CN112940968B - 一种发酵乳杆菌、发酵乳杆菌的培养物及其制备方法 - Google Patents

一种发酵乳杆菌、发酵乳杆菌的培养物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种发酵乳杆菌菌株LF8005，于2020年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCC NO:M2020704。本发明还提供了发酵乳杆菌培养物及其制备方法，以及抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌、清除自由基抗氧化、防止皮肤炎症发生的作用。所述发酵乳杆菌分离于传统发酵乳制品，保证其安全性，可以分泌产生多糖、糖蛋白、生物素等大分子活性物，从而增加发酵液的黏度，作为天然活性成分在护肤品中添加应用；产品具有低刺激、高安全性、不易产生依赖性，对皮肤作用以改善皮肤环境、预防保护为主，适应当下护肤类化妆品发展要求，可在护肤品中安全添加应用。

Description

一种发酵乳杆菌、发酵乳杆菌的培养物及其制备方法
技术领域
本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种发酵乳杆菌、发酵乳杆菌的培养基及其制备方法。
背景技术
人体皮肤表面具有丰富的微生物多样性，包括多种有益菌、致病菌和中性菌，这些微生物构成的皮肤微生态平衡状态直接影响皮肤的健康状态。皮肤有益微生物菌群及其代谢产物可以通过抑制皮肤表面致病微生物、保持皮肤湿度、增强皮肤表面免疫等多方面调节皮肤功能，对建立和维持皮肤健康稳态具有重要意义。
乳酸菌是广泛存在于动植物体内、发酵食品、环境中的一类有益菌，对动植物机体平衡稳定健康具有举足轻重的作用。一方面乳酸菌可以定植于人体，作为人体微生态的一份子，可以有效抑制致病菌和阻止外源致病微生物侵入，调控人体粘膜免疫、促进人体营养物质吸收，增强机体的免疫力；另一方面乳酸菌可以产生多种益生代谢产物，包括活性酶类、蛋白质、胜肽、多糖、有机酸、短链脂肪酸等多种活性成分，这些活性成分具有一定的抑菌、抗氧化、抗炎症、增强免疫力、抗衰老等多种健康作用。现阶段市面化妆品成分多采用化学合成类物质，这类物质在增强皮肤功能的同时，具有一定的皮肤刺激，打破皮肤原有的健康稳态，长期使用会产生一定的皮肤残留毒性和依赖性，不利于皮肤的平衡和健康。因此，开发健康来源、天然活性成分必将是化妆品行业趋势，其中活性益生菌及其活性成分必将占有一席之地。
公开专利文件“一种发酵乳杆菌及其在制备具有抗衰老功能的乳酸菌发酵液中的应用”(申请号：CN202010282431.7)提供了一种具有抗衰老作用的乳酸菌，以β-半乳糖苷酶阳性率为指标，发现其提供的发酵乳杆菌具有抗衰老效果。
公开专利技术“用于治疗皮肤病的组合物和方法”(申请号：CN03806002.7)提供了益生菌用于预防或治疗皮肤病的方法和组合物，采用口服益生菌的形式用于专利如接触性皮炎、广化性皮炎、微生物感染引起的皮炎、湿疹和红斑狼疮。
以上技术方案针对的受众较小，且使用方式限于口服，对于益生菌的应用范围和使用途径尚未有更广阔的拓展。
发明内容
本发明旨在提供一种可用于化妆品的益生菌及其产生的天然活性成分，通过分析研究乳酸菌发酵培养物，筛选出了一株高产多糖、糖蛋白、生物素等大分子活性物质的发酵乳杆菌，分析其在保护皮肤、促进皮肤健康方面的作用机理。以上目的，通过如下技术方案实现：
作为本发明的第一个方面，在于提供一种发酵乳杆菌菌株LF8005，已于2020年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M 2020704。
本发明将从不同产地采集发酵乳制品和酸菜样品用无菌生理盐水梯度稀释至1.0×10-4，采用平板划线法，在无菌条件，用接种环挑取样品稀释液，在MRS固体平板划线，置于37℃培养箱培养12-36h，挑取单菌落进行重复平板划线培养，进一步挑取单菌落至MRS斜面培养基，置于37℃培养箱培养12-36h，获得乳酸菌纯化菌株。最终从新疆酸牛奶中筛选出一株发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)菌株LF8005。
