CN116930513A - 一种用于蛋白检测的无蛋白快速封闭液及其应用 - Google Patents
一种用于蛋白检测的无蛋白快速封闭液及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及蛋白检测技术领域，具体涉及一种用于蛋白检测的无蛋白快速封闭液及其应用。本发明提供的用于蛋白检测的封闭液包含十二烷基类化合物，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。本发明的封闭液具有封闭时间短、封闭效果好、背景和本底低、信噪比高、检测信号灵敏，适用检测实验广泛，且成本低等优势。
Description
技术领域
本发明涉及蛋白检测技术领域，尤其涉及一种用于蛋白检测的无蛋白快速封闭液及其应用。
背景技术
目前常用的蛋白检测技术，例如蛋白质印迹法（Western Blot）和酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）涉及目标蛋白与固相载体的结合，以及固相载体未与蛋白结合的空白位点的封闭步骤，封闭步骤通常采用封闭液进行。
以Western Blot为例，其是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种蛋白检测技术，通过将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相载体（例如NC膜或PVDF膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，并作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素等标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的蛋白成分。Western Blot已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个领域。
总蛋白质通过电转从凝胶转移到固相载体（例如NC膜或PVDF膜）上，蛋白以机械填补（堆积）和吸附的方式结合于固相载体表面。然而，吸附的蛋白并不是连续的，有很多空隙，这些空隙并没有填补蛋白，而抗体也是蛋白，也会被吸附在上述空隙里，导致非特异性信号的产生。因而需要采用封闭液来封闭所有未与目标蛋白结合的位点，从而避免固相载体与抗体或检测试剂发生交叉反应，降低非特异性吸附导致的结果干扰和误差。封闭液中的大分子物质可以与固相载体表面上的空白位置结合，以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在固相载体表面，有效覆盖蛋白结合位点，避免样品中非特异性蛋白或者一抗结合到固相载体表面，导致检测蛋白/抗体与其非特异性结合，出现干扰背景。封闭液应封闭所有未结合位点而不影响固相载体表面的靶蛋白，同时也不结合靶蛋白表位、不与抗体或检测蛋白发生交叉反应，还可起到洗脱膜上杂蛋白的作用。
传统的封闭液中通常含有BSA、脱脂奶粉、明胶或酪蛋白，含动物源成分，封闭效果差、封闭时间过长、效率低，容易产生较多的杂带，对某些特殊要求的实验，会有严重的背景干扰，如：BSA和酪蛋白中均有少量抗体残留，会导致抗原/抗体之间的交叉反应，产生高背景，杂带较多或导致本底水平增高。脱脂奶粉中含有少量的生物素和碱性磷酸酶残留，在使用生物素亲和素系统和碱性磷酸酶标记的二抗时，也会导致高背景或本底水平增高。
现有技术中的无动物源成分封闭液多采用聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇等高聚物，封闭效果不佳、背景高、信噪比低，无法较好地显示出实验真实结果。因此，亟需开发具有较好封闭时间短且封闭效果好的封闭液。
发明内容
本发明提供一种用于蛋白检测的无蛋白快速封闭液及其应用。
本发明在进行用于蛋白检测的封闭液的研发过程中意外地发现，特定的十二烷基类化合物能够在不依赖于BSA、脱脂奶粉、明胶、酪蛋白等蛋白类物质存在的情况下，发挥封闭固相载体未与蛋白结合的空白位点的功能，具有较好的封闭效果和较高的封闭效率，能够在较短时间内对固相载体的空白位点进行高效封闭，显著降低蛋白检测的背景和本底水平，提高信噪比。
基于上述发现，本发明提供以下技术方案：
第一方面，本发明提供十二烷基类化合物在制备用于蛋白检测的封闭液中的应用，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。
本发明中，用于蛋白检测的封闭液是指用于封闭蛋白检测用固相载体未与蛋白结合的空白位点的封闭液。
其中，蛋白检测可为任意涉及目标蛋白与固相载体结合的检测技术。固相载体包括包被板、能够吸附蛋白的膜材料（例如NC膜、PVDF膜、尼龙膜）等。
在本发明的一些实施方式中，所述蛋白检测为Western blot或ELISA。基于涉及目标蛋白与固相载体结合的不同蛋白检测技术在蛋白与固相载体结合的作用机理以及封闭液发挥封闭作用机理的相似性，本领域技术人员可以理解，本发明的封闭液适用的蛋白检测技术不局限于Western blot、ELISA。
