CN112771063B - 氟化胆汁酸衍生物 - Google Patents

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Abstract

通式(I)的化合物：其中R2a、R2b、R3a、R3b、R5、Y和R7如本文所定义，该化合物为FXR受体的选择性激动剂，并且用于治疗或预防疾病和病症，包括非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；原发性胆汁性肝硬化；原发性硬化性胆管炎；胆道闭锁；胆汁郁积性肝病；丙型肝炎感染；酒精性肝病；纤维化；或因纤维化导致的肝损伤。

Description

氟化胆汁酸衍生物
发明领域
本发明涉及为胆汁酸衍生物并且可以用于治疗肝病的化合物。特别地，本发明涉及为类法尼醇X受体(Farnesoid X receptor)的选择性激动剂且由此用于治疗疾病例如非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和原发性胆管炎的化合物。本发明还涉及包含本发明的化合物的药物组合物。
发明背景
非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是全球慢性肝病的最主要原因之一，并且正迅速成为肝移植的主要指征(Bellentani，2017)。NAFLD描述了一系列生理状况，范围从简单的脂质在肝脏中蓄积(皮脂腺病)到非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，其特征在于小叶炎症和肝细胞损伤(Haas，Francque和Staels，2016)。在西方，NAFLD被认为是巨大的公共卫生负担，估计影响了英国30％的人口(Dyson，Anstee和McPherson，2014)。NAFLD的患病率增加反映了肥胖症和2型糖尿病的患病率增加，并且NAFLD被认为是代谢综合征的肝脏表现(Cave等人，2016)。
在患有NAFLD的患者中，至少有10-20％会继续发展NASH，这伴随着患者易患肝和肝外并发症例如纤维化、肝硬化、肝细胞癌(HCC)和心血管病。尽管知之甚少，但皮脂腺病到NASH的病理进展被认为是由多个“命中”组成，并伴有脂毒性、氧化性应激和内质网应激，使肝脏对先天免疫防御系统介导的其他损伤系统敏感并导致细胞因子诱导的细胞损伤(Pacana和Sanyal，2015)。一个“命中”涉及肝脏新生脂肪形成，这是由超高胰岛素血症和富含碳水化合物的膳食激活的。此外，作为胰岛素抵抗的结果，功能失调的脂肪细胞中的脂解作用不会失活，导致游离脂肪酸(FFA)渗入循环系统。这些FFA积聚在异位组织(例如肝脏)中，以甘油三酸酯的形式储存。然而，由于甘油三酸酯衍生的有毒代谢产物，FFA的过度积累超过了甘油三酸酯储存的阈值，最终导致了脂毒性。此外，甘油三酸酯清除率的降低和极低密度脂蛋白(VLDL)输出的减少也有助于肝脏中脂肪的积累。这些事件被试图氧化脂肪酸的线粒体和过氧化物酶体所抵消，但最终导致这些细胞器的损伤，导致活性氧(ROS)的过量生产和相关分子模式分子(DAMP)的破坏。在第二个″命中″中，脂质过氧化和FFA和ROS激活炎性细胞因子触发炎症和细胞凋亡，并可以通过Toll样受体激活天然免疫防御系统，从而通过加剧胰岛素抵抗和启动纤维形成进一步延长NASH进程(Cusi，2012)。此外，最近的证据表明肝-肠轴参与了疾病的发展。在NAFLD患者中，肠道菌群的组成改变和肠道通透性增加，且炎症小体(inflamemasome)介导的生态失调也被认为可以促进NASH的发展(Henao-mejia等人，2012；Mouzaki等人，2013)。脂毒性肝事件与脂肪组织、肠道和免疫系统的炎症介体的间接作用共同地突出表明了这种代谢异常的复杂、多因素、跨系统的性质，并且重要地反映了NASH的多种潜在治疗靶标(Haas，Francque和Staels，2016)。
当前，没有用于NASH治疗或预防的有效医学疗法。大部分常见地，推荐通过膳食和生活方式的改变来减体重并改善胰岛素敏感性，但是由于许多患者无法开始或维持这些改变，因此需要长期的药理学解决方案(Neuschwander-Tetri等人，2015)。研究集中在治疗NASH的潜在分子靶标上，包括NR1亚家族的几种核激素受体。这些受体，特别是类法尼醇X受体(FXR)为富有吸引力的靶标，这归因于它们在促成疾病病因的几种途径中的潜在作用。
与所有核受体一样，类法尼醇X受体(FXR)充当配体激活的转录因子，其可调节负责控制表观遗传变化的细胞机制。存在两种编码FXR的基因：在许多物种中高度保守的FXRα(NR1H4)和在人类中作为假基因存在的FXR β(NR1H5)。FXR α基因编码四种不同的同工型，这些同工型是由于不同的启动子应用和可选的mRNA剪接组合产生的。尽管所有四个同工型均具有高度保守的配体结合结构域，这启示FXR配体将以非选择性方式与任何同工型结合，但显然存在差异表达，其中2个同工型主要在肝细胞和具有活跃类固醇代谢的细胞中表达，并且其他的则主要在结肠、肠和其他参与肠肝循环的细胞中表达(Huber等人，2002；Vaquero等人，2013)。此外，某些FXR靶基因比其他一些对某些同工型的反应更敏感，而且同工型表达的整体模式被认为对特定组织对FXR配体的敏感性和转录反应具有显著影响(Zhang，Kast-woelbern和Edwards，2003；Vaquero等人，2013)。
FXR在其结构组织和激活方面均代表典型的核受体。简言之，FXR由N-末端DNA结合结构域(DBD)组成，该区域由两个负责识别并结合共有激素效应元件的Zn2+手指组成，它们通过可变铰链区连接至C-末端配体结合域(LBD)，该结构域为小分子配体的鉴定和沉淀所必需的疏水口袋(Chiang，2013)。与其他核受体相似，FXR与DNA结合为带有强制配偶体的异二聚体类视色素X受体(RXR)。在没有配体存在下，FXR为无活性的。通常，FXR/RXR异二聚体以与辅阻遏物肽的复合物形式与其靶基因的AGGTCA反向重反复应元件预先结合在一起(Neuschwander-Tetri，2012)。在通过配体结合激活时，受体发生构象变化，从而释放了辅阻遏物复合物，从而使LXXLL共激活基元的结合位点暴露于配体结合袋的疏水槽中(Copple和Li，2016)。LBD表面与共激活蛋白的两端之间的氢键会形成“电荷钳”，所述共激活蛋白被募集至所述位点。最终，这导致靶基因的染色质结构发生变化，从而使通用转录因子和RNA聚合酶接近其启动子，且由此启动其转录(Ananthanarayanan等人，2004)。
FXR的典型内源性配体是胆汁酸。胆汁酸是在哺乳动物胆汁中发现的类固醇酸，并且包括例如均在人体内发现的胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸和去氧胆酸的化合物。
以下显示了类固醇的通用编号系统和鹅脱氧胆酸中碳原子的编号。
FXR充当胆汁酸代谢的主要调节剂。FXR的主要作用是促进在进食和禁食状态下沿着肠-肝-脂肪轴的营养和能量转移(Evans和Mangelsdorf，2014)。餐后刺激后，胆汁酸使脂质吸收，并激活FXR介导的信号转导途径。通过FXR靶基因成纤维细胞生长因子19(FGF19)的作用，这可促进肠道吸收养分并刺激肝脏中的能量代谢。除了肠FGF19外，肝脏中FXR转录靶标(短异二聚体配偶体(SHP))的表达还导致重新胆汁酸合成的下调，并根据代谢需要严格控制肠肝胆汁酸池。对NASH患者的研究表明，FXR和胆汁酸生物合成酶、胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)和固醇27羟化酶(CYP27A1)的表达减少均与疾病的严重程度成正比；而NAFLD患者也显示对肝FGF19的反应受损(Yang、Shen和Sun，2010；Min等人，2013；Cave等人，2016)。
最近，FXR已成为脂质、葡萄糖和胆固醇体内稳态的主要参与者，从而调节牵涉肝脂肪生成、VLDL合成、胰岛素敏感性有关的基因，且部分归因于与其他核受体、糖原异生和糖原生成的相互作用(Kast等人，2001；Watanabe等人，2004；Ma等人，2006；Zhang等人，2006)。由于通过SHP信号传导级联起作用，因此，FXR下调固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)以减少脂肪酸合成，同时上调过氧化物酶体增生物激活受体α(PPAR α)以增加线粒体β-氧化作用对脂肪酸的分解代谢，从而减少了肝脏脂肪酸的积累。FXR还可以提高载脂蛋白C2(APOC2)和VLDL受体的表达水平，这是VLDL水解和清除的原因。使用FXR缺陷小鼠的研究表明与人NASH患者的表型相似性，包括肝甘油三酸酯水平显著升高、循环FFA升高和肝皮脂腺病(Maloney等人，2000；Zhang等人，2004)。此外，天然和合成激动剂对FXR的激活已经能够改善啮齿动物的血浆甘油三酸酯水平(Kast等人，2001)。通过降低甘油三酸酯和FFA的水平，认为FXR激活还可以增加肝脏和周围组织的胰岛素敏感性，如FXR空小鼠中所观察到的，其展示出在肝脏和肌肉中均表现出轻度的葡萄糖耐受不良和胰岛素信号传导振荡(Ma等人，2006)。与这一发现一致的是，在NASH的人体受试者和动物肥胖模型中，半合成的FXR激动剂奥贝胆酸(OCA)可改善胰岛素敏感性(Cipriani等人，2010；Mudaliar等人，2013)。同样，已经提出FXR主要通过FGF19信号传导在葡萄糖稳态；降低血浆葡萄糖浓度、降低三种关键的糖异生酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)、果糖-1，6-双磷酸酶(FBP1)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)的表达和活性和抑制cAMP调节元件结合蛋白(CREB)和下游PPARγ共激活因子1-α(PGC1 α)以促进葡萄糖作为糖原的存储申起重要作用(Zhang等人，2006)。然而，来自动物模型的矛盾结果启示，FXR的参与可能只是受体和途径的复杂网状结构的一部分(Watanabe等人，2011)。
值得注意的是，FXR牵涉肝炎的抑制，其中涉及复杂的途径，其导致特异性核因子κB(NF-κB)靶基因和促炎细胞因子的负调控(Wang等人，2008)。此外，尽管对潜在的机制仍知之甚少，但据认为FXR在肠保护和维持肠道菌群的肠道屏障方面具有重要作用(Inagaki等人，2006)。饲喂高脂饮食的FXR基因敲除小鼠表现出肠道细菌过度生长以及促炎和促纤维生成介体水平升高，例如肿瘤坏死因子α(TNF α)、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)和转化生长因子β(TGF β-1)(Kong等人，2009)。此外，临床前期证据启示，FXR激动剂的参与抑制了初级肝细胞和NASH小鼠模型中NFκB的表达，从而改善了炎症性微环境和纤维化(Kong等人，2009；Ma等人，2013)。
为了进一步支持其在NASH(且尤其是HCC)中的作用，已证明FXR可以调节肿瘤抑制基因的表达，并且证实FXR激动剂可以减少小鼠肝异种移植肿瘤模型中的肿瘤生长和转移(Deuschle等人，2012；Jiang等人，2013)。因此，该证据除了在肠-肝-脂肪轴中发挥中心作用外，还在维持肠屏障完整性、抑制炎症以及调节胆汁酸、葡萄糖和脂质代谢方面均支持FXR失调导致NASH的发生的理念，且由此证实FXR为NASH治疗剂的理想靶标。
已知许多FXR激动剂，包括各种非类固醇化合物。更近来，已经开发了具有FXR激动剂活性的胆汁酸类似物。它们包括在WO 02/072598和EP1568706中描述的奥贝胆酸(OCA；INT-747)。OCA的类似物和医学用途以及OCA和类似物的制备方法描述在下列文献中：WO2005/092925、WO 2005/089316、WO 2006/122977、WO 2007095174、WO 2008/002573、WO2008/091540、WO 2010/014836、WO 2010/059853、WO 2010/059859、WO 2013/192097、WO2014/066819、WO 2015/085474、WO 2014/184271、WO 2016/127019、WO 2016/144946、WO2016/164413、WO 2016/176208、WO 2016/205475、WO 2017/019524、WO 2017/027396、WO2017/053428、WO 2017/053826、WO 2017/062763、WO 2017/079062、WO 2017/111979和WO2017/156024(均为Intercept Pharmaceuticals，Inc)。
另外的带有修饰的侧链的6-烷基胆汁酸类似物描述在WO 2016/073767、WO 2016/086115、WO 2016/086134、WO 2016/086169、WO 2016/086218、WO 2016/130809、WO 2016/161003、WO2017/147137、WO 2017/147159和WO 2017/147174中(均来自EnantaPharmaceuticals，Inc)。
涉及类似化合物的其他对比文件包括CN105646634、WO 2016/173524、WO 2016/173397、CN105348365、US 2014/0206657。
我们早期的申请WO 2016/079518、WO 2016/079518、WO 2016/079519、WO 2016/079520、WO 2017/199036、WO 2017/199039和WO 2017/199033均涉及制备这些胆汁酸类似物及其合成中的中间体的方法。
现有技术中描述的胆汁酸类似物的问题之一在于，除了它们作为FXR激动剂的活性外，它们还是G蛋白偶联受体TGR5的调节剂。其为G蛋白偶联受体视紫质样超家族的成员，并且在胆汁酸信号传导网络中具有重要作用。例如，与使用OCA相关的不良反应之一为瘙痒，并且认为其来源于脱靶受体例如TGR5的OCA激活(Alemi等人，2013)。
Xiao等人，2017涉及OCA及其作为FXR激动剂的OCA系列衍生物的合成和生物学评估。在衍生物中，羧酸基团被各种替代物替代。作者指出，所有测试的化合物均显示出低至中等的TGR5效能，且得到的最佳选择性为对FXR的选择性的30倍，这通过四唑衍生物实现。具有最高肝：血浆浓度比的化合物为化合物18，其具有CH2CH2C(O)NH-S(O)2CH3侧链。
本发明涉及新的化合物，其维持FXR激动剂活性并且相对于TGR5对于FXR具有增强的选择性。
此外，与已知的胆汁酸衍生物相比，在2和/或4位氟化并且具有芳基磺酰胺或磺酰脲侧链的胆汁酸衍生物具有对FXR受体增加的激动剂活性。本发明人推定这种增加的激动剂活性归因于分子结合到FXR配体结合结构域的规范和变构口袋中。然而，本发明化合物的有效性不受此推定的正确性或其他影响。
发明概述
因此，本发明提供了通式(I)的化合物：
其中
R2a、R2b、R3a和R3b的各自独立地为H或F，条件是R2b和R3b的至少一个为F；
R5为CR6aR6bR8、OR8、SR8或NR6aR8；
R6a、R6b和R8各自独立地为H或甲基
Y为价键或C1-4亚烷基或C2-4亚烯基连接基，其中之一任选地被一个或多个R10取代；
其中R10各自独立地为卤素或OH；
R7选自C(O)NR17S(O)2R15、NR17C(O)NR18S(O)2R15、NR17C(S)NR18S(O)2R15和NR17C(NR20)NR18S(O)2R15；
R15为5至10元芳基或杂芳基环，其任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自C1-6烷基、Ci-6卤代烷基、卤素、O(C1-6烷基)和O(C1-6卤代烷基)；
R17和R18各自独立地为H或甲基；
R20为H、甲基或CN；
或其盐或同位素变化形式。
一些氟化胆汁酸衍生物为已知的，例如，Roda等人1995，Honorio等人2006、US 5,175,320和WO 97/44043均涉及胆汁酸类似物的6-类似物，而WO 2014/160441描述了6，6-二胆汁酸类似物。Sato等人2008涉及7-氟石胆酸衍生物，且Sievanen等人2008和Cushman等人1995分别公开了3，3-二氟胆烷-24-酸及其甲酯。EP 3290429公开了胆汁酸衍生物，认为其引用治疗FXR-介导的疾病。所公开的化合物包括一些4-氟胆汁酸衍生物。Clerici等人2006和Macchiarulo等人2008均涉及3α-6α-二羟基-7α-氟-5β-胆烷酸酯，认为其引用治疗肝病。WO2016/154216涉及UDCA的3-和7-氟化衍生物，其引用治疗神经变性疾病。WO2016/173493涉及带有修饰的侧链并且为FXR和/或TGR5的调节剂的胆汁酸衍生物。US 2018/0148470涉及4β-氟化胆汁酸衍生物，认为其用于治疗FXR-介导的疾病。然而，现有技术中没有教导通式(I)的化合物。
通式(I)的化合物为选择性FXR激动剂且由此用于治疗疾病和病症，例如非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；原发性胆汁性肝硬化(PBC)；原发性硬化性胆管炎；胆道闭锁；胆汁郁积性肝病；丙型肝炎感染；酒精性肝病；纤维化；和因纤维化导致的肝损伤。
尽管不希望受到该理论束缚，但本发明人已经推测，环中的存在的氟会改变3α羟基的氢键合能力，从而影响化合物对FXR和TGR5的受体活性和选择性。此外，显而易见，在类固醇环系的2或4位上具有的化合物可能具有增加的代谢稳定性。
本发明人还发现，如以下实施例所示，侧链基团(-Y-R7)的性质对FXR激动剂活性具有显著影响。
在本说明书中，除非上下文由于表达语言或必要的暗示而另外要求，否则词语“包含”或变化形式例如“包括”或“含有”以包括性含义使用，即指定存在所陈述的特征，但不排除在本发明的各种实施方案中存在或增加其他特征。
在本说明书中，涉及的“药物用途”是指施用于人或动物，特别是人或哺乳动物，例如家养的或家畜的哺乳动物，目的在于治疗或预防疾病或医学状况。术语“药物组合物”是指适用于药物用途的组合物，且“药学上可接受的”是指适用于药物组合物的活性剂。其他类似的术语应据此解释。
在本说明书的上下文中，术语“多个”是指两个或两个以上。
本说明书中引用的所有出版物，包括、但不限于专利和专利申请，均通过引用并入本文，就如同各个出版物已被具体地和单独地指示以引用的方式并入本文作为充分阐述一样。
发明详述
在本申请中，术语“C1-6”烷基是指具有1-6个碳原子的直链或支链完全饱和的烃基。该术语包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。其他烷基，例如C1-4烷基、C1-3烷基或C1-2烷基如上述所定义，且包含不同数量的碳原子。
术语“亚烷基”是指直链或支链完全饱和的烃链。适合的亚烷基为C1-4亚烷基、C1-3亚烷基或C1-2亚烷基。亚烷基的实例包括-CH2-、-CH2CH2-、-CH(CH3)-CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2CH2CH2-和-CH2CH(CH2CH3)-。
术语“亚烯基”是指包含至少一个碳-碳双键的直链或支链烃链。适合的亚烯基为C2-4亚烯基或C2-3亚烯基。亚烯基的实例包括-CH＝CH-、-CH＝C(CH3)-、-CH2CH＝CH-、-CH＝CHCH2-、-CH2CH2CH＝CH-和-CH2CH＝C(CH3)-。
术语“芳基”和“芳族基团”是指环状基团，其具有芳香性，并且具有6-14个碳原子(另有指定的除外，例如6-10个环碳原子)并且包含至多3个环。如果芳基包含一个以上环，则并非所有环必须具有芳香性。实例包括苯基、萘基和蒽基以及部分饱和系统，例如四氢萘基、茚满基和茚基。芳基的另外的实例为1，2，3，4-四氢萘。
术语“杂芳基”和“杂芳族基团”.是指环状基团，其具有芳香性，并且具有5-14个环原子(另有指定的除外，例如5-10个环原子)，其中至少一个为选自N、O和S的杂原子且包含至多3个环。如果杂芳基包含一个以上环，则并非所有环必须具有芳香性。杂芳基的实例包括吡啶、嘧啶、吲哚、苯并呋喃、苯并咪唑和亚吲哚。杂芳基的另外的实例包括喹啉和异喹啉。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘，并且术语“卤代”是指氟代、氯代、溴代或碘代基团。
术语“C1-6卤代烷基”是指如上述所定义的具有1-6个碳原子并且被一个或多个卤原子取代、至多全卤代的直链或支链烷基。实例包括三氟甲基、氯乙基和1，1-二氟乙基。其他卤代烷基，例如C1-5卤代烷基、C1-4卤代烷基、C1-3卤代烷基或C1-2卤代烷基如上述所定义，但包含不同数量的碳原子。
术语“侧链”是指-Y-R7部分。在UDCA中，-YR7为-CH2CH2-C(O)OH，并且涉及的可变的侧链是指-YR7除此之外的部分。
术语“同位素变化形式”是指与通式(I)中所述的那些相同的同位素标记的化合物，但事实上一个或多个原子被原子量或质量数不同于在自然界中最常见的原子量或质量数的原子替代，或者其中具有在自然界中较少见的原子量或质量数的原子的比例已经增加(后一概念称为“同位素富集”)。可掺入本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟、碘和氯的同位素。例如2H(氘)、3H、11C、13C、14C、18F、123I或125I(例如3H、11C、14C、18F、123I或125I)，它们可以是天然存在的同位素或非天然存在的同位素。
通式(I)的化合物的盐适当地是药学上可接受的表盐。但是，例如，在制备通式(I)的化合物中的中间体或进行反应以制备具有可替代侧链的通式(I)的化合物时，也可以使用非药学上可接受的盐。
本文所述化合物的适合的盐包括碱加成盐，例如钠、钾、钙、铝、锌、镁和其他金属盐以及胆碱、二乙醇胺、乙醇胺、乙二胺、葡甲胺和其他众所周知的碱加成盐，如在Paulekuhn等人，J.Med.Chem.2007，50，6665-6672中所概括的和/或本领域技术人员已知的。
如上所述，在通式(I)的化合物中，R2a、R2b、R3a和R3b各自独立地为H或F，条件是R2b和R3b的至少一个为F。
在一些通式(I)的化合物中，R3b为F，且R2a、R2b和R3a的每一个为H或F。在另外的通式(I)的化合物中，R2b为F，且R2a、R3a和R3b的每一个为H或F。
本发明的一些适合的化合物为单氟化的。
在一些单氟化化合物中，R3b为F，且R3a、R2a和R2b的每一个为H，即通式(I)的化合物具有4β-氟取代基。
在另外一些单氟化化合物中，R2b为F，且R2a、R3a和R3b的每一个为H，即通式(I)的化合物具有2β-氟取代基。
一些适合的通式(I)的化合物为二氟化的。在一些适合的二氟化通式(I)化合物中，R3b为F，R3a为H，R2a和R2b之一为F，且R2a和R2b的另一个为H，即通式(I)的化合物具有2-氟取代基和4β-氟取代基。
在另外的适合的二氟化通式(I)的化合物中，R3a和R3b均为F，且R2a和R2b均为H，使得通式(I)的化合物为4，4-二氟取代的化合物。
通式(I)的化合物可以为三氟化化合物，其中R2a、R2b、R3a和R3b中的三个为F，且另一个为H，或四氟化化合物，其中R2a、R2b、R3a和R3b全部为F。
在通式(I)的化合物中，适合地，R6a和R6b均为氢，和/或R8为甲基。
在一些适合的化合物中，R5为乙基、OH或甲氧基，特别是乙基或甲氧基，且尤其是乙基。
在一些适合的化合物中，R5为甲氧基。
在特别适合的化合物中，R5为乙基。
在一些适合的通式(I)的化合物中，Y为价键。
在另外的适合的通式(I)的化合物中，Y为C1-4亚烷基或C2-4亚烯基连接基，其中之一任选地被一个或多个如上述定义的基团R10取代。
在这些化合物中，更适合地，Y为C1-4、C1-3或C1-2亚烷基连接基，其任选地被一个或多个如上述定义的基团R10取代。
在一些通式(I)的化合物中，Y为未取代的。
在另外的通式(I)的化合物中，Y被一个或多个取代基R10取代。
在一些情况中，R10为卤素。
在另外的情况中，R10为OH。
适合的连接基Y的实例包括价键、-CH2-、-CH2CH2-、-CH(OH)-CH2-、-CH＝CH-或-CH＝C(CH3)-，特别是价键、-CH2-、-CH2CH2-、-CH＝CH-或-CH＝C(CH3)-，尤其是-CH2-、-CH2CH2-、-CH＝CH-或-CH＝C(CH3)-。
更适合地，Y为价键或C1-3亚烷基连接基，其任选地被一个或多个OH基团取代。仍然更适合地，Y为C1-3亚烷基连接基，其任选地被一个或多个OH基团取代。
在一些特别适合的化合物中，Y为未取代的C1-3亚烷基连接基。
特别地，适合的通式(I)的化合物，Y为-CH2-或-CH2-CH2-，尤其是-CH2-CH2-。
在本发明的化合物中，R7更适合为C(O)NR17S(O)2R15或NR17C(O)NR18S(O)2R15，其中R15、R17和R18如上述对通式(I)的化合物所定义。
更适合地，R17和R18的每一个(如果存在)为H。
在一些适合的通式(I)的化合物中，R15选自苯基和5或6元杂芳基，例如吡啶基、嘧啶基或吡咯基，其任一个可以未被取代或被一个或多个如本文所定义的取代基取代，尤其是1-3个取代基，更常见的是1或2个取代基，且特别是1个取代基。更适合地，R15为苯基或6元杂芳基，其任一个未被取代或被一个或多个如上述所定义的取代基取代，尤其是1-3个取代基，更常见的是1或2个取代基，且特别是1个取代基。
R15部分的特别适合的取代基选自氟、C1-4烷基、C1-4氟烷基、O(C1-4烷基)和O(C1-4氟烷基)。
通式(I)的化合物中R15基团的实例包括苯基，其未被取代或被单一取代基取代，所述取代基选自氟、C1-4烷基、C1-4氟烷基、O(C1-4烷基)和O(C1-4氟烷基)，尤其是氟、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、三甲基、甲氧基和三氟甲氧基。
当R7为NR17C(O)NR18S(O)2R15，且R15为带有单一取代基的苯基时，取代基可以在环上的任意位置上，但最适合地为间或对取代基，尤其是对取代基。特别地，当R7为NR17C(O)NR18S(O)2R15且R15为被CF3取代的苯基时，优选CF3取代基位于间或对位上。
通式(I)的化合物的实例包括：
N，N’-(3α，7α二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-甲苯磺酰脲(化合物1)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲(化合物2)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-4-(叔丁基)苯磺酰脲(化合物3)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-间-甲苯磺酰脲(化合物4)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-邻-甲苯磺酰脲(化合物5)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-氟苯磺酰脲(化合物6)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-间-氟苯磺酰脲(化合物7)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-邻-氟苯磺酰脲(化合物8)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-(三氟甲基)苯磺酰脲(化合物9)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-间-(三氟甲基)苯磺酰脲(化合物10)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-邻-(三氟甲基)苯磺酰脲(化合物11)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-4-(三氟甲氧基)苯磺酰脲(化合物12)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-甲氧基苯磺酰脲(化合物13)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-对-三氟甲氧基苯磺酰胺(化合物14)；
N-(3α，7α-二.羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-对-苯磺酰胺(化合物15)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-3-氟苯基磺酰胺(化合物16)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-2-氟苯基磺酰胺(化合物17)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-4-三氟甲基苯基磺酰胺(化合物18)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-3-三氟甲基苯基磺酰胺(化合物19)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-2-三氟甲基苯基磺酰胺(化合物20)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲(化合物21)
N-(3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-苯磺酰胺(化合物22)；及其盐和同位素变化形式。
通式(I)的化合物可以通过下列步骤制备，其中R7为NHC(O)N(R18)S(O)2R15：使通式(II)的化合物脱保护：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R40为被保护的OH基团。
适合地，保护基为可以通过用碱处理除去的基团。这种类型的被保护的OH基团的实例包括R41C(O)O，其中R41为C1-6烷基或苄基，尤其是甲基。也可以使用甲硅烷基醚保护基。OH的其他适合的保护基为本领域技术人员众所周知(参见Wuts，PGM和Greene，TW(2006))。
通式(II)的化合物可由通式(III)的化合物：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R40如对通式(II)所定义；
与通式(IV)的磺酰胺
在催化剂例如1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)存在下，并且适合地在有机溶剂例如甲苯中反应而制备，
其中R15和R18如对通式(I)的化合物所定义。
通式(IV)的磺酰胺为已知的并且易于得到或可以通过已知方法制备。
通式(III)的化合物可以通过在惰性气氛中例如在氩气气氛中加热通式(V)的化合物而制备：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R40如对通式(II)所定义。
适合地，将通式(V)的化合物加热至约100-150℃，典型地约125℃。
通式(V)的化合物可以由通式(VI)的化合物：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R40如对通式(II)所定义；
通过与二苯基磷酰基叠氮化物在碱性条件下、例如在三乙胺存在下反应而制备。
该反应适合地中惰性气氛中、例如在氩气气氛中进行。
通式(VI)的化合物可以通过使通式(VII)的化合物脱保护而制备：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义。
例如，当被保护的OH基团R40为乙酰氧基时，可以使通式(VII)的化合物与乙酐在适度碱性条件下，例如在碳酸氢钠存在下反应。
该反应适合地中惰性气氛中进行，例如在氩气气氛中。
通式(VII)的化合物可以通过水解通式(VIII)的化合物制备：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47为C1-6烷基或苄基。
水解可以为碱催化的水解，例如使用碱金属氢氧化物，例如氢氧化钠或氢氧化锂。适合地，该反应在醇溶剂例如甲醇中进行。
通式(VIII)的化合物，其中R3b为F，可以通过还原适合的通式(XX)的化合物而制备：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义。
适合的还原剂包括氢化物，例如硼氢化钠。该反应适合地在惰性气氛例如氩气中并且在有机溶剂例如四氢呋喃中进行。
用于制备通式(XX)的化合物和通式(VIII)的化合物的方法如下所述，其中R2b为F。
在可替代选择的方法中，可以通过使通式(XII)的化合物脱保护制备通式(I)的化合物，其中R7为NHC(O)N(R18)S(O)2R15：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R45和R46的每一个独立地为被保护的OH基团。
适合地，R45和R46各自独立地为甲硅烷基醚，例如叔丁基二甲基甲硅烷氧基或三甲基甲硅烷氧基。当R45和R46为甲硅烷基醚时，它们可以相同或不同，并且脱保护可以通过用试剂例如氟化四丁基铵(TBAF)处理来进行。还可以使用可替代选择的保护基，例如如上述通式(II)中的基团R41C(O)O。其他保护基为本领域众所周知的(参见Wuts，PGM和Greene，TW(2006))。
通式(XII)的化合物可以由通式(XIII)的化合物：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R45和R46如对通式(XII)的化合物所定义；
通过与如上述所定义的通式(IV)的磺酰胺在催化剂例如1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)存在下和适合地在有机溶剂例如甲苯中反应而制备。
通式(XIII)的化合物可以通过在惰性气氛中、例如在氩气气氛中加热通式(XIV)的化合物而制备：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R45和R46如对通式(XII)的化合物所定义。
通式(XIV)的化合物可以由通式(XV)的化合物：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R45和R46如对通式(XII)的化合物所定义；
通过与二苯基磷酰基叠氮化物在碱性条件下、例如在三乙胺存在下反应而制备。
通式(XV)的化合物可以通过水解所定义的通式(XVI)的化合物制备：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，R45和R46如对通式(XII)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义。
适合地，水解在碱性条件下进行，例如通过用碱金属氢氧化物处理进行，例如氢氧化钠或氢氧化锂。适合地，该反应在醇溶剂中进行。
通式(XVI)的化合物可以通过保护通式(XVII)的化合物而制备：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，R46如对通式(XII)所定义，且R47如对通式(VIII)所定义。
当被保护的OH基团R45为甲硅烷基醚时，可以通过使通式(XVII)的化合物与通式(XVIII)的化合物反应进行保护：
(R50)3Si-R48
(XVIII)
其中R48为离去基，典型地为卤化物，例如氟化物、氯化物或溴化物，或磺酰基，例如三氟甲磺酰基、甲苯磺酰基或甲磺酰基；且其中R50各自独立地为，例如C1-6烷基或苯基，使得通式(XVI)的化合物中的基团R45为(R50)3Si-O。
该反应可以在惰性气氛中、在碱例如2，6-卢剔淀存在下，并且在约-5-5℃温度下、典型地为0℃下进行。适合的溶剂包括有机溶剂，例如二氯甲烷。
通式(XVII)的化合物可以通过还原通式(XIX)的化合物制备：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，R46如对通式(XII)所定义，且R47如对通式(VIII)所定义。
适合的还原剂包括氢化物，例如硼氢化钠。还原适当地在惰性气氛中、例如氩气，在约15-25℃的温度下、典型地在室温下，并且在溶剂例如四氢呋喃中进行。
通式(XIX)的化合物可以通过保护通式(XX)的化合物而制备，其中R3b为F：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义。
当被保护的OH基团R46为甲硅烷基醚时，保护可以通过与适合的甲硅烷基卤或磺酸酯(例如三氟甲磺酸酯、甲磺酸酯或甲苯磺酸酯)在碱例如正丁基锂存在下进行。例如，当R46为三甲基甲硅烷氧基时，通式(XX)的化合物可以与三甲基甲硅烷基氯反应。
可以通过使通式(XXII)的化合物脱保护制备通式(I)的化合物，其中R7为C(O)N(R17)S(O)2R15：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b、R5、R15和R17如对通式(I)的化合物所定义，且R46如对通式(XII)所定义。
当被保护的OH基团R46为甲硅烷基醚时，可以通过用碱例如TBAF处理使其脱保护。该反应适当地在惰性气氛例如氩气气氛中并且在干有机溶剂例如四氢呋喃中进行。
通式(XXII)的化合物可以由通式(XXIII)的化合物：
其中Y、R2a、R2b、R3a、F3b和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R46如对通式(XII)所定义；
通过与通式(XXIV)的磺酰胺
其中R15和R17如对通式(I)的化合物所定义；
在偶联剂例如1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)和碱例如二甲基氨基吡啶存在下反应而制备。
通式(XXIII)的化合物可以通过水解通式(XVII)的化合物制备，适合地在碱性条件下，例如通过用碱金属氢氧化物、例如氢氧化钠或氢氧化锂处理进行。适合地，该反应在醇溶剂中进行。
对于通式(I)的化合物，其中R2b为F，R3a和R3b为H，且R7为C(O)N(R17)S(O)2R15，可以使用类似路线，以通式(VII)的化合物为原料，其中R2b为F，且R3a和R3b均为H。
如上所述，通式(XVII)的化合物可以由通式(XX)的化合物通过通式(XIX)的化合物而制备。
通式(XX)的化合物可以为通式(XXa)、(XXb)、(XXc)、(XXd)或(XXe)的化合物：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义。
通式(XXa)的化合物可以由通式(XXX)的化合物制备：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义；
通过下列方法进行，该方法包含：
(i)用强碱、例如n-BuLi或二异丙基氨基锂(LDA)和三烷基甲硅烷基卤、例如三甲基甲硅烷基氯处理，然后
(ii)例如用具有如下结构的(1-氯甲基-4-氟-1，4-重氮基双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸酯)使步骤(i)的产物亲电氟化：
当使用时，该反应适合地在15-25℃温度下、典型地在室温下、在极性有机溶剂例如乙腈中进行。
适合的碱包括二异丙基氨基锂(LDA)和正丁基锂，它们典型地以与三甲基甲硅烷基氯组合的方式使用。
通式(XXb)的化合物可以由通式(XXa)的化合物通过进一步氟化制备，典型地通过与上述对通式(XXa)化合物所述类似的方法，即通过包含下列步骤的方法：
(i)用强碱例如n-BuLi或LDA和三烷基甲硅烷基卤、例如三甲基甲硅烷基氯处理，然后
(ii)例如用对步骤(i)的产物进行亲电氟化。
通式(XXc)的化合物可以由通式(XXb)的化合物通过用强碱、典型地为与三烷基甲硅烷基卤例如三甲基甲硅烷基氯组合使用处理，然后用氟化制备。
通式(XXd)的化合物可以由通式(XXc)的化合物通过进一步氟化、典型地用和弱碱例如三乙胺制备。
通式(XXe)的化合物可以由通式(XXa)的化合物制备，通过与通式(XXXI)的化合物
R51-Si(R13)3 (XXXI)
其中R13各自独立地选自C1-6烷基和苯基，且R51为卤素，例如氯；
在强碱例如二异丙基氨基锂存在下，然后氟化、典型地用反应而制备。
通式(XXX)的化合物可以由通式(XXXII)的化合物通过氧化而制备：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义；所述氧化典型地使用试剂例如(2，2，6，6-四甲基哌啶-1-基)oxidanyl(TEMPO)或(二乙酰氧基碘)苯(BAIB)进行。
通式(XXXII)的化合物可以通过酯化通式(XXXIII)的羧酸：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义；
通过与式R47-OH的醇在酸例如对甲苯磺酸或甲磺酸存在下反应而制备。
通式(XXXXIII)的化合物为已知的。通式(XXXIII)的化合物为奥贝胆酸，其中R5为乙基，且Y为-CH2CH2-(参见WO 02/072598)。
我们早期的申请WO 2016/079518、WO 2016/079518、WO 2016/079519、WO 2016/079520、WO 2017/199036和WO 2017/199033描述了用于按照方案1制备通式(XXXIII)的化合物的方法，其中Y如对通式(I)所定义。
方案1
通式(XL)和(XLI)的一些化合物为已知的，且例如Uekawa等人(2004)描述了由豆甾醇合成(22E)-3-氧代-4，22-胆二烯-24-酸乙酯：
然后将其转化成(22E)-3-氧代-4，6，22-胆三烯-24-酸乙酯：
Uekawa等人随后继续描述了将这种化合物转化成(6α，7α，22E)-6，7-环氧-3-氧代-4，22-胆二烯-24-酸乙酯。
通式(XL)和(XLI)的其他化合物可以通过由与豆甾醇类似的植物甾醇通过类似方法制备。
豆甾醇和其他植物甾醇为植物甾醇并且易于得到或可以通过已知路线制备。
可以通过还原通式(XLV)的化合物制备通式(VIII)的化合物，其中R2b为F，且R2a、R3a和R3b均为H：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义。
适合的还原剂包括氢化物，例如硼氢化钠，且该反应在惰性气氛例如氩气气氛中进行。
得到产物，为与3β-羟基异构体的混合物。
通式(XLV)的化合物可以通过酯化通式(XLVI)的化合物制备：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义。
适合地，酯化通过与卤化物例如烷基或苄基R47的碘化物在碱例如碳酸铯存在下并且在醇溶剂例如甲醇中反应来进行。
通式(XLVI)的化合物可以通过使通式(XLVII)的化合物表异构化制备：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义。
可通过用强碱例如氢氧化钠处理通式(XLVII)的化合物来进行表异构化，这导致OR47部分水解成OH。所得产物为通式(XLVI)化合物及其2α异构体的60∶40混合物。然后，该混合物无需进一步分离即可用于上述再酯化步骤，因为通式(XLV)的酯比羧酸(XLVI)更易于从其2α异构体中分离出来。
通式(XIVII)的化合物可以通过氧化通式(XLVIII)的化合物制备：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义。适合的氧化剂包括戴斯-马丁试剂(Dess-Martin periodinane)。
通式(XLVIII)的化合物可以由通式(XLIX)的化合物：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义；与HF.吡啶(70％)复合物在惰性气氛例如氩气气氛中反应而制备。适合地，该反应在卤代溶剂例如二氯甲烷中在降低的温度、例如-10至10℃、典型地在约0℃的温度下进行。
通式(XLIX)的化合物可以由通式(L)的化合物通过氧化而制备：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义，且虚线表示键之一为单键，而另一个为双键；
例如使用间-过氯苯甲酸，在卤代有机溶剂例如二氯甲烷中。适合地，在反应在15-25℃的温度下进行，典型地在室温下进行。
通式(L)的化合物可以由通式(LI)的化合物通过脱水而制备：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义；使用适合的脱水剂，例如三氟甲磺酸酐，在碱例如二甲基氨基吡啶存在下。适合地，该反应在卤代有机溶剂例如二氯甲烷中，在15-25℃的温度下，典型地在室温下进行。
通式(LI)的化合物可以通过使通式(LII)的化合物：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义，且R47如对通式(VIII)所定义；与还原剂例如(三-仲-丁基硼氢化锂)、然后用过氧化氢处理而制备。
适合地，与的反应在惰性气氛例如在氩气气氛中并且在降低的温度下、典型地在-78℃下进行。与过氧化氢的反应适合在约0℃的温度下进行。
通式(LII)的化合物可以通过酯化通式(LIII)的化合物而制备：
其中Y和R5如对通式(I)的化合物所定义。
适合地，酯化可以通过与醇R47-OH在包含离去基的酸例如对-甲苯磺酸存在下反应进行。该反应可以在约20-40℃、例如约30℃的温度下进行。
通式(LIII)的化合物为已知的，并且可以通过本领域技术人员已知的方法制备，例如WO 2016/079518、WO 2016/079518、WO 2016/079519、WO 2016/079520、WO 2017/199036和WO 2017/199033中教导的方法。
通式(I)的化合物为FXR激动剂，且由此用于治疗或预防FXR介导的疾病和病症。
因此，本发明的另一个方面提供了通式(I)的化合物，用于药物。
该化合物可以用于人或兽药，适合于治疗哺乳动物，特别是人。
通式(I)的化合物特别地用于治疗或预防代谢综合征，包括非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；原发性胆汁性肝硬化；原发性硬化性胆管炎；胆道闭锁；胆汁郁积性肝病；丙型肝炎感染；酒精性肝病；纤维化；和因纤维化导致的肝损伤。
本发明还提供了通式(I)的化合物在制备用于治疗或预防如下疾病的药物中的用途：非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；原发性胆汁性肝硬化；原发性硬化性胆管炎；胆道闭锁；胆汁郁积性肝病；丙型肝炎感染；酒精性肝病；纤维化；或因纤维化导致的肝损伤。
还提供了用于治疗或预防非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；原发性胆汁性肝硬化；原发性硬化性胆管炎；胆道闭锁；胆汁郁积性肝病；丙型肝炎感染；酒精性肝病；纤维化；或因纤维化导致的肝损伤的方法，该方法包括对有此这类治疗需要的患者施用有效量的通式(I)的化合物。
纤维化包括肝、肾和肠的纤维化。
肝纤维化可能与NASH、酒精性肝病或非酒精性脂肪肝有关。或者，肝纤维化可能与感染有关，例如肝炎，尤其是乙型肝炎或丙型肝炎或寄生虫性肝病。肝纤维化的其他原因包括先天性疾病引起的损害，例如Wilson病、戈谢病、糖原贮积症、血色素沉着，Zellweger综合征和先天性肝纤维化。肝纤维化也可以因药物诱导，例如氯丙嗪、甲苯磺丁酰胺、甲氨蝶呤、异烟肼和甲基多巴。
肾纤维化可能与疾病有关，例如糖尿病性肾病、高血压性肾硬化、肾小球肾炎、间质性肾炎、与移植有关的肾小球病和多囊性肾病。
肠纤维化可能与肠病相关。
肠病包括肠易激综合征、克罗恩病和溃疡性结肠炎。
通式(I)的化合物适合地以药物组合物的形式提供，且本发明的另一个方面提供了包含通式(I)的化合物和药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
所使用的特定赋形剂或载体将取决于所选的施用途径，并且在与制剂的其他成分相容且对接受者无害的意义上必须是可接受的。
本发明的组合物还可包含一种或多种用于治疗一种或多种上述疾病和病症的其他活性成分。
这些制剂包括适合于口服、直肠、鼻、支气管(吸入)、局部(包括滴眼液、口含和舌下)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)施用的那些，并且可以通过制药领域众所周知的任何方法制备。
该组合物可以通过将上述定义的活性剂与载体混合来制备。通常，通过使活性剂与液体载体或细分的固体载体或两者均匀且紧密地结合，然后如果需要使产品成型来制备制剂。本发明扩展到制备药物组合物的方法，该方法包含使通式(I)的化合物与药学或兽医学上可接受的赋形剂或载体混合或结合。
本发明用于口服施用的制剂可以制成：离散单位，例如胶囊、小袋或片剂，它们各自包含预定量的活性剂；作为散剂或颗粒剂；作为活性剂在水性液体或非水液体中的溶液或混悬液；或作为水包油型液体乳状液或油包水型液体乳状液；或作为大丸剂等。
对于口服施用的组合物(例如片剂和胶囊)，术语“可接受的载体”包括媒介物，例如常见的赋形剂，例如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、黄蓍胶、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和淀粉；填充剂和载体、例如玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露糖醇、磷酸二钙、氯化钠和藻酸；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸钠和其他金属硬脂酸盐、硬脂酸甘油酯、硬脂酸、硅酮流体、滑石蜡、油和胶体二氧化硅。也可以使用矫味剂，例如薄荷、冬青油、樱桃矫味剂等。期望添加着色剂以使剂型易于识别。片剂也可以通过本领域众所周知的方法进行包衣。
片剂可以通过压制或模制，任选地与一种或多种辅助成分一起制成。压制片可以通过在适合的机器中压制自由流动形式的活性剂例如粉末或颗粒的形式，任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合来制备。模制片可以通过在适合的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物来制备。片剂可以任选地被包衣或刻痕，并且可以被配制以提供活性剂的缓慢或受控释放。
适于口服施用的其他制剂包括含加香基料中的活性剂的锭剂，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；在惰性基料例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中包含的活性剂的软锭剂；以及在适合的液体载体中包含活性剂的漱口剂。
对于皮肤的局部施用，可以将通式(I)或(II)的化合物制成霜剂、软膏、胶冻、溶液或混悬液等。可以用于药物的霜剂或软膏制剂是众所周知的常规制剂，例如，如药学的标准教科书英国药典(British Pharmacopoeia)中所述。
肠胃外制剂通常是无菌的。
附图
在附图中，＊表示p值＜0.05，＊＊表示p值＜0.01，且＊＊＊表示p值＜0.001。
图1显示人肝细胞瘤细胞系Huh7与对照、OCA(在EC50和EC90)和化合物2(在EC50和EC90)一起温育24小时后SHP表达的改变。
图2显示人肝细胞瘤细胞系Huh7与对照、OCA(在EC50和EC90)和化合物2(在EC50和EC90)一起温育24小时后OSTα表达的改变。
图3显示人肝细胞癌细胞系HepG2与对照、OCA(在EC50和EC90)和化合物2(在EC50和EC90)一起温育24小时后CYP7A1表达的改变。
图4显示人肝细胞癌细胞系HepG2与对照、OCA(在EC50和EC90)和化合物2(在EC50和EC90)一起温育24小时后TGFβ1表达的改变。
图5显示人肝细胞瘤细胞系Huh7与对照、OCA(在EC50和EC90)和化合物14(在EC50和EC90)一起温育24小时后SHP表达的改变。
图6显示人肝细胞瘤细胞系Huh7与对照、OCA(在EC50和EC90)和化合物14(在EC50和EC90)一起温育24小时后OSTα表达的改变。
图7显示人肝细胞癌细胞系HepG2与对照、OCA(在EC50和EC90)和化合物14(在EC50和EC90)一起温育24小时后CYP7A1表达的改变。
图8显示人肝细胞癌细胞系HepG2与对照、OCA(在EC50和EC90)和化合物14(在EC50和EC90)一起温育24小时后TGFβ1表达的改变。
实施例
在实施例中，使用如下缩写。
Ac2O 乙酐
DBU 1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯
DMAP 二甲基氨基吡啶
EDCI 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
Equiv 当量
Et3N 三乙胺
EtOAc 乙酸乙酯
IPA 异丙醇
h 小时
HDCA 猪去氧胆酸
HPLC 高效液相色谱法
LDA 二异丙基氨基锂
MeOH 甲醇
n-BuLi 正-丁基锂
OCA 奥贝胆酸
PE 石油醚
PTFE 聚四乙烯
pTSA 对-甲苯磺酸
RT 室温
sat 饱和
TBAF 氟化四丁基铵
TBDMS-OTf 三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷基酯
TEMPO (2，2，6，6-四甲基哌啶-1-基)oxidanyl
THF 四氢呋喃
TMS-Cl 三甲基甲硅烷基氯
TMS-OTf 三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯
TLC 薄层色谱法
实施例1-带有磺酰脲-取代的侧链的3α-羟基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷 酸类似物的合成
A.6α-乙基-3α，7α-二羟基-5β-胆烷-24-酸甲酯
在RT向OCA(23.5g，55.87mmol)在MeOH(540mL)中的溶液中加入对-甲苯磺酸(1.02mg，5.59mmol，～0.1当量)，在30℃超声处理3h。完成时，真空浓缩该反应混合物。将残余物溶于氯仿(500mL)，用饱和NaHCO3(500mL)、H2O(500mL)和盐水(500mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到标题化合物，为白色固体，定量收率。将得到的固体不经进一步纯化使用。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.70(1H，s)，3.67(3H，s，)，3.44-3.37(1H，m)，2.40-2.32(1H，m)，2.26-2.18(1H，m)，1.96(1H，dt，J＝12.0，2.6Hz)，1.92-1.76(6H，m)，1.69-1.59(3H，m)，1.58-1.12(14H，m)，1.00(1H，td，14.2，3.3Hz)，0.93(3H，d，J＝6.3Hz)，0.90(3H，s)，0.90(3H，t，J＝7.4Hz)，0.66(3H，s)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：452.4[M+NH4]+，100％。
B.6α-乙基-7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯
在RT向来自步骤A的搅拌的6α-乙基-3α，7α-二羟基-5β-胆烷-24-酸甲酯(9.53g，21.9mmol)在H2O(22mL)和叔丁醇(88mL)中的溶液中加入KBr(5.22g，43.9mmol，～2.0当量)、KHCO3(22.0g，219mmol，～10当量)和TEMPO(4.45g，28.5mmol，～1.3当量)。将该反应混合物冷却至0℃，以4mL/小时的速率接受滴加的NaClO(28mL，32.9mmol，～1.5当量)，历时7小时。完成时，通过缓慢添加1∶1饱和的Na2S2O3(250mL)使反应淬灭，用EtOAc(200mL)稀释。除去有机相，然后用EtOAc(3×150mL)反萃取水相。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到14.2g粗物质，为橙色油状物。通过柱色谱法纯化得到的油状物(在PE中的丙酮40-60，0-20％梯度洗脱)，得到标题化合物，为白色固体(8.48g，89％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.78(1H，d，J＝2.2Hz)，3.67(3H，s)，3.07(1H，dd，J＝15.2，13.5Hz)，2.46-2.33(2H，m)，2.29-1.91(7H，m)，1.84-1.77(1H，m)。1.74-1.15(18H，m)，1.00(3H，s)，0.94(3H，d，J＝6.5Hz)，0.91(3H，t，J＝7.4Hz)，0.70(3H，s)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：450.3[M+NH4]+，100％。
C.6α-乙基-4β-氟-7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯
在-78℃在氩气气氛中向搅拌的预先冷却的二异丙基胺(0.78mL，5.54mmol，～12当量)在干THF(6.9mL)中的溶液中滴加n-BuLi的己烷溶液(1.44mL，2.31mmol，～5.0当量)，历时0.25h。添加后，加入三甲基甲硅烷基氯(0.29mL，2.31mmol，～5.0当量)，搅拌1h。然后加入来自步骤B的6α-乙基-7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯(200mg，0.46mmol)在干THF(3mL)和三乙胺(1.16mL，8.32mmol，～18当量)中的溶液。添加完成后，使该反应体系逐步温热至-20℃，搅拌2h。完成时，通过滴加饱和NaHCO3(5mL)使反应淬灭，温热至RT 2h。除去有机相，用EtOAc(3×10mL)反萃取水相。合并有机相，用盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到271mg粗物质，为黄色残余物。
向搅拌的得到的粗物质在MeCN中的溶液(13mL)中加入将该混合物搅拌16h。完成时，真空浓缩该反应混合物。将残余物溶于EtOAC(20mL)，用2M HCl(30mL)酸化。除去有机相，用EtOAc(3x15mL)反萃取水相。合并有机相，用盐水(100mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到196mg粗物质，为绿色固体。通过使用己烷/丙酮(90/10)作为洗脱液的HPLC纯化，得到标题化合物和甲基-2β-3-氧代-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷-24-酸酯不能分离的混合物，为无色油状物(79mg，0.18mmol，37％标题化合物，考虑到1％甲基-2β-氟-3-氧代-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷-24-酸酯污染，通过1H NMR)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.94(1H，dd，J＝46.5，10.9Hz)，3.88(1H，s)，3.65(3H，s)，2.49(1H，td，J＝14.6，5.0Hz)，2.38-2.09(4H，m)，2.01-1.30(18H，m)，1.25-1.14(3H，m)，1.04(3H，s)，0.93-0.89(6H，m)，0.68(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：-194.3(1F，dd，J＝46.8，13.9Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：468.4[M+NH4]+，100％。
D.6α-乙基-4β-氟-(3α，7α)-二羟基-5β-胆烷-24-酸甲酯
在RT在氩气气氛中向搅拌的来自步骤C的6α-乙基-4β-氟-7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯(75mg，0.17mmol)在干THF(6.7mL)中的溶液中加入NaBH4(19mg，0.50mmol，～3.0当量)，搅拌16h。完成时，通过滴加H2O(8mL)使反应淬灭，用EtOAc(10mL)稀释。除去有机相，用EtOAc(3x50mL)反萃取水相。合并有机相，用H2O(100mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到77mg粗物质，为白色残余物。通过使用己烷/丙酮(90/10)作为洗脱液的HPLC纯化，得到标题化合物，为无色油状物(55mg，0.12mmol，74％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.31(1H，ddd，J＝50.0，10.4，8.9Hz)，3.82(1H，s)，3.67(3H，s)，3.57-3.50(1H，m)，2.36(1H，ddd，J＝15.4，10.1，5.7Hz)，2.27-2.18(1H，m)，1.96-1.92(2H，m)，1.83-1.07(23H，m)，0.97(3H，s)，0.94-0.92(6H，m)，0.66(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-189.0(1F，d，J＝50.3Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：470.4[M+NH4]+，100％。
E.3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷酸
在RT向搅拌的6α-乙基-4β-氟-(3α，7α)-二羟基-5β-胆烷-24-酸甲酯(58mg，0.13mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中加入NaOH(250mg，5％溶液)，搅拌18h。完成时，真空浓缩该反应混合物，用1M HCl将残余物酸化至pH 2，用EtOAc(20mL)稀释。除去有机相，用EtOAc(3x50mL)反萃取水相。合并有机相，用盐水(100mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到76mg粗物质，为黄色油状物。通过使用己烷/丙酮(70/30)作为洗脱液的HPLC活化，得到标题化合物，为无色油状物(41mg，0.09mmol，72％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.31(1H，dt，J＝49.9，9.5Hz)，3.83(1H，s)，3.60-3.50(1H，m)，2.36(1H，ddd，J＝15.5，10.4，5.3Hz)，2.26(1H，ddd，J＝15.8，9.5，6.6Hz)，1.97-1.91(2H，m)，1.85-1.08(21H，m)，0.97(3H，s)，0.95-0.91(6H，m)，0.67(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-188.7(1F，d，J＝48.6Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：456.2，[M+NH4]+，100％。
带有磺酰脲-取代的侧链的化合物的合成
下面的方法示例了4β-氟衍生物，但也可用于2β-氟化、4，4-二氟化或2，4-二氟化合物。
F.3α-乙酰氧基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷酸
在RT在氩气气氛中向搅拌的来自步骤E的3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷酸(2.08g，4.74mmol)在干THF(160mL)中的溶液中滴加入NaHCO3(2.04g，23.7mmol，～5.0当量)和Ac2O(2.29mL，23.7mmol，～5.0当量)，历时5min。添加后，将该反应混合物在70℃加热16h。完成时，将该反应混合物冷却至RT，通过滴加H2O(100mL)淬灭，用1M HCl(20mL)酸化，用EtOAc(100mL)稀释。除去有机相，用EtOAc(3x150mL)反萃取水相。合并有机相，用盐水(400mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到黄色油状物。通过柱色谱法纯化得到的油状物(MeOH的CH2Cl2溶液梯度洗脱0-3％)，得到标题化合物，为白色固体(660mg，29％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.47(1H，dt，J＝49.4，9.4Hz)，4.78(1H，dddd，J＝14.1，11.9，9.3，5.0Hz)，3.84(1H，s)，2.41(1H，ddd，J＝15.5，10.2，5.3Hz)，2.27(1H，ddd，J＝15.8，9.7，6.6Hz)，2.06(3H，s)，1.97-1.89(2H，m)，1.86-1.80(3H，m)，1.70-1.14(19H，m)，0.99(3H，s)，0.94(3H，d，J＝6.2Hz)，0.92(3H，t，J＝7.1Hz)，0.67(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-188.6(1F，dt，J＝50.3，12.1Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：498.2，[M+NH4]+，100％。
G.3α-乙酰氧基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷-24-酰基叠氮化物
在RT在氩气气氛中向来自步骤F的3α-乙酰氧基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷酸(200mg，0.42mmol)在干THF(4mL)中的溶液中滴加Et3N(0.12mL，0.83mmol，～2.0当量)。添加后，将该反应混合物冷却至0℃，滴加二苯基磷酰基叠氮化物(0.13mL，0.62mmol，～1.5当量)。添加后，在强气流护罩后将该反应混合物搅拌3h。完成时，用盐水(5mL)使反应淬灭，用CH2Cl2(5mL)稀释。除去有机相，用CH2Cl2(3x5 mL)反萃取水相。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，在0℃真空浓缩，得到黄色油状物。将得到的油状物不经进一步纯化使用。
1H NMR-特征峰(400MHz，CDCl3)：δ5.47(1H，ddd，J＝49.4，10.4，9.2Hz)，4.82-4.74(1H，m)，3.83(1H，s)，2.38(1H，ddd，J＝15.8，10.0，5.3Hz)，2.29-2.23(1H，m)，2.06(3H，s)，0.98(3H，s)，0.920(3H，d，J＝6.5Hz)，0.919(3H，t，J＝7.2Hz)，0.67(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-186.8(1F，dt，J＝50.3Hz)ppm。
H.异氰酸3α-乙酰氧基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-24-降-5β-胆烷-23-基酯
在氩气气氛中将搅拌的来自步骤G的粗油状物3α-乙酰氧基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷-24-酰基叠氮化物(105mg推定，0.42mmol)在干甲苯(3.1mL)中的溶液加热至125℃。5h后，将该反应体系冷却至RT。将得到的溶液不经进一步纯化使用。
1H NMR-特征峰(400MHz，CDCl3)：δ5.47(1H，ddd，J＝49.4，10.4，9.2Hz)，4.81-4.73(1H，m)，3.83(1H，s)，3.35(1H，ddd，J＝12.9，7.8，4.5Hz)，3.30-3.24(1H，m)，2.05(3H，s)，0.98(3H，s)，0.94(3H，d，J＝6.6Hz)，0.92(3H，t，J＝7.2Hz)，0.68(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-186.5(1F，dt，J＝49.3，12.7Hz)ppm。
用于异氰酸酯转化成磺酰脲的通用方法1
向搅拌的来自步骤H异氰酸3α-乙酰氧基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-24-降-5β-胆烷-23-基酯在甲苯中的粗溶液中加入磺酰胺(～1.5当量)和DBU(～1.5当量)，搅拌16h。完成时，通过滴加1M HCl(2mL)使反应淬灭，用EtOAc(5mL)稀释。除去有机相，用EtOAc(3×5mL)反萃取水相。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。通过柱色谱法纯化得到的产物(PE中的丙酮梯度洗脱，40-60、5-20％)，得到所需的磺酰脲。
N，N’-(3α-乙酰氧基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-甲苯磺酰脲(中间体1)
根据通用方法1，使用53.4mg对-甲苯磺酰胺制备，得到中间体1，为黄色油状物(51.7mg，38％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.78(2H，d，J＝8.2Hz)，7.32(2H，d，J＝8.3Hz)，6.50(1H，t，J＝4.8Hz)，5.47(1H，dt，J＝49.4，9.8Hz)，4.83-4.73(1H，m)，3.83(1H，s)，3.33-3.25(1H，m)，3.19-3.11(1H，m)，2.44(3H，s)，2.06(3H，s)，1.96-1.80(5H，m)，1.72-1.38(15H，m)，1.23-1.14(5H，m)，0.99(3H，s)，0.93(3H，d，J＝6.6Hz)，0.92(3H，t，J＝7.5Hz)，0.65(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-186.6(1F，dt，J＝49.0，12.8Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：666.4，[M+NH4]+，100％。
N，N’-(3α-乙酰氧基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲(中间体2)
根据通用方法1，使用49.0mg苯磺酰胺制备，得到中间体2，为黄色油状物(49.9mg，38％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.90(2H，d，J＝7.6Hz)，7.63(1H，t，J＝7.0Hz)，7.50(2H，t，J＝7.7Hz)，6.60(1H，s)，5.48(1H，dt，J＝49.2，9.8Hz)，4.84-4.74(1H，m)，3.83(1H，s)，3.31-3.25(1H，m)，3.18-3.10(1H，m)，2.06(3H，s)，1.95-1.80(5H，m)，1.69-1.38(13H，m)，1.29-1.12(7H，m)，0.99(3H，s)，0.93(3H，d，J＝6.7Hz)，0.92(3H，t，J＝7.0Hz)，0.65(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-186.5(1F，dt，J＝48.6，12.1Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：652.3，[M+NH4]+，100％。
N，N’-(3α-乙酰氧基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-24-降-5β-胆烷-23-基)-4-(叔丁基)苯磺酰脲(中间体3)
根据通用方法1，使用53.2mg 4-(叔丁基)苯磺酰胺制备，得到中间体3，为无色油状物(81.6mg，71％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.81(2H，d，J＝8.7Hz)，7.54(2H，d，J＝8.7Hz)，6.56(1H，s)，5.48(1H，ddd，J＝49.4，10.4，9.3Hz)，4.83-4.73(1H)，3.84(1H，s)，3.33-3.29(1H，m)，3.21-3.14(1H，m)，2.07(3H，s)，1.97-1.80(4H，m)，1.74-1.44(13H，m)，1.36(9H，s)，1.29-1.16(7H，m)，0.99(3H，s)，0.95(3H，d，J＝6.6Hz)，0.93(3H，t，J＝7.0Hz)，0.67(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-186.6(1F，dt，J＝49.9，13.2Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：708.4，[M+NH4]+，100％。
N，N’-(3α-乙酰氧基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-24-降-5β-胆烷-23-基)-间-甲苯磺酰脲(中间体4)
根据通用方法1，使用42.6mg间-甲苯磺酰胺制备，得到中间体4，为无色油状物(85.7mg，80％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.71-7.68(2H，m)，7.45-7.38(2H，m)，6.54(1H，s)，5.47(1H，ddd，J＝49.4，10.3，9.4Hz)，4.83-4.73(1H，m)，3.83(1H，s)，3.33-3.26(1H，m)，3.19-3.12(1H，m)，2.42(3H，s)，2.06(3H，s)，1.96-1.80(4H，m)，1.72-1.11(21H，m)，0.99(3H，s)，0.94(3H，d，J＝6.6Hz)，0.93(3H，t，J＝7.3Hz)，0.65(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-186.6(1F，dt，J＝49.4，13.4Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：666.3，[M+NH4]+，100％。
N，N’-(3α-乙酰氧基-4β-氟-6α-乙基-7α-羟基-24-降-5β-胆烷-23-基)-邻-甲苯磺酰脲(中间体5)
根据通用方法1，使用42.6mg邻-甲苯磺酰胺制备，得到中间体5，为无色油状物(55.4mg，51％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.94(1H，dd，J＝8.3，1.0Hz)，7.51(1H，td，J＝7.6，1.2Hz)，7.34(2H，d，J＝7.3Hz)，6.47(1H，s)，5.47(1H，dt，J＝49.3，9.5Hz)，4.83-4.73(1H，m)，3.83(1H，s)，3.28-3.22(1H，m)，3.15-3.08(1H，m)，2.65(3H，s)，2.21-2.17(1H，m)，2.06(3H，s)，1.94-1.80(4H，m)，1.68-1.10(20H，m)，0.98(3H，s)，0.92(3H，d，J＝6.7Hz)，0.90(3H，t，J＝7.3Hz)，0.63(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-186.6(1F，dt，J＝49.9，12.4Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：666.3，[M+NH4]+，100％。
用于3α-乙酸酯磺酰脲脱保护的通用方法2
向添加了被保护的磺酰脲的烧瓶中加入NaOH的MeOH溶液(5％溶液，10mL)，搅拌16h。完成时，用1M HCl将该反应体系酸化至pH 7.0，用EtOAc(10mL)稀释。除去有机相，用EtOAc(3×10mL)反萃取水相。合并有机相，用NaHCO3溶液(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。通过柱色谱法纯化得到的产物(在CH2Cl2中的MeOH梯度洗脱，0-5％)，得到脱保护的磺酰脲。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-甲苯磺酰脲(化合物1)
根据通用方法2，使用49.7mg中间体1制备，得到化合物1，为无色残余物(18.6mg，40％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.78(2H，d，J＝8.3Hz)，7.34(2H，d，J＝8.1Hz)，6.50(1H，t，J＝4.8Hz)，5.32(1H，ddd，J＝50.0，10.0，9.2Hz)，3.83(1H，s)，3.59-3.51(1H，m)，3.33-3.26(1H，m)，3.21-3.12(1H，m)，2.46(3H，s)，1.96-1.06(26H，m)，0.98(3H，s)，0.94(3H，t，J＝6.2Hz)，0.93(3H，t，J＝6.4Hz)，0.66(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-188.8(1F，dt，J＝50.3，10.4Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：624.4，[M+NH4]+，100％。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲(化合物2)
根据通用方法2，使用44.8mg中间体2制备，得到化合物2，为无色残余物(28.5mg，64％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.91(2H，d，J＝7.5Hz)，7.65(1H，t，J＝7.3Hz)，7.54(2H，t，J＝7.8Hz)，6.51(1H，s)，5.31(1H，ddd，J＝50.1，10.3，9.1Hz)，3.82(1H，s)，3.60-3.50(1H，m)，3.35-3.26(1H，m)，3.20-3.12(1H，m)，1.95-1.36(17H，m)，1.27-1.11(9H，m)，0.97(3H，s)，0.94(3H，d，J＝6.2Hz)，0.93(3H，t，J＝6.7Hz)，0.65(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-189.0(1F，dt，J＝50.3，12.1Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：610.2，[M+NH4]+，100％。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-4-(叔丁基)苯磺酰脲(化合物3)
根据通用方法2，使用79.6mg中间体3制备，得到化合物3，为无色残余物(50.7mg，65％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.82(2H，d，J＝8.6Hz)，7.53(2H，t，J＝8.4Hz)，6.54(1H，s)，5.32(1H，ddd，J＝49.9，10.3，9.1Hz)，3.82(1H，s)，3.60-3.50(1H，m)，3.35-3.25(1H，m)，3.19-3.11(1H，m)，1.95-1.41(16H，m)，1.34(9H，s)，1.28-1.08(10H，m)，0.97(3H，s)，0.930(3H，t，J＝6.9Hz)，0.927(3H，d，J＝6.2Hz)，0.65(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-188.8(1F，dt，J＝50.3，12.1Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：666.4，[M+NH4]+，100％。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-间-甲苯磺酰脲(化合物4)
根据通用方法2，使用83.7mg中间体4制备，得到化合物4，为无色残余物(29.0mg，37％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.71-7.69(2H，m)，7.45-7.38(2H，m)，6.52(1H，s)，5.32(1H，ddd，J＝49.9，10.4，8.9Hz)，3.82(1H，s)，3.60-3.50(1H，m)，3.35-3.26(1H，m)，3.20-3.10(1H，m)，2.43(3H，s)，1.95-1.39(17H，m)，1.28-1.11(10H，m)，0.97(3H，s)，0.94(3H，d，J＝6.2Hz)，0.93(3H，t，J＝6.5Hz)，0.65(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-188.9(1F，dt，J＝48.6，10.4Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：624.3，[M+NH4]+，100％。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-邻-甲苯磺酰脲(化合物5)
根据通用方法2，使用53.4mg中间体5制备，得到化合物5，为无色残余物(24.2mg，48％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.94(1H，d，J＝8.1Hz)，7.52(1H，td，J＝7.6，1.1Hz)，7.35(2H，d，J＝7.7Hz)，6.47(1H，t，J＝4.6Hz)，5.31(1H，ddd，J＝49.9，10.4，8.9Hz)，3.82(1H，s)，3.60-3.50(1H，m)，3.30-3.22(1H，m)，3.17-3.08(1H，m)，2.67(3H，s)，1.94-1.06(25H，m)，0.97(3H，s)，0.91(3H，t，J＝7.5Hz)，0.90(3H，d，J＝6.6Hz)，0.63(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-189.0(1F，dt，J＝48.6，12.1Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：624.3，[M+NH4]+，100％。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-氟苯磺酰脲(化合物6)
通过与上述对化合物1-5类似的方法制备该化合物。
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ7.93-7.(2H，m)，7.20-7.17(2H，m)，5.19(1H，dq，J＝49.3，10.5，8.9Hz)，3.65(1H，s)，3.31(1H，m)，3.06(1H，m)，2.95(1H，m)，1.94-1.06(21H，m)，0.84-0.76(9H，m)，0.63(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，MeOD)：δ-107.29(1F，m)，-186.6(1F，m)ppm。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-间-氟苯磺酰脲(化合物7)
通过与上述对化合物1-5类似的方法制备该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.71(ddd，J＝7.8，1.6，1.0Hz，1H)，7.61(br dt，J＝8.0，2.1Hz，1H)，7.54(td，J＝8.1，5.3Hz，1H)，7.35(tdd，J＝8.3，2.6，0.7Hz，1H)，6.50(br t，J＝5.1Hz，1H)，5.32(ddd，J＝49.9，10.5，8.8Hz，1H)，3.83(s，1H)，3.55(dddd，J＝14.2，12.0，8.8，5.1Hz，1H)，3.32(ddt，J＝13.1，9.5，5.1Hz，1H)，3.18(dtd，J＝13.0，8.0，6.1Hz，1H)，1.96-1.86(m，2H)，1.85-1.74(m，2H)，1.71-1.58(m，6H)，1.54-1.41(m，7H)，1.31-1.08(m，9H)，0.98(s，3H)，0.95(d，J＝6.5Hz，3H)，0.93(t，J＝7.0Hz，3H)，0.66(s，3H)ppm。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-108.9(br s，1F)，-188.9(br d，J＝50.3Hz，1F)ppm。
19F{1H}NMR(376MHz，CDCl3)δ-108.9(s，1F)，-188.9(s，1F)ppm。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-邻-氟苯磺酰脲(化合物8)
通过与上述对化合物1-5类似的方法制备该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.91(ddd，J＝7.8，7.2，1.7Hz，1H)，7.67(dddd，J＝8.3，7.5，5.0，1.7Hz，1H)，7.33(td，J＝7.7，1.1Hz，1H)，7.28(ddd，J＝10.0，8.4，0.9Hz，1H)，6.45(br t，J＝5.1Hz，1H)，5.31(ddd，J＝49.9，10.5，8.7Hz，1H)，3.83(br s，1H)，3.55(dddd，J＝13.8，11.9，8.9，5.4Hz，1H)，3.29(ddt，J＝12.8，9.4，5.3Hz，1H)，3.16(dtd，J＝13.5，7.8，5.6Hz，1H)，1.96-1.74(m，4H)，1.71-1.39(m，14H)，1.25-1.09(m，8H)，0.98(s，3H)，0.94(t，J＝7.3Hz，3H)，0.93(d，J＝6.6Hz，3H)，0.65(s，3H)ppm。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-109.0(ddd，J＝10.4，6.9，5.2Hz，1F)，-189.2(dt，J＝50.3，11.3Hz，1F)ppm。
19F{1H}NMR(376MHz，CDCl3)δ-109.0(s，1F)，-189.2(s，1F)ppm。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-(三氟甲基)苯磺酰脲(化合物9)
通过与上述对化合物1-5类似的方法制备该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.07(d，J＝8.2Hz，2H)，7.80(d，J＝8.1Hz，2H)，6.46(brt，J＝4.8Hz，1H)，5.32(ddd，J＝49.8，10.4，8.8Hz，1H)，3.82(s，1H)，3.55(dddd，J＝14.2，11.9，8.8，5.4Hz，1H)，3.28(ddt，J＝13.6，7.7，4.9Hz，1H)，3.15(dtd，J＝13.5，7.6，6.0Hz，1H)，1.96-1.75(m，4H)，1.72-1.55(m，7H)，1.53-1.37(m，7H)，1.25-1.06(m，8H)，0.97(s，3H)，0.933(d，J＝6.1Hz，3H)，0.927(t，J＝6.5Hz，3H)，0.63(s，3H)ppm。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-63.5(s，3F)，-188.5(br d，J＝48.6Hz，1F)ppm。
19F{1H}NMR(376MHz，CDCl3)δ-63.4(s，3F)，-188.6(br s，1F)ppm。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-间-(三氟甲基)苯磺酰脲(化合物10)
通过与上述对化合物1-5类似的方法制备该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.17(s，1H)，8.11(d，J＝8.0Hz，1H)，7.91(br d，J＝7.7Hz，1H)，7.71(t，J＝7.9Hz，1H)，6.49(br t，J＝4.7Hz，1H)，5.32(ddd，J＝49.9，10.2，9.1Hz，1H)，3.83(s，1H)，3.56(dddd，J＝14.1，11.7，8.7，5.1Hz，1H)，3.32(ddt，J＝13.5，9.4，5.3Hz，1H)，3.17(dtd，J＝12.6，7.8，6.2Hz，1H)，1.96-1.87(m，2H)，1.84-1.74(m，2H)，1.72-1.58(m，6H)，1.53-1.41(m，7H)，1.29-1.09(m，9H)，0.98(s，3H)，0.95(d，J＝6.5Hz，3H)，0.93(t，J＝6.9Hz，3H)，0.66(s，3H)ppm。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-63.1(s，3F)，-189.0(br s，1F)ppm。
19F{1H}NMR(376MHz，CDCl3)δ-63.1(s，3F)，-189.0(br s，1F)ppm。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-邻-(三氟甲基)苯磺酰脲(化合物11)
通过与上述对化合物1-5类似的方法制备该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.26(dd，J＝6.3，2.3Hz，1H)，7.92(dd，J＝6.6，2，3Hz，1H)，7.77(m，2H)，6.35(br t，J＝4.8Hz，1H)，5.31(ddd，J＝49.9，10.4，8.9Hz，1H)，3.82(s，1H)，3.56(dddd，J＝14.2，12.1，8.7，5.1Hz，1H)，3.29(ddt，J＝13.5，9.1，5.1Hz，1H)，3.13(dtd，J＝13.5，7.7，6.2Hz，1H)，1.96-1.72(m，5H)，1.70-1.35(m，14H)，1.25-1.06(m，7H)，0.97(s，3H)，0.93(d，J＝7.0Hz，3H)，0.92(t，J＝6.5Hz，3H)，0.63(s，3H)ppm。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-58.0(s，3F)，-188.9(br d，J＝48.6Hz，1F)ppm。
19F{1H}NMR(376MHz，CDCl3)δ-58.0(s，3F)，-188.9(s，1F)ppm。
N，N’-(3α，7α-二羟基-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲(对比化合物A)
通过与上述化合物5-9所述类似的方法制备该化合物。
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ7.86-7.81(2H，m)，7.53(1H，m)，7.47-7.41(2H，m)，3.52(1H，br.s)，3.22(1H，m)，3.04(1H，m)，2.93(1H，m)，1.87-0.83(25H，m)，0.81-0.76(9H，m)，0.52(3H，s)ppm。
实施例2-带有磺酰脲-取代的侧链的化合物的备选合成
示例用于4β-氟衍生物的以下方法，但也可用于2β-氟化、4，4-二氟化或2，4-二氟化化合物。
A.6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯
在-78℃在氩气气氛中向搅拌的预先冷却的二异丙基胺(0.78mL，5.54mmol，～12当量)在干THF(6.9mL)中的溶液中滴加n-BuLi的己烷溶液(1.44mL，2.31mmol，～5.0当量)，历时0.25h。添加后，加入三甲基甲硅烷基氯(0.29mL，2.31mmol，～5.0当量)，搅拌1h。然后加入来自实施例1步骤B的6α-乙基-7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯(200mg，0.46mmol)在干THF(3mL)和三乙胺(1.16mL，8.32mmol，～18当量)中的溶液。添加后，使该反应体系逐步温热至-20℃，搅拌2h。完成时，通过滴加饱和NaHCO3(5mL)使反应淬灭，温热至RT 2h。除去有机相，用EtOAc(3×10mL)反萃取水相。合并有机相，用盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到271mg粗物质，为黄色残余物。
向粗物质(1.16g，2.3mmol)在干MeCN(55mL)中的溶液中加入(1.23g，3.47mmol)。在RT搅拌14.5h后，用乙酸乙酯(100mL)稀释该混合物，用5％NaHCO3(100mL)和10％NaCl(50mL)的混合物洗涤。用乙酸乙酯(3x 100mL)萃取水相，用MgSO4干燥合并的有机相，过滤，真空浓缩，得到橙色/黄色油状物。通过柱色谱法纯化粗物质(SiO2，0-40％EtOAc的庚烷溶液)，得到标题化合物，为无色油状物(319.5mg)。
B.6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-羟基-5β-胆烷-24-酸甲酯
在搅拌的同时在氩气气氛中将来自步骤A的粗6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯(319.5mg，0.71mmol)溶于THF(28mL)。加入NaBH4(80.5mg，2.13mmol)，将该反应体系在RT搅拌16.5h，此后，再加入NaBH4(0.24g，6.38mmol)。将该混合物再搅拌4.5h，然后加入水(20μL)，将该混合物搅拌～60h。此后，通过添加水(15mL)使反应淬灭，用EtOAc(50mL)稀释。分离各相，用EtOAc(3x 50mL)萃取水相。用MgSO4干燥合并的萃取物，过滤，真空浓缩，得到澄清糖浆状物(0.34g)。通过柱色谱法纯化粗物质(SiO2，0-40％EtOAc的庚烷溶液)，得到标题化合物，为澄清油状物(162.3mg)。
C.6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-邻-叔丁基二甲基甲硅烷基-5β-胆烷-24-酸甲酯
将来自步骤B的6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-羟基-5β-胆烷-24-酸甲酯(0.48g，0.92mmol)溶于干DCM(12mL)，在搅拌的同时在氩气气氛中冷却至0℃。加入2，6-卢剔淀(1.1mL，9.17mmol)，然后滴加TBMDS-OTf(0.32mL，1.38mmol)。将该反应体系温热至RT，搅拌24h，然后冷却至0℃，通过滴加10％柠檬酸(5mL)淬灭。分离各相，用DCM(3x 5mL)萃取水相。用10％柠檬酸(5mL)、NaHCO3水溶液(5mL)和水(5mL)洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到黄色油状物(0.69g)。通过柱色谱法纯化粗物质(SiO2，0-20％EtOAc的庚烷溶液)，得到标题化合物，为澄清油状物(0.58g)。
D.6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-邻-叔丁基二甲基甲硅烷基-5β-胆烷酸
在搅拌的同时将来自步骤C的6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-邻-叔丁基二甲基甲硅烷基-5β-胆烷-24-酸甲酯(0.58g)溶于IPA(5.8mL)。加入0.5M NaOH(5.8mL)，将该反应体系在RT搅拌15h。减压浓缩该反应混合物至～一半体积，然后加入水(5mL)，通过添加2M H2SO4中和该溶液，用EtOAc(10mL)稀释。用2M H2SO4将该混合物酸化至pH1，分离各相，用EtOAc(10mL)萃取水相。用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到白色泡沫体(0.52g)。通过柱色谱法纯化粗物质(SiO2，0-50％丙酮的甲苯溶液)，得到标题化合物，为白色固体(0.41g，72％)。
E.6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-邻-叔丁基二甲基甲硅烷基-5β-胆烷-24-酰基叠氮化物
在RT在氩气气氛中向搅拌的来自步骤D的6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-邻-叔丁基二甲基甲硅烷基-5β-胆烷酸(197mg，0.32mmol)在干THF(3.2mL)中的溶液中滴加Et3N(0.09mL，0.64mmol，～2.0当量)。添加后，将该反应混合物冷却至0℃，滴加二苯基磷酰基叠氮化物(0.1mL，0.48mmol，～1.5当量)。添加后，将该反应混合物在强气流护罩后搅拌2.5h。完成时，用盐水(3mL)使反应淬灭，用DCM(3x5 mL)萃取。用MgSO4干燥合并的有机相，过滤，在0℃真空浓缩。将得到的油状物不经进一步纯化使用。
用于形成磺酰脲的通用方法3
在氩气气氛中将搅拌的来自实施例2步骤E的粗6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-邻-叔丁基二甲基甲硅烷基-5β-胆烷-24-酰基叠氮化物(69mg)在干甲苯(2.1mL)中的溶液加热至125℃。5h后，将该反应体系冷却至RT。将得到的溶液不经进一步纯化使用。将该溶液在氩气气氛中搅拌，加入磺酰胺(1.5当量)和DBU(1.5当量)。完成时，通过滴加1MHCl(1mL)使反应淬灭，用EtOAc(5mL)稀释。除去有机相，用EtOAc(3×5mL)反萃取水相。用盐水(3mL)洗涤合并的有机相，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩(231.7mg)。通过柱色谱法纯化得到的产物，得到期望的磺酰脲，为粗的不可分离的混合物。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-4-(三甲氧基)苯磺酰脲(化合物12)和N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-甲氧基苯磺酰脲(化合物13)
根据上述通用方法3，通过使粗异氰酸酯产物分别与4-(三氟甲氧基)苯磺酰胺和4-(甲氧基)苯磺酰胺反应制备化合物12和13。
为了得到纯产物，将粗化合物12和13转化成被保护的物质(中间体12和13)，将其纯化，然后脱保护以再生化合物12和13。该方法如下所述。
N，N’-(3α，7α-二-邻-叔丁基二甲基甲硅烷基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-4-(三氟甲氧基)苯磺酰脲(中间体12)
将N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-4-(三氟甲氧基)苯磺酰脲(24.3mg，0.036mmol)溶于干DCM(1mL)，在搅拌的同时在氩气气氛中冷却至0℃。加入2，6-卢剔淀(0.04mL，0.36mmol)，然后滴加TBMDS-OTf(0.02mL，0.108mmol)。将该反应体系温热至RT，搅拌1.5h，然后冷却至0℃，通过滴加10％柠檬酸(1mL)淬灭。分离各相，用DCM(3x1mL)萃取水相。用10％柠檬酸(1mL)、NaHCO3水溶液(1mL)和水(1mL)洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到黄色油状物。通过柱色谱法纯化粗物质(SiO2，0-50％EtOAc的庚烷溶液)，得到标题化合物，为澄清油状物(9.4mg，33％)。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-4-(三氟甲氧基)苯磺酰脲(化合物12)
在搅拌的同时在氩气气氛中将N，N’-(3α，7α-二邻-叔丁基二甲基甲硅烷基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-4-(三氟甲氧基)苯磺酰脲(9.4mg)溶于干THF(1mL)。加入1M TBAF的THF溶液(31μL，0.03mmol)，将该反应体系在RT搅拌6天。使粗溶液干燥上硅胶，通过柱色谱法纯化(SiO2，50-100％EtOAc的庚烷溶液)，得到标题化合物(1mg)。
N，N’-(3α，7α-二-邻-叔丁基二甲基甲硅烷基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-甲氧基苯磺酰脲(中间体13)
将N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-甲氧基苯磺酰脲(26.1mg，0.042mmol)溶于干DCM(1mL)，在搅拌的同时在氩气气氛中冷却至0℃。加入2，6-卢剔淀(0.05mL，0.419mmol)，然后滴加TBMDS-OTf(0.03mL，0.126mmol)。将该反应体系温热至RT，搅拌16h，然后冷却至0℃，通过滴加10％柠檬酸(1mL)淬灭。分离各相，用DCM(3x1mL)萃取水相。用10％柠檬酸(1mL)、NaHCO3水溶液(1mL)和水(1mL)洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到黄色油状物(28.1mg)。通过柱色谱法纯化粗物质(SiO2，0-80％MeOH的DCM溶液)，然后通过柱色谱法再纯化(SiO2，0-50％丙酮的甲苯溶液)，得到标题化合物(7.8mg)。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-甲氧基和磺酰脲(化合物13)
在搅拌的同时在氩气气氛中将N，N’-(3α，7α-二-邻-叔丁基二甲基甲硅烷基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-甲氧基苯磺酰脲(7.8mg)溶于干THF(1mL)。加入1MTBAF的THF溶液(28μL，0.03mm0l)，将该反应体系在RT搅拌17h。使粗溶液干燥上硅胶，通过柱色谱法纯化(SiO2，0-80％丙酮的甲苯溶液)，得到标题化合物(3.4mg，59.6％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.97-7.81(2H，m)，7.11-7.02(2H，m)，5.30(1H，ddd，J＝49.6，10.3，8.9Hz)，3.88(3H，s)，3.76(1H，br.s)，3.42(1H，m)，3.15(1H，m)，3.06(1H，m)，1.99-0.96(26H，m)，0.95-0.80(6H，m)，0.64(3H，s)ppm。
实施例3-带有磺酰胺-取代的侧链的化合物的合成
下面的方法示例了4β-氟衍生物，但也可用于2β-氟化、4，4-二氟化或2，4-二氟化化合物。步骤A和B如例如2所述。
C.6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-羟基-5β-胆烷酸
在搅拌的同时将来自步骤B的6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-羟基-5β-胆烷-24-酸甲酯(162.3mg)溶于IPA(1.6mL)。加入0.5M NaOH(1.6mL)，将该反应体系在RT搅拌16h。减压浓缩该反应混合物至～一半体积，然后加入水(5mL)，通过添加2M H2SO4中和该溶液，用EtOAc(10mL)稀释。用2M H2SO4将该混合物酸化至pH 1，分离备相，用EtOAc(10mL)萃取水相。用水(3mL)和盐水(5mL)洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到白色泡沫体(151.1mg)。通过柱色谱法纯化粗物质(SiO2，0-80％EtOAc的庚烷溶液)，得到标题化合物，为澄清油状物(164.1mg)。
用于酰基磺酰胺侧链形成的通用方法4
将6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-羟基-5β-胆烷酸(50mg，0.11mmol)溶于干DCM(2mL)。加入EDCI(43.7mg，0.23mmol)和DMAP(27.8mg，0.23mmol)，然后加入适合的磺酰胺(3当量)。在RT搅拌过夜后，加入水(5mL)，分离各相，用DCM(2x 5mL)萃取水相。用1M HCl(2mL)和盐水(2mL)洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到粗物质，为黄白色固体。
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-对-三氟甲氧基苯磺酰胺(化合物14)
在搅拌的同时在氩气气氛中将根据通用方法4使用三甲氧基苯磺酰胺得到的粗N-(6α-乙基-4β-氟-7α-三甲基甲硅烷氧基-3α-羟基-5β-胆烷-24-酰基)-三氟甲氧基苯磺酰胺(81.6mg)溶于干THF(5mL)。加入1M TBAF的THF溶液(0.48mL，0.48mmol)，将该反应体系在RT搅拌17.5h。使粗溶液干燥上硅胶，通过柱色谱法纯化(SiO2，0-100％EtOAc的庚烷溶液)。合并包含期望的产物的级分，真空浓缩，溶于EtOAc(5mL)，用2M HCl(5mL)洗涤。用EtOAc(2x5mL)萃取水相，用MgSO4干燥合并的萃取物，过滤，真空浓缩，得到白色固体，通过柱色谱法纯化(SiO2，0-25％丙酮的甲苯溶液)，得到标题化合物，为澄清残余物(4.9mg)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.21-8.10(2H，m)，7.38-7.36(2H，dd，J＝8.9，0.8Hz)，5.31(1H，ddd，J＝49.8，10.4，9.0Hz)，3.82(1H，br.s)，3.56(1H，m)，2.31(1H，ddd，J＝15.6，10.1，5.0Hz)，2.17(1H，m)，1.92-1.07(23H，m)，0.97(3H，s)，0.93(3H，t，J＝6.9Hz)，0.86(3H，d，J＝6.4Hz)，0.62(3H，s)ppm。
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-对-氟苯磺酰胺(化合物15)
通过与上述用于化合物14类似的路线制备该化合物。
1H NM[R(400MHz，CDCl3)δ8.11(m，2H)，7.23(m，2H)，5.31(ddd，J＝49.9，10.3，9.1Hz，1H)，3.81(br s，1H)，3.57(dddd，J＝13.8，11.6，8.6，5.1Hz，1H)，2.29(ddd，J＝15.4，10.0，5.3Hz，1H)，2.17(ddd，J＝15.7，9.2，6.4Hz，1H)，1.90(dt，J＝12.3，2.9Hz，1H)，1.87-1.57(m，9H)，1.53-1.29(m，8H)，1.24-1.08(m，7H)，0.97(s，3H)，0.93(t，J＝7.0Hz，3H)，0.86(d，J＝6.4Hz，3H)，0.61(s，3H)ppm。
19F NMR(376MHz，CDCl3)-103.1(br s，1F)，-188.8(br s，1F)ppm。
19F{1H}NMR(376MHz，CDCl3)-103.1(br s，1F)，-188.8(br s，1F)ppm。
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-间-氟苯基磺酰胺(化合物16)
通过与上述用于化合物14类似的路线制备该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)8.39(1H，br s)，7.89(1H，br d，J＝7.8Hz)，7.78(1H，br d，J＝7.7Hz)，7.55(1H，td，J＝8.1，5.4Hz)，7.36(1H，td，J＝8.3，1.3Hz)，5.31(1H，dt，J＝50.0，9.8Hz)，3.82(1H，br s)，3.56(1H，dddd，J＝14.2，11.0，8.7，5.1Hz)，2.31(1H，ddd，J＝15.0，9.9，5.1Hz)，2.18(1H，ddd，J＝15.3，9.5，7.2Hz)，1.99-1.03(25H，m)，0.97(3H，s)，0.94(3H，t，J＝6.6Hz)，0.87(3H，d，J＝8.1Hz)，0.62(3H，s)ppm。
19F NMR(376MHz，CDCl3)-109.52(1F，br d，J＝5.2Hz)，-189.0(1F，dt，J＝50.1，13.9Hz)ppm。
19F{1H}NMR(376MHz，CDCl3)-109.52(1F，s)，-189.00(1F，s)ppm。
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-邻-氟苯基磺酰胺(化合物17)
通过与上述用于化合物14类似的路线制备该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.06(1H，br s)，8.10(1H，td，J＝7.5，1.5Hz)，7.65(1H，m)，7.35(1H，t，J＝7.6Hz)，7.22(1H，t，J＝9.2Hz)，5.31(1H，dt，J＝50.1，9.5Hz)，3.81(1H，br s)，3.57(1H，dddd，J＝14.1，11.3，8.6，5.1Hz)，2.34(1H，ddd，J＝15.4，10.0，5.0Hz)，2.21(1H，ddd，J＝15.9，9.3，6.6Hz)，2.08-1.02(25H，m)，0.96(3H，s)，0.92(3H，br t，J＝6.9Hz)，0.86(3H，d，J＝6.2Hz)，0.61(3H，s)ppm。
19F NMR(376MHz，CDCl3)-110.0(1F，br s)，-189.1(1F，d，J＝46.8Hz)ppm。
19F{1H}NMR(376MHz，CDCl3)-109.8(1F，s)，-188.9(1F，s)ppm。
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-4-三氟甲基苯基磺酰胺(化合物18)
通过与上述用于化合物14类似的路线制备该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)8.22(2H，d，J＝8.3Hz)，8.00(1H，br s)7.83(2H，d，J＝8.4Hz)，5.30(1H，dtd，J＝50.1，10.2，1.6Hz)，3.81(1H，br s)，3.56(1H，dddd，J＝13.9，12.0，8.6，5.0Hz)，2.31(1H，ddd，J＝15.8，10.3，5.1Hz)，2.17(1H，ddd，J＝15.8，10.0，6.6Hz)，1.94-1.05(25H，m)，0.97(3H，s)，0.93(3H，t，J＝5.8Hz)，0.87(3H，d，J＝6.1Hz)，0.61(3H，s)ppm。
19F NMR(376MHz，CDCl3)-63.5(3F，br s)，-189.2(1F，br d，J＝48.6Hz)ppm。
19F{1H}NMR(376MHz，CDCl3)-63.3(3F，s)，-189.0(1F，s)ppm。
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-3-三氟甲基苯基磺酰胺(化合物19)
通过与上述用于化合物14类似的路线制备该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)8.32(2H，m)，8.22(1H，br s)，7.92(1H，br d，J＝7.8Hz)，7.72(1H，t，J＝7.9Hz)，5.30(1H，dtd，J＝49.5，9.3，1.2Hz)，3.81(1H，br s)，3-54(1H，m)，2.31(1H，ddd，J＝15.6，10.1，5.1Hz)，2.18(1H，ddd，J＝15.9，9.2，6.4Hz)，1.95-1.04(25H，m)，0.97(3H，s)，0.93(3H，t，J＝6.9Hz)，0.86(3H，d，J＝6.2Hz)，0.61(3H，s)ppm。
19F NMR(376MHz，CDCl3)-63.02(3F，s)，-189.11(1F，br d，J＝48.6Hz)ppm。
19F{1H}NMR(376MHz，CDCl3)-63.02(3F，s，CF3)，-189.10(1F，s)ppm。
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-2-三氟甲基苯基磺酰胺(化合物20)
通过与上述用于化合物14类似的路线制备该化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)8.53(1H，m)，8.09(1H，br s)，7.90(1H，m)，7.79(2H，m)，5.3(1H，dtd，J＝50.0，9.8，1.7Hz)，3.81(1H，br s)，3.55(1H，dddd，J＝14.2，11.7，8.8，5.0Hz)，2.31(1H，ddd，J＝15.3，9.7，4.8Hz)，2.17(1H，m)，1.91(1H，m)，1.87-1.05(24H，m)，0.97(3H，s)，0.93(3H，t，J＝6.9Hz)，0.86(3H，d，J＝6.2Hz)，0.61(3H，s)ppm。
19F NMR(376MHz，CDCl3)-63.02(3F，s)，-189.11(1F，br d，J＝48.6Hz)ppm。
19F{1H}NMR(376MHz，CDCl3)-63.02(3F，s)，-189.10(1F，s)ppm。
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-环丙基磺酰胺(对比化合物B)
在搅拌的同时在氩气气氛中将N-(3α-羟基-4β-氟-6α-乙基-7α-三甲基甲硅烷氧基-5β-胆烷-24-基)-环丙基磺酰胺(50mg)溶于干THF。加入1M TBAF的THF溶液(0.3mL，0.3mmol)，将该反应体系在RT搅拌23h。用EtOAc(20mL)稀释该反应体系，用水(10mL)和10％NaCl水溶液洗涤。使粗溶液干燥上硅胶，通过柱色谱法纯化(SiO2，0-50％丙酮的甲苯溶液)，得到标题化合物(5.4mg)。
Rf 0.65(EtOAc/庚烷，50：50)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.31(1H，ddd，J＝49.8，10.7，8.9Hz)，3.83(1H，br.s)，3.55(1H，m)，2.95(1H，tt，J＝8.1，4.8Hz)，2.39(1H，m)，2.25(1H，m)，2.01-1.07(27H，m)，0.98(3H，s)，0.95(3H，d，J＝6.5Hz)，0.94(3H，t，J＝7.1Hz)，0.67(3H，s)ppm。
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-甲基磺酰胺(对比化合物C)
在搅拌的同时在氩气气氛中将N-(3α-羟基-4β-氟-6α-乙基-7α-三甲基甲硅烷氧基-5β-胆烷-24-基)-甲基磺酰胺(50mg)溶于干THF。加入1M TBAF的THF溶液(0.3mL，0.3mmol)，将该反应体系在RT搅拌16h。用EtOAc(5mL)稀释该反应体系，用盐水(3mL)洗涤。使粗溶液干燥上硅胶，通过柱色谱法纯化(SiO2，0-50％丙酮的甲苯溶液)。合并包含期望的产物的级分，减压浓缩，溶于CDCl3，用2M HCl和水洗涤，通过PTFE滤器过滤，真空浓缩，得到标题化合物(7.1mg)。
1H NMR(400M[Hz，CDCl3)：δ5.30(1H，ddd，J＝49.8，10.4，8.8Hz)，3.83(1H，br.s)，3.56(1H，m)，3.30(3H，s)，2.39(1H，ddd，J＝15.6，10.3，5.1Hz)，2.25(1H，m)，2.00-1.08(23H，m)，0.97(3H，s)，0.94(3H，d，J＝6.5Hz)，0.93(3H，t，J＝6.8Hz)，0.67(3H，s)ppm。
实施例4-带有磺酰脲和酰基磺酰胺侧链的4，4-二氟-3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β- 胆烷酸类似物的合成
A.6α-乙基-4，4-二氟-7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯
在-78℃在氩气气氛中向预先冷却的6α-乙基-4β-7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯(实施例1C的产物；7.30g，16.0mmol)在干THF(300mL)中的溶液中滴加LDA的己烷溶液(21.1mL，21.1mmol，～1.3当量)，历时0.25h。添加后，加入作为干THF(150mL)中的溶液的三甲基甲硅烷基氯(2.70mL，21.1mmol，～1.3当量)，搅拌1h。完成时，通过滴加饱和NaHCO3溶液(300mL)使反应停止，温热至RT 0.25h。除去有机相，用二氯甲烷(2x150 mL)反萃取水相。合并有机相，用盐水(300mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到粗物质，为黄色残余物(3％6α-乙基-4β-氟-7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯污染，通过19F NMR)。将得到的残余物不经进一步纯化用于下一步反应。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz)：δ-135.2(1F，s)。
向搅拌的得到的粗物质在MeCN(360mL)中的溶液中加入 (11.4g，32.0mmol，～2.0当量)，搅拌16h。完成时，真空浓缩该反应混合物。将残余物溶于二氯甲烷(500mL)和H2O(500mL)。除去有机相，用二氯甲烷(2x250mL)反萃取水相。合并有机相，用盐水(250mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到粗物质，为黄色残余物。将得到的残余物不经进一步纯化用于下一步反应。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.70(1H，dq，J＝7.7，3.2Hz)，3.66(3H，s)，2.70(1H，tdd，J＝14.2，5.1，3.4Hz)，2.44(1H，dq，J＝15.2，3.8Hz)，2.35(1H，ddd，J＝15.5，10.2，5.4Hz，2.24(1H，dd，J＝9.6，6.5Hz)，2.19(1H，dd，J＝10.2，2.9Hz)，2.14(1H，dt，J＝17.0，5.6Hz)，2.08(1H，td，J＝14.6，5.8Hz)，2.00-1.86(3H，m)，1.84-1.75(3H，m)，1.73-1.63(3H，m)，1.58(1H，dd，J＝13.9，4.8Hz)，1.54-1.28(6H，m)，1.25-1.11(3H，m)，1.10(3H，s)，0.98(3H，t，J＝7.3Hz)，0.93(3H，d，J＝6.4Hz)，0.67(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-99.2(1F，dd，J＝263.6，17.3Hz)，-100.7(1F，ddd，J＝263.6，29.5，15.6Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：486.6，[M+NH4]+，100％。
B.4，4-二氟-(3α，7α)-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸甲酯
在RT向搅拌的来自步骤A的粗6α-乙基-4，4-二氟-7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯(7.51g assumed，16.0mmol)在干甲醇(500mL)中的溶液中加入NaBH4(3.03g，80.1mmol，～5.0当量)，在氩气气氛中搅拌72h。完成时，真空浓缩该反应体系。将残余物溶于二氯甲烷(500mL)和H2O(500mL)。除去有机相，用二氯甲烷(2x 250mL)反萃取水相。合并有机相，用盐水(250mL)洗涤，用MgSO4干燥，用SiO2过滤，真空浓缩，得到7.63g粗物质，为无色残余物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP KP-Sil 100g柱)，使用己烷/丙酮(100/0-80/20)作为洗脱液，得到标题化合物4，4-二氟-(3α，7α)-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸甲酯，为无色残余物(3.09g，6.57mmol，41％，3步)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.76-3.65(2H，m)，3.67(3H，s)，2.36(1H，ddd，J＝15.5，10.3，5.4Hz)，2.31-2.19(2H，m)，2.11(1H，d，J＝5.4Hz)，2.00-1.92(3H，m)，1.91-1.30(16H，m)，1.22-1.10(4H，m)，1.04(3H，s)，0.97(3H，t，J＝7.3Hz)，0.92(3H，d，J＝6.5Hz)，0.65(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-99.3(1F，d，J＝239.3Hz)，-111.4(1F，dtd，J＝239.3，34.7，22.5Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：488.6，[M+NH4]+，100％。
C.3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-5β-胆烷酸
在RT向搅拌的来自步骤B的4，4-二氟-(3α，7α)-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸甲酯(1.77g，3.75mmol，1.0当量)在1，4-二噁烷(95mL)和水(35mL)的溶液中加入浓(37％)盐酸(11mL，9∶3∶1之比)。回流1h后，将该反应混合物冷却至RT，用饱和NaHCO3溶液(50mL)中和。除去有机相，用二氯甲烷(3x50mL)反萃取水相。合并有机相，用盐水(200mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到1.84g粗物质，为棕色油状物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP KP-Sil 50g柱)，使用己烷/丙酮(100/0-90/10)作为洗脱液，得到标题化合物3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-5β-胆烷酸，为无色油状物(1.51g，3.30mmol，88％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.78-3.64(2H，m)，2.39(1H，ddd，J＝15.8，10.3，5.3Hz)，2.25(1H，ddd，J＝15.7，9.6，6.4Hz)，，1.98-1.93(3H，m)，1.86-1.65(7H，m)，1.60(1H，d，J＝13.0Hz)，1.49-1.41(5H，m)，1.40-1.29(3H，m)，1.25-1.16(6H，m)，1.04(3H，s)，0.96(3H，t，J＝7.3Hz)，0.93(3H，d，J＝6.4Hz)，0.65(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-99.1(1F，d，J＝239.3Hz)，-111.1(1F，dtd，J＝241.0，38.2，19.1Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：474.6，[M+NH4]+，100％。
D.3α-乙酰氧基-4，4-二氟-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷酸
在HRT向搅拌的来自步骤C的3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-5β-胆烷酸(400mg，0.88mmol，1.0当量)在干THF(50mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(370mg，4.38mmol，～5.0当量)和乙酐(0.41mL，4.38mmol，～5.0当量)。在70℃ 16h后，将该反应混合物冷却至RT，通过缓慢添加H2O(50mL)淬灭。除去有机相，用EtOAc(2x50 mL)反萃取水相。合并有机相，用饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到462mg粗物质，为黄色油状物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP KP-Sil Ultra 25g柱)，使用己烷/丙酮(100/0-80/20)作为洗脱液，得到标题化合物3α-乙酰氧基-4，4-二氟-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷酸，为无色油状物(270mg，0.54mmol，62％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.97(1H，ddd，J＝27.5，10.2，6.0Hz)，3.67(1H，s)，2.54-2.33(2H，m)，2.30-2.26(1H，m)，2.24-2.18(1H，m)，2.13(3H，s)，2.02-1.79(6H，m)，1.77-1.62(3H，m)，1.56-1.42(6H，m)，1.41-1.21(5H，m)，1.20-1.13(3H，m)，1.05(3H，s)，0.95(3H，t，J＝7.3Hz)，0.94(3H，d，J＝6.5Hz)，0.66(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-98.2(1F，d，J＝244.5Hz)，-107.1(1F，ddd，J＝242.8，36.4，22.5Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：516.5，[M+NH4]+，100％。
E.3α-乙酰氧基-4，4-二氟-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷-24-酰基-叠氮化物
在0℃向预先冷却的来自步骤D的3α-乙酰氧基-4，4-二氟-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷酸(240mg，0.48mmol，1.0当量)在干THF(5.3mL)中的溶液中加入三乙胺(0.14mL，0.96mmol，～2.0当量)和二苯基磷酰基叠氮化物(0.16mL，0.72mmol，～1.5当量)。3h后，通过缓慢添加盐水(10mL)使该反应混合物淬灭。除去有机相，用二氯甲烷(3x20 mL)反萃取水相。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，在0℃真空浓缩，得到粗物质，为黄白色油状物。将得到的油状物不经进一步纯化用于下一步反应。
1H NMR-特征峰(400MHz，CDCl3)：δ4.94-4.83(1H，m)，3.59(1H，s)，2.30(1H，ddd，J＝15.7，10.0，5.4Hz)，2.04(3H，s)，0.97(3H，s)，0.87(3H，t，J＝7.3Hz)，0.84(3H，d，J＝6.4Hz)，0.57(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-98.2(1F，d，J＝242.8Hz)，-107.2(1F，dtd，J＝242.8，33.0，26.0Hz)ppm。
F.异氰酸3α-乙酰氧基-4，4-二氟-6α-乙基-7α-羟基-24-降-5β-胆烷-23-基酯
在氩气气氛中将搅拌的来自步骤E的粗油状物3α-乙酰氧基-4，4-二氟-6α-乙基-7α-羟基-5β-胆烷-24-酰基叠氮化物(252mg推定，0.48mmol)在干甲苯(7.5mL)中的溶液加热至125℃。4h后，将该反应体系冷却至RT。将得到的溶液不经进一步纯化使用。
1H NMR-特征峰(400MHz，CDCl3)：δ4.89(1H，ddd，J＝27.510.2，6.5Hz)，3.59(1H，q，J＝3.2Hz)，3.27(1H，ddd，J＝13.1，7.8，4.5Hz)，3.22-3.15(1H，m)，2.04(3H，s)，0.97(3H，s)，0.88(3H，t，J＝7.1Hz)，0.86(3H，d，J＝6.4Hz)，0.59(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-98.2(1F，d，J＝242.8Hz)，-107.2(1F，dtd，J＝243.2，37.7，22.5Hz)ppm。
G.N，N’-(3α-乙酰氧基-4，4-二氟-6α-乙基-7α-羟基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲
根据通用方法1，使用113mg苯磺酰胺制备，得到标题化合物N，N’-(3α-乙酰氧基-4，4-二氟-6α-乙基-7α-羟基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲，为白色残余物(235mg，0.36mmol，75％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.90(2H，dd，J＝8.4，1.1Hz)，7.63(1H，tt，J＝7.6，1.1Hz)，7.49(2H，t，J＝8.1Hz)，6.53(1H，s)，4.98(1H，ddd，J＝27.1，11.3，4.5Hz)，3.67(1H，s)，3.27(1H，ddd，J＝13.5，8.9，4.5Hz)，3.18-3.11(1H，m)，2.13(3H，s)，2.02-1.79(6H，m)，1.75-1.64(4H，m)，1.62-1.43(5H，m)，1.42-1.36(1H，m)，1.28-1.10(7H，m)，1.05(3H，s)，0.95(3H，t，J＝7.3Hz)，0.92(3H，d，J＝6.5Hz)，0.63(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-98.2(1F，d，J＝242.8Hz)，-107.1(1F，dtd，J＝243.2，37.7，22.5Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：635.8，[M+NH4]+，100％。
N，N’-(3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲(化合物21)
根据通用方法2，使用210mg N，N’-(3α-乙酰氧基-4，4-二氟-6α-乙基-7α-羟基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲制备，得到标题化合物N，N’-(3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲，为白色固体(102mg，0.17mmol，52％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.19(1H，s)，7.90(2H，dt，J＝7.3，1.3Hz)，7.65(1H，tt，J＝7.5，1.1Hz)，7.54(2H，tt，J＝7.3，1.6 Hz)，6.51(1H，t，J＝5.2Hz)，3.78-3.67(2H，m)，3.29(1H，ddt，J＝13.9，10.2，5.1Hz)，3.18(1H，ddd，J＝13.6，8.0，6.1Hz)，2.30(1H，dd，J＝31.4，11.0Hz)，1.99-1.94(3H，m)，1.88-1.57(9H，m)，1.52-1.37(5H，m)，1.23-1.11(7H，m)，1.04(3H，s)，0.97(3H，t，J＝7.3Hz)，0.93(3H，d，J＝6.5Hz)，0.64(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-99.3(1F，d，J＝239.3H[z)，-111.3(1F，dtd，J＝239.3Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：593.6，[M+NH4]+，100％。
N-(3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-苯磺酰胺(化合物22)
根据通用方法4，使用来自步骤C的400mg的3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-5β-胆烷酸制备，得到标题化合物N-(3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-苯磺酰胺，为白色固体(161mg，0.27mmol，31％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.06(2H，dd，J＝7.6，1.3Hz)，7.64(1H，tt，J＝7.6，0.8Hz)，7.54(2H，t，J＝7.3Hz)，3.85-3.69(2H，m)，2.45(1H，dd，J＝32.1，11.0Hz)，2.27(1H，ddd，J＝15.3，10.2，5.0Hz)，2.16-2.10(1H，m)，1.97-1.89(3H，m)，1.86-1.64(8H，m)，1.61-1.54(1H，m)，1.47-1.43(4H，m)，1.37-1.29(2H，m)，1.22-1.06(6H，m)，1.03(3H，s)，0.97(3H，t，J＝7.3Hz)，0.84(3H，d，J＝6.2Hz)，0.59(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-99.0(1F，d，J＝239.3Hz)，-111.0(1F，dtd，J＝239.3，33.0，26.0Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：613.6，[M+NH4]+，100％。
实施例5-带有磺酰脲和磺酰胺侧链的6α-乙基-2α/β，4β-二氟-(3α，7α)-二羟基-5 β-胆烷酸类似物的合成
A.6α-乙基-2α/β，4β-二氟-7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯
在-78℃向搅拌的预先冷却的1M LDA在THF/己烷中的溶液(1.63mL，1.625mmol)和TMS-Cl(0.21mL，1.626mmol)在干THF(6mL)中的溶液中滴加6α-乙基-4β-氟-7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷-24-酸甲酯(实施例1C的产物；170mg，0.325mmol)在干THF(2.5mL)中的溶液，历时10min。添加后，将该反应体系逐步温热至RT，搅拌20h。完成时，将该反应混合物冷却至0℃，通过滴加饱和NaHCO3(5mL)淬灭，用H2O(5mL)稀释。除去有机相，用EtOAc(3×5mL)反萃取水相。用NaHCO3(5mL)、H2O(5mL)和盐水(5mL)洗涤合并的有机相。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到黄色油状物。将得到的糖浆状物不经进一步纯化用于下一步反应。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz)：δ-169.9(1F，s)；
向搅拌的甲基-3-三甲基甲硅烷基-6α-乙基-4β-氟-7α-羟基-5β-胆烷-2-烯-24-酸酯(推定0.19g，0.325mmol)在干MeCN(10mL)中的溶液中逐步加入(0.17g，0.488mmol)，将该反应体系在RT搅拌16h。完成时，用EtOAc(5mL)和饱和NaHCO3(3mL)稀释该反应体系。除去有机相，用EtOAc(3×5mL)反萃取水相。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到黄色油状物。
上述实施例2D和2E中所述的方法可以对步骤A的产物进行，得到6α-乙基-2α/β，4β-二氟-(3α，7α)-二羟基-5β-胆烷-24-酸甲酯。
可以使用如上述实施例1-3中所述的通用方法1-4将该化合物转化成等效的磺酰脲或磺酰胺类似物。
2β-氟化合物的合成
如下所述制备奥贝胆酸的2α-氟和4α-氟衍生物。
实施例6-带有磺酰脲和磺酰胺侧链的2β-氟-3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷酸 类似物的合成
A.甲基-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯
在RT向如WO 2016/079520中所述制备的(6α，5β，7α)-6-乙基-7-羟基-3，7-二氧代-胆烷-24-酸(36.0g，87.7mmol，1.0当量)在甲醇(800mL)中的溶液中加入对-甲苯磺酸(1.67g，8.78mmol，～0.1当量)，在30℃超声处理4小时。通过TLC确认反应完成，真空浓缩该反应混合物。将残余物溶于氯仿(400mL)，用饱和NaHCO3溶液(400mL)和盐水(400mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到37.6g粗物质，为白色固体，不经进一步纯化使用(87.3mmol，99％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.66(3H，s)，2.74(1H，m)，2.47(1H，t，J＝11.3Hz)，2.35(1H，ddd，J＝15.4，10.0，5.3Hz)，2.26-2.14(6H，m)，2.10-1.77(6H，m)，1.74-1.35(7H，m)，1.33(3H，s)，1.31-1.26(1H，m)，1.21-0.96(4H，m)，0.93(3H，d，J＝6.5Hz)，0.80(3H，t，J＝7.4Hz)，0.69(3H，s)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：448.3[M+NH4]+，100％。
B.甲基-3β-羟基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯和甲基-3α-羟基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯
在-78℃在氩气气氛中向步骤A的干甲基-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯(10.0g，23.2mmol，1.0当量)在四氢呋喃(340mL)中的溶液中滴加L-selectride(35.0mL，34.8mmol，～2.5当量)，历时15分钟。10分钟后，在0℃该反应混合物接受过氧化氢(40mL，30％v/v)和2M氢氧化钠(40mL)在水(400mL)中的溶液。再经过10分钟后，该反应混合物在RT接受2M盐酸(130mL)。分离水相，用乙酸乙酯(2x250mL)萃取，用水(500mL)洗涤合并的有机级分，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到11.0g粗物质，为无色油状物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP KP-Sil 100g柱)，使用PE 40-60/丙酮(90/10-80/20)作为洗脱液，得到化合物甲基-3β-羟基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯和甲基-3α-羟基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯的不可分离的65：35之比的混合物，为白色残余物(7.83g，18.1mmol，78％)。对于该混合物，不分离为两种化合物，在下一步中产生烯烃的相同混合物。
化合物A：1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.05(1H，t，J＝2.5Hz)，3.66(3H，s)，2.77-2.73(1H，m)，2.41-2.31(2H，m)，2.26-2.14(3H，m)，2.00-1.88(2H，m)，1.84-1.58(6H，m)，1.55-1.29(10H，m)，1.25(3H，s)，1.15-1.07(4H，m)，0.92(3H，d，J＝6.5Hz)，0.81(3H，t，J＝7.4Hz)，0.66(3H，s)。
LRMS(ESI+)m/z：450.3[M+NH4]+，100％。
化合物B：1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.66(3H，s)，3.57-3.48(1H，m)，2.76-2.67(1H，m)，2.41-2.32(2H，m)，2.26-2.14(3H，m)，2.00-1.88(2H，m)，1.84-1.59(6H，m)，1.55-1.29(10H，m)，1.22(3H，s)，1.17-1.07(4H，m)，0.92(3H，d，J＝6.4Hz)，0.80(3H，t，J＝7.4Hz)，0.65(3H，s)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：450.4[M+NH4]+，100％。
C.甲基-6α-乙基-7氧代-5β-胆-2-烯-24-酸酯和甲基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆-3-烯-24-酸酯
在RT向步骤B的甲基-3β-羟基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯和甲基-3α-羟基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯(6.31g，14.6mmol，1.0当量)在二氯甲烷(120mL)中的溶液中加入二甲基氨基吡啶(3.56g，29.2mmol，～2.0当量)。将该反应混合物冷却至0℃，接受滴加三氟甲磺酸酐(2.57mL，15.3mmol，～1.05当量)，历时5分钟。2小时后，温热至12℃，通过TLC确认反应完成，用2M盐酸(100mL)使该反应混合物淬灭。分离水相，用二氯甲烷(3x 100mL)萃取，用盐水(200mL)洗涤合并的有机级分，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到7.56g粗物质，为橙色油状物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP KP-Sil 100g柱)，使用PE 40-60/丙酮(90/10)作为洗脱液，得到甲基-6α-乙基-7氧代-5β-胆-2-烯-24-酸酯和甲基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆-3-烯-24-酸酯不可分离的80：20之比的混合物，为无色油状物(2.70g，6.51mmol，45％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.63-5.40(2H，m)，3.66(3H，s，)，2.74(1H，dd，J＝12.0，6.6Hz)，2.34(2H，tt，J＝10.3，5.1Hz)，2.27-1.29(19H，m)，1.27(2H，s)，1.26(1H，s)，1.18-0.94(3H，m)，0.91(3H，d，J＝6.5Hz)，0.83(3H，t，J＝7.5Hz)，0.664(1H，s)，0.657(2H，s)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：432.20[M+NH4]+，100％。
D.甲基-2β，3β-环氧-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯和甲基-3β，4β-环氧-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯
在RT向80∶20之比的步骤C的甲基-6α-乙基-7氧代-5β-胆-2-烯-24-酸酯和甲基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆-3-烯-24-酸酯(5.00g，12.1mmol，～1.0当量)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入间-过氯苯甲酸(3.12g，18.1mmol，～1.5当量)。在RT 3小时后，通过TLC确认反应完成，用饱和Na2S2O3溶液(150mL)使该反应混合物淬灭。10min搅拌后，分离水相，用二氯甲烷(3x 100mL)萃取，用Na2SO4干燥合并的有机级分，过滤，真空浓缩，得到5.28g粗物质，为淡黄色产物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP KP-Sil 100g柱)，使用PE 40-60/丙酮(95/5-90/10)作为洗脱液，得到甲基-2β，3β-环氧-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯和甲基-3β，4β-环氧-6α-乙相基.7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯不可分离的混合物，为无色油状物(4.94g，11.5mmol，95％)。进一步通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP KP-Sil 340g柱)，使用PE 40-60/丙酮(95/5-90/10)作为洗脱液，得到化合物甲基-2β，3β-环氧-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯，为无色油状物(3.71g，8.62mmol，72％)和化合物甲基-3β，4β-环氧-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯，为无色油状物(1.18g，2.74mmol，23％)。
化合物A：1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.66(3H，s)，3.13(1H，t，J＝2.6Hz)，3.01(1H，dd，J＝5.5，4.2Hz)，2.67(1H，dd，J＝11.5，6.6Hz)，2.35(1H，ddd，J＝15.4，10.2，5.1Hz)，2.30-2.18(3H，m)，2.01-1.65(7H，m)，1.55-1.20(10H，m)，1.17(3H，s)，1.15-0.95(3H，m)，0.92(3H，d，J＝6.4Hz)，0.81(3H，t，J＝7.4Hz)，0.65(3H，s)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：448.30[M+NH4]+，100％。
化合物B：1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.66(3H，s)，3.10-3.09(1H，m)，2.79-2.74(2H，m)，2.41-2.31(2H，m)，2.26-2.04(3H，m)，2.00-1.88(4H，m)，1.84-1.58(2H，m)，1.53-1.20(11H，m)，1.17(3H，s)，1.14-0.94(2H，m)，0.91(3H，d，J＝6.3Hz)，0.90(3H，t，J＝7.5Hz)，0.66(3H，s)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：448.26[M+NH4]+，100％。
E.甲基-2α-氟-3α-羟基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯
在0℃在氩气气氛中向步骤D的甲基-2β，3β-环氧-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯(3.33g，7.73mmol，1.0当量)在二氯甲烷(100mL)中的干溶液中加入HF.吡啶(70％)复合物(100mL，3.86mol，～500当量)，通过在稳态氩气气流气氛中经玻璃漏斗将新鲜打开的100mL瓶倾入冷却的反应烧瓶中来进行。添加试剂后，用二氯甲烷(20mL)冲洗瓶和漏斗。在0℃ 3小时后，用二氯甲烷(200mL)稀释该反应混合物，通过缓慢添加饱和NaHCO3溶液(500mL)淬灭，在RT搅拌1小时，同时接受5.0g的NaHCO3，分100mg部分进行。然后分离水相，用二氯甲烷(3x250mL)萃取，用Na2SO4干燥合并的有机级分，过滤，真空浓缩，得到3.61g粗物质，为无色油状物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP KP-Sil 100g柱)，使用PE 40-60/丙酮(95/5-90/150作为洗脱液，得到化合物甲基-2α-氟-3α-羟基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯，为白色残余物(2.39g，5.30mmol，69％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.53(1H，dq，J＝47.0，2.3Hz)，4.01(1H，dq，J＝6.6，2.9Hz)，3.66(3H，s)，2.75(1H，dd，J＝13.3，5.8Hz)，2.38-2.30(2H，m)，2.25-2.11(4H，m)，2.01(1H，dd，J＝12.0，3.8Hz)，1.93-1.36(14H，m)，1.25(3H，d，J＝4.0Hz)，1.21-1.10(3H，m)，0.91(3H，d，J＝6.5Hz)，0.82(3H，t，J＝7.4Hz)，0.65(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-184.3(1F，tt，J＝50.3，8.7Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：468.28[M+NH4]+，100％。
F.甲基-2α-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯
在RT向步骤E的甲基-2α-氟-3α-羟基-6α-乙基-7-氧代-5β-胆烷-24-酸酯(1.00g，2.26mmol，1.0当量)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入戴斯-马丁试剂(1.92g，4.52mmol，～2.0当量)和H2O(0.25mL)。在RT 3小时后，通过TLC确认反应完成，用饱和NaHCO3溶液(25mL)使该反应混合物淬灭，用C盐过滤，用二氯甲烷(90mL)洗涤。然后分离水相，用二氯甲烷(2x 50mL)萃取，用饱和Na2S2O3溶液(150mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到1.21g粗物质，为浅黄色油状物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP KP-Sil25g柱)，使用PE 40-60/丙酮(95/5-90/10)作为洗脱液，得到化合物甲基-2α-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯，为白色残余物(568mg，1.27mmol，56％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.69(1H，ddd，J＝50.7，4.8，3.4Hz)，3.68(3H，s)，2.75(1H，ddd，J＝7.7，5.0，4.3Hz)，2.51-1.94(12H，m)，1.83-1.40(9H，m)，1.37(3H，s)，1.34-1.08(5H，m)，0.94(3H，d，J＝6.5Hz)，0.84(3H，t，J＝7.4Hz)，0.70(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-188.2(1F，ddd，J＝51.6，42.1，12.1Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：466.55[M+NH4]+，100％。
G.2α-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷酸和2β-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷酸
在RT向甲基-2α-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯(步骤F的产物，878mg，1.95mmol，1.0当量)在甲醇(20mL)中的溶液中加入氢氧化钠(1.0g)。在RT 19小时后，通过TLC确认反应完成，将该反应混合物酸化至pH 4.0，真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯(50mL)，用1M盐酸(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到968mg粗物质，为无色油状物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP KP-Sil 25g柱)、使用二氯甲烷/甲醇(98/2-90/10)作为洗脱液，得到2α-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷酸和2β-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷酸不可分离的40：60之比的混合物，为白色残余物(772mg，1.77mmol，91％)。
2α-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷酸：1H NMR-特征峰(400MHz，CDCl3)：δ4.68(1H，ddd，J＝50.7，5.1，3.6Hz)，2.75(1H，ddd，J＝7.7，5.0，4.3Hz)，1.36(3H，s)，0.94(3H，d，J＝6.5Hz)，0.82(3H，t，J＝7.3Hz)，0.69(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-188.2(1F，ddd，J＝51.6，42.1，12.1Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：452.51[M+NH4]+，100％。
2β-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷酸：1H NMR-特征峰(400MHz，CDCl3)：δ4.90(0.6H，ddd，J＝48.7，13.2，6.1Hz)，2.75(1H，ddd，J＝7.7，5.0，4.3Hz)，1.39(2H，s)，0.95(2H，d，J＝6.5Hz)，0.82(3H，t，J＝7.3Hz)，0.70(2H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-195.1(1F，ddd，J＝48.6，10.4，5.2Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：452.51[M+NH4]+，100％。
H.甲基-2β-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯
在RT向步骤G的40∶60之比的2α-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷酸和2β-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷酸(750mg，1.72mmol，～1.0当量)在二甲基甲酰胺(17mL)的溶液中加入碳酸铯(840mg，2.58mmol，～1.5当量)。在RT 20min后，滴加碘甲烷(0.54mL，8.59mmol，～5.0当量)。在RT 19小时后，通过TLC确认反应完成，真空浓缩该反应混合物。将残余物溶于乙酸乙酯(25mL)和H2O(20mL)。分离水层，用乙酸乙酯(3x 25mL)萃取，用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到917mg粗物质，为浅黄色油状物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP Ultra KP-Sil 25g柱)，使用PE 40-60/丙酮(95/5-90/10)作为洗脱液，得到化合物甲基-2β-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯，为白色残余物(416mg，0.95mmol，54％)。不分离相应的2α-氟衍生物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.69(1H，ddd，J＝48.8，13.3，6.4Hz)，3.67(3H，s)，2.75(1H，dd，J＝13.1，5.0Hz)，2.54-2.44(2H，m)，2.40-2.32(2H，m)，2.29-2.13(3H，m)，2.09(1H，dt，J＝13.0，3.3Hz)，2.01-1.91(2H，m)，1.85-1.65(5H，m)，1.54-1.42(2H，m)，1.39(3H，s)，1.38-1.05(7H，m)，0.94(3H，d，J＝6.5Hz)，0.82(3H，t，J＝7.4Hz)，0.70(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-195.1(1F，ddt，J＝48.6，10.4，5.2Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：466.59[M+NH4]+，100％。
I.甲基-2β-氟-3β，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯和甲基-2β-氟-3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯
在氩气气氛中在RT向来自步骤H的甲基-2β-氟-3，7-二氧代-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯(390mg，0.87mmol，1.0当量)在甲醇(20mL)中的干溶液中加入硼氢化钠(164mg，4.44mmol，5.0当量)。在RT 1小时后，真空浓缩该反应混合物。将残余物溶于二氯甲烷(20mL)和H2O(20mL)，分离水相，用二氯甲烷萃取(3x 20mL)。用Na2SO4干燥合并的有机级分，过滤，真空浓缩，得到446mg粗物质，为浅黄色油状物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAPUltra KP-Sil 25g柱)，使用PE 40-60/丙酮(95/5-90/10)作为洗脱液，得到化合物甲基-2β-氟-3β，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯，为无色油状物(161mg，0.36mmol，41％)和甲基-2β-氟-3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯，为无色油状物(146mg，0.32mmol，37％)。
甲基-2β-氟-3β，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯：1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.63(1H，dddd，J＝47.4，12.5，4.4，3.1Hz，)，4.15(1H，q，3.6Hz)，3.71(1H，s)，3.67(3H，s)，2.36(1H，ddd，J＝15.5，10.2，5.3Hz)，2.33(1H，ddd，J＝16.0，9.7，6.6Hz)，2.12(1H，td，J＝13.2，2.2Hz)，2.00(1H，dt，J＝12.5，3.1Hz)，1.94-1.78(5H，m)，1.77-1.54(6H，m)，1.52-1.25(8H，m)，1.20-1.12(4H，m)，1.00(3H，s)，0.93(3H，d，J＝6.8Hz)，0.92(3H，t，J＝7.1Hz)，0.67(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-187.1(1F，dquin，J＝46.9，7.8Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：470.64[M+NH4]+，100％。
甲基-2β-氟-3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯：1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.42(1H，dddd，J＝52.7，12.5，8.7，4.5Hz)，3.70(1H，s)，3.67(3H，s)，3.52(1H，ddt，13.8，12.5，6.0Hz)，2.36(1H，ddd，J＝15.4，10.2，5.3Hz)，2.27-2.17(3H，m)，2.09-1.97(2H，m)，1.95-1.86(2H，m)，1.84-1.76(1H，m)，1.66-1.29(14H，m)，1.22-1.13(4H，m)，0.98(3H，s)，0.93(3H，d，J＝6.5Hz)，0.92(3H，t，J＝7.2Hz)，0.67(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-188.2(1F，ddd，J＝51.6，42.1，12.1Hz)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：470.64[M+NH4]+，100％。
J.2β-氟-3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷酸
在RT向步骤I的甲基-2β-氟-3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸酯(119mg，0.26mmol，1.0当量)在1，4-二噁烷(9.8mL)和水(3.6mL)中的溶液中加入浓(37％)盐酸(1.2mL，9∶3∶1比)。1小时回流后，通过TLC确认反应完成，用饱和NaHCO3溶液(20mL)中和该反应混合物。用乙酸乙酯萃取水相(3x15mL)，用Na2SO4干燥合并的有机级分，过滤，真空浓缩，得到141mg粗物质，为无色油状物。通过快速色谱法纯化(Biotage SNAP Ultra KP-Sil10g柱)、使用二氯甲烷/甲醇(95/5-90/10)作为洗脱液，得到化合物2β-氟-3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷酸，为白色残余物(92mg，0.21mmol，80％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.42(1H，dddd，J＝52.6，12.5，8.7，4.3Hz)，3.69(1H，s)，3.52(1H，tdd，12.0，8.8，5.4Hz)，2.39(1H，ddd，J＝15.5，10.3，5.1Hz)，2.29-2.19(3H，m)，2.01(2H，t，J＝13.0Hz)，1.93-1.77(3H，m)，1.65-1.54(3H，m)，1.53-1.26(12H，m)，1.23-1.10(4H，m)，0.97(3H，s)，0.94(3H，d，J＝6.5Hz)，0.91(3H，t，J＝7.1Hz)，0.66(3H，s)ppm。
19F NMR(1H非-解偶联的，376MHz，CDCl3)：δ-186.8(1F，ddq，J＝52.9，13.0，7.5Hz，)ppm。
LRMS(ESI+)m/z：456.60[M+NH4]+，100％。
可以使用如上述实施例1-3中所述的通用方法1-4将该化合物转化成等效的磺酰脲或磺酰胺类似物。
生物学实施例
对于下面的生物学实施例8和9，University of Reading，UK的Kim Watson教授和Dannielle Kydd-Sinclair教授已进行了所有工作，并友好地提供了数据。
实施例7-EC50的测定和对FXR受体的功效
测定了本发明化合物对FXR受体的激动剂活性。表1显示与对比例化合物奥贝胆酸和已知的具有如下结构的FXR激动剂GW4064的值相比，本发明的实施例化合物的EC50值和功效值：
将功效定义为剂量反应曲线上的最高点，且将表1中GW4064的功效值指定为100％。
将表1中的EC50值对指定为25nM的GW4064的EC50校准。
奥贝胆酸可以如WO 02/072598或我们的申请WO 2016/079518、WO 2016/079518、WO 2016/079519和WO 2016/079520中所述制备。
FXR EC50/功效方案
剂量响应测定如人类法尼醇X受体(NR1H4，FXR)报道基因检测系统技术手册(Indigo Biosciences Human Farnesoid X Receptor(NR1H4，FXR)Reporter AssaySystem，Technical Manual(7.1b版)，www.indigobiosciences.com)中所述进行。
将由功能连接至萤光素酶基因的FXR-响应启动子基因组成的FXR受体细胞解冻并接种到96-孔板中，并根据制造商的方案立即给这些细胞施用不同浓度(10-0.05μM)的测试化合物。在测试化合物或溶剂(DMSO)存在下温育24h后，使用基于荧光的活细胞多路(LCM)测定法测量了这些处理/未处理的报道细胞的细胞活力，以消除假阴性结果(IndigoBiosciences Live Cell Multiplex Assay，Technical Manual(3.1版)，www.indigobiosciences.com)。使用读板器与[485nmEx|535nmEm]的滤器的组合测量活细胞的荧光。此后，通过使用光度计(TECAN)，根据制造商的方案对萤光素酶活性的诱导进行定量，该活性为激动剂活性的度量。
分别进行阳性对照试验，其中将GW4064的EC50值指定为25nM，并且将GW4064的功效指定为100％的功效值。将每种测试化合物的功效和EC50与GW4064的功效和EC50进行比较。
结果如表1中所示。
表1
本发明的化合物均具有FXR激动剂活性。与奥贝胆酸相比，除化合物11以外的所有化合物均具有显著改善的EC50值。此外，所有本发明化合物的功效值至少与GW4064的功效同样好，并且在大多数情况下优于GW4064。
化合物2及其未氟化类似物对比化合物A的结果比较表明，氟化可改善EC50和功效。芳族磺酰胺化合物14-20与碳环磺酰胺对比化合物B和甲基磺酰胺对比化合物C的结果比较表明了在侧链上的芳族取代基的重要性。
实施例8-EC50的测定和对TGR5受体的功效
使用激动剂模式下的DiscoverX提供的 cAMP测定法来监测化合物2和14、TGR5(对照)和奥贝胆酸的牛磺酸和甘氨酸缀合物对TGR5受体的活性，以监测TGR5(GPBAR1)受体通过Gi和Gs二次信使信号传导的活化。将数据标准化为在对照配体(TGR5)和媒介物存在下观察到的最大和最小反应。
试验设计：GPCR cAMP调节
细胞操作
1.根据标准方法，从冷藏库储备物扩增cAMP Hunter细胞系。
2.将细胞以20μL的总体积接种到白壁的384-孔微孔板中，并在测试前于37℃温育适当的时间。
3.使用DiscoverX cAMP XS+测定法测定cAMP调节。
Gs激动剂形式
1.对于激动剂测定，将细胞与样品一起温育以诱导响应。
2.从细胞中抽吸出培养基，并用15μL 2∶1HBSS/10mM Hepes：cAMP XS+Ab试剂替代。
3.进行样品储备液的中间稀释以在测定缓冲液中生成4X样品。
4.将5μL 4x样品加入到细胞中并且在37℃或在室温下温育30或60分钟。媒介物浓度为1％。
信号检测
1.在适当的化合物温育之后，通过与20μLcAMP XS+ED/CL裂解混合物温育1小时，然后与20μLcAMP XS+EA试剂在室温温育3小时来产生测定信号。
2.在信号发生后，使用用于化学发光信号检测的PerkinElmer EnvisionTM仪器读取微量培养板。
数据分析
1.使用CBIS数据分析套件(ChemInnovation，CA)分析化合物活性。
2.对于Gs激动剂模式测定，活性百分比使用以下公式计算，其中RLU为相对光单位的缩写：
％活性＝100％x((测试样品的平均RLU-媒介物对照的平均RLU)/(最大对照的平均RLU-媒介物对照的平均RLU))
5.对于Gi激动剂模式测定，活性百分比使用以下公式计算：
％活性＝100％x((1-(测试样品的平均RLU-最大对照的平均RLU))/(媒介物对照的平均RLU-最大对照的平均RLU))
结果
结果如表2中所示。
表2
化合物 EC50(μM) 最大响应
TGR5(对照) 0.445 101.26
化合物2 ＞100 0
化合物14 ＞100 0
奥贝胆酸牛磺酸缀合物 0.979 97.70
奥贝胆酸甘氨酸缀合物 1.904 110.9
结果表明，与奥贝胆酸缀合物不同，化合物2和化合物14都不对TGR5受体具有激动剂活性。因此，这些化合物是选择性的FXR激动剂。
实施例9-配体诱导的基因表达的定量分析
测试了化合物2和奥贝胆酸对许多FXR靶基因表达的影响。本实施例描述了基于细胞的测定法和基因表达分析，以观察本发明的化合物和奥贝胆酸在细胞水平上对FXR的功能性激活。
为了评估响应测试化合物的基因表达的特定变化，通过定量实时PCR(qPCR)进行精确的定量和分析。哺乳动物组织培养实验涉及将肝细胞癌(Huh7)细胞以1×106细胞/孔的浓度接种在6孔板中，并在37℃温育24小时以使其附着。将细胞暴露于在其EC50或EC90下的相应化合物或媒介物(DMSO)24小时。
将化合物2和OCA也在人肝细胞癌HepG2细胞系中进行测试。也将HepG2细胞与包含EC50或EC90浓度下的OCA或化合物2的培养基一起温育24小时。
还以与化合物2相同的方式对化合物14进行了Huh7细胞和HepG2细胞的测试。
从培养的细胞中分离总RNA
使用RNAqueousTM总RNA分离试剂盒(Ambion)提取总RNA，且试剂盒中提供了所有试剂或根据制造商的说明进行制备。对于培养的细胞，除去培养基，并用1×PBS洗涤细胞以除去细胞碎片和残留培养基。从新鲜细胞中提取总RNA。对于1×106细胞，将350μl裂解缓冲液直接加入孔中，并用移液管吸头刮取收获细胞。将裂解的细胞与等体积的64％乙醇合并，并通过移液彻底混合。将乙醇裂解物混合物转移至柱中，并以12,000xG的转速旋转1分钟，并弃去流通液。通过在柱上加入洗涤缓冲液1并在12,000×G下离心1分钟来洗涤膜，然后弃去流通液，并用洗涤缓冲液2重复此步骤两次。另外包括用空柱旋转以完全干燥乙醇膜。最终，将总RNA在2个依次等份的50μl预热洗脱缓冲液(含痕量EDTA的无核酸酶的水)洗脱。
RNA量、纯度和完整性分析
使用Nanodrop Lite分光光度计(Thermo Scientific)通过测量260nm处的吸光度来定量RNA浓度。RNA的纯度通过分析A260∶280的比率来确定，其中1.8到2.1之间的值被认为没有蛋白质污染，并且对于下游应用为可接受的。通过在变性甲醛琼脂糖凝胶上运行样品来确定RNA的完整性。通过添加1×SYBRTM Safe DNA染料(Invitrogen)制成1％琼脂糖(Sigma Aldrich)、1x MOPS(Sigma Aldrich)、6.6％甲醛(Fisher Scientific)凝胶，以可视化核酸。上样之前，将等体积的甲醛上色染料(Ambion)添加到1μg RNA中，并且将样品在70℃加热10分钟，然后立即在冰上快速冷却2-3分钟。使凝胶在90V下运行1小时30分钟，并使用NuGenius凝胶doe系统(Syngene)在UV光下显影。仔细检查28S和18S rRNA的条带，分别在大约5kb和1.9kb处观察到清晰、强烈的条带，其中分别预期28S上部条带的强度是完整RNA 18S下部条带的强度的两倍。低于18S rRNA条带的涂片被认为表示降解的RNA，而高于28S rRNA条带的涂片和/或条带则指示DNA污染。分析后，立即将RNA用于逆转录。
逆转录
使用用于RT-qPCR的iScriptTM Advanced cDNA合成试剂盒(Biorad)进行逆转录。向1μgDNase处理的RNA中加入4μl 5x iScriptTM Advanced反应混合物和1μl iScriptTMAdvanced逆转录酶。加入无核酸酶的水至终体积为20μl，并将该反应体系在46℃温育20分钟，然后在95℃灭活1分钟。将新合成的cDNA在TE缓冲液(10mM Tris pH 8，1mM EDTA)中稀释10倍，等分并保存在-20℃直至用于qPCR实验。
定性实时PCR分析
基于来自现有文献的数据选择参比基因。选择的靶基因如表3中所示。
表3-定性实时PCR分析的选定的靶基因
qPCR引物的优化
用于上述靶标基因的 Green预先设计的引物(根据最佳等级选择)购自Sigma Life Science。将无核酸酶的水添加至冻干的引物中，储备液浓度为100μM。将引物用无核酸酶的水稀释至10μM的工作浓度。为了测试该测定法的效率、重现性和动态范围，进行了十倍的系列稀释；由人参比RNA(Agilent)产生的5种浓度的cDNA(如上所述)组成。在对这些样品进行qPCR之后，通过阈值循环(Ct)值(y轴)对log cDNA浓度(x-轴)构建标准曲线。指数期中一个循环的引物扩增效率(E)由方程E＝10(-1/slope)1(Pfaff1，2001)确定。这些qPCR反应的准确性由标准曲线的R2值确定，其中值＞0.98是适合的。每种引物的特异性通过熔化曲线分析确定，该分析在每次试验结束时进行，其中在一个熔化温度下一个峰的产生表明仅一种产物的扩增，因此，为具有高度特异性的引物。通过琼脂糖凝胶电泳(2％琼脂糖，1×TAE，在100V下运行30分钟)证实扩增产物，以检查扩增子大小是否如预期，并且仅观察到一种产物。
定量PCR
即用型反应标准混合物iTaqTM Universal Green Supermix(Biorad)用于所有qPCR反应。每个基因的典型反应包含5μl 2×iTaqTM Universal Green Supermix，500nm正向和500nm反向引物，约15ng cDNA和无核酸酶的水，至终体积为10μl。在Optical MicroAmp 96孔板(Applied Biosystems)上一式三份地运行每种靶基因、参比基因和无模板对照。用光学粘合剂密封物(Applied biosystems)将板密封，将其短暂置于板振荡器上以混合各成分并离心。使用Applied Biosystem Step One Plus实时PCR系统，应用以下循环条件下进行反应；在95℃的初始变性步骤持续15分钟，进行40个扩增循环，由在94℃的变性步骤持续15秒，合并退火和在60℃下进行1分钟延伸步骤组成，其中进行单一荧光测量。分别运行后立即通过以0.3℃的增量将温度从60℃升高至95℃，并测量荧光解离来进行熔化曲线分析。
数据分析
为了定量基因表达，通过qPCR系统软件(Applied Biosystems)自动确定基线校正的Ct值。通过Livak或ΔΔCt方法确定基因表达的相对变化，其中将用媒介物处理的样品/未经处理的样品(对照)和用测试化合物处理的样品(测试样品)的目标基因的Ct值对参比基因的Ct值校准。然后将测试样品的ΔCt值与对照样品的ΔCt值校准。且最终，使用等式2-ΔAC t计算表达率。总计3个生物学重复样品，并且将所有数据均表示为平均值±SE。将处理通过单向方差分析进行比较，然后再进行Tukey和Dunnet氏事后检验。
结果
用化合物2进行Huh7处理时，牵涉胆汁酸稳态并已知受FXR正调节的直接靶基因nr0b2(SHP)和slc51a(OSTα)(Goodwin等人，2000；Landrier等人，2006)展示出显著增加。SHP表达水平在化合物2处理后增加了1.5(EC50浓度)-2.5倍(EC90浓度)(图1)。Ostα mRNA也得到显著上调，在其EC50和EC90浓度下处理时展示出表达分别增加11倍和18倍(图2)。
FXR激活通过SHP介导的和FGF19-介导的途径导致CYP7A1的抑制。CYP7A1随着化合物2浓度的增加而下调(图3)。
作为对用化合物2在其EC50浓度下处理的响应，HepG2细胞展示出TGFβ1表达水平显著下调(图4)。
SHP表现出适度的增加，因此用化合物14在其EC90浓度下处理的表达水平增加了一倍以上(图5)。化合物14诱导FXR-靶标Ostα的显著增加，其中经过处理的细胞的mRNA表达水平达到比媒介物-处理的细胞高20-40倍(图6)。
在EC50浓度下，化合物14显著降低CYP7A1的表达，将其降低至对媒介物对照细胞观察到的水平的一半以上(图7)。
与化合物2类似，化合物14随着化合物浓度的增加诱导TGFβ1表达下降(图8)。
本发明人感谢University of Reading的Dannielle Kydd-Sinclair，他提供了许多背景部分以及如上所述生物学实例的方法和数据，并且感谢University ofSouthampton的David Evans、Simon Holland和Lawrence Tam，他们进行了几种实施例化合物的合成。
参考文献
Alemi，F.等人(2013)‘The TGR5 receptor mediates bile acid-induced itchand analgesia’，The Journal of Clinical Investigation，123(4)，pp.1513-1530.doi：10.1172/JCI64551.mation.
Ananthanarayanan，M.等人(2004)‘Ligand-dependent activation of thefarnesoid X-receptor directs arginine methylation of histone H3 by CARM1’，Journal of Biological Chemistry，279(52)，pp.54348-54357.doi：10.1074/jbc.M410021200.
Bellentani，S.(2017)‘The epidemiology of non-alcoholic fatty liverdisease’，37(October 2016)，pp.81-84.doi：10.1111/liv.13299.
Cave，M.C.等人(2016)‘Biochimica et Biophysica Acta Nuclear receptorsand nonalcoholic fatty liver disease 1’，BBA-Gene RegulatoryMechanisms.Elsevier B.V.，1859(9)，pp.1083-1099.doi：10.1016/j.bbagrm.2016.03.002.
Using Combinatorial Peptide Libraries：Discovery of PeptideAntagonists of Estrogen Receptorsαand β.Molecular and Cellular Biology，19(12)，8226-8239.https：//doi.org/10.1128/mcb.19.12.8226
Chiang，J.Y.L.(2013)‘Bile Acid Metabolism and Signalling’，
Comprehensive Physiology，3(3)，pp.1191-1212.doi：10.1002/cphy.c120023.Bile.
Cipriani，S.等人(2010)‘FXR activation reverses insulin resistance andlipid abnormalities an d protects against liver steatosis in Zucker(fa/fa)obese rats’，Journal of Lipid Research，51，pp.771-784.doi：10.1194/jlr.M001602.
Clerici等人Toxicology and Applied Pharmacology，214，199-208(2006)Copple，B.L.and Li，T.(2016)‘Pharmacology of bile acid receptors：
Evolution of bile acidsfrom simple detergents to complex signalingmolecules’，PharmacologicaI Research.Elsevier Ltd，104，pp.9-21.doi：10.1016/j.phrs.2015.12.007.
Cushman等人J.Med.Chem.(1995)，Cosalane analogs with enhanced potenciesas inhibitors of HIV-1protease and integrase′，38(3)，443-452Cusi，Gastroenterology(2012)，′Role of obesity and lipotoxicity in the developmentof nonalcoholic steatohepatitis：pathophysiology and clinical implications′，142(4)，711-725
Deuschle，U.等人(2012)‘FXR Controls the Tumor Suppressor NDRG2 and FXRAgonists Reduce Liver Tumor Growth and Metastasis in an Orthotopic MouseXenograft Model’，PLoS ONE，7(10).doi：10.1371/journal.pone.0043044.
Dyson，J.K.，Anstee，Q.M.和McPherson，S.(2014)‘Non-alcoholic fatty liverdisease：a practical approach to diagnosis and staging.’，Frontlinegastroenterology，5(3)，pp.211-218.doi：10.1136/flgastro-2013-100403.
Evans，R.M.and Mangelsdorf，D.J.(2014)‘Nuclear Receptors，RXR and theBig Bang’，Cell，157(1)，pp.255-266.doi：10.1016/j.cell.2014.03.012.Nuclear.
Goodwin，B.，Jones，S.A.，Price，R.R.，Watson，M.A.，McKee，D.D.，Moore，L.B.，…KIiewer，S.A.(2000).A regulatory cascade of the nuclear receptors FXR，SHP-1，and LRH-1represses bile acid biosynthesis.Molecular Cell，6(3)，517-526.
https：//doi.org/10.1016/S1097-2765(00)00051-4.
Haas，J.T.，Francque，S.and Staels，B.(2016)‘Pathophysiology andMechanisms of Nonalcoholic Fatty Liver Disease’，Annual Review 0f Physiology，78，pp.181-205.doi：10.1146/annurev-physiol-021115-105331.
Henao-mejia，J.等人(2012)‘Inflammasome-mediated dysbiosis regulatesprogression of NAFLD and obesity.’，Nature，482(7384)，pp.179-185.doi：10.1038/nature10809.Inflammasome-mediated.
Honorio等人′Hologram QSAR Studies on Farnesoid X ReceptorActivators′，Letters in Drug Design&Discovery，(2006)，3(4)，261-271Huber，R.等人(2002)‘Generation of multiple farnesoid-X-receptor isoforms through the useof alternative promoters’，Gene，290(1-2)，pp.35-43.
Inagaki，T.等人(2006)‘Regulation of antibacterial defense in thesmallintestine by the nuclear bile acid receptor’，Proc Natl Acad Sci U S A，103(10)，pp.3920-3925.doi：10.1073/pnas.0509592103.
Jiang，Y.等人(2013)‘Farnesoid X reeeptor inhibits gankyrin in mouselivers and prevents development of liver cancer.’，Hepatology(Baltimore，Md.)，57(3)，pp.1098-106.doi：10.1002/hep.26146.
Kast，H.R.等人(2001)‘Farnesoid X-activated receptor inducesapolipoprotein C-II transcription：a molecular mechanism linking plasmatriglyceride levels to bile acids.’，Molecular endocrinology(Baltimore，Md.)，15(10)，pp.1720-1728.doi：10.1210/me.15.10.1720.
Kong，B.等人(2009)‘Farnesoid X Receptor Deficiency InducesNonalcoholic Steatohepatitis in Low-Density Lipoprotein Receptor-KnockoutMice Fed a High-Fat Diet’，Journal of Pharmacology and ExperimentalTherapeutics，328(1)，pp.116-122.doi：10.1124/jpet.108.144600.
Landrier，J-F等人(2006)′The nuclear receptor for bile acids，FXR，transactivates human organic solute transporter-α and-β genes′，Am.J.Physiol-Gastrointest.Liver Physiol.，290，pp G476-G485.
Ma，K.等人(2006)‘Farnesoid X receptor is essential for normal glueosehomeostasis’，Journal of Clinical Investigation，116(4)，p.1102.doi：10.1172/JCI25604.1102.
Ma，Y.等人(2013)‘Synthetic FXR Agonist GW4064 Prevents Diet-InducedHepatic Steatosis and Insulin Resistance’，Pharmaceutical Research，30，pp.1447-1457.doi：10.1007/s11095-013-0986-7.
Macchiarulo等人Journal of Chemical Information and Modeling，48，1792-1801(2008)
Maloney，P.R.等人(2000)‘Identification of a chemical tool for theorphan nuclear receptor FXR’，Journal of Medicinal Chemistry，43(16)，pp.2971-2974.doi：10.1021/jm0002127.
Min，H.等人(2013)‘Increased hepatic synthesis and dysregulation ofcholesterol metabolism is assoeiated with the severity of nonalcoholic fattyliver disease’，Cell Metabolism，15(5)，pp.665-674.doi：10.1016/j.cmet.2012.04.004.
Mouzaki，M.等人(2013)‘Intestinal Microbiota in Patients WithNonalcoholic Fatty Liver Disease’，Hepatology，1，pp.120-127.doi：10.1002/hep.26319.
Mudaliar，S.等人(2013)‘Efficacy and Safety of the Farnesoid X ReceptorAgonist Obeticholic Acid in Patients With Type 2Diabetes and NonalcoholicFatty LiverDisease’，Gastroenterology.Elsevier，Inc，145(3)，p.574-582.e1.doi：10.1053/j.gastro.2013.05.042.
Neuschwander-Tetri，B.A.(2012)‘Farnesoid X receptor agonists：What theyare and how they might be used in treating liver disease’，CurrentGastroenterology Reports，14(1)，pp.55-62.doi：10.1007/s11894-011-0232-6.
Neuschwander-Tetri，B.A.等人(2015)‘Farnesoid X nuclear receptor ligandobeticholic acid for non-cirrhotic，nonn-alcoholic steatohepatitis (FLINT)：amulticentre，randomised，placebo-controlled trial Prof.’，Lancet，385(9972)，pp.956-965.doi：10.1016/S0140-6736(14)61933-4.Farnesoid.
Pacana，T.和Sanyal，A.J.(2015)‘Recent advances in understanding/management of non-alcoholic steatohepatitis’，F1000 Prime Reports，7(28)，pp.1-8.doi：10.12703/P7-28.
Paulekuhn等人(2007)′Trends in Active Pharmaceutical Ingredient SaltSelection based on Analysis of the Orange Book Database′，J.Med.Chem.50，6665-6672
Pfafffl，M.W.(2001).A new mathematical model for relativequantification in real-time RT-PCR.Nucleic Acids Research，29(9)，16-21.
Roda等人Gastroenterology(1995)′Metabolism，pharmacokinetics，andactivity of a new 6-fluoro analogue of ursodeoxycholic acid in rats andhamsters′，108(4)，1204-1214.
Sato等人′Novel Potent and Selective Bile Acid Derivatives asTGR5Agonists：Biological Screening，Structure-Activity Relationships，andMolecular Modeling Studies′，J.Med.Chem.(2008)，51(15)，4831-4849.
Sievanen E.等人′1H，13C，19F NMR，and ESI mass spectral characterizationof two geminal difluorosteroids′，Magnetic Resonance in Chemistry，(2008)，46(4)，392-397.
Uekawa等人(2004)′Short-step Synthesis of Chenodiol fromStigmasteFol′，Biosci.Biotechnol.Biochem.，68，1332-1337
Vaquero，J.等人(2013)‘Differential activation of the human farnesoid Xreceptor depends on the pattern of expressed isoforms and the bile acid poolcomposition’，Biochemical Pharmacology，86(7)，pp.926-939.doi：10.1016/j.bcp.2013.07.022.
Wang，Y.等人(2008)‘Farnesoid X receptor antagonizes NF-kB in hepaticinflammatory response’，Hepatology，48(5)，pp.1632-1643.doi：10.1002/hep.22519.Farnesoid.
Watanabe，M.，Houten，S.M.，Wang，L.，Moschetta，A.，Mangelsdorf，D.J.，Heyman，R.A.，...Auwerx，J.(2004).Bile acids lower triglyceride levels via a pathwayinvolving FXR，SHP，and SREBP-1c.Journnal of Clinical Investigation，113(10)，1408-1418.https：//doi.org/10.1172/JCI200421025Watanabe，M.等人(2011)‘Loweringbile acid pool size with a synthetic farnesoid X receptor(FXR)agonist inducesobesity and diabetes through reduced energy expenditure’，Journal ofBiological Chemistry，286(30)，pp.26913-26920.doi：10.1074/jbc.M111.248203.
Wuts，PGM和Greene，TW(2006)“Greene’s Protective Groups in OrganicSynthesis”，第4版，John Wiley&Sons，Inc.，Hoboken，NJ，USA，Xiao，H.等人(2017)′Synthesis and biological evaluation of a series of bile acid derivatives asFXR agonists for treatment of NASH′，Med.Chem.Lett.8，1246-1251.
Yang，Z.，Shen，W.和Sun，H.(2010)‘Effects of nuclear receptor FXR on theregulation of liver lipid metabolism in patients with non-alcoholic fattyliver disease’，Hepatology International，4(4)，pp.741-748.doi：10.1007/s12072-010-9202-6.
Zhang，Y.等人(2004)‘Peroxisome proliferator-activated regulatestriglyceride metabolism by activation of the nuclear receptor FXR’，Genes&Development，18，pp.157-169.doi：10.1101/gad.1138104.
Zhang，Y.等人(2006)‘Activation of the nuclear receptor FXR improveshyperglycemia and hyperlipidemia in diabetic mice.’，Proceedings of theNational Academy of Sciences of the United States of America，103(4)，pp.1006-1011.doi：10.1073/pnas.0506982103.
Zhang，Y.，Kast-woelbern，H.R.和Edwards，P.A.(2003)‘Natural StructuralVariants of the Nuclear Receptor Farnesoid X Receptor Affect TranscriptionalActivation’，Journal of Biological Chemistry，278(1)，pp.104-110.doi：10.1074/jbc.M209505200.

Claims (18)

1.通式(I)的化合物：
其中
R3b为F且R2a、R2b和R3a各自独立地为H或F；
R5为CR6aR6bR8、OR8、SR8或NR6aR8；
R6a、R6b和R8各自独立地为H或甲基；
Y为价键或C1-4亚烷基或C2-4亚烯基连接基，其中之一任选地被一个或多个R10取代；
其中R10各自独立地为卤素或OH；
R7选自C(O)NR17S(O)2R15、NR17C(O)NR18S(O)2R15、NR17C(S)NR18S(O)2R15和NR17C(NR20)NR18S(O)2R15；
R15为5至10元芳基或杂芳基环，其任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自C1-6烷基、C1-6卤代烷基、卤素、O(C1-6烷基)和O(C1-6卤代烷基)；
R17和R18各自独立地为H或甲基；
R20为H、甲基或CN；
或其盐。
2.根据权利要求1的化合物，其中R3b为F，且R3a、R2a和R2b的每一个为H。
3.根据权利要求1的化合物，其中：
R3b为F，R3a为H，R2a和R2b之一为F，且R2a和R2b的另一个为H；或R3a和R3b均为F，且R2a和R2b均为H。
4.根据权利要求1-3任一项的化合物，其中R5为乙基。
5.根据权利要求1-3任一项的化合物，其中Y为价键或C1-3亚烷基连接基，其任选地被一个或多个OH基团取代。
6.根据权利要求1-3任一项的化合物，其中R7为C(O)NR17S(O)2R15或NR17C(O)NR18S(O)2R15，其中R15、R17和R18如权利要求1所定义。
7.根据权利要求6的化合物，其中独立地或以任意组合的方式：
R17和R18的每一个为H；和/或
R15选自苯基和5或6元杂芳基，它们任意地可以未被取代或被一个或多个如权利要求1中所定义的取代基取代。
8.根据权利要求7的化合物，其中R15为苯基，其未被取代或被单一取代基取代，所述取代基选自氟、C1-4烷基、C1-4氟烷基、O(C1-4烷基)和O(C1-4氟烷基)。
9.根据权利要求1的化合物，其选自：
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-甲苯磺酰脲(化合物1)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲(化合物2)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-4-(叔丁基)苯磺酰脲(化合物3)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-间-甲苯磺酰脲(化合物4)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-邻-甲苯磺酰脲(化合物5)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-氟苯磺酰脲(化合物6)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-间-氟苯磺酰脲(化合物7)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-邻-氟苯磺酰脲(化合物8)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-(三氟甲基)苯磺酰脲(化合物9)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-间-(三氟甲基)苯磺酰脲(化合物10)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-邻-(三氟甲基)苯磺酰脲(化合物11)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-4-(三氟甲氧基)苯磺酰脲(化合物12)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-对-甲氧基苯磺酰脲(化合物13)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-基)-对-三氟甲氧基苯磺酰胺(化合物14)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-对-氟苯磺酰胺(化合物15)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-间-氟苯基磺酰胺(化合物16)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-邻-氟苯基磺酰胺(化合物17)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-4-三氟甲基苯基磺酰胺(化合物18)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-3-三氟甲基苯基磺酰胺(化合物19)；
N-(3α，7α-二羟基-4β-氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-2-三氟甲基苯基磺酰胺(化合物20)；
N，N’-(3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-24-降-5β-胆烷-23-基)-苯磺酰脲(化合物21)
N-(3α，7α-二羟基-4，4-二氟-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基)-苯磺酰胺(化合物22)；
及其盐。
10.根据权利要求1-3的化合物在制备用于治疗或预防非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；原发性胆汁性肝硬化；原发性硬化性胆管炎；胆道闭锁；胆汁郁积性肝病；丙型肝炎感染；酒精性肝病；纤维化；或因纤维化导致的肝损伤的药物中的用途。
11.根据权利要求10的用途，其中纤维化选自肝、肾和肠的纤维化。
12.根据权利要求11的用途，其中肝纤维化与NASH、酒精性肝病或非酒精性脂肪肝病相关，或与感染或寄生虫性肝疾病相关，或是由先天性疾病诱导的损伤导致，或由药物诱发；和/或
与糖尿病肾病、高血压肾硬化、肾小球肾炎、间质性肾炎、与移植相关的肾小球病和多囊肾疾病相关的肾纤维化；和/或
与肠病相关的肠纤维化。
13.根据权利要求12的用途，其中所述的肝纤维化与肝炎相关，或由选自Wilson病、戈谢病、糖原贮积障碍、血色素沉着、Zellweger综合征和先天性肝纤维化的先天性疾病诱导的损伤导致，或通过选自氯丙嗪、甲苯磺丁脲、甲氨蝶呤、异烟肼和甲基多巴的药物诱导。
14.根据权利要求13的用途，其中所述的肝纤维化与乙型肝炎或丙型肝炎相关。
15.药物组合物，其包含根据权利要求1-3任一项的化合物和药学上可接受的赋形剂或载体。
16.根据权利要求15的药物组合物，其还包含一种或多种另外的活性剂，活性剂适合于治疗或预防代谢综合征：非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；原发性胆汁性肝硬化；原发性硬化性胆管炎；胆道闭锁；胆汁郁积性肝病；丙型肝炎感染；酒精性肝病；纤维化；或因纤维化导致的肝损伤。
17.用于制备根据权利要求1-3任一项的化合物的方法，该方法包含：
A.对于通式(I)的化合物，其中R7为NHC(O)N(R18)S(O)2R15：
使通式(III)的化合物：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如权利要求1中所定义，且R40为被保护的OH基团；
在催化剂存在下与通式(IV)的磺酰胺反应：
其中R15和R18如权利要求1中所定义；
以形成通式(II)的化合物：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如权利要求1中所定义，且R40为被保护的OH基团；并且
使通式(II)的化合物脱保护；或
B.对于通式(I)的化合物，其中R7为NHC(O)N(R18)S(O)2R15：
使通式(XIII)的化合物：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如权利要求1中所定义，且R45和R46各自独立地为被保护的OH基团；
与如上述所定义的通式(IV)的磺酰胺在催化剂存在下反应，以形成通式(XII)的化合物：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如权利要求1中所定义，且R45和R46各自独立地为被保护的OH基团；并且
使通式(XII)的化合物脱保护；或
C.对于通式(I)的化合物，其中R7为C(O)N(R17)S(O)2R15：
使通式(XXIII)的化合物：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b和R5如权利要求1中所定义，且R46为被保护的OH基团；
与通式(XXIV)的磺酰胺
其中R15和R17如权利要求1中所定义；
在偶联剂和碱存在下反应：
以得到通式(XXII)的化合物：
其中Y、R2a、R2b、R3a、R3b、R5、R15和R17如权利要求1中所定义，且R46如对通式(XII)的化合物所定义；并且
使通式(XXII)的化合物脱保护。
18.根据权利要求17的方法，其中在步骤A和B中所述的催化剂为1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)，在步骤C中所述的偶联剂为1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)，在步骤C中所述的碱为二甲基氨基吡啶。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201820887D0 (en) 2018-12-20 2019-02-06 Nzp Uk Ltd Compounds
CN115819491A (zh) * 2022-12-22 2023-03-21 江苏佳尔科药业集团股份有限公司 7-酮基石胆酸及熊去氧胆酸的合成方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016073767A1 (en) * 2014-11-06 2016-05-12 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bile acid analogs an fxr/tgr5 agonists and methods of use thereof
WO2016173493A1 (en) * 2015-04-28 2016-11-03 Shanghai De Novo Pharmatech Co. Ltd. Sulfonylaminocarbonyl derivative, pharmaceutical composition and uses thereof
CN106518946A (zh) * 2015-09-10 2017-03-22 上海迪诺医药科技有限公司 磺酰脲衍生物、其药物组合物及应用
EP3290429A1 (en) * 2015-04-28 2018-03-07 Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co., Ltd. Cholic acid derivative, and preparation method and medical use thereof

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5175320A (en) 1989-04-17 1992-12-29 Giuliani S.P.A. Fluorinated bile acid derivatives, processes for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them
JP2000510858A (ja) 1996-05-23 2000-08-22 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト ６―フルオロウルソデオキシコール酸（６―ｆｕｄｃａ）による結腸直腸癌の予防および治療
IL157816A0 (en) 2001-03-12 2004-03-28 Roberto Pellicciari Steroids as agonists for fxr
CA2466033A1 (en) 2001-11-08 2003-05-15 The University Of Chicago Method of treating disorder related to high cholesterol concentration
EP1568706A1 (en) 2004-02-26 2005-08-31 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Novel steroid agonist for FXR
EP2712617B2 (en) 2004-03-12 2020-11-18 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Treatment of fibrosis using Fxr ligands
US7276585B2 (en) 2004-03-24 2007-10-02 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the Fc region
ITMI20050912A1 (it) 2005-05-19 2006-11-20 Erregierre Spa Processo di preparazione di acidi 3-a-ya(b)-diidrossi-6-a(b)-alchil-5b-colanici
EP1987051A2 (en) 2006-02-14 2008-11-05 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Bile acid derivatives as fxr ligands for the prevention or treatment of fxr-mediated diseases or conditions
ES2523591T3 (es) 2006-06-27 2014-11-27 Intercept Pharmaceuticals Inc. Derivados de ácidos biliares como ligandos de FXR para la prevención o el tratamiento de enfermedades o estados mediados por FXR
CA2928178C (en) 2007-01-19 2019-09-10 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Tgr5 modulators and methods of use thereof
US8796249B2 (en) 2008-07-30 2014-08-05 Intercept Pharmaceuticals, Inc. TGR5 modulators and methods of use thereof
EP3150620B1 (en) 2008-11-19 2020-01-08 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Tgr5 modulators and methods of use thereof
PT2698375T (pt) 2008-11-19 2018-05-25 Intercept Pharmaceuticals Inc Moduladores de tgr5 e método de utilização dos mesmos
SI3336097T1 (sl) 2012-06-19 2021-07-30 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Priprava nekristalinične oblike obetiholne kisline
ES2655034T3 (es) 2012-10-26 2018-02-16 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Proceso para preparar derivados del ácido biliar
US20140206657A1 (en) 2013-01-18 2014-07-24 City Of Hope Bile acid analog tgr5 agonists
AU2014243819A1 (en) 2013-03-13 2015-10-01 Sage Therapeutics, Inc. Neuroactive steroids, compositions, and uses thereof
PL2997035T3 (pl) 2013-05-14 2018-10-31 Intercept Pharmaceuticals, Inc. 11-hydroksy-6-podstawione pochodne kwasów żółciowych i ich koniugaty aminokwasowe jako modulatory receptorów farnezoidu x
WO2015085474A1 (zh) 2013-12-10 2015-06-18 华为终端有限公司 一种注册方法和相关节点以及注册系统
ES2733643T3 (es) 2014-11-19 2019-12-02 Nzp Uk Ltd Esteroides 5.beta.-6