CN112891517A - 促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物及其制备方法与应用，该细胞因子组合物的制备方法为：将皮肤提取的成纤维干细胞体外培养，传代至第6代细胞；将提取的第6代细胞按每孔数量十万个传入6孔板中，培养到对数生长期时，换入1.1‑5倍浓度的培养液至高渗状态下48h后取上清液离心，取离心得到的上清液，即得到促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物。本发明的促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物的制备方法通过改变细胞渗透压的方法提高了成纤维细胞因子（kgf细胞因子）含量，从而通过微针注射细胞因子改变毛囊内环境，在一定程度上唤醒人脱发或秃发区域的毛囊，进而促进其增殖分化，提高头发生长活力，促进头发生长。

Description

促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体来说，涉及一种促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物及其制备方法与应用。
背景技术
目前现有的改善脱发的方法有头皮涂抹(以中草药成分为主)，毛囊移植技术等。中国专利CN102038626A公开了一种中药育发防脱洗发液及其制备方法，该中药育发防脱洗发液的制备方法通过在制备好的洗发水中加入中药提取液，混合后搅拌均匀制得中药育发防脱洗发液，所述中药提取液由干姜、川椒、川芎、红花、蔓荆子、防风、黄芩、当归混合后制得。
这些方法的缺点是不能从根本上解决毛囊受损，效果不理想，因此需要一种区别于传统头皮抗衰与毛发再生技术，能够有效的减轻毛囊衰老，促进毛发再生，高效解决头皮多种问题，并且维持有效时间较长的技术。
发明内容
针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物及其制备方法与应用，能够克服现有技术的上述不足。
为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1将皮肤提取的成纤维干细胞体外培养，传代至第6代细胞；
S2将提取的第6代细胞按每孔数量十万个传入6孔板中，培养到对数生长期时，换入1.1-5倍浓度的培养液至高渗状态下48h后取上清液离心，取离心得到的上清液，即得到促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物。
进一步地，所述成纤维干细胞体外培养的方法为：将组织块置于细胞培养瓶底壁，倒置培养瓶于37℃的二氧化碳培养箱中培养2-4小时，待组织块黏着牢固时，加入10-15mL完全培养液，翻转培养瓶，使完全培养液浸润组织块，在37℃的二氧化碳培养箱中培养，每天观察细胞，三天后半量换液，待原代细胞长满80％时，取原代细胞进行消化，计数，进行传代培养。
进一步地，相邻组织块之间的距离保持在0.5cm之内。
根据本发明的第二方面，提出了一种由上述制备方法得到的细胞因子组合物。
根据本发明的第三方面，提出了上述细胞因子组合物在制备用于促进头皮毛囊再生的药物中的应用。
本发明的有益效果：本发明的促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物的制备方法通过改变细胞渗透压的方法提高了成纤维细胞因子(kgf细胞因子) 含量，从而通过微针注射细胞因子改变毛囊内环境，在一定程度上唤醒人脱发或秃发区域的毛囊，进而促进其增殖分化，提高头发生长活力，促进头发生长；本发明的促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物能够有效地作用于毛囊，能更好地从根本上预防、改善、唤醒已经衰老毛囊导致的脱发、白发。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1培养原代成纤维细胞，在培养皿中用眼科剪将组织块剪切成1mm 的小块，再用眼科镊移出组织块，置于细胞培养瓶底壁，组织块与组织块之间保持在0.5cm之内的距离，倒置培养瓶于37℃，二氧化碳培养箱中培养2-4小时，待组织块黏着牢固时，加入10-15mL完全培养液，然后翻转培养瓶，使培养液慢慢浸润组织块，于37℃的二氧化碳培养箱培养，每天观察细胞，三天后半量换液，约6天左右显微镜下可见原代细胞游离出组织，待原代细胞长满80％进行消化，取原代细胞进行消化，计数，进行传代培养，传代至第6代细胞止；
