段处理剂的工作pH为7-8.5，进一步优选为7-8，再进一步优选为7.2-7.6；
可选地，封闭阶段处理剂还包括至少一种金属盐；
可选地，金属盐选自氯化钠、氯化钾；
可选地，金属盐的浓度为100-500mM，优选为100-300mM，进一步优选为150-300mM。
4.根据权利要求1所述的封闭阶段处理剂，其特征在于，封闭阶段处理剂还包括至少一种封闭蛋白；
可选地，封闭蛋白选自酪蛋白、BSA、明胶、水解明胶、胰蛋白胨、鱼明胶、小牛血清、低脂奶粉、脱脂奶粉；
可选地，封闭蛋白的使用浓度为足够量的，例如0.05-5w/v％BSA、5-30v/v％小牛血清、0.5-2w/v％鱼明胶、0.1-3w/v％酪蛋白、0.5-4w/v％胰蛋白胨；
可选地，所述封闭阶段处理剂还包括至少一种糖；
可选地，糖选自蔗糖、葡聚糖、甘露糖醇或普鲁兰多糖；
可选地，糖的浓度为1-10w/v％，优选为2.5-8w/v％，进一步优选为4-6w/v％。
5.根据权利要求1所述的封闭阶段处理剂，其特征在于，所述封闭阶段处理剂还包括至少一种防腐剂；
可选地，防腐剂选自ProClin300、叠氮化钠；
可选地，防腐剂的浓度为0.1-3v/v％，优选为0.1-0.5v/v％。
6.根据权利要求1-5任一项所述的封闭阶段处理剂，其特征在于，所述固相载体的材质例如是塑料、衍生化的塑料、磁性或非磁性金属、玻璃或硅；
可选地，所述固相载体的类型例如是微粒、珠子、试管、微孔滴定板、比色皿、膜、支架分子、滤纸、圆盘或芯片；
可选地，所述固相载体例如是磁性微粒、微孔滴定板、PVDF膜。
7.阴离子表面活性剂在制备免疫诊断试剂中固相载体的封闭阶段处理剂的用途；
可选地，阴离子表面活性剂的浓度为0.005-0.5w/v％，优选为0.01-0.4w/v％，进一步优选为0.01-0.2w/v％；
可选地，所述阴离子表面活性剂选自硫酸酯型阴离子表面活性剂、羧酸盐型阴离子表面活性剂；
可选地，所述阴离子表面活性剂选自脂肪醇硫酸盐、N-酰基氨基羧酸盐；
可选地，所述阴离子表面活性剂选自十二烷基硫酸盐、月桂酰-N-甲基氨基乙酸盐、N-油酰基多羧酸氨基酸盐；
可选地，所述阴离子表面活性剂选自月桂酰-N-甲基氨基乙酸钠、十二烷基硫酸钠；
可选地，所述固相载体的材质例如是塑料、衍生化的塑料、磁性或非磁性金属、玻璃或硅；
可选地，所述固相载体的类型例如是微粒、珠子、试管、微孔滴定板、比色皿、膜、支架分子、滤纸、圆盘或芯片；
可选地，所述固相载体例如是磁性微粒、微孔滴定板、PVDF膜。
8.权利要求1-7任一项所述的封闭阶段处理剂在免疫比浊、ELISA、化学发光免疫分析或免疫层析中的应用。
9.一种免疫诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-7任一项所述的封闭阶段处理剂。
10.根据权利要求9所述的免疫诊断试剂盒，其特征在于，所述免疫诊断包括针对感染性病原体的抗体的检测；
可选地，感染性病原体包括病毒、细菌、真菌、衣原体、支原体或寄生虫；
可选地，感染性病原体包括艾滋病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、风疹病毒、人巨细胞病毒、单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型、狂犬病毒、人类T淋巴细胞白血病病毒、登革热病毒、人乳头瘤病毒、西尼罗河病毒、森林脑炎病毒、麻疹病毒、流感病毒、副流感病毒、水痘病毒、艾柯病毒型、柯萨奇病毒、乙型脑炎病毒、柯萨奇病毒、EB病毒、腮腺炎病毒、梅毒螺旋体、包柔氏螺旋体、沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体、解脲脲原体、肺炎支原体、结核分枝杆菌、幽门螺旋杆菌、淋球菌、疟原虫、枯氏锥虫、弓形虫。
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