CN109908329A - 毛囊细胞激活因子止脱生发制剂生产工艺及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种毛囊细胞激活因子组合物、制剂及其用途，所述毛囊细胞激活因子包括碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、角质细胞生长因子(KGF或KGF1)、角质细胞生长因子2(KGF2)、胰岛素样生长因子(IGF‑1)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子或肝细胞生长因子重链(HGF或HGFα)、成纤维细胞生长因子18(FGF18)、干细胞因子(SCF)、成纤维细胞生长因子20(FGF20)、神经生长因子(NGF)、生长激素(GH)、Wnt3a蛋白中的至少二种。该毛囊细胞激活因子制剂能调节毛囊细胞的增殖、分化、再生和新陈代谢，改善微循环，使毛囊恢复正常，有效治疗脂溢性脱发及其他类型脱发。

Description

毛囊细胞激活因子止脱生发制剂生产工艺及其用途

技术领域

本发明涉及一种毛囊细胞激活因子，包括十二种重组人源细胞因子、重组人源蛋白，这种生物制剂的制备以及预防、治疗脱发的应用，属生物医药领域。

背景技术

脂溢性脱发又称作雄激素性脱发(androgenialopecia，AGA)，是最常见的脱发原因之一，男女两性均有发生，在男性群体中发生率很高，50％的男性50 岁时会发生雄激素性脱发，随着年龄的增大发生几率上升至70％。脂溢性脱发虽无自觉症状，但对脱发人的心理影响较大，并有可能影响其日常生活。随着生活水平的提高，人们对脱发治疗也愈发重视，防治脱发产品的市场需求日益增大。

脂溢性脱发的病理表现和发生机制

脂溢性脱发的特征是头发的生长期大大缩短，导致头发数量减少，提前进入毛囊的微型化，使毛囊转变成类毫毛毛囊，结果增加了休止期头发的脱落，提前终止了生长期而进入退化期，在发生过程中表现为头皮脂分泌增强，头部油脂多并伴有明显脱发。

目前，比较公认的发病机理与雄激素、雄激素受体(Androgen receptor， AR)及雄激素代谢相关酶密切相关。脱氢表雄酮(DHEA)为多种激素的前体，其与雄激素受体的结合性弱，经酶转化后生成了与雄激素受体结合性更强的雄激素，如睾酮，其在5α还原酶的作用下又转化为双氢睾酮 (Dihydrotestosterone，DHT)，双氢睾酮与雄激素受体的结合活性是睾酮与雄激素受体结合活性的5倍。雄激素与受体结合后，雄激素受体发生复杂的酶促反应，如磷酸化等作用，形成雄激素-受体复合物，进入细胞核，结合到基因位点的特异激素反应原件，诱发或抑制靶基因的转录，合成特异的信使RNA (mRNA)及相应的蛋白质，如不同种类的细胞因子，调节细胞增殖和分化，触发了细胞进程，导致头发过早地进入休止期，并向微型毛囊转变，从而引起脂溢性脱发(见附图1)。5α还原酶有2个同工酶，其中I型分布在肝肾及皮脂腺，II型主要存在于性腺组织和头皮、胡须部位的毛囊组织中，皮脂腺中的I型5α还原酶与脂溢性脱发头皮皮脂分泌过于旺盛可能存在一定关联。皮脂的过多分泌会堆积于毛囊周围，引发炎症，从而影响到毛囊的正常生长。值得一提的是，在雄激素代谢过程中，除了5α还原酶将睾酮转化为双氢睾酮外，存在于头发毛囊外根鞘的P-450芳香酶可将雄激素转化为雌激素，女性头皮中，芳香酶的含量是男性的2倍～5倍，所以这有可能解释为女性相对于男性较少脱发现象的原因。但是，对于芳香酶是否能减少头皮毛囊组织中的雄激素含量还有研究。