本发明所述的十二烷基类化合物的分子式和结构式具体如下：
月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠（C12H26Na2O5S）：
十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S）：
十二烷基磺酸钠（C12H25NaO3S）：
十二烷基肌氨酸钠（C15H28NO3Na）：
本发明所述的封闭液以上述十二烷基类化合物为主体，这些十二烷基类化合物分子呈中性，无特异性吸附，性质稳定，用于封闭蛋白检测的固相载体的封闭时间较BSA、脱脂奶粉等蛋白类物质更短，而且能够达到降低本底和背景且稳定封闭的效果。
本发明通过验证发现，十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中的任意一种或至少两种的混合物均能够发挥较好的封闭效果。因此，本发明中，十二烷基类化合物可选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种的混合物。
在本发明的一些实施方式中，所述十二烷基类化合物为十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠或月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠。
在本发明的一些实施方式中，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中的任意两种、三种或四种。
在本发明的一些实施方式中，所述十二烷基类化合物为十二烷基肌氨酸钠和十二烷基磺酸钠、十二烷基磺酸钠和十二烷基硫酸钠、十二烷基肌氨酸钠和十二烷基磺酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠和十二烷基磺酸钠，或者为月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠和十二烷基肌氨酸钠。
在使用十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中的任意两种的组合时，两种十二烷基类化合物的浓度比为1：5-5：1。
上述应用中，所述封闭液中，十二烷基类化合物的浓度优选为10-60g/L，更优选为15-50g/L。
第二方面，本发明提供十二烷基类化合物在封闭蛋白检测用固相载体未与蛋白结合的空白位点中的应用，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。
上述应用中，十二烷基类化合物在进行封闭时的使用浓度优选为10-60g/L，更优选为15-50g/L。
第三方面，本发明提供一种用于蛋白检测的封闭液，所述封闭液包含十二烷基类化合物，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。
在本发明的一些实施方式中，所述十二烷基类化合物为十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠或月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠。
在本发明的一些实施方式中，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中的任意两种、三种或四种。
在本发明的一些实施方式中，所述十二烷基类化合物为十二烷基肌氨酸钠和十二烷基磺酸钠、十二烷基磺酸钠和十二烷基硫酸钠、十二烷基肌氨酸钠和十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠和十二烷基肌氨酸钠、或者为月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠和十二烷基肌氨酸钠。
在使用十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中的任意两种的组合时，两种十二烷基类化合物的浓度比为1：5-5：1。
优选地，所述封闭液中，十二烷基类化合物的浓度为10-60g/L 。
进一步优选地，所述封闭液中，十二烷基类化合物的浓度为15-50g/L。
优选地，所述封闭液不包含蛋白。
本发明所述的十二烷基类化合物可以在不依赖于BSA、脱脂奶粉、明胶、酪蛋白等蛋白类物质的存在，发挥封闭固相载体未与蛋白结合的空白位点的功能。因此，本发明所述的封闭液可不包含蛋白成分。不包含蛋白成分的封闭液可进一步降低背景和本底水平，并能够适用于特殊蛋白检测方法（例如使用生物素亲和素系统和碱性磷酸酶标记的二抗进行检测）。
作为本发明的一种实施方式，以上所述的封闭液还包含缓冲液。
优选地，所述封闭液中，缓冲液的浓度为0.01-0.5mol/L。
