CN112898400B - 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法 - Google Patents

一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112898400B
CN112898400B CN202110094363.6A CN202110094363A CN112898400B CN 112898400 B CN112898400 B CN 112898400B CN 202110094363 A CN202110094363 A CN 202110094363A CN 112898400 B CN112898400 B CN 112898400B
Authority
CN
China
Prior art keywords
gly
deer
glue
pep
pro
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110094363.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112898400A (zh
Inventor
韩疏影
赵珂璇
蔡朔
蒋梦彤
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing University of Chinese Medicine
Original Assignee
Nanjing University of Chinese Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing University of Chinese Medicine filed Critical Nanjing University of Chinese Medicine
Priority to CN202110094363.6A priority Critical patent/CN112898400B/zh
Publication of CN112898400A publication Critical patent/CN112898400A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112898400B publication Critical patent/CN112898400B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种可区分鹿皮胶与鹿角胶的特征肽段及其检测方法，本发明通过大量实验筛选，以非标记多肽定量方法、主成分分析及含量比较法，确定能够区分鹿皮胶与鹿角胶的特征肽段Pep‑1与Pep‑2，根据Pep‑1、Pep‑2与参比肽Pep‑R相的对含量限度，可区分鹿皮胶与鹿角胶。该方法专属性强、灵敏度高、操作简单，可用于鹿皮胶与鹿角胶的区分及质量控制。