近期有关雄激素通过间接调节毛乳头细胞分泌的细胞因子来实现对毛发生长调控的假说渐渐受到广泛认同。假说认为，真皮乳头是雄激素作用的靶部位，血液中的雄激素与真皮乳头细胞中的受体结合，引发真皮乳头细胞旁分泌一些细胞因子，从而改变了毛囊的细胞活性，调节毛发的粗细以及颜色。受到影响的毛囊细胞有：角质形成细胞，形成头发本身以及外毛根鞘和内毛根鞘；黑素细胞，形成头发的色素颜色以及微血管的内皮细胞；旁分泌的细胞因子同时也影响到真皮乳头细胞自分泌方式。在这一假说模型中，雄激素通过毛细血管到达毛乳头细胞，并与其中的雄激素受体结合，促发了激素应答元件，改变了毛乳头细胞旁分泌产生可溶性的细胞因子，作用于毛囊细胞，从而影响毛发的生长。这一假说也得到了实验的支持，采用免疫组化方法发现，真皮乳头细胞中存在雄激素受体，将从胡须部位和脱发区取到的真皮乳头细胞进行体外培养，在真皮毛乳头细胞中测到了高亲和力雄激素受体。体外培养实验发现，睾酮对单独培养的毛乳头细胞和外毛根鞘细胞的DNA的合成和细胞增殖无影响。然而，在胡须部位的毛乳头细胞和外毛根鞘细胞共培养时，睾酮对外毛根鞘细胞增殖有促进作用，但是枕部的毛乳头细胞与外毛根鞘细胞共培养时，睾酮对外毛根鞘细胞增殖无作用。实验结果说明，睾酮要发生作用，必须通过毛乳头细胞介导而产生一些特定细胞因子，然后才对毛囊表皮细胞起到促进作用。Randall 等采用先培养真皮乳头细胞，用雄激素去影响细胞的分裂及其生长的方法，得到″条件培养液″，然后以这种培养过细胞的培养液再去培养其他的细胞，发现真皮乳头细胞培养液中的一些细胞分泌的因子，如胰岛素样生长因子、干细胞生长因子和表皮生长因子等，这些生长因子促进了其他真皮乳头细胞、外毛根鞘细胞、表皮角质形成细胞及内皮细胞的有丝分裂。

针对上述发病机理，之前主要的治疗方法集中在5α还原酶抑制剂和雄激素受体阻断剂，而现在随着脂溢性脱发的发生机理进一步阐明，确定了细胞因子的影响，局部调节细胞因子将会成为一种治疗脂溢性脱发的重要手段。

根据中国医师协会美容与整形医师分会毛发整形美容专业委员会制订的《中国人雄激素性脱发诊疗指南》，见《中国美容整形外科杂志》2019年1月第 30卷第1期

雄激素性脱发(脂溢性脱发)治疗方法包括系统用药、局部用药、毛发移植术、中胚层疗法和低能量激光治疗等，具体包括以下：

1、非那雄胺仅适用于男性患者，该药通过特异性抑制II型5α还原酶，进而减少双氢睾酮的生成和对毛囊的破坏。一般在服药3个月后头发脱落减少，使用6个月后观察治疗效果。个别服药患者可出现前列腺特异性抗原减少、男性乳房发育、睾丸疼痛、过敏反应、性功能受损。

2、螺内酯仅适用于部分女性患者，可减少肾上腺产生睾酮，同时对DHT与雄激素受体的结合有轻微的竞争作用。至少服用1年才会有效果。

3、米诺地尔是能够促进毛发生长的有效外用药物，具体机制不明。平均见效时间为6～9个月，个别用药患者可能出现多毛症、刺激性和过敏性皮炎等。

4、毛发移植是将非脱发区域的毛囊提取并处理后再移植至脱发或秃发区域，以达到外形美观的方法。需要在术后6～9个月才可看到明显效果。毛发移植后建议继续使用上述防脱发药物。

5、自体富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)指自体全血经离心后得到血小板浓度相当于全血血小板浓度的4～6倍的浓缩物。PRP一经激活，血小板内的α颗粒将会释放大量的生长因子，包括血小板衍生生长因子、转化生长因子-β、类胰岛素生长因子、表皮生长因子和血管内皮生长因子等，具有改善毛囊微环境、促进毛囊生长的作用，但具体作用机制尚不完全明确。国内外各项临床研究虽初步证实PRP对AGA具有一定效果，但由于PRP的制备方法并无统一标准，因此PRP治疗的有效率尚不统一，现阶段可以作为 AGA治疗的辅助手段。PRP的不良反应主要是注射过程及注射后一段时间内的轻微疼痛。

