CN112868889A - 一种动物饲料添加剂及其制备方法、动物饲料及其应用 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及动物养殖领域，具体公开了一种动物饲料添加剂及其制备方法、动物饲料及其应用。其中，动物饲料添加剂包括米曲霉、灭活嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌；动物饲料添加剂的制备方法为：S1、准备材料；S2、接种；S3、灭活；S4、干燥；S5、稀释。本申请的动物饲料添加剂可用于制备动物饲料，其具有改善反刍动物瘤胃中的发酵环境、保持瘤胃内环境稳定、稳定瘤胃内pH、降低瘤胃酸中毒风险的优点。

Description

一种动物饲料添加剂及其制备方法、动物饲料及其应用
技术领域
本申请涉及动物养殖领域，更具体地说，它涉及一种动物饲料添加剂及其制备方法、动物饲料及其应用。
背景技术
瘤胃是迄今已知的降解纤维物质能力最强的天然发酵罐，瘤胃作为草食动物中反刍动物独特的消化器官，能够有效的消化粗纤维，除产生营养物质外，对营养物质的吸收也至关重要。
高精饲料具有营养成分丰富、粗纤维含量低、可消化养分含量多等优点，使用高精饲料饲养反刍动物能够提高反刍动物的生产性能。然而，随着高精饲料的使用，也容易导致反刍动物瘤胃酸中毒的发生，从而造成瘤胃内环境紊乱，影响瘤胃内pH，减弱瘤胃对粗纤维降解能力，严重时甚至还会造成反刍动物死亡。
防治瘤胃酸中毒的传统方法主要是对草反刍动物日粮的控制，如控制淀粉的进食量或添加碱性物质，但这些措施很难从根本上解决问题。
近年，与瘤胃酸中毒相关的微生物研究逐渐受到重视，研究发现，阻止瘤胃微生物过量产酸尤其是乳酸，具有防治瘤胃酸中毒发生的作用。使用莫能菌素等离子载体抗生素对抑制微生物过量产生乳酸具有一定的效果，但是使用抗生素的同时也会抑制瘤胃内纤维降解菌对粗饲料的降解，并且由于食品安全问题，抗生素也逐渐禁用，因此使用抗生素解决瘤胃酸中毒的方式难以广泛推广应用。
针对上述中的相关技术，发明人认为目前瘤胃酸中毒的问题还得不到很好的解决，导致反刍动物食用高精饲料时，其瘤胃内的发酵环境很容易不稳定。
发明内容
为了改善反刍动物瘤胃内的发酵环境，降低瘤胃酸中毒的风险，本申请提供一种动物饲料添加剂及其制备方法、动物饲料及其应用。
第一方面，本申请提供一种动物饲料添加剂，采用如下的技术方案：
一种动物饲料添加剂，所述动物饲料添加剂包括米曲霉、灭活嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌。
通过采用上述技术方案，采用本申请的动物饲料添加剂进行饲养反刍动物，在米曲霉、灭活嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌的相互配合下，能够有效的改善反刍动物瘤胃中的发酵环境，保持瘤胃内环境稳定，稳定瘤胃内pH，从而促进瘤胃对粗纤维的降解，提高粗纤维的利用率，再提高挥发性脂肪酸和微生物蛋白的合成，为机体补充额外的蛋白质和能量，最终提高反刍动物肉制品及奶制品的品质。通过本申请的动物饲料添加剂，无需使用抗生素和激素，不仅降低了瘤胃酸中毒的风险，而且降低了食品安全的风险，还有助于满足肉制品及奶制品对量和质的要求。
优选的，所述米曲霉的浓度为5.0×107cfu/g-7.0×107cfu/g，所述灭活嗜酸乳酸杆菌的浓度为7.0×107cfu/g-9.0×107cfu/g，所述枯草芽孢杆菌的浓度为3.0×107cfu/g-5.0×107cfu/g。
通过采用上述技术方案，米曲霉和灭活嗜酸乳酸杆菌的浓度较高，本申请的动物饲料添加剂改善瘤胃发酵环境和稳定瘤胃pH的作用更显著。经测试，当米曲霉的浓度为5.0×107cfu/g-7.0×107cfu/g、灭活嗜酸乳酸杆菌的浓度为7.0×107cfu/g-9.0×107cfu/g、枯草芽孢杆菌的浓度为3.0×107cfu/g-5.0×107cfu/g时，本申请的动物饲料添加剂的性能更优异，效果更好，优选米曲霉的浓度为6.0×107cfu/g、灭活嗜酸乳酸杆菌的浓度为8.0×107cfu/g、枯草芽孢杆菌的浓度为4.0×107cfu/g。
优选的，所述动物饲料添加剂还包括米曲霉的代谢产物、嗜酸乳酸杆菌的代谢产物、枯草芽孢杆菌的代谢产物。
通过采用上述技术方案，微生物的代谢产物中含有多种酶类、挥发性脂肪酸类、维生素类、抑菌物质类等物质，将微生物发酵得到的代谢产物和微生物本身一起作用于反刍动物，两者能够共同发挥稳定瘤胃内环境的作用，从而使本申请的动物饲料添加剂对瘤胃的改善效果更加明显。
优选的，所述动物饲料添加剂还包括米曲霉液体培养基、嗜酸乳酸杆菌液体培养基、枯草芽孢杆菌液体培养基，其中：
所述米曲霉液体培养基包括以下原料：
Figure BDA0002924535060000021
所述嗜酸乳酸杆菌液体培养基包括以下原料：
Figure BDA0002924535060000031
所述枯草芽孢杆菌液体培养基包括以下原料：
Figure BDA0002924535060000032
通过采用上述技术方案，米曲霉液体培养基、嗜酸乳酸杆菌液体培养基、枯草芽孢杆菌液体培养基均包含微生物生长和维持所需要的碳水化合物、含氮物质、无机盐、水等养料，为米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌的发酵提供良好的条件和环境，有利于微生物更好的发酵。另外，米曲霉液体培养基、嗜酸乳酸杆菌液体培养基、枯草芽孢杆菌液体培养基的各原料均为纯试剂或天然物质，安全无污染。
第二方面，本申请提供一种动物饲料添加剂的制备方法，采用如下的技术方案：
一种动物饲料添加剂的制备方法，按照处理工序依次包括以下步骤：
S1、准备材料：准备米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌，并制备米曲霉液体培养基、嗜酸乳酸杆菌液体培养基、枯草芽孢杆菌液体培养基；
S2、接种：在20-35℃下，将米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种至米曲霉液体培养基、嗜酸乳酸杆菌液体培养基、枯草芽孢杆菌液体培养基内进行发酵，控制发酵温度为39-41℃，发酵通气比为0.4-1.5v/v.m，搅拌速度为45-170rpm，压强为0，并保证光照；待三种菌种的菌量均达到6×108-9后发酵完成，得到米曲霉发酵液、嗜酸乳酸杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液；
S3、灭活：将嗜酸乳酸杆菌发酵液进行灭活处理，得到灭活嗜酸乳酸杆菌发酵液；
S4、干燥：分别在米曲霉发酵液、灭活嗜酸乳酸杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液中均加入1-16％吸附剂吸附菌体1-2h，再加入1-20％保护剂，然后在进风温度为100-200℃、物料流量为0.5-2L/h下进行喷雾干燥，得到米曲霉菌粉、灭活嗜酸乳酸杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉；
S5、稀释：分别对米曲霉菌粉、灭活嗜酸乳酸杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉进行稀释，再混合，得到动物饲料添加剂。
通过采用上述技术方案，利用液体培养基对米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌三种菌种进行发酵，得到三种菌种的发酵液。将嗜酸乳酸杆菌发酵液灭活后，再将三种发酵液进行喷雾干燥成菌粉，再将菌粉进行稀释并混合，即得到本申请的动物饲料添加剂。该制备方法操作更简单、方便，操作难度更小，应用范围更广。
接种过程中，接种温度过高，容易造成菌体灭活，接种温度过低，容易造成菌体代谢程度降低，当接种温度为20-35℃时，能够使菌体的生理活性达到一个相对平衡的状态，从而更有利于菌体的发酵。发酵过程中，发酵温度、发酵通气比、搅拌速度等条件对菌体发酵的最终所得浓度均有所影响，因此应该控制好发酵温度、发酵通气比、搅拌速度。
优选的，S4中，所述吸附剂为二氧化硅，所述保护剂为脱脂乳等条件。
通过采用上述技术方案，二氧化硅作为吸附剂，能够起到载体的作用，供菌体吸附，从而保护菌体结构。脱脂乳作为保护剂，既有利于阻止菌体聚合，又有利于菌体的吸收和转化，保持细菌活性，从而减少加工过程中菌体的损失。
第三方面，本申请提供一种动物饲料，采用如下的技术方案：
一种动物饲料，包括上述方案中所述的一种动物饲料添加剂。
通过采用上述技术方案，采用本申请的动物饲料添加剂，配合其他动物饲料原料来饲养动物，不仅能够为反刍动物创造良好的发酵和消化条件，降低反刍动物发生瘤胃酸中毒的风险，赋予反刍动物正常且健康成长的环境，提高反刍动物的产量和品质，而且安全无公害，不会产生污染，也不会对人类的身体健康造成影响。
优选的，所述动物饲料添加剂的含量为500g/吨。
通过采用上述技术方案，通过对动物饲料添加剂的含量进行测试，发现当每吨动物饲料中添加500g动物饲料添加剂时，动物饲料的使用效果更好，具体表现在反刍动物的瘤胃平均pH值更稳定、饲料转化率更低、累计死亡数量更小、平均重量更大、平均日增重均更大。
优选的，所述动物饲料应用于饲养草食动物。
通过采用上述技术方案，本申请的动物饲料适用于饲养草食动物，不仅包括肉羊等反刍动物，还包括肉兔等非反刍动物。食用了本申请动物饲料的草食动物更加不容易发生瘤胃酸中毒，并且能够更好的消化粗纤维、合成微生物蛋白，从而更有利于草食动物持续、高效的生产出优质的肉制品及奶制品。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、采用本申请的动物饲料添加剂进行饲养反刍动物，在米曲霉、灭活嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌的相互配合下，能够有效的改善反刍动物瘤胃中的发酵环境，保持瘤胃内环境稳定，稳定瘤胃内pH，从而促进瘤胃对粗纤维的降解，提高粗纤维的利用率，再提高挥发性脂肪酸和微生物蛋白的合成，为机体补充额外的蛋白质和能量，最终提高反刍动物肉制品及奶制品的品质。通过本申请的动物饲料添加剂，无需使用抗生素和激素，不仅降低了瘤胃酸中毒的风险，而且降低了食品安全的风险，还有助于满足肉制品及奶制品对量和质的要求。
