CN106635967A - 一种毛囊干细胞的移植方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种毛囊干细胞的移植方法，包括以下步骤：（1）干细胞的提取：在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞；（2）制备干细胞无血清培养基；（3）培养无血清毛囊干细胞；（4）根据待生发面积，利用步骤（3）所得无血清毛囊干细胞多次注射到待生发部位；采用分散注射，每次注射点少于180个，每间隔15‑45天注射一次。该毛囊干细胞的移植方法通过将人毛囊干细胞培养为无血清毛囊干细胞，然后将无血清毛囊干细胞注射到待生发部位，完成毛囊干细胞的移植，毛囊干细胞存活率可达为98%以上；整体技术和方法既合理高效，又简便实用。

Description

一种毛囊干细胞的移植方法
技术领域
本发明涉及毛发生长技术领域，具体是一种毛囊干细胞的移植方法。背景技术
生产毛发的毛囊组织借助称作毛乳头的特殊的间充质与表皮的相互作用形成。认为毛乳头与作为毛发生长、停止周期的毛发周期的进行关系也很密切。由于男性激素浓度或血液循环的恶化等种种的原因，该毛发周期发生变化，故产生男性型的脱毛症。在男性型脱毛症后期，由于生发治疗药等的效果低，并且毛乳头密度也变得疏松，故要求采用细胞移植增加毛囊组织数的治疗技术。
迄今的治疗技术中，报道了切除脱毛症发病部位皮肤后，将头部或侧头部有健康头发的头皮组织其本身植皮到脱毛症部位上。使脱毛症部位的面积减少的方法，还报道了从健康的头皮外科分离毛囊后移植到脱毛症发病部位的方法，提高了治疗效果。然而，任何一种方法虽然可以实现脱毛症部位的面积缩小，但毛囊数或毛发的总数不得不减少或与现状相同。这是由于只是使健康的毛囊移到脱发部位。因此治疗涉及宽范围的脱毛症的场合必须移皮形成更宽范围的正常头皮，或切除后成为毛囊供给的供体组织。所以按照所利用的正常皮肤的面积，预先在皮下组织中插入扩张器，慢慢地使皮肤伸长，或必须分几次手术等待皮肤的伸长，虽然是自体组织移植，但与肝脏或心脏移植之类的脏器移植同样地存在头皮组织供体不足的现状。此外，要求非常高的外科技术和采用手工作业进行组织的分离。这样的外科方法伤害性非常高，对患者来讲是强迫非常大的痛苦和负担的方法。而另一方面，作为有效的唯一的根本的治疗法是利用健康性质的毛囊覆盖脱毛症发病部位，可以得到即使处于种种脱毛症发病的主要因素中也难于脱发的头发。
鉴于这些的现状，考虑通过由极小的组织中分离患者自体细胞进行培养增殖，然后作为材料构筑毛囊，增加移植用毛囊的方法。由于毛囊由患者自己的细胞形成，故原理上不发生免疫排斥，并且由于呈现极高的生物体亲和性故也不引起异物应答，迅速地完成移植组织的修复。因此，不需要如人造毛发移植一样地经数天到数周实现人造毛发周围上皮化而使患者蒙受高感染症危害。然而，实际情况是即使将培养增殖的毛乳头细胞移植到皮肤上生发效率也极低，并且即使长出头发，头发的状态也脆弱，难以说是天然头发的再生。
为了人工诱导毛囊，必须以胚胎学的知识为基础，应用组织工程学的方法。胚胎学上如前述那样，毛囊通过表皮细胞与作为真皮细胞的毛乳头细胞的相互作用形成。另外，报道了实现该毛囊形成的相互作用可通过将培养毛乳头细胞与来自新生儿的表皮细胞混合，移植到除去全层皮肤后的筋膜上的实验来再现。此外，由于业已报道了通过人毛乳头与动物毛囊的组合形成毛囊的方法，故已知也可应用于人的脱毛症治疗。
由于现有的毛囊干细胞移植技术并不成熟，对于脱发的治疗效果也较差，存活率较低，为了改善脱发对于人们的生活产生的不良影响，有效治疗脱发，本发明提供一种治疗效果好、存活率高的毛囊干细胞的移植方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种毛囊干细胞的移植方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种毛囊干细胞的移植方法，包括以下步骤：
（1）干细胞的提取：在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞；
（2）制备干细胞无血清培养基；
（3）培养无血清毛囊干细胞：将步骤（1）的毛囊干细胞放入步骤（2）的干细胞无血清培养基中进行增殖培养，得到培养无血清毛囊干细胞；
（4）根据待生发面积，利用步骤（3）所得无血清毛囊干细胞多次注射到待生发部位；采用分散注射，每次注射点少于180个，每间隔15-45天注射一次。
作为本发明进一步的方案：所述干细胞无血清培养基包括以下组分：碱性成纤维细胞生长因子10-15ng/ml、凝血酶0.01-0.1ng/ml、重组人胰岛素1-3mg/ml、人转铁蛋白0.05-0.12mg/ml、人血白蛋白0.1-0.2mg/ml、亚硒酸钠0.1-0.5μg/ml、左旋卡尼丁0.5-1.2mM和丹参素5-10μm。
作为本发明进一步的方案：所述干细胞无血清培养基包括以下组分：碱性成纤维细胞生长因子12ng/ml、凝血酶0.02ng/ml、重组人胰岛素2mg/ml、人转铁蛋白0.1mg/ml、人血白蛋白0.14mg/ml、亚硒酸钠0.2μg/ml、左旋卡尼丁1mM和丹参素8μm。
作为本发明进一步的方案：所述步骤（2）的具体步骤为：将碱性成纤维细胞生长因子、凝血酶、重组人胰岛素、人转铁蛋白、人血白蛋白、亚硒酸钠、左旋卡尼丁和丹参素混合均匀，加入生理盐水，即得干细胞无血清培养基。
作为本发明进一步的方案：所述步骤（4）根据待生发面积，利用步骤（3）所得无血清毛囊干细胞多次注射到待生发部位；采用分散注射，每次注射点少于150个，每间隔20-40天注射一次。
作为本发明进一步的方案：所述步骤（4）根据待生发面积，利用步骤（3）所得无血清毛囊干细胞多次注射到待生发部位；采用分散注射，每次注射点少于130个，每间隔30天注射一次。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
该毛囊干细胞的移植方法通过将人毛囊干细胞培养为无血清毛囊干细胞，然后将无血清毛囊干细胞注射到待生发部位，完成毛囊干细胞的移植，毛囊干细胞存活率可达为98%以上；整体技术和方法既合理高效，又简便实用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种毛囊干细胞的移植方法，包括以下步骤：
（1）干细胞的提取：在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞；
（2）制备干细胞无血清培养基；
（3）培养无血清毛囊干细胞：将步骤（1）的毛囊干细胞放入步骤（2）的干细胞无血清培养基中进行增殖培养，得到培养无血清毛囊干细胞；
（4）根据待生发面积，利用步骤（3）所得无血清毛囊干细胞多次无菌微创注射到待生发部位；采用分散注射，每次注射点少于180个，每间隔15天注射一次。每个毛囊干细胞可长出3根头发，每个人平均有3000个毛囊，平均有9000根头发，每次注射时不要过于密集，不是一片一片注射，而是分散注射。
所述干细胞无血清培养基包括以下组分：碱性成纤维细胞生长因子10ng/ml、凝血酶0.01ng/ml、重组人胰岛素1mg/ml、人转铁蛋白0.05mg/ml、人血白蛋白0.1mg/ml、亚硒酸钠0.1μg/ml、左旋卡尼丁0.5mM和丹参素5μm。
所述步骤（2）的具体步骤为：将碱性成纤维细胞生长因子、凝血酶、重组人胰岛素、人转铁蛋白、人血白蛋白、亚硒酸钠、左旋卡尼丁和丹参素混合均匀，加入生理盐水，即得干细胞无血清培养基。
实施例1的毛囊干细胞存活率为98.1%。
实施例2
一种毛囊干细胞的移植方法，包括以下步骤：
（1）干细胞的提取：在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞；
（2）制备干细胞无血清培养基；
（3）培养无血清毛囊干细胞：将步骤（1）的毛囊干细胞放入步骤（2）的干细胞无血清培养基中进行增殖培养，得到培养无血清毛囊干细胞；
（4）根据待生发面积，利用步骤（3）所得无血清毛囊干细胞多次无菌微创注射到待生发部位；采用分散注射，每次注射点少于180个，每间隔45天注射一次。每个毛囊干细胞可长出3根头发，每个人平均有3000个毛囊，平均有9000根头发，每次注射时不要过于密集，不是一片一片注射，而是分散注射。
所述干细胞无血清培养基包括以下组分：碱性成纤维细胞生长因子15ng/ml、凝血酶0.1ng/ml、重组人胰岛素3mg/ml、人转铁蛋白0.12mg/ml、人血白蛋白0.2mg/ml、亚硒酸钠0.5μg/ml、左旋卡尼丁1.2mM和丹参素10μm。
所述步骤（2）的具体步骤为：将碱性成纤维细胞生长因子、凝血酶、重组人胰岛素、人转铁蛋白、人血白蛋白、亚硒酸钠、左旋卡尼丁和丹参素混合均匀，加入生理盐水，即得干细胞无血清培养基。
实施例2的毛囊干细胞存活率为98.3%。
实施例3
一种毛囊干细胞的移植方法，包括以下步骤：
（1）干细胞的提取：在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞；
（2）制备干细胞无血清培养基；
（3）培养无血清毛囊干细胞：将步骤（1）的毛囊干细胞放入步骤（2）的干细胞无血清培养基中进行增殖培养，得到培养无血清毛囊干细胞；
（4）根据待生发面积，利用步骤（3）所得无血清毛囊干细胞多次无菌微创注射到待生发部位；采用分散注射，每次注射点少于150个，每间隔25天注射一次。每个毛囊干细胞可长出3根头发，每个人平均有3000个毛囊，平均有9000根头发，每次注射时不要过于密集，不是一片一片注射，而是分散注射。
所述干细胞无血清培养基包括以下组分：碱性成纤维细胞生长因子12ng/ml、凝血酶0.02ng/ml、重组人胰岛素2mg/ml、人转铁蛋白0.1mg/ml、人血白蛋白0.14mg/ml、亚硒酸钠0.2μg/ml、左旋卡尼丁1mM和丹参素8μm。
所述步骤（2）的具体步骤为：将碱性成纤维细胞生长因子、凝血酶、重组人胰岛素、人转铁蛋白、人血白蛋白、亚硒酸钠、左旋卡尼丁和丹参素混合均匀，加入生理盐水，即得干细胞无血清培养基。
实施例3的毛囊干细胞存活率为98.9%。
实施例4
一种毛囊干细胞的移植方法，包括以下步骤：
（1）干细胞的提取：在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞；
（2）制备干细胞无血清培养基；
（3）培养无血清毛囊干细胞：将步骤（1）的毛囊干细胞放入步骤（2）的干细胞无血清培养基中进行增殖培养，得到培养无血清毛囊干细胞；
（4）根据待生发面积，利用步骤（3）所得无血清毛囊干细胞多次无菌微创注射到待生发部位；采用分散注射，每次注射点少于130个，每间隔30天注射一次。每个毛囊干细胞可长出3根头发，每个人平均有3000个毛囊，平均有9000根头发，每次注射时不要过于密集，不是一片一片注射，而是分散注射。
所述干细胞无血清培养基包括以下组分：碱性成纤维细胞生长因子11ng/ml、凝血酶0.06ng/ml、重组人胰岛素1.8mg/ml、人转铁蛋白0.08mg/ml、人血白蛋白0.16mg/ml、亚硒酸钠0.4μg/ml、左旋卡尼丁0.9mM和丹参素7μm。
所述步骤（2）的具体步骤为：将碱性成纤维细胞生长因子、凝血酶、重组人胰岛素、人转铁蛋白、人血白蛋白、亚硒酸钠、左旋卡尼丁和丹参素混合均匀，加入生理盐水，即得干细胞无血清培养基。
实施例4的毛囊干细胞存活率为98.4%。
该毛囊干细胞的移植方法通过将人毛囊干细胞培养为无血清毛囊干细胞，然后将无血清毛囊干细胞注射到待生发部位，完成毛囊干细胞的移植，且毛囊干细胞存活率可达为98%以上；整体技术和方法既合理高效，又简便实用。
上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下做出各种变化。

Claims (6)

1.一种毛囊干细胞的移植方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）干细胞的提取：在无菌室中，从人体后脑部表皮中提取毛囊干细胞；
（2）制备干细胞无血清培养基；
（3）培养无血清毛囊干细胞：将步骤（1）的毛囊干细胞放入步骤（2）的干细胞无血清培养基中进行增殖培养，得到培养无血清毛囊干细胞；
（4）根据待生发面积，利用步骤（3）所得无血清毛囊干细胞多次注射到待生发部位；采用分散注射，每次注射点少于180个，每间隔15-45天注射一次。
2.根据权利要求1所述的毛囊干细胞的移植方法，其特征在于，所述干细胞无血清培养基包括以下组分：碱性成纤维细胞生长因子10-15ng/ml、凝血酶0.01-0.1ng/ml、重组人胰岛素1-3mg/ml、人转铁蛋白0.05-0.12mg/ml、人血白蛋白0.1-0.2mg/ml、亚硒酸钠0.1-0.5μg/ml、左旋卡尼丁0.5-1.2mM和丹参素5-10μm。
3.根据权利要求1或2所述的毛囊干细胞的移植方法，其特征在于，所述干细胞无血清培养基包括以下组分：碱性成纤维细胞生长因子12ng/ml、凝血酶0.02ng/ml、重组人胰岛素2mg/ml、人转铁蛋白0.1mg/ml、人血白蛋白0.14mg/ml、亚硒酸钠0.2μg/ml、左旋卡尼丁1mM和丹参素8μm。
4.根据权利要求1所述的毛囊干细胞的移植方法，其特征在于，所述步骤（2）的具体步骤为：将碱性成纤维细胞生长因子、凝血酶、重组人胰岛素、人转铁蛋白、人血白蛋白、亚硒酸钠、左旋卡尼丁和丹参素混合均匀，加入生理盐水，即得干细胞无血清培养基。
5.根据权利要求1所述的毛囊干细胞的移植方法，其特征在于，所述步骤（4）根据待生发面积，利用步骤（3）所得无血清毛囊干细胞多次注射到待生发部位；采用分散注射，每次注射点少于150个，每间隔20-40天注射一次。
6.根据权利要求1所述的毛囊干细胞的移植方法，其特征在于，所述步骤（4）根据待生发面积，利用步骤（3）所得无血清毛囊干细胞多次注射到待生发部位；采用分散注射，每次注射点少于130个，每间隔30天注射一次。
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