Description

一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
技术领域
本发明涉及一种鹿源特征肽段及其检测方法，具体涉及区分鹿皮胶与鹿角胶的特征肽段及其检测方法。
技术背景
胶类药材包括阿胶、鹿皮胶、鹿角胶、黄明胶等，80%以上的成分为不同类别的胶原蛋白，包括I型胶原α1链（COL1A1）、I型胶原α2链（COL1A2）、II型胶原α1链（COL2A1）、III型胶原α1链（COL3A1）等，其中以COL1A2来源的肽段为主。COL1A2作为高保守蛋白质，广泛存在于不同动物种体内，是构成胶类药材的重要蛋白类成分之一。
鹿角胶与鹿皮胶均来源于梅花鹿或马鹿，两者为名贵胶类中药材，鹿角胶为梅花鹿或马鹿角经水煎煮、浓缩制成的固体胶，鹿皮胶为梅花鹿或马鹿的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶。鹿角为马鹿或梅花鹿已骨化的角，价格远高于鹿皮，市场上存在以鹿皮胶掺入鹿角胶以次充好的现象。如何将鹿皮胶与鹿角胶进行区分，着实是胶类药材鉴定研究的难题，给鹿角胶与鹿皮胶鉴别，以及鹿角胶掺入鹿皮胶的伪品鉴别都带来了挑战。
鹿角胶与鹿皮胶从外观上难以区分，且两者均来源于梅花鹿或马鹿，其蛋白质组成相同，因此，通过寻找专属性肽段来区分两者基本不可能。
发明内容：
发明目的：本发明通过大量是实验筛选，研究筛选出2条鹿源肽段与参比肽段的相对含量的比值，从而用来区分鹿皮胶与鹿角胶。该方法专属性强、灵敏度高、操作简单，可用于鹿皮胶与鹿角胶的区分及质量控制。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段，其特征在于，所述的特征肽为：
Pep-1:
Gly-Asp-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Ile-Gly-Asn-Val-Gly-Ala-Hyp-Gly-Pro-Lys-Gly-Ala-Arg；
Pep-2：
Gly-Gly-Hyp-Gly-Gly-Hyp-Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Ala-Gly-Lys；
Pep-R：
Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Met-Gly-Pro-Hyp-Gly-Leu-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Ser-Gly-Arg。
一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将上述的Pep-1和Pep-2 两个鹿源特征肽及参比肽Pep-R配成混合对照品溶液；
（2）将待检测鹿皮胶与鹿角胶的胶类样品，用胰蛋白酶进行酶切后，将酶解液和步骤（1）鹿源特征肽混合对照品溶液注入液质联用仪，以鹿源特征肽对照，采用ESI正离子模式，多反应监测模式，选择的离子对包括：Pep-1：m/z 864.7（三电荷）→568.1、m/z 864.7（三电荷）→398.3；Pep-2：m/z 583.6（双电荷）→526.8、m/z 583.6（双电荷）→342.2进行检测；Pep-R：m/z 916.9（双电荷）→772.4、m/z 916.9（双电荷）→715.3。以Pep-1峰面积A1与Pep-R峰面积AR比值或Pep-2峰面积A2与Pep-R峰面积AR比值确定样品为鹿皮胶或鹿角胶。
作为优选方案，以上所述的可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段的检测方法，所述的酶切方法为：所述的酶切方法为：取待检测鹿皮胶与鹿角胶的胶类药材样品，加入磷酸盐缓冲液，超声使样品完全溶解，离心，取上清液，置于离心管中，以 PBS稀释，加入适量胰蛋白酶，摇匀，充分酶解，加入三氟乙酸溶液终止反应，离心，即得胶类药材酶解液，冷藏保存，备用。
作为更加优选方案，以上所述的可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段的检测方法，所述的酶切方法为：取待检测胶类药材样品10 mg，加入5 ml磷酸盐缓冲液，超声使样品完全溶解，12000 rpm离心20 min，取上清液150 μl，置于2 ml离心管中，以1 ml 50 mM PBS稀释，加入适量胰蛋白酶，摇匀，充分酶解，加入10% 三氟乙酸溶液60 μl终止反应，12000 rpm离心20 min，即得胶类药材酶解液，置于-20℃保存，备用。
作为优选方案，以上所述的可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段的检测方法，加入胰蛋白酶的质量浓度为0.1%~10%。
作为优选方案，以上所述的可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段的检测方法，酶解方式包括：37℃恒温酶解、微波辅助酶解、超声辅助酶解、酶固定化酶解。
作为优选方案，以上所述的可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段的检测方法，液质联用仪检测的液相条件为：色谱柱为1.7μm Waters C18柱，规格为2.1μm × 100 mm，上样量为2μl，流速0.3ml/min，流动相A（乙腈），流动相B（0.1%甲酸），0~3.5 min，10~30%A线性梯度洗脱，3.5~4 min，30~10%A线性梯度洗脱，4~6 min，10%A洗脱；采用三重四极杆质谱，质谱条件为：Pep-1：m/z 864.7（三电荷）→568.1；Pep-2：m/z 583.6（双电荷）→526.8；Pep-R：m/z916.9（双电荷）→772.4。
液质联用仪检测的质谱条件为：电喷雾正离子模式ESI+，质谱参数为：离子源温度500℃；电离电压5500V；脱溶剂温度500℃；离子源气体1，60psi；离子源气体2，60psi。
设置特征肽对应的离子对条件如下：
Pep-1：m/z 864.7（三电荷）→568.1，DP=185.91, CE=36.97；
Pep-1：m/z 864.7（三电荷）→398.3，DP=165.95, CE=43.17；
Pep-2：m/z 583.6（双电荷）→526.8，DP=65.94, CE=26.91；
Pep-2：m/z 583.6（双电荷）→342.2，DP=66.25, CE=27.99；
Pep-R：m/z 916.9（双电荷）→772.4，DP=132.42, CE=38.60；
Pep-R：m/z 916.9（双电荷）→715.3，DP=130.46, CE=37.57。
作为优选方案，以上所述的可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段的检测方法，鹿角胶的 A1/AR不得低于5.0，A 2/AR不得高于0.5；鹿皮胶的A1/AR不得高于1.0，A 2/AR不得低于0.8。
有益效果：本发明相比现有技术具有以下优点：
本发明通过大量是实验筛选，研究筛选出2条鹿源肽段与参比肽段的相对含量的比值在鹿角胶和鹿皮胶中不同，从而来区分鹿皮胶与鹿角胶。该方法专属性强、灵敏度高、操作简单，可用于鹿皮胶与鹿角胶的区分及质量控制。从而可以克服现有技术中，鹿角胶与鹿皮胶从外观上难以区分，专属性肽段也难以区分的不足，取得了非常好的技术进步。
附图说明
图1为LFQ肽段的散点图。