2、将微生物发酵得到的代谢产物和微生物本身一起作用于反刍动物，两者能够共同发挥稳定瘤胃内环境的作用，从而使动物饲料添加剂对瘤胃的改善效果更加明显。
3、米曲霉液体培养基包括硝酸钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钾、硫酸亚铁、蔗糖、水。嗜酸乳酸杆菌液体培养基包括胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、抗坏血酸、硫酸镁、甘油磷酸钠、乳糖、水。枯草芽孢杆菌液体培养基包括胰酪胨、氯化钠、大豆木瓜蛋白酶消化物、磷酸氢二钾、葡萄糖、水。各原料均为纯试剂或天然物质，安全无污染。
4、利用液体培养基对米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌三种菌种进行发酵，得到三种菌种的发酵液。将嗜酸乳酸杆菌发酵液灭活后，再将三种发酵液进行喷雾干燥成菌粉，再将菌粉进行稀释并混合，即得到本申请的动物饲料添加剂。该制备方法操作更简单、方便，操作难度更小，应用范围更广。
5、采用本申请的动物饲料添加剂，配合其他动物饲料原料来饲养反刍动物，不仅能够为反刍动物创造良好的发酵和消化条件，降低反刍动物发生瘤胃酸中毒的风险，赋予反刍动物正常且健康成长的环境，提高反刍动物的产量和品质，而且安全无公害，不会产生污染，也不会对人类的身体健康造成影响。本申请的动物饲料添加剂能够用于饲养草食动物，并且，当每吨动物饲料中添加500g动物饲料添加剂时，动物饲料的使用效果更好。
附图说明
图1是肉兔纤维素酶活力试验中葡萄糖标准曲线和回归方程的示意图。
图2是肉兔纤维素酶活力试验中肉兔胃液平均纤维素酶活力测试的结果示意图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本申请作进一步详细说明。
瘤胃是一种消化器官，能够有效的消化粗纤维，产生营养物质，并作用于营养物质的吸收。然而，在高精饲料的作用下，瘤胃容易发生酸中毒，从而造成瘤胃内环境紊乱，影响瘤胃内pH，减弱瘤胃对粗纤维降解能力，严重时甚至还会造成反刍动物死亡。
为了解决该问题，本申请人对动物饲料的添加剂进行了大量研究，以图找到能够改善反刍动物瘤胃内的发酵环境，降低瘤胃酸中毒风险的方法。结果，本申请人发现，米曲霉、灭活嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌的相互配合能够改善反刍动物瘤胃内的发酵环境，从而成功解决了本申请所要解决的技术问题。
以具体实施例作具体说明，实施例中的材料均由市场购买获得，其中：
米曲霉购自GDMCC，编号为3.470；
嗜酸乳酸杆菌购自GDMCC，编号为1.731；
枯草芽孢杆菌购自GDMCC，编号为1.784；
肉羊饲料购自新希望六合集团；
肉兔饲料购自新希望六合集团。
制备例
米曲霉液体培养基的制备例1
米曲霉液体培养基包括的原料以及原料的用量见表1，将各原料按照用量加入已经清洁及消毒灭菌处理的配料罐中，搅拌均匀，得到米曲霉液体培养基。
米曲霉液体培养基的制备例2
米曲霉液体培养基包括的原料以及原料的用量见表1，将各原料按照用量加入已经清洁及消毒灭菌处理的配料罐中，搅拌均匀，得到米曲霉液体培养基。
米曲霉液体培养基的制备例3
米曲霉液体培养基包括的原料以及原料的用量见表1，将各原料按照用量加入已经清洁及消毒灭菌处理的配料罐中，搅拌均匀，得到米曲霉液体培养基。
表1米曲霉液体培养基的原料以及原料的用量
Figure BDA0002924535060000071
嗜酸乳酸杆菌液体培养基的制备例1
嗜酸乳酸杆菌液体培养基包括的原料以及原料的用量见表2，将各原料按照用量加入已经清洁及消毒灭菌处理的配料罐中，搅拌均匀，得到嗜酸乳酸杆菌液体培养基。
嗜酸乳酸杆菌液体培养基的制备例2
嗜酸乳酸杆菌液体培养基包括的原料以及原料的用量见表2，将各原料按照用量加入已经清洁及消毒灭菌处理的配料罐中，搅拌均匀，得到嗜酸乳酸杆菌液体培养基。
嗜酸乳酸杆菌液体培养基的制备例3
嗜酸乳酸杆菌液体培养基包括的原料以及原料的用量见表2，将各原料按照用量加入已经清洁及消毒灭菌处理的配料罐中，搅拌均匀，得到嗜酸乳酸杆菌液体培养基。
表2嗜酸乳酸杆菌液体培养基的原料以及原料的用量
Figure BDA0002924535060000081
枯草芽孢杆菌液体培养基的制备例1
枯草芽孢杆菌液体培养基包括的原料以及原料的用量见表3，将各原料按照用量加入已经清洁及消毒灭菌处理的配料罐中，搅拌均匀，得到枯草芽孢杆菌液体培养基。
枯草芽孢杆菌液体培养基的制备例2
枯草芽孢杆菌液体培养基包括的原料以及原料的用量见表3，将各原料按照用量加入已经清洁及消毒灭菌处理的配料罐中，搅拌均匀，得到枯草芽孢杆菌液体培养基。
枯草芽孢杆菌液体培养基的制备例3
枯草芽孢杆菌液体培养基包括的原料以及原料的用量见表3，将各原料按照用量加入已经清洁及消毒灭菌处理的配料罐中，搅拌均匀，得到枯草芽孢杆菌液体培养基。
表3枯草芽孢杆菌液体培养基的原料以及原料的用量
Figure BDA0002924535060000091
实施例
实施例1
