CN108685803A - 一种益生菌发酵当归的组合物及其在化妆品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种益生菌发酵当归的组合物及其在化妆品中的应用，所述的益生菌发酵当归的组合物是由当归粉碎后，经过酶解、益生菌发酵、提取制备的澄清、透明的当归提取物；其可溶性固形物含量高于7.0%；澄清度透光率大于98%；阿魏酸含量高于38.27µg/mL。所述的组合物作为添加成分按照已知的生产方法制成化妆品。本发明益生菌在代谢过程中，产生丰富的酶对当归成分进行修饰和转化，使大分子物质转化为易于吸收的小分子物质，可溶性固形物明显增加、溶液的澄清度明显增加、阿魏酸含量明显增加。益生菌含有的核酸类及酸性代谢物，能有效地维护皮肤的微生态环境，促进人体皮肤的新陈代谢，达到护肤、养肤、健肤的效果。

Description

一种益生菌发酵当归的组合物及其在化妆品中的应用

技术领域

本发明涉及益生菌发酵当归的组合物的制备方法以及在化妆品中的应用，属于化妆品技术领域。

背景技术

随着社会的进步、科学技术的发展以及人们生活水平的提高，绿色、功能性的化妆品已成为消费者追求的方向。中草药的副作用小，安全性高，将中草药活性成分提取物正确地应用于化妆品中，越来越受广大消费者的欢迎，成为国内外化妆品研发的主要趋势。

在我国，利用中草药美容的历史悠久。文献上积累了许多有关这方面的资料，经过人们长期的日常保健与美容临床实践验证作用显著。当归为伞形科植物当归Angelicasinensis （Oliv．）Diels的干燥根，是临床常用药，素有“十方九归”之称。性味甘、辛、温，归肝、心、脾经。既可内服也可外用，而内服能够帮助人体补气活血，调理经络，更有通便润肠之功效。当归不仅作为药物有着良好的治疗功效，随着医学技术的逐渐发展，当归中所含有的化学物质可以清除人体肌肤中所含有的自由基，从而起到抗衰老的作用，不仅如此其中所含有的酪氨酸酶具有清除人体黑色素的效果。

现代药理学研究进一步发现，当归的主要成分为多种有机酸、脂类、糖、多种氨基酸、微量元素以及其他有机成分等共80种化学物质。阿魏酸是当归抗氧化作用的有效成分，几乎无毒性，是天然安全的自由基猝灭剂、皮肤美白剂和细胞分化促进剂。动物实验研究已表明含复方当归提取物水剂型护肤品具有增加小鼠表皮含水量和提高小鼠皮肤细胞SOD活性；人体试验研究显示它具有改善人体皮肤颜色，增加皮肤白皙、透明效果。这些新的功效在护肤化妆品研发当中得到了重视和应用。

中国专利（申请号： 201510561300.1）公开了一种当归提取物及提取方法，取当归粗粉或中粉，用体积浓度为70％~95％的乙醇水溶液提取，回收乙醇，浓缩，干燥，得当归粗提物；向当归粗提物中加入石油醚，溶解，滤过，滤液加入到硅胶柱中；以石油醚洗柱，收集洗脱液，回收石油醚，得当归提取物；中国专利（申请号 201410824164.6）公开了一种提取当归提取物的方法，采用乙醇浸提、微波辅助提取和大孔树脂吸附解析，最后得到当归提取物。中国专利（申请号：201711141221.0）公开了一种当归多糖面膜的制备方法，水提取后醇沉提取当归多糖，用于面膜的制备。

现有技术均采用传统的水提取、醇沉或者树脂纯化的方法提取处理当归，得到当归提取物，未发现有利用生物的发酵技术提取当归的方法。

发明内容

为了更好地发挥当归在护肤、养肤、健肤等化妆品领域的功效，有效地维护皮肤的微生态环境，本发明提供了一种益生菌发酵当归的组合物，所述组合物包括当归及其益生菌发酵代谢物，是由当归粉碎后，经过酶解、益生菌发酵、提取制备的澄清、透明的当归提取物；其可溶性固形物含量高于7.0%；澄清度透光率大于98%；阿魏酸含量高于38.27µg/mL。

所述的当归在益生菌发酵当归的组合物中的重量g/体积mL百分比为10~14%。

所述的益生菌为双歧杆菌、乳杆菌、链球菌、乳球菌。

所述酶解时使用的酶为纤维素酶，纤维素酶与当归粉的重量比为0.1~0.3%。

本发明的另一个目的是提供所述益生菌发酵当归的组合物的制备方法，由所选当归粉碎后，经过水浸泡、酶解、益生菌发酵提取后处理添加防腐剂即得所述的益生菌发酵当归的组合物；具体步骤如下：

（1）粉碎：将当归粉碎细度在60~100目，得当归粉；

（2）制备当归发酵底物：取步骤（1）所得当归粉，加入当归粉10 倍重量的纯水浸泡30~60 分钟，水浴加热提取40~120分钟后，将温度维持65℃，pH值4.5~6.0，加入纤维素酶，酶解3小时后，加热至沸10分钟，调节至pH6.0~6.5，高温高压灭菌，得到发酵当归底物。

（3）发酵：当步骤（2）制备的发酵当归底物温度降至39℃时，接种预培养的体积百分比各为0.5% 的双歧杆菌、链球菌、乳球菌中的一种或两种及以上的菌液，常规培养约3～8 小时后，再次接种预培养的体积百分比各为0.5% 的一种或两种及以上乳杆菌菌液，继续发酵40～42小时。当pH 值降至3.6以下时，结束发酵，加热煮沸10分钟，将发酵液过滤，滤液备用，残渣加入6倍量的纯水，加热至沸提取30分钟，过滤，将两次的滤液合并减压浓缩，离心，收集离心液，加入防腐剂，定容至所需体积，即得到澄清透明的益生菌发酵当归的组合物。

步骤（2）所述水浴加热提取的温度为60~100℃；最适提取温度为90℃。

步骤（3）中所述的双歧杆菌选自两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌或婴儿双歧杆菌；所述的乳杆菌选自嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌或植物乳杆菌；所述的链球菌选自嗜热链球菌；所述的乳球菌选自乳酸乳球菌乳酸亚种、乳酸乳球菌乳脂亚种。所述菌种来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心或者从正常人的粪便或肠粘膜组织中分离得到这些细菌菌株。

步骤（3）所述的防腐剂为杰马，防腐剂杰马与益生菌发酵当归的组合物的重量g/体积mL比为0.4%；防腐剂杰马由40%的双（羟甲基）咪唑烷基脲、0.4%的碘丙炔醇丁基氨甲酸酯和59.6%的丙二醇组成。

本发明的再一个目的是提供本发明所述的益生菌发酵当归的组合物在制备化妆品中的应用。其可以作为添加成分，应用于化妆品的生产。可按照化妆品工业中已知的方法将所述的益生菌发酵当归的组合物添加入化妆品中，所述的化妆品可以是膏霜类、乳液类、水类、凝胶类、面膜类、美容类或护肤类化妆品。

一般说来，本发明所述的益生菌发酵当归的组合物的添加量可根据产品状态、性质、用途等因素，按照状态稳定、产品安全、作用可靠的原则确定。

因此，根据本发明的优选实施方案，按照本发明的方法制备的当归发酵组合物，可应用于膏霜类、水类、凝胶类化妆品中。

有益效果：本发明中使用纤维素酶解、益生菌发酵转化当归，一方面，当归含有丰富的营养物质，不添加任何营养成分，益生菌生长良好，另一方面，益生菌在代谢过程中，所产生的丰富的酶对中药成分进行修饰和转化，使大分子物质转化为易于吸收的小分子物质，经与未发酵处理的当归溶液比较，可溶性固形物明显增加、益生菌发酵当归组合物溶液的澄清度明显增加，并且益生菌发酵当归组合物中的阿魏酸含量明显增加。另外，益生菌含有的核酸类及酸性代谢物，能有效地维护皮肤的微生态环境，促进人体皮肤的新陈代谢，达到了护肤、养肤、健肤的效果。动物实验表明，含有本发明的益生菌发酵当归组合物的护肤品可以显著改善小鼠衰老模型的SOD酶活力，增加胶原蛋白合成能力。

根据本发明的益生菌发酵当归的组合物，当其作为功能性美容/化妆品添加剂使用时，其中还可进一步含有选自紫外吸收剂、抗炎剂、抗氧化剂、苯并呋喃衍生物，金属离子络合剂和皮肤通透剂的一种或多种辅助成分。

具体实施方式

以下将结合实施例对本发明进行进一步的描述，但并非对本发明的限制。

实施例1：益生菌发酵当归的组合物A的制备

取干燥的当归100g，粉碎过100目筛，加入当归粉10倍重量的纯水浸泡60分钟，于90℃加热80分钟，将温度降至65℃时，调节pH值5.0，加入300mg纤维素酶，65℃条件下酶解3小时后，加热至沸10分钟，调节pH值至 6.5，115℃高温高压灭菌40分钟，得到发酵当归底物。温度降至39℃时，接入预培养好的两歧双歧杆菌（正常人体分离，经中国科学院微生物研究所鉴定）和短双歧杆菌（AS 1.2213）菌液，接种量均为0.5%（体积/体积）。发酵5小时后再接入预培养的嗜酸乳杆菌（AS1.1854）和植物乳杆菌（AS 1.19）菌液，接种量均为0.5%（体积/ 体积）。37℃继续发酵42小时，当pH 值降至3.6时，将发酵液加热至沸10分钟，结束发酵。将发酵液过滤，滤液备用，残渣加入6倍量的纯水，加热至沸提取30分钟，过滤，将两次的滤液合并减压浓缩至1000mL左右，5000rpm/min离心10分钟，收集离心液，加入杰马防腐剂4.0g，并定容至1000mL，即得到澄清质量稳定的的益生菌发酵当归组合物A。

实施例2：益生菌发酵当归的组合物B的制备

取干燥的当归140g，粉碎过100目筛，加入当归粉10倍重量的纯水浸泡60分钟，于60℃加热120分钟，将温度降至65℃时，调节pH值5.0，加入280mg纤维素酶，65℃条件下酶解3小时后，加热至沸10分钟，调节pH至6.5，115℃高温高压灭菌40分钟，得到发酵当归底物。温度降至39℃时，接入预培养好的嗜热链球菌（AS1.1855）和乳酸乳球菌乳酸亚种（AS1.2030）菌液，接种量均为0.5%（体积/体积）。发酵7小时后再接入预培养的德氏乳杆菌（正常人体分离）和鼠李糖乳杆菌（AS 1.26），接种量均为0.5%（体积/ 体积）。37℃继续发酵42 小时，当pH值降至3.60时，将发酵液加热至沸10分钟，结束发酵。将发酵液过滤，滤液备用，残渣加入6倍量的纯水，加热至沸提取30分钟，过滤，将两次的滤液合并减压浓缩至1000mL左右，5000rpm/min离心10分钟，收集离心液，加入杰马防腐剂4.0g，并定容至1000mL，即得到澄清质量稳定的的益生菌发酵当归组合物B。

实施例3：益生菌发酵当归的组合物C的制备

取干燥的当归120g，粉碎过100目筛，加入当归粉10 倍重量的纯水浸泡60分钟，于100℃加热40分钟，将温度降至65℃时，调节pH值5.0，加入120mg纤维素酶，65℃条件下酶解3小时后，加热至沸10分钟，调节pH至 6.5，115℃高温高压灭菌40分钟，得到发酵当归底物。温度降至39℃时，接入预培养好的乳酸乳球菌乳脂亚种（AS1.3920）和婴儿双歧杆菌（正常人体分离）菌液，接种量均为0.5%（体积/体积）。发酵8小时后再接入预培养的德氏乳杆菌（正常人体分离）和鼠李糖乳杆菌（AS 1.26），接种量均为0.5%（体积/ 体积）。37℃继续发酵42小时，当pH 值降至3.60时，将发酵液加热至沸10分钟，结束发酵。将发酵液过滤，滤液备用，残渣加入6倍量的纯水，加热至沸提取30分钟，过滤，将两次的滤液合并减压浓缩至1000mL左右，5000rpm/min离心10分钟，收集离心液，加入杰马防腐剂4.0g，并定容至1000mL，即得到澄清质量稳定的的益生菌发酵当归组合物C。

为了比较当归经过纤维素酶解、益生菌发酵后溶液状态、有效成分以及阿魏酸含量的变化，通过以下对比实验，表明益生菌对当归的代谢转化作用。

实验例1：益生菌发酵当归的组合物可溶性固形物测定

实验目的：比较当归经过酶解、益生菌发酵后与未发酵的当归提取物比较，可溶性固形物的含量差异。

实验样品：以实施例1制备的益生菌发酵当归组合物A为供试品，同时以未发酵的同样浓度的当归提取液为对照样品。

未发酵当归提取液制备：取干燥的当归100g，粉碎过100目筛，加入当归粉10倍重量的纯水浸泡60分钟，于90℃加热80分钟，将温度降至65℃时，调节pH值5.0，加入300mg纤维素酶，65℃条件下酶解3小时后，加热至沸10分钟，将酶解液过滤，滤液备用，残渣加入6倍量的纯水，加热至沸提取30分钟，过滤，将两次的滤液合并减压浓缩至1000mL左右，5000rpm/min离心10分钟，收集离心液，加入杰马防腐剂4.0g，并定容至1000mL，即得到未发酵的当归提取液。

实验与结果：在20℃ 用阿贝折光计上直接读出可溶性固形物含量。

将试样充分混匀，测定前按说明书校正折光计，分开折光计两而棱镜，用脱脂棉蘸乙醚或乙醇擦净。用末端熔圆之玻璃棒蘸取试液2~3滴，滴于折光计棱镜面中央（注意勿使玻璃棒触及镜面）。迅速闭合棱镜，静置1分钟，使试液均匀无气泡并充满视野。对准光源，通过目镜观察接物镜。旋转微调螺旋，使明暗界限清晰，并使其分界线恰在接物镜的十字交叉点上。读取目镜视野中的百分数，并记录棱镜温度。将上述百分含量换算为20℃时可溶性固形物含量(%)。

结果：益生菌发酵当归的组合物A可溶性固形物含量：7.0%

未发酵的的当归提取液可溶性固形物含量：5.5%

实验结果显示，经过益生菌发酵后，当归的大分子物质或者水不溶的成分经过益生菌的分解代谢，可溶性成分明显增加。

实验例2：益生菌发酵当归的组合物透光率测定

实验目的：比较当归经过酶解、益生菌发酵后与传统的水提取后，当归溶液透光率的差异。

实验样品：以实施例2制备的益生菌发酵当归的组合物B为供试品，同时以未发酵的同样浓度的当归提取液为对照样品。

未发酵的同样浓度的当归提取液制备：取干燥的当归140g，粉碎过100目筛，加入当归粉10倍重量的纯水浸泡60分钟，于60℃加热120分钟，将温度降至65℃时，调节pH值5.0，加入280mg纤维素酶，65℃条件下酶解3小时后，加热至沸10分钟，将酶解液过滤，滤液备用，残渣加入6倍量的纯水，加热至沸提取30分钟，过滤，将两次的滤液合并减压浓缩至1000mL左右，5000rpm/min离心10分钟，收集离心液，加入杰马防腐剂4.0g，并定容至1000mL，即得。

仪器：分光光度计，1cm的比色皿。

实验方法：将样品摇匀，分别吸取两样品于1cm比色皿中，以蒸馏水为参比，在波长625nm出测定其透光率。

结果：益生菌发酵当归组合物A的透光率：98%

未发酵的当归提取液透光率：86%

结论：经过益生菌发酵转化的当归溶液，透光率明显提高，澄清度明显提高。

实验例3：益生菌发酵当归的组合物阿魏酸含量测定

实验目的：实验观察当归经过酶解、益生菌发酵后与传统的水提取未发酵当归提取液中有效成分阿魏酸的含量。

实验样品：为实验例1的两个样品：益生菌发酵当归的组合物A和未发酵的当归提取液。

方法：参照中国药典当归项下阿魏酸的高效液相色谱法测定。色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.085%磷酸溶液（17:83）为流动相；检测波长为316nm。

对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加75%甲醇制成每1mL含20.04µg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：两样品摇匀，分别精密取5.0mL，置具塞锥形瓶中，再精密加入甲醇15毫升，称定重量，超声提取30分钟，放冷，再称定重量，用75%的甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与两个供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。实验结果见表1。

表1阿魏酸含量测定结果

从实验结果中可以看出，当归经过水提取、纤维素酶解后，通过益生菌发酵当归的组合物A与未发酵的当归提取液相比较，阿魏酸含量明显提高，推测可能是益生菌生长过程中产生的酶利于阿魏酸的溶出，也可能是酶的分解代谢作用，将其他成分转化为阿魏酸。

实施例4：含有本发明所述的益生菌发酵当归的组合物B的润肤水的制备

配方（其中各成分重量单位均为千克）

制备方法

乳化锅中加入去离子水，开动搅拌，加入卡波姆充分搅拌分散均匀，再加热至85℃，保温10分钟，降温到70℃，依次加入对羟基苯甲酸甲酯、甘油、透明质酸钠、聚乙二醇、生育酚乙酸酯、霍霍巴油，降温到50℃，加入三乙醇胺、益生菌发酵当归的组合物B、双（羟甲基）咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、丙二醇，降温到45℃；称取香精，PEG-40 氢化蓖麻油，搅拌均匀，即得。

实施例5：含有本发明所述的益生菌发酵当归的组合物A的润肤霜的制备

配方（其中各成分重量单位均为千克）

制备方法：

去离子水加入水锅，开动搅拌，加入黄原胶，甘油、透明质酸钠、聚乙二醇-90M、硅石低温分散均匀，再加热升温到85℃，保温10分钟；将鲸蜡硬脂醇、鲸蜡硬脂基葡糖苷、辛酸/癸酸甘油三酯、碳酸二乙基己酯、聚二甲基硅氧烷、C13-14 异链烷烃、聚丙烯酰胺、月桂醇聚醚-7依次加入油锅，搅拌加热到85℃，保温10分种；将水锅料抽人乳化锅，在搅拌下再抽人油锅料；抽完后，乳化锅开启均质3分钟，搅拌降温到50℃；再加入熊果苷、烟酰胺、甘草酸二钾、红没药醇、双（羟甲基）咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、丙二醇、益生菌发酵当归的组合物A、香精，搅拌均匀，降温到36℃，即得。

实施例6：含有本发明所述的益生菌发酵当归的组合物C的润肤凝露

配方（其中各成分重量单位均为千克）

制备方法：

去离子水加入乳化锅，开动搅拌，加入黄原胶、卡波姆分散均匀，加热到85℃，加入对羟基苯甲酸甲酯、霍霍巴油，降温到70℃，再依次加入甘油，生育酚乙酸酯，降温到45℃，加入三乙醇胺、双（羟甲基）咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、丙二醇、香精、PEG-40 氢化蓖麻油、发酵当归的组合物C，搅拌均匀，即得。

实验例4：含有本发明所述的益生菌发酵当归的组合物护肤品对小鼠皮肤作用观察

实验目的：实验测定含有本发明所述的益生菌发酵当归组合物护肤品对D一半乳糖衰老模型小鼠皮肤超氧化物歧化酶(SOD)、羟脯氨酸含量的影响，以观察含有本发明所述的益生菌发酵当归组合物护肤品对皮肤的抗氧化作用，同时以未添加本发明所述的益生菌发酵当归组合物护肤品为对照。

实验方法：实验动物共分为8组，分别为：①D一半乳糖模型组；②正常对照组；试验组分为：③含发酵组合物A的润肤霜组，④不含发酵组合物A的润肤霜组，⑤含发酵组合物B的润肤水组，⑥不含发酵组合物B的润肤水组，⑦含发酵组合物C的润肤凝露组，⑧不含发酵组合物C的润肤凝露组，每组10只。

①D一半乳糖模型组：每天给小鼠颈背部皮下注射12．5％D一半乳糖(1000mg／kg)；②正常对照组：每天小鼠颈背部皮下注射等容量生理盐水；试验组各组：每天小鼠颈背部皮下注射12.5％的D一半乳糖(1000mg／kg)，并用剃毛器剃去背部被毛，暴露大小约2cm×3cm的皮肤，各组分别涂抹：③含发酵组合物A的润肤霜、④不含发酵组合物A的润肤霜、⑤含发酵组合物B的润肤水、⑥不含发酵组合物B的润肤水、⑦含发酵组合物C的润肤凝露、⑧不含发酵组合物C的润肤凝露。

衰老小鼠皮肤SOD活力和皮肤总羟脯氨酸含量测定：各组小鼠均于28天后处死，取背部脱毛部位皮肤组织块，经预冷生理盐水漂洗，除去皮下脂肪及结缔组织，滤纸拭干，取0.5g于10mL烧杯中，加预冷生理盐水，眼科剪剪碎组织块后，倒入匀浆管中，加预冷生理盐水至5mL，用电动玻璃匀浆机制成10％组织匀浆(在冰水中进行)，然后反复冻融3次，使其完全破碎，细胞内容物完全游离液相中。制备的组织匀浆采用SOD试剂盒和羟脯氨酸试剂盒按说明书方法测定。

实验结果：

各实验组对衰老小鼠皮肤SOD活力和总羟脯氨酸含量的影响，见表2。

表2 各实验组对衰老小鼠皮肤SOD活力和总羟脯氨酸含量的影响

与正常组比较：*P<0.05，与模型组比较#P<0.05，与不含发酵组合物组间比较：&P<0.05

结果显示：与②正常对照组比较，①D一半乳糖模型组小鼠皮肤SOD活力和总羟脯氨酸含量明显降低，试验组③含发酵组合物A的润肤霜组、⑤含发酵组合物B的润肤水组、⑦含发酵组合物C的润肤凝露组小鼠皮肤SOD活力明显提高，与①D一半乳糖模型组比较，其他各组均有明显差别。

含有发酵组合物的护肤品与不含发酵组合物的护肤品组间比较，小鼠皮肤SOD活力明显提高，添加了发酵组和物的润肤霜和润肤水与未添加的比较，总羟脯氨酸含量明显提高，表明添加了发酵组和物的护肤品可有效防止自由基反应的连续发生和有害代谢产物的积累，对提高皮肤细胞自身防御能力，改善皮肤细胞营养状况，有效拮抗具有积极意义；同时可显著增高D一半乳糖衰老模型小鼠皮肤总羟脯氨酸含量(P<0.05)，表明其可通过刺激衰老皮肤成纤维细胞活性，增强胶原蛋白合成能力。

Claims (10)

1.一种益生菌发酵当归的组合物，其特征在于，所述组合物包括当归及其益生菌发酵代谢物，是由当归粉碎后，经过酶解、益生菌发酵、提取制备的澄清、透明的当归提取物；其可溶性固形物含量高于7.0%；澄清度透光率大于98%；阿魏酸含量高于38.27µg/mL；

所述的当归在益生菌发酵当归的组合物中的重量g/体积mL百分比为10～14%；

所述的益生菌为双歧杆菌、乳杆菌、链球菌、乳球菌。

2.根据权利要求1所述的益生菌发酵当归的组合物，其特征在于，所述酶解时使用的酶为纤维素酶，纤维素酶与当归粉的重量比为0.1~0.3%。

3.权利要求1或2所述的益生菌发酵当归的组合物的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）粉碎：将当归粉碎细度在60～100目，得当归粉；

（2）制备当归发酵底物：取步骤（1）所得当归粉，加入当归粉10 倍重量的纯水浸泡30～60 分钟，水浴加热提取40～120分钟后，将温度维持65℃，pH值4.5~6.0，加入纤维素酶，酶解3小时后，加热至沸10分钟，调节至pH6.0~6.5，高温高压灭菌，得到发酵当归底物；

（3）发酵：当步骤（2）制备的发酵当归底物温度降至39℃时，接种预培养的体积百分比各为0.5% 的双歧杆菌、链球菌、乳球菌中的一种或两种及以上的菌液，常规培养约3～8 小时后，再次接种预培养的体积百分比各为0.5% 的一种或两种及以上乳杆菌菌液，继续发酵40～42小时；当pH 值降至3.6以下时，结束发酵，加热煮沸10分钟，将发酵液过滤，滤液备用，残渣加入6倍量的纯水，加热至沸提取30分钟，过滤，将两次的滤液合并减压浓缩，离心，收集离心液，加入防腐剂，定容至所需体积，即得到澄清透明的益生菌发酵当归的组合物。

4.根据权利要求3所述的益生菌发酵当归的组合物的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述水浴加热提取的温度为60~100℃。

5.根据权利要求3所述的益生菌发酵当归的组合物的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述水浴加热提取的温度为90℃。

6.根据权利要求3所述的益生菌发酵当归的组合物的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述的双歧杆菌选自两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌或婴儿双歧杆菌；所述的乳杆菌选自嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌或植物乳杆菌；所述的链球菌选自嗜热链球菌；所述的乳球菌选自乳酸乳球菌乳酸亚种、乳酸乳球菌乳脂亚种。

7.根据权利要求3-6任一项所述的益生菌发酵当归的组合物的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述的防腐剂为杰马，防腐剂杰马与益生菌发酵当归的组合物的重量g/体积mL比为0.4%。

8.根据权利要求7所述的益生菌发酵当归的组合物的制备方法，其特征在于，防腐剂杰马由40%的双（羟甲基）咪唑烷基脲、0.4%的碘丙炔醇丁基氨甲酸酯和59.6%的丙二醇组成。

9.权利要求1或2所述的益生菌发酵当归的组合物在制备化妆品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的化妆品为将所述的益生菌发酵当归的组合物作为添加成分，按照化妆品工业中已知的生产方法制成的膏霜类、乳液类、水类、凝胶类、面膜类、美容类或护肤类化妆品。