进一步优选地，所述封闭液中，缓冲液的浓度为0.03-0.5mol/L。
优选地，缓冲液的pH为6.0-8.0。
封闭液中的缓冲液主要起到缓冲、维持pH的作用，本发明的封闭液对于缓冲液的种类没有特殊限制，可采用Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液等常用缓冲液。
优选地，所述缓冲液为选自Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或两种。
在本发明的一些实施方式中，所述缓冲液为Tris-HCl缓冲液。
作为本发明的另一种实施方式，以上所述的封闭液还包含缓冲液以及糖类和/或表面活性剂。
优选地，所述封闭液中糖类的浓度为1-20g/L。更优选为1-10 g/L。
优选地，所述封闭液中表面活性剂的浓度为1-20mL/L。
进一步优选地，所述封闭液中表面活性剂的浓度为5-20mL/L。
以上所述的糖类为单糖和/或二糖。具体可选自海藻糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖中的一种或多种。
在本发明的一些实施方式中，所述糖类为海藻糖。
以上所述的表面活性剂为选自吐温-20、吐温-80、曲拉通 X-100中的一种或多种。
在本发明的一些实施方式中，所述表面活性剂为吐温-20。
在本发明的一些实施方式中，所述封闭液包含十二烷基类化合物、缓冲液、糖类和表面活性剂。
在本发明的一些实施方式中，所述封闭液包含如下组分：缓冲液0.03-0.3mol/L，十二烷基类化合物15-50g/L，表面活性剂5-20mL/L，糖类1-10g/L。
在本发明的一些实施方式中，所述封闭液包含如下组分：Tris-HCl缓冲液（pH6.0-8.0）0.03-0.3mol/L，十二烷基类化合物15-50g/L，吐温-20 5-20mL/L，海藻糖1-10g/L；其中，所述十二烷基类化合物为质量比为1：（0.5-3）的十二烷基肌氨酸钠和十二烷基磺酸钠、或者为十二烷基肌氨酸钠、或者为质量比为（1-3）：1的十二烷基磺酸钠和十二烷基硫酸钠、或者为质量比为1：（3-5）的十二烷基肌氨酸钠和十二烷基磺酸钠、或者为月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠、或者为质量比为（3-5）：1的月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠和十二烷基肌氨酸钠、或者为十二烷基硫酸钠、或者为质量比为（1-3）：1的十二烷基硫酸钠和十二烷基肌氨酸钠、或者为十二烷基磺酸钠。
为更有利于所述封闭液的长期保存，可在封闭液中添加防腐剂。对于防腐剂的种类，本发明没有特殊限制，所有可用于体外检测试剂防腐的防腐剂均可使用，包括但不限于PC-300、叠氮钠、抗生素等。
在本发明的一些实施方式中，所述防腐剂为PC-300。PC-300 在封闭液中的浓度可为100-300μL/L。
第四方面，本发明提供以上所述的封闭液在蛋白检测中的应用。
第五方面，本发明提供以上所述的封闭液在封闭蛋白检测用固相载体未与蛋白结合的空白位点中的应用。
本发明的封闭液在用于Western blot、ELISA等蛋白检测技术时可采用常规的封闭步骤和检测步骤。所述封闭液用于蛋白检测的封闭步骤，封闭时间优选为5-15min。
本发明的有益效果至少包括：本发明的封闭液的封闭时间短、封闭效果好、背景和本底更低、封闭效率更高，与目前已有的封闭液相比，其优势主要在于：
（1）背景更低、信噪比更高，与传统封闭液相比，检测信号更加灵敏；
（2）封闭时间短，5-15min即可完成封闭，且封闭效果可达到脱脂奶粉、BSA封闭1h的效果；
（3）以十二烷基类化合物为主体，不依赖于动物源成分（蛋白类），可适用于特殊要求的实验，避免与抗体发生交叉反应，检测结果更准确；无需引入磷酸化蛋白、生物素，兼容磷酸化抗体、生物素标记抗体，适用检测实验更广泛；
（4）与添加高分子聚合物等成分的封闭液相比，本发明的封闭液的成本更低。
附图说明
为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1、图2、图3、图4、图5、图6、图7、图8、图9、图10分别为采用本发明实施例1-10的封闭液进行封闭的免疫印迹实验结果图。
图11、图12、图13、图14、图15分别为采用对比例1-5的封闭液进行封闭的免疫印迹实验结果图。
图16、图17分别为采用市售产品1和市售产品2进行封闭的免疫印迹实验结果图。
图1-图17中，肝脏组织Raw264.7代表小鼠肝脏组织样品，细胞NIH5B代表小鼠细胞样品，心脏组织M代表小鼠心脏组织样品，检测目标蛋白为β-微管蛋白（β-Tubulin）。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明中的附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例提供一种用于蛋白检测的无蛋白封闭液，其组成如下：
Tris-HCl缓冲液（pH=8.0）：0.24mol/L；