图2为Pep-1的质谱图。
图3为Pep-2的质谱图。
图4为Pep-R的质谱图。
图5为Pep-1、Pep-2在鹿皮胶(DCG)与鹿角胶（DHG）中的含量。
具体实施例
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例不应解释为限制本发明。
实施例1
一种鹿源特征肽，所述的特征肽序列有3个，如序列表NO1~NO3：
Pep-1:
Gly-Asp-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Ile-Gly-Asn-Val-Gly-Ala-Hyp-Gly-Pro-Lys-Gly-Ala-Arg
Pep-2：
Gly-Gly-Hyp-Gly-Gly-Hyp-Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Ala-Gly-Lys
Pep-R：
Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Met-Gly-Pro-Hyp-Gly-Leu-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Ser-Gly-Arg。
实施例2 Pep-1、Pep-2、Pep-R的确定
1.鹿皮胶和鹿角胶酶解液的制备：
取5批次鹿皮胶样品和5批次鹿角胶样品，每批次各取10 mg，分别加入5 ml磷酸盐缓冲液，超声使样品完全溶解，12000 rpm离心20 min，取上清液150 μl，置于2 ml离心管中，以1 ml 50 mM PBS稀释，加入1%胰蛋白酶（w/v），摇匀，37℃恒温酶解12 h，酶解后加入10% TFA溶液60 μl终止反应，Seppak C18脱盐处理，离心浓缩干燥，以纯水复溶，测定多肽浓度，再次离心浓缩干燥，置于-20℃保存，得到5批次鹿皮胶和5批次鹿角胶的酶解样品，备用。
2、用戴安U3000 NanoRSLC纳升液相系统，色谱柱为5 μm Reprosil C18AQ（75μm× 150 mm），LC-MS/MS质谱系统分析样品。
用初始流动相复溶5批次的鹿皮胶与鹿角胶酶解样品，调整多肽浓度为1 μg/μl，上样2 μl，流速400 nL/min，流动相A（乙腈/甲酸/水=2/0.2/98，v/v/v），流动相B（乙腈/甲酸/水=80/0.2/20，v/v/v），2~30%B线性梯度洗脱120 min。Thermo Q-Exactive Orbitrap质谱仪用于进行肽段分析，喷雾电压为2.5 kV，离子传输毛细管温度为200℃；质谱一级全扫描范围为m/z 300~2000，分离宽度为3；串联质谱分析采用一级质谱数据依赖的二级质谱扫描模式，依次选取一级质谱中离子强度最高的5个离子进行碰撞诱导解离（CID）二级串联质谱，每个样品重复进样1次。采用Xcalibur（3.0.63）软件进行数据采集。
串联质谱数据用PEAKS 8.5软件进行搜库分析，选择鹿胶原蛋白数据库搜索，检索参数设置为：前体离子误差10；子离子误差1；翻译后修饰（PTM）的设置参数为：脯氨酸的羟基化（+15.99）；天门冬酰胺与谷氨酰胺的脱酰胺（+0.98）；允许2个位点误切，假阳性率（FDR）≤1%；选择胰蛋白酶酶切（Trypsin），在上述检索条件下所得分值有显著性意义（P <0.05）被认定为有效的鉴定结果。
Label free定量（LFQ）通过比较提取离子色谱（XIC）和PEAK Studio 8.5计算峰面积，计算相对表达水平的变化。采集的LC-MS/MS数据首先通过软件进行校准。以其中一个样品为参照，以总离子流（TIC）对每一个鉴定肽的峰面积进行归一化，对鉴定肽的相对含量进行定量分析。
将肽段的LFQ结果以Fold change（FC）取log2为横坐标，显著性差异P值取−log10为纵坐标，作散点图，取FC > 3，P < 0.01的肽段为鹿皮胶与鹿角胶中显著变化的肽段。如图1所示，Pep-1与Pep-2为离散点，即在鹿皮胶与鹿角胶中含量差异大，且可用来区分鹿皮胶与鹿角胶。Pep-1、Pep-2、Pep-R的MS/MS图分别见图2、图3和图4。
实施例3 鹿皮胶与鹿角胶A1/AR、A 2/AR的测定
取10批次鹿皮胶样品、10批次鹿角胶样品，每批次各取10 mg，加入5 ml磷酸盐缓冲液，超声使样品完全溶解，12000 rpm离心20 min，取上清液150 μl，置于2 ml离心管中，以1 ml 50 mM PBS稀释，加入1%胰蛋白酶（w/v），摇匀，37℃恒温酶解12 h，酶解后加入10%TFA溶液60 μl终止反应，12000 rpm离心20 min，即得10批次的鹿皮胶、鹿角胶酶解液，置于-20℃保存，备用。
将上述10批次的鹿皮胶和鹿角胶酶解液注入液质联用仪，进样量为1 μg，液质联用仪检测的液相条件为：色谱柱为1.7μm C18反相色谱柱（2.1 μm × 100 mm），流速0.3ml/min，流动相A（乙腈），流动相B（0.1%甲酸），0~3.5 min，10~30%A线性梯度洗脱，3.5~4 min，30~10%A线性梯度洗脱，4~6 min，10%A洗脱。液质联用仪检测的质谱条件为：电喷雾正离子模式（ESI+），质谱参数为：离子源温度500℃；电离电压5500V；脱溶剂温度500℃；离子源气体1，60psi；离子源气体2，60psi。设置特征肽对应的离子对条件如下：
Pep-1：m/z 864.7（三电荷）→568.1，DP=185.91, CE=36.97；
Pep-2：m/z 583.6（双电荷）→526.8，DP=65.94, CE=26.91；
Pep-R：m/z 916.9（双电荷）→772.4，DP=132.42, CE=38.60。
10个批次鹿皮胶、鹿角胶A1/AR、A 2/AR数值见表1和图5，鹿皮胶的A1/AR、A 2/AR平均值分别为0.53±0.09、1.33±0.34，鹿角胶的A1/AR、A 2/AR平均值分别为7.48±2.12、0.21±0.09。
根据结果规定：鹿角胶的 A1/AR不得低于5.0，A 2/AR不得高于0.5，鹿皮胶的A1/AR不得高于1.0，A 2/AR不得低于0.8。
表1 鹿皮胶、鹿角胶的A1/AR、A 2/AR结果
Figure DEST_PATH_IMAGE002
序列表
<110> 南京中医药大学
<120> 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 1
Gly Asp Ala Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly
1 5 10 15
Pro Ile Gly Asn Val Gly Ala Pro Gly Pro Lys Gly Ala Arg
20 25 30
<210> 2
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 2
Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Pro Gln Gly Pro Ala Gly Lys
1 5 10
<210> 3
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 3
Gly Pro Pro Gly Pro Met Gly Pro Pro Gly Leu Ala Gly Pro Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ser Gly Arg
20

