CN112782326B - 同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法 - Google Patents

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Abstract

一种同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法，以胃康灵胶囊溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪中进行色谱检测并建立UPLC指纹图谱，再按照外标一点法计算芍药内酯苷、芍药苷、2‑O‑葡萄糖基白及苷(dactylorhinA)、白及苷(Militarine)和甘草酸的具体含量。本发明可以同时检测胃康灵胶囊指纹图谱和5个指标成分的含量，考察不同厂家、不同批号产品之间的差异性，是胃康灵胶囊质量控制的可行方法。

Description

同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法
技术领域
本发明涉及的是一种药物检测领域的技术，具体是一种同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法。
背景技术
胃康灵胶囊由白芍、白及、三七、甘草、茯苓、延胡索、海螵蛸、颠茄浸膏组成，具柔肝和胃、散瘀止血、缓急止痛功效，临床用途广泛，尤其是治疗慢性胃炎。2020版《中国药典》胃康灵鉴别项下，采用4种方法分别对甘草、延胡索、三七和颠茄浸膏进行薄层鉴别，操作繁琐；含量测定仅以芍药苷作为指标，难以反应复方的整体特点。中药指纹图谱从物质群出发，整体展现中药成分信息和指标性成分，以指纹图谱结合多指标成分同时定量的分析模式，有利于控制胃康灵胶囊的质量一致性。
发明内容
本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法，可以同时检测胃康灵胶囊指纹图谱和5个指标成分的含量，考察不同厂家、不同批号产品之间的差异性，是胃康灵胶囊质量控制的可行方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明涉及一种同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法，以胃康灵胶囊溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪中进行色谱检测并建立UPLC指纹图谱，再按照外标一点法计算芍药内酯苷、芍药苷、2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhin A)、白及苷(Militarine)和甘草酸的具体含量。
所述的胃康灵胶囊溶液是指：胃康灵胶囊的甲醇溶液，具体通过：精密称定胃康灵胶囊粉末0.5～1.5g，置于50mL离心管内，精密加入50～100％甲醇，浸泡1.0h后，30℃下超声(100W，40kHz)提取2次，每次30～60min，3000r/min离心10min，上清液转移至容量瓶，以50～100％甲醇定容，混合均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液进行分析。
所述的对照品溶液是指：对照品芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhinA、militarine、甘草酸单铵盐的甲醇溶液，具体通过：精密称定对照品芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhinA、militarine、甘草酸单铵盐适量，置于2mL容量瓶中，加70％甲醇溶解，定容，得混合标准品溶液，其中芍药内酯苷、芍药苷、2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhinA)、白及苷(Militarine)、甘草酸单铵盐浓度分别为9.6～1449.0μg/mL、3.0～1544.0μg/mL、6.7～670μg/mL、4.3～1095μg/mL、9.9～1485μg/mL，备用。
所述的色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，粒径为1.8μm，以浓度为0.1～0.3％磷酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，洗脱梯度：0～2min，5％B；2～11min，5％～19％B；11～18min，19％B；18～22min，19～25％B；22～30min，25％～26％B；30～40min，26％～39％B；40～65min，39％～69％B，65～67min，69％～95％B；67～69min，95％；69～70min，95％～5％B；检测波长：203nm；210nm；230nm；254nm；280nm；360nm；柱温：30～40℃；流速：0.3～0.5mL·min-1；进样量：2～5μL。
所述的UPLC指纹图谱，通过将液相色谱检测的结果导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012)软件，以中位数法进行相似度评价。
