CN112824458B - 采用马蓝鲜叶制备靛蓝、靛玉红的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了采用马蓝鲜叶制备靛蓝、靛玉红的方法，由以下步骤组成：(1)马蓝鲜叶浸泡发酵；(2)靛合成；(3)靛提取；(4)靛蓝靛玉红纯化；(5)层析柱分离纯化。本发明不加石灰让其沉降，而是直接用吸附树脂替代。吸附效果好比碳酸钙好；简化工艺流程，省去碳酸钙除杂，直接可过柱洗脱纯化；树脂可回收重利用，得到的靛玉红、靛蓝得率的纯度均比常规工艺高。

Description

采用马蓝鲜叶制备靛蓝、靛玉红的方法
技术领域
本发明属于天然产物提取领域，具体涉及采用马蓝鲜叶制备靛蓝、靛玉红的方法。
背景技术
马蓝(Baphicacanthus cusia Brem)为爵床科马蓝属多年生草本植物,广泛分布于我国西南、华南及华东地区。马蓝根、茎、叶均可入药。其根和茎作为南板蓝根入药，干燥叶作为大青叶入药，既是临床上的常用中药，也是许多中成药的主要原料。靛玉红制备原料主要有马蓝、菘蓝、蓼蓝等“蓝”类植物，其中靛玉红在新鲜马蓝叶中的含量最高，同时马蓝茎叶含有大量靛前体物质一一吲哚苷或游离态的吲哚酚，由马蓝茎叶加工的成品靛蓝，靛玉红含量高，质量优于其它同类产品。
靛蓝，是中药青黛主要成分，具有抗炎保肝护肝作用。靛蓝类色素是人类所知最古老的色素之一，最早从蓝草类植物提取，为水溶性非偶氮类着色剂，并以其磺酸钠盐或其铝化的形式等用作食用色素，广泛用于食品、医药和印染工业。靛蓝最初是从植物中提取，后来发展为化学合成制备。植物提取的方法为：将靛叶堆积，经常浇水，使其发酵2～3个月，成为黑色土块状。用臼捣实后称为球靛，含靛蓝色素2％～10％。球靛中拌入木灰、石灰及麸皮，再加水拌和，加热至30～40℃，暴露在空气中，成为蓝色不溶性靛蓝，收率低。化学合成制备靛蓝的方法污染环境且有潜在的致癌风险，因此用植物制备靛蓝具有较高的发展前景。
靛玉红是从中药青黛中分离出来的抗白血病的有效成分，为一双吲哚类抗肿瘤药物。靛玉红对多种移植性动物肿瘤有抑制作用，能破坏白血病细胞；靛玉红无论对动物移植性肿瘤还是人体肿瘤均显示一定治疗作用，能使变性坏死的细胞多呈肿胀、溶解性坏死。且靛玉红在临床治疗慢性粒细胞性白血病上，总有效率达90％以上，与临床首选药物马利兰疗效相当，疗效快，副作用小。目前国内用于研究的靛玉红有3中来源：即从中药大青叶、青黛中提取的天然产物，半合成、全合成的靛玉红。
申请号：201510334173.1，)发明名称：一种超声辅助提取大青叶中靛蓝和靛玉红的方法发明涉及一种超声辅助提取大青叶中靛蓝和靛玉红的方法，首先取干燥的大青叶粉末与体积分数为55～95％的甲醇溶液混合，大青叶粉末和甲醇溶液的料液比为1g：(10～50)mL，然后进行超声辅助提取，得到靛蓝和靛玉红的总提取液。
鉴于靛蓝较高的食品、工业价值和靛玉红高效、低毒的抗肿瘤功效预示其存在着较大的市场需求和较好的前景,要想充分有效的利用靛蓝、靛玉红,并使其标准化、产业化,首先必须寻求一套切实可行的、低成本、绿色、高效的提取分离纯化方法。
发明内容
基于上述背景技术中的不足本发明拟公开一种以马蓝鲜叶制备靛蓝、靛玉红的方法，增加马蓝综合利用率，提高生产效益。
本发明是通过以下技术方案实现的：
采用马蓝鲜叶制备靛蓝、靛玉红的方法，由以下步骤组成：(1)马蓝鲜叶浸泡发酵；(2)靛合成；(3)靛提取；(4)靛蓝靛玉红纯化；(5)层析柱分离纯化。
所述的采用马蓝鲜叶制备靛蓝、靛玉红的方法：具体步骤为：
(1)马蓝鲜叶浸泡发酵：将鲜叶置于pH为5.5的30℃去离子水中，其中水质量为鲜叶质量为30倍，通气1小时搅拌一次，浸泡48h后，滤筛过滤除去叶渣；
(2)靛合成：加碱调节浸泡液pH至10.5，加热浸泡液至60度，同时通气搅拌1h；
(3)靛提取：在浸泡液中加8％已预处理的D3520大孔树脂，搅拌打靛40min后，静止至沉淀，过滤收集树脂；
(4)靛蓝靛玉红纯化：将D3520树脂装进500×10mm的玻璃柱，先水冲洗水溶性杂质，再用4BV 50％乙醇冲洗脂溶性杂质，最后用6BV量100％乙醇3BV/h流速进行解离，收集解离液，旋转浓缩，得靛蓝靛玉红粗品；
(5)层析柱分离纯化：将粗品靛蓝、靛玉红与粉末等量的碱性氧化铝混合拌匀，将粉末10倍重量当量的氧化铝装柱，加样后上层覆盖1CM厚氧化铝，上层加塞一层脱脂棉，先以乙酸乙酯：80％乙醇＝3:1展开，分离出蓝、紫红色两个色带，当展开剂第一滴流出时，收集蓝色带，即为靛蓝，收集完蓝色色带后改用100％乙醇：乙酸乙酯＝3:2洗脱，流速1.5d/s，收集紫红色色带，将收集蓝色洗脱液、紫红色洗脱液减压浓缩，用甲乙醇重结晶，减压过滤，回收乙醇，用去离子水冲洗20min去除杂质，干燥得蓝色结晶即为靛蓝，紫红色结晶即为靛玉红。
本发明的有益效果
(1)本发明不加石灰让其沉降，而是直接用吸附树脂替代。吸附效果好比碳酸钙好；简化工艺流程，省去碳酸钙除杂，直接可过柱洗脱纯化；树脂可回收重利用，得到的靛玉红、靛蓝得率的纯度均比常规工艺高。
具体实施方式
实施例1
称取1kg马蓝鲜叶，置于pH为5.5的30℃自来水中，其中水体积为鲜叶质量为30倍，通气1小时搅拌一次，浸泡48h后，滤筛过滤除去叶渣，加碱调节浸泡液pH至10.5，加热浸泡液至60度，同时通气搅拌1h，在浸泡液中加8％已预处理的D3520大孔树脂，搅拌打靛40min后，静止至沉淀，过滤收集树脂，将的D3520树脂装进500×10mm的玻璃柱。先水冲洗水溶性杂质，再用4BV 50％乙醇冲洗脂溶性杂质，最后用6BV量100％乙醇3BV/h流速进行解离，收集解离液，旋转浓缩，得靛蓝靛玉红粗品58.25g。RP-HPLC法检测靛蓝、靛玉红含量分别为16.13g/kg、5.81g/kg,靛蓝靛玉红纯度分别为27.69％，9.97％。
实施例2
称取1kg鲜叶置于pH为5.5的30℃自来水中，其中水质量为鲜叶质量为30倍。通气1小时搅拌一次，浸泡48h后，滤筛过滤除去叶渣，向浸泡液中加NaOH调节滤液pH至10.5，加热浸泡液至60度，再通空气1h后，加入4％新制的石灰乳，搅拌打靛40min后，过滤取沉淀，滤液重过滤回收，沉淀加水混合后水飞除杂，得靛膏183.14g。RP-HPLC法检测产品靛蓝靛玉红得率分别15.02g/kg、5.29g/kg。
实施例3
超声辅助法从靛膏中提出靛蓝靛玉红
按实施例2中方法制备的靛膏，加入4倍乙醇搅拌100W超声处理30min，过滤，滤渣再用乙醇提取两次合并三次滤液，旋转蒸发浓缩回收乙醇溶剂，达到一定浓度后加入与乙醇等量的蒸馏水。浓缩回收1/2的水后冷却过滤，得滤渣即为靛蓝靛玉红粗品55.32g，RP-HPLC法检测靛蓝、靛玉红含量分别为24.75％、10.28％。
实施例4
靛蓝靛玉红分离纯化
取实施例1中制备的靛蓝靛玉红粗品，将粗品靛蓝、靛玉红与适量碱性氧化铝混合拌匀，将相当于粉末10倍量的氧化铝装柱，加样后上层覆盖氧化铝，加脱脂棉。先以乙酸乙酯：80％乙醇＝3:1展开，分离出蓝、紫红色两个色带。当展开剂第一滴流出时，收集蓝色带，即为靛蓝。收集完蓝色色带后改用100％乙醇：乙酸乙酯＝3:2洗脱，流速1.5d/s，收集紫红色色带。将收集蓝色洗脱液、紫红色洗脱液减压浓缩，用甲乙醇重结晶，减压过滤，回收乙醇，用少量水冲洗掉一些杂质，干燥得蓝色结晶靛蓝14.23g，紫红色结晶靛玉红4.86g。靛蓝纯度为95％。得靛玉红纯度高于97％。