Claims (4)

1.一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段为：
Pep-1:
Gly-Asp-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Ile-Gly-Asn-Val-Gly-Ala-Hyp-Gly-Pro-Lys-Gly-Ala-Arg
Pep-2：
Gly-Gly-Hyp-Gly-Gly-Hyp-Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Ala-Gly-Lys
参比肽Pep-R：
Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Met-Gly-Pro-Hyp-Gly-Leu-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Ser-Gly-Arg；
将特征肽段Pep-1、Pep-2及参比肽Pep-R配成混合对照品溶液；
（2）将待检测鹿皮胶与鹿角胶样品，用胰蛋白酶进行酶切后，将酶解液和步骤（1）混合对照品溶液注入液质联用仪，以Pep-1和Pep-2对照，采用ESI正离子模式，多反应监测模式，选择的离子对包括：Pep-1：m/z 864.7三电荷→568.1、m/z 864.7三电荷→398.3；Pep-2：m/z 583.6双电荷→526.8、m/z 583.6双电荷→342.2进行检测；Pep-R：m/z 916.9双电荷→772.4、m/z 916.9双电荷→715.3；以Pep-1峰面积A1与Pep-R峰面积AR比值或Pep-2峰面积A2与Pep-R峰面积AR比值确定样品为鹿皮胶或鹿角胶；鹿角胶的 A1/AR不得低于5.0，A 2/AR不得高于0.5，鹿皮胶的A1/AR不得高于1.0，A 2/AR不得低于0.8；
所述的液质联用仪检测的液相条件为：色谱柱为1.7μm Waters C18柱，规格为2.1μm ×100 mm，上样量为2μl，流动相A为乙腈，流动相B为0.1%甲酸，流速0.3ml/min，0~3.5 min，10~30%A线性梯度洗脱，3.5~4 min，30~10%A线性梯度洗脱，4~6 min，10%A洗脱。
2.根据权利要求1所述的可区分鹿角胶和鹿皮胶的检测方法，其特征在于，所述的酶切方法为：取待检测鹿皮胶与鹿角胶样品，加入磷酸盐缓冲液，超声使样品完全溶解，离心，取上清液，置于离心管中，以 PBS稀释，加入适量胰蛋白酶，摇匀，充分酶解，加入三氟乙酸溶液终止反应，离心，即得酶解液，冷藏保存，备用。
3.根据权利要求2所述的可区分鹿角胶和鹿皮胶的检测方法，其特征在于，加入胰蛋白酶的质量浓度为0.1%~10%。
4.根据权利要求2所述的可区分鹿角胶和鹿皮胶的检测方法，其特征在于，酶解方式包括：37℃恒温酶解、微波辅助酶解、超声辅助酶解或酶固定化酶解。
CN202110094363.6A 2021-01-23 2021-01-23 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法 Active CN112898400B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110094363.6A CN112898400B (zh) 2021-01-23 2021-01-23 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110094363.6A CN112898400B (zh) 2021-01-23 2021-01-23 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112898400A CN112898400A (zh) 2021-06-04
CN112898400B true CN112898400B (zh) 2022-08-23

Family

ID=76117407

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110094363.6A Active CN112898400B (zh) 2021-01-23 2021-01-23 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112898400B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114720601B (zh) * 2022-04-12 2023-09-08 中国海洋大学 三条特征性肽段及其应用
CN115792243A (zh) * 2022-11-25 2023-03-14 北京同仁堂(辽宁)科技药业有限公司 一种利用专属离子对检测鹿胶的方法及应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012032298A (ja) * 2010-07-30 2012-02-16 Nippi:Kk 糖タンパク質の試料調製方法および分析方法
CN112098578A (zh) * 2020-09-01 2020-12-18 南京中医药大学 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
CN112098579A (zh) * 2020-09-01 2020-12-18 南京中医药大学 一种鹿源特征肽段及其检测方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012032298A (ja) * 2010-07-30 2012-02-16 Nippi:Kk 糖タンパク質の試料調製方法および分析方法
CN112098578A (zh) * 2020-09-01 2020-12-18 南京中医药大学 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
CN112098579A (zh) * 2020-09-01 2020-12-18 南京中医药大学 一种鹿源特征肽段及其检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
基于"多肽组-修饰组"比较分析鹿皮与鹿皮胶物质基础;刘睿等;《药学学报》;20201231(第08期);第1882-1888页 *
基于"蛋白质/肽组学-修饰组学"研究动物药功效物质基础的思路与方法;刘睿等;《药学学报》;20201231(第08期);第1735-1743页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112898400A (zh) 2021-06-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112898384B (zh) 一种鹿角特征肽段及其检测方法
CN112098579B (zh) 一种区分鹿皮胶或鹿角胶的特征肽段及其检测方法
CN112098578B (zh) 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
Chaurand et al. Profiling proteins from azoxymethane‐induced colon tumors at the molecular level by matrix‐assisted laser desorption/ionization mass spectrometry
James Protein identification in the post-genome era: the rapid rise of proteomics
AU2003262824B2 (en) Method for characterizing biomolecules utilizing a result driven strategy
CN112898400B (zh) 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
US20060243900A1 (en) Real-time analysis of mass spectrometry data for identifying peptidic data of interest
US9110074B2 (en) Mass spectrometry assay for eIF4E and eIF4E regulon activity
Lee et al. Highly informative proteome analysis by combining improved N‐terminal sulfonation for de novo peptide sequencing and online capillary reverse‐phase liquid chromatography/tandem mass spectrometry
Arnott et al. Rapid identification of comigrating gel‐isolated proteins by ion trap‐mass spectrometry
Yates [15] Protein structure analysis by mass spectrometry
Shively et al. Highlights of protein structural analysis
CN111948315A (zh) 胰岛素或其类似物的序列分析方法及鉴定方法
CN113173971B (zh) 用于鉴别含有鹿角或鹿皮的配方颗粒的特征肽段及其检测方法
CN113173972B (zh) 用于鉴别鹿角或鹿皮配方颗粒的特征肽段及其检测方法
US20100317043A1 (en) MASS SPECTROMETRY ASSAY FOR eIF4E AND eIF4E REGULON ACTIVITY
CN115572322A (zh) 一种麋鹿角特征肽段及其检测方法
CN113848259A (zh) 基于高精度质谱的蛋白类泛素化修饰位点检测方法及应用
CN110412192A (zh) 一种激素性股骨头坏死血清标记物fga的应用
CN115197298B (zh) 用于相对定量分析猪细胞色素p450酶cyp2e1的肽段组合物及应用
Ozdanovac et al. N-Terminal Derivatization of Peptides with 4'-Formylbenzo-18-crown-6-ether for Protein and Species Identification
Krutzsch Protein/peptide sequence analysis by mass spectrometry
Hurst et al. Isolation, separation, and detection of enkephalins: a review of methods for high performance liquid chromatography and capillary electrophoresis
CN114184794A (zh) 尿液蛋白质在进展期白癜风激素疗效评估中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Han Shuying

Inventor after: Zhao Kexuan

Inventor after: Cai Shuo

Inventor after: Jiang Mengtong

Inventor before: Zhao Kexuan

Inventor before: Han Shuying

Inventor before: Cai Shuo

Inventor before: Jiang Mengtong

Inventor before: Liu Rui

CB03 Change of inventor or designer information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant