CN112816635B - 一种黑木耳中测定脂肪酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黑木耳中测定脂肪酸的方法，具体涉及脂肪酸检测技术领域，该方法包括如下步骤：准确称取待测样品于试管中，匀浆处理，得到样品浆液。将所述样品浆液进行离心处理，得到上清液和残渣A。在所述残渣A中加入标记试剂A和净化试剂B，搅拌均匀，过滤后得到的提取液与上清液混合，得到待水解样本液。待水解样本液经13C同位素标记的甲醇衍生反应后在水浴条件下水解酯化，冷却，氮吹至干，得到粗提物。粗提物经正己烷复溶，得到正己烷相，正己烷相经氮吹浓缩后，得到上机分析液。本发明通过净化黑木耳基质以及通过进一步检测黑木耳中对检测结果有干扰的杂质是否清除来更高效地得到脂肪酸的含量。
Description
技术领域
本发明涉及脂肪酸检测技术领域，具体为一种黑木耳中测定脂肪酸的方法。
背景技术
脂肪酸是一类含有长链烃的脂肪族羧酸化合物，通式为C(n)H(2n +1)COOH,通常以酯的形式存在于中性脂肪、磷脂和糖酯等各种脂质组分中[1]。中性脂肪是由一个甘油分子缩合三个脂肪酸分子而成。自然界中约有四十多种不同的脂肪酸，脂肪酸按照碳链的长度，可分为短链脂肪酸（C原子数为4-6），中链脂肪酸（C原子数为8-12）和长链脂肪酸（C原子数为12-24）；按照双键数，又可分为饱和脂肪酸（碳氢链上没有不饱和键）、单不饱和脂肪酸（碳氢链上有1个不饱和键）和多不饱和脂肪酸（碳氢链上有2个以上不饱和键）[2]；不饱和脂肪酸根据双键两侧基团的不同，可分为顺式脂肪酸和反式脂肪酸。2个氢原子在双键的一侧的是顺式脂肪酸，而2个氢原子各自在双键相反两侧不同位置的是反式脂肪酸。
黑木耳中的脂肪酸检测是领域中的一大难题，具体表现为：（1）黑木耳中脂肪酸含量非常少，不易富集；（2）黑木耳中的成分较为复杂，脂肪酸测定过程中，容易受到其含有的微量元素的干扰。因此，只有高效地解决上述问题，黑木耳中脂肪酸的检测才能准确、方便地进行。
发明内容
本发明的目的在于提供一种黑木耳中测定脂肪酸的方法，该方法通过净化黑木耳基质以及通过进一步检测黑木耳中对检测结果有干扰的杂质是否清除来更高效地得到脂肪酸的含量。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种黑木耳中测定脂肪酸的方法，该方法包括如下步骤：
S01、准确称取待测样品于试管中，匀浆处理，得到样品浆液。
S02、将所述样品浆液进行离心处理，得到上清液和残渣A。
S03、在所述残渣A中加入标记试剂A和净化试剂B，搅拌均匀，过滤后得到的提取液与上清液混合，得到待水解样本液。
S04、待水解样本液经13C同位素标记的甲醇衍生反应后在水浴条件下水解酯化，冷却，氮吹至干，得到粗提物。
S05、粗提物经正己烷复溶，得到正己烷相，正己烷相经氮吹浓缩后，得到上机分析液。
作为优选，步骤S03的具体包括：
(1)在残渣A中加入净化试剂B，碘-碘化钾溶液，在30～50摄氏度的水浴温度下搅拌30～40min，搅拌完成后，过滤后得到提取液A和残渣B；
(2)残渣B经清水淋洗，得到残渣C和提取液B；
(3)残渣C失色后，则提取液B、提取液A以及上清液混合，得到待水解样本液；
残渣C仍有染色时，可重复加入净化试剂B，过滤后再进行步骤(2)，直至失色，则混合多次淋洗得到的提取液和所述上清液，得到待水解样本液。
作为优选，在步骤（1）中，水浴温度为40摄氏度。
作为优选，搅拌时间为35min。
作为优选，标记试剂A选自碘-碘化钾溶液。
作为优选，净化试剂B包括果胶质离散剂，果胶质离散剂选自盐酸、硫酸中任意一种。