6、低能量激光治疗2007年，美国FDA将波长为655nm的低能量激光治疗设备批准用于AGA的治疗，其作用机制尚不完全明确，连续使用3个月以上才可见到一定疗效，可以作为AGA治疗的辅助手段。

7、其他类生长因子和中草药提取物等由于缺乏严谨而有效证据，故目前尚无法推荐使用。

以上治疗方法中，治疗脱发的药物包括非那雄胺、米诺地尔、螺内酯等，这些药物的缺点是患者需要每天服用药，并且，经过长时间的服用才能发挥效果，若停止服用药物时会失去治疗效果。并且，都具有一定的副作用。

头发移植手术，这种手术费用昂贵，还具有手术部位的皮肤坏死或瘢痕瘤组织形成的风险。并且做完手术后头发的成长方向不自然或安全地移植毛囊的数量有限，使得无法给予满意的效果。

富血小板血浆(PRP)注射疗法，虽然能恢复一些患者的头发，但对患有脱发的大多数人治疗效果没有一致性。低能量激光治疗方法的疗效有限，实用价值不大。

中草药方剂众多，但治疗效果不确却，并且大多以调理身体为主，起效慢。

细胞因子类(包括生长因子)，目前大多是单独应用某一种细胞因子，这本身与毛囊组织、毛囊各细胞正常生长发育所需多种细胞因子不符，所以应用中虽有一定效果，但效果尚不理想。

发明内容

本发明所解决的技术问题是：现有的医药、医疗、美容洗护用品在脂溢性脱发方面时间长起效慢、或者效果不明显，或者费用高等问题。为了解决上述技术问题，克服现有技术的不足，本发明应用了多种细胞因子、蛋白联合应用的毛囊细胞激活因子止脱生发制剂，可对脂溢性脱发等脱发有明显预防脱发及促进头发生长的功能。

本发明的目的之一在于提供一种多种细胞因子、蛋白联合应用的毛囊细胞激活因子止脱生发制剂。该制剂是一种能在分子和基因水平上协同作用于毛囊组织、毛囊细胞，高效地调节毛囊细胞的增殖、分化、再生和毛囊的新陈代谢，增加毛细血管，改善微循环，使毛囊组织、毛囊细胞恢复正常生理生化状态的毛囊细胞激活因子止脱生发制剂。

本发明的目的之二在于提供一种毛囊细胞激活因子止脱生发制剂的制备方法，该制备方法可制备冻干粉剂及溶媒，既保证毛囊细胞激活因子的活性和产品的经济有效性，而且步骤简单易操作，节省了人力物力。

本发明的目的之三在于提供一种毛囊细胞激活因子止脱生发制剂的使用方法和具体应用。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

毛囊细胞激活因子止脱生发制剂，其是由如下以质量百分比计的组分制备而成：

毛囊细胞激活因子0.005％～0.1％；

甘露糖醇0.5％～5％；

甘氨酸1％～10％；

白蛋白0.01％～0.1％；

余量为纯化水。

所述毛囊细胞激活因子均为重组人源细胞因子、重组人源蛋白，包括碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、角质细胞生长因子(KGF或KGF1)、角质细胞生长因子2(KGF2)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子或肝细胞生长因子重链(HGF或HGFα)、成纤维细胞生长因子18(FGF18)、干细胞因子(SCF)、成纤维细胞生长因子20(FGF20)、神经生长因子(NGF)、生长激素(GH)、Wnt3a蛋白中的至少二种；

优选的，所述毛囊细胞激活因子包括碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、角质细胞生长因子(KGF或KGF1)、角质细胞生长因子2(KGF2)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子或肝细胞生长因子重链(HGF或HGFα)、成纤维细胞生长因子18(FGF18)、干细胞因子 (SCF)、成纤维细胞生长因子20(FGF20)、神经生长因子(NGF)、生长激素 (GH)、Wnt3a蛋白；

所述碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、角质细胞生长因子(KGF或KGF1)、角质细胞生长因子2(KGF2)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子或肝细胞生长因子重链(HGF或HGFα)、成纤维细胞生长因子18(FGF18)、干细胞因子(SCF)、成纤维细胞生长因子 20(FGF20)、神经生长因子(NGF)、生长激素(GH)、Wnt3a蛋白的质量比为1～10∶5～30∶5～25∶5～30∶5～20∶5～30∶1～30∶5～20∶1～15∶ 1～10∶1～15∶5～20。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

