CN112920983A - 一株具有改善面部敏感性皮肤以及修复皮肤屏障的植物乳杆菌 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株具有改善面部敏感性皮肤以及修复皮肤屏障的植物乳杆菌，属于微生物技术领域以及医药技术领域。本发明提供了一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM1158，此植物乳杆菌CCFM1158能够缓解人细胞屏障损伤，具体体现在：(1)显著提高SDS诱导HaCaT细胞的存活率；(2)显著改善SDS诱导HaCaT细胞造成的屏障损伤；(3)显著促进细胞迁移的能力；(4)能够有效促进天然保湿因子和屏障完整性因子FLG的表达，因此，植物乳杆菌CCFM1158在制备预防或治疗皮肤屏障损伤的产品中，具有巨大的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一株具有改善面部敏感性皮肤以及修复皮肤屏障的植物乳杆菌，属于微生物技术领域以及医药技术领域。
背景技术
人体的皮肤具备排泄、感觉、分泌、代谢、屏障、吸收、免疫、体温调节等多种功能，屏障是其最基础的功能。一旦皮肤屏障功能受损，而各类皮肤病的发生风险会明显增高，做好皮肤屏障功能修复治疗是减少皮肤病发生的重要措施。研究发现，皮肤屏障结构以及功能上的异常联系着不同皮肤病的病理特点，做好皮肤屏障修复治疗是预防细菌入侵的重要方法，也有助于减轻皮肤炎症，减少皮肤病的复发。
敏感性皮肤是对于常规刺激出现刺痛、烧灼、疼痛、瘙痒及麻刺感的一种综合征，可累及全身任何部位，常见于青年女性面部。随着人们对敏感性皮肤认识的提高，护肤品以及医疗美容技术的发展，该综合征受到临床医生越来越多的关注。虽然敏感性皮肤的症状多是一过性，且不一定伴有局部皮损，但反复出现的刺痛、烧灼及瘙痒等不适症状常常显著影响患者的生活质量。
表皮角质层由角质细胞和细胞问基质组成，在皮肤屏障功能的形成以及发挥中起着至关重要的作用。皮肤与化学物质的接触机会日益增多，化学物质所引起的皮肤毒性El趋明显。
当前对于皮肤病的治疗，除了用药、手术，皮肤屏障修复治疗成为新的研究方向，越来越多学者尝试从皮肤屏障病理、分子层面进行皮肤病出现、进展的研究。虽然关于治疗各类皮肤病的药物研究不少，但是由于药物的作用机制复杂会带来依赖性和副作用。
因此，仍需要开发一种天然无刺激的产品来增强皮肤屏障功能、提高皮肤的防御机能、减少敏感性皮肤疾患的发生、促进皮肤外用药物的疗效和护肤用品的功效。
发明内容
本发明的技术方案如下：
为解决上述问题，本发明提供了一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM1158，所述植物乳杆菌于2021年2月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61498，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
所述植物乳杆菌来源于泡菜样本，该菌株经测序分析，其16S rDNA序列如SEQ IDNO.1所示，将测序得到的序列在GeneBank中进行核酸序列比对，结果显示菌株为植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌CCFM1158。
所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的微生物形态学特征为：呈轻微不规则、圆形末端的弯曲杆菌，非运动性、不产芽孢。
本发明还提供了上述植物乳杆菌的细胞、发酵上清液或胞内物在制备预防和/或治疗皮肤屏障的产品中的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述胞内物为上述植物乳杆菌破碎后的上清液。
在本发明的一种实施方式中，所述胞内物的制备方法为将上述植物乳杆菌的菌液离心收集菌泥，添加PBS溶液溶解，加液氮研磨破碎，收集菌泥悬液，添加PBS溶液溶解，超声破碎，离心收集上清液；0.22μm一次性滤器过滤除菌。
本发明还提供了一种产品，其特征在于，所述产品含有上述植物乳杆菌的细胞、发酵上清液或胞内物中的一种或多种。
在本发明的一种实施方式中，所述胞内物为上述植物乳杆菌破碎后的上清液。
在本发明的一种实施方式中，所述胞内物的制备方法为将上述植物乳杆菌的菌液离心收集菌泥，添加PBS溶液溶解，加液氮研磨破碎，收集菌泥悬液，添加PBS溶液溶解，超声破碎，离心收集上清液；0.22μm一次性滤器过滤除菌。
在本发明的一种实施方式中，所述产品包含日化用品或药品。
在本发明的一种实施方式中，所述日化用品为护肤品或洗护用品。
在本发明的一种实施方式中，所述日化用品含有上述植物乳杆菌的细胞、发酵上清液或胞内物中的一种或多种。
在本发明的一种实施方式中，所述附加剂包含保湿剂、润肤剂和/或乳化剂。
本发明的一种实施方式中，所述保湿剂包含甘油、丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、山梨醇和/或乙醇。
本发明的一种实施方式中，所述润肤剂包含辛酸/癸酸甘油三酯、肉豆蔻酸异丙酯、异壬酸异壬酯、棕榈酸乙基己酯和/或乙二醇二硬脂酸酯。
本发明的一种实施方式中，所述乳化剂包含椰油基葡糖苷、聚甘油-2二聚羟基硬脂酸酯和/或聚山梨醇酯-60。
在本发明的一种实施方式中，所述药品为涂抹型药品。
在本发明的一种实施方式中，所述涂抹型药品含有上述植物乳杆菌的细胞、发酵上清液或胞内物中的一种或多种。
在本发明的一种实施方式中，所述涂抹型药品中还含有附加剂。
在本发明的一种实施方式中，所述涂抹型药品的剂型为霜、乳液、爽肤水及膏。
在本发明的一种实施方式中，所述附加剂包含软膏剂、防腐剂和/或抗氧化剂。
在本发明的一种实施方式中，所述软膏剂包含单甘脂、硬脂酸、十八醇、丙三醇、白凡士林和/或尼帕金乙酯。
在本发明的一种实施方式中，所述防腐剂包含苯甲酸和/或乙醇。
在本发明的一种实施方式中，所述抗氧化剂为亚硫酸钠。
在本发明的一种实施方式中，所述涂抹型药品的剂型为膏剂、膜剂或凝胶剂。
在本发明的一种实施方式中，所述植物乳杆菌的制备方法为：将植物乳杆菌接种于添加了碳源、氮源、无机盐和微量元素的增殖培养基中进行发酵，得到植物乳杆菌发酵液；发酵后以8000-10000g，15～20min条件离心，得到所需的植物乳杆菌。
在本发明的一种实施方式中，所述植物乳杆菌发酵上清液的制备方法为：将植物乳杆菌接种于增殖培养基中进行发酵生产，活菌数达到4～6×109cfu/mL，后以8000-10000g，15～20min条件离心，通过0.22-0.45μm滤膜过滤除菌后，得到所需的植物乳杆菌发酵上清液。
在本发明的一种实施方式中，所述植物乳杆菌胞内物的制备方法为：由上述方法制备的植物乳杆菌，以8000-10000g，15～20min条件离心，添加适量PBS后，利用液氮反复研磨直至形成粉末状，添加适量PBS后，以100～500W，5～15min超声，再以8000-10000g，15～20min条件离心，通过0.22-0.45μm滤膜过滤除菌后，得到所需的植物乳杆菌胞内物。
在本发明的一种实施方式中，所述增殖培养基中碳源为10～40g/L葡萄糖，氮源为5～25g/L酵母浸粉、胰蛋白胨或大豆蛋白胨，无机盐为0.1～0.5g/L硫酸镁，0.1～0.5g/L硫酸锰，微量元素为1～5g/L无水乙酸钠，1～5g/L柠檬酸氢二铵，1～5g/L磷酸二氢钾和吐温80 0.5～1.5mL/L。
有益效果：
本发明提供了一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM1158，此植物乳杆菌CCFM1158能够缓解缓解皮肤细胞屏障损伤，具体体现在：
(1)显著提高SDS诱导HaCaT细胞的存活率；
(2)显著改善SDS诱导HaCaT细胞造成的屏障损伤；
(3)显著促进细胞迁移的能力；
(4)能够有效促进天然保湿因子和屏障完整性因子FLG的表达；
可见，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)在制备预防或治疗皮肤屏障损伤的产品中，具有巨大的应用前景。
生物材料保藏
一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM1158，分类学命名为Lactobacillus plantarum，已于2021年2月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61498，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1：不同组别改善SDS诱导的HaCaT细胞存活率的效果对比。
图2：不同组别对HaCaT细胞形态影响对比。
图3：不同组别促进细胞迁移能力的效果对比。
图4：不同组别FLG的基因表达量。
具体实施方式
