CN101619104B - 一种从褐藻中提取岩藻聚糖硫酸酯的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明岩藻聚糖硫酸酯的提取方法。一种从褐藻中提取岩藻聚糖硫酸酯的方法，具体工艺为：第一步去盐：将新鲜褐藻或冰冻褐藻解冻后，用纯净水浸泡去盐分；第二步酶解：在去盐后的褐藻中加入酶进行酶解，酶解温度40～60℃，酶解1～3小时；第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙，加热至90～100℃，热提取1～4小时，制得岩藻聚糖硫酸酯的提取液。本发明具有操作简单、应用安全性高、提取效率高、提取纯度高等特点，其提取工艺适用于工厂化的大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及岩藻聚糖硫酸酯的提取方法。
背景技术
岩藻聚糖硫酸酯(fucoidan)，又名褐藻多糖硫酸酯，也称为岩藻糖胶或褐藻糖胶。岩藻聚糖硫酸酯主要存在于褐藻中，是所有褐藻中所固有的细胞间多糖，存在于细胞壁基质中。一般生长于潮间带的褐藻类中，如多年生的墨角藻类，其岩藻聚糖硫酸酯的含量可高达20％，生长在较深处的海带中含量较低，约为1～2％。1913年，Kylin首次从褐藻掌状海带中提出岩藻聚糖硫酸酯。岩藻聚糖硫酸酯结构复杂，具有多种生理活性，有明显的抗凝血和促纤溶的药理学活性；包含硫酸基的岩藻糖或其降解物能诱导癌细胞凋亡，可用作凋亡诱导剂和抗癌药；有较强的清除活性氧自由基和抑制脂质过氧化的能力，其作用随多糖浓度增加而增加；可治疗慢性肾衰，改善肾功能；还具有提高免疫力等多种作用。
目前提取岩藻聚糖硫酸酯方法在中间处理阶段使用试剂种类多，其中一部分试剂如甲醛等试剂对人体有害，增加了安全隐患；提取纯度不高，有些提取方法获得的岩藻聚糖硫酸酯在最终提取物中的含量不到20％；生产工艺复杂，处理过程分别经超声、减压浓缩或电渗析等方法，耗能大，成本高，不利于工厂化生产；生产步骤须经反复沉淀、调pH值、离心沉淀等操作，十分繁琐。
发明内容
本发明的目的在于克服上述不足问题，提供一种从褐藻中提取岩藻聚糖硫酸酯的方法，操作简单、应用安全性高、提取效率高、提取纯度高。
本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：一种从褐藻中提取岩藻聚糖硫酸酯的方法，具体工艺为：
第一步去盐：将新鲜褐藻或冰冻褐藻解冻后，用纯净水浸泡去盐分；
第二步酶解：在去盐后的褐藻中加入酶进行酶解，酶解温度40～60℃，酶解1～3小时；
第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙，加热至90～100℃，热提取1～4小时，制得岩藻聚糖硫酸酯的提取液。
所述第一步去盐：采用褐藻2～10倍重量的纯净水浸泡褐藻15～60分钟，除去水，再重复浸泡除水一次。
所述第二步酶解：采用纤维素酶或果胶酶，所述纤维素酶或果胶酶的加入量是褐藻重量的0.2％～2％。
所述第三步提取：酶解液中氯化钙的加入量是褐藻重量的0.5％～5％。
所述第三步提取后对提取液进行干燥制成干粉。
本发明与同类方法相比，具有如下优点：
1.操作简单。本发明操作工艺非常简单，所用的试剂和设备种类少，便于组织生产。
2.藻体未进行匀浆，保持褐藻完整，用酶量少，酶解效率更高，提取岩藻聚糖硫酸酯杂质更少。
3.应用安全性高。本发明所用试剂为生物酶和食品生产常用试剂，对人体无毒副作用，安全性极高。
4.提取效率高。本发明采用酶解工艺，与未采用酶解工艺相比，提取效率提高30％以上。
5.提取纯度高。本发明采用氯化钙做絮凝剂后，极大地降低了提取液中褐藻胶的含量，提取液经干燥成粉后，岩藻聚糖硫酸酯纯度较高，达40～60％。
6.本发明提出了一种从褐藻中提取岩藻聚糖硫酸酯的方法，初步研究了多种因素对岩藻聚糖硫酸酯提取的影响，其提取工艺适用于工厂化的大规模生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不局限于具体实施例。
实施例1
第一步去盐：取新鲜或冰冻裙带菜孢子叶，室温解冻后，取100公斤加200公斤纯净水，浸泡15分钟，除去水，重复浸泡、除水一次，除去盐分；
第二步酶解：去盐后的裙带菜孢子叶中加入200公斤的纯净水，加入纤维酶0.5公斤进行酶解，酶解温度为40℃，酶解时间为3小时；
第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙0.5公斤，加热至95℃，提取3.5小时得提取液，提取液经浓缩干燥后得到粗提物干粉。制得的干粉中岩藻聚糖硫酸酯含量42％。
实施例2
第一步去盐：取新鲜或冰冻裙带菜孢子叶，室温解冻后，取100公斤加200公斤纯净水，浸泡25分钟，除去水，重复浸泡、除水一次，除去盐分；
第二步酶解：去盐后的裙带菜孢子叶中加入350公斤的纯净水，加入纤维酶2公斤进行酶解，酶解温度为40℃，酶解时间为2.5小时；
第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙0.5公斤，加热至100℃，提取2.5小时提取液，提取液经浓缩干燥后得到粗提物干粉。制得的干粉中岩藻聚糖硫酸酯含量46％。
实施例3
第一步去盐：取新鲜或冰冻裙带菜孢子叶，室温解冻后，取100公斤加400公斤纯净水，浸泡45分钟，除去水，重复浸泡、除水一次，除去盐分；
第二步酶解：去盐后的裙带菜孢子叶中加入600公斤的纯净水，加入纤维酶2公斤进行酶解，酶解温度为45℃，酶解时间2为小时；
第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙1公斤，加热至96℃，提取4小时提取液，提取液经浓缩干燥后得到粗提物干粉。制得的干粉中岩藻聚糖硫酸酯含量55％。
实施例4
第一步去盐：取新鲜或冰冻裙带菜孢子叶，室温解冻后，取100公斤加800公斤纯净水，浸泡20分钟，除去水，重复浸泡、除水一次，除去盐分；
第二步酶解：去盐后的裙带菜孢子叶中加入900公斤的纯净水，加入纤维酶1.5公斤进行酶解，酶解温度为50℃，酶解时间为1.5小时；
第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙1.5公斤，加热至93℃，提取2小时提取液，提取液经浓缩干燥后得到粗提物干粉。制得的干粉中岩藻聚糖硫酸酯含量44％。
实施例5
第一步去盐：取新鲜或冰冻裙带菜孢子叶，室温解冻后，取100公斤加600公斤纯净水，浸泡45分钟，除去水，重复浸泡、除水一次，除去盐分；
第二步酶解：去盐后的裙带菜孢子叶中加入800公斤的纯净水，加入纤维酶0.2公斤进行酶解，酶解温度为45℃，酶解时间为2小时；
第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙1公斤，加热至93℃，提取3小时提取液，提取液经浓缩干燥后得到粗提物干粉。制得的干粉中岩藻聚糖硫酸酯含量40％。
实施例6
第一步去盐：取新鲜或冰冻裙带菜孢子叶，室温解冻后，取100公斤加400公斤纯净水，浸泡50分钟，除去水，重复浸泡、除水一次，除去盐分；
第二步酶解：去盐后的裙带菜孢子叶中加入400公斤的纯净水，加入纤维酶0.3公斤进行酶解，酶解温度为50℃，酶解时间为3小时；
第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙2公斤，加热至90℃，提取2小时提取液，提取液经浓缩干燥后得到粗提物干粉。制得的干粉中岩藻聚糖硫酸酯含量41％。
实施例7
第一步去盐：取新鲜或冰冻裙带菜孢子叶，室温解冻后，取100公斤加300公斤纯净水，浸泡60分钟，除去水，重复浸泡、除水一次，除去盐分；
第二步酶解：去盐后的裙带菜孢子叶中加入300公斤的纯净水，加入纤维酶1公斤进行酶解，酶解温度为55℃，酶解时间为1小时；
第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙3公斤，加热至95℃，提取1小时提取液，提取液经浓缩干燥后得到粗提物干粉。制得的干粉中岩藻聚糖硫酸酯含量48％。
实施例8
第一步去盐：取新鲜或冰冻裙带菜孢子叶，室温解冻后，取100公斤加500公斤纯净水，浸泡30分钟，除去水，重复浸泡、除水一次，除去盐分；
第二步酶解：去盐后的裙带菜孢子叶中加入200公斤的纯净水，加入纤维酶1公斤进行酶解，酶解温度为55℃，酶解时间为2小时；
第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙4公斤，加热至95℃，提取2小时提取液，提取液经浓缩干燥后得到粗提物干粉。制得的干粉中岩藻聚糖硫酸酯含量53％。
实施例9
第一步去盐：取新鲜或冰冻裙带菜孢子叶，室温解冻后，取100公斤加500公斤纯净水，浸泡55分钟，除去水，重复浸泡、除水一次，除去盐分；
第二步酶解：去盐后的裙带菜孢子叶中加入400公斤的纯净水，加入纤维酶1.5公斤进行酶解，酶解温度为60℃，酶解时间为1.5小时；
第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙4公斤，加热至100℃，提取4小时提取液，提取液经浓缩干燥后得到粗提物干粉。制得的干粉中岩藻聚糖硫酸酯含量61％。
Claims (4)
1.一种从褐藻中提取岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征是：具体工艺为：
第一步去盐：将新鲜褐藻或冰冻褐藻解冻后，用纯净水浸泡去盐分；
第二步酶解：在去盐后的褐藻中加入酶进行酶解，酶解温度40～60℃，酶解1～3小时，所述酶为纤维素酶或果胶酶，其加入量是褐藻重量的0.5％～2％；
第三步提取：酶解后的酶解液中加入氯化钙，加热至90～100℃，热提取1～4小时，制得岩藻聚糖硫酸酯的提取液。
2.根据权利要求1所述一种从褐藻中提取岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征是：第一步去盐：采用褐藻2～10倍重量的纯净水浸泡褐藻15～60分钟，除去水，再重复浸泡除水一次。
3.根据权利要求1所述一种从褐藻中提取岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征是：第三步提取：酶解液中氯化钙的加入量是褐藻重量的0.5％～5％。
4.根据权利要求1-3任一所述一种从褐藻中提取岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征是：第三步提取后对提取液进行干燥制成干粉。
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| C56 | Change in the name or address of the patentee |
Owner name: DALIAN HAIBAO BIOTECHNOLOGY CO., LTD. Free format text: FORMER NAME: TAIINGYANG HAILONG SCIENCE AND TECHNOLOGY CO., LTD., DALIAN |
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| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 116045 Bai Lanzi street, Lushunkou District, Liaoning, Dalian, China, Patentee after: Dalian Haibao Biological Technology Co.,Ltd. Address before: 116045 Bai Lanzi street, Lushunkou District, Liaoning, Dalian, China, Patentee before: TAIPINGYANG HAILONG SCIENCE AN |