该发酵乳杆菌在液体发酵过程中，分泌产生的多糖、糖蛋白、生物素等大分子活性物可以增加发酵液的黏度，可作为天然活性成分在化妆品中添加应用；本发明提供的发酵乳杆菌制备的发酵培养物是一种天然活性成分，相对于化学类化妆品成分，具有低刺激、高安全性、不易产生依赖性，对皮肤作用以改善皮肤环境、预防保护为主，适应当下护肤类化妆品发展要求。
作为本发明的第二个方面，在于提供一种发酵乳杆菌培养物，所述培养物包含多糖、糖蛋白和生物素。
优选的，所述发酵乳杆菌培养物中各成分含量分别为多糖10～15％、糖蛋白60～70％和生物素15～25％。
作为本发明的第三个方面，在于提供所述发酵乳杆菌培养物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
(1)菌株活化：将发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)LF8005转接于MRS固体斜面培养基，35-40℃培养12-16h；
(2)一级种子制备：取培养好的斜面菌株，无菌条件下转接于MRS液体培养基中，35-40℃静置培养12-20h，获得一级种子液；
(3)二级种子制备：取一级种子液转接至MRS液体培养基中进行扩大培养，转接量2％-10％，35-40℃静置培养12-20h，获得二级种子液；
(4)发酵罐培养：将二级种子液转接至灭菌培养基中，接种量5-10％，培养温度35-40℃，静置培养时间10-24h，黏度达20000-25000cP时，收集获得发酵液；
(5)发酵液灭活：将发酵液升高温度至75-85℃，保持时间15-25min，然后迅速冷却至室温25℃，冷却时间为5-10min，获得灭活发酵液；
(6)超声处理：将上述灭活发酵液置于超声波清洗器中进行超声处理，超声功率200-600W，温度35-50℃，时间30-120min，获得处理发酵液；
(7)离心：取上述处理发酵液，进行离心，离心转速3500rpm/min，时间10min，获得上清液；
(8)透析：将上述上清液置于3500Da的透析袋去离子水透析24-48h，得透析液；
(9)二次离心：去上述透析液，进行离心，离心转速3500rpm/min，时间10min，获得澄清透析液；
(10)浓缩：将上述澄清透析液，采用旋转蒸发仪，压力0.08-0.1MPa，温度40-50℃，旋转蒸发浓缩3-5倍，获得浓缩液；
(11)冷冻干燥：取发酵浓缩液，-80℃预冻12h，放入冷冻干燥机，冷阱温度-50℃，时间24-48h，冷冻干燥收集获得发酵培养物干粉。
本发明还提供了所述发酵培养物的功能特点。研究发现：(1)该发酵培养物对致病菌具有较强的抑制作用，可以调节皮肤菌群平衡，抑制病原微生物入侵；(2)该发酵培养物具有一定的清除自由基抗氧化作用，保护皮肤免受氧化损伤，促进皮肤细胞活力，增强皮肤细胞功能；(3)发酵培养物中多种大分子活性物质，可以有效保水，防止皮肤干燥，为皮肤营造健康环境；(4)发酵培养物可以防止皮肤炎症发生，减少慢性炎症对皮肤的损伤程度，体现出较好的保肤护肤功效，改善皮肤健康状态。
作为本发明的第四个方面，在于提供了所述发酵乳杆菌菌株LF8005抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的应用。
以及所述发酵乳杆菌菌株LF8005清除自由基抗氧化的应用。
以及所述发酵乳杆菌菌株LF8005防止皮肤炎症发生的应用。
作为本发明的第五个方面，在于提供了所述发酵乳杆菌培养物抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的应用。
以及所述发酵乳杆菌培养物清除自由基抗氧化的应用。
以及防止皮肤炎症发生的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的发酵乳杆菌是从不同产地多种发酵制品中筛选获得，该菌株命名为发酵乳杆菌LF8005(Lactobacillus fermentum LF8005)，已于2020年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 2020704；所述发酵乳杆菌通过液体发酵及系列处理工艺，最终制备获得发酵培养物；所述发酵培养物可以用于制备护肤类化妆品添加使用。
(1)本发明提供的发酵乳杆菌分离于传统发酵乳制品，保证其安全性，在液体发酵过程中，可以分泌产生多糖、糖蛋白、生物素等大分子活性物，从而增加发酵液的黏度，可以作为天然活性成分在化妆品中添加应用；