Claims (1)

1.采用马蓝鲜叶制备靛蓝、靛玉红的方法，其特征在于，由以下步骤组成:(1)马蓝鲜叶浸泡发酵；(2)靛合成；(3)靛提取；(4)靛蓝靛玉红纯化；(5)层析柱分离纯化，具体步骤为:
(1)马蓝鲜叶浸泡发酵:将鲜叶置于pH为5.5的30℃去离子水中，其中水质量为鲜叶质量为30倍，通气1小时搅拌一次，浸泡48h后，滤筛过滤除去叶渣；
(2)靛合成:加碱调节浸泡液pH至10.5，加热浸泡液至60℃，同时通气搅拌1h；
(3)靛提取:在浸泡液中加8％已预处理的D3520大孔树脂，搅拌打靛40min后，静止至沉淀，过滤收集树脂；
(4)靛蓝靛玉红纯化:将D3520树脂装进500X 10mm的玻璃柱，先水冲洗水溶性杂质，再用4BV 50％乙醇冲洗脂溶性杂质，最后用6BV量100％乙醇3BV/h流速进行解离，收集解离液，旋转浓缩，得靛蓝靛玉红粗品:
(5)层析柱分离纯化:将粗品靛蓝、靛玉红与粉末等量的碱性氧化铝混合拌匀，将粉末10倍重量当量的氧化铝装柱，加样后上层覆盖1CM厚氧化铝，上层加塞一层脱脂棉，先以乙酸乙醋:80％乙醇＝3:1展开，分离出蓝、紫红色两个色带，当展开剂第一滴流出时，收集蓝色带，即为靛蓝，收集完蓝色色带后改用100％乙醇:乙酸乙醋＝3:2洗脱，流速1.5d/s，收集紫红色色带，将收集蓝色洗脱液、紫红色洗脱液减压浓缩，用甲乙醇重结晶，减压过滤，回收乙醇，用去离子水冲洗20min去除杂质，干燥得蓝色结晶即为靛蓝，紫红色结晶即为靛玉红。
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