十二烷基肌氨酸钠：5g/L；
十二烷基磺酸钠：10g/L；
吐温-20（Tween-20）：10mL/L；
海藻糖：1g/L；
PC-300：100μL/L。
实施例2
本实施例提供一种用于蛋白检测的无蛋白封闭液，其组成如下：
Tris-HCl缓冲液（pH=8.0）：0.24mol/L；
十二烷基肌氨酸钠：30g/L；
吐温-20（Tween-20）：10mL/L；
海藻糖：3g/L；
PC-300：100μL/L。
实施例3
本实施例提供一种用于蛋白检测的无蛋白封闭液，其组成如下：
Tris-HCl缓冲液（pH=8.0）：0.24mol/L；
十二烷基磺酸钠：33g/L；
十二烷基硫酸钠：16g/L；
吐温-20（Tween-20）：10mL/L；
海藻糖：5g/L；
PC-300：100μL/L。
实施例4
本实施例提供一种用于蛋白检测的无蛋白封闭液，其组成如下：
Tris-HCl缓冲液（pH=8.0）：0.24mol/L；
十二烷基肌氨酸钠：8g/L；
十二烷基磺酸钠：33g/L；
吐温-20（Tween-20）：10mL/L；
海藻糖：8g/L；
PC-300：100μL/L。
实施例5
本实施例提供一种用于蛋白检测的无蛋白封闭液，其组成如下：
Tris-HCl缓冲液（pH=8.0）：0.24mol/L；
月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠：50g/L；
吐温-20（Tween-20）：10mL/L；
海藻糖：10g/L；
PC-300：100μL/L。
实施例6
本实施例提供一种用于蛋白检测的无蛋白封闭液，其组成如下：
Tris-HCl缓冲液（pH=8.0）：0.24mol/L；
月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠：33g/L；
十二烷基肌氨酸钠：8g/L；
吐温-20（Tween-20）：10mL/L；
海藻糖：10g/L；
PC-300：100μL/L。
实施例7
本实施例提供一种用于蛋白检测的无蛋白封闭液，其组成如下：
Tris-HCl 缓冲液（pH=8.0）：0.24mol/L；
十二烷基硫酸钠：25g/L；
吐温-20(Tween-20)：10mL/L；
海藻糖：1g/L；
PC-300：100μL/L。
实施例8
本实施例提供一种用于蛋白检测的无蛋白封闭液，其组成如下：
Tris-HCl 缓冲液（pH=8.0）：0.24mol/L；
十二烷基硫酸钠：15g/L；
十二烷基肌氨酸钠：8g/L；
吐温-20(Tween-20)：10mL/L；
海藻糖：8g/L；
PC-300：100μL/L。
实施例9
本实施例提供一种用于蛋白检测的无蛋白封闭液，其组成如下：
Tris-HCl 缓冲液（pH=6.8）：0.05mol/L；
十二烷基肌氨酸钠：10g/L；
十二烷基磺酸钠：5g/L；
吐温-20(Tween-20)：5mL/L；
海藻糖：5g/L；
PC-300：100μL/L。
实施例10
本实施例提供一种用于蛋白检测的无蛋白封闭液，其组成如下：
Tris-HCl 缓冲液（pH=6.0）：0.03mol/L；
十二烷基磺酸钠：15g/L；
吐温-20(Tween-20)：5mL/L；
海藻糖：5g/L；
PC-300：100μL/L。
对比例1
本对比例提供一种用于蛋白检测的封闭液，按照总质量百分比为100％计算，其组成如下：脱脂奶粉5％，余量为1*TBS缓冲液。
对比例2
本对比例提供一种用于蛋白检测的封闭液，按照总质量百分比为100％计算，其组成如下：BSA 3％，余量为水。
对比例3
本对比例提供一种用于蛋白检测的封闭液，其组成如下：
Tris-HCl缓冲液（pH=7.4）：0.1mol/L，
PEG-20000：1g/L，
吐温-20（Tween-20）：5g/L，
海藻糖：10g/L，
叠氮钠：1g/L。
对比例4
本对比例提供一种用于蛋白检测的封闭液，其组成如下：
Tris-HCl缓冲液（pH=7.4）：0.01mol/L；
聚乙烯吡咯烷酮：0.5g/L；
吐温-20（Tween-20）：0.5g/L；
海藻糖：1g/L；
叠氮钠：0.1g/L。
对比例5
本对比例提供一种用于蛋白检测的封闭液，其组成如下：
脂肪胺聚氧乙烯醚：0.35%（W/V）；
三羟甲基氨基甲烷：0.02mol/L；
氯化钠：0.04mol/L；
吐温-20：0.4%（W/V）；
Proclin300：0.02%（W/V）。
实验例
分别采用上述各实施例和对比例的封闭液进行蛋白检测过程中的封闭步骤，以Western blot检测为例，步骤如下：
S1，组织和细胞蛋白样品经定量后，每孔上样量固定为10μg。配制10％的聚丙烯酰胺分离胶混合液，聚丙烯酰胺凝分离胶混合液的组成为：30％丙烯酰胺、1.5mol/L Tris-HCl（pH 8.8）、10％SDS、10％过硫酸铵、TEMED。取一定量的上述试剂混合均匀后全量加样至玻璃板中，并缓慢加入去离子水为封水层，室温下放置30min等待分离胶凝固。待分离胶凝固后倒掉封水层，加入2mL聚丙烯酰胺浓缩胶，同时在胶面上插上梳子。待浓缩胶凝固后，缓慢拔掉梳子，加样于上样孔中，80V电压跑电泳，待样品在浓缩胶和分离胶的界面处压成一条线时，调电压至140V。电泳结束后，分开两块玻璃板，切除浓缩胶；
S2，转膜：PVDF膜提前浸入甲醇中激活，然后将海绵和滤纸以及PVDF膜都浸泡在转膜液里，将胶轻轻放在事先预冷的转膜液里，转膜用的夹板黑色朝下，白色朝上；黑色夹板上先垫一层海绵，再放4层滤纸，然后将胶放置在滤纸上；
将PVDF膜在放置在胶上；然后继续对称放置滤纸和海绵，最后将夹板夹好，按照黑色对黑色，白色对红色的方向地插入转膜槽中；将电压调至200mA，时间为1h；NC膜则无需甲醇激活，其它操作同PVDF膜；
S3，封闭：分别采用上述各实施例和对比例的封闭液进行封闭，各实施例的封闭液以及对比例3、4、5的封闭液均设置10min的封闭时间，对比例1和2的封闭液的封闭时间为1h（根据对比例1和2的封闭液的最优封闭时间设置）；
S4，抗体孵育：一抗孵育：根据稀释比1:3000的比例，加入一抗（β-Tubulin抗体），过夜封闭；洗膜：次日，用事先配好的TBST室温洗涤5遍，每次5min；二抗孵育：根据稀释比1:20000的比例，加入羊抗兔HRP标记二抗，室温孵育1小时，用TBST洗涤5遍，每次5min；
S5，显色：使用ECL发光液进行显色，伯乐成像仪自动调整合适光强进行成像，获得最佳免疫印迹结果。
采用实施例1-10和对比例1-5的封闭液进行封闭的检测结果分别如图1、图2、图3、图4、图5、图6、图7、图8、图9、图10、图11、图12、图13、图14、图15所示。
将上述检测结果汇总于表1，其中，信噪比是指目标条带与干扰条带的比值，比值越高代表免疫印迹结果越好（即免疫印迹效果：超高＞高>中>低），背景干扰程度是指除目标条带以外的非特异性条带以及背景的干扰程度，干扰程度越低代表免疫印迹结果越好（即免疫印迹效果：超低＞低>中>高）。
表1
上述结果表明，采用各实施例的封闭液进行封闭的检测结果明显优于各对比例，各实施例的封闭液用于检测的信噪比更高、背景干扰更低，目的条带单一、清晰、准确率高。经实验验证和对比，本发明的无蛋白封闭液的封闭效果显著优于传统的含蛋白封闭液，与目前已知的以PEG-20000、聚乙烯吡咯烷酮等聚合物为封闭剂的封闭液以及以聚氧乙烯醚类表面活性剂为封闭剂的封闭液相比，在封闭效果方面也具有明显优势。各实施例的封闭液中，实施例2和6的封闭液的效果最优，表现出超高信噪比和超低背景干扰。
此外，将上述各实施例的封闭液的封闭效果与目前本领域较为常用的用于蛋白检测的无蛋白封闭液市售产品（如表1中所示，市售产品1（雅酶，PS108P）和市售产品2（YEASEN，36122ES60），Western blot检测方法同上述记载，封闭时间为10min进行对比，结果显示，与目前市售的无蛋白封闭液产品（图16、图17，表1）相比，本申请各实施例的封闭液的信噪比更高、背景干扰更低，封闭效果更优。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.十二烷基类化合物在制备用于蛋白检测的封闭液中的应用，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述封闭液中，十二烷基类化合物的浓度为10-60g/L。
3.十二烷基类化合物在封闭蛋白检测用固相载体未与蛋白结合的空白位点中的应用，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。
4.一种用于蛋白检测的封闭液，其特征在于，所述封闭液包含十二烷基类化合物，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。
5.根据权利要求4所述的封闭液，其特征在于，所述封闭液中，十二烷基类化合物的浓度为10-60g/L。
6.根据权利要求4所述的封闭液，其特征在于，所述封闭液不包含蛋白。
7.根据权利要求4~6任一项所述的封闭液，其特征在于，所述封闭液还包含缓冲液；
或者，所述封闭液还包含缓冲液以及糖类和/或表面活性剂。
8.根据权利要求7所述的封闭液，其特征在于，所述封闭液中，缓冲液的浓度为0.01-0.5mol/L；
和/或，糖类的浓度为1-20g/L；
和/或，表面活性剂的浓度为1-20mL/L。
9.根据权利要求8所述的封闭液，其特征在于，所述缓冲液为选自Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或两种；
和/或，所述糖类为单糖和/或二糖；
和/或，所述表面活性剂为选自吐温-20、吐温-80、曲拉通 X-100中的一种或多种。
10.权利要求4~9任一项所述的封闭液在蛋白检测或封闭蛋白检测用固相载体未与蛋白结合的空白位点中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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