S2将提取的细胞按每孔数量十万个传入6孔板中，培养到对数生长期时，分别换入1.1x，1.5x，5x的培养液至高渗状态下48h后取上清液离心到15分钟止，离心转速为3000转/分，提取上清液为促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物；
S3通过ELISA试剂盒，检测角脘细胞生长因子-kgf含量是否有提高。
三次实验检测结果如表1-3所示，检测结果显示改变细胞成高渗状态 48小时后，细胞因子含量大大提升。
表1第一次检测结果
1.1x 1.5x 5x
对照组 0.236
样品组 0.100 0.090 0.022
重复步骤S1-S3，检测结果如表2所示：
表2第二次检测结果
1.1x 1.5x 5x
对照组 0.256
样品组 0.090 0.100 0.036
再次重复步骤S1-S3，检测结果如表3所示：
表3第三次检测结果
1.1x 1.5x 5x
对照组 0.266
样品组 0.112 0.102 0.065
角脘细胞生长因子-kgf是从成纤维细胞中纯化的，从结构上分析是成纤维生长因子(FGF)家族成员，但其专一靶细胞是表皮细胞，刺激所有皮肤内表皮基本单位包括头发毛囊，皮脂腺汗腺生长。本发明的制备方法通过改变成纤维细胞渗透压的实验方法大大地提高了kgf的含量，从而改善头皮内环境，增加毛囊存活率。
实施例1制备的细胞因子组合物的使用方法为：操作前清洁及消毒志愿者头皮，通过微针的方法将细胞因子导入头皮4mm深处。
目前接种该细胞因子组合物的志愿者有145人，年龄范围在45岁～80岁，其中男性志愿者为118人，女性志愿者为27人，分为四个疗程，每次导入的细胞因子组合物的量为14mL，两周注射一次，使用周期为两个月。志愿者使用本产品后本来枯萎坏死的毛囊会有细小毛发生长出来，恢复了受损毛囊的正常生理功能，赋予真皮和表皮细胞充分营养物质，改善了头皮干痒的环境，改善了头皮出油的状态，重塑头皮抵御屏障，疏通堵塞毛囊，部分白发突出的患者在已长出的白发发根新长出处部分重新长出黑发。其中134例效果显著，其中有9例效果不明显，2例无效。
综上所述，借助于本发明的上述技术方案，本发明的细胞因子组合物能从根本上唤醒毛囊，具有免疫调节与抗炎的作用，kgf生长因子蛋白在促进毛发再生的过程中起着重要的作用，本发明通过微针导入，将干细胞因子直击毛囊根部，通过修复头皮微循环境促进毛囊干细胞分化，补给全层细胞营养，促进胶原蛋白合成，修复表皮，滋养发干，从而达到再生新发的目的。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1将皮肤提取的成纤维干细胞体外培养，传代至第6代细胞；
S2将提取的第6代细胞按每孔数量十万个传入6孔板中，培养到对数生长期时，换入1.1-5倍浓度的培养液至高渗状态下48h后取上清液离心，取离心得到的上清液，即得到促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物。
2.根据权利要求1所述的促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物的制备方法，其特征在于，所述成纤维干细胞体外培养的方法为：将组织块置于细胞培养瓶底壁，倒置培养瓶于37℃的二氧化碳培养箱中培养2-4小时，待组织块黏着牢固时，加入10-15mL完全培养液，翻转培养瓶，使完全培养液浸润组织块，在37℃的二氧化碳培养箱中培养，每天观察细胞，三天后半量换液，待原代细胞长满80%时，取原代细胞进行消化，计数，进行传代培养。
3.根据权利要求2所述的促进头皮毛囊再生的细胞因子组合物的制备方法，其特征在于，相邻组织块之间的距离保持在0.5cm之内。
4.一种由权利要求1-3任意一项所述的制备方法得到的细胞因子组合物。
5.如权利要求4所述的细胞因子组合物在制备用于促进头皮毛囊再生的药物中的应用。
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