一种毛囊细胞激活因子止脱生发制剂及配套溶媒的制备方法：

配置细胞因子、蛋白母液步骤：

可采用重组大肠杆菌(E.Coli)或其他基因工程方法表达重组人源细胞因子、重组人源蛋白，通过发酵、纯化分别得到各细胞因子、蛋白，其步骤简述如下：发酵罐常规发酵基因工程菌；低速冷冻离心收集细菌，超声波破碎菌体，高速离心沉淀细菌残渣，保留上清液；使上清液流过亲和层析柱，把外源融合蛋白截留在层析介质上，加蛋白酶切割细胞因子、蛋白；洗脱细胞因子、蛋白，通过分子筛除去蛋白酶分子；配制成不同细胞因子、蛋白母液。

备料步骤：

按配比称量甘露糖醇、甘氨酸、白蛋白和细胞因子、蛋白母液，倒入混合罐，加入纯化水，搅拌，直至溶解，得到混合液A；

过滤步骤：

将混合液A经微孔过滤，得到混合液B；干燥步骤：将混合液B放入真空冷冻干燥机中，抽真空升华，出料得到毛囊细胞激活因子冻干粉剂，即毛囊细胞激活因子止脱生发制剂。

制备溶媒：

溶媒，是由如下以质量百分比计的组分混合后制备而成：

甘油4％～18％；

海藻糖1％～10％；

透明质酸0.1％～0.5％；

余量为纯化水。

本发明的目的之三采用如下技术方案实现：

毛囊细胞激活因子止脱生发制剂配合溶媒(或纯化水)的使用：

将前述的毛囊细胞激活因子止脱生发制剂以及溶媒(或纯化水)分别准备好后，将毛囊细胞激活因子止脱生发制剂和溶媒(或纯化水)二者混合摇匀，即可使用。

所述毛囊细胞激活因子止脱生发制剂在混合溶媒(或纯化水)后，混合溶液中的毛囊细胞激活因子总含量为0.002μg～100μg/mL。

具体应用为：脱发部位头皮外部搽抹、脱发部位头皮用微针纳米晶片超声波离子等方式辅助导入、脱发部位头皮皮下注射、脱发部位头皮微针贴片、加入到洗发护发产品中、做为毛囊相关组织、相关细胞的体外培养剂等。

毛囊细胞激活因子止脱生发制剂因为是二种以上甚至十二种细胞因子、蛋白组成，可分别与毛囊组织、毛囊细胞中的众多细胞作用，作用广泛，功效显著。

在众多学术论述中，这些细胞因子、蛋白用于头发、毛囊等方面的功效如下：

胰岛素样生长因子(IGF-1)：

实验证实，IGF-1可刺激培养的角朊细胞增生。Barkan等用免疫组化法证实 IGF-1存在于鼠毛囊及真皮纤维细胞内。Ph illpott等研究发现IGF-1可显著刺激毛囊生长。

IGF-1刺激体外毛发的生长，延缓毛囊进入退行期，对毛发生长期的维持起到重要作用。在用非那雄胺治疗的脂溢性脱发人群中发现，非那雄胺抑制还原酶活性的同时可使毛乳头细胞的IGF-1表达增加，与临床反应是一致的。

肝细胞生长因子(HGF)：

HGF是一种多功能多肽，可刺激各种上皮细胞、黑素细胞和内皮细胞的生长及其功能。亦有研究表明HGF对毛囊的上皮成分毛乳头细胞和真皮部分毛球内的角朊细胞均有重要的刺激作用。J indo等报道在新生小鼠触须毛囊体外培养实验中10μg/mlHGF可明显促进毛发生长和DNA合成量增加。我国范卫新等研究当HGF浓度增加到1μg/ml～10μg/ml，促生长作用达高峰。

血管内皮生长因子(VEGF)：

VEGF是血管发生和血管通透性的调节剂，人类的真皮乳头中也有表达，促进 VEGF的表达，通过直接作用于真皮乳头细胞或促进微血管的生成，从而正向影响毛发的生长。

Lachgar等从毛乳头条件培养基中分离出VEGF。后又发现雄激素可抑制头皮毛乳头细胞表达VEGF，使毛囊生长期缩短。这可能是雄激素性脱发的原因之一。Goldman等发现斑秃患者毛囊中VEGF的表达减弱或消失。范卫新等亦证明VEGF在毛囊培养的早期有促毛发生长作用，且与HGF有协同作用，机制尚不完全清楚。

