CN111904909A - 一种含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，其中的玫瑰发酵液富含多糖、黄酮和氨基酸。其中含有的黄酮作用于头皮微生物，能够选择性抑制马拉色菌和葡萄球菌，而不抑制丙酸杆菌的生长，从而使头皮菌群达到平衡。含有的多糖能够保持头皮湿润，氨基酸能够增强头皮屏障。因此该去屑头皮精华能够调节头皮微生态，从多维度提升头皮健康，达到去头屑、滋养头皮的效果。

Description

一种含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华及其制备方法
技术领域
本发明涉及轻化工业技术领域，具体涉及一种含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，以及该去屑头皮精华的制备方法。
背景技术
头皮屑是常见疾病，据不完全统计，全球青春期后人群头皮屑患病率为50％，其成因和发病机制非常复杂。目前多数研究认为，微生物学因素、皮脂腺分泌和个体易感性是头皮屑发生最重要的三个因素。
其中微生物学因素和局部免疫反应在头皮屑的发病过程中起到了主要作用。人体皮肤上分布着许多微生物，其中头皮的上分布的真菌主要是马拉色菌(Malassezia sp.)，细菌主要是葡萄球菌(Staphylococcus sp.)和丙酸杆菌(Propionibacterium sp.)。
马拉色菌定殖是头皮屑发生的重要原因，应用抗真菌药物可以直接减少头皮屑的发生。马拉色菌诱导产生头皮屑的通路研究表明，马拉色菌生长需要脂肪酸，但马拉色菌本身不能从头合成脂肪酸，它具有脂肪酶等水解酶，可以水解宿主脂质，生成游离的饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸。由于马拉色菌对于不饱和脂肪酸利用存在限制，所以导致头皮上不饱和脂肪酸含量比例上升，不饱和脂肪酸会刺激头皮屑产生。此外也有研究表明，马拉色菌被巨噬细胞识别，引起炎症反应；马拉色菌使角鲨烯过氧化，引发炎症响应，继而可能导致头皮屑。因此，抑制马拉色菌，或是抑制马拉色菌脂肪酶活性，减少马拉色菌引起的炎症反应是治疗头皮屑的方法之一。
并且研究表明，头皮屑患者头皮上细菌组成有明显差异，头皮屑患者中丙酸杆菌含量降低，而葡萄球菌的含量增高。细菌丰度变化的原因至今没有详尽报道，但是调节丙酸杆菌和葡萄球菌含量比例达到健康人水平也是治疗头皮屑的新思路。
目前使用的去头屑成分主要是针对头皮定殖的马拉色菌设计，但对单一菌群抑制可能会导致抗药性快速出现，失去疗效，也可能使头皮菌群更加失衡，从而引发其他问题。如果从菌群平衡的角度筛选去头屑活性物，那么该活性物应该能够选择性抑制马拉色菌和葡萄球菌，而不抑制丙酸杆菌的生长，从而调节头皮上菌群平衡来达到去头屑的效果。同时，头皮角质层干燥和屏障受损会进一步导致头皮屑恶化，因此要在调节菌群的同时添加对头皮具有保湿功效和保护头皮屏障的活性物质。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华。
本发明的第二目的在于提供上述去屑头皮精华的制备方法。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
本发明涉及一种含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，以所述去屑头皮精华的质量为100％计，包括以下质量百分含量的原料：变性乙醇1％～5％、泛醇0.5％～1％、氨甲基丙醇0.05％～0.3％、透明质酸钠0.1％～0.5％、玫瑰发酵液10％～20％、尿囊素0.1％～0.5％、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.1％～0.3％、乙基己基甘油0.5％～1％、苯氧乙醇0.3％～0.8％，余量为纯水。
本发明还涉及所述去屑头皮精华的制备方法，包括以下步骤：
(1)将所述纯水和丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物混合均匀得到A相备用；
将所述纯水、变性乙醇、泛醇、氨甲基丙醇、透明质酸钠、玫瑰发酵液和尿囊素混合均匀得到B相备用；
将所述乙基己基甘油和苯氧乙醇混合均匀得到C相备用；
优选地，所述A相中的纯水占纯水总质量的40％～55％，余下的纯水加入B相中；
(2)搅拌条件下，将所述A相中的纯水加入搅拌锅中，然后加入丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物，加热至70～75℃后搅拌至混合均匀，然后冷却至室温；
(3)将所述B相加入搅拌锅中，搅拌至混合均匀；
(4)将C相加入到搅拌锅中并搅拌均匀，得到所述去屑头皮精华。
本发明还涉及所述玫瑰发酵液的制备方法，包括以下步骤：
1)玫瑰发酵基质制备：将干玫瑰花蕾粉碎后过筛，并加水配成混合液，灭菌后得到玫瑰发酵基质。
优选地，所述筛网的目数为100～200目。
优选地，所述混合液的质量浓度为10％～15％。
优选地，所述灭菌为将所述混合液在121℃下灭菌15min，或对其在600MPa，25℃下进行超高压灭菌。
2)菌种活化：采用平板划线法将菌种分别接种到固体活化培养基表面，于37℃恒温倒置培养15～20h，得到活化菌株；
优选地，所述菌种选自双歧杆菌、芽孢杆菌、乳杆菌、酿酒酵母中的至少一种。
优选地，所述菌种选自青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271、酿酒酵母菌CICC 1252中的至少一种。
优选地，所述活化培养基为MRS培养基，包括牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，琼脂20g/L，pH值6.2±0.2。
优选地，所述活化培养基还包括海藻多糖，所述海藻多糖的加入量为3g/L。
3)混合发酵：将所述活化菌株扩大培养后进行混合得到混合菌液，将所述混合菌液以1.5％～2.5％的质量百分含量加入玫瑰发酵基质中，于40～45℃摇床发酵培养45～50h，得到初始发酵液；
优选地，所述摇床转速为100～150rpm。
优选地，所述菌种为纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC 1252的混合菌种，扩大培养后的所述纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC 1252的种子液质量比例为1:(2～5):(2～5)。
4)发酵后处理：对所述初始发酵液依次进行灭菌、菌体破碎和过滤后，得到所述玫瑰发酵液。
优选地，所述灭菌为将所述初始发酵液在121℃下灭菌15min，或对其在600MPa，25℃下进行超高压灭菌。
优选地，所述过滤选自离心分离、超滤膜过滤、微滤膜过滤、反渗透过滤中的一种，或者在灭菌后破碎菌体无需进行过滤。
优选地，采用高压匀浆机破碎菌体，压力设定为100MPa，匀浆3～5次，出口温度为25℃。
本发明的有益效果：
本发明提供了一种含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华。其对于马拉色菌和葡萄球菌具有抑制作用，但对痤疮丙酸杆菌抑制作用很弱。机理研究发现，该工艺玫瑰发酵物能够抑制马拉色菌的CA酶(马拉色菌生长必需酶)，从而抑制马拉色菌生长；也能够抑制马拉色菌的脂肪酶，从而抑制不饱和脂肪酸的生成；并且可以减少角质细胞的炎症因子表达，进而减少头屑带来的不适感。同时，玫瑰发酵液富含多糖、黄酮和氨基酸。多糖可以保持头皮湿润，氨基酸能够增强头皮屏障，因此该去屑头皮精华能够调节头皮微生态，从多维度提升头皮健康，改善菌群平衡，达到去头屑、滋养头皮的效果。
附图说明
图1为本发明玫瑰发酵液的制备流程图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
本发明实施例涉及一种含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，以所述去屑头皮精华的质量为100％计，包括以下质量百分含量的原料：变性乙醇1％～5％、泛醇0.5％～1％、氨甲基丙醇0.05％～0.3％、透明质酸钠0.1％～0.5％、玫瑰发酵液10％～20％、尿囊素0.1％～0.5％、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.1％～0.3％、乙基己基甘油0.5％～1％、苯氧乙醇0.3％～0.8％，余量为纯水。
其中，变性乙醇为添加了助剂的酒精，非食用酒精。作用是增加头皮清爽度，使其保持干燥。
泛醇又称泛酞醇，通常被称为前维生素B5。为无色至微黄色透明粘稠的液体，略带特殊气味。对皮肤和头发具有保湿、抗炎、刺激细胞分裂等作用。
氨甲基丙醇，别名为2-氨基-2-甲基-1-丙醇。氨甲基丙醇在化妆品、护肤品里主要作用是pH调节剂，风险系数为3，比较安全。
透明质酸钠是人体内一种固有的成分，是一种葡聚糖醛酸，没有种属特异性。它广泛存在于胎盘、羊水、晶状体、关节软骨、皮肤真皮层等组织中，对其中所含的细胞和细胞器官本身起润滑与滋养作用。
玫瑰发酵液含有黄酮、氨基酸等活性物质，起到营养头皮和去屑作用。
尿囊素，别名5-尿基乙内酰胺、脲基醋酸内酰胺、脲基海因、脲咪唑二酮，是一种乙内酰脲衍生物。由于尿囊素是一种两性化合物，能结合多种物质形成复盐，具有避光、杀菌防腐、止痛、抗氧化作用，能使皮肤保持水份，滋润和柔软，对头发有保护作用，可使头发不分叉、不断发。
丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物(duAcrylates C10-30 AlkylAcrylate Cross Polymer)是一种成膜剂，在化妆品中可用做增稠剂和稳定剂。主要用于透明凝胶和液体中，以及一些防晒霜和面部磨砂产品中。它通常用于在水中保持分散形态避免凝结，形成的膜还可以为产品提供锁水功能。
乙基己基甘油又名3-[2-(乙基己基)氧]-1,2-丙二醇、1,2-丙二醇-3-(2-乙基己基)醚、甘油单异辛基醚、辛氧基甘油。具有保湿作用和抗菌性，可作为防腐剂使用，且稳定性强，能提高产品滋润效果，兼具柔滑肤感。该成分还能增强传统防腐剂如苯氧乙醇、甲基异噻唑啉酮、羟苯甲酯等，减少产品中这些成分的用量，增加了产品的安全性。
苯氧乙醇作为防腐剂，在去屑头皮精华中的质量含量小于1％。
本发明实施例还涉及该去屑头皮精华的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯水和丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物混合均匀得到A相备用；
将变性乙醇、泛醇、氨甲基丙醇、透明质酸钠、玫瑰发酵液和尿囊素混合均匀得到B相备用；
将乙基己基甘油和苯氧乙醇混合均匀得到C相备用；
可以按以下方式分配A相和B相中的纯水用量：A相中的纯水占纯水总质量的40％～55％，余下的纯水加入B相中；
(2)开启搅拌锅的搅拌功能，将A相中的纯水加入搅拌锅中，然后加入丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物，加热至70～75℃后搅拌至混合均匀，然后冷却至室温；
(3)将B相中的各原料逐个加入搅拌锅中，搅拌至混合均匀；
(4)将C相加入到搅拌锅中并搅拌均匀，取样检测符合标准后，出料。
对制备过程的机理解释如下：先加入纯水和丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物，有利于后续的活性物质在体系中的溶解和分散。然后加入氨甲基丙醇、透明质酸钠、玫瑰发酵液和尿囊素等B相水溶性活性物质，最后加入C相作为防腐剂。
本发明还涉及玫瑰发酵液的制备方法，其制备流程图如图1所示，包括以下步骤：
1)玫瑰发酵基质制备：将干玫瑰花蕾粉碎后过筛，并加水配成混合液，灭菌后得到玫瑰发酵基质。
在本发明的一个实施例中，筛网的目数为100～200目。混合液的质量浓度为10％～15％。
在本发明的一个实施例中，灭菌为将混合液在121℃下灭菌15min，或对混合液进行软包装后，用水作为介质，在600MPa，25℃下进行超高压灭菌。超高压灭菌的温度较低，可保护多酚、黄酮类物质，但超高压灭菌成本高，可根据实际情况选择灭菌方式。
2)菌种活化：采用平板划线法将菌种分别接种到固体活化培养基表面，于37℃恒温倒置培养15～20h，得到活化菌株。菌种活化的目的是使保藏菌种的活性得以恢复，同时恢复其优良的生产性能。
在本发明的一个实施例中，菌种选自双歧杆菌、芽孢杆菌、乳杆菌、酿酒酵母中的至少一种。
进一步地，菌种选自青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271、酿酒酵母菌CICC 1252中的至少一种。
优选地，菌种为纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC 1252的混合菌种。
在本发明的一个实施例中，用于菌种活化的活化培养基为MRS培养基，包括牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，琼脂20g/L，pH值6.2±0.2。
进一步地，活化培养基还包括海藻多糖，所述海藻多糖可作为碳源加入，有利于菌株活化，对于菌落直径、形态、菌体体积以及长出的菌落时间都有正向效果。优选海藻多糖的加入量为3g/L。
进一步地，菌种活化方式为：用灭菌竹签蘸取少量的菌种，按照平板划线法在固体活化培养基上划线，于37℃的恒温培养箱中倒置培养15～20h，得到活化菌株。由于双歧杆菌和乳杆菌需要无氧条件活化，芽孢杆菌和酿酒酵母需要有氧活化，可以将双歧杆菌、乳杆菌、芽孢杆菌和酿酒酵母分别接种于不同的固体活化培养基，然后在适宜的条件下培养，待混合发酵步骤将上述活化菌株加入玫瑰发酵基质中即可。
3)混合发酵：将活化菌株扩大培养后，按照比例混合得到混合菌液，将所述混合菌液以1.5％～2.5％的质量百分含量加入玫瑰发酵基质中，于40～45℃摇床发酵培养45～50h，得到初始发酵液。
在本发明的一个实施例中，采用MRS液体培养基进行扩大培养，包括牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，pH值6.2±0.2。不同菌种的扩大培养方法如下：
[1]对于酿酒酵母菌CICC 1252，固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，轻微摆动接种针，使菌体分散于液体培养基内，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^9cfu/mL时结束，得到酿酒酵母种子液。
[2]对于纳豆芽孢杆菌CICC 10262，固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，轻微摆动接种针，使菌体分散于液体培养基内，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^9cfu/mL时结束，得到纳豆芽孢杆菌种子液。
[3]对于青春双歧杆菌CICC 6175，由于在无氧条件进行活化，需要对其进行耐氧训练。具体为固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，静置培养24h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为5％，37℃，20rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为10％，37℃，60rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为15％，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^9cfu/mL时结束，得到青春双歧杆菌种子液；
[4]对于保加利亚乳杆菌CICC 20271，由于在无氧条件进行活化，需要对其进行耐氧训练。具体为固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，静置培养24h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为5％，37℃，20rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为10％，37℃，60rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为15％，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^9cfu/mL时结束，得到保加利亚乳杆菌种子液。
扩大培养后的纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC 1252种子液的质量比例为1:(2～5):(2～5)。申请人研究发现，当发酵菌种满足上述配比时，得到的玫瑰发酵液中含有较多的黄酮和糖类物质。
在步骤3)中，采用摇床培养可以使菌种与发酵底物充分接触，优选的摇床转速为100～150rpm。
4)发酵后处理：对初始发酵液依次进行灭菌、菌体破碎和过滤后，得到玫瑰发酵液。
与步骤1)类似，灭菌为将初始发酵液在121℃下灭菌15min，或对其在600MPa，25℃下进行超高压灭菌。
过滤选自离心分离、超滤膜过滤、微滤膜过滤、反渗透过滤中的一种，或者在灭菌后破碎菌体无需进行过滤，目的是除去悬浮物，防止沉降。
采用高压匀浆机破碎菌体，目的是破碎发酵菌及部分玫瑰细胞，使胞内物质溶出，玫瑰发酵液的成分更丰富。高压匀浆压力设定为100MPa，匀浆3～5次，出口温度为25℃。也可采用超声破碎菌体。
制备例玫瑰发酵液的制备
制备例1
1)玫瑰发酵基质制备：将干玫瑰花蕾粉碎后过100目筛，并加水配成质量浓度为10％的混合液，121℃下灭菌15min，得到玫瑰发酵基质。
2)菌种活化：用灭菌竹签蘸取纳豆芽孢杆菌CICC 10262，按照平板划线法在固体活化培养基上划线，于37℃的恒温培养箱中倒置有氧培养15～20h，得到活化纳豆芽孢杆菌CICC 10262菌株。
用灭菌竹签蘸取保加利亚乳杆菌CICC 20271，按照平板划线法在固体活化培养基上划线，于37℃的恒温培养箱中倒置无氧培养15～20h，得到活化保加利亚乳杆菌CICC20271菌株。
用灭菌竹签蘸取酿酒酵母菌CICC 1252，按照平板划线法在固体活化培养基上划线，于37℃的恒温培养箱中倒置有氧培养15～20h，得到活化酿酒酵母菌CICC 1252菌株。
活化培养基为MRS培养基，包括牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，琼脂20g/L，pH值6.2±0.2。
3)混合发酵：将活化菌株分别扩大培养，以纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC 1252的种子液质量比例为1:3:3混合，把混合菌液按照2％的质量百分含量加入玫瑰发酵基质中，于40℃，120rpm摇床发酵培养48h，得到初始发酵液。
4)发酵后处理：对初始发酵液在121℃下灭菌15min后，使用High PressureHomogenizer高压匀浆机进行菌体破碎，压力设定为100MPa，匀浆3次，出口温度为25℃，然后离心分离取上清液，得到玫瑰发酵液。
