CN112924700A - 一种钥孔血蓝蛋白(KLH)的包被工艺及小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒 - Google Patents

一种钥孔血蓝蛋白(KLH)的包被工艺及小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种钥孔血蓝蛋白(KLH)的包被工艺及小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒，包括KLH特异性IgG抗体捕获微球、样本前处理lgM捕获微球、标准品、FITC标记检测荧光抗体、样品稀释液、洗涤缓冲液；KLH特异性IgG抗体捕获微球制备包括如下步骤：1)将KLH蛋白溶于含0.1％二硫苏糖醇(DTT)的碳酸盐缓冲液中，得到包被蛋白液；2)活化微球；3)将活化后得到活化微球加入到包被蛋白液中进行偶联，反应后进行封闭。本发明通过对包被液进行调整，使KLH蛋白解聚与聚苯乙烯羧基微球进行有效连接，提高了KLH蛋白与微球偶联的效率；同时通过对待测样品进行前处理，减少了免疫应答中lgM抗体的干扰，提高了免疫血清中lgG抗体定量检测的灵敏度与精度。

Description

一种钥孔血蓝蛋白(KLH)的包被工艺及小鼠KLH特异性IgG抗 体定量检测试剂盒
技术领域
本发明涉及检测试剂盒领域，具体涉及一种钥孔血蓝蛋白(KLH)的包被工艺及小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒。
背景技术
近年来TDAR试验被认为是检测药物潜在免疫毒性预测性较好的功能性试验，可通过人为引入外来抗原，来反映待测药物对免疫系统整体的影响，预测免疫功能的改变，并能对药物的免疫调节和免疫毒性特点进行早期预测，因此该方法在药物免疫毒理学研究中逐渐得到广泛应用。然而，传统的TDAR试验由于存在外来引入的抗原特异差、操作复杂及变异性大等问题，导致该试验的特异性、灵敏性、精密性、重复性及可操作性等都存在很大缺陷。近年来国内外很多学者研究以钥孔血蓝蛋白KLH作为引入的外来抗原，在利用ELISA法检测大鼠、猪等实验动物外周血KLH特异性IgG抗体时发现，KLH作为外来抗原比其它抗原相比具有变异性小，结果稳定等优点，更适合作为T细胞依赖性抗原。
KLH做为特异性抗原的TDAR试验方法虽然有诸多优点，但目前也存在一些问题：
1)KLH是从海洋生物体内提取出来的可溶性蛋白，对于哺乳动物来讲是一种异体蛋白，具有高度免疫原性。KLH为天然高分子蛋白，其分子量8000-9000KDa，具有KLH1(400KDa)和KLH2(345KDa)两个亚基。对于直径在1-10μm的微球来讲，分子量高达8000KDa多的KLH蛋白并不适合做为偶联蛋白，因此需将其解离成单体。通常当包被溶液的PH为9.6时，KLH高分子蛋白会发生解离，但这种解离的KLH亚基不稳定会自身再次形成聚合，因此KLH蛋白与微球的偶联效率低下，导致检测水平低。
2)不同的免疫剂量、免疫途径及周期可产生不同的免疫效果，在免疫应答过程中会产生lgG和lgM抗体，因此在血清定量中会存在lgM的检测基质干扰，从而降低对KLH-lgG抗体检测的精准性。
同时，TDAR试验检测方法大多采用间接ELISA法，实验结果以定性为主，因此对于不同的免疫抑制药物或刺激药物无法全部体现免疫毒性；此外一些已知免疫抑制剂如化疗药物，本身就存在免疫抑制，需要考察的是免疫抑制程度，定性分析也无法满足检测需求。
发明内容
本发明为了解决现有技术存在的上述问题，提供了一种钥孔血蓝蛋白(KLH)的包被工艺及小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒，通过对包被液进行调整，使KLH蛋白解聚与聚苯乙烯羧基微球进行有效连接，提高了KLH蛋白与微球偶联的效率；同时通过对待测样品进行前处理，减少了免疫应答中lgM抗体的干扰，提高了免疫血清中lgG抗体定量检测的灵敏度与精度。
本发明通过下述技术方案实现：
一种钥孔血蓝蛋白KLH的包被工艺，包括如下步骤：1)将KLH蛋白溶于含0.1％二硫苏糖醇(DTT)的碳酸盐缓冲液中，得到包被蛋白液；2)利用活化剂对微球表面的羧基进行活化得到活化微球；3)将活化后得到活化微球加入到步骤1)的包被蛋白液中进行偶联，反应完成后进行封闭，即得KLH特异性IgG抗体捕获微球。
常规的微球包被液一般为碳酸盐包被液，而本发明采用的包被液为在常规的碳酸盐包被液基础上额外加入了0.1％二硫苏糖醇(DTT)，能够将KLH单体与聚苯乙烯羧基微球进行有效的结合，提高化学偶联效率。
步骤1)中包被蛋白液的成分配比为：KLH蛋白的浓度为80-160g/L，二硫苏糖醇的浓度为1g/L，碳酸盐缓冲液pH值为9.6。
步骤2)中活化剂为EDC(1-乙基-3-[3-二甲氨基丙基]碳化亚胺)和S-NHS(巯基乙酰基三甘氨酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)，活化时间为20min；微球为聚苯乙烯羧基微球。
步骤3)中活化微球数量与包被液体积比为500个/μL。
步骤3)中偶联反应时间为2h，封闭剂为2％BSA溶液。
一种小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒，包括KLH特异性IgG抗体捕获微球、样本前处理lgM捕获微球、标准品、FITC标记检测荧光抗体、样品稀释液、洗涤缓冲液。
试剂盒中各试剂的含量配比为：
样本前处理lgM捕获微球：1.5mL(1.25×107个)/管，此微球用量为3μL/test，可做500次实验。用于去除血清中lgM的干扰；
KLH特异性IgG抗体捕获微球：1.5mL(1.25×107个)/管，此微球用量为6μL/test，可做250次实验；
标准品：浓度为0.4mg/mL，每管标准品采用样品稀释液200μL稀释，作为标准品最高浓度；
FITC标记检测荧光抗体：2mL，浓度为0.06mg/mL，用量为100μL/test；
样品稀释液：浓度为1％BSA的0.01mol/L，PH＝7.2-7.4PBS磷酸盐缓冲液25mL，用于稀释标准品或待检样品；
洗涤缓冲液：含有0.05％吐温20的浓度为0.01mol/L，pH＝7.2-7.4的PBS磷酸盐缓冲液500mL，用于清洗的步骤和重悬洗过的微球。
样本前处理lgM捕获微球的制备方法为：将活化后的微球与抗小鼠IgM特异性抗体进行偶联2h，反应完成后进行封闭，即得IgM抗体捕获微球。
所述抗小鼠IgM特异性抗体为抗小鼠IgMμ链特异性IgG抗体。
试剂盒的使用操作方法如下：1)取样本前处理lgM捕获微球加入到待测血清样本进行前处理1h，去除待测样本血清中KLH特异性IgM抗体；2)前处理完成后将KLH特异性IgG抗体捕获微球加入样本血清中；3)加入FITC标记检测荧光抗体后，检测FITC通道的荧光强度MFI值。
本发明的试剂盒含有样本前处理lgM捕获微球，在对IgM抗体进行检测之间，对血清样本进行前处理，能够去除样本血清中KLH特异性IgM抗体，从而降低待测样本血清中KLH特异性IgM抗体对IgG抗体定量检测的干扰；同时含有采用本发明包被工艺制得的KLH特异性IgG抗体捕获微球，蛋白与微球偶联效率好，能够更好的针对免疫血清中lgG抗体进行定量分析。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明一种钥孔血蓝蛋白(KLH)的包被工艺，通过对包被液进行改进，能够使KLH蛋白解聚与聚苯乙烯羧基微球进行有效连接，提高了偶联的效率；
2、本发明一种小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒，通过对待测样品进行前处理，减少免疫应答中lgM抗体干扰，能够更好的针对免疫血清中lgG抗体进行定量分析；
3、本发明一种小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒，需要的样本量少、检测灵敏度高、操作便利、实用性强，能够直接进行TDAR实验定量分析。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明实施例的限定。在附图中：
图1标准品溶液的线性曲线；
图2标准品溶液和待检样品中小鼠KLH特异性IgG抗体检测浓度值；
图3血清样品流式分析图；
图4待检样品经过前处理和未经过前处理的MFI值对比图；
图5本发明包被液与现有包被液制备的抗体捕获微球的MFI值对比图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
实施例1
一种KLH蛋白的包被工艺，具体过程如下：
1)将KLH蛋白溶于含0.1％二硫苏糖醇(DTT)pH9.6碳酸盐缓冲液中以得到包被蛋白液；
2)利用活化剂EDC和S-NHS对聚苯乙烯羧基微球表面的羧基进行活化20min得到活化微球；
3)将活化后的聚苯乙烯羧基微球加入到包被蛋白液中进行偶联，偶联时间2h；
4)反应完成后加入2％的牛血清白蛋白进溶液行封闭，封闭30min，得到KLH特异性IgG抗体捕获微球；然后将捕获微球加入到含有0.05％叠氮钠，PH＝7.2-7.4的PBS磷酸盐缓冲液储存液中储存即可。
其中，本实施例中，微球的添加量、封闭剂和储存液的类型与添加量均与现有技术相同，因此上述各物质的添加量与添加种类不再一一阐述。
本发明通过采用改进后的包被液：即0.1％二硫苏糖醇(DTT)pH9.6碳酸盐缓冲液，能够使KLH蛋白解聚，实现KLH蛋白与微球之间偶联效率的增加。
对比例1
一种KLH蛋白的包被工艺，与实施例1的区别在于，步骤1)中使用常规不含0.1％二硫苏糖醇(DTT)的碳酸盐缓冲液。
取实施例1制得的KLH特异性IgG抗体捕获微球和对比例1制得的微球，进行荧光强度MFI值检测，结果如图5所示，从图中可以明显看出本实施例的MFI值明显高于对比例1的MFI值，说明本发明改进的包被液能够提高KLH蛋白与微球之间的偶联。
实施例2
一种小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒，所述试剂的配比为：
样本前处理lgM捕获微球：1.5mL(1.25×107个)/管，此微球用量为3μL/test，可做500次实验。用于去除血清中lgM的干扰；
KLH特异性IgG抗体捕获微球：1.5mL(1.25×107个)/管，此微球用量为6μL/test，可做250次实验；
标准品：浓度为0.4mg/mL，每管标准品采用样品稀释液200μL稀释，作为标准品最高浓度；
FITC标记检测荧光抗体：2mL，浓度为0.06mg/mL，用量为100μL/test
样品稀释液：浓度为1％BSA的0.01mol/L，PH＝7.2-7.4PBS磷酸盐缓冲液25mL，用于稀释标准品或待检样品；
洗涤缓冲液：含有0.05％吐温20的0.01mol/L，PH＝7.2-7.4PBS磷酸盐缓冲液500mL，用于清洗的步骤和重悬洗过的微球。
上述试剂盒的具体检测操作步骤如下：
1.微球标准溶液的制备
1.1取KLH特异性IgG抗体捕获微球进行倍比稀释1.2；
1.2取100μL标准品溶液，用1％BSA样品稀释液倍比稀释500000、250000、125000、62500、31250、15625、7812.5、3906.25(pg/mL)；
1.3每支样品管加入50μL标准品+重悬后KLH特异性IgG抗体捕获微球50μL，振荡30s,室温避光孵育2h；
1.4每支样品管中加入1:25稀释后FITC标记检测荧光抗体，室温避光孵育1h；
1.5加入500μL洗涤缓冲液洗涤，14000g离心4min，去上清液；
1.6加入200μL洗涤缓冲液，涡旋混匀；
2.标准曲线绘制
检测及数据分析，FSC/SSC散点图圈出检测微球门，获取3500个微球，检测FITC通道的荧光强度MFI值；以标准品稀释浓度为横坐标(X)，平均荧光强度(MFI)的对数为纵坐标(Y)进行标准曲线的绘制。如图1所示，利用线性回归对测定结果拟合，得出方程：y＝(A-D)/[1+(x/C)^B]^E+D，R2＝0.9993，A＝10.090、B＝14.122、C＝21.873、D＝15.805、E＝-11.800，表明本方法的线性良好。
3.待检样品前处理
3.1将血清稀释到1:100，每支样品管中加入稀释后的血清100μL；
3.2再加入50μL重悬后样本前处理lgM捕获微球，室温避光孵育1h；
3.3 14000g离心4min，取50μL上清液；
4.待检样品IgG抗体定量检测
4.1加入50μL重悬后KLH特异性IgG抗体捕获微球，室温避光孵育2h；
4.2加入1:25稀释后的100μL FITC标记检测抗体，室温避光孵育2h；
4.3加入500μL洗涤缓冲液洗涤，14000g离心4min，去上清液；
4.4加入200μL洗涤缓冲液洗涤，涡旋混匀；
5.待检样品检测
如图2为标准品中小鼠KLH特异性IgG抗体的浓度值(Std1-Std8)和通过标准曲线计算得出的待检样品血清中抗体的浓度值(Test1)结果。
FSC/SSC散点图圈出检测微球门，获取3500个微球，检测FITC通道的荧光强度MFI值，如图3所示，左边为待检样品的KLH多克隆抗体微球流式分析仪FSC/SSC图；中间和右边为调节FSC和SSC得到的待检样品荧光微球流式细胞分析仪结果图。
对比例2
一种小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒，与实施例2的区别在于，不含有样本前处理lgM捕获微球。
该试剂盒的具体检测操作步骤与实施例2的区别在于不包含步骤3.待检样品前处理。
如图4所示对实施例2待测样品经过前处理的MFI值和对比例2待测样品未经过前处理的MFI值，从图中可以看出，实施例2的MFI值明显高于对比例2的MFI值，这说明待测样品经过前处理去除了样品中KLH特异性IgM抗体，从而减少了对检测结果的干扰。
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种钥孔血蓝蛋白KLH的包被工艺，其特征在于，包括如下步骤：1)将KLH蛋白溶于含有0.1％二硫苏糖醇(DTT)的碳酸盐缓冲液中，得到包被蛋白液；2)利用活化剂对微球表面的羧基进行活化得到活化微球；3)将活化后得到活化微球加入到步骤1)的包被蛋白液中进行偶联，反应完成后进行封闭，即得KLH特异性IgG抗体捕获微球。
2.根据权利要求1所述的一种钥孔血蓝蛋白KLH的包被工艺，其特征在于，步骤1)中包被蛋白液的成分配比为：KLH蛋白的浓度为80-160g/L，二硫苏糖醇的浓度为1g/L，碳酸盐缓冲液pH值为9.6。
3.根据权利要求1所述的一种钥孔血蓝蛋白KLH的包被工艺，其特征在于，步骤2)中活化剂为EDC和S-NHS。
4.根据权利要求1所述的一种钥孔血蓝蛋白KLH的包被工艺，其特征在于，步骤3)中活化微球数量与包被液体积比为500个/μL。
5.根据权利要求1所述的一种钥孔血蓝蛋白KLH的包被工艺，其特征在于，步骤3)中偶联反应时间为2h，封闭剂为2％BSA溶液。
6.一种小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-5任一工艺制得的KLH特异性IgG抗体捕获微球、样本前处理lgM捕获微球、标准品、FITC标记检测荧光抗体、样品稀释液、洗涤缓冲液。
7.根据权利要求6所述的一种小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒，其特征在于，样本前处理lgM捕获微球的制备方法为：将活化后的微球与抗小鼠IgM特异性抗体进行偶联，反应完成后进行封闭，即得IgM抗体捕获微球。
8.根据权利要求7所述的一种小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒，其特征在于，所述抗小鼠IgM特异性抗体为抗小鼠IgMμ链特异性IgG抗体。
9.根据权利要求6所述的一种小鼠KLH特异性IgG抗体定量检测试剂盒，其特征在于，试剂盒的使用操作方法如下：1)取样本前处理lgM捕获微球加入到待测血清样本进行前处理，去除待测样本血清中KLH特异性IgM抗体；2)前处理完成后将KLH特异性IgG抗体捕获微球加入样本血清中；3)加入FITC标记检测荧光抗体后，检测FITC通道的荧光强度MFI值。
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Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110111417A1 (en) * 2008-05-14 2011-05-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and kits for monitoring the effects of immunomodulators on adaptive immunity
CN102553297A (zh) * 2011-12-31 2012-07-11 南宁市蓝光生物技术有限公司 微型高效克伦特罗免疫亲和层析柱制备及应用
CN102621296A (zh) * 2012-01-06 2012-08-01 天津医科大学 一种带有间隔臂的羧化聚苯乙烯微球上偶联蛋白质的方法
CN105764921A (zh) * 2013-09-17 2016-07-13 台湾浩鼎生技股份有限公司 用于诱导免疫反应的糖疫苗组合物及其治疗癌症的用途
CN105988000A (zh) * 2015-03-02 2016-10-05 上海高尼企业管理服务有限公司 一种测定甘胆酸浓度的试剂盒及方法
CN106199000A (zh) * 2016-07-07 2016-12-07 四川新健康成生物股份有限公司 抗体的包被工艺以及该工艺制成的肌红蛋白测定试剂盒
CN106645764A (zh) * 2016-12-26 2017-05-10 北京勤邦生物技术有限公司 检测地西泮的酶联免疫试剂盒及其应用
US20180209961A1 (en) * 2012-06-29 2018-07-26 Celgene Corporation Methods for determining drug efficacy using cereblon-associated proteins
CN110221058A (zh) * 2019-05-31 2019-09-10 海南医学院 一种小鼠tdar实验定量分析检测试剂盒及检测方法
CN112595847A (zh) * 2020-12-31 2021-04-02 杭州福德敏生物技术有限公司 一种虾免疫荧光检测试纸条及应用

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110111417A1 (en) * 2008-05-14 2011-05-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and kits for monitoring the effects of immunomodulators on adaptive immunity
CN102553297A (zh) * 2011-12-31 2012-07-11 南宁市蓝光生物技术有限公司 微型高效克伦特罗免疫亲和层析柱制备及应用
CN102621296A (zh) * 2012-01-06 2012-08-01 天津医科大学 一种带有间隔臂的羧化聚苯乙烯微球上偶联蛋白质的方法
US20180209961A1 (en) * 2012-06-29 2018-07-26 Celgene Corporation Methods for determining drug efficacy using cereblon-associated proteins
CN105764921A (zh) * 2013-09-17 2016-07-13 台湾浩鼎生技股份有限公司 用于诱导免疫反应的糖疫苗组合物及其治疗癌症的用途
CN105988000A (zh) * 2015-03-02 2016-10-05 上海高尼企业管理服务有限公司 一种测定甘胆酸浓度的试剂盒及方法
CN106199000A (zh) * 2016-07-07 2016-12-07 四川新健康成生物股份有限公司 抗体的包被工艺以及该工艺制成的肌红蛋白测定试剂盒
CN106645764A (zh) * 2016-12-26 2017-05-10 北京勤邦生物技术有限公司 检测地西泮的酶联免疫试剂盒及其应用
CN110221058A (zh) * 2019-05-31 2019-09-10 海南医学院 一种小鼠tdar实验定量分析检测试剂盒及检测方法
CN112595847A (zh) * 2020-12-31 2021-04-02 杭州福德敏生物技术有限公司 一种虾免疫荧光检测试纸条及应用

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
G.P. ANDERSON 等: ""TNT detection using llama antibodies and a two-step competitive fluid array immunoassay"", 《JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS》 *
H. LEBREC 等: ""T cell dependent antibody responses in the rat Forms and sources of keyhole limpet hemocyanin matter"", 《JOURNAL OF IMMUNOTOXICOLOGY》 *
王丽娟 等: "《动物微生物检测》", 31 July 2014, 中国农业大学出版社 *
王金亭: "《生物化学》", 30 December 2017, 北京理工大学出版社 *
耿耀宗 等: "《合成聚合物乳液制造与应用技术》", 30 June 1999, 中国轻工业出版社 *
郑红花 等: "《医学生物化学实验教程》", 31 August 2018, 厦门大学出版社 *
马文丽: "《分子生物学实验手册》", 30 June 2011, 人民军医出版社 *

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