神经生长因子(NGF)：

NGF在毛囊发生初期有重要的促进作用。Natalia等发现NGF促进新生胚胎鼠皮片三维培养的毛囊形态发生。

干细胞因子(SCF)：

SCF对表皮和毛发色素的形成起到重要作用，胡须部位及未秃发部位的真皮乳头细胞均分泌SCF，并对黑素细胞产生影响。成人的头皮毛囊是表达SCF受体的，虽然在体外没有测到雄激素对其有促进分泌作用，但是胡须部位SCF的分泌量比未脱发头皮的分泌量多，促进SCF的分泌将帮助毛囊的毛发变粗，颜色变深。

角质细胞生长因子(KGF)：

KGF其专一靶细胞是表皮细胞，刺激所有皮肤内的表皮基本单位包括头发毛囊、皮脂腺、汗腺生长。LaRochelle等发现毛囊中含有KGF受体；Cather ine等认为KGF可以保护生长期和休止期毛囊免受X射线损害，增加毛囊存活率达 14％。前期研究表明KGF尚能保护毛囊角质形成细胞免受细胞周期特异性化疗药阿糖胞苷、5-Fu和甲氨蝶呤引起的损伤。

成纤维细胞生长因子18(FGF18)：

FGF18是Wnt/β-联蛋白的目标基因，而后者是一个对皮肤和头发形成重要的信号传导途径。FGF18能刺激人类皮肤成纤维细胞、毛乳头细胞、表皮角化细胞、血管othelial细胞的DNA合成，因此FGF18可能是皮肤和毛发形成的重要调节剂。有研究表明，FGF18m RNA几乎只在毛囊的内根鞘细胞的毛根成型部接近毛球部表达Wnt/β-连环蛋白的信号影响毛囊发育，信号的活化作用可强制激活毛囊发生。

脂溢性脱发的发病机理已部分阐明，雄激素与雄激素受体结合后，引发靶细胞毛乳头细胞分泌多种细胞因子来调节毛囊细胞。因此，最终的调节物质为各种细胞因子。所以局部调节细胞因子的方法才是治疗脂溢性脱发最安全有效的方法。

本发明中的毛囊细胞激活因子包含最多十二种细胞因子、蛋白，均为能刺激毛囊组织、毛囊细胞活化、再生的细胞信号因子，能调节毛囊细胞的增殖、分化、再生和毛囊的新陈代谢，增加毛细血管，改善微循环，使毛囊组织、毛囊细胞恢复正常生理生化状态的，能有效地改善或治疗脂溢性脱发。并且从机理上，也适用于其他类型脱发。

附图说明

图1为双氢睾酮DHT使毛囊萎缩，导致脱发

具体实施方式

下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。

实施例1毛囊细胞激活因子止脱生发制剂的制备

一种毛囊细胞激活因子止脱生发制剂，其是由如下以质量百分比计的组分制备而成：

毛囊细胞激活因子0.005％～0.1％；甘露糖醇0.5％～5％；甘氨酸1％～ 10％；白蛋白0.01％～0.1％；余量为纯化水。

上述毛囊细胞激活因子止脱生发制剂的制备方法，包括：

配置细胞因子、蛋白母液步骤：

可采用重组大肠杆菌(E.Coli)或其他基因工程方法表达重组人源细胞因子、重组人源蛋白，通过发酵、纯化分别得到各细胞因子、蛋白，其步骤简述如下：发酵罐常规发酵基因工程菌；低速冷冻离心收集细菌，超声波破碎菌体，高速离心沉淀细菌残渣，保留上清液；使上清液流过亲和层析柱，把外源融合蛋白截留在层析介质上，加蛋白酶切割细胞因子、蛋白；洗脱细胞因子、蛋白，通过分子筛除去蛋白酶分子；配制成细胞因子、蛋白母液。

备料步骤：

按配比称量甘露糖醇、甘氨酸、白蛋白和细胞因子、蛋白母液，倒入混合罐，加入纯化水，搅拌，搅拌的速度为500-1000r/min，搅拌时间为8-12min，直至溶解，得到混合液A；

过滤步骤：

将混合液A经微孔过滤，微孔滤膜的孔径为0.2-0.3μm，得到混合液B；

干燥步骤：

将混合液B放入真空冷冻干燥机中后，真空冷冻干燥机先降温至-40至-30℃，预冻0.5-1.2h，然后自动加热，抽真空升华，真空压强为9-11MPa，升温至 30-35℃，保持5-7h，最后再停机出料得到毛囊细胞激活因子冻干粉剂，即毛囊细胞激活因子止脱生发制剂。

本发明中的重组人源细胞因子、重组人源蛋白均由本发明人自行生产提供，其余原料为市售市售医药级或化妆品级原料。

实施例2溶媒的制备

溶媒是由如下以质量百分比计的组分制备而成：

甘油4％～18％；海藻糖1％～10％；透明质酸0.1％～0.5％；余量为纯化水。

溶媒制备步骤包括：

配料步骤：按配比将透明质酸倒入混合罐，加入1/3的纯化水，加热至75- 85℃，溶解后，降温至40-50℃，得到混合液X；

填料步骤：将甘油、海藻糖倒入混合液X中，加入剩余的纯化水，搅拌均匀，得到混合液Y；

微滤步骤：将混合液Y经孔径为0.2-0.3μm的微孔过滤，得到溶媒。

本发明中的原料均为市售医药级或化妆品级原料。

实施例3毛囊细胞激活因子止脱生发制剂配合溶媒(或纯化水)的使用

将前述的毛囊细胞激活因子止脱生发制剂以及溶媒(或纯化水)分别准备好后，将毛囊细胞激活因子止脱生发制剂和溶媒(或纯化水)二者混合摇匀，即可使用。

所述毛囊细胞激活因子止脱生发制剂混合溶媒(或纯化水)后，混合溶液中的毛囊细胞激活因子的含量为0.002μg～100μg/mL。

实施例4毛囊细胞激活因子止脱生发制剂对毛发再生的试验

有研究显示脱发区域中的毛囊干细胞并未消失，只是处于异常的休止状态而无法产生毛发。

目的：通过观察毛囊细胞激活因子对体外毛囊培养中的效果，以证实毛囊细胞激活因子对毛发再生的有效性。

方法：将分离完整的毛囊随机分成实验组与对照组，实验组分别置入毛囊细胞激活因子浓度分别为0.01，0.1，1，10μg/ML无血清毛囊生长培养液中，对照组则置入不含毛囊细胞激活因子的培养液中。每孔放入6根完整毛囊，置37℃、体积分数5％CO2培养箱中培养，在倒置显微镜下用目镜测微尺每天测量每根毛囊的长度并记录。

结果、结论：

(a)与对照组相比，实验各组不同时间段毛囊生长速度均有不同程度的增快，有一定的浓度依赖性，10μg/ML时达到较好效果浓度，随后减弱。1μg/ML、10μ g/ML组生长长度显著长于对照组(P&lt；0.05)，见附表1；

(b)毛囊细胞激活因子刺激毛囊生长显示，各组均呈不同速度加速增长，而且6天前生长斜度最大，6天后生长斜度减小；

(c)结果说明，毛囊细胞激活因子对毛囊的生长有较好的促进作用，可能是直接做为信号因子调节毛囊细胞起作用。

附表1 各组毛囊第2，4，6，8天平均生长长度(mm)

表注：与对照组比较，^a，bP＜0.05。

实施例5典型试用实例：

于先生，男，50岁。脱发严重，头发从前额两侧至头顶半光，脂溢性脱发，各种治疗无效或效果不佳，已拟植发，一周理发一次，极短寸头。后做为自愿者使用了本发明的止脱生发制剂，洗发后将实施例3的毛囊细胞激活因子止脱生发制剂混合溶液用软毛刷均匀涂于头发脱发处，反复多刷至完全吸收。平均二天一次，每次使用3ml溶液。试用二十多天感觉手摸原有的头发茬子变壮了 (指理发推短后新生的头发比以前变得粗硬)，二个多月后，还有少量脱发的部位不再脱发，原先已脱发的前额中间到头顶部位，长出新发，且很密集，部分新生发质较软。共试用三月，生发效果维持，无不良反应。

实施例6典型试用实例：张先生，男，45岁。脱发严重，头发半光，脂溢性脱发，各种治疗效果不佳。后做为自愿者使用了本发明的止脱生发制剂，洗发后，将实施例3的毛囊细胞激活因子止脱生发制剂混合溶液用微针辅助导入。每周一次，每次2ml溶液。试用共二周二次，十天时原先已脱发的部位，陆续长出一部分新发。确定效果后建议其不再试用。停用后生发效果维持，无不良反应。

Claims (10)

1.一种具有止脱生发功效的毛囊细胞激活因子止脱生发制剂，其特征在于，是由如下以质量百分比计的组分制备而成：

毛囊细胞激活因子0.005％～0.1％；甘露糖醇0.5％～5％；甘氨酸1％～10％；白蛋白0.01％～0.1％；余量为纯化水；

所述毛囊细胞激活因子包括碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、角质细胞生长因子(KGF或KGF1)、角质细胞生长因子2(KGF2)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子或肝细胞生长因子重链(HGF或HGFα)、成纤维细胞生长因子18(FGF18)、干细胞因子(SCF)、成纤维细胞生长因子20(FGF20)、神经生长因子(NGF)、生长激素(GH)、Wnt3a蛋白中的至少二种。

2.根据权利要求1所述的毛囊细胞激活因子止脱生发制剂，其特征在于，所述毛囊细胞激活因子均为重组人源细胞因子、重组人源蛋白，包括碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、角质细胞生长因子(KGF或KGF1)、角质细胞生长因子2(KGF2)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子或肝细胞生长因子重链(HGF或HGFα)、成纤维细胞生长因子18(FGF18)、干细胞因子(SCF)、成纤维细胞生长因子20(FGF20)、神经生长因子(NGF)、生长激素(GH)、Wnt3a蛋白；

所述碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、角质细胞生长因子(KGF或KGF1)、角质细胞生长因子2(KGF2)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子或肝细胞生长因子重链(HGF或HGFα)、成纤维细胞生长因子18(FGF18)、干细胞因子(SCF)、成纤维细胞生长因子20(FGF20)、神经生长因子(NGF)、生长激素(GH)、Wnt3a蛋白的质量比为1～10∶5～30∶5～25∶5～30∶5～20∶5～30∶1～30∶5～20∶1～15∶1～10∶1～15∶5～20。

3.根据权利要求1所述的毛囊细胞激活因子止脱生发制剂，其特征在于，所述毛囊细胞激活因子止脱生发制剂是冻干粉剂。

4.根据权利要求3所述的毛囊细胞激活因子止脱生发制剂，其特征在于，所述毛囊细胞激活因子止脱生发制剂按照以下方法制备：

a)、采用重组大肠杆菌(E.Coli)表达人源细胞因子、人源蛋白，通过发酵、纯化分别得到各人源细胞因子、人源蛋白，配制成细胞因子、蛋白母液；

b)、甘露糖醇、甘氨酸、白蛋白和细胞因子、蛋白母液、纯化水，搅拌溶解，微孔过滤，真空冷冻干燥，得到毛囊细胞激活因子冻干粉剂。

5.一种溶媒，其特征在于，是由如下以质量百分比计的组分制备而成：

甘油5％～15％；海藻糖1％～10％；透明质酸0.1％～1％；胶原蛋白1％～8％；余量为纯化水。

6.根据权利要求5所述的溶媒在溶解毛囊细胞激活因子冻干粉剂使用时，溶液中毛囊细胞激活因子的含量为0.002μg～100μg/mL。

7.一种具有止脱生发功效的生物制剂，包括权利要求6的溶液，以及纯化水和权利要求1～6任一项所述的组合物。

8.根据权利要求7所述的生物制剂，其特征在于，毛囊细胞激活因子在生物制剂中的含量为0.002μg～100μg/mL。

9.根据权利要求8所述的生物制剂，在脂溢性脱发以及其他类型脱发中的应用。

10.根据权利要求9所述的生物制剂，其具体用法为：脱发部位头皮外部搽抹、脱发部位头皮用微针纳米晶片超声波离子等方式辅助导入、脱发部位头皮皮下注射、脱发部位头皮微针贴片、加入到洗发护发产品中、做为毛囊相关组织、相关细胞的体外培养剂等。