CN112931223A - 一种用于蓝莓组织培养的培养基及培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于蓝莓组织培养的愈伤诱导培养基，其以WPM培养基为基础培养基，含有0.5‑5mg/L CPPU和0.1‑0.4mg/L 2‑ip。本发明还提供了一种蓝莓愈伤组织培养方法，步骤为：将蓝莓外植体接种到前述愈伤诱导培养基中进行诱导培养，形成蓝莓愈伤组织。本发明还公开了将前述蓝莓愈伤组织培养成蓝莓组织培养植株的培养基组合和培养方法。前述培养基和培养方法分化效果好、效率高，能够进行持续分化，并且对多个品种的效果均较好。

Description

一种用于蓝莓组织培养的培养基及培养方法
技术领域
本发明属于植物组织培养领域，涉及一种用于蓝莓组织培养的培养基及培养方法，特别涉及一种用于蓝莓叶片愈伤组织诱导及生芽以及获得蓝莓组织培养植株的培养基及培养方法。
背景技术
蓝莓(Vaccinium Spp)为杜鹃花科越橘属多年生低灌木。原生于北美州与东亚，分布于朝鲜、蒙古、欧洲、北美洲以及中国黑龙江、内蒙古、吉林长白山等地区。蓝莓果实中营养丰富，富含花青素，具有防止脑神经老化、强心、抗癌、软化血管、增强人体免疫等功能。因为其具有较高的保健价值而风靡世界，是世界粮食及农业组织推荐的五大健康水果之一。
申请号为200710157193.1的中国专利申请公开了一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物及其方法，但该方法愈伤诱导率低，不能充分满足蓝莓组织培养的需求。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明第一方面提供了一种用于蓝莓组织培养的愈伤诱导培养基，所述愈伤诱导培养基以WPM培养基为基础培养基，所述愈伤诱导培养基包括：0.5-5.0mg/L(比如，0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.2mg/L、1.4mg/L、1.6mg/L、1.8mg/L、2.0mg/L、2.2mg/L、2.4mg/L、2.6mg/L、2.8mg/L、3.0mg/L、3.2mg/L、3.4mg/L、3.6mg/L、3.8mg/L、4.0mg/L、4.2mg/L、4.4mg/L、4.6mg/L、4.8mg/L)CPPU和0.1-0.4mg/L(比如，0.12mg/L、0.14mg/L、0.16mg/L、0.18mg/L、0.20mg/L、0.22mg/L、0.24mg/L、0.26mg/L、0.28mg/L、0.30mg/L、0.32mg/L、0.34mg/L、0.36mg/L、0.38mg/L)2-ip。
在一些实施方式中，所述蓝莓的品种选自JE、公爵、蓝丰、甜心。
在一些实施方式中，所述愈伤诱导培养基包括：2.0-4.0mg/L CPPU和0.2-0.3mg/L2-ip。
在一些实施方式中，所述愈伤诱导培养基包括：2.0mg/L CPPU和0.2mg/L2-ip。
在一些实施方式中，所述WPM培养基包括：4-8g/L琼脂、20-30g/L蔗糖。
在一些实施方式中，所述WPM培养基还包括：400mg/L硝酸铵、370mg/L七水硫酸镁、278mg/L四水硝酸钙、200mg/L硝酸钾、170mg/L磷酸二氢钾、8.6mg/L七水硫酸锌、22.4mg/L一水硫酸锰、0.25mg/L二水钼酸钠、0.25mg/L五水硫酸铜、73.4mg/L乙二胺四乙酸钠铁、100mg/L肌醇、2mg/L甘氨酸、0.5mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L烟酸和0.1mg/L盐酸吡哆醇。
在一些实施方式中，所述愈伤诱导培养基的pH为5.0-5.5。
本发明第二方面提供了一种用于蓝莓组织培养的培养基组合，所述培养基组合包括本发明第一方面所述的愈伤诱导培养基、生芽培养基和生根培养基。