(2)本发明提供的发酵乳杆菌培养获得发酵培养物，对致病菌具有较强的抑制作用，可以调节皮肤菌群平衡，抑制病原微生物入侵；具有一定的清除自由基抗氧化作用，保护皮肤免受氧化损伤，促进皮肤细胞活力，增强皮肤细胞功能；发酵培养物中多种大分子活性物质，可以有效保水，防止皮肤干燥，为皮肤营造健康环境；发酵培养物可以防止皮肤炎症发生，减少慢性炎症对皮肤的损伤程度，体现出较好的保肤护肤功效，改善皮肤健康状态；
(3)本发明提供的发酵乳杆菌制备的发酵培养物是一种天然活性成分，相对于化学类化妆品成分，具有低刺激、高安全性、不易产生依赖性，对皮肤作用以改善皮肤环境、预防保护为主，适应当下护肤类化妆品发展要求。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1是发酵乳杆菌LF8005显微菌形态图；
图2是发酵乳杆菌LF8005的单糖组成分析结果；
图3是发酵乳杆菌LF8005培养物的均分子量分布图；
图4是不同来源乳酸菌发酵培养物水分降低率测定结果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，本发明用以下具体实施例进行说明，但绝非仅限于此。以下所述为本发明较好的实施例，仅仅用于描述本发明，不能理解为对本发明的限制，应当指出的是在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进，均应包含在本发明的保护范围之内。
本发明将从不同产地采集发酵乳制品和酸菜样品用无菌生理盐水梯度稀释至1.0×10-4，采用平板划线法，在无菌条件，用接种环挑取样品稀释液，在MRS固体平板划线，置于37℃培养箱培养12-36h，挑取单菌落进行重复平板划线培养，进一步挑取单菌落至MRS斜面培养基，置于37℃培养箱培养12-36h，获得乳酸菌纯化菌株。
实施例1：选取新鲜发酵新疆酸牛奶，采用MRS培养基固体平板划线法，在37℃培养箱中培养36h，挑取单菌落进行重复纯化培养一次，肉眼观察发酵乳杆菌单菌落形态，同时采用革兰氏染色方法制备平板，进行电子显微镜观察。
结果显示，发酵乳杆菌LF8005(Lactobacillus fermentum LF8005)的生物学特征如下：该菌种的细胞大小为(0.5μm～0.7μm)×(0.8μm～3.0μm)，菌体呈杆状，单个或成对排列，革兰氏阳性；该菌种能在MRS琼脂培养基上生长，菌落呈乳白色，圆形，表面湿润，不透明，边缘整齐，挑取菌体具一定黏性；最适生长温度为30～40℃，兼性厌氧，在pH值4.5-9.0生长，最适pH值6.5左右。
实施例2：发酵乳杆菌的黏度分析
将不同来源乳酸菌接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养24h，采用粘度计测定不同发酵液的黏度。
试验结果如表1所示：
表1不同来源乳酸菌发酵液黏度分析结果
菌株 分离来源 产地 黏度/cP
LF8005 酸牛奶 新疆 24418
CK-1 酸牛奶 内蒙古 15740
CK-2 奶酪 内蒙古 18636
CK-3 藏灵菇 西藏 22015
CK-4 酸牛奶 西藏 18902
CK-5 酸白菜 黑龙江 12841
CK-6 泡菜 四川 15027
不同来源乳酸菌发酵液比较，分离于新疆酸牛奶的发酵乳杆菌LF8005发酵液具有较高的黏度，发酵过程更易产生较高的粘性物质。
实施例3：发酵乳杆菌LF8005培养物的制备
一种发酵乳杆菌LF8005培养物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
(1)菌株活化：将发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)LF8005转接于MRS固体斜面培养基，35-40℃培养12-16h；
(2)一级种子制备：取培养好的斜面菌株，无菌条件下转接于MRS液体培养基中，35-40℃静置培养12-20h，获得一级种子液；
(3)二级种子制备：取一级种子液转接至MRS液体培养基中进行扩大培养，转接量2％-10％，35-40℃静置培养12-20h，获得二级种子液；
(4)发酵罐培养：将二级种子液转接至灭菌培养基中，接种量5-10％，培养温度35-40℃，静置培养时间10-24h，黏度达20000-25000cP时，收集获得发酵液；
(5)发酵液灭活：将发酵液升高温度至75-85℃，保持时间15-25min，然后迅速冷却至室温25℃，冷却时间为5-10min，获得灭活发酵液；
