CN112794896B - 一种胃膜素的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种胃膜素的制备方法，包括以下步骤：向搅碎的猪胃粘膜中加入混合酶液并于0‑5℃超声条件下反应0.5‑3h，离心过滤得上清液和沉淀；向沉淀中加入盐酸溶液并于30‑50℃超声条件下反应1‑3h，离心过滤得上清液；将两上清液混合，调节混合液pH值为3.0‑5.0，然后利用半透膜渗透处理，预冷，向其中加入体积浓度为70％以上的乙醇，静置5‑8h，过滤，收集沉淀并洗涤；将沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得。该方法可有效解决现有的制备方法存在的生产周期长，胃膜素得率低以及乙醇用量大的问题。

Description

一种胃膜素的制备方法
技术领域
本发明涉及胃膜素技术领域，具体涉及一种胃膜素的制备方法。
背景技术
胃膜素目前是市场上用于治疗胃及十二指肠溃疡的药物。胃膜素是从猪黏膜中提取的一种以黏蛋白为主要成份的生物活性药物，有极强的黏附作用，可直接作用于消化道内壁，在胃及十二指肠溃疡面形成一层保护膜，减少胃酸对它的刺激，利于溃疡面的愈合；另一方面有润滑作用，使进入消化道的食物易于在消化道内移行，有利于减少某些物质对溃疡面的刺激。
我国猪胃原料极为丰富，但从猪胃粘膜中提取胃膜素的工艺相对落后，国内主要按胃粘膜消化、三氯甲烷或乙醚脱脂、丙酮沉淀、干燥的工艺路线生产，该工艺耗时长、胃膜素得率低，仅1.5％左右；国外采取pH6.5的NaH3PO4、EDTA、NEM及盐酸胍的缓冲液为提取液，再经高速离心、透析、等密度梯度离心制得胃膜素，该工艺复杂、生产成本高、生产周期长；采用乙醇提取法，提高胃膜素的收率，生产成本低，通过严格控制提取乙醇浓度、加工时间和温度来提高产品质量。
发明内容
针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种胃膜素的制备方法，该方法可有效解决现有的制备方法存在的生产周期长，胃膜素得率低以及乙醇用量大的问题。
为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种胃膜素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将新鲜猪胃粘膜搅碎，向其中加入混合酶液并于0-5℃超声条件下反应0.5-3h，然后离心过滤得上清液和沉淀；
(2)向步骤(1)沉淀中加入盐酸溶液并于30-50℃超声条件下反应1-3h，然后离心过滤得上清液；
(3)将步骤(1)和步骤(2)中的上清液混合，调节混合液pH值为3.0-5.0，然后将混合液利用半透膜渗透处理，预冷，向混合液中加入体积浓度为70％以上的乙醇，于静置5-8h，过滤，收集沉淀并洗涤；
(4)将步骤(3)中洗涤后的沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得。
上述方案中，先利用混合酶液在超声条件下对胃粘膜上的细胞进行消化分离，初步将胃粘膜中的胃膜素成分分离，然后继续用盐酸在超声条件下对沉淀继续进行消化分离，进一步的将胃粘膜中的胃膜素成分分离，获得的混合上清液中含有大量的粘液物质；超声条件下产生的空化作用可加速细胞破裂和分离，缩短反应时间，同时空化作用可加速细胞间组织分离，增大与细胞与混合酶液和盐酸的接触面积，进而加快反应速率，缩短反应时间。
将混合的上清液用半透膜进行处理，通过半透膜另一侧的饱和渗透压溶液将上清液中过于的水分吸收，可减少后续乙醇的使用量；同时，上清液中含水量减少以后，粘液物质与乙醇的接触面积更大，发生沉淀的速度更快，时间更短，然后将沉淀过滤，对沉淀进行洗涤以及后续的脱脂干燥等处理，便制得胃膜素。
进一步地，步骤(1)中混合酶液的体积与猪胃粘膜体积之比为1-3:1。
进一步地，步骤(1)中混合酶液的体积与猪胃粘膜体积之比为1.3:1。
上述方案中，当将混合酶液与胃粘膜的体积之比控制在1-3:1时，混合酶液可充分与胃粘膜中的细胞接触，并将细胞消化分离，提高粘液物质的分离效果。
进一步地，步骤(1)中所述混合酶液由于胰酶和胶原酶组成，混合酶液中胰酶的浓度为0.2-0.3％，胶原酶的浓度为0.05-0.15％。
进一步地，步骤(1)中所述混合酶液由于胰酶和胶原酶组成，混合酶液中胰酶的浓度为0.25％，胶原酶的浓度为0.1％。
进一步地，步骤(1)中超声条件为超声频率23kHz，超声功率25W。
进一步地，步骤(1)中反应时间为1.5h。
上述方案中，将胰酶和胶原酶控制在合适的浓度范围内，胰酶和胶原酶可分别对胃粘膜中的细胞进行消化分离，消化过程中进行超声处理，超声的空化作用增大细胞间的缝隙，进而增大酶与细胞的接触面积，通过混合酶液先对胃粘膜进行处理，既可达到粘液物质的分离，又能缩短胃膜素与盐酸接触的时间，减少盐酸对胃膜素的分解，最终，提高胃膜素的产量。