在一些实施方式中，所述生芽培养基以WPM培养基为基础培养基，所述生芽培养基包括：0.5-1.5mg/L CPPU(比如，0.6mg/L、0.7mg/L、0.8mg/L、0.9mg/L、1.0mg/L、1.2mg/L、1.3mg/L、1.4mg/L)和0.2-0.6mg/L(比如，0.25mg/L、0.3mg/L、0.35mg/L、0.4mg/L、0.45mg/L、0.5mg/L、0.55mg/L)2-ip。
在一些实施方式中，所述生芽培养基包括：0.8-1.2mg/L CPPU和0.3-0.5mg/L 2-ip。
在一些实施方式中，所述生芽培养基包括：1.0mg/L CPPU和0.4mg/L2-ip。
在一些实施方式中，所述生芽培养基的pH为5.0-5.5。
在一些实施方式中，所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，所述生根培养基包括：0.2-4.0mg/L(比如，0.5mg/L、1.0mg/L、mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L、3.0mg/L、3.5mg/L)NAA。
在一些实施方式中，所述生根培养基包括：1.0-3.0mg/L NAA。
在一些实施方式中，所述生根培养基包括：2.0mg/L NAA。
在一些实施方式中，所述生根培养基的pH为5.0-5.5。
在一些实施方式中，所述培养基组合还包括继代培养基。
在一些实施方式中，所述继代培养基以WPM培养基为基础培养基，所述继代培养基包括：0.3-5.0mg/L CPPU(比如，0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L、3.0mg/L、3.5mg/L、4.0mg/L、4.5mg/L)。
在一些实施方式中，所述继代培养基包括：2.0-4.0mg/L CPPU。
在一些实施方式中，所述继代培养基包括：3.0mg/L CPPU。
在一些实施方式中，所述继代培养基的pH为5.0-5.5。
在一些实施方式中，所述WPM培养基包括：4-8g/L琼脂、20-30g/L蔗糖。
在一些实施方式中，所述WPM培养基还包括：400mg/L硝酸铵、370mg/L七水硫酸镁、278mg/L四水硝酸钙、200mg/L硝酸钾、170mg/L磷酸二氢钾、8.6mg/L七水硫酸锌、22.4mg/L一水硫酸锰、0.25mg/L二水钼酸钠、0.25mg/L五水硫酸铜、73.4mg/L乙二胺四乙酸钠铁、100mg/L肌醇、2mg/L甘氨酸、0.5mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L烟酸和0.1mg/L盐酸吡哆醇。
在一些实施方式中，所述1/2MS培养基包括：5-9g/L琼脂、15-25g/L蔗糖。
在一些实施方式中，所述1/2MS培养基还包括：950mg/L硝酸钾、166.1mg/L氯化钙、825mg/L硝酸铵、90.35mg/L硫酸镁、85mg/L磷酸二氢钾、0.025mg/L硫酸铜、6.2mg/L硼酸、16.9mg/L硫酸锰、0.25mg/L钼酸钠、8.6mg/L硫酸锌、0.025mg/L氯化钴、0.83mg/L碘化钾、27.8mg/LFeSO4·7H2O、37.26mg/L Na2-EDTA·2H2O；2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、0.50mg/L烟酸、0.1mg/L盐酸硫胺素和0.5mg/L盐酸吡哆醇。
本发明第三方面提供了一种蓝莓愈伤组织培养方法，所述愈伤组织培养方法为：
将蓝莓外植体接种到本发明第一方面所述的愈伤诱导培养基中进行诱导培养，形成蓝莓愈伤组织。
在一些实施方式中，所述诱导培养为暗培养。
在一些实施方式中，所述诱导培养中，温度为22-26℃。
在一些实施方式中，所述诱导培养中，时间为12-22天。
在一些实施方式中，所述蓝莓外植体为无菌蓝莓叶片。
在一些实施方式中，将所述无菌蓝莓叶片切口后接种。
在一些实施方式中，将所述无菌蓝莓叶片远轴面挨着所述愈伤诱导培养基接种。
在一些实施方式中，所述无菌蓝莓叶片取自蓝莓组织培养苗。
本发明第四方面提供了一种蓝莓组织扩繁方法，所述组织扩繁方法为：将通过本发明第三方面所述的愈伤组织培养方法培养得到的所述蓝莓愈伤组织依次进行生芽培养和生根培养，得到蓝莓组织培养植株。
在一些实施方式中，将所述蓝莓愈伤组织的愈伤团接种到本发明第二方面所述的培养基组合中的所述生芽培养基中进行生芽培养，形成长有不定芽的蓝莓植株。
在一些实施方式中，所述生芽培养中，温度为22-26℃。
在一些实施方式中，所述生芽培养中，光照时间为每日14-18小时。
在一些实施方式中，所述生芽培养中，光照强度为1500-3000lx。
在一些实施方式中，所述生芽培养中，培养时间为12-22天。
在一些实施方式中，将所述长有不定芽的蓝莓植株接种到本发明第二方面所述的培养基组合中的所述生根培养基中进行生根培养，形成长有不定芽和根的蓝莓植株。
在一些实施方式中，所述生芽培养中，温度为22-26℃。
在一些实施方式中，所述生芽培养中，光照时间为每日14-18小时。
在一些实施方式中，所述生芽培养中，光照强度为1500-3000lx。
在一些实施方式中，所述生芽培养中，培养时间为15-35天。
在一些实施方式中，所述组织扩繁方法还包括愈伤继代培养，步骤为：
将所述蓝莓愈伤组织接种到本发明第二方面所述的培养基组合中的所述愈伤继代培养基中进行愈伤继代培养。
在一些实施方式中，所述继代培养为暗培养。
在一些实施方式中，所述继代培养中，温度为22-26℃。
在一些实施方式中，所述继代培养中，时间为20-30天。
在一些实施方式中，所述组织扩繁方法还包括将所述有不定芽和根的蓝莓植株进行炼苗和移栽，得到蓝莓栽培植株。
在一些实施方式中，所述炼苗的步骤包括：将所述有不定芽和根的蓝莓植株的培养瓶内保持65-75％的湿度0.5-1.5天，再在通风条件下保持55-65％的湿度5-9天。
在一些实施方式中，所述炼苗的步骤中，光照时间为每日14-18小时。
在一些实施方式中，所述炼苗的步骤中，光照强度为1500-3000lx。
在一些实施方式中，将经过练苗后的所述有不定芽和根的蓝莓植株的根部清理去掉培养基，进行所述移栽。
在一些实施方式中，移栽所用培养土为质量用量比为1：0.5-1.5：0.5-1的蛭石、营养土和苔藓。
本发明技术与现有技术相比有益效果：
利用本发明的蓝莓叶片愈伤诱导培养基提高了蓝莓的再生效率，且诱导出的愈伤组织持续分化的能力强。诱导蓝莓叶片产生愈伤组织及再分化，分化效果好、效率高，能够进行持续分化，并且对多个品种的效果均较好。
附图说明
图1为JE叶片愈伤组织诱导及分化的照片。
图2为体式显微镜下JE叶片诱导出的愈伤组织及分化出的丛芽的照片。
图3为蓝莓愈伤愈伤团生长为蓝莓组培苗的照片。
图4为蓝莓生根的照片。
图5公爵叶片愈伤组织诱导及分化的照片。
图6为体式显微镜下公爵叶片诱导出的愈伤组织及分化出的丛芽的照片。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。
本发明没有详细描述的步骤均为本领域常规操作，没有详细记录的材料均为本领域常规材料。
实施例1：JE品种蓝莓的组织培养
(一)培养基的配制
(1)愈伤诱导培养基
本发明的1-18号愈伤组织诱导培养基均以WPM培养基为基础培养基，WPM基础培养基含有25g/L蔗糖、6.5g/L琼脂，pH5.2，配方中其他常规成分如表1所示，激素成分如表2第2列所示。
表1.WPM培养基配方中的其他成分
Figure BDA0003025280490000061
(2)愈伤继代培养基
以WPM培养基为基础培养基(配方参见表1)，WPM基础培养基含有25g/L蔗糖、6.5g/L琼脂，pH5.2，激素为CPPU，激素的含量参见表3第2列。
(3)芽生长培养基
以WPM培养基为基础培养基(配方参见表1)，WPM基础培养基含有25g/L蔗糖、6.5g/L琼脂，pH5.2，激素为CPPU和2-ip，激素的含量参见表4第2-3列。
(4)生根培养基
以1/2MS培养基为基础培养基，1/2MS基础培养基含有20g/L蔗糖、7g/L琼脂，pH5.2-5.4，激素为NAA，激素含量参见表5第2列。
1/2MS培养基具体还包括大量元素：950mg/L硝酸钾、166.1mg/L氯化钙、825mg/L硝酸铵、90.35mg/L硫酸镁、85mg/L磷酸二氢钾；微量元素：0.025mg/L硫酸铜、6.2mg/L硼酸、16.9mg/L硫酸锰、0.25mg/L钼酸钠、8.6mg/L硫酸锌、0.025mg/L氯化钴、0.83mg/L碘化钾；铁盐：27.8mg/LFeSO4·7H2O、37.26mg/L Na2-EDTA·2H2O；有机成分：2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、0.50mg/L烟酸、0.1mg/L盐酸硫胺素(VB1)、0.5mg/L盐酸吡哆醇(VB6)。
(二)蓝莓叶片外植体的获取及处理
选取生长2-4周的健壮的蓝莓无菌组培苗，用灭菌的组培剪刀将上部茎剪下，在灭菌的滤纸板上，用灭菌的解剖刀将幼嫩的叶片切下，切掉叶柄，放到不含任何营养成分的培养基(即，只含7g/L的琼脂，pH5.2-5.3)板中备用。
本步骤使用蓝莓无菌组培苗是为了省去外植体消毒处理步骤，提高效率，增加无菌效果，促进生产的连续化。本发明亦可采用健壮幼嫩的蓝莓叶片，通过常规消毒，获得无菌蓝莓叶片，进行后续的操作。
(三)愈伤组织诱导及生芽
(1)将叶片正面(即，近轴面)向上，沿垂直于主叶脉的方向斜切2-3刀，注意不要将叶片切碎，一次性切割，不要来回切割；用尖头镊子在叶片上扎3-4次，以更好地促进愈伤组织的诱导；每切10片叶子更换一张无菌滤纸。
(2)将叶片正面向上，平铺于培养皿中的培养基上，并使叶片背面与培养基充分接触，叶片与叶片之间留有0.5cm的间隙，以给予叶片充足的生长空间。
(3)将培养皿封口，正置于24℃黑暗培养室中，暗培养15-20天。
(4)从暗培养室中拿出培养皿，放于24℃，每日在16h光照/8小时黑暗的环境中培养15-30天，光照强度1500-3000lx，以诱导芽的分化。
使用JE品种的蓝莓外植体，分别采用含有表2所示18种激素组合的诱导愈伤培养基，每种培养基的培养皿数为10个。观察外植体即叶片组织的愈伤组织诱导情况以及长势，出愈的时间、愈伤的状态、愈伤的颜色、愈伤诱导率(只计算成活的叶片)和愈伤分化率，其中，愈伤分化率是步骤(4)光照培养之后进行计算的，其他指标是步骤(3)暗培养之后进行计算的，结果分别参见表2。
由表2的数据可见，8号愈伤诱导培养基的效果最好，其中步骤(4)光照培养之后一个培养基板参见图1。
使用体式显微镜(厂家Leica，型号M205C)观察步骤(4)光照培养之后8号愈伤诱导培养基培养的带有愈伤组织的蓝莓叶片，放大倍数为6.3倍，观察愈伤组织和丛芽，其中一系列视野的照片参见图2。
根据表2和图1-2可见，采用CPPU(氯吡苯脲)和2-ip(2-异戊烯腺嘌呤)的组合为激素愈伤诱导率、愈伤分化率指标明显更好，其中8号愈伤诱导培养基的效果最好，能够有效地诱导蓝莓外植体生成愈伤组织。
图2中可以清晰地看到愈伤组织分化为芽的过程(A-F)，分别是芽原基的出现(A)、芽原基的生长(B-D)、芽的出现(E)、肉眼可见的丛芽(F-H)，H中的芽切下来，每个都可以长成一株完整的蓝莓组培苗。
(四)愈伤组织继代培养：
在步骤(三)中步骤(3)暗培养之后筛选出最优愈伤培养基(8号愈伤培养基)中培养的长势好、生长力强、未分化出芽的愈伤组织，置于无菌超净工作台上，之后的操作需要在超净工作台上进行无菌操作。
将选取的愈伤组织用无菌解剖刀分切成长宽为(0.5×0.5)cm大小的块，分别植入含有表3所示5种浓度激素蓝莓愈伤组织继代培养基中，进行继代增殖培养，每种培养基10个板，每板中愈伤组织的个数为10个。
将上述愈伤组织暗室中进行继代培养3-4周，培养温度为24℃，观察愈伤组织增殖状态。增殖系数参见表3。
由此可见，本步骤的方法能够有效地将愈伤组织继代培养。
(五)芽生长培养
将(三)中步骤(3)暗培养之后筛选出最优愈伤培养基(8号愈伤培养基)中培养的长势好、生长力强、未分化出芽的愈伤组织，分别移至含有表4所示4种激素组合的芽生长培养基中，每瓶20-25棵，培养环境为24℃，培养15-20天，每日16h光照/8小时黑暗，光照强度1500-3000lx，观察小苗生长状况并记录。其中一瓶的照片参见图3，生长情况参见表4。
(六)生根诱导
将步骤(五)中长势茁壮的蓝莓苗切割后，将其分别移至表1和5所示4种蓝莓生根培养基中，每瓶8-10株，培养环境为24℃，每日16h光照/8小时黑暗，培养20-30天，光照强度1500-3000lx，观察小苗生根状况并记录生根率。其中一瓶的照片参见图4，生根率参见表5。
(七)炼苗
将所述长有不定芽和根的蓝莓植株进行炼苗培养，炼苗的步骤包括：准备前述步骤(六)中已经生根的蓝莓组培苗，将组培瓶瓶盖打开，在其中加入15ml的无菌水，置于湿度为70％的环境中，1天后，将组培瓶中的水倒掉，重新加入20ml无菌水，将湿度调整为60％并进行通风，7天后进行移栽，期间可以更换一次无菌水。以上的光暗周期均为每日16h光/8h黑暗，光照强度1500-3000lx。
(八)移栽
将经前述步骤(七)炼苗后的蓝莓植株从瓶中取出，去掉培养基，用水清洗根部，种于营养钵中。移栽所用的培养土为蛭石：营养土：苔藓(1：1：1)，注意营养土的pH要控制在5.3-5.6。
结果：当优化条件后，最终愈伤诱导率可达到97％，愈伤生芽率(步骤(4)光照培养之后)可达到71％、生根率可达到90％，幼苗成活率(指移栽阶段的成活率)可达到94％。
表2.诱导愈伤及生芽培养基中的激素组合及其培养效果统计
Figure BDA0003025280490000101
Figure BDA0003025280490000111
表3.蓝莓愈伤组织继代培养基中的激素及其培养效果统计
编号 CPPU(mg/L) 增殖系数
1 0.5 0.9
2 1.0 1.4
3 2.0 1.8
4 3.0 2.4
5 4.0 1.6
表4.蓝莓芽生长培养基中的激素组合及其培养效果统计
编号 CPPU(mg/L) 2-ip(mg/L) 芽生长状况
1 0.5 0.4 +
2 0.5 0.6 ++
3 1.0 0.4 ++++
4 1.0 0.6 ++
注：“+”表示愈伤组织生长状态。
“++++”为生长状态最好，长势健壮，生长快，叶片较大；
“++”表示生长状态一般，生长较慢，长势中庸；
“+”表示生长状态差，生长缓慢，叶片小。
表5.蓝莓生根培养基及其培养效果统计
Figure BDA0003025280490000121
实施例2：公爵品种蓝莓的组织培养
采用与实施例1相同的操作方法和参数，使用8号愈伤诱导培养基，对公爵品种的蓝莓叶片进行愈伤组织培养，其中步骤(4)光照培养之后一瓶的生长状况参见图5。
使用体式显微镜观察8号愈伤诱导培养基的带有愈伤组织的蓝莓叶片，放大倍数为6.3倍，观察愈伤组织和丛芽，其中步骤(4)光照培养之后一些视野的照片参见图6。
通过图5可见，叶片诱导出的愈伤为淡黄色或白色，肉眼可见愈伤组织上有绿色点状突起，该点状突起即为已经分化出的蓝莓芽原基，并且芽原基的状态及生长情况在体式显微镜下能够观察的更为清晰。
图6中可以清晰地看到愈伤组织分化为芽的过程(A-I)，分别是芽原基的出现(A)、芽原基的生长(B-D)、芽的出现(E)、肉眼可见的丛芽(F-I)，I中的芽切下来，每个都可以长成一株完整的蓝莓组培苗。
8号愈伤诱导培养基对公爵品种的蓝莓具有近似的愈伤组织诱导效果。
实施例3：叶片与培养基接触面对愈伤培养的影响
实施例1中使用8号愈伤诱导培养基的情况在表6中计做编号1；将实施例1的步骤(2)中叶片正面(即，近轴面)向上变成叶反面(远轴面)向上，其他步骤与实施例1相同，表3中计做编号2。
观察外植体即叶片组织的愈伤组织诱导情况以及长势，出愈的时间、愈伤的状态、愈伤的颜色、愈伤诱导率(只计算成活的叶片)和愈伤分化率，具体情况参见表6。
由表6可见，叶片正面(即，近轴面)向上相比叶反面(远轴面)向上愈伤诱导率略高，而愈伤分化率显著更高。
表6.叶片与培养基接触面对愈伤培养的影响
Figure BDA0003025280490000131
由技术常识可知，本发明可以通过其它的不脱离其精神实质或必要特征的实施方案来实现。因此，上述公开的实施方案，就各方面而言，都只是举例说明，并不是仅有的。所有在本发明范围内或在等同于本发明的范围内的改变均被本发明包含。

Claims (10)

1.一种用于蓝莓组织培养的愈伤诱导培养基，所述愈伤诱导培养基以WPM培养基为基础培养基，所述愈伤诱导培养基包括：0.5-5.0mg/L CPPU和0.1-0.4mg/L 2-ip。
2.如权利要求1所述的愈伤诱导培养基，其特征在于，所述蓝莓的品种选自JE、公爵、蓝丰、甜心；优选地，所述愈伤诱导培养基包括：2.0-4.0mg/LCPPU和0.2-0.3mg/L 2-ip；
优选地，所述愈伤诱导培养基包括：2.0mg/LCPPU和0.2mg/L 2-ip；
优选地，所述WPM培养基包括：4-8g/L琼脂、20-30g/L蔗糖；
优选地，所述WPM培养基还包括：400mg/L硝酸铵、370mg/L七水硫酸镁、278mg/L四水硝酸钙、200mg/L硝酸钾、170mg/L磷酸二氢钾、8.6mg/L七水硫酸锌、22.4mg/L一水硫酸锰、0.25mg/L二水钼酸钠、0.25mg/L五水硫酸铜、73.4mg/L乙二胺四乙酸钠铁、100mg/L肌醇、2mg/L甘氨酸、0.5mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L烟酸和0.1mg/L盐酸吡哆醇；
优选地，所述愈伤诱导培养基的pH为5.0-5.5。
3.一种用于蓝莓组织培养的培养基组合，所述培养基组合包括本权利要求1或2所述的愈伤诱导培养基、生芽培养基和生根培养基。
4.如权利要求3所述的培养基组合，其特征在于，所述生芽培养基以WPM培养基为基础培养基，所述生芽培养基包括：0.5-1.5mg/L CPPU和0.2-0.6mg/L 2-ip；
优选地，所述生芽培养基包括：0.8-1.2mg/L CPPU和0.3-0.5mg/L 2-ip；
优选地，所述生芽培养基包括：1.0mg/L CPPU和0.4mg/L 2-ip；
优选地，所述生芽培养基的pH为5.0-5.5；
优选地，所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，所述生根培养基包括：0.2-4.0mg/L NAA；
优选地，所述生根培养基包括：1.0-3.0mg/L NAA；
优选地，所述生根培养基包括：2.0mg/L NAA；
优选地，所述生根培养基的pH为5.0-5.5；
优选地，所述培养基组合还包括继代培养基；
优选地，所述继代培养基以WPM培养基为基础培养基，所述继代培养基包括：0.3-5.0mg/L CPPU；
优选地，所述继代培养基包括：2.0-4.0mg/L CPPU；
优选地，所述继代培养基包括：3.0mg/L CPPU；
优选地，所述继代培养基的pH为5.0-5.5；
优选地，所述WPM培养基包括：4-8g/L琼脂、20-30g/L蔗糖；
优选地，所述WPM培养基还包括：400mg/L硝酸铵、370mg/L七水硫酸镁、278mg/L四水硝酸钙、200mg/L硝酸钾、170mg/L磷酸二氢钾、8.6mg/L七水硫酸锌、22.4mg/L一水硫酸锰、0.25mg/L二水钼酸钠、0.25mg/L五水硫酸铜、73.4mg/L乙二胺四乙酸钠铁、100mg/L肌醇、2mg/L甘氨酸、0.5mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L烟酸和0.1mg/L盐酸吡哆醇；
优选地，所述1/2MS培养基包括：5-9g/L琼脂、15-25g/L蔗糖。
优选地，所述1/2MS培养基还包括：950mg/L硝酸钾、166.1mg/L氯化钙、825mg/L硝酸铵、90.35mg/L硫酸镁、85mg/L磷酸二氢钾、0.025mg/L硫酸铜、6.2mg/L硼酸、16.9mg/L硫酸锰、0.25mg/L钼酸钠、8.6mg/L硫酸锌、0.025mg/L氯化钴、0.83mg/L碘化钾、27.8mg/LFeSO4·7H2O、37.26mg/L Na2-EDTA·2H2O；2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、0.50mg/L烟酸、0.1mg/L盐酸硫胺素和0.5mg/L盐酸吡哆醇。
5.一种蓝莓愈伤组织培养方法，所述愈伤组织培养方法为：
将蓝莓外植体接种到本权利要求1或2所述的愈伤诱导培养基中进行诱导培养，形成蓝莓愈伤组织。
6.如权利要求5所述的愈伤组织培养方法，其特征在于，所述诱导培养为暗培养；
优选地，所述诱导培养中，温度为22-26℃；
优选地，所述诱导培养中，时间为12-22天；
优选地，所述蓝莓外植体为无菌蓝莓叶片；
优选地，将所述无菌蓝莓叶片切口后接种；
优选地，将所述无菌蓝莓叶片远轴面挨着所述愈伤诱导培养基接种；
优选地，所述无菌蓝莓叶片取自蓝莓组织培养苗。
7.一种蓝莓组织扩繁方法，所述组织扩繁方法为：将通过权利要求5或6所述的愈伤组织培养方法培养得到的所述蓝莓愈伤组织依次进行生芽培养和生根培养，得到蓝莓组织培养植株。
8.如权利要求7所述的组织扩繁方法，其特征在于，将所述蓝莓愈伤组织的愈伤团接种到权利要求3或4所述的培养基组合中的所述生芽培养基中进行生芽培养，形成长有不定芽的蓝莓植株；
优选地，所述生芽培养中，温度为22-26℃；
优选地，所述生芽培养中，光照时间为每日14-18小时；
优选地，所述生芽培养中，光照强度为1500-3000lx；
优选地，所述生芽培养中，培养时间为12-22天；
优选地，将所述长有不定芽的蓝莓植株接种到权利要求3或4所述的培养基组合中的所述生根培养基中进行生根培养，形成长有不定芽和根的蓝莓植株；
优选地，所述生芽培养中，温度为22-26℃；
优选地，所述生芽培养中，光照时间为每日14-18小时；
优选地，所述生芽培养中，光照强度为1500-3000lx；
优选地，所述生芽培养中，培养时间为15-35天。
9.如权利要求7所述的组织扩繁方法，其特征在于，所述组织扩繁方法还包括愈伤继代培养，步骤为：将所述蓝莓愈伤组织接种到权利要求3或4所述的培养基组合中的所述愈伤继代培养基中进行愈伤继代培养；
优选地，所述继代培养为暗培养；
优选地，所述继代培养中，温度为22-26℃；
优选地，所述继代培养中，时间为20-30天。
10.如权利要求7所述的组织扩繁方法，其特征在于，所述组织扩繁方法还包括将所述有不定芽和根的蓝莓植株进行炼苗和移栽，得到蓝莓栽培植株；
优选地，所述炼苗的步骤包括：将所述有不定芽和根的蓝莓植株的培养瓶内保持65-75％的湿度0.5-1.5天，再在通风条件下保持55-65％的湿度5-9天；
优选地，所述炼苗的步骤中，光照时间为每日14-18小时；
优选地，所述炼苗的步骤中，光照强度为1500-3000lx；
优选地，将经过练苗后的所述有不定芽和根的蓝莓植株的根部清理去掉培养基，进行所述移栽；
优选地，移栽所用培养土为质量用量比为1：0.5-1.5：0.5-1的蛭石、营养土和苔藓。
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