CN112293571A - 一种用于液态饲喂的仔猪生物配合饲料 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于液态饲喂的仔猪生物配合饲料，可有效解决现有饲料中添加抗生素带来的药物残留问题，其解决的技术方案是，该配合饲料在原仔猪用配合饲料的基础上，添加乳酸杆菌106‑107CFU/g、葡萄糖氧化酶10‑15U/g、α‑半乳糖苷酶5‑10U/g，采取液态饲喂，饲喂时水料重量比为3:1，本发明产品适口性好，能够增加消化道酸度抑制病原菌生长，促进肠道健康，提高免疫力，适合规模化生产，不产生粉尘，有利于猪只健康，是仔猪生物配合饲料上的创新。

Description

一种用于液态饲喂的仔猪生物配合饲料
技术领域
本发明涉及生物饲料领域，特别是一种用于液态饲喂的仔猪生物配合饲料。
背景技术
抗生素作为饲料添加剂，可预防动物疾病、改善动物健康、提高饲料利用率，促进肉蛋奶的生产，对畜牧养殖业的快速发展做出了贡献，同时也产生了很多严重问题，饲料中添加抗生素带来的药物残留危害十分显著，长期使用抗生素导致致病菌的耐药性增强产生耐药性超级细菌，同时污染了环境，从而危害人类健康，随着物质生活水平的日益提高，食品安全问题越来越受到关注，人们开始寻求安全、有效的无抗饲料，即发展安全、健康的养殖成为当务之急。欧盟自2006年全面禁止使用抗生素类饲料添加剂，我国农村农业部第194号公告，自2020年起饲料中全面禁止使用抗生素，饲料端“禁抗”、养殖端“减抗、限抗”大势所趋，随着我国饲料资源的日趋紧张及抗生素的禁用，“禁抗”、“减抗”是未来养殖业发展趋势，积极寻找健康多元化的饲料资源及安全高效的饲料生产模式，成为了函待解决的首要任务，是压力所在，是必须面临的挑战。
近年来，生物发酵技术发展日新月异，在饲料行业中的应用越来越广泛，现出巨大的潜力，生物饲料作为一种新型、绿色的环境友好型饲料，制作过程中含有大量有益微生物和酶制剂，具有改善胃肠道健康和提高畜禽生产性能等功效，生物饲料有着安全高效、环境友好、无残留的特点，是比较有效的实现无抗养殖的手段。因此，发明一种液态饲喂的仔猪生物配合饲料势在必行。
发明内容
针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种用于液态饲喂的仔猪生物配合饲料，可有效解决现有饲料中添加抗生素带来的药物残留问题。
本发明解决的技术方案是，该配合饲料在原仔猪用配合饲料的基础上，添加乳酸杆菌106-107CFU/g、葡萄糖氧化酶10-15U/g、α-半乳糖苷酶5-10U/g，采取液态饲喂，饲喂时水料重量比为3:1。
所述的原仔猪用配合饲料为：仔猪前期日粮组成：一级玉米13.0％、膨化玉米25.0％、膨化大豆24.0％、豆粕6.0％、进口鱼粉7.0％、乳清粉15.0％、仔猪预混料10.0％，仔猪预混料(每千克饲料提供)组成：VA10000IU、VD33 000IU、VE30 IU、VK32.00 mg、VB12.50mg、VB2 6.00mg、VB63.20 mg、VB12 0.04mg、泛酸15.00mg、烟酸45.00mg、生物素0.10mg、叶酸1.50mg、锰40.00mg、铁120.00mg、铜10.00mg、锌130.00mg、硒0.30mg、碘0.50mg。
仔猪后期日粮组成：一级玉米39.0％、膨化玉米13.0％、膨化大豆21.0％、豆粕8.0％、进口鱼粉4.0％、乳清粉5.0％、仔猪预混料10.0％，仔猪预混料(每千克饲料提供)：VA9000IU、VD3 2900IU、VE30 IU、VK33.00 mg、VB1 3.00mg、VB2 8.00mg、VB66.20 mg、VB120.04mg、泛酸15.00mg、烟酸40.00mg、生物素0.08mg、叶酸1.00mg、锰45.00mg、铁100.00mg、铜11.00mg、锌100.00mg、硒0.35mg、碘0.40mg。
本发明产品适口性好，能够增加消化道酸度抑制病原菌生长，促进肠道健康，提高免疫力，适合规模化生产，不产生粉尘，有利于猪只健康，是仔猪生物配合饲料上的创新。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1
本发明在具体实施时，在原仔猪用配合饲料的基础上，添加乳酸杆菌106CFU/g、葡萄糖氧化酶10U/g、α-半乳糖苷酶5U/g，混合均匀，采取液态饲喂，饲喂时水料重量比为3:1。
实施例2
本发明在具体实施时，在原仔猪用配合饲料的基础上，添加乳酸杆菌107CFU/g、葡萄糖氧化酶15U/g、α-半乳糖苷酶10U/g，混合均匀，采取液态饲喂，饲喂时水料重量比为3:1。
为保证科学喂养和有效促进仔猪生长，实现仔猪无抗养殖，本发明做了相关实验，试验资料如下：
一、本发明配合饲料酶活力检测：
α-半乳糖苷酶：
1酶活力定义
α-半乳糖苷酶活性单位：在一定条件下，每分钟分解ρNPG底物生成1μmol对硝基酚所需的酶量为一个α-半乳糖苷酶酶活单位。
2原理
α-半乳糖苷酶与对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖(ρNPG)反应后，生成有色物质对硝基(苯)酚，通过吸光度值的变化得出对硝基(苯)酚的生成量，即可计算计算出α-半乳糖苷酶酶活力。
3仪器与设备
3.1 pH计：精确到0.01pH；
3.2分析天平：感应0.0001g；
3.3紫外-可见分光光度计：波长准确度±1nm，吸光度值精确至0.001；
3.4恒温水浴槽：控温精度±0.5℃；
3.5离心机；
3.6磁力搅拌器:附加热功能；
3.7秒表；
3.8移液器：精度1μL；
4主要试剂
无水醋酸钠(AR)；冰醋酸(AR)；碳酸钠(AR)；对硝基酚(ρ-nitrophenol，ρNP)标准品(纯度99％)；对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖苷(ρ-nitrophenyl-alpha-D-galactopyranoside，ρNPG)(纯度98％)(AR)；试验用水符合GB/T6682规定的二级水标准。
5试剂配制
5.1 pH 5.0醋酸钠缓冲液
A：0.05mol/L醋酸钠缓冲液：
称取无水醋酸钠4.2g定容至1000mL；
B：冰醋酸溶液
称取冰醋酸3.0mL定容至1000mL；
用B调节A至pH 5.0即成。
5.2 0.2mol/L碳酸钠溶液
0.2mol/L碳酸钠溶液：称取21.198g无水碳酸钠，定容至1000mL。
5.3 10mmol/L对硝基(苯)酚标准(储备)溶液
10mmol/L对硝基(苯)酚标准溶液：准确称取0.1391g对硝基(苯)酚，用0.2mol/L碳酸钠溶液定容至100mL，4℃下保存。
5.4 10mmol/L对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖苷(ρNPG)溶液
10mmol/L对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖苷(ρNPG)溶液：称取0.3031g对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖苷(ρNPG)，用0.05mol/LpH5.0醋酸钠缓冲液定容至100mL，置棕色试剂瓶于4℃下保存。
6分析步骤
6.1标准曲线的绘制