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| C56 | Change in the name or address of the patentee | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 116045 Bai Lanzi street, Lushunkou District, Liaoning, Dalian, China, Patentee after: DALIAN HAIBAO BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Address before: 116045 Bai Lanzi street, Lushunkou District, Liaoning, Dalian, China, Patentee before: Dalian Haibao Biological Technology Co.,Ltd. |
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| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20170306 Address after: Dalian Lushun 116045 street Tieshan District Liaoning province Bai Lanzi Village No. 1 Patentee after: DALIAN HAIBAO BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 116045 Bai Lanzi street, Lushunkou District, Liaoning, Dalian, China, Patentee before: DALIAN HAIBAO BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. |
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| TR01 | Transfer of patent right | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: Dalian Lushun 116045 street Tieshan District Liaoning province Bai Lanzi Village No. 1 Patentee after: DALIAN HAIBAO BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: Dalian City, Liaoning Province in Lushun district Tieshan street Lanzi Bai Village No. 1 Patentee before: DALIAN HAIBAO BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. |
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| CP02 | Change in the address of a patent holder | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A method for extracting fucoidan sulfate from brown algae Effective date of registration: 20230816 Granted publication date: 20110720 Pledgee: Industrial and Commercial Bank of China Limited Dalian Lvshunkou sub branch Pledgor: DALIAN HAIBAO BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2023210000209 |
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| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Granted publication date: 20110720 Pledgee: Industrial and Commercial Bank of China Limited Dalian Lvshunkou sub branch Pledgor: DALIAN HAIBAO BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2023210000209 |
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| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |