CN115960742B - 具有延长真皮成纤维细胞寿命、抗皮肤老化功能的发酵乳杆菌xjc48及其应用 - Google Patents
具有延长真皮成纤维细胞寿命、抗皮肤老化功能的发酵乳杆菌xjc48及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115960742B CN115960742B CN202210822151.XA CN202210822151A CN115960742B CN 115960742 B CN115960742 B CN 115960742B CN 202210822151 A CN202210822151 A CN 202210822151A CN 115960742 B CN115960742 B CN 115960742B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- xjc
- lactobacillus fermentum
- lactobacillus
- fermentum
- uva
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 title claims abstract description 97
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 title claims abstract description 97
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 title abstract description 18
- 230000006870 function Effects 0.000 title abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 39
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 39
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 34
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 34
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 30
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 13
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 13
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 2
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 47
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 abstract description 25
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 16
- 206010051246 Photodermatosis Diseases 0.000 abstract description 11
- 230000008845 photoaging Effects 0.000 abstract description 9
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 abstract description 8
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 abstract description 8
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 abstract description 7
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 abstract description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 7
- 101710151806 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 abstract description 6
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 abstract description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 5
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 abstract description 5
- 208000014674 injury Diseases 0.000 abstract description 5
- 101001059929 Caenorhabditis elegans Forkhead box protein O Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 7
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 7
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 7
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 6
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 6
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical group N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 6
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 5
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 5
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 5
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 4
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 4
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 4
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 3
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 230000007730 Akt signaling Effects 0.000 description 2
- 241000301512 Bacillus cereus ATCC 14579 Species 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 2
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 2
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 description 2
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 2
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 2
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000037338 UVA radiation Effects 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000004155 insulin signaling pathway Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 2
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 238000007665 sagging Methods 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000007671 third-generation sequencing Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl-(4-methoxyphenyl)sulfonylamino]-n-hydroxy-4-methylpentanamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(CC(C)C)C(=O)NO)CC1=CC=CC=C1 VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100297694 Arabidopsis thaliana PIP2-7 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 108700002304 Drosophila can Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 241001360526 Escherichia coli ATCC 25922 Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 108090000988 Lysostaphin Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000017343 Phosphatidylinositol kinases Human genes 0.000 description 1
- 108050005377 Phosphatidylinositol kinases Proteins 0.000 description 1
- 206010063493 Premature ageing Diseases 0.000 description 1
- 208000032038 Premature aging Diseases 0.000 description 1
- 108010050808 Procollagen Proteins 0.000 description 1
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 101100456541 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) MEC3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100483663 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) UFD1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710108790 Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100028848 Stromelysin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710108792 Stromelysin-2 Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- 238000009412 basement excavation Methods 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 1
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 1
- 230000011382 collagen catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000010227 cup method (microbiological evaluation) Methods 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 229940066758 endopeptidases Drugs 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000010201 enrichment analysis Methods 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000021393 food security Nutrition 0.000 description 1
- 101150046266 foxo gene Proteins 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000000383 hazardous chemical Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005142 microbroth dilution method Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007886 mutagenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000299 mutagenicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000028 nontoxic concentration Toxicity 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003068 pathway analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 108700022487 rRNA Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 description 1
- 230000036559 skin health Effects 0.000 description 1
- 206010040872 skin infection Diseases 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了具有延长真皮成纤维细胞寿命、抗皮肤老化功能的发酵乳杆菌XJC48及其应用。发酵乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)XJC48，是经筛选得到的具有抗皮肤老化作用的发酵乳杆菌，具体表现为：1、提高UVA损伤后人真皮成纤维细胞存活率49.62％；2、分别降低1.40倍、11.64倍UVA损伤后人真皮成纤维细胞中的MMP‑1和MMP‑2的表达水平；3、能调节IGF‑1/Akt/FOXO细胞寿命调节通路，延长真皮成纤维细胞寿命；4、抑制皮肤致病菌。本发明提供一种更安全有效地改善皮肤光老化问题的方法，具有广阔的市场发展空间和较高的市场价值。
Description
技术领域：
本发明属于微生物领域，具体涉及具有延长真皮成纤维细胞寿命、抗皮肤老化功能的发酵乳杆菌XJC48及其应用。
背景技术：
自臭氧空洞出现至今，过量的紫外辐射(ultraviolet radiation，UV radiation)产生的生化效应已造成严重的环境危害,正严重影响环境以及人类的自身健康。皮肤是接受UV辐照最直接且面积最大的人体器官，过量的UV辐照对其造成的损伤最为严重。UV辐照导致的皮肤损伤被称为光老化，而光老化是导致皮肤细胞提早衰老死亡的主要因素，80％以上的面部老化均由光老化引起。光老化主要表现为皮肤松弛、下垂和皱纹加深，主要机制是光老化皮肤真皮层中的成纤维细胞数量减少，真皮细胞外基质(extracellular matrix，ECM)造成明显的损伤。真皮ECM最重要及含量最高的物质是胶原、弹性蛋白和糖胺聚糖，这些蛋白的主要功能是维持皮肤的强度、弹性和水分。研究指出，光老化导致皮肤粗糙、松弛、起皱与皮肤中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)增加密切相关。MMPs是一类依赖于锌离子的内肽酶家族，其主要生理作用是降解ECM中的各种蛋白质成分。
UV辐照对皮肤的损害与波长密切相关：中波长UVB的诱变性很强，可以直接导致DNA和RNA损伤从而损伤皮肤细胞，长波长UVA是一种微弱的诱变剂，但它具有很强的穿透能力，可以影响真皮甚至皮下组织区域。当在相同辐照剂量时，暴露于UVB对皮肤的损伤比暴露于UVA大得多，但是因为太阳中UVA辐射实际上没有被大气层吸收所以皮肤受到UVA的损伤也是不可忽视的。
随着人们越来越关注皮肤健康，追求健康年轻的皮肤，美容护肤逐渐成为人们关注的热点，无时无刻的UV辐照成为皮肤衰老的主要元凶。目前抗光老化是国内外讨论的热点问题，近年来相关的研究呈指数型增长。因此，寻找有效、安全的修复皮肤UVA损伤、缓解炎症、延长光照后真皮细胞寿命、预防皮肤光老化方法具有重大的应用研究价值。
乳酸菌(Lactic acid bacteria，LAB)是一类利用糖类发酵产生乳酸的无芽孢、革兰氏阳性细菌。乳酸菌被美国FDA认证为安全微生物，是与人类关系最为密切的微生物之一。乳酸菌可以保持肠道微生态平衡，抑制肠内有害菌生长，控制内毒素，减少腐败物质产生，制造营养物质，刺激组织发育等。近年来，乳酸菌的抗光老化活性被发现，文献报道了嗜酸乳杆菌KCCM 12625可以通过减少皮肤衰老过程中产生的MMP-1、MMP-9的表达，同时增加了前胶原蛋白的表达，减少真皮层胶原蛋白流失；干酪乳杆菌B9-1的胞外多糖作用于UV损伤的皮肤细胞后可下调MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9和MMP-10表达水平，从而增强皮肤细胞中抗胶原酶、抗弹性蛋白酶活性，可有效减少光照后的胶原蛋白降解。上述研究证明益生菌可以通过降低MMPs、保护真皮成纤维细胞等方式修复紫外受损皮肤。
国内外对具有抗皮肤光老化功能因子的研究，目前主要集中于多肽类、多糖类和黄酮类物质。现今化妆品市场从植物提取物时代进入微生态护肤时代，在化妆品行业也出现许多与益生菌相关的护肤品。因此，寻找具有抗皮肤衰老能力的益生菌，可以延长皮肤真皮细胞寿命、修复紫外损伤的皮肤，有利于更安全有效地改善皮肤光老化问题，具有广阔的市场发展空间和较高的市场价值。
发明内容：
本发明的第一个目的在于提供一株发酵乳杆菌(Limosilactobacillusfermentum)XJC48。本发明的发酵乳杆菌XJC48在体内、体外均明显减低UV诱导的真皮成纤维细胞的MMPs表达水平、延长真皮细胞寿命，有效抗皮肤老化。
本发明的发酵乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)XJC48，其于2022年5月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为GDMCC No：62495。
本发明的第二个目的提供上述发酵乳杆菌XJC48在制备预防和/或治疗皮肤老化问题如皱纹增多、感染等药品中的应用。
本发明的第三个目的是提供一种预防和/或治疗皮肤老化的药品，其含有发酵乳杆菌XJC48作为活性成分。
优选，所述的发酵乳杆菌XJC48是以发酵乳杆菌XJC48的活菌菌体、菌体破碎物、发酵液或发酵上清液的形式使用。
进一步优选，所述的药品含有发酵乳杆菌XJC48、药物载体和/或药物辅料。
本发明的第四个目的是提供一种鉴别发酵乳杆菌XJC48的引物对，引物对包括如SEQ IDNo.3和SEQ ID No.4所示的核苷酸序列。
本发明的第五个目的是提供一种鉴别发酵乳杆菌XJC48的方法，其是以上述引物对作为扩增引物对待测菌进行PCR反应扩增，如果扩增出479bp的产物，则为发酵乳杆菌XJC48，如果没有扩增出479bp的产物，则不是发酵乳杆菌XJC48。
本发明的第六个目的是提供了一种对样本中发酵乳杆菌XJC48进行定量检测的方法，采用SEQ ID No.3和SEQ ID No.4作为qPCR扩增反应的引物进行qPCR反应扩增，在空白对照不存在荧光信号前提下，如果产生荧光信号，说明样品中含有发酵乳杆菌XJC48；如果不产生荧光信号，则样品中不含有发酵乳杆菌XJC48。
本发明与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1、本发明中的发酵乳杆菌XJC48来源于阳光充足的新疆奶酪，为本土来源的优良菌株。
2、与传统抗光老化的化学药物相比，本发明具有对生态环境无毒副作用、无残留风险，绿色安全。
3、本发明使用方便、安全，在基因、细胞多水平证实均无对人体有潜在的危害，具有安全、高效的优点。
4、本发明的发酵乳杆菌XJC48是具有良好的抗皮肤老化作用的乳杆菌，具体体现为：
a、提高UVA损伤后人真皮成纤维细胞存活率49.62％；b、分别降低1.40倍、11.64倍UVA损伤后人真皮成纤维细胞中的MMP-1和MMP-2的表达水平；c、能调节IGF-1/Akt/FOXO细胞寿命调节通路，延长真皮成纤维细胞寿命；d、抑制皮肤致病菌。
因此，发酵乳杆菌XJC48在制备修复或治疗皮肤老化的药品中，具有巨大的应用前景。
Limosilactobacillus fermentum XJC48于2022年5月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为GDMCC No：62495。
附图说明
图1是乳杆菌延长皮肤真皮细胞寿命的能力评估；
a)图为不同UVA辐照剂量对人真皮成纤维(Human Dermal Fibroblasts，HDF)细胞存活率的影响；b)图为有效修复UVA损伤HDF细胞的乳杆菌发酵上清液；c)图为不同分子量发酵上清液对HDF细胞存活率的影响；其中NC为空白对照，MRS是模型组，XJC48、R60、C64是不同的发酵乳杆菌；
图注：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与正常对照组(NC)原液组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001与正常对照组(NC)<10KDa组相比。
图2是乳杆菌发酵上清液对UVA损伤的HDF细胞因子的影响；
a)图为乳杆菌发酵上清液对UVA损伤的HDF细胞MMP-1表达水平的影响；
b)图为乳杆菌发酵上清液对UVA损伤的HDF细胞MMP-2表达水平的影响；