依次移取10mmol/L对硝基(苯)酚标准(储备)溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL，用0.2mol/L碳酸钠溶液定容到100mL，配成浓度即为0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L、0.5mmol/L、0.6mmol/L、0.7mmol/L的对硝基苯酚标准工作液。
分别吸取0.5mL对硝基酚标准工作溶液(做3个重复)于试管中，分别加入0.5mL醋酸钠缓冲液；然后在对照的空白样试管中加入1.0mL醋酸钠缓冲液(做3个重复)；在所有试管中加入4.0mL碳酸钠溶液，振荡，在405nm处测定吸光度OD值。
对硝基酚标准曲线绘制：以对硝基酚浓度(x)为横坐标，吸光度值OD405值(y)为纵坐标，绘制标准曲线。用Excel出标准曲线，要求R2>0.999。
7.2酶液的制备
7.2.1固体样品待测酶液制备
酶液制备：通过“四分法”精确品称取α-半乳糖苷酶1.0g左右，用醋酸钠缓冲液溶解然后定容至100mL，37℃水浴，150r/min震荡30min，3000r/min离心20min，过滤得上清液即为粗酶液备用。
根据酶活力高低，可将粗酶液适当稀释，使吸光度值OD405值在0.1-0.6之间，所得酶活力较为准确。
样品测定：将粗酶液和ρNPG底物溶液于37℃下水浴预热10min，然后再吸取各溶液0.5mL充分混合，37℃恒温水浴10min，加入4.0mL碳酸钠溶液，振荡混匀，终止酶反应，在405nm测定吸光值。
空白测定：另取0.5mL稀释酶液和4.0mL碳酸钠溶液37℃预热3min，然后加入ρNPG底物溶液，37℃水浴10min，在405nm测定吸光值，作为空白对照。
7.2.2液体样品待测酶液制备
将液体样品待测酶液3000r/min离心20min，过滤得上清液即为粗酶液备用。
根据酶活力高低，可将粗酶液适当稀释，使吸光度值OD405值在0.1-0.6之间，所得酶活力较为准确。
样品测定：称取α-半乳糖苷酶酶液和ρNPG底物溶液于37℃下水浴预热10min，然后再吸取各溶液0.5mL充分混合，37℃恒温水浴10min，加入4.0mL碳酸钠溶液，振荡混匀，终止酶反应，在405nm测定吸光值。
空白测定：另取0.5mL酶液和4.0mL碳酸钠溶液37℃预热3min，然后加入ρNPG底物溶液，37℃水浴10min，在405nm测定吸光值，作为空白对照。
8酶活计算
8.1固体样品
按照标准曲线回归方程计算α-半乳糖苷酶酶活力，其计算公式如下：
α-半乳糖苷酶酶活力(U·g-1)A＝[(Ax-A0)×K+C0]×Df/mt
式中：Ax样品酶液吸光度OD值；A0空白吸光度OD值；K对硝基(苯)酚标准曲线的斜率；C0对硝基酚标准曲线的截距；Df稀释倍数；m称取样品质量/g；t反应时间/min
8.2液体样品
按照标准曲线回归方程计算α-半乳糖苷酶酶活力，其计算公式如下：
α-半乳糖苷酶酶活力(U·mL-1)A＝[(Ax-A0)×K+C0]×Df/vt
式中：Ax样品酶液吸光度OD值；A0空白吸光度OD值；K对硝基(苯)酚标准曲线的斜率；C0对硝基酚标准曲线的截距；Df稀释倍数；v吸取样品酶液体积/mL；t反应时间/min
葡萄糖氧化酶酶活力检测：参照河南省地方标准饲料添加剂葡萄糖氧化酶活力的测定分光光度法DB41/T1729-2018。
乳酸菌检验：参照GB4879.35-2016
实验结果：
乳酸菌AS1.2624培养：取乳酸菌AS1.2624斜面菌种0.3％(以重量计)接种于种子培养基(液体)中100mL/250mL三角瓶中，30℃、120r/min摇床震荡培养，待乳酸菌AS1.2624菌数达到1×106CFU/mL时，以0.3％(以重量计)接种于发酵培养基(液体)中，30℃厌氧培养48h，玉米芯粉吸附45℃烘干，按照GB4879.35-2016进行乳酸菌检验计数，每g配合饲料添加乳酸杆菌106-107CFU添加于配合饲料中。如检验计数乳酸菌AS1.2624菌数达到1×109CFU/g时，以g配合饲料添加106-107CFU添加于配合饲料中，每g配合饲料添加乳酸菌0.001g-0.01g，即每Kg配合饲料添加乳酸菌0.001Kg-0.01Kg。
其中：保藏培养基(试管)：酪蛋白胨10.0g、牛肉提取物10.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸二胺2.0g、Tween 80 1.0g、K2HPO4 2.0g、MgSO4·7H2O 0.2g、MnSO4·H2O 0.05g、CaCO3 20.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000ml，Ph6.8。
种子培养基(液体)：酵母膏7.5g、葡萄糖10g、蛋白胨7.5g、K2HPO4 2.0g、西红柿汁100ml、Tween 80 0.5g、蒸馏水900ml，pH6.8。
发酵培养基(液体)：酵母膏5g、葡萄糖30g、蛋白胨5g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O0.5g、CaCO3 22g、蒸馏水1000ml，pH自然。
饲料用α-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶均为市场销售产品。α-半乳糖苷酶经上述α-半乳糖苷酶检测方法检测，按照每g配合饲料α-半乳糖苷酶5-10U添加于配合饲料中；葡萄糖氧化酶经河南省地方标准饲料添加剂葡萄糖氧化酶活力的测定分光光度法DB41/T1729-2018检测，添加葡萄糖氧化酶10-15U/g添加于配合饲料中。
添加方法是：取乳酸菌、α-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶，先与配合饲料配方中的10Kg膨化玉米人工混合后，再加入到配合饲料在混合均匀，采取液态饲喂，饲喂时水料重量比为3:1。
二：本发明配合饲料对仔猪生产性能影响
1、试验设计与饲养管理
试验选取6.5kg健康状况良好的“杜长大”断奶仔猪，平均分为2组(见表1)，每组3个重复，对照组A组分别为27头、32头、30头3个重复，实验组B组分别为28头、32头、29头3个重复。A组为对照组，基础日粮采取粉料干法饲喂(原仔猪用配合饲料)；B组为本发明实施例1制得的产品，即添加了添加剂乳酸杆菌、葡萄糖氧化酶、α-半乳糖苷酶的基础日粮，液态饲喂(水料比3:1)，采取液态饲喂，水料比3:1，预试期5天，试验期42天，正试验期即2020年8月1日至9月11日，试验期间，每天饲喂两次，上午、下午各一次，猪只自由采食，其它按照该场正常的饲养管理和防疫流程进行。
表1试验分组
组别 日粮组成 生长育肥猪数量
A 基础日粮(固体料) 89(27+32+30)
B 基础日粮+添加剂组合 89(28+32+29)
2、试验饲粮
本发明生产的仔猪配合饲料(生物)，满足一般营养成分指标外，还含有乳酸杆菌(106CFU/g配合饲料)、葡萄糖氧化酶(10U/g配合饲料)、α-半乳糖苷酶(5U/g配合饲料)等活性成分，试验饲粮各项营养指标均可以满足猪的营养需求，基础饲粮组成及营养水平见表2。
营养成分指标应符合表2的要求。
表2营养成分指标(％)
Figure BDA0002790931600000061
3、试验方法
每天记录猪群的健康情况，以重复为单位记录猪群每日耗料量，在试验开始和结束时分别早晨空腹称重，计算平均日增重、平均日采食量和料肉比。另外，计算每组的腹泻头数。
4、试验结果
表3对生产性能指标的影响
Figure BDA0002790931600000071
由表3可以看出A组为对照组，采取固体干法饲喂；B组为基础日龄添加添加剂试验组，饲喂公司养猪场自备料生产的仔猪配合饲料(生物)，即基础日粮+乳酸杆菌+葡萄糖氧化酶+α-半乳糖苷酶，液态饲喂(水料比3:1)，采取液态饲喂，水料比3:1。
在平均日增重方面：B组较A组平均日增重增加0.053kg，提高11.44％(P<0.05)，结果表明添加添加剂试验组对仔猪日增重有明显提高。
在平均日采食量方面，B组较A组平均日采食量减少0.019kg，减少2.41％(P>0.05)，结果表明添加添加剂试验组较对照组仔猪日采食量有所减少，但效果不显著。
在料肉比方面，B组较A组平均日采食量减少0.21，减少12.3％(P<0.05)。结果表明添加添加剂试验组较对照组显著降低了料肉比。
在腹泻率方面，对照组A组与实验组B组腹泻率均为0，没有腹泻腹泻猪只，结果表明添加添加剂试验组B组腹泻率方面较与对照组A组相当。
三、对仔猪生产性能影响
1、试验设计与饲养管理
试验选取180头8.5kg左右健康状况良好的“杜长大”仔猪，平均分为2组(见表4)，每组3个重复，对照组A组分别为30头、30头、30头3个重复，实验组B组分别为30头、30头、30头3个重复，A组为对照组，采取基础日粮粉料干法饲喂；B组为基础日龄添加添加剂试验组，饲喂本发明实施例2产品，即基础日粮+乳酸杆菌+葡萄糖氧化酶+α-半乳糖苷酶，液态饲喂(水料比3:1)，采取液态饲喂，水料比3:1，预试期5天，试验期40天，正试验期即2020年9月1日至10月10日，试验期间，每天饲喂两次，上午、下午各一次，猪只自由采食，其它按照该场正常的饲养管理和防疫流程进行。
表4试验分组
组别 日粮组成 生长育肥猪数量
A 基础日粮(固体料) 90(30+30+30)
B 基础日粮+添加剂组合 90(30+30+30)
2、试验饲粮
本发明生产的仔猪配合饲料(生物)，满足一般营养成分指标外，还含有乳酸杆菌(107CFU/g配合饲料)、葡萄糖氧化酶(15U/g配合饲料)、α-半乳糖苷酶(10U/g配合饲料)等活性成分。试验饲粮各项营养指标均可以满足猪的营养需求，基础饲粮组成及营养水平见表5。
营养成分指标应符合表5的要求。
表5营养成分指标(％)
Figure BDA0002790931600000081
3、试验方法
每天记录猪群的健康情况，以重复为单位记录猪群每日耗料量，在试验开始和结束时分别早晨空腹称重，计算平均日增重、平均日采食量和料肉比。另外，计算每组的腹泻头数。
4、试验结果
表6对生产性能指标的影响
Figure BDA0002790931600000091
由表6可以看出A组为对照组，采取固体干法饲喂；B组为基础日龄添加添加剂试验组，饲喂公司养猪场自备料生产的仔猪配合饲料(生物)，即基础日粮+乳酸杆菌+葡萄糖氧化酶+α-半乳糖苷酶，液态饲喂(水料比3:1)，采取液态饲喂，水料比3:1。
在平均日增重方面：B组较A组平均日增重增加0.053kg，提高9.83％(P<0.05)，结果表明添加添加剂试验组对仔猪日增重有明显提高。
在平均日采食量方面，B组较A组平均日采食量减少0.037kg，减少4.65％(P>0.05)，结果表明添加添加剂试验组较对照组仔猪日采食量有所减少，但效果不显著。
在料肉比方面，B组较A组平均日采食量减少0.20，减少13.5％(P<0.05)。结果表明添加添加剂试验组较对照组显著降低了料肉比。
在腹泻率方面，对照组A组与实验组B组腹泻率均为0，没有腹泻猪只，结果表明添加添加剂试验组B组腹泻率方面较与对照组A组相当。
本发明产品中不仅含有满足仔猪生长一般营养成分指标外，还含有德氏乳杆菌AS1.2624、α-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶，乳酸菌不仅具有一般益生素应有的功能，产生有机酸，降低肠道pH值，创造有益菌群生存环境，葡萄糖氧化酶、α-半乳糖苷酶可以优化肠道的酶体系，减少饲料中抗营养因子的影响，促进营养物质的消化吸收，提高饲料转化率，在饲料营养相对不足时，改善饲料的效果尤其显著。α-半乳糖苷酶可水解饲料豆粕中抗营养因子棉籽糖家族寡糖，消除胃肠胀气因子和防止腹泻的发生，另外，α-半乳糖苷酶还用于生产能够促进肠道益生菌增值的益生元α-低聚半乳糖(galactooligosaccharides，GOS)，葡萄糖氧化酶作为一种安全、绿色的新型酶制剂饲料添加剂，它可以延长饲料保存时间；维持肠道菌群的生态平衡，提高了机体免疫力；改善胃肠道的pH值，可以促进营养物质的吸收，提高饲料的吸收效率；保护肠道上皮细胞完整；解除霉菌毒素中毒，可以代替部分抗菌药物；葡萄糖氧化酶作用反应过程中消耗动物肠道中氧气，造成肠道厌氧环境，促进厌氧菌乳酸菌的繁殖和生长。应用可实现仔猪无抗养殖，有效促进仔猪生长。
本发明优点还有在仔猪饲养中，相对于传统干料，生物饲料液态饲喂有着明显的优势：1、对仔猪来讲液态生物饲料状态更接近于母乳，适口性好；2、生物饲料中含有有益菌乳酸菌和酶制剂，增加消化道酸度抑制病原菌生长，促进肠道健康，提高免疫力；3、自动化喂养更加方便，适合规模化生产；4、不产生粉尘，有利于猪只健康，随着集约化养猪的发展，逐渐转变为以干粉料和颗粒料为主的饲喂模式，液态料在动物生产性能和健康方面有诸多优势，具有良好的经济和社会效益。

Claims (3)

1.一种用于液态饲喂的仔猪生物配合饲料，其特征在于，该配合饲料在原仔猪用配合饲料的基础上，添加乳酸杆菌106-107CFU/g、葡萄糖氧化酶10-15U/g、α-半乳糖苷酶5-10U/g，采取液态饲喂，饲喂时水料重量比为3:1；所述的原仔猪用配合饲料为：仔猪前期日粮组成：一级玉米13.0%、膨化玉米25.0%、膨化大豆24.0%、豆粕6.0%、进口鱼粉7.0%、乳清粉15.0%、仔猪预混料10.0%，仔猪预混料为每千克饲料中含：VA10000IU、VD33 000 IU、VE30IU 、VK32.00 mg、VB1 2.50 mg、VB2 6.00 mg、VB63.20 mg、VB12 0.04 mg、泛酸15.00 mg、烟酸45.00 mg、生物素0.10 mg、叶酸1.50 mg、锰 40.00 mg、铁 120.00 mg、铜 10.00 mg、锌130.00 mg、硒0.30 mg、碘0.50 mg;
仔猪后期日粮组成：一级玉米39.0%、膨化玉米13.0%、膨化大豆21.0%、豆粕8.0%、进口鱼粉4.0%、乳清粉5.0%、仔猪预混料10.0%，仔猪预混料为每千克饲料中含：VA9000IU、VD32900 IU、VE30 IU 、VK33.00 mg、VB1 3.00 mg、VB2 8.00 mg、VB66.20 mg、VB12 0.04 mg、泛酸15.00 mg、烟酸40.00 mg、生物素0.08mg、叶酸1.00 mg、锰 45.00 mg、铁 100.00 mg、铜11.00 mg、锌100.00 mg、硒0.35 mg、碘0.40 mg。
2.根据权利要求1所述的用于液态饲喂的仔猪生物配合饲料，其特征在于，在原仔猪用配合饲料的基础上，添加乳酸杆菌106CFU/g、葡萄糖氧化酶10U/g、α-半乳糖苷酶5U/g，混合均匀，采取液态饲喂，饲喂时水料重量比为3:1。
3.根据权利要求1所述的用于液态饲喂的仔猪生物配合饲料，其特征在于，在原仔猪用配合饲料的基础上，添加乳酸杆菌107CFU/g、葡萄糖氧化酶15U/g、α-半乳糖苷酶10U/g，混合均匀，采取液态饲喂，饲喂时水料重量比为3:1。
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