所述的共有峰共16个，其相对保留时间分别为：1号峰0.02、2号峰0.05、3号峰0.2、4号峰0.3、5号峰0.31、6号峰0.38、7号峰0.41、8号峰0.55、9号峰0.55、10号峰0.60、11号峰0.61、12号峰0.94、13号峰1.00、14号峰1.09、15号峰1.13、16号峰1.52，其中：5号峰为芍药内酯苷、6号峰为芍药苷、12号峰为2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhin A)、13号峰为白及苷(Militarine)、16号峰为甘草酸。
所述的外标一点法具体是指：通过建立的UPLC指纹图谱方法同时检测胃康灵胶囊中的芍药内酯苷、芍药苷、2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhin A)、白及苷(Militarine)和甘草酸的成分，具体为：精密称定对照品芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhinA、militarine、甘草酸单铵盐适量，置于2mL容量瓶中，加70％甲醇溶解，定容，制备2份混合标准品溶液，其中芍药内酯苷、芍药苷、2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhin A)、白及苷(Militarine)、甘草酸单铵盐浓度分别为9.6～1449.0μg/mL、3.0～1544.0μg/mL、6.7～670μg/mL、4.3～1095μg/mL、9.9～1485μg/mL，经0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，以所建立的UPLC指纹图谱方法对标准品和样品进行检测并计算样品浓度
Figure BDA0002872428640000021
其中：Cr为对照浓度，Ax为样品峰面积，Ar为对照峰面积。
技术效果
与现有技术相比，本发明采用液相色谱建立了胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法，弥补了现有技术无法全面反映产品质量状况的不足，使其质量控制技术更加完善、科学，为今后的标准化生产提供一种可利用的质量控制模式。将待测胃康灵胶囊的UPLC指纹图谱与所建立的标准胃康灵胶囊的UPLC指纹图谱进行比较，可以从整体上更好地控制产品的质量，为药品的生产和临床应用提供了有效保障。
本发明可快速、准确的鉴定不同厂家产品，评价产品的优劣，具有简单、高效、重复性及稳定性好的优点，可用于胃康灵胶囊的质量控制及鉴别不同厂家产品优劣。
附图说明
图1为胃康灵胶囊UPLC指纹图谱及共有峰(230nm)；
图2为实施例中29批次胃康灵胶囊UPLC-DAD指纹图谱(230nm)
图3为实施例中29批次胃康灵胶囊含量测定热图及聚类分析图。
具体实施方式
实施例1
本实施例取黑龙江生产的十批胃康灵胶囊(S1-S10)进行检测，具体步骤包括：
步骤1：供试品溶液制备：精密称定胃康灵胶囊粉末约0.8g，置于50mL离心管内，精密加入50％甲醇，浸泡1h后，30℃下超声(100W，40kHz)提取2次(15mL，10mL)，每次30min，3000r/min离心10min，上清液转移至25mL容量瓶，以50％甲醇定容，混合均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液进行分析。
步骤2：对照品溶液制备：精密称定对照品芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhinA、militarine、甘草酸单铵盐适量，置于2mL容量瓶中，加70％甲醇溶解，定容，得混合标准品溶液，其中芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhinA、militarine、甘草酸单铵盐浓度分别为9.6μg/mL、3.0μg/mL、6.7μg/mL、4.3μg/mL、9.9μg/mL，备用。0.22μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液进行分析。
步骤3：色谱图检测：吸取供试品溶液和对照品溶液各5μL，注入到液相色谱仪中进行色谱检测，将不同批次样品的色谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012)软件，确定了16个共有峰，并计算相似度；同时记录色谱峰峰面积，按照外标一点法计算其含量。
所述的色谱检测中：色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，AgilentZorbax Eclipse Plus C18，Rapid Resoluion HD(Agilent，2.1mm×100mm，1.8μm)，以浓度为0.2％磷酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，洗脱梯度：0～2min，5％B；2～11min，5％～19％B；11～18min，19％B；18～22min，19～25％B；22～30min，25％～26％B；30～40min，26％～39％B；40～65min，39％～69％B，65～67min，69％～95％B；67～69min，95％；69～70min，95％～5％B；检测波长：203nm；210nm；230nm；254nm；280nm；360nm；柱温：35℃；流速：0.3mL·min-1。
以对照图谱为参照，S1-S10批次与对照图谱相比相似度均大于0.99，说明同厂家生产的样品化学成分基本一致，工艺稳定；外标一点法计算黑龙江生产的10批次胃康灵胶囊中芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhinA、militarine和甘草酸的含量，平均含量分别为0.71～0.80mg/粒、1.99～2.17mg/粒、0.90～1.24mg/粒、3.63～4.22mg/粒和0.90～1.05mg/粒。
实施例2
本实施例取黑龙江生产的十批胃康灵胶囊(S11-S20)，具体步骤包括：
步骤1：供试品溶液制备：精密称定胃康灵胶囊粉末约1.5g，置于50mL离心管内，精密加入80％甲醇，浸泡1h后，30℃下超声(100W，40kHz)提取2次(15mL，10mL)，每次60min，3000r/min离心10min，上清液转移至25mL容量瓶，以80％甲醇定容，混合均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液进行分析。
步骤2：对照品溶液制备：精密称定对照品芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhin A、militarine、甘草酸单铵盐适量，置于2mL容量瓶中，加70％甲醇溶解，定容，得混合标准品溶液，其中芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhin A、militarine、甘草酸单铵盐浓度分别为144.9μg/mL、308.8μg/mL、53.6μg/mL、438.0μg/mL、297.0μg/mL，备用。0.22μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液进行分析。
步骤3：色谱图检测：吸取供试品溶液和对照品溶液各4μL，注入到液相色谱仪中进行色谱检测，将不同批次样品的色谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012)软件，确定了16个共有峰，并计算相似度；同时记录色谱峰峰面积，按照外标一点法计算其含量。
所述的色谱检测中：色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，AgilentZorbax Eclipse Plus C18，Rapid Resoluion HD(Agilent，2.1mm×100mm，1.8μm)，以浓度为0.3％磷酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，洗脱梯度：0～2min，5％B；2～11min，5％～19％B；11～18min，19％B；18～22min，19～25％B；22～30min，25％～26％B；30～40min，26％～39％B；40～65min，39％～69％B，65～67min，69％～95％B；67～69min，95％；69～70min，95％～5％B；检测波长：203nm；210nm；230nm；254nm；280nm；360nm；柱温：40℃；流速：0.5mL·min-1。
以对照图谱为参照，S11-S20批次与对照图谱相比相似度均大于0.98，说明同一厂家生产的样品化学成分基本一致，工艺稳定。外标一点法计算黑龙江生产的10批次胃康灵胶囊中芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhin A、militarine和甘草酸的含量，平均含量分别为0.68～0.76mg/粒、1.68～2.05mg/粒、0.94～1.24mg/粒、3.61～4.10mg/粒和0.71～0.90mg/粒。
实施例3
本实施例取黑龙江(S18-S20)、云南生产(S21-S23)、吉林延边(S24-S26)、吉林柳河(S27-S29)的十二批胃康灵胶囊，具体步骤包括：
步骤1：供试品溶液制备：精密称定胃康灵胶囊粉末约0.5g，置于50mL离心管内，精密加入甲醇，浸泡1h后，30℃下超声(100W，40kHz)提取2次(15mL，10mL)，每次45min，3000r/min离心10min，上清液转移至25mL容量瓶，以甲醇定容，混合均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液进行分析。
步骤2：对照品溶液制备：精密称定对照品芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhin A、militarine、甘草酸单铵盐适量，置于2mL容量瓶中，加70％甲醇溶解，定容，得混合标准品溶液，其中芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhin A、militarine、甘草酸单铵盐浓度分别为1449.0μg/mL、1544.0μg/mL、670μg/mL、1095.0μg/mL、1485.0μg/mL，备用。0.22μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液进行分析。
步骤3：色谱图检测：吸取供试品溶液和对照品溶液各3μL，注入到液相色谱仪中进行色谱检测，将不同批次样品的色谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012)软件，确定了16个共有峰，并计算相似度；同时记录色谱峰峰面积，按照外标一点法计算其含量。
所述的色谱检测中：色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，AgilentZorbax Eclipse Plus C18，Rapid Resoluion HD(Agilent，2.1mm×100mm，1.8μm)，以浓度为0.1％磷酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，洗脱梯度：0～2min，5％B；2～11min，5％～19％B；11～18min，19％B；18～22min，19～25％B；22～30min，25％～26％B；30～40min，26％～39％B；40～65min，39％～69％B，65～67min，69％～95％B；67～69min，95％；69～70min，95％～5％B；检测波长：203nm；210nm；230nm；254nm；280nm；360nm；柱温：38℃；流速：0.4mL·min-1；。
以对照图谱为参照，比较S18-S29批次样品相似度，除S24相似度为0.84以外，其他各批次与对照图谱相比相似度均大于0.90，说明所建方法可用于区分产地的胃康灵胶囊。外标一点法计算不同产地生产的12批次胃康灵胶囊中芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhinA、militarine和甘草酸的含量，含量分别为0.67～1.94mg/粒、1.68～2.96mg/粒、0.34～2.45mg/粒、0.71～4.65mg/粒和0.71～1.63mg/粒。
实施例4
取29批胃康灵胶囊(S1-S29)
步骤1：供试品溶液制备：精密称定胃康灵胶囊粉末约1.0g，置于50mL离心管内，精密加入70％甲醇，浸泡1h后，30℃下超声(100W，40kHz)提取2次(15mL，10mL)，每次30min，3000r/min离心10min，上清液转移至25mL容量瓶，以70％甲醇定容，混合均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液进行分析。
步骤2：对照品溶液的制备：精密称定对照品芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhin A、militarine、甘草酸单铵盐适量，置于2mL容量瓶中，加70％甲醇溶解，定容，得混合标准品溶液，其中芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhin A、militarine、甘草酸单铵盐浓度分别为28.9μg/mL、77.2μg/mL、13.4μg/mL、109.5μg/mL、59.0μg/mL，备用。0.22μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液进行分析。
步骤3：色谱图检测：吸取供试品溶液和对照品溶液各2μL，注入到液相色谱仪中进行色谱检测，将不同批次样品的色谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012)软件，确定了16个共有峰，并计算相似度；同时记录色谱峰峰面积，按照外标一点法计算其含量。
所述的色谱检测中：色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，AgilentZorbax Eclipse Plus C18，Rapid Resoluion HD(Agilent，2.1mm×100mm，1.8μm)，以浓度为0.1％磷酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，洗脱梯度：0～2min，5％B；2～11min，5％～19％B；11～18min，19％B；18～22min，19～25％B；22～30min，25％～26％B；30～40min，26％～39％B；40～65min，39％～69％B，65～67min，69％～95％B；67～69min，95％；69～70min，95％～5％B；检测波长：203nm；210nm；230nm；254nm；280nm；360nm；柱温：35℃；流速：0.4mL·min-1；
以对照图谱为参照，除S24相似度为0.84以外，其他各批次与对照图谱相比相似度均大于0.90，说明同厂家生产的样品化学成分基本一致，工艺稳定。外标一点法计算29批次胃康灵胶囊中芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhinA、militarine和甘草酸的含量，含量分别为0.68～1.94mg/粒、1.68～2.96mg/粒、0.34～2.45mg/粒、0.71～4.65mg/粒和0.71～1.63mg/粒，具体如图3所示。