(6)超声处理：将上述灭活发酵液置于超声波清洗器中进行超声处理，超声功率200-600W，温度35-50℃，时间30-120min，获得处理发酵液；
(7)离心：取上述处理发酵液，进行离心，离心转速3500rpm/min，时间10min，获得上清液；
(8)透析：将上述上清液置于3500Da的透析袋去离子水透析24-48h，得透析液；
(9)离心：去上述透析液，进行离心，离心转速3500rpm/min，时间10min，获得澄清透析液；
(10)浓缩：将上述澄清透析液，采用旋转蒸发仪，压力0.08-0.1MPa，温度40-50℃，旋转蒸发浓缩3-5倍，获得浓缩液；
(11)冷冻干燥：取发酵浓缩液，-80℃预冻12h，放入冷冻干燥机，冷阱温度-50℃，时间24-48h，冷冻干燥收集获得发酵培养物干粉。
实施例4：发酵乳杆菌培养物组成分析
取发酵乳杆菌LF8005冻干培养物，用去离子水完全溶解，参照《保健食品中粗多糖的检验方法》分光光度法，进行粗多糖含量检测；
取发酵乳杆菌LF8005冻干培养物，用三氟乙酸完全酸水解，进行糖腈乙酰酯衍生化，衍生物进行气相色谱(GC)分析。以肌醇六乙酰酯作为内标，木糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、核糖、甘露糖、阿拉伯糖为标准单糖进行单糖组成测定。
称取发酵乳杆菌LF8005冻干培养物粉末，参照GB 5009.5《食品安全国家标准食品中蛋白质测定方法》自动凯式定氮仪法，进行蛋白质含量检测；
参照GB/T5009.124《食品安全国家标准食品中氨基酸的测定》，采用高效液相色谱法测定色氨酸，氨基酸自动分析仪进行氨基酸组成分析，测定发酵乳杆菌LF8005冻干培养物的氨基酸组成。
采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定发酵乳杆菌LF8005冻干培养物分子量分布。Shodex Ohpak SB-803HQ色谱柱，以超纯水作为流动相，流速1.0mL/min，示差折光检测器检测发酵乳杆菌LF8005冻干培养物的分子量分布，紫外检测器检测不同分子量物质吸收波长。
检测结果显示，发酵乳杆菌LF8005冻干培养物中粗多糖含量为52.61％，粗多糖含量是包括多糖和糖蛋白中的糖。其中单糖组成检测结果见图2，其中，保留时间10.1min为甘露糖；10.233min为葡萄糖；10.517min为半乳糖；11.3min为内标。酵乳杆菌LF8005冻干培养物中主要含有甘露糖、葡萄糖和半乳糖，其中摩尔比为甘露糖：葡萄糖：半乳糖＝1:3:2。
表2发酵乳杆菌LF8005培养物的氨基酸组成分析(
Figure BDA0002940582220000071
g/100g,n＝3,干重)
氨基酸 含量 氨基酸 含量
异亮氨酸Ile* 2.503±0.013 赖氨酸Lys* 1.976±0.031
苏氨酸Thr* 2.563±0.011 组氨酸His 2.205±0.006
酪氨酸Tyr 1.139±0.020 精氨酸Arg 2.940±0.019
谷氨酸Glu 2.207±0.024 半胱氨酸Cys 3.642±0.023
脯氨酸Pro 1.608±0.002 蛋氨酸Met* 2.331±0.024
丙氨酸Ala 2.886±0.021 天冬氨酸Asp 3.766±0.009
色氨酸Trp* 2.645±0.031 甘氨酸Gly 1.635±0.037
缬氨酸Val* 1.683±0.005 丝氨酸Ser 1.856±0.016
苯丙氨酸Phe* 2.001±0.047 亮氨酸Leu* 1.540±0.006
注:*代表必需氨基酸
凯氏定氮法测定发酵乳杆菌LF8005冻干培养物中总蛋白质含量为42.17％。其中氨基酸组成分析结果见表2，其中必需氨基酸约占总蛋白的40.90％。
表3发酵乳杆菌LF8005培养物的均分子量分布结果
Figure BDA0002940582220000081
发酵乳杆菌LF8005培养物的均分子量分布检测结果见图3和表3，表3为三批次培养物测定结果，图3为批次一检测图谱，其中横坐标为时间(min)，纵坐标为信号强度，保留时间/min从左到右1-6.583；2-8.444；3-12.314；4-13.545。结果显示，培养物分布在4个分子量区域，其中主要成分均分子量为5.6×105Da。培养物紫外吸收波长主要集中在190nm和280nm，说明发酵乳杆菌LF8005培养物主要包含由多糖(峰1)、糖蛋白(峰2)、多肽类和寡糖类生物素(峰3和峰4)在内的四种均一物质组成。
发酵乳杆菌LF8005培养物的均分子量分布检测结果见图3和表3，图3中横坐标为时间(min)，纵坐标为信号强度，保留时间/min从左到右1-6.583；2-8.444；3-12.314；4-13.545。结果显示，培养物分布在4个分子量区域，其中主要成分均分子量为5.638×105Da。说明发酵乳杆菌LF8005培养物主要包含由多糖、糖蛋白、肽类或寡糖类生物素在内的四种均一物质组成。
实施例5：发酵乳杆菌的护肤功能分析
5.1抑菌功能分析
采用牛津杯法对乳酸菌培养物的抑菌能力进行测定。选用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌三株致病菌，采用营养琼脂培养基，160rpm/min，37℃条件下培养15h，梯度稀释至数量级106，取2ml转移至100ml 50℃营养琼脂固体培养基中，混匀后倒入牛津杯平板中，凝固后取出牛津杯，将乳酸菌培养物用灭菌水溶解至5％浓度，取100μl接入孔中，置于37℃培养箱中培养12h，测量抑菌圈直径。
表4不同来源乳酸菌发酵培养物抑菌能力测定结果
Figure BDA0002940582220000091
不同来源乳酸菌发酵培养物抑菌能力测定结果见表4，其中对比不同来源乳酸菌发酵乳杆菌LF8005培养物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌体现出较好的抑菌效果，抑菌圈直径分别为18.41±0.34mm、23.74±0.53mm，对白色念珠菌具有一定的抑制效果，抑菌圈直径为12.42±0.16mm。
5.2抗氧化能力分析
总还原能力测定，取1mL 10mg/mL的乳酸菌发酵培养物溶液，加入0.5mL0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH＝6.6)和1.5ml 0.3％铁氰化钾，50℃水浴20min，后加入1mL 10％的三氯乙酸，混匀后3000rpm/min离心10min，取上清液2mL，加入0.5ml 0.3％三氯化铁溶液，混匀后在700nm处测定吸光值A，以1mg/mL维生素C作为对比参照。
DPPH﹒清除率测定，取2ml 30μmol/L的DPPH溶液，分别加入0.2ml 10mg/mL的乳酸菌发酵培养物溶液，混匀后置入25℃水浴中反应15min，测定525nm波长下的吸光值Ai，以0.2ml蒸馏水代替样品作为空白对照管Ac，以2ml 50％乙醇代替DPPH溶液作为样品参比管Aj，并以等体积蒸馏水和50％乙醇混合溶液空白调零，以1mg/mL维生素C作为对比参照。DPPH﹒清除率＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100％。
表5不同来源乳酸菌发酵培养物抗氧化能力测定结果
菌株 总还原力A DPPH﹒清除率％
VC 0.543±0.007 76.64±1.36
LF8005 0.892±0.012 85.39±3.76
CK-1 0.573±0.005 43.41±2.04
CK-2 0.638±0.024 60.53±2.70
CK-3 0.405±0.008 49.58±3.41
CK-4 0.356±0.028 39.02±2.90
CK-5 0.594±0.015 74.78±3.85
CK-6 0.275±0.027 38.64±4.07
不同来源乳酸菌发酵培养物抗氧化能力测定结果见表5，相对于不同分离来源乳酸菌，发酵乳杆菌LF8005具有较强的总还原能力和DPPH﹒清除率，总还原能力为0.892±0.012，DPPH﹒清除率达到85.39±3.76％，高于1mg/mL维生素C参比，具有较强的清除自由基抗氧化的作用。
5.3保湿能力分析
取不同来源乳酸菌发酵培养物，用去离子水配制成5％溶液，以10％甘油作为对照参比，用分析天平精确称取10g样品溶液，置于干燥恒重的玻璃培养皿中，保证完全覆盖培养皿底部，确保蒸发面积一致，将培养皿放入25℃恒温鼓风培养箱中，分别在1、2、4、6、8h后精确称量样品重量，计算重量降低率，公式为：
重量降低率％＝[初始重量A0-过程重量Ai]/初始重量A0×100％
不同来源乳酸菌发酵培养物保湿能力测定结果见图4，纵坐标为降低率％，显示发酵乳杆菌LF8005在长时间放置中水分降低水平最低，说明发酵乳杆菌LF8005培养物具有较好的保湿能力，可能与其含有较多粘性物质有关，可以有效增加保水能力。
5.4抗炎能力分析
近交系SPF级KM小鼠，体重18-20g，雌雄各半,预饲一周，随机分成9组，每组8只,设置空白组、模型组和样品组，空白组和模型组给予去离子水，样品组给予5％不同乳酸菌培养物，取50μl于小鼠右耳廓正反两侧均匀涂药，用药后1h，模型组和样品组小鼠右耳廓正反两侧均匀涂抹30μl二甲苯，15min后处死小鼠，剪下两耳，用直径0.8cm打孔器打取两耳圆片，分析天平精确称重，右耳减去左耳的重量差即代表肿胀度。
表6乳酸菌发酵培养物对小鼠耳廓炎症的影响
菌株 肿胀度/mg
空白对照组 2.4±0.8
模型组 15.7±4.6
LF8005 4.3±2.8**
CK-1 10.9±4.3
CK-2 7.5±4.7*
CK-3 6.4±3.2*
CK-4 12.6±6.1
CK-5 6.6±3.9*
CK-6 13.5±5.8
注:与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
二甲苯刺激小鼠耳廓炎症实验结果见表6，二甲苯可以刺激小鼠耳廓产生炎症反应，引起肿胀程度增加，不同来源乳酸菌发酵培养物可以炎症反应，降低肿胀度。与模型组相比，发酵乳杆菌LF8005培养物具有极显著性差异(P＜0.01)，体现出较高的抑制炎症反应效果，具有防止皮肤炎症发生的作用。
本发明从不同产地来源的发酵乳制品和酸菜中筛选乳酸菌，获得一株发酵乳杆菌，该发酵乳杆菌在液体发酵过程中产生多糖、糖蛋白、生物素等大分子活性物质，可以增加发酵液的黏度，通过对发酵乳杆菌培养物的成分及功效分析，可以发现该发酵乳杆菌培养物具有保湿功效，可以防止皮肤水分流失；具有抑制致病菌的作用，可体现出维护皮肤菌群平衡作用；通过清除自由基抗氧化，可以降低皮肤氧化损伤程度，增强皮肤细胞活力；通过抗炎作用，抑制皮肤慢性炎症的发生，在保护皮肤、促进皮肤健康方面起到多方面作用，可作为活性成分在化妆品中添加应用，为促进益生菌及其活性成分在化妆品领域的应用扩展提供有力的支持。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)菌株LF8005，其特征在于，所述菌株于2020年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCC NO:M 2020704。
2.根据权利要求1所述发酵乳杆菌的培养物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)菌株活化：将发酵乳杆菌LF8005转接于MRS固体斜面培养基，35-40℃培养12-16h；
(2)一级种子制备：取培养好的斜面菌株，无菌条件下挑取2环转接于100ml MRS液体培养基中，35-40℃静置培养12-20h，获得一级种子液；
(3)二级种子制备：取一级种子液转接至MRS液体培养基中进行扩大培养，转接量2％-10％，35-40℃静置培养12-20h，获得二级种子液；
(4)发酵罐培养：将二级种子液转接至灭菌培养基中，接种量5-10％，培养温度35-40℃，静置培养时间10-24h，黏度达20000-25000cP时，收集获得发酵液；
(5)发酵液灭活：将发酵液升高温度至75-85℃，保持时间15-25min，然后迅速冷却至室温25℃，冷却时间为5-10min，获得灭活发酵液；
(6)超声处理：将上述灭活发酵液置于超声波清洗器中进行超声处理，超声功率200-600W，温度35-50℃，时间30-120min，获得处理发酵液；
(7)离心：取上述处理发酵液，进行离心，离心转速3500rpm，时间10min，获得上清液；
(8)透析：将上述上清液置于3500Da的透析袋去离子水透析24-48h，得透析液；
(9)二次离心：去上述透析液，进行离心，离心转速3500rpm，时间10min，获得澄清透析液；
(10)浓缩：将上述澄清透析液，采用旋转蒸发仪，压力0.08-0.1MPa，温度40-50℃，旋转蒸发浓缩3-5倍，获得浓缩液；
(11)冷冻干燥：取发酵浓缩液，-80℃预冻12h，放入冷冻干燥机，冷阱温度-50℃，时间24-48h，冷冻干燥收集获得发酵培养物干粉。
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