作为优选，色素吸附试剂包括Fe3O4-多巴胺、Fe3O4-SiO2-壳聚糖氧化石墨烯、Fe3O4-氮掺杂石墨烯、壳聚糖以及Fe3O4-β环糊精-羧甲基纤维素中的至少一种。
作为优选，色素吸附试剂选自壳聚糖。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
（1）、在得到黑木耳的基质后，通过在基质中加入净化试剂，除去可对脂肪酸检测中造成干扰的成分，从而是的脂肪酸的检测结果更加准确。
（2）对经一次提取后的样品残渣进行染色标记，同时通过净化试剂将黑木耳细胞打散，使得细胞之间呈游离状，从而更加有利于脂肪酸被提取出来。
说明书附图
图1表示黑木耳样本中各不同种类的脂肪酸浓度。
具体实施方式
一种黑木耳中测定脂肪酸的方法，该方法包括如下步骤：
S01、准确称取待测样品于试管中，匀浆处理，得到样品浆液。
S02、将所述样品浆液进行离心处理，得到上清液和残渣A。
S03、在残渣A中加入壳聚糖、碘-碘化钾溶液，在40摄氏度的水浴温度下搅拌35min，搅拌完成后，依次加入盐酸，过滤后得到提取液A和残渣B。在本步骤中，由于体系呈酸性，溶液体系中有脱水剂硫酸。果胶在脱水剂的作用下，失去了水合膜，并且，酸性条件下，抑制了果胶中羧基的解离。同时，甲氧基之间形成了氢键，因此越来越多的果胶分子胶连成网状的结构，从而絮凝成凝胶。当果胶被除去后，瓜果细胞之间呈松散状态，从而使得脂肪酸可快速析出，且析出地更加完全。
S04、残渣B经清水淋洗，得到残渣C和提取液B；
如果残渣C失色后，则提取液B、提取液A以及上清液混合，得到待水解样本液。当残渣C失色表示碘-碘化钾溶液经清水淋洗后除去，黑木耳细胞之间基本呈游离状。
残渣C仍有染色时，可重复加入净化试剂B，过滤后再进行步骤S04，直至失色，则混合多次淋洗得到的提取液和所述上清液，得到待水解样本液；
S05、待水解样本液经13C同位素标记的甲醇衍生反应后在水浴条件下水解酯化，冷却，氮吹至干，得到粗提物；
S06、粗提物经正己烷复溶，得到正己烷相，正己烷相经氮吹浓缩后，得到上机分析液。
通过上述步骤检测黑木耳中脂肪酸浓度，结果图1所示。
Claims (3)
1.一种黑木耳中测定脂肪酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S01、准确称取待测样品于试管中，匀浆处理，得到样品浆液；
S02、将所述样品浆液进行离心处理，得到上清液和残渣A；
S03、在所述残渣A中加入碘-碘化钾溶液和净化试剂B，搅拌均匀，过滤后得到的提取液与上清液混合，得到待水解样本液；其中，净化试剂B包括果胶质离散剂，果胶质离散剂选自盐酸、硫酸中任意一种；
S04、待水解样本液经13C同位素标记的甲醇衍生反应后在水浴条件下水解酯化，冷却，氮吹至干，得到粗提物；
S05、粗提物经正己烷复溶，得到正己烷相，正己烷相经氮吹浓缩后，得到上机分析液；
步骤S03的具体包括：
(1)在残渣A中加入净化试剂B，碘-碘化钾溶液，在30～50摄氏度的水浴温度下搅拌30～40min，搅拌完成后，过滤后得到提取液A和残渣B；
(2)残渣B经清水淋洗，得到残渣C和提取液B；
(3)残渣C失色后，则提取液B、提取液A以及上清液混合，得到待水解样本液；
残渣C仍有染色时，可重复加入净化试剂B，过滤后再进行步骤(2)，直至失色，则混合多次淋洗得到的提取液和所述上清液，得到待水解样本液。
2.根据权利要求1所述的一种黑木耳中测定脂肪酸的方法，其特征在于，在步骤(1)中，水浴温度为40摄氏度。
3.根据权利要求1所述的一种黑木耳中测定脂肪酸的方法，其特征在于，搅拌时间为35min。
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