先用混合酶液对胃粘膜进行消化，在超声条件下，酶液进入胃粘膜的细胞间隙内，将细胞间隙溶解，也便于后续盐酸进入间隙内，加速盐酸的消化效率，本发明中的消化方式相对于传统的盐酸消化方式可大大缩短消化所需的时间，提高胃粘膜消化效率。
进一步地，步骤(2)中盐酸溶液的体积分数为4％-6％，盐酸加入量与沉淀的体积比为0.55-0.65:1。
进一步地，步骤(2)中盐酸溶液的体积分数为5.4％，盐酸加入量与沉淀的体积比为0.6:1。
进一步地，步骤(2)中的反应温度为45℃。
进一步地，步骤(2)中反应时间为2.5h。
进一步地，步骤(2)中超声条件为超声频率20-50kHz，超声功率20-35W。
进一步地，步骤(2)中超声条件为超声频率23kHz，超声功率25W。
进一步地，步骤(2)中离心条件为进一步地，步骤(1)中离心条件为4000-5000r/min离心10min。
进一步地，步骤(3)中半透膜渗透处理操作时，半透膜另一侧为饱和渗透压溶液，渗透处理时间为0.5-2h。
进一步地，步骤(3)中半透膜渗透处理操作时，饱和渗透压溶液为蔗糖溶液或氯化钠溶液，渗透处理时间为1h。
上述方案中，半透膜进行渗透处理过程中，水分子在渗透压溶液的作用下，可透过半透膜，快速进入渗透压溶液中，实现将消化后的上清液进行浓缩的目的，浓缩后的上清液中胃膜素的浓度较高，向其中加入乙醇后，乙醇可快速与胃膜素接触，使得胃膜素形成沉淀。
进一步地，步骤(3)中乙醇的体积浓度为75-95％。
进一步地，步骤(3)中乙醇的体积浓度为85％。
上述方案中，乙醇的浓度与上清液中胃膜素的浓度相关，当乙醇的体积浓度为85％时，胃膜素的沉降速度最快，沉降量最多。
进一步地，步骤(3)中预冷温度为0-6℃。
进一步地，步骤(3)中预冷温度为2℃。
进一步地，步骤(3)中静置时间为6h。
本发明所产生的有益效果为：
1、本发明中依次利用混合酶液和盐酸对胃粘膜进行消化处理，混合酶液可对胃粘膜中的细胞进行消化分离，降低后续盐酸消化时的消化难度，缩短总体消化时间，同时，减少盐酸与胃粘膜的接触时间，降低盐酸对胃膜素的分解作用，提高胃膜素的含量；消化的同时进行超声处理，利用超声波的空化作用破坏胃粘膜中的细胞和组织，增大混合酶液和盐酸与细胞的接触面积，进而，提高消化的效率，进一步的缩短消化时间。
2、本发明中利用半透膜将上清液中的水分进行去除，进而降低后续用于沉淀胃膜素时乙醇的使用量，由于上清液中的水分含量降低，加入的乙醇与粘液物质的接触面积曾大，可缩短沉淀的时间，进而缩短胃膜素的总体制备时间。
具体实施方式
实施例1
一种胃膜素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1kg新鲜猪胃粘膜搅碎至体积小于0.5mm2，向其中加入由胰酶和胶原酶组成的混合酶液并于2℃、超声频率20kHz、超声功率20W超声条件下反应1h，其中，混合酶液中胰酶的质量浓度为0.2％，胶原酶的质量浓度为0.05％，然后于4000r/min条件下离心10min，过滤得上清液和沉淀；
(2)向步骤(1)沉淀中加入体积分数为4％的盐酸溶液并于40℃，超声频率20kHz、超声功率20W的超声条件下反应1h，盐酸溶液与沉淀的体积比为0.55:1，然后于4000r/min条件下离心10min，过滤得上清液；
(3)将步骤(1)和步骤(2)中的上清液混合，调节混合液pH值为4.8然后将混合液利用半透膜渗透处理，半透膜另一侧为饱和氯化钠溶液，2℃条件下预冷，然后向混合液中加入体积浓度为75％的乙醇，静置5h，过滤，收集沉淀并用90％乙醇洗涤2次；
(4)将步骤(3)中洗涤后的沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得胃膜素26.7g。
实施例2
一种胃膜素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1kg新鲜猪胃粘膜搅碎至体积小于0.5mm2，向其中加入由胰酶和胶原酶组成的混合酶液并于5℃、超声频率50kHz、超声功率35W超声条件下反应2h，其中，混合酶液中胰酶的质量浓度为0.3％，胶原酶的质量浓度为0.15％，然后于5000r/min条件下离心10min，过滤得上清液和沉淀；
(2)向步骤(1)沉淀中加入体积分数为6％的盐酸溶液并于50℃，超声频率50kHz、超声功率35W的超声条件下反应2h，盐酸溶液与沉淀的体积比为0.6:1，然后于5000r/min条件下离心10min，过滤得上清液；
(3)将步骤(1)和步骤(2)中的上清液混合，调节混合液pH值为4.5然后将混合液利用半透膜渗透处理，半透膜另一侧为饱和氯化钠溶液，6℃条件下预冷，然后向混合液中加入体积浓度为95％的乙醇，静置6h，过滤，收集沉淀并用90％乙醇洗涤2次；
(4)将步骤(3)中洗涤后的沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得胃膜素27.4g。
实施例3
一种胃膜素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1kg新鲜猪胃粘膜搅碎至体积小于0.5mm2，向其中加入由胰酶和胶原酶组成的混合酶液并于4℃、超声频率23kHz、超声功率25W超声条件下反应1.5h，其中，混合酶液中胰酶的质量浓度为0.25％，胶原酶的质量浓度为0.1％，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液和沉淀；
(2)向步骤(1)沉淀中加入体积分数为5.4％的盐酸溶液并于45℃，超声频率23kHz、超声功率25W的超声条件下反应1h，盐酸溶液与沉淀的体积比为0.65:1，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液；
(3)将步骤(1)和步骤(2)中的上清液混合，调节混合液pH值为4.6然后将混合液利用半透膜渗透处理，半透膜另一侧为饱和葡萄糖溶液，2℃条件下预冷，然后向混合液中加入体积浓度为85％的乙醇，静置6h，过滤，收集沉淀并用90％乙醇洗涤2次；
(4)将步骤(3)中洗涤后的沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得胃膜素31.4g。
对比例1
一种胃膜素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1kg新鲜猪胃粘膜搅碎至体积小于0.5mm2，向其中加入由胰酶和胶原酶组成的混合酶液并于4℃条件下反应1.5h，其中，混合酶液中胰酶的质量浓度为0.25％，胶原酶的质量浓度为0.1％，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液和沉淀；
(2)向步骤(1)沉淀中加入体积分数为5.4％的盐酸溶液并于45℃条件下反应1h，盐酸溶液与沉淀的体积比为0.65:1，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液；
(3)将步骤(1)和步骤(2)中的上清液混合，调节混合液pH值为4.6然后将混合液利用半透膜渗透处理，半透膜另一侧为饱和葡萄糖溶液，2℃条件下预冷，然后向混合液中加入体积浓度为85％的乙醇，静置6h，过滤，收集沉淀并用90％乙醇洗涤2次；
(4)将步骤(3)中洗涤后的沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得胃膜素21.2g。
对比例2
一种胃膜素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1kg新鲜猪胃粘膜搅碎至体积小于0.5mm2，向其中加入体积分数为5.4％的盐酸溶液并于45℃，超声频率23kHz、超声功率25W的超声条件下反应1h，盐酸溶液与沉淀的体积比为0.65:1，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液；
(2)调节步骤(1)中上清液pH值为4.6，然后将混合液利用半透膜渗透处理，半透膜另一侧为饱和葡萄糖溶液，2℃条件下预冷，然后向混合液中加入体积浓度为85％的乙醇，静置6h，过滤，收集沉淀并洗涤；
(4)将步骤(3)中洗涤后的沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得胃膜素19.1g。
对比例3
一种胃膜素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1kg新鲜猪胃粘膜搅碎至体积小于0.5mm2，向其中加入由胰酶和胶原酶组成的混合酶液并于4℃、超声频率23kHz、超声功率25W超声条件下反应1.5h，其中，混合酶液中胰酶的质量浓度为0.25％，胶原酶的质量浓度为0.1％，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液和沉淀；
(2)向步骤(1)沉淀中加入体积分数为5.4％的盐酸溶液并于45℃，超声频率23kHz、超声功率25W的超声条件下反应1h，盐酸溶液与沉淀的体积比为0.65:1，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液；
(3)将步骤(1)和步骤(2)中的上清液混合，调节混合液pH值为4.6然后于2℃条件下预冷，然后向混合液中加入体积浓度为85％的乙醇，静置6h，过滤，收集沉淀并用90％乙醇洗涤2次；
(4)将步骤(3)中洗涤后的沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得胃膜素18.5g。
对比例4
一种胃膜素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1kg新鲜猪胃粘膜搅碎至体积小于0.5mm2，向其中加入体积分数为5.4％的盐酸溶液反应5h，盐酸溶液与沉淀的体积比为0.65:1，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液；
(2)调节步骤(1)中上清液pH值为4.6，然后于2℃条件下预冷，然后向上清液中加入体积浓度为85％的乙醇，静置6h，过滤，收集沉淀并用90％乙醇洗涤2次；
(4)将步骤(3)中洗涤后的沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得胃膜素15.3g。
对比例5
一种胃膜素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1kg新鲜猪胃粘膜搅碎至体积小于0.5mm2，向其中加入胰酶酶液并于4℃、超声频率23kHz、超声功率25W超声条件下反应1.5h，其中，胰酶的质量浓度为0.25％，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液和沉淀；
(2)向步骤(1)沉淀中加入体积分数为5.4％的盐酸溶液并于45℃，超声频率23kHz、超声功率25W的超声条件下反应1h，盐酸溶液与沉淀的体积比为0.65:1，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液；
(3)将步骤(1)和步骤(2)中的上清液混合，调节混合液pH值为4.6然后将混合液利用半透膜渗透处理，半透膜另一侧为饱和葡萄糖溶液，2℃条件下预冷，然后向混合液中加入体积浓度为85％的乙醇，静置6h，过滤，收集沉淀并用90％乙醇洗涤2次；
(4)将步骤(3)中洗涤后的沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得胃膜素16.8g。
对比例6
一种胃膜素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1kg新鲜猪胃粘膜搅碎至体积小于0.5mm2，向其中加入体积分数为5.4％的盐酸溶液并于45℃，超声频率23kHz、超声功率25W的超声条件下反应1h，盐酸溶液与沉淀的体积比为0.65:1，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液；
(2)向步骤(1)离心沉淀中加入由胰酶和胶原酶组成的混合酶液并于4℃、超声频率23kHz、超声功率25W超声条件下反应1.5h，其中，混合酶液中胰酶的质量浓度为0.25％，胶原酶的质量浓度为0.1％，然后于4500r/min条件下离心10min，过滤得上清液；
(3)将步骤(1)和步骤(2)中的上清液混合，调节混合液pH值为4.6然后将混合液利用半透膜渗透处理，半透膜另一侧为饱和葡萄糖溶液，2℃条件下预冷，然后向混合液中加入体积浓度为85％的乙醇，静置6h，过滤，收集沉淀并用90％乙醇洗涤2次；
(4)将步骤(3)中洗涤后的沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得胃膜素15.4g。

Claims (7)

1.一种胃膜素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将新鲜猪胃粘膜搅碎，向其中加入混合酶液并于0-5℃超声条件下反应0.5-3h，然后离心过滤得上清液和沉淀；其中，所述混合酶液由胰酶和胶原酶组成，混合酶液中胰酶的质量浓度为0.2-0.3%，胶原酶的质量浓度为0.05-0.15%；
（2）向步骤（1）沉淀中加入盐酸溶液并于40-50℃超声条件下反应1-3h，超声条件为超声频率20-50kHz，超声功率20-35W，然后离心过滤得上清液；盐酸溶液的体积分数为4%-6%，盐酸溶液的加入量与沉淀的体积比为0.55-0.65:1；
（3）将步骤（1）和步骤（2）中的上清液混合，调节混合液pH值为3.0-5.0，然后将混合液利用半透膜渗透处理，预冷，向混合液中加入体积浓度为70%以上的乙醇，静置5-8h，过滤，收集沉淀并洗涤；
（4）将步骤（3）中洗涤后的沉淀依次进行脱脂、干燥和粉碎处理，制得。
2.如权利要求1所述的胃膜素的制备方法，其特征在于，步骤（1）中混合酶液的体积与猪胃粘膜体积之比为1-3:1。
3.如权利要求1所述的胃膜素的制备方法，其特征在于，步骤（2）中的反应温度为45℃。
4.如权利要求1所述的胃膜素的制备方法，其特征在于，步骤（2）中反应时间为2.5h。
5.如权利要求1所述的胃膜素的制备方法，其特征在于，步骤（3）中半透膜渗透处理操作时，半透膜另一侧为饱和渗透压溶液，渗透处理时间为0.5-2h。
6.如权利要求1所述的胃膜素的制备方法，其特征在于，步骤（3）中乙醇的体积浓度为75-95%。
7.如权利要求1所述的胃膜素的制备方法，其特征在于，步骤（3）中预冷温度为0-6℃。
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