皮肤覆盖于人体表面，是人体最大的器官之一。皮肤由表皮和真皮两部分组成，其中表皮的关键功能是在生物体和外界之间形成屏障，对人体有重要的保护作用。皮肤角质形成细胞(keratinocytes,KCs)是表皮的主要组成部分，而人永生化皮质形成细胞(HaCaT细胞)属于成人表皮细胞自发转化而来的细胞系，它与人体正常的角质形成细胞有相同的增殖、分化特性和遗传稳定性，常被用于生物医学领域，作为体外研究的细胞系，比如皮肤修复愈合、防晒和抗衰老等研究。并且，角质形成细胞是研究皮肤氧化损伤重要组成部分。因此，下述实施例中使用经SDS诱导处理的人永生化皮质形成细胞作为屏障损伤细胞模型进行细胞实验。
下述实例中涉及的人永生化皮质形成细胞(HaCaT细胞)购自中国典型培养物保藏中心；下述实例中涉及的DMEM培养基购自赛默飞世尔(苏州)仪器有限公司；下述实例中涉及的胎牛血清(FBS)、青霉素、链霉素和胰蛋白酶购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司；下述实例中涉及的MTT购自北京索莱宝科技有限公司；下述实例中涉及的RNA试剂盒(货号：DP419)购自上海天根生物技术有限公司；PCR试剂盒(货号：q711-02)购自诺唯赞生物技术有限公司。
下述实施例中涉及的培养基如下：
MRS液体培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H20 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温80：1ml/L，pH 7.0。
乳杆菌1号发酵培养基配方：葡萄糖：20g；酵母浸粉：10g；Na2HPO4：3.5g；MgSO4-7H2O：0.25g；MnSO4-H2O：0.1g；柠檬酸氢二铵：2g；KH2PO4：3.5g；吐温80：1mL；pH调至6.8。
乳杆菌2号发酵培养基配方：葡萄糖：20g；胰酪蛋白胨(胰蛋白胨)：15g；Na2HPO4：3g；MgSO4-7H2O：0.25g；MnSO4-H2O：0.1g；柠檬酸氢二铵：2g；KH2PO4：3g；吐温80：1mL；pH调至6.8。
下述实施例中涉及的植物乳杆菌培养发酵液和胞内物的制备方法如下：
1.菌株的活化
所有容器和工具灭菌。取菌种保藏管震荡均匀后用无菌接种环蘸取少量菌液在MRS固体培养基划线纯化。静置一段时间后，将平板倒置于37℃恒温厌氧培养箱中48h。培养结束后挑取单菌落接种于5mL的MRS液体培养基中，静置于37℃恒温厌氧培养箱中培养12～18h。即得菌株的种子液。连续活化两代，接种量为5％。将上述种子液以5％的接种量接种到MRS液体培养基中，置于37℃恒温厌氧培养箱中培养12～18h。重复操作1次。
MRS培养基可以替换为乳杆菌1号发酵培养基或乳杆菌2号发酵培养基，培养条件与方法相同。
2.外用益生菌样品的制备
(1)益生菌发酵上清液：取培养好的益生菌8000r离心15min取上清；调节pH至7.2～7.4；0.22μm一次性滤器过滤除菌，分装后于-20℃冰箱保存。
(2)益生菌胞内物：取10mL培养好的益生菌离心收集菌泥，添加1mL PBS溶液溶解；加液氮研磨破碎，收集菌泥悬液；添加1mL PBS溶液溶解，超声破碎；8000r离心10min收集上清液；0.22μm一次性滤器过滤除菌，分装后于-20℃冰箱保存(0.1g湿菌泥得到1mL的胞内上清液)。
完全培养基：5％胎牛血清(FBS)、100U/mL青霉素、100mg/mL链霉素、95％DMEM培养基。
实施例1：植物乳杆菌的筛选与鉴定
具体步骤如下：
(一)植物乳杆菌的分离筛选
(l)收集产自不同地区的泡菜样本，将样品在含有山梨醇MRS培养基中富集12h；
(2)将步骤(1)中富集样品进行梯度稀释后涂布于添加了0.02％嗅甲酚紫的MRS固体平板上，培养24～48h；
(3)选取步骤(2)中MRS平板上变色圈明显的并且符合乳酸菌基本形态的单菌落至MRS固体平板上进行划线纯化，筛选分离出乳酸菌；
(4)挑取步骤(3)中平板上的单菌落培养于液体MRS培养液中培养24h后进行革兰氏染色，选取革兰氏阳性菌进行后续试验。
(二)植物乳杆菌的初步鉴定：溶钙圈测定法
(l)将步骤(一)所筛选得到的乳酸菌在液体山梨醇MRS培养液中培养24h，然后取lmL培养物8000×g离心2min；
(2)用0.05M KH2PO4溶液洗涤两次；
(3)将所得菌泥重悬，划线在山梨醇MRS-0.75％CaCO3的固体培养基上，培养24h；
(4)选取溶钙圈明显，且呈凸面圆形、细密色白、无菌丝体的菌落，革兰氏染色后显微镜观察菌体为杆状即初步判定为乳杆菌。
(三)植物乳杆菌的分子生物学鉴定
(l)单菌基因组抽提
A.将步骤(二)所筛选得到的乳酸菌培养过夜，取培养过夜的菌悬液l mL于1.5mL离心管，10000×g离心2min，弃上清得菌体；
B.用l mL无菌水吹洗菌体后，10000×g离心2min，弃上清得菌体；
C.加入200μL SDS裂解液，80℃水浴30min；
D.加入酚-氯仿溶液200μL于菌体裂解液中，其中酚-氯仿溶液的组成成分及体积比为Tris饱和酚:氯仿:异戊醇＝25:24:1，颠倒混匀后，12000×g离心5～10min，取上清200μL；
E.加入400μL冰乙醇或冰异丙醇于200μL上清中，﹣20℃静置1h，12000×g离心5～10min，弃上清；
F.加入500μL 70％(体积百分数)冰乙醇重悬沉淀，12000×g离心1～3min，弃上清；
G.60℃烘箱烘干，或者自然晾干；
H.50μL ddH2O重溶沉淀以备PCR。
(2)16S rDNA PCR
A.细菌16S rDNA 50μLPCR反应体系：
10×Taq buffer，5μL；dNTP，5μL；27F，0.5μL；1492R，0.5μL；Taq酶，0.5μL；模板，0.5μL；ddH2O，38μL。
B.PCR条件：95℃5min；95℃10s；55℃30s；72℃30s；共30个循环；72℃5min；12℃2min；
(3)制备1％琼脂糖凝胶，之后将PCR产物与10×loading buffer混合，上样量5μL，120V跑30min，然后进行凝胶成像；
(4)将16S rDNA的PCR产物进行测序分析，将得到的序列结果使用BLAST在GeneBank中进行搜索和相似性比对，测序结果鉴定为属于植物乳杆菌菌株。
实施例2：植物乳杆菌对SDS诱导的HaCaT细胞存活的影响
具体步骤如下：
将冻存的HaCaT细胞37℃复温后，1000rpm离心5min，取沉淀；将沉淀用完全培养基洗涤一次后，用完全培养基重悬细胞并计数，得到细胞重悬液；将细胞重悬液接种至10cm培养皿，于37℃、气相含5％(v/v)CO2的细胞培养箱中培养，次日更换完全培养基继续于37℃、气相含5％(v/v)CO2的细胞培养箱中培养。细胞生长至培养皿的70％～80％密度时进行传代。
选取生长状态良好的HaCaT细胞，将HaCaT细胞经浓度为2.5g/L的胰蛋白酶消化后离心、用完全培养基重悬，进行细胞计数，得到细胞重悬液；将细胞重悬液按照5×103个/孔接种于96孔培养板中，每孔100μL；将96孔培养板置于37℃、气相含5％(v/v)CO2的细胞培养箱中培养24h；更换含50μM SDS的完全培养基处理细胞24h。
设置正常对照组、植物乳杆菌MRS培养基发酵液实验组Z1、植物乳杆菌1号发酵培养基发酵液实验组Z2、植物乳杆菌2号发酵培养基发酵液实验组Z3、植物乳杆菌活菌实验组Z4、植物乳杆菌胞内物实验组Z5、短双歧杆菌R1实验组和长双歧杆菌R2实验组。
使用MRS培养基、双歧杆菌1号发酵培养基或双歧杆菌2号发酵培养基培养植物乳杆菌至菌浓达6×109CFU/mL，离心并收集上清，分别记作实验组Z1、Z2和Z3的孵育上清；选取使用MRS培养基培养植物乳杆菌的发酵液离心获得活菌，用完全培养基重悬致菌浓达6×109CFU/mL，记作实验组Z4的孵育上清；选取使用MRS培养基培养植物乳杆菌的发酵液离心获得活菌，制备胞内物，记作实验组Z5的孵育上清；使用MRS培养基分别培养短双歧杆菌实验组R1和长双歧杆菌实验组R2至菌浓达6×109CFU/mL，离心并收集上清，分别记作实验组R1和R2的孵育上清。
将Z1、Z2、Z3、Z4、Z5和R1、R2的孵育上清分别与完全培养基混合(5％:95％)，并各吸取100μL分别培养经SDS处理过的HaCaT细胞24h。对照组添加100μL的完全培养基，每组设置5个复孔，MTT法检测细胞存活率。
由图1可知，以正常对照组增殖存活率为61.80％，而植物乳杆菌显著促进了细胞的增殖(P＜0.001)，植物乳杆菌MRS培养基发酵液实验组Z1细胞存活率为78.92％，植物乳杆菌1号发酵培养基发酵液实验组Z2细胞存活率为70.97％，植物乳杆菌2号发酵培养基发酵液实验组Z3细胞存活率为77.11％，植物乳杆菌活菌实验组Z4细胞存活率为76.95％，植物乳杆菌胞内物实验组Z5细胞存活率为69.48％，且较之短双歧杆菌R1(细胞存活率＝48.11％)、长双歧杆菌(细胞存活率＝47.68％)，增殖效果更好。
可见，相比于短双歧杆菌R1、长双歧杆菌R2，植物乳杆菌更能够显著促进HaCaT细胞生长，缓解细胞屏障损伤。
实施例3：植物乳杆菌对HaCaT细胞形态影响
具体步骤如下：
将冻存的HaCaT细胞37℃复温后，1000rpm离心5min，取沉淀；将沉淀用完全培养基洗涤一次后，用完全培养基重悬细胞并计数，得到细胞重悬液；将细胞重悬液接种至10cm培养皿，于37℃、气相含5％(v/v)CO2的细胞培养箱中培养，次日更换完全培养基继续于37℃、气相含5％(v/v)CO2的细胞培养箱中培养。细胞生长至培养皿的70％～80％密度时进行传代。
选取生长状态良好的HaCaT细胞，将HaCaT细胞经浓度为2.5g/L的胰蛋白酶消化后离心、用DMEM培养基重悬，进行细胞计数，得到细胞重悬液；将细胞重悬液按照5×106个/孔接种于6孔培养板中，每孔1mL，将6孔培养板置于37℃、气相含5％(v/v)CO2的细胞培养箱中培养24h；更换含50μM SDS的完全培养基处理细胞24h。
设置正常对照组、植物乳杆菌实验组Z1、短双歧杆菌R1实验组和长双歧杆菌R2实验组(图2)。使用与实施例2相同浓度的孵育上清，将植物乳杆菌实验组Z1、R1和R2的孵育上清分别与完全培养基混合(5％:95％)，并各吸取2mL分别培养经SDS处理过的HaCaT细胞24h。正常对照组添加2mL的完全培养基。
由图2可知，正常对照组的HaCaT细胞培养24h后，在显微镜下见其贴壁生长旺盛，邻近细胞生长融合成片，胞浆饱满，细胞轮廓清晰，细胞外型呈梭形或多角形，铺展良好；加入植物乳杆菌CCFM1158后的HaCaT细胞，24h后观察可见细胞贴壁生长良好，呈现出梭形或者多边形，可群集生长，核大，核质比高，短双歧杆菌R1实验组和长双歧杆菌R2实验组中的HaCaT细胞悬浮稍有增多，出现胞体缩小，变圆的现象。
因此，从形态学上直接观察细胞生长状态，植物乳杆菌可保持HaCaT细胞的正常形态，细胞数量增多，细胞活性增强，有对HaCaT细胞的生长有促进作用。
实施例4：植物乳杆菌对HaCaT细胞迁移能力的影响
具体步骤如下：
将冻存的HaCaT细胞37℃复温后，1000rpm离心5min，取沉淀；将沉淀用完全培养基洗涤一次后，用完全培养基重悬细胞并计数，得到细胞重悬液；将细胞重悬液接种至10cm培养皿，于37℃、气相含5％(v/v)CO2的细胞培养箱中培养，次日更换完全培养基继续于37℃、气相含5％(v/v)CO2的细胞培养箱中培养。细胞生长至培养皿的70％～80％密度时进行传代。
先将直尺标定在24孔板背面，用marker笔沿直尺划两道横向平行直线，直线间距在0.5～1cm。选取生长状态良好的HaCaT细胞，将HaCaT细胞经浓度为2.5g/L的胰蛋白酶消化后离心、用DMEM培养基重悬，进行细胞计数，得到细胞重悬液；将HaCaT细胞以每孔6×105个细胞接种于24孔板中培养48h致细胞达到100％融合；更换含50μM SDS的完全培养基处理细胞24h后，用直尺标定，沿24孔板底部预先标记的平行线垂直方向，用200μL枪头在培养板底部划痕(使用同一枪头，保持枪头垂直于底面，一次划过)，PBS轻洗后，更换含样品的新鲜无血清培养基，根据marker笔标记的位置在显微下观察拍照(快速完成，减少细胞应激)，设置正常对照组、植物乳杆菌实验组Z1、短双歧杆菌R1实验组和长双歧杆菌R2实验组(图2)。正常对照组添加200μL的完全培养基，实验组使用与实施例2相同浓度的孵育上清，将植物乳杆菌实验组Z1、R1和R2的孵育上清分别与完全培养基混合(5％:95％)，并各吸取200μL分别培养经SDS处理过的HaCaT细胞48h，用无血清培养基清洗细胞，根据marker笔标记的位置，选取与之前相同的视野观察并拍照。
由图3可知，与正常对照组相比，植物乳杆菌Z1处理后划痕相对宽度减小，细胞迁移速率增快，划痕愈合率为(47.12±1.92)％，明显提高细胞迁移能力；短双歧杆菌R1和长双歧杆菌R2处理后划痕相对宽度较宽，细胞迁移速率减慢，细胞划痕愈合率降低，分别为(25.47.57±2.18)％、(26.55±2.87)％，抑制细胞迁移。
实施例5：植物乳杆菌对HaCaT细胞FLG mRNA水平的影响
具体步骤如下：
将冻存的HaCaT细胞37℃复温后，1000rpm离心5min，取沉淀；将沉淀用完全培养基洗涤一次后，用完全培养基重悬细胞并计数，得到细胞重悬液；将细胞重悬液接种至10cm培养皿，于37℃、气相含5％(v/v)CO2的细胞培养箱中培养，次日更换完全培养基继续于37℃、气相含5％(v/v)CO2的细胞培养箱中培养。细胞生长至培养皿的70％～80％密度时进行传代。
选取生长状态良好的HaCaT细胞，将HaCaT细胞经浓度为2.5g/L的胰蛋白酶消化后离心、用DMEM培养基重悬，进行细胞计数，得到细胞重悬液；将HaCaT细胞以每孔5×106个细胞接种于6cm细胞培养皿中培养24h；更换含50μM SDS的完全培养基处理细胞24h。。
设置正常对照组、植物乳杆菌实验组、短双歧杆菌R1实验组和长双歧杆菌R2实验组(图2)。使用与实施例2相同浓度的孵育上清，将Z1、Z2、Z3、Z4、R1和R2的孵育上清分别与完全培养基混合(5％:95％)，并各吸取7mL分别培养经SDS处理过的HaCaT细胞24h。正常对照组添加7mL的完全培养基。
收集细胞，提取总RNA，测RNA浓度，反转录后于-20℃冰箱保存备用。Q-PCR法检测FLG基因表达水平。
引物名称
FLG-F(5'-3')：ATGTCCGCTCTCCTGGAAAG；
FLG-R(5'-3')：TGGATTCTTCAAGACTGCCTGTA。
human-Actin-F(5'-3')：GTGACGTTGACATCCGTAAAGA；
human-Actin-R(5'-3')：GCCGGACTCATCGTACTCC。
Q-PCR：详细步骤参照PCR试剂盒说明书。
由图4可知，与正常对照组比较，在相同培养时间下，添加植物乳杆菌培养的HaCaT细胞中FLG mRNA相对表达量明显增加，较正常对照组增加了约1.6～2倍。植物乳杆菌显著地提高HaCaT人角质形成细胞FLG基因相对表达量，这说明植物乳杆菌可以促进皮肤FLG的表达，改善皮肤屏障功能和保湿能力。
实施例6：植物乳杆菌的应用
(1)植物乳杆菌CCFM1158可用于制备身体乳，身体乳的具体制备过程如下：
将10份植物乳杆菌CCFM1158培养上清、0.3份保湿剂、0.3份润肤剂、0.1份乳化剂、0.5份防腐剂、油相基质30份、水相基质60份混合，得到身体乳。
(2)植物乳杆菌CCFM1158可用于制备沐浴露，沐浴露的具体制备过程如下：
将10份植物乳杆菌CCFM1158培养上清、10份表面活性剂脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸盐、5份乳化剂辛烯基琥珀酸淀粉糖、5份增稠剂聚乙二醇、10份清洁剂十二烷基硫酸钠(月桂醇硫酸钠)、0.3份防腐剂乙内酰脲、0.5份香精，60份水相基质混合，得到身体乳。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 江南大学
<120> 一株具有改善面部敏感性皮肤以及修复皮肤屏障的植物乳杆菌
<130> BAA210309A
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 458
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
aaaaatttgg taagcttaca gaatgtcatc agcaatgatc aacaatggct tgccttgttc 60
aacgatggat tgtaatagtg gtaagatatc ttgaatgttt gaaatcttct tatcagtaat 120
taagatatat ggattgtcaa gatccgcttc catcttatca ttatcagtaa ccatgtattg 180
tgataagtag ccgcggtcga attgcatccc ttcaacaacg tctaagctag tatcaacacc 240
acgtgattct tcaatcgtga taacaccgtc atgaccaact ttttccatgg cttcggcaat 300
caatttacca gtttcttcac ttgctgaaga tacagaagcg atttgcgcaa tatcttcttg 360
cgtcttaact tcgtgtgcca tagcgtgtaa tgagtcaacc gccgtcttag tagcttcttc 420
aatcccacga cgaatgccaa ctgggtttgc accagcaa 458
Claims (10)
1.一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，于2021年2月4日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61498，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
2.权利要求1所述植物乳杆菌的细胞、发酵上清液或胞内物在在制备预防和/或治疗皮肤氧化损伤的产品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述胞内物为权利要求1所述植物乳杆菌破碎后的上清液。
4.一种产品，其特征在于，所述产品含有权利要求1所述植物乳杆菌的细胞、发酵上清液或胞内物中的一种或多种。
5.如权利要求4所述的产品，其特征在于，所述产品包含日化用品或药品。
6.如权利要求5所述的产品，其特征在于，所述日化用品为护肤品或洗护用品。
7.如权利要求5所述的产品，其特征在于，所述药品为涂抹型药品。
8.如权利要求7所述的产品，其特征在于，还含有附加剂。
9.如权利要求8所述的产品，其特征在于，所述附加剂为软膏剂、防腐剂和/或抗氧化剂。
10.如权利要求7所述的产品，其特征在于，所述涂抹型药品的剂型为膏剂、膜剂或凝胶剂。
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|---|---|
| CN (1) | CN112920983B (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112512541A (zh) * | 2018-06-26 | 2021-03-16 | 西姆莱斯有限公司 | 用于皮肤护理的乳杆菌 |
| CN113604395A (zh) * | 2021-08-20 | 2021-11-05 | 江南大学 | 一株可发酵石斛且其发酵液可改善皮肤质量的植物乳杆菌 |
| CN114574408A (zh) * | 2022-05-06 | 2022-06-03 | 山东锦鲤生物工程有限公司 | 益生菌seuneu-107及应用 |
| CN115181695A (zh) * | 2022-06-27 | 2022-10-14 | 广东粤港澳大湾区国家纳米科技创新研究院 | 一种植物乳杆菌5b4m2及其应用 |
| CN116042426A (zh) * | 2021-10-28 | 2023-05-02 | 南京盛德生物科技研究院有限公司 | 一种植物乳杆菌wsh048及其筛选方法及其发酵产物的制备方法 |
| CN116083315A (zh) * | 2023-01-17 | 2023-05-09 | 江南大学 | 一株具有调控宿主ha含量的植物乳植杆菌ccfm1296及其后生元 |
| CN116948921A (zh) * | 2023-09-19 | 2023-10-27 | 黑龙江省科学院微生物研究所 | 植物乳杆菌及其外泌体的应用 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20190247295A1 (en) * | 2018-02-12 | 2019-08-15 | Genmont Biotech Incorporation | Use of lactobacillus plantarum gmnl-6 composition for skin care |
| CN110384650A (zh) * | 2019-08-29 | 2019-10-29 | 湖北省麦诗特生物科技有限公司 | 一种用于皮肤保湿、屏障保护的益生菌组合物及其在化妆品中的应用 |
| WO2020002429A1 (en) * | 2018-06-26 | 2020-01-02 | Symrise Ag | Lactobacillus plantarum for skin care |
| CN111228130A (zh) * | 2019-10-28 | 2020-06-05 | 北京皓尔生物科技有限公司 | 一种具有激发皮肤细胞能量、修复皮肤屏障功效的组合物及其制备方法与应用 |
| CN111265468A (zh) * | 2020-03-13 | 2020-06-12 | 佛山市奥姿美生物科技有限公司 | 皮肤双屏障修复组合物及其应用 |
| CN112159781A (zh) * | 2020-10-23 | 2021-01-01 | 深圳市沁帆科技有限公司 | 一种植物乳杆菌、微生物菌剂及其应用 |
-
2021
- 2021-04-27 CN CN202110457019.9A patent/CN112920983B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20190247295A1 (en) * | 2018-02-12 | 2019-08-15 | Genmont Biotech Incorporation | Use of lactobacillus plantarum gmnl-6 composition for skin care |
| WO2020002429A1 (en) * | 2018-06-26 | 2020-01-02 | Symrise Ag | Lactobacillus plantarum for skin care |
| CN112512541A (zh) * | 2018-06-26 | 2021-03-16 | 西姆莱斯有限公司 | 用于皮肤护理的乳杆菌 |
| CN110384650A (zh) * | 2019-08-29 | 2019-10-29 | 湖北省麦诗特生物科技有限公司 | 一种用于皮肤保湿、屏障保护的益生菌组合物及其在化妆品中的应用 |
| CN111228130A (zh) * | 2019-10-28 | 2020-06-05 | 北京皓尔生物科技有限公司 | 一种具有激发皮肤细胞能量、修复皮肤屏障功效的组合物及其制备方法与应用 |
| CN111265468A (zh) * | 2020-03-13 | 2020-06-12 | 佛山市奥姿美生物科技有限公司 | 皮肤双屏障修复组合物及其应用 |
| CN112159781A (zh) * | 2020-10-23 | 2021-01-01 | 深圳市沁帆科技有限公司 | 一种植物乳杆菌、微生物菌剂及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MARIMAN R等: "Lactobacillus plantarum NCIMB8826 ameliorates inflammation of colon and skin in human APOC1 transgenic mice", 《BENEFICIAL MICROBES》 * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112512541A (zh) * | 2018-06-26 | 2021-03-16 | 西姆莱斯有限公司 | 用于皮肤护理的乳杆菌 |
| CN113604395A (zh) * | 2021-08-20 | 2021-11-05 | 江南大学 | 一株可发酵石斛且其发酵液可改善皮肤质量的植物乳杆菌 |
| CN113604395B (zh) * | 2021-08-20 | 2023-07-25 | 江南大学 | 一株可发酵石斛且其发酵液可改善皮肤质量的植物乳杆菌 |
| CN116042426A (zh) * | 2021-10-28 | 2023-05-02 | 南京盛德生物科技研究院有限公司 | 一种植物乳杆菌wsh048及其筛选方法及其发酵产物的制备方法 |
| CN114574408A (zh) * | 2022-05-06 | 2022-06-03 | 山东锦鲤生物工程有限公司 | 益生菌seuneu-107及应用 |
| CN114574408B (zh) * | 2022-05-06 | 2022-07-22 | 山东锦鲤生物工程有限公司 | 益生菌seuneu-107及应用 |
| CN115181695A (zh) * | 2022-06-27 | 2022-10-14 | 广东粤港澳大湾区国家纳米科技创新研究院 | 一种植物乳杆菌5b4m2及其应用 |
| CN115181695B (zh) * | 2022-06-27 | 2023-08-29 | 广东粤港澳大湾区国家纳米科技创新研究院 | 一种植物乳杆菌5b4m2及其应用 |
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Application publication date: 20210608 Assignee: Jiangsu Ruiting Biotechnology Co.,Ltd. Assignor: Jiangnan University Contract record no.: X2024980001337 Denomination of invention: A plant-based lactobacillus with the ability to improve facial sensitivity and repair skin barriers Granted publication date: 20220802 License type: Common License Record date: 20240123 |