从图3样品含量测定结果发现，20批黑龙江生产的胃康灵胶囊中芍药内酯苷、芍药苷、2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhin A)、白及苷(Militarine)和甘草酸的含量较为一致，然而云南、吉林延边和吉林柳河生产的胃康灵胶囊与之相比，含量差异较大。从聚类分析结果可发现，第一大类S21和S22为云南生产的产品，总体平均含量最高；第二大类S1～S20为黑龙江生产的产品，总体平均含量较高；第三大类S27～S29为吉林柳河生产的产品，总体平均含量较为居中；第四大类S23和S24～S26为云南和吉林延边生产的产品，总体平均含量最低。猜想各成分含量与原药材产地和生产工艺有一定的关联，表明所建立的方法与现有的2020版中国药典收载的单一成分相比，不仅可以从整体上评价胃康灵胶囊的质量一致性，而且可以用于区分不同生产厂家的产品，为后期胃康灵胶囊治疗慢性胃炎药效成分质量标准研究奠定基础。
本实施例考察了分别考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1％磷酸溶液、甲醇-0.1％磷酸溶液4种流动相进行梯度洗脱，结果显示甲醇0.1％磷酸溶液作为流动相，梯度洗脱条件下，各峰分离度较好，出峰时间适中，且峰型较好；经考察不同柱温(30、35、40℃)下的图谱，结果35℃的柱温分离度及峰形较好；经对0.3mL·min-1、0.4mL·min-1、0.5mL·min-13种不同的流速进行考察，用0.4mL·min-1流速洗脱效果较好。
经用高效液相色谱仪的紫外二极管阵列检测器对芍药内酯苷、芍药苷、2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhin A)、白及苷(Militarine)和甘草酸在波长190～400nm进行全波长扫描，结果芍药内酯苷、芍药苷、2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhinA)、白及苷(Militarine)最佳吸收波长为230nm，甘草酸最佳吸收波长为254nm；为使各目标成分能获得尽可能高的测量灵敏度且能在同一波长下获得胃康灵胶囊的指纹图谱，本实施例采用230nm作为检测最佳波长。试验结果显示，在此检测条件下，各目标成分均有较好的测量灵敏度及较好的峰型，并与共存组份可达到较好的分离。
试验考察了不同供试品制备方法(超声、回流)，结果显示超声提取和回流提取测得结果相差不大，故本实施例选择了更简便快捷的超声提取法；试验还考察比较了不同提取溶剂、不同溶剂用量、不同提取次数及提取时间对含量测定结果的影响，结果显示用70％甲醇超声提取30min，超声提取2次(15mL、10mL)，各成分已基本提取完全，故选择作为本实施例的供试品制备方法。
结果分析本实施例共测定了29个不同来源的胃康灵胶囊的UPLC指纹图谱及其5个主要功效相关成分的含量。试验结果显示，除S24为2018年生产的产品，相似度为0.84以外，剩余28个不同来源胃康灵胶囊的UPLC指纹图谱相似度均达0.9以上，说明不同企业生产的胃康灵胶囊产品各成分组成基本一致；但含量测定结果表明，不同来源胃康灵胶囊的5种主要功效成分含量仍存在一定的差异，如黑龙江、云南企业生产的胃康灵胶囊中，5种主要功效成分的含量较吉林延边、吉林柳河等企业产品的含量高，这可能与药材的来源、生产工艺等因素有关。
本方法通过液相色谱法，首次建立了可同时用于胃康灵胶囊指纹图谱及5个主要成分含量测定的检测方法。如结果所示，该方法操作简便、快速，测得的指纹图谱特征性强，含量测定结果重复性、准确性好，可同时用于胃康灵胶囊的定性与定量分析。该法可以更加全面地对胃康灵胶囊进行质量控制。与现有技术相比，本发明建立了一个既可测定胃康灵胶囊的特征指纹图谱，又可同时测定该制剂中芍药苷、白及苷、甘草酸5种主要成分的检测方法。试验结果表明，该方法指纹图谱特征性强，含量测定结果准确，可以高效的、全面的评价多批次胃康灵胶囊的质量一致性，保证临床疗效的有效性。
上述具体实施可由本领域技术人员在不背离本发明原理和宗旨的前提下以不同的方式对其进行局部调整，本发明的保护范围以权利要求书为准且不由上述具体实施所限，在其范围内的各个实现方案均受本发明之约束。

Claims (6)

1.一种同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法，其特征在于，以胃康灵胶囊溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪中进行色谱检测并建立UPLC指纹图谱，再按照外标一点法计算芍药内酯苷、芍药苷、2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhin A)、白及苷(Militarine)和甘草酸的具体含量；
所述的胃康灵胶囊溶液是指：胃康灵胶囊的甲醇溶液；所述的对照品溶液是指：对照品芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhin A、militarine、甘草酸单铵盐的甲醇溶液；
色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，粒径为1.8 μm，以浓度为0.1~0.3%磷酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，洗脱梯度：0～2 min，5%B；2～11 min，5%～19% B；11～18 min，19%B；18～22 min，19~25% B；22～30 min，25%～26% B；30～40 min，26%～39%B；40～65 min，39%～69% B，65～67 min，69%～95% B；67～69 min，95%；69～70 min，95%～5% B；检测波长：203 nm；210 nm；230 nm；254 nm；280 nm；360 nm；柱温：30~40℃；流速：0.3~0.5 mL·min-1；进样量：2~5 µL。
2.根据权利要求1所述的同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法，其特征是，所述的胃康灵胶囊溶液，具体通过以下方式实现：精密称定胃康灵胶囊粉末0.5~1.5 g，置于50 mL离心管内，精密加入50~100%甲醇，浸泡1.0 h后，30 ℃ 下采用100 W，40kHz的超声提取2次，每次 30~60 min，3000 r/min离心10 min，上清液转移至容量瓶，以50~100%甲醇定容，混合均匀，0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液进行分析。
3.根据权利要求1所述的同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法，其特征是，所述的对照品溶液，具体通过以下方式实现：精密称定对照品芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhin A、militarine、甘草酸单铵盐适量，置于2 mL容量瓶中，加70%甲醇溶解，定容，得混合标准品溶液，其中芍药内酯苷、芍药苷、2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhin A)、白及苷(Militarine)、甘草酸单铵盐浓度分别为9.6~1449.0 μg/mL、3.0~1544.0 μg/mL、6.7~670 μg/mL、4.3~1095 μg/mL、9.9~1485 μg/mL。
4.根据权利要求1所述的同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法，其特征是，所述的UPLC指纹图谱通过将液相色谱检测的结果导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012版软件，以中位数法进行相似度评价。
5.根据权利要求1所述的同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法，其特征是，所述的色谱检测，得到的共有峰共16个，其相对保留时间分别为：1号峰0.02、2号峰0.05、3号峰0.2、4号峰0.3、5号峰0.31、6号峰0.38、7号峰0.41、8号峰0.55、9号峰0.55、10号峰0.60、11号峰0.61、12号峰0.94、13号峰1.00、14号峰1.09、15号峰1.13、16号峰1.52，其中：5号峰为芍药内酯苷、6号峰为芍药苷、12号峰为2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhin A)、13号峰为白及苷(Militarine)、16号峰为甘草酸。
6.根据权利要求1所述的同时测定胃康灵胶囊指纹图谱及多指标成分含量的方法，其特征是，所述的外标一点法具体是指：通过建立的UPLC指纹图谱方法同时检测胃康灵胶囊中的芍药内酯苷、芍药苷、2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhin A)、白及苷(Militarine)和甘草酸的成分，具体为：精密称定对照品芍药内酯苷、芍药苷、dactylorhin A、militarine、甘草酸单铵盐适量，置于2 mL容量瓶中，加70%甲醇溶解，定容，制备2份混合标准品溶液，其中芍药内酯苷、芍药苷、2-O-葡萄糖基白及苷(dactylorhin A)、白及苷(Militarine)、甘草酸单铵盐浓度分别为9.6~1449.0 μg/mL、3.0~1544.0 μg/mL、6.7~670 μg/mL、4.3~1095 μg/mL、9.9~1485 μg/mL，经0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，以所建立的UPLC指纹图谱方法对标准品和样品进行检测并计算样品浓度
Figure DEST_PATH_IMAGE002
，其中：
Figure DEST_PATH_IMAGE004
为对照浓度，
Figure DEST_PATH_IMAGE006
为样品峰面积，
Figure DEST_PATH_IMAGE008
为对照峰面积。
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