图注：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组(MRS)组相比，其中NC为空白对照，MRS是模型组，P69、P87、P27、Q5、R60、XJC48、C64和C60分别是不同的发酵乳杆菌。
图3是发酵乳杆菌XJC48的延长细胞寿命机制探究；
图a)是寿命调节通路；图b)是发酵乳杆菌对UVA损伤HDF细胞mRNA表达水平的影响；
图注：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组(MRS)组相比。
图4是发酵乳杆菌XJC48的基因组信息和安全性评价。
图5是发酵乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)XJC48的分子靶标验证；
图注M为DNA marker，1为发酵乳杆菌XJC48经分子靶标序列(SEQ ID NO.3和SEQID NO.4)扩增后的PCR产物电泳图，2-94为其他乳杆菌经分子靶标序列扩增后的PCR产物电泳图。
图6是本发明对含发酵乳杆菌XJC48菌落数样品的检测灵敏度评价；
采用本发明提供的qPCR检测方案对含发酵乳杆菌XJC48菌落数样品进行定量检测：A.结果提示当样本中菌落浓度≥1×104CFU/mL时，样本可检测出荧光信号，B.本发明对含发酵乳杆菌XJC48菌落样本的定量检测效果良好，对标准曲线的拟合度高。
具体实施方案
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的培养基如下：
MRS琼脂平板(g/L)：蛋白胨10.0g/L、牛肉膏5.0g/L、酵母膏粉4.0g/L、葡萄糖20.0g/L、吐温80 1.0ml/L、K2PO4·3H2O 2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、柠檬酸三胺2.0g/L、MgSO4·7H2O 0.2g/L、MnSO4·4H2O 0.05g/L、琼脂20g/L，溶剂为水，配制方法是将各成分混合均匀灭菌制得。液体培养基不添加琼脂。
高产胞外多糖的MRS肉汤培养基(g/L)：蛋白胨10.0g/L、牛肉膏10.0g/L、酵母膏粉5.0g/L、柠檬酸三胺2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、MgSO4·7H2O 0.2g/L、MnSO4·4H2O 0.05g/L、蔗糖20.0g/L、吐温80 1.0g/L，溶剂为水，配制方法是将各成分混合均匀灭菌制得。
实施例1乳杆菌的分离、保藏、鉴定
1.1益生菌的分离及菌种库保藏
采集中国新疆维吾尔自治区发酵食品作为样本，共204份。在无菌环境下，取0.1g奶酪样本加入10ml MRS液体培养基，震荡混匀后于37℃厌氧条件下富集培养24h，吸取0.5ml菌液做梯度稀释。加入生理盐水制成10-1至10-5稀释梯度菌悬液，选取10-3、10-4、10-5三个梯度菌悬液，分别吸取100μL至MRS琼脂培养基，使用涂布棒涂抹均匀，再于37℃厌氧条件下培养48h。挑取平板上形态典型的菌落至MRS琼脂培养基上进行划线纯化，纯化后挑取单菌落接种入MRS液体培养基中，37℃厌氧培养48h，30％甘油保藏于-80℃超低温冰箱中。从204份发酵食品样品中，共分得805株菌，最终总计保藏756株益生菌。
1.2乳杆菌的鉴定
采用细菌DNA提取试剂盒(Mabio，CHINA)进行细菌DNA提取，后采用2×PCR mix(Dongshengbio，CHINA)进行PCR扩增。PCR扩增引物采用16S rRNA基因通用引物，上游引物序列为27F：5’-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3’；下游引物序列为1492R：5’-CTAC GGCTAC CTT GTT ACG A-3’。PCR反应条件为：预变性95℃ 5min；95℃ 30s，56℃ 30s，72℃1min 30s共35个循环，72℃退火延伸10min。对PCR产物进行切胶回收，后进行一代测序(由苏州金唯智生物科技有限公司完成)。将获得的16S rRNA基因序列比对NCBI数据库(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov)，结果显示与乳杆菌同源性最高。对于比对结果中Identity和Coverage均与已知乳杆菌相似度大于99％的菌株，可确定为乳杆菌。
经鉴定后，756株益生菌中有515株乳杆菌。其中本专利所要求保护的菌株16SrRNA基因序列如SEQ ID No.1所示(ATGCGCTTATTAGGATTAGACGTTGGCTCCAAGACGGTGGGGGTGGCGGAAAGCGATCCCTTGGGCTGGACGGCCCAAGCCGTGGAAATCATCCCCATTGATGAGGAAGCGGAGGTCTTTGGCTTAGAGCGGGTGGCGGAACTGGTTAAATCCCGTCAGGTCGCTGGCTTTGTGCTCGGCCTACCCAAGAACATGAATAACACGGAGGGACCACGGGTTGAAGCGGCACGCCATTACGGTGAGCTCTTGGAGGAGCGGTTTGGTTTGCCAATCGACTATCAAGATGAGCGCTTAACCACGGTCCAAGCCCACCGGATGTTAGTCGAAGAGGCTGACGTTTCCCGGCGCAAACAAAAAAAGGTGATCGACGAATTGGCGGCCACCTTAATCTTACAGAATTACTTGGATCGCCACGGTAAGTTGTGCGCCAAGCTATAG)。将该序列比对NCBI数据库(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov)，结果提示其与发酵乳杆菌同源性最高，命名为发酵乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)XJC48，于2022年5月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为GDMCC No：62495。
发酵乳杆菌XJC48的菌体呈短杆状，在MRS琼脂平板该菌菌落呈淡黄色圆形、边缘光滑，该菌在37℃厌氧环境下于MRS培养基中培养8小时即达稳定期，异型发酵，代谢葡萄糖产酸产气。
实施例2发酵乳杆菌XJC48的培养及乳杆菌发酵液的制备
将发酵乳杆菌XJC48从甘油管中接种至MRS琼脂平板上，于37℃厌氧培养48h，挑取单菌落接入高产胞外多糖的MRS肉汤培养基中，于37℃厌氧培养48h。采用10000g×4℃离心5min，获取发酵上清，采用1mol/L NaOH将发酵液pH调整至7.35-7.45。采用0.22μm滤膜过滤调整pH值后的发酵上清液，获得发酵乳杆菌XJC48发酵的无细胞上清液，冻存于-80℃待用。其他乳杆菌的发酵上清液也参照此方法制作。
实施例3发酵乳杆菌XJC48发酵上清抗皮肤细胞UVA损伤能力的评估
3.1细胞培养
人真皮成纤维细胞(human dermal fibroblasts，HDF)细胞在37℃，5％ CO2的细胞培养箱中，使用HDF完全培养基(Procell，CHINA)培养。待HDF细胞在T25培养瓶中生长达到80％的密度时，加入0.25％胰酶反应1min进行消化。消化后加入完全培养基进行中和，用一次性无菌吸管将细胞从培养瓶壁上冲洗下来，并将含细胞的培养基混合液转移至15mL离心管。离心1000r/min 5min收集沉淀的细胞，用培养基重悬获得单细胞悬液。
3.2建立UVA辐射的HDF光损伤细胞模型
采用人真皮成纤维细胞HDF(Procell，CHINA)作为研究对象，采用完全培养基对HDF细胞进行培养。将传代HDF细胞种于孔板中，当细胞增殖覆盖孔板80％面积时，进行UVA辐射。UV辐照的条件为：采用UVA灯管(川谷照明科技，中国)，分别给予0、15、30、45、60min的UVA照射，辐射剂量为0、0.819、1.638、2.457、3.276mJ/cm2。
3.3不同剂量UVA照射HDF细胞的存活影响
HDF细胞培养至对数期，收集细胞。96孔板内设正常对照、不同剂量处理组，以1×104个/mL每孔接种100μL细胞悬液，每组均设3个实验孔。边缘孔用无菌PBS填充，细胞培养板置于5％ CO2，37℃培养箱培养24h。培养24h细胞长至单层后，吸走培养基，用无菌PBS清洗3次，清除原有培养基后，每孔加入100μL无菌PBS。正常对照组用锡纸包裹，避免受到UVA照射。不同剂量处理组分别给予0、15、30、45、60min的UVA照射，辐射剂量为0、0.819、1.638、2.457、3.276mJ/cm2。照射后吸走PBS后每孔加入100μL完全培养基继续培养。培养24h后，用CCK-8法测定细胞存活率。
如图1a，随着UVA照射剂量的增加，HDF细胞的存活率下降。在UVA辐射时间45min，辐照剂量累计为2.46J/cm2，HDF细胞存活率达到50％，选此剂量作为UVA损伤HDF细胞模型的剂量。
3.4乳杆菌发酵上清液对UVA损伤的HDF细胞存活率的影响
HDF细胞培养至对数期，收集细胞。96孔板内设正常对照、模型、阳性对照和处理组，以1×104个/mL每孔接种100μL细胞悬液，每组均设3个实验孔。边缘孔用无菌PBS填充，细胞培养板置于5％CO2，37℃培养箱培养24h。
培养24h细胞长至单层后，吸走培养基，用无菌PBS清洗3次，清除原有培养基后，每孔加入100μL无菌PBS。正常对照组用锡纸包裹，避免受到UVA照射。处理组给予45min的UVA照射，辐射剂量为2.46J/cm2。
照射后处理组每孔加入100μL体积分数10％乳杆菌发酵上清液的完全培养基(即将实施例2的上清液按照体积比1:9的比例加入到完全培养基中)继续培养，阳性对照组是加入100μL体积分数10％干酪乳杆菌(Lactobacillus casei strain Shirota)发酵上清液的完全培养基。模型组加入100μL体积分数10％MRS培养基继续24h后，用CCK-8法测定细胞存活率。
如图1b结果所示，乳杆菌的发酵上清液对UVA损伤的HDF细胞的存活率高于模型组，且有统计学意义。如图1c结果所示，为了进一步确定发酵乳杆菌中具有抗UVA能力的组分，对发酵乳杆菌发酵上清液用10kDa超滤膜进行分离，发现在发酵乳杆菌XJC48发酵上清液的<10kDa组分与原液具有同样水平的修复UVA损伤的HDF细胞的能力。
实施例4发酵乳杆菌XJC48发酵上清对UVA损伤的HDF细胞因子的影响
(1)6孔板内设正常对照、模型、阳性对照和处理组如实验例3中培养，细胞计数后将细胞悬液浓度调整至5×105个细胞/孔接种于6孔板中，并生长24h以达到80％的细胞密度。
(2)培养24h细胞长至单层后，弃去培养基，用PBS清洗3次，清除原有培养基后，每孔加入2mL无菌PBS。空白对照组用锡纸包裹，避免受到UVA照射。处理组给予45min的UVA照射。
(3)照射后处理组每孔加入2mL含最小无毒性浓度乳杆菌发酵上清液的完全培养基、模型组每孔加入2mL体积分数10％MRS培养基、阳性对照组是加入2mL体积分数10％干酪乳杆菌(Lactobacillus casei strain Shirota)发酵上清液的完全培养基继续培养24h后，用0.25％含EDTA的胰酶收集孔内细胞，用等体积PBS清洗2次。
(4)使用HiPure Total RNA Mini Kit提取、HDF细胞的RNA。根据试剂盒的说明，使用Evo M-MLV逆转录酶从1μg总RNA合成cDNA。用于定量RT-PCR的MMP-1、MMP-2、IGF-1、Akt、FoxO-4和GAPDH的引物由苏州金唯智生物科技有限公司合成(表2)。使用LightCycler96使用以下条件进行qPCR测定：95℃30s；95℃5s、60℃30s共40个循环；95℃5s、60℃60s、95℃1s。使用LightCycler96 SW软件分析数据得出扩增循环数值(cycle threshold,ct),按照ΔΔct方法计算得到各基因的表达水平。
表2 RT-PCR所用引物
由图2可知，UVA损伤模型组(MRS组)显著上调了HDF细胞中的MMP-1、MMP-2mRNA的表达水平，而8株有抗UVA能力的菌株作用后大部分能显著下调MMP-1、MMP-2的mRNA表达水平。其中发酵乳杆菌XJC48的效果最为明显，下调MMP-1mRNA水平3.07倍、下调MMP-2mRNA水平10.14倍。结果表明，与其他乳杆菌相比，发酵乳杆菌XJC48的发酵上清液具有最强的降低UVA辐照导致HDF细胞中MMPs的表达水平的能力，具有较强的抗UVA损伤能力。
实施例5发酵乳杆菌XJC48发酵上清修复UVA损伤细胞的机制研究
5.1细胞样品制备
(1)6孔板内设UV组和XJC48组，均设3个实验平行孔，细胞如实施例3中培养，细胞计数后将细胞悬液浓度调整至5×105个细胞/孔接种于6孔板中，并生长24h以达到80％的细胞密度。
(2)弃去培养基，用无菌PBS清洗3次，每孔加入100μL无菌PBS。阳性对照组用锡纸包裹，避免受到UVA照射。处理组给予45min的UVA照射。
(3)照射后每孔加入100mL的10％发酵乳杆菌XJC48发酵上清液的完全培养基继续培养24h后，放入-80℃冰箱保存。
5.2RNA抽提
转录组测序实验主要由上海美吉生物医药科技有限公司完成。采用TRIzol(Invitrogen，USA)法提取样本中的总RNA，并使用DNase I(TaKara，Japan)去除基因组DNA。分别用2100Bioanalyser(Agilent Technologies，USA)、ND-2000(NanoDropTechnologies，USA)方法检测RNA样品的质量，以保证使用合格的样品(OD260/280＝1.8～2.2，OD260/230≥2.0，RIN≥6.5，28S:18S≥1.0，total RNA>1μg)进行转录组测序。
5.3文库的建立和测序
RNA文库的建立采用TruSeqTM RNA sample preparation Kit(Illumina，America)试剂盒，并按说明书进行操作。经TBS380定量后，文库使用Illumina Nextseq测序平台(Illumina，America)进行高通量测序，测序读长为PE150。
5.4测序数据质量控制及比对分析
使用SeqPrep(https://github.com/jstjohn/SeqPrep)去除接头序列、修剪低质量碱基等。使用软件HiSat2将质控后的原始数据与参考基因组比对，并对测序覆盖度、基因覆盖度等进行分析。使用软件edgeR进行差异表达计算；使用软件KOBAS进行KEGG PATHWAY富集分析。
在寿命调节通路中涉及胰岛素信号通路、P13K-Akt信号通路、叉头盒O类(Forkhead box O,FoxO)信号通路。目前研究表明这三个通路在调控衰老中的具有重要作用：抑制酵母和果蝇中胰岛素信号通路中的关键因子可以延长寿命；FOXO信号通路也被发现在全球百岁老人群体起着重要作用，而P13K-Akt信号通路连接胰岛素信号通路和FOXO信号通路。
如图3a所示，在寿命调节通路中，胰岛素信号通路是指胞外的类胰岛素一类生长因子(insulin-like growth factors-1,IGF-1)和胞膜上的受体(IGF-1R)结合，激活底物胰岛素受体亚基(Insulin receptor substrate,IRS)；PI3K-Akt信号通路是指上游被激活的IRS促进胞内磷脂酰肌醇激酶PI3K的活性，PI3K催化PIP3生成，从而激活Akt；在FoxO信号通路中在细胞核中的FoxO调控DNA转录，影响SOD、CAT的表达，从而解除ROS的毒性。若上游激活的Akt促进FoxO磷酸化，从而抑制FoxO入核，抑制其功能。
本研究的转录组测序结果表明，在发酵乳杆菌XJC48干预之后，不同程度地激活了HDF细胞中的涉及胰岛素信号、PI3K-Akt信号和FoxO信号的寿命调节通路中的多个重要基因，包括IGF-1和P13K基因表达量显著增加，推测发酵乳杆菌XJC48通过调节IGF/P13K-Akt通路而影响HDF细胞寿命。
如图3b，发酵乳杆菌XJC48使UVA损伤的HDF细胞中IGF-1的mRNA转录水平上调4.76倍、Akt上调了1.82倍、FoxO-4上调了3.82倍。这一结果验证了上一节差异基因涉及的信号通路分析的结果，表明发酵乳杆菌XJC48可通过调节细胞寿命通路IGF-1/Akt/FoxO通路而修复UVA对HDF造成的损伤。
实施例6发酵乳杆菌XJC48对皮肤常见致病菌的抑菌效果评价
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌等致病菌是导致皮肤炎症、皮肤感染的常见致病微生物。采用牛津杯法评估发酵乳杆菌XJC48的抑菌效能，具体操作如下：将大肠杆菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、蜡样芽胞杆菌ATCC 14579的单菌落分别接种于LB液体培养基(环凯，中国)中，37℃，200r/min培养6h，调节浓度至1×108CFU/mL，进行抑菌实验。取100μL菌液分别均匀涂布于营养琼脂平板(环凯，中国)上，用灭菌的镊子将无菌牛津杯放置于平板中，每只牛津杯加入100μL发酵乳杆菌XJC48的发酵上清，以MRS培养基作为空白对照。将平皿置于4℃冰箱8h待发酵乳杆菌XJC48发酵上清均匀扩增，后转至37℃培养箱培养18h，后测量抑菌圈直径。测量可知，加入MRS培养基的大肠杆菌ATCC 25922抑菌圈直径为10.00±0.00mm，加入发酵乳杆菌XJC48发酵上清的抑菌圈直径为17.07±0.23mm，抑菌圈直径明显大于对照(p<0.001)；加入MRS培养基的金黄色葡萄球菌ATCC 25923抑菌圈直径为10.00±0.00mm，加入发酵乳杆菌XJC48发酵上清的抑菌圈直径为16.43±0.82mm，抑菌圈直径明显大于对照(p＝0.005)；加入MRS培养基的蜡样芽胞杆菌ATCC 14579抑菌圈直径为10.00±0.00mm，加入发酵乳杆菌XJC48发酵上清的抑菌圈直径为17.27±0.12mm，抑菌圈直径明显大于对照(p<0.001)。可见发酵乳杆菌XJC48对皮肤常见致病微生物有较好的抑菌作用，可抑制皮肤常见致病菌，减少皮肤炎症、缓解炎症所致的皮肤衰老。
实施例7发酵乳杆菌XJC48基因组及表型的安全性评价
7.1乳杆菌的基因组特征及安全性评估
采用Illumina Nextseq 550二代测序及Nanopore MinION三代测序平台对515株乳杆菌进行全基因组测序。细菌基因组DNA提取方法同前。二代测序采用AMT Rapid DNA-Seq Kit for Illumina(CISTRO,CHINA)建库，采用High Output v2.5 kit(Illumina,USA)试剂盒测序。三代测序采用Rapid Barcoding Sequencing Kit(Nanopore,UK)建库，后采用R9.4.1芯片(Nanopore,UK)测序。下机数据分别采用Trimmomatic(v0.39)及Filtlong(v0.2.0)软件进行质控，后采用Unicycler(v0.4.8)软件进行组装。组装后乳杆菌的基因组采用Quast(v5.0.2)软件进行基因组质控评估，采用Abricate(v0.8.13)软件查找并注释毒力基因及耐药基因。
经测序获得图4发酵乳杆菌XJC48基因组完成图，对发酵乳杆菌XJC48进行测序后发现该菌株基因组总长度1,910,530bp，GC含量为51.71％。采用prokka软件注释发现XJC48基因组一共有2118个蛋白质编码基因、58个tRNA基因和7个rRNA基因。采用Abricate软件比对VFDB(Virulence Factor Database)、ARG-Annot(Antibiotic Resistance Gene-ANNOTation)、CARD(the Comprehensive Antibiotic Research Database)、Resfinder数据库，均未发现发酵乳杆菌XJC48含有毒力基因或耐药基因。
7.2乳杆菌对抗生素的敏感性
根据欧盟食品安全局(European Food Safety Authority，EFSA)标准，使用微量肉汤稀释法检测本专利发酵乳杆菌XJC48对8种抗生素的敏感性。该8种抗生素为：氨苄西林、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、红霉素、克林霉素、四环素和氯霉素。将生长至对数生长期的乳杆菌悬液调整至0.5麦氏浊度，后加入不同浓度的抗生素稀释剂(浓度从0.5-64μg/mL)，37℃厌氧培养48h。48h后读取菌株对每种抗生素的最小抑菌浓度(minimal inhibitconcentration，MIC)，发酵乳杆菌XJC48对8种抗生素的MIC如表3，可知该菌对EFSA规定的8种抗生素菌敏感。
表3发酵乳杆菌XJC48对抗生素的MIC
7.3乳杆菌的溶血试验
在无菌环境下，用接种环接种目标乳杆菌于血平板上，37℃培养48h，观察溶血现象。图3b可知，48h后观察发酵乳杆菌XJC48菌落周围未出现溶血现象，而阳性对照溶血葡萄球菌ATCC6538菌落周围出现透明溶血环，表明发酵乳杆菌XJC48不具有溶血风险。
实施例8发酵乳杆菌XJC48的特异分子靶标识别
8.1乳杆菌的特异分子靶标挖掘
采用Prokka(v1.11)、Roary(v3.11.2)软件对发酵乳杆菌XJC48及NCBI数据库内其他94株发酵乳杆菌及其它1400株乳杆菌的全基因组进行泛基因组分析。获得核心基因组后，采用Gubbins(v2.4.1)识别包含碱基取代密度较高的基因。基于泛基因组分析获得的发酵乳杆菌XJC48有别于其它乳杆菌的特异序列。采用Oligo(v7)软件针对特异序列进行引物设计，获得识别该菌的特异性分子靶标序列引物SEQ ID No.3(5’-CTTGGAAGTGCTGCGTCATT-3’)和SEQ ID No.4(5’-CTCCACAGAAAAGGCGTGTG-3’)。
8.2.乳杆菌特异分子识别靶标有效性验证
采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)及琼脂糖电泳验证发酵乳杆菌XJC48的特异分子识别靶标序列的有效性。检测模板为细菌的DNA，DNA提取方法同前。
PCR反应体系配置如下：
以下为PCR反应条件：
PCR结束后取5-10μl PCR产物进行1.5％琼脂糖电泳。若发酵乳杆菌XJC48能在479bp处形成单一特异条带，而其他乳杆菌不能形成479bp的单一条带，则说明该对靶标具有良好识别发酵乳杆菌XJC48的效能。
如图5和表4所示，除发酵乳杆菌XJC48的DNA加入引物SEQ ID No.3和SEQ.ID No.4扩增后形成479bp的特异性扩增产物外，其余乳杆菌分离株均未见特异扩增产物形成。结果提示分子靶标序列SEQ ID No.2(ATGCAAACGGATAATGAAAAGTACAATGAAACTGTACAGCCGAATACTGCTTTCTTAAATGAACTTAAAGCAAAGCTGCCTGAATTCTTTACCAAGGAAGGATCTTTTGATTTAGATAAGTTTAGGAACCAACTAAAAGATAAGAATATTAATGAGCTGAGTGAGGGTTATCAGCTAGATTTCATTGGTAAGGATTATGCTCGTCGCCAGGCTGGTGAAATGCCGAGTACTGTAATTGTCCCCGATGAAAAGCAAAATCAAGGTGAAGGAAAAGATAGTAAGAACCTCTTTTTCACCGGTGATAACTTGGAAGTGCTGCGTCATTTGCAAAACAATTATCAAAATAAGATTGATGTTATTTACATTGATCCGCCGTATAACACAGGCAGCGATGGCTTTGTTTATCCAGATTCTTTTGAATACAGTGATGAGAAACTAAAAGATATGTTTGGCCTTGATGATGATCAAGTTGAACGATTGAAGAGTATTCAGGGAAAAGCTAGTCATTCTGCTTGGCTAACCTTTATGTATCCAAGATTATCTTTAGCGAAAAAGTTGTTATCGGGTGAAGGAATTATCTTCATTTCTATAGATGATAATGAAAAAGACAATTTATCAGAAATTATGGATGAATTGTATGGTGAAAGTAATTTTATAACTAATTTTGTTTGGGAGAAAAAGAAAAAACCGTCTTTTTTAAACGGAAATGTAGGTCAAAAGTTTGAATATGTAGCGTGTTATTCAAAAAATAGAAAAAAAACACACGCCTTTTCTGTGGAGCAGACGGAAAGAGGAAAAAAGTATCCGTTTAATAATGCAGGAAATTCAGAAAGCACTTTAACATTTCCTAAAAATACTGTTAATTTTACTAAAATTAAAAACAACATTATCAAAAGTCAAGATATGTCTGGCGGCAACATTAAAACGATACTTTTAAATGATGTAATAATAAGCAATCATAAAAATACTAATGCTTTTTCACTTAAGGGAGAATGGAGATACTCTCAAGATAAATTAGATGATTTACTTTCTAATGGTGCCCAAATAACGATAAGCAGCGTTCCGTTCCGTCCGAATTTAGTTAAAAACGGCGGAGAAACTAAGAAAATGCATAACTTATTAACACTGAGTCATTATCCTGTTGGTTCTAATGAGGATGCTACAAAAGAATTAATGAGCTTATTGGGATTAAATATTTTTGATTACAATAAACCTAGTTCATTAATTAAATTGTTAGTTAAAAGTTATACATATAATATGAAACATGCAATTGTTATGGACTTCTTCGCTGGCTCTTCTACTACTGCCGATGCAGTCATGCAACTAAATGCAGAAGATGATGGTCATCGTAAATTCATCATGGTGCAGAAACCTGAAAAAACGTATGAAGTTGATAAAGAAACAGGTGAAGCTAAATTAGATAAGAGCGGCAATAGAATTCCTACAAAGGGCGGTAAAGCAGCTTATGAAGCTGGGTATATGACCATTGATCCAATTTCACGCGAACGTATCCGTTGTGCTGCTAAAAAGATCCGCGAAAATAACGAACTAACGTTACCAAAGGATTTTGATGGAAGCTTCAAACACTATCGAGTAGTTAAGCCAGTCAAACAAACACTCGAAGAAATTGAAGACTTCGATCCAAATAATATTAATTTGTTTACTGATATGGTGGATGGCTTCTCTAGTCAGACTTTAGGTATTGATGGGGATGCTACAGGTGAAGAAACAATTCTGACGACCTGGCTTGCTAAAGATGGTTATCCATTTGATGCTAATGTTGAAGATGTTAACTTTGGAAGTTACATTGCCCATAAAGTTGAAGATAATCGTCTGTACTTAATTAAAGATCATTGGGGAGCAGAACAGACTAAAGAATTGTTGAACCAACTGGGTACGCATCAATTAGAAGTCCAAAGTGTCGTTATTTTTGGCTATTCCTTCAATATTGCTGAATTGCGCGAATTAGAGAATGGTCTG)能特异的鉴别发酵乳杆菌XJC48与其它乳杆菌。
2-94的乳杆菌菌株信息如下表4所示。
表4靶标扩增结果
实施例9发酵乳杆菌XJC48特异分子识别靶标的定量检测方法
本实施例8提供了一种对样本中发酵乳杆菌XJC48进行定量检测的方法，采用SEQ.IDNo.3及SEQ.ID No.4作为qPCR扩增反应的引物，具体操作如下：
9.1模板DNA制备
按实施例1方法提取含发酵乳杆菌XJC48样本中的微生物DNA，作为待检测模板；
9.2qPCR检测体系及扩增程序
qPCR检测所需的DNA模板制备方法采用实施例1中的组织微生物DNA提取方案执行。HP的qPCR反应体系配置如下：
以下为qPCR扩增程序：
9.3qPCR结果读取
利用Roche96荧光定量扩增仪上对体系进行扩增检测，利用软件96SW读取扩增结果。在空白对照不存在荧光信号前提下，如果产生荧光信号，说明样品中含有发酵乳杆菌XJC48；如果不产生荧光信号，则样品中不含有发酵乳杆菌XJC48。
9.4新检测方案对发酵乳杆菌XJC48检测灵敏度评价
应用生理盐水将浓度为1×109CFU/mL的发酵乳杆菌XJC48按照10倍梯度进行稀释，得浓度为109、108、107、106、105、104、103、102、101CFU/mL的菌株纯培养物，按照实施例1的方法进行DNA的提取，按上述qPCR方案进行发酵乳杆菌XJC48定量检测，每个浓度样品分别进行三次平行实验。
绘制标准曲线：以样品中发酵乳杆菌XJC48浓度的对数为横坐标，以相应的qPCR的实时Ct值为纵坐标，拟合所得曲线即为发酵乳杆菌XJC48定量检测的标准曲线。标准曲线如图6所示，引物对所述发酵乳杆菌XJC48的拟合标准曲线为y＝-3083x+37.77，相关系数R2为0.9878。
虽然本发明已将较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰。因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的内容为准。
Claims (9)
1.发酵乳杆菌（Limosilactobacillus fermentum）XJC48，保藏编号为GDMCC No：62495。
2.权利要求1所述的发酵乳杆菌XJC48在制备预防和/或治疗皮肤老化的药品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的预防和/或治疗皮肤老化的药品是预防和/或治疗真皮老化的药品。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述的发酵乳杆菌XJC48是以发酵乳杆菌XJC48的活菌菌体、菌体破碎物、发酵液或发酵上清液的形式使用。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的药品含有发酵乳杆菌XJC48和药物载体。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的药品含有发酵乳杆菌XJC48和药物辅料。
7.一种预防和/或治疗皮肤老化的药品，其特征在于，含有权利要求1所述的发酵乳杆菌XJC48作为活性成分。
8.一种鉴别权利要求1所述的发酵乳杆菌XJC48的引物对，其特征在于，所述引物对的上、下游引物序列分别如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。
9.一种用于定量检测权利要求1所述的发酵乳杆菌XJC48的方法，其特征在于，采用权利要求8所述的引物对进行qPCR扩增，确定样本中发酵乳杆菌XJC48的含量。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210822151.XA CN115960742B (zh) | 2022-07-12 | 2022-07-12 | 具有延长真皮成纤维细胞寿命、抗皮肤老化功能的发酵乳杆菌xjc48及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210822151.XA CN115960742B (zh) | 2022-07-12 | 2022-07-12 | 具有延长真皮成纤维细胞寿命、抗皮肤老化功能的发酵乳杆菌xjc48及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115960742A CN115960742A (zh) | 2023-04-14 |
| CN115960742B true CN115960742B (zh) | 2023-09-08 |
Family
ID=87362163
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210822151.XA Active CN115960742B (zh) | 2022-07-12 | 2022-07-12 | 具有延长真皮成纤维细胞寿命、抗皮肤老化功能的发酵乳杆菌xjc48及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115960742B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116656578B (zh) * | 2023-07-26 | 2023-11-28 | 杭州微致生物科技有限公司 | 一种发酵粘液乳杆菌vb216及其应用 |
| CN117143767B (zh) * | 2023-08-23 | 2024-06-11 | 浙江民生健康科技有限公司 | 可调节肠道菌群的母乳源发酵粘液乳杆菌msjk0025及其应用 |
| CN117298032B (zh) * | 2023-11-17 | 2024-08-16 | 天津中耀博研生物医药有限公司 | 一种改变皮肤微生态的后生元面膜及其制备方法 |
| CN117801988B (zh) * | 2023-12-15 | 2024-06-25 | 吉林省农业科学院(中国农业科技东北创新中心) | 一株发酵粘液乳杆菌dp116及其用于制备具有改善和保护基底膜功能的产品的用途 |
| CN117736942B (zh) * | 2024-02-20 | 2024-05-31 | 山东中科嘉亿生物工程有限公司 | 改善皮肤衰老的发酵粘液乳杆菌jylf-315及其后生元制剂和应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112940968A (zh) * | 2021-02-07 | 2021-06-11 | 山东凤凰生物有限公司 | 一种发酵乳杆菌、发酵乳杆菌的培养物及其制备方法 |
| CN113832050A (zh) * | 2021-08-13 | 2021-12-24 | 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) | 一株高效合成烟酰胺、抗光老化的发酵乳杆菌及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022077276A1 (zh) * | 2020-10-14 | 2022-04-21 | 音芙医药科技(上海)有限公司 | 烟酰胺单核苷酸与发酵乳杆菌联合在制备缓解皮肤光老化制剂中的应用 |
-
2022
- 2022-07-12 CN CN202210822151.XA patent/CN115960742B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112940968A (zh) * | 2021-02-07 | 2021-06-11 | 山东凤凰生物有限公司 | 一种发酵乳杆菌、发酵乳杆菌的培养物及其制备方法 |
| CN113832050A (zh) * | 2021-08-13 | 2021-12-24 | 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) | 一株高效合成烟酰胺、抗光老化的发酵乳杆菌及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Nicotinamide Mononucleotide Combined With Lactobacillus fermentum TKSN041 Reduces the Photoaging Damage in Murine Skin by Activating AMPK Signaling Pathway;Xianrong Zhou等;《Front Pharmacol》;第12卷;643089. 参见全文，尤其是摘要、图4、图6 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115960742A (zh) | 2023-04-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN115960742B (zh) | 具有延长真皮成纤维细胞寿命、抗皮肤老化功能的发酵乳杆菌xjc48及其应用 | |
| CN114350578B (zh) | 一株产溶菌酶并高效拮抗多药耐药幽门螺杆菌的植物乳杆菌lp1z及其应用 | |
| CN112940982B (zh) | 一株鳢源贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
| CN113249255B (zh) | 一种防控禽肠炎的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN113444785B (zh) | 一种与仔猪C型产气荚膜梭菌感染性腹泻相关的ssc-miR-122-5p及其应用 | |
| CN112239741B (zh) | 一种Megasphaera属的细菌MNC-992及其培养方法和应用 | |
| CN110713960A (zh) | 植物乳杆菌ln66及在降低口臭风险产品中的应用 | |
| CN113832050B (zh) | 一株高效合成烟酰胺、抗光老化的发酵乳杆菌xjc60及其应用 | |
| CN105779346B (zh) | 一种产细菌素的屎肠球菌及其应用 | |
| CN111778178B (zh) | 海洋灰平链霉菌hn60在抗细菌方面的应用 | |
| CN111088181B (zh) | 短双歧杆菌菌株bk55及在抑制艰难梭菌中的应用 | |
| CN117229975A (zh) | 一种新型唾液乳酸杆菌lzzay01及其应用 | |
| CN115786190B (zh) | 一株可产尿石素a抗衰老的植物乳杆菌及其应用 | |
| CN116536195A (zh) | 克劳氏盐碱芽孢杆菌及其在制备有机微生物菌肥中的应用 | |
| CN114621884B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌及其在水质净化中的应用 | |
| CN115152924A (zh) | 一种抑制黄曲霉污染及其毒素污染的方法及应用 | |
| CN115838652A (zh) | 一种罗伊氏黏液乳杆菌lr21及其应用 | |
| CN115074286A (zh) | 一株拮抗足癣病原真菌的短小芽孢杆菌及其应用 | |
| Fu et al. | Temporal variability of microbiome in the different plankton hosts revealed distinct environmental persistence of Vibrio parahaemolyticus in shrimp farms | |
| CN107488608B (zh) | 一株微白黄链霉菌z9及其在防治向日葵菌核病的应用 | |
| CN116024144B (zh) | 一种海洋源黄色钱培元菌及其在制备抑菌药物中的应用 | |
| CN115386523B (zh) | 一株乳酸乳球菌及其在抗幽门螺杆菌感染的应用 | |
| CN117487719B (zh) | 一种从对虾肠道中分离的具有抗弧菌活性的芽孢杆菌 | |
| CN115975846B (zh) | 一株沙阿霉素链霉菌、其微生态制剂及其制备方法 | |
| CN118006485B (zh) | 一株植物乳杆菌st10-7及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |