CN108303553B - 基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法及试剂盒和应用 - Google Patents

基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法及试剂盒和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法及试剂盒和应用，检测方法灵敏、准确、快速、特异性强，还能搭配全自动化学发光免疫分析仪实现大批量样本的全自动检测。所述试剂盒组成成分包括：磁微球、MPA抗体工作液、吖啶酯标记物工作液、MPA标准品、底物液1、底物液2、浓缩提取液和浓缩洗涤液。本发明试剂盒的分析灵敏度为：0.057ppb；IC50为0.48ppb；精密性：分析内的变异系数（CV%）不大于8%，分析间的变异系数（CV%）不大于8%；准确度通过回收率实验进行测定，回收率为85%～120%之间；线性相关系数|r|不小于0.9800。

Description

基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法及试剂 盒和应用
技术领域
本发明涉及诊断检测技术领域，更具体地，涉及一种基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法及试剂盒和应用。
背景技术
醋酸甲羟孕酮(Medroxyprogesterone acetate，简称MPA)，又称为醋酸甲孕酮、安宫黄体酮，为甾酮类化合物，化学名称6α-甲基-17α-羟基孕甾-4-烯-3，20-二酮醋酸酯，为白色结晶性粉末，甾氯仿中极易溶解，在丙酮中溶解，在醋酸乙酯中略溶，在无水乙醇中微溶，在水中不溶。
醋酸甲羟孕酮是人工合成的孕激素，无雌激素活性，作用类似于黄体酮。在人类药物应用中，醋酸甲羟孕酮作为避孕药和激素替代治疗用药；在畜牧业中，曾被用作动物生长促进剂，以促进动物生长，提高饲料转化率，节省成本，提高经济效益。但醋酸甲羟孕酮易在动物体内残留，人食用有醋酸甲羟孕酮等激素的食品后，可扰乱人体内分泌、生长发育、免疫系统、生殖系统等方面的正常功能，还可能致癌、致畸，因此欧盟及我国都明文禁止在饲料中添加醋酸甲羟孕酮等激素类物质。
醋酸甲羟孕酮一般用量小，代谢的速度快，导致了其在动物体内残留的水平较低，故需要有高灵敏度的方法测定其残留量。目前现有的醋酸甲羟孕酮检测方法，根据检测原理主要分为色谱技术、免疫分析技术，以及紫外分光光度计法，其中色谱技术主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)和液相色谱-质谱法(LC-MS)等；免疫分析技术主要有酶联免疫吸附分析法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)等，相关的技术文献，国内外都有不少的报道，但是广大的科研工作者一直致力于研究更简便、灵敏度更高、准确性更好、自动化程度更高的检测技术，动物体内残留醋酸甲羟孕酮的监控检测也对检测方法提出了更高的准确、快速、灵敏要求。
发明内容
本发明要解决的技术问题是针对现有醋酸甲羟孕酮的检测技术不足，尤其是样品中低含量醋酸甲羟孕酮残留的检测技术不足，提供一种基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法。
本发明另一要解决的技术问题是提供实现所述方法的试剂盒。
本发明还一要解决的技术问题是提供所述试剂盒的应用。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
提供一种基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法，是在磁微球上包被有羊抗鼠多克隆抗体，依次加入MPA单克隆抗体工作液、样品或标准品及吖啶酯标记MPA抗原后，样品或标准品中的MPA与吖啶酯标记的MPA抗原在液相环境中竞争结合到MPA单克隆抗体上，同时MPA单克隆抗体被分散在液相中磁微球吸附下来，形成了磁微球-MPA抗体-MPA或磁微球-MPA抗体-MPA抗原-吖啶酯的免疫复合物，经底物液1和底物液2的酸碱化学反应，即可测量化学发光反应的相对光单位(RLU/s，以下简称RLU值)；样品或标准品中MPA的含量和光学系统所测量出的相对光单位(RLU/s)成反比关系，通过标准曲线拟合，测定样品中MPA的残留量；
其中，磁微球上包被羊抗鼠多克隆抗体的方法是取清洗好的磁微球，加入BindingBuffer后混匀，然后加入Coupling Reagent溶液旋转活化反应，再加入经过BindingBuffer超滤纯化的羊抗鼠多克隆抗体进行旋转反应，反应后用洗涤液清洗磁微球即得；
底物液1为0.1％～1％(w/v)过氧化氢，0.02％Tween-20，0.05％TritonX-100；底物液2为pH值为9～12的氢氧化钠。
本发明同时提供一种磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的试剂盒，包括：
(1)磁微球：1瓶，磁微球浓度为0.2～2.0mg/mL，5～10mL/100测试，羊抗鼠多克隆抗体包被的磁性微球，储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Tris-HCl缓冲液中，pH值范围7.0～7.8之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin 300；
(2)MPA抗体工作液：1瓶，5～10mL/100测试，MPA单克隆抗体，以10～1000ng/mL的浓度储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Tris-HCl缓冲液中，pH值范围7.0～7.8之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin 300；
(3)吖啶酯标记物工作液：1瓶，5～10mL/100测试，吖啶酯盐标记的MPA-BSA偶联物，以0.05～5μg/mL的浓度储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Mopso缓冲液中，pH值范围6.0～7.4之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin300；
(4)MPA标准品：标准品1：0ppb；标准品2：0.1ppb；标准品3：1.25ppb；标准品4：8.0ppb；标准品5：30ppb；标准品6：120ppb；
(5)底物液1：0.1％～1％(w/v)过氧化氢，0.02％Tween-20，0.05％TritonX-100；
(6)底物液2：pH值为9～12的氢氧化钠；
(7)浓缩提取液：为含有0.05～0.25％吐温20、1～5％BSA、0.2～0.5mol/L的磷酸盐缓冲液，pH值范围7.0～7.8之间，防腐剂：0.02％～0.2％ProClin 300；
(8)浓缩洗涤液：为含有0.5～1.5％吐温20、0.02％～0.2％ProClin 300、0.2～0.5mol/L的磷酸盐缓冲液，pH值范围7.0～7.8之间。
本发明还提供所述试剂盒的应用，应用于检测样品中醋酸甲羟孕酮含量，包括如下操作步骤：
S1.样本前处理：样品中加入乙腈和氯化钠，震荡，离心处理，移取上清液于50～60℃水浴氮气吹干，加入样本提取液，涡旋后备用；
S2.用试剂盒检测：取步骤S1处理后的样品，依次加入所述试剂盒中的磁微球、标准品或样品溶液、抗体工作液及吖啶酯标记物工作液，置于37℃电热恒温箱中，孵育，孵育结束后，清洗磁微粒，吸干洗液，加入底物液1和底物液2，并测值；
S3.分析检测结果：根据MPA标准品的浓度及测得的RLU值，以Log-Logit的数学模型绘制MPA标准曲线，并根据标准曲线计算样品中MPA的含量。
所述样本为动物肌肉组织包括鸡肉、鱼肉等等。
更具体地，操作方法如下：
步骤S1所述样本前处理是称取2.0±0.5g样品至50mL的聚苯乙烯离心管中，加入5mL乙腈，再加入0.5g氯化钠，用振荡器震荡5分钟，以4500rpm的速度室温离心5分钟。移取3mL上清液至10mL洁净干燥的玻璃管中，于50～60℃水浴氮气吹干，加入1mL样本提取液，用涡旋振荡器涡旋1分钟，取50μL用于分析。
步骤S2所述用试剂盒检测是取1.5mL的聚苯乙烯离心管，依次加入50μL磁微球、50μLMPA标准品或样品溶液、50μLMPA抗体工作液及100μL吖啶酯标记物工作液，置于37℃电热恒温箱中，孵育25分钟。孵育结束后，将离心管置于磁力架中，清洗磁微粒3次，最后一次吸干洗液，置于管式化学发光仪中，由仪器加入底物液1和底物液2，并测值。
本发明试剂盒还可应用于结合使用现有的开放式的全自动管式化学发光免疫分析仪进行检测，具体检测程序可以根据上述的检测方法进行设置，即可由仪器自动完成实验操作，并绘制标准曲线，直接得到样品中MPA的含量。整个检测过程仅需30分钟即可完成。
本发明的有益效果如下：
本发明经过对检测原理和试剂的针对性的优化，首次提供一种针对残留醋酸甲羟孕酮的磁微球化学发光法测定方法，科学利用磁微球、吖啶酯标记物的化学发光免疫分析法，可手工进行实验操作，也可搭配开放式的全自动管式化学发光免疫分析仪进行实验操作。本发明试剂盒的分析灵敏度为：0.057ppb；IC50为0.48ppb；精密性：分析内的变异系数(CV％)不大于8％，分析间的变异系数(CV％)不大于8％；准确度通过回收率实验进行测定，回收率为85％～120％之间；线性相关系数|r|不小于0.9800。简便、灵敏度更高、准确性更好，适用于自动化操作，可在醋酸甲羟孕酮的大规模检测中发挥重要的作用。
附图说明
图1本发明MPA CLIA试剂盒的检测原理图。
图2磁微球包被羊抗鼠多克隆抗体的反应原理图。
图3吖啶酯标记物的发光原理图。
图4 MPA CLIA试剂盒的剂量-反应曲线图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例进一步说明本发明。除非特别说明，本发明采用的试剂和和设备为本领域常规使用的试剂和设备。
实施例1羊抗鼠多克隆抗体包被磁微球的制备
取10mg磁微球于2.0mL的聚苯乙烯离心管中，并置于磁力架中，用Binding Buffer(0.1mol/L的MES缓冲液，pH5.0)将磁微球清洗3次，最后一次清洗结束后，加入1.0mLBinding Buffer，并用涡旋振荡器将磁微球混匀。然后加入100μL Coupling Reagent(10mg/mL的EDC溶液，溶于Binding Buffer中)，置于旋转混匀仪中，在室温(20-26℃，下同)条件下旋转反应30分钟。活化反应结束，往离心管中加入100μg经过Binding Buffer超滤纯化的羊抗鼠多克隆抗体(1mg/mL)，再次置于旋转混匀仪中，室温旋转反应3小时。反应结束，用洗涤液清洗磁微球三次，即可。包被好羊抗鼠多克隆抗体的磁微球，用50mmol/L，pH7.2含有0.5％BSA稳定剂的Tris-HCl缓冲液至0.5mg/mL，于2～8℃冰箱中储存，备用。具体的化学反应过程见图2所示。
实施例2 MPA抗体工作液的制备
配制50mmol/L，pH7.2的Tris-HCl缓冲液中，再往其中加入0.5％的BSA，及0.05％(v/v)的Proclin 300，即可得到MPA抗体稀释液。再将MPA抗体按200ng/mL的浓度加入MPA抗体稀释液中，即为MPA抗体工作液。
如配制100mL MPA抗体工作液，则要先配制100mL MPA抗体稀释液，再加入20μgMPA单克隆抗体，混合均匀，即可，于2～8℃冰箱中储存，备用。
实施例3吖啶酯标记物工作液的制备
通过超滤纯化，将1mg MPA-BSA偶联物的储存缓冲液置换成0.1mol/L，pH7.4的PBS缓冲液，并控制MPA-BSA偶联物的体积为250μL，再加入4μL吖啶酯溶液(2mg吖啶酯溶于200μL DMSO中)，于室温中避光振荡反应2小时。反应结束，将吖啶酯标记物转移至透析膜中，使用0.1mol/L，pH6.3的PBS缓冲液中，于4℃冰箱中透析24小时，期间更换透析液6次，收集透析膜里的标记抗原，并用BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度，最后用50mmol/L，pH6.8含有1.0％BSA稳定剂的Mopso缓冲液稀释至0.6μg/mL，混合均匀，即可，于2～8℃冰箱中储存，备用。
实施例4试剂盒的组装
本实施例提供一种磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的试剂盒，包括：
(1)磁微球：1瓶，磁微球浓度为0.2～2.0mg/mL，5～10mL/100测试，羊抗鼠多克隆抗体包被的磁性微球(包被方法参照实施例1)，储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Tris-HCl缓冲液中，pH值范围7.0～7.8之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin 300；
(2)MPA抗体工作液：1瓶，5～10mL/100测试，MPA单克隆抗体(制备方法参照实施例2)，以10～1000ng/mL的浓度储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Tris-HCl缓冲液中，pH值范围7.0～7.8之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin 300；
(3)吖啶酯标记物工作液(制备方法参照实施例3)：1瓶，5～10mL/100测试，吖啶酯盐标记的MPA-BSA偶联物，以0.05～5μg/mL的浓度储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Mopso缓冲液中，pH值范围6.0～7.4之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin 300；
(4)MPA标准品：标准品1：0ppb；标准品2：0.1ppb；标准品3：1.25ppb；标准品4：8.0ppb；标准品5：30ppb；标准品6：120ppb；
(5)底物液1：0.1％～1％(w/v)过氧化氢，0.02％Tween-20，0.05％TritonX-100；
(6)底物液2：pH值为9～12的氢氧化钠；
(7)浓缩提取液：为含有0.05～0.25％吐温20、1～5％BSA、0.2～0.5mol/L的磷酸盐缓冲液，pH值范围7.0～7.8之间，防腐剂：0.02％～0.2％ProClin 300；
(8)浓缩洗涤液：为含有0.5～1.5％吐温20、0.02％～0.2％ProClin 300、0.2～0.5mol/L的磷酸盐缓冲液，pH值范围7.0～7.8之间。
实施例5试剂盒的使用方法
S1.样本前处理：称取2.0±0.5g样品至50mL的聚苯乙烯离心管中，加入5mL乙腈，再加入0.5g氯化钠，用振荡器震荡5分钟，以4500rpm的速度室温离心5分钟。移取3mL上清液至10mL洁净干燥的玻璃管中，于50-60℃水浴氮气吹干，加入1mL样本提取液，用涡旋振荡器涡旋1分钟，取50μL用于分析。
S2.用试剂盒检测：取1.5mL的聚苯乙烯离心管，依次加入50μL磁微球、50μLMPA标准品或样品溶液、50μLMPA抗体工作液及100μL吖啶酯标记物工作液，置于37℃电热恒温箱中，孵育25分钟。孵育结束后，将离心管置于磁力架中，清洗磁微粒3次，最后一次吸干洗液，置于管式化学发光仪中，由仪器加入底物液1和底物液2，并测值。具体发光原理详见附图3。
S3.分析检测结果：根据MPA标准品的浓度及测得的RLU值，选择Log-Logit的数学模型绘制标准曲线，即将MPA标准品浓度的对数作为X轴，此时X＝Log(浓度)，而Y轴则定义为Y＝logit(B/Bmax)＝Ln((B/Bmax)/(1-B/Bmax))，以此绘制MPA CLIA试剂盒的标准曲线，并计算线性相关系数，如图4所示。最后根据标准曲线即可计算样品中MPA的含量。
标准曲线方程为：y＝-1.8644x-0.5820，R2＝0.9990。
实施例6试剂盒的检测限和半抑制率
检测限(Limit of Detection，LOD)，即试剂盒的分析灵敏度。通过MPA标准曲线插入法计算MPA CLIA试剂盒的LOD，即根据平行测定六次或以上标准品1的RLU值，计算其均值和标准差，将标准品1的RLU值均值减去3倍标准差得到的RLU值，代入标准曲线的方程，通过计算所得到的浓度值，即为本试剂的LOD。
半抑制率(IC50)，即在结合率为50％时，所对应的MPA浓度。根据平行测定6次或以上标准品1的RLU值，其均值除以2，代入标准曲线的方程，计算所得到的浓度值，即为MPACLIA试剂盒的IC50。
根据图4所示的MPA标准曲线可知，MPA CLIA试剂盒的LOD为0.057ng/mL，IC50为0.487ng/mL。
实施例7试剂盒的精密性评价
精密性研究包括分析内、分析间精密性。使用MPA CLIA试剂盒，检测0.5ng/mL、5ng/mL、50ng/mL MPA标准溶液的浓度，每次实验平行测定各标准溶液10次，重复3次实验，评价MPA CLIA试剂盒分析内、分析间的精密性。
如表1所示，MPA CLIA试剂盒的分析内的变异系数(CV％)为：4.23％～6.22％；分析间的异系数(CV％)为：4.37％～5.50％，证明本发明MPA CLIA试剂盒的精密性良好。
表1 MPA CLIA试剂盒的精密性实验结果
实施例8试剂盒的准确性评价
MPA CLIA试剂盒的准确性，通过回收率实验进行评价。取3份2g空白的鸡肉样品，分别加入0.8ng/mL、7.5ng/mL、40ng/mL的醋酸甲羟孕酮，再进行样品前处理，取提取液进行测定，每份样品重复测定3次，根据标准曲线计算出各样品的浓度值。
由表2可知，MPA CLIA试剂盒的回收率为93.87％～108.75％，表明本发明试剂盒的准确性良好。
表2 MPA CLIA试剂盒的回收率实验结果
实施例9试剂盒的交叉反应率评价
为评价MPA CLIA试剂盒的交叉反应率，选择与MPA有类似结构及类似功能的药物进行交叉反应率实验，并根据公式：交叉反应率(％)＝IC50(MPA)/IC50(MPA结构类似物)×100％，计算交叉反应率。
由表3可知，MPA CLIA试剂盒与孕酮、甲地孕酮、己烯雌酚、氢化可的松、孔雀石绿、恩诺沙星、炔诺酮的交叉反应率实验中，除了与孕酮、甲地孕酮有较低的交叉反应(<6％)以外，与其他待测的药物均没有交叉反应(<0.1％)，表明本发明MPA CLIA试剂盒的特异性较好。
表3 MPA CLIA试剂盒的交叉反应性实验结果

Claims (6)

1.一种基于磁微球化学发光法测定醋酸甲羟孕酮含量的方法，其特征在于，
是在磁微球上包被有羊抗鼠多克隆抗体，依次加入MPA单克隆抗体工作液、样品或标准品及吖啶酯标记MPA抗原后，样品或标准品中的MPA与吖啶酯标记的MPA抗原在液相环境中竞争结合到MPA单克隆抗体上，同时MPA单克隆抗体被分散在液相中磁微球吸附下来，形成了磁微球-MPA抗体-MPA或磁微球-MPA抗体-MPA抗原-吖啶酯的免疫复合物，经底物液1和底物液2的酸碱化学反应，即可测量化学发光反应的相对光单位(RLU/s，以下简称RLU值)；样品或标准品中MPA的含量和光学系统所测量出的相对光单位(RLU/s)成反比关系，通过标准曲线拟合，测定样品中MPA的残留量；
其中，磁微球上包被羊抗鼠多克隆抗体的方法是取清洗好的磁微球，加入BindingBuffer后混匀，然后加入CouplingReagent溶液旋转活化反应，再加入经过BindingBuffer超滤纯化的羊抗鼠多克隆抗体进行旋转反应，反应后用洗涤液清洗磁微球即得；
底物液1为0.1％～1％(w/v)过氧化氢，0.02％Tween-20，0.05％TritonX-100；底物液2为pH值为9～12的氢氧化钠；
所述磁微球的浓度为0.2～2.0mg/mL；MPA单克隆抗体的浓度为10～1000ng/mL；
所述磁微球：1瓶，磁微球浓度为0.2～2.0mg/mL，5～10mL/100测试，羊抗鼠多克隆抗体包被的磁性微球，储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Tris-HCl缓冲液中，pH值范围7.0～7.8之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin300；
MPA单克隆抗体工作液：1瓶，5～10mL/100测试，MPA单克隆抗体，以10～1000ng/mL的浓度储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Tris-HCl缓冲液中，pH值范围7.0～7.8之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin300；
吖啶酯标记物工作液：1瓶，5～10mL/100测试，吖啶酯盐标记的MPA-BSA偶联物，以0.05～5μg/mL的浓度储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Mopso缓冲液中，pH值范围6.0～7.4之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin300；
MPA标准品：标准品1：0ppb；标准品2：0.1ppb；标准品3：1.25ppb；标准品4：8.0ppb；标准品5：30ppb；标准品6：120ppb。
2.一种实现权利要求1所述方法的测定醋酸甲羟孕酮含量的试剂盒，其特征在于，包括：
(1)磁微球：1瓶，磁微球浓度为0.2～2.0mg/mL，5～10mL/100测试，羊抗鼠多克隆抗体包被的磁性微球，储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Tris-HCl缓冲液中，pH值范围7.0～7.8之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin300；
(2)MPA抗体工作液：1瓶，5～10mL/100测试，MPA单克隆抗体，以10～1000ng/mL的浓度储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Tris-HCl缓冲液中，pH值范围7.0～7.8之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin300；
(3)吖啶酯标记物工作液：1瓶，5～10mL/100测试，吖啶酯盐标记的MPA-BSA偶联物，以0.05～5μg/mL的浓度储存于50mmol/L含有0.2％～5％BSA稳定剂的Mopso缓冲液中，pH值范围6.0～7.4之间，防腐剂：0.02％～0.1％ProClin300；
(4)MPA标准品：标准品1：0ppb；标准品2：0.1ppb；标准品3：1.25ppb；标准品4：8.0ppb；标准品5：30ppb；标准品6：120ppb；
(5)底物液1：0.1％～1％(w/v)过氧化氢，0.02％Tween-20，0.05％TritonX-100；
(6)底物液2：pH值为9～12的氢氧化钠；
(7)浓缩提取液：为含有0.05～0.25％吐温20、1～5％BSA、0.2～0.5mol/L的磷酸盐缓冲液，pH值范围7.0～7.8之间，防腐剂：0.02％～0.2％ProClin300；
(8)浓缩洗涤液：为含有0.5～1.5％吐温20、0.02％～0.2％ProClin300、0.2～0.5mol/L的磷酸盐缓冲液，pH值范围7.0～7.8之间；
应用于检测样品中醋酸甲羟孕酮含量，包括以下操作步骤：
S1.样本前处理：样品中加入乙腈和氯化钠，震荡，离心处理，移取上清液于50～60℃水浴氮气吹干，加入样本提取液，涡旋后备用；
S2.用试剂盒检测：取步骤S1处理后的样品，依次加入所述试剂盒中的磁微球、标准品或样品溶液、抗体工作液及吖啶酯标记物工作液，置于37℃电热恒温箱中，孵育，孵育结束后，清洗磁微粒，吸干洗液，加入底物液1和底物液2，并测值；
S3.分析检测结果：根据MPA标准品的浓度及测得的RLU值，以Log-Logit的数学模型绘制MPA标准曲线，并根据标准曲线计算样品中MPA的含量。
3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述样本为动物肌肉组织。
4.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，步骤S1所述震荡的时间为5分钟，所述离心是以4500rpm的速度室温离心5分钟；所述涡旋的时间为1分钟。
5.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，步骤S2所述孵育的时间为25分钟；所述清洗磁微粒的次数为3次。
6.根据权利要求2至5任一项所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒结合使用开放式的全自动管式化学发光免疫分析仪进行检测样品中MPA的含量。
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