制备例2～8改变某一项实验参数，其它操作步骤和测试过程同制备例1，具体设置方式见表1。制备例中的青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271、酿酒酵母菌CICC 1252均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
对比例1中的玫瑰提取液的提取方法为：将干玫瑰花蕾粉碎后过100目筛，并加水配成质量浓度为10％的混合液，121℃下灭菌15min，然后在40℃下保温48h，再在121℃下灭菌15min，离心分离取上清液，即得到清水提取液。
对比例2中的玫瑰发酵液的制备方法为：将步骤2)中的活化培养基替换为沙氏葡萄糖液体培养基。
表1
Figure BDA0002639833130000111
营养成分检测
对于制备例1至12制备得到的玫瑰发酵液，以及对比例1和2制备得到的玫瑰提取液，采用分光光度法测定总黄酮含量；参照GB/T 5009.7-2008测定总糖含量；参照GB/T5009.124-2003测定氨基酸含量。测试结果见表2和表3。
表2玫瑰发酵液各成分含量
Figure BDA0002639833130000121
表3玫瑰发酵液氨基酸含量
Figure BDA0002639833130000122
Figure BDA0002639833130000131
上述实验结果表明，比较制备例1和对比例1可知，与传统玫瑰水提物相比，本发明的玫瑰发酵液含有更多的活性物质，例如多糖、黄酮和氨基酸。
比较制备例1～6以及制备例11和12可知，采用纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC 1252作为发酵菌种，且三者质量比例满足1:(2～5):(2～5)时，玫瑰发酵液中的活性物质含量最高。
比较制备例1和7～9可知，如果在此基础上向活化培养基和扩大培养基中均加入海藻多糖，能够进一步提升活性物质含量。但将海藻多糖替换为葡萄糖或米粉则不具有相应效果，原因可能是海藻多糖刺激菌种表达了某些基因，使其分解、合成活性物质的能力提升，并且使菌生长状态更加旺盛，活力更强。
比较制备例1与10可知，混合发酵过程中，摇床上培养比静置培养有更多活性物质，原因可能是摇床使发酵菌与玫瑰充分接触，使活性成分更易产生和流出。
比较制备例1与11和12可知，黄酮含量有所升高，原因可能是超高压灭菌可以保护黄酮，减少其被氧化。
比较制备例1和对比例2可知，采用固体活化培养基与液体活化培养基相比，能获得更多的活性物质。并且与液体培养基相比，固体培养基单位体积的质量更轻，而且对生产过程中所需设备要求较低。大量培育液体菌种需要在大型液体发酵罐中进行，对场地、能源(蒸汽)的需求较高；而使用固体培养基培育菌种，仅需灭菌设备即可，在条件较低的情况下即可生产。
抑菌实验
(1)将表皮葡萄球菌ATCC12228接种于营养肉汤培养基，金黄色葡萄球菌ATCC6538接种于营养肉汤培养基，痤疮丙酸杆菌ATCC6919接种于GAM培养液，糠秕马拉色菌ATCC443434培养于橄榄油培养基。
(2)每种培养液各取10mL，各2份，分别加入0.1mL制备例1的玫瑰发酵液和0.1mL去离子水作为空白对照。
(3)将表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌置于37℃下进行24h需氧培养，将痤疮丙酸杆菌、糠秕马拉色菌置于37℃下进行48h厌氧培养。
(4)用稀释平板法测定培养前后培养液中各种菌的数目，测试结果如表4所示。
表4
Figure BDA0002639833130000141
以3.1*10^6为例，含义为3.1×106。
表4数据可以看出，培养24h后，糠秕马拉色菌的数量下降1个数量级，金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的数量也被抑制了，而痤疮丙酸杆菌没有显著变化。说明本发明的玫瑰提取液可以作用于头皮微生物，特别是能够选择性抑制马拉色菌和葡萄球菌，而不抑制丙酸杆菌的生长，从而使头皮菌群达到平衡。将其用于去屑头皮精华中，能够调节头皮微生态，达到去头屑、滋养头皮的效果。
实施例去屑头皮精华的制备
(1)将纯水50份和丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.2份作为A相备用；
B相组分选自变性乙醇、泛醇、氨甲基丙醇、透明质酸钠、玫瑰发酵液、尿囊素和纯水中的若干种。
将乙基己基甘油0.7份和苯氧乙醇0.5份作为C相备用；
其中丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物购自路博润公司，型号为Ultrez 20。尿囊素购自DSM，无具体型号。
(2)开启搅拌锅的搅拌功能，将A相中的纯水加入搅拌锅中，然后缓慢加入丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物，加热至70～75℃后搅拌至混合均匀，然后冷却至室温；
(3)将B相中的各原料逐个加入搅拌锅中，搅拌至混合均匀；
(4)将C相加入到搅拌锅中并搅拌均匀，取样检测符合标准后，出料。
实施例1～7和对比例1～2改变B相组分和加入量，其它操作步骤和测试过程同实施例1，具体设置方式见表5。
表5
Figure BDA0002639833130000151
Figure BDA0002639833130000161
其中，“余量纯水”的含义为：将去屑头皮精华的总质量计为100份，用100份减去B相中除纯水以外的原料，以及A相和C相，余下的即为B相中纯水的重量份。
头皮使用测试
选取年龄范围18～60岁的有轻微头屑问题的80名志愿者，男女均可，年龄在18～60岁之间。将上述志愿者随机分为8组，每组10人。其中1至5组为实验组，分别在使用普通市售非去屑洗发水洗头后使用上述实施例1～5和对比例1～2制备的去屑头皮精华；第8组为空白组，使用同种洗发水后不使用去屑头皮精华。根据使用者习惯，每天或隔天洗头，洗头后使用头皮精华，实验时间为30天。
去屑头皮精华使用方法为：洗发后取2～5mL去屑头皮精华涂抹于头皮表面。指腹按揉3～5分钟后直接吹干头发或自然晾干。
选取头顶正中作为测试部位，在实验第0，15，30天采用皮肤水分测试仪水分测试探头Corneometer CM825测试其头皮角质层含水量，测试三次取平均值，结果如表6所示；在实验第0，15，30天采用超小皮肤水分流失TEWL测试探头Tewameter TM Nano测试其头皮经皮失水，测试三次取平均值，结果如表7所示。
采用ASFS分值(adhere scalp flaking score，黏着性头皮鳞屑分值)对实施例1～5的人群进行临床评估，无可见脱屑为0分；发根偶见细小脱屑为1分；少量的大型脱屑或大量细小脱屑为3分；大量大型脱屑为4分。在实验开始第0天，14天，28天于洗头前进行评分，结果如表8所示。
表6
Figure BDA0002639833130000171
表7
Figure BDA0002639833130000172
从表6和7可知，实施例1～7均在第28天头皮角质层含水量上升，头皮经皮失水量下降，说明含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华具有滋润头皮的作用，可以使头皮角质层水含量增加。头皮经皮失水减少意味着头皮屏障功能增强，以上对于减少头屑产生有一定帮助。
将实施例1～3对比可知，添加的玫瑰发酵液份数增加，头皮角质层含水量增加，经皮失水下降。实施例3与实施例4对比可知，添加玫瑰发酵液15份与20份相比，头皮角质层含水量与经皮失水的变化不大。考虑到成本，优选15份为玫瑰发酵液添加量。
将实施例3、实施例5～7与对比例2对比可知，在玫瑰发酵液添加份数相同的条件下，复配泛醇、透明质酸钠和尿囊素能够促进头皮角质层含水量增加以及经皮失水下降，起到很好的协同增效作用。因此配方中建议复配泛醇、透明质酸钠和尿囊素。
表8
ASFS分值 0天 14天 28天
实施例1 2.53±0.31 2.43±0.27 2.39±0.19
实施例2 2.31±0.18 2.01±0.46 1.87±0.21
实施例3 2.34±0.22 1.93±0.28 1.82±0.18
实施例4 2.33±0.21 1.92±0.27 1.82±0.19
实施例5 2.46±0.17 2.11±0.15 1.41±0.21
实施例6 2.50±0.21 2.41±0.17 1.76±0.25
实施例7 2.49±0.15 2.40±0.25 1.34±0.10
对比例1 2.19±0.21 2.22±0.23 2.24±0.18
对比例2 2.71±0.27 2.73±0.19 2.62±0.13
空白组 2.45±0.14 2.43±0.21 2.49±0.19
从表8可知，从第0天至第28天，实施例5受试者的平均ASEF分值由2.46降为1.41，可见使用玫瑰发酵液复配泛醇、透明质酸钠和尿囊素的去屑头皮精华能够改善头屑。
将实施例1～3对比可知，玫瑰发酵液添加量低于15份时去屑效果降低。实施例3与实施例4的分值降低幅度接近。考虑到成本，优选15份为玫瑰发酵液添加量。
将实施例6和7与实施例5比较可知，当玫瑰发酵液添加量15份时，改变其它物质的加入量，对去屑效果影响不大。
将实施例3、实施例5和对比例2对比可知，泛醇、透明质酸钠和尿囊素三者对头屑影响很小。实施例3说明添加玫瑰发酵液可以对去头屑起到一定效果，实施例5说明在与实施例3玫瑰发酵液添加份数相同的条件下，复配泛醇、透明质酸钠和尿囊素能够协同增加去屑效果。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，其特征在于，以所述去屑头皮精华的质量为100％计，包括以下质量百分含量的原料：变性乙醇1％～5％、泛醇0.5％～1％、氨甲基丙醇0.05％～0.3％、透明质酸钠0.1％～0.5％、玫瑰发酵液10％～20％、尿囊素0.1％～0.5％、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.1％～0.3％、乙基己基甘油0.5％～1％、苯氧乙醇0.3％～0.8％，余量为纯水。
2.根据权利要求1所述的含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将所述纯水和丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物混合均匀得到A相备用；
将所述纯水、变性乙醇、泛醇、氨甲基丙醇、透明质酸钠、玫瑰发酵液和尿囊素混合均匀得到B相备用；
将所述乙基己基甘油和苯氧乙醇混合均匀得到C相备用；
优选地，所述A相中的纯水占纯水总质量的40％～55％，余下的纯水加入B相中；
(2)搅拌条件下，将所述A相中的纯水加入搅拌锅中，然后加入丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物，加热至70～75℃后搅拌至混合均匀，然后冷却至室温；
(3)将所述B相加入搅拌锅中，搅拌至混合均匀；
(4)将C相加入到搅拌锅中并搅拌均匀，得到所述去屑头皮精华。
3.根据权利要求1所述的含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，其特征在于，所述玫瑰发酵液的制备方法包括以下步骤：
1)玫瑰发酵基质制备：将干玫瑰花蕾粉碎后过筛，并加水配成混合液，灭菌后得到玫瑰发酵基质；
2)菌种活化：采用平板划线法将菌种分别接种到固体活化培养基表面，于37℃恒温倒置培养15～20h，得到活化菌株；
3)混合发酵：将所述活化菌株扩大培养后进行混合得到混合菌液，将所述混合菌液以1.5％～2.5％的质量百分含量加入玫瑰发酵基质中，于40～45℃摇床发酵培养45～50h，得到初始发酵液；
4)发酵后处理：对所述初始发酵液依次进行灭菌、菌体破碎和过滤后，得到所述玫瑰发酵液。
4.根据权利要求3所述的含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，其特征在于，步骤1)中，所述混合液的质量浓度为10％～15％。
5.根据权利要求3所述的含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，其特征在于，步骤2)中，所述菌种选自青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC20271、酿酒酵母菌CICC 1252中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，其特征在于，步骤2)中，所述菌种为纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC 1252的混合菌种，步骤3)中扩大培养后的所述纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC20271和酿酒酵母菌CICC 1252种子液的质量比例为1:(2～5):(2～5)。
7.根据权利要求3所述的含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，其特征在于，步骤2)中，所述活化培养基为MRS培养基，包括牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，琼脂20g/L，pH值6.2±0.2。
8.根据权利要求3所述的含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，其特征在于，步骤2)中，所述活化培养基还包括海藻多糖，所述海藻多糖的加入量为3g/L。
9.根据权利要求3所述的含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，其特征在于，步骤3)中，所述摇床转速为100～150rpm。
10.根据权利要求3所述的含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华，其特征在于，步骤1)和4)中，所述灭菌为将所述初始发酵液在121℃下灭菌15min，或对其在600MPa，25℃下进行超高压灭菌；
步骤4)中，采用高压匀浆机破碎菌体，压力设定为100MPa，匀浆3～5次，出口温度为25℃。
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