实施例1公开一种动物饲料添加剂，包括米曲霉、灭活嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌，还包括其中米曲霉的代谢产物、灭活嗜酸乳酸杆菌的代谢产物、枯草芽孢杆菌的代谢产物。米曲霉的浓度为5.0×107cfu/g，嗜酸乳酸杆菌的浓度为7.0×107cfu/g，枯草芽孢杆菌的浓度为3.0×107cfu/g。
实施例1还公开一种动物饲料添加剂的制备方法，按照处理工序依次包括以下步骤：
S1、准备材料
准备米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌，并分别采用米曲霉液体培养基的制备例1、嗜酸乳酸杆菌液体培养基的制备例1、枯草芽孢杆菌液体培养基的制备例1制备米曲霉液体培养基、嗜酸乳酸杆菌液体培养基、枯草芽孢杆菌液体培养基。
S2、接种
S21、在20℃下，将米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌分别随相应液体培养基的原料边搅拌边加入配料罐中。
S22、将三种液体培养基加入发酵罐内，控制发酵温度为39℃，发酵通气比为0.4v/v.m，搅拌速度为145rpm，发酵罐内罐压为0。发酵罐顶部安装100W白炽灯，在发酵过程中打开，保证光照。发酵过程中前期通气量大，随着泡沫的不断上升，逐渐降低通气量，控制pH在5.0以下，待发酵罐内三种菌种的菌量均达到6×108-9(活菌计数法)后发酵完成，得到米曲霉发酵液、嗜酸乳酸杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液。
S3、灭活
将嗜酸乳酸杆菌发酵液按照专利号为ZL200810068138.X中记载的灭活方法进行灭活处理，得到灭活嗜酸乳酸杆菌发酵液。
S4、干燥
分别在米曲霉发酵液、灭活嗜酸乳酸杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液中均加入1％二氧化硅吸附菌体1h，再加入1％脱脂乳，然后在进风温度为100℃、物料流量为0.5L/h下进行喷雾干燥，得到米曲霉菌粉、灭活嗜酸乳酸杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉。
S5、稀释
分别对米曲霉菌粉、灭活嗜酸乳酸杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉进行稀释，使稀释后米曲霉的浓度为5.0×107cfu/g、嗜酸乳酸杆菌的浓度为7.0×107cfu/g、枯草芽孢杆菌的浓度为3.0×107cfu/g，再混合，得到动物饲料添加剂。
实施例2
实施例2公开一种动物饲料添加剂，包括米曲霉、灭活嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌，还包括其中米曲霉的代谢产物、灭活嗜酸乳酸杆菌的代谢产物、枯草芽孢杆菌的代谢产物。米曲霉的浓度为7.0×107cfu/g，嗜酸乳酸杆菌的浓度为9.0×107cfu/g，枯草芽孢杆菌的浓度为5.0×107cfu/g。
实施例2还公开一种动物饲料添加剂的制备方法，按照处理工序依次包括以下步骤：
S1、准备材料
准备米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌，并分别采用米曲霉液体培养基的制备例2、嗜酸乳酸杆菌液体培养基的制备例2、枯草芽孢杆菌液体培养基的制备例2制备米曲霉液体培养基、嗜酸乳酸杆菌液体培养基、枯草芽孢杆菌液体培养基。
S2、接种
S21、在35℃下，将米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌分别随相应液体培养基的原料边搅拌边加入配料罐中。
S22、将三种液体培养基加入发酵罐内，控制发酵温度为41℃，发酵通气比为1.5v/v.m，搅拌速度为170rpm，发酵罐内罐压为0。发酵罐顶部安装100W白炽灯，在发酵过程中打开，保证光照。发酵过程中前期通气量大，随着泡沫的不断上升，逐渐降低通气量，控制pH在5.0以下，待发酵罐内三种菌种的菌量均达到6×108-9(活菌计数法)后发酵完成，得到米曲霉发酵液、嗜酸乳酸杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液。
S3、灭活
将嗜酸乳酸杆菌发酵液按照专利号为ZL200810068138.X中记载的灭活方法进行灭活处理，得到灭活嗜酸乳酸杆菌发酵液。
S4、干燥
分别在米曲霉发酵液、灭活嗜酸乳酸杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液中均加入16％二氧化硅吸附菌体2h，再加入20％脱脂乳，然后在进风温度为200℃、物料流量为2L/h下进行喷雾干燥，得到米曲霉菌粉、灭活嗜酸乳酸杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉。
S5、稀释
分别对米曲霉菌粉、灭活嗜酸乳酸杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉进行稀释，使稀释后米曲霉的浓度为7.0×107cfu/g、嗜酸乳酸杆菌的浓度为9.0×107cfu/g、枯草芽孢杆菌的浓度为5.0×107cfu/g，再混合，得到动物饲料添加剂。
实施例3
实施例3公开一种动物饲料添加剂，包括米曲霉、灭活嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌，还包括其中米曲霉的代谢产物、灭活嗜酸乳酸杆菌的代谢产物、枯草芽孢杆菌的代谢产物。米曲霉的浓度为6.0×107cfu/g，嗜酸乳酸杆菌的浓度为8.0×107cfu/g，枯草芽孢杆菌的浓度为4.0×107cfu/g。
实施例3还公开一种动物饲料添加剂的制备方法，按照处理工序依次包括以下步骤：
S1、准备材料
准备米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌，并分别采用米曲霉液体培养基的制备例3、嗜酸乳酸杆菌液体培养基的制备例3、枯草芽孢杆菌液体培养基的制备例3制备米曲霉液体培养基、嗜酸乳酸杆菌液体培养基、枯草芽孢杆菌液体培养基。
S2、接种
S21、在30℃下，将米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌分别随相应液体培养基的原料边搅拌边加入配料罐中。
S22、将三种液体培养基加入发酵罐内，控制发酵温度为40℃，发酵通气比为1v/v.m，搅拌速度为155rpm，发酵罐内罐压为0。发酵罐顶部安装100W白炽灯，在发酵过程中打开，保证光照。发酵过程中前期通气量大，随着泡沫的不断上升，逐渐降低通气量，控制pH在5.0以下，待发酵罐内三种菌种的菌量均达到6×108-9(活菌计数法)后发酵完成，得到米曲霉发酵液、嗜酸乳酸杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液。
S3、灭活
将嗜酸乳酸杆菌发酵液按照专利号为ZL200810068138.X中记载的灭活方法进行灭活处理，得到灭活嗜酸乳酸杆菌发酵液。
S4、干燥
分别在米曲霉发酵液、灭活嗜酸乳酸杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液中均加入8％二氧化硅吸附菌体1.5h，再加入9.5％脱脂乳，然后在进风温度为160℃、物料流量为1.5L/h下进行喷雾干燥，得到米曲霉菌粉、灭活嗜酸乳酸杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉。
S5、稀释
分别对米曲霉菌粉、灭活嗜酸乳酸杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉进行稀释，使稀释后米曲霉的浓度为6.0×107cfu/g、嗜酸乳酸杆菌的浓度为8.0×107cfu/g、枯草芽孢杆菌的浓度为4.0×107cfu/g，再混合，得到动物饲料添加剂。
实施例4
实施例4公开一种动物饲料，包括500g实施例1的动物饲料添加剂，还包括0.9995吨肉羊饲料。将动物饲料添加剂加入肉羊饲料中，搅拌均匀，得到动物饲料。
实施例5
实施例5公开一种动物饲料，与实施例4的区别在于，包括500g实施例2的动物饲料添加剂。
实施例6
实施例6公开一种动物饲料，与实施例4的区别在于，包括500g实施例3的动物饲料添加剂。
对比例
对比例1
对比例1公开一种动物饲料，与实施例6的不同之处在于，动物饲料添加剂中不包括米曲霉，动物饲料添加剂的制备方法作相应调整。
对比例2
对比例2公开一种动物饲料，与实施例6的不同之处在于，动物饲料添加剂中不包括嗜酸乳酸杆菌，动物饲料添加剂的制备方法作相应调整。
对比例3
对比例3公开一种动物饲料，与实施例6的不同之处在于，不包括动物饲料添加剂。
对比例4
对比例4公开一种动物饲料，与实施例6的不同之处在于，包括250g实施例3的动物饲料添加剂，还包括0.99975吨肉羊饲料。
对比例5
对比例5公开一种动物饲料，与实施例6的不同之处在于，包括1000g实施例3的动物饲料添加剂，还包括0.999吨肉羊饲料。
肉羊累计死亡数量、平均重量、平均日增重量、平均饲料转化率、平均pH值试验60
取600只生长状况良好、大小基本均匀、4日龄的肉羊，随机且平均分成A-H组，分别使用实施例4-6、对比例1-5的动物饲料饲养A-H组的肉羊。从各组随机挑选50只肉羊，在第1，14，21，28，35和42天时称重，收集在同一时期各组肉羊的累计死亡数量、平均重量、平均日增重量，并计算各组肉羊42天后的饲料转化率。同时，收集在同一时期各组肉羊饲养动物饲料之前的瘤胃液，并测定各组肉羊瘤胃液的平均pH值。累计死亡数量的测试结果见表4，平均重量的测试结果见表5，平均日增重量的测试结果见表6，平均饲料转化率的测试结果见表7，平均pH值的测试结果见表8。
其中，饲料转化率的计算公式为：
饲料转化率＝消耗饲料总量(kg)/增重总量(kg)
表4各组肉羊的累计死亡数量(只)
饲养天数/d A组 B组 C组 D组 E组 F组 G组 H组
1 - - - - - - - -
14 0 0 0 1 1 1 1 0
21 0 0 0 2 2 3 2 1
28 1 1 1 2 3 4 3 1
35 2 1 1 4 3 4 4 2
42 2 2 1 5 5 5 4 2
表5各组肉羊的平均重量(kg)
饲养天数/d A组 B组 C组 D组 E组 F组 G组 H组
1 5.69 6.04 5.47 5.36 5.92 5.10 6.23 6.25
14 7.52 7.89 7.35 6.99 7.59 6.72 7.91 8.04
21 9.04 9.44 8.94 8.43 9.02 8.03 9.36 9.51
28 10.64 11.08 10.63 9.68 10.36 9.44 10.84 11.10
35 12.45 12.90 12.47 11.23 11.85 10.95 12.49 12.87
42 13.90 14.32 13.92 12.49 13.12 12.27 13.86 14.43
表6各组肉羊的平均日增重量(g/d)
饲养天数/d A组 B组 C组 D组 E组 F组 G组 H组
1 - - - - - - - -
14 140.77 142.31 144.62 125.38 128.46 124.62 129.23 137.69
21 217.14 221.43 227.14 205.71 204.29 187.14 207.14 210.00
28 228.57 234.29 241.43 178.57 191.43 201.43 211.43 227.14
35 258.57 260.00 262.86 221.43 212.86 215.71 235.71 252.86
42 207.14 202.86 207.14 180.00 181.43 188.57 195.71 222.86
表7各组肉羊42天后的饲料转化率(FCR)
组别 A组 B组 C组 D组 E组 F组 G组 H组
FCR 1.92 1.89 1.87 1.99 2.10 2.14 1.97 1.80
表8各组肉羊的瘤胃液的平均pH值
饲养天数/d A组 B组 C组 D组 E组 F组 G组 H组
1 6.7 6.7 6.8 6.7 6.8 6.8 6.9 6.9
14 6.7 6.8 6.9 6.5 6.7 6.6 7.0 6.9
21 6.8 6.8 6.8 6.6 6.7 6.7 7.0 7.3
28 6.9 6.9 6.9 6.8 6.8 6.5 7.5 7.4
35 6.9 7.0 7.0 6.8 6.9 6.5 7.6 7.3
42 7.0 7.0 7.0 6.9 6.9 6.6 7.7 7.4
结合实施例4-6、对比例1-5并结合表4-8可以看出，A-C组的肉羊在饲养过程的各时间段中，肉羊的累计死亡数量更少，肉羊的平均重量增加更显著，平均日增重量更大，饲料转化率更低，平均pH值呈稳定上升趋势，并且均上升至7.0或以上，说明本申请的动物饲料添加剂以及包括本申请动物饲料添加剂的动物饲料不仅能够有效的改善反刍动物瘤胃中的发酵环境，保持瘤胃内环境稳定，稳定瘤胃内pH，而且有利于提高反刍动物成长速度、降低动物死亡率、提高饲料利用率、降低饲养成本。
F组的动物饲料为不包括本申请动物物饲料添加剂的动物饲料，即F组的动物饲料为现有的动物饲料。对比A-C组和F组可以看出，A-C组的各项指标结果均更加理想，表明相对于现有的动物饲料，本申请的动物饲料添加剂以及包括本申请动物饲料添加剂的动物饲料对反刍动物瘤胃内发酵环境的改善效果更好，能够明显对瘤胃内的pH起到很好的调节和缓冲的作用，从而大大降低了瘤胃酸中毒的风险。
对比A-C组和D-E组，D组缺少米曲霉，E组缺少灭活嗜酸乳酸杆菌，从表4-8可以看出，D-E组的肉羊累计死亡数量、平均重量的增加、平均日增重量均明显降低，饲料转化率明显升高，而且瘤胃液的平均pH值在前期呈下降趋势，在后期略有上升，说明肉羊瘤胃液的pH值较不稳定，酸中毒风险增加。因此，D-E组的各项指标的测试结果均明显差于A-C组，个别指标甚至与F组相当，证明了本申请的动物饲料添加剂的优异性能需要米曲霉、灭活嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌，以及三种菌种的代谢产物的相互配合，三种菌种缺一不可。
对比A-C组和G-H组可以发现，随着动物饲料添加剂用量的增加，肉羊的整体情况基本呈逐渐变好的趋势，包括饲料转化率逐渐降低。其中，C组的动物饲料添加剂的用量为G组的两倍，饲料转化率降低了0.1，H组的动物饲料添加剂的用量为G组的四倍，饲料转化率却只降低了0.17，说明在一定范围内，饲料转化率随动物饲料添加剂的增加而快速降低，但超过一定范围时，随着动物饲料添加剂的继续增加，饲料转化率的降低速度下降。为降低整体饲养成本，优选动物饲料添加剂的用量为每吨饲料添加500g动物饲料添加剂，此时动物饲料添加剂的使用效果更好、使用成本更低，综合经济效益更好。
肉羊瘤胃的微生物蛋白产量试验
对肉羊累计死亡数量、平均重量、平均日增重量、平均饲料转化率、平均pH值试验中C、F-H组的肉羊进行瘤胃的微生物蛋白产量测试，测试方法为：
1、肉羊尿液的采集与指标的测定：采用点收尿法，结合人工接尿和膀胱取尿。采集时间为预试期的第1-3d(目的是更换肠的内容物，观察肉羊的采食、排尿规律，便于收集尿液，同时使肉羊适应试验环境)、正式试验期的第28-30d、58-60d。在尿样中加入10％硫酸调节pH值，使pH值<3，将尿样置于-20℃保存。对尿液使用型号为UV-1800PC的分光光度计测定尿酸，并使用型号为DNM-9602的酶标分析仪测定尿囊素。
2、尿酸与尿囊素的含量之和为嘌呤衍生物(PD)，按照以下公式，根据尿中(PD)计算瘤胃的微生物蛋白(MCP)产量。
PD(mmol/d)＝0.85X+0.385BW0.75
MCP(g/d)＝6.25×(70X)/(0.83×0.116×1000)
其中，0.85为肠道吸收的嘌呤转化为尿中PD的回收率；X为小肠吸收外源性嘌呤数量(mmol/d)；0.385BW0.75为内源嘌呤衍生物的数量；6.25为氮与蛋白质的换算系数；70为每mmol嘌呤的含氮量(mg/mmol)；0.83为微生物核酸嘌呤的消化率；0.116为瘤胃微生物总氮中嘌呤氮的比例。
以正试期第28-30、58-60天瘤胃MCP产量的平均值作为正试期内瘤胃的微生物蛋白平均产量，测试结果见表9。
表9C、F-H组肉羊瘤胃的微生物蛋白平均产量
组别 尿素(mmol/d) 尿囊素(mmol/d) PD(mmol/d) MCP(g/d)
C组 28.02 290.41 318.43 1446.96
F组 26.06 259.32 285.38 1296.78
G组 26.9 284.58 311.48 1415.38
H组 27.39 288.64 316.03 1436.05
结合实施例6、对比例3-5并结合表9可以看出，相对于F组，C、G-H组的肉羊瘤胃的微生物蛋白平均产量显著提高，说明使用本申请的动物饲料添加剂能够有效的调节肉羊瘤胃及肠道的微生态平衡，促使胃肠道厌氧菌的繁殖，增强营养物质消化吸收，增强机体免疫力，刺激瘤胃微生物合成菌体蛋白，降低瘤胃中氨的浓度，有利于氨基酸营养平衡，提高挥发性脂肪酸和微生物蛋白的合成，从而提高肉制品及奶制品的品质。优选的，动物饲料添加剂的用量为每吨饲料添加500g动物饲料添加剂时，肉羊瘤胃的微生物蛋白平均产量最佳。
实施例7
实施例7公开一种动物饲料，包括500g实施例3的动物饲料添加剂，还包括0.9995吨肉兔饲料。将动物饲料添加剂加入肉兔饲料中，搅拌均匀，得到动物饲料。
对比例6
对比例6公开一种动物饲料，与实施例7的不同之处在于，不包括动物饲料添加剂。
对比例7
对比例7公开一种动物饲料，与实施例7的不同之处在于，包括250g实施例3的动物饲料添加剂，还包括0.99975吨肉兔饲料。
对比例8
对比例8公开一种动物饲料，与实施例7的不同之处在于，包括1000g实施例3的动物饲料添加剂，还包括0.999吨肉兔饲料。
肉兔纤维素酶活力试验
取200只生长状况良好、大小基本均匀、10日龄的肉兔，随机且平均分成I-L组，分别使用实施例7、对比例6-8的动物饲料饲养I-L组的肉兔。从各组随机挑选25只肉羊，收集在第30天时各组肉兔的饲养动物饲料之前的胃液，并测试各组肉兔胃液的纤维素酶活力，测试方法为：
1、DNS试剂的配制：称取3，5-二硝基水杨酸3.15g(化学纯)，加水500mL，搅拌5s，水浴至45℃。然后逐步加入100mL 0.2g/mL的氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，直到溶液清澈透明(在加入氢氧化钠过程中，溶液温度不要超过48℃)。再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g、苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g。继续45℃水浴加热，同时补加水300mL，不断搅拌，直到加入的物质完全溶解。停止加热，冷却至室温后，用水定容至1000mL。用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。
2、醋酸-醋酸钠缓冲液的配制：称取乙酸钠10.52g溶解在450mL蒸馏水中，用冰醋酸将溶液pH值调至4.8左右，最后定容至500mL。
3、0.1％的羧甲基纤维素-钠溶液的配制：1000mL的水和1g羧甲基纤维钠加到大烧瓶里,放入磁子,常温搅拌至羧甲基纤维钠全部溶解,静置取上清液使用。
4、葡萄糖标准溶液的配制：称取100mg的干燥葡萄糖溶于50mL蒸馏水中，再定容至100mL，配制成浓度为1g/L的葡萄糖标准溶液。
5、绘制葡萄糖标准曲线：取15个玻璃试管，每个试管中分别加入0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4mL的葡萄糖标准溶液，再分别加入醋酸-醋酸钠缓冲液定容至5mL，再分别加入2mL DNS试剂，沸水浴10min，取出冷却至常温，用蒸馏水定容至25mL，测定溶液在540mm处的吸光度(OD值)。以葡萄糖含量为横坐标，OD值为纵坐标绘制葡萄糖标准曲线，得到回归方程。葡萄糖标准曲线和回归方程见图1。
6、取多支玻璃试管，在每支玻璃试管中加入1mL 0.1％的羧甲基纤维素-钠溶液，2mL醋酸-醋酸钠缓冲液，再在每支玻璃试管中分别加入1mL一组肉兔胃液，45℃水浴30min。混合液冷却至常温时加入2mL DNS试剂，沸水浴5min，取出冷却至常温，用蒸馏水定容体系至25mL，测定溶液在540mm处的OD值。
7、定义酶活单位为单位时间内，使得纤维素水解生成1μg葡萄糖的酶液量。酶活力(IU/mL)＝(葡萄糖含量(mg)×稀释倍数×5.56)/(反应液中加入的酶液量(mL)×时间(min))。将各组测得的每只肉兔胃液的OD平均值代入葡萄糖标准曲线的回归方程中，算出葡萄糖含量，再根据酶活力的公式计算各组肉兔胃液的平均纤维素酶活力，测试结果见图2。
结合实施例7、对比例6-8并结合图1-2可以看出，相对于J组，I、K-L组的肉兔的平均纤维素酶活力明显升高，其中，当动物饲料添加剂的含量为500g时，即I组，平均纤维素酶活力最大，其远远大于J组的平均纤维素酶活力，说明使用本申请的动物饲料添加剂能够有效的促进肉兔胃内粗纤维的降解，提高粗纤维的利用率，并且产生葡萄糖作为其它肠道菌群的营养，改善草食动物胃肠道的生态平衡，从而更有利于草食动物持续、高效的生产出优质的肉制品及奶制品。同时，也证明了本申请的动物饲料添加剂能够适用于饲养草食动物，不仅包括肉羊等反刍动物，还包括肉兔等非反刍动物。
此外，虽然I组的动物饲料添加剂的用量为500g/吨，L组的动物饲料添加剂的用量为1000g/吨，但两组的胃液平均纤维素酶活力差异不显著，甚至I组的胃液平均纤维素酶活力超过了L组，故综合考虑在每吨饲料添加500g草食动物饲料添加剂，能够保证动物饲料添加剂的作用，同时符合实际生产的需要，获得的经济效益最佳。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (9)

1.一种动物饲料添加剂，其特征在于，所述动物饲料添加剂包括米曲霉、灭活嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述的一种动物饲料添加剂，其特征在于：所述米曲霉的浓度为5.0×107cfu/g-7.0×107cfu/g，所述灭活嗜酸乳酸杆菌的浓度为7.0×107cfu/g-9.0×107cfu/g，所述枯草芽孢杆菌的浓度为3.0×107cfu/g-5.0×107cfu/g。
3.根据权利要求1所述的一种动物饲料添加剂，其特征在于：所述动物饲料添加剂还包括米曲霉的代谢产物、嗜酸乳酸杆菌的代谢产物、枯草芽孢杆菌的代谢产物。
4.根据权利要求1所述的一种动物饲料添加剂，其特征在于：所述动物饲料添加剂还包括米曲霉液体培养基、嗜酸乳酸杆菌液体培养基、枯草芽孢杆菌液体培养基，其中：
所述米曲霉液体培养基包括以下原料：
硝酸钠 2.5-3g/L
磷酸氢二钾 1-1.5g/L
硫酸镁 0.5-0.8g/L
氯化钾 0.5-0.8g/L
硫酸亚铁 0.01-0.05g/L
蔗糖 30-32g/L
水；
所述嗜酸乳酸杆菌液体培养基包括以下原料：
胰酪蛋白胨 4.5-5g/L
大豆蛋白胨 4.5-5g/L
牛肉浸粉 5-5.5g/L
酵母浸粉 2.5-3g/L
抗坏血酸 0.5-0.8g/L
硫酸镁 0.25-0.3g/L
甘油磷酸钠 19-23g/L
乳糖 5-8g/L
水；
所述枯草芽孢杆菌液体培养基包括以下原料：
胰酪胨 17-20g/L
氯化钠 5-8g/L
大豆木瓜蛋白酶消化物 3-5g/L
磷酸氢二钾 2.5-3g/L
葡萄糖 2.3-2.6g/L
水。
5.一种动物饲料添加剂的制备方法，其特征在于：按照处理工序依次包括以下步骤：
S1、准备材料：准备米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌，并制备米曲霉液体培养基、嗜酸乳酸杆菌液体培养基、枯草芽孢杆菌液体培养基；
S2、接种：在20-35℃下，将米曲霉、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种至米曲霉液体培养基、嗜酸乳酸杆菌液体培养基、枯草芽孢杆菌液体培养基内进行发酵，控制发酵温度为39-41℃，发酵通气比为0.4-1.5v/v.m，搅拌速度为45-170rpm，压强为0，并保证光照；待发酵完成，得到米曲霉发酵液、嗜酸乳酸杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液；
S3、灭活：将嗜酸乳酸杆菌发酵液进行灭活处理，得到灭活嗜酸乳酸杆菌发酵液；
S4、干燥：分别在米曲霉发酵液、灭活嗜酸乳酸杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液中均加入1-16%吸附剂吸附菌体1-2h，再加入1-20%保护剂，然后在进风温度为100-200℃、物料流量为0.5-2L/h下进行喷雾干燥，得到米曲霉菌粉、灭活嗜酸乳酸杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉；
S5、稀释：分别对米曲霉菌粉、灭活嗜酸乳酸杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉进行稀释，再混合，得到动物饲料添加剂。
6.根据权利要求5所述的一种动物饲料添加剂的制备方法，其特征在于：S4中，所述吸附剂为二氧化硅，所述保护剂为脱脂乳。
7.一种动物饲料，其特征在于：包括权利要求1-4任意一项所述的一种动物饲料添加剂。
8.根据权利要求7所述的一种动物饲料，其特征在于：所述动物饲料添加剂的含量为500g/吨。
9.权利要求7或8所述的一种动物饲料的应用，其特征在于：所述动物饲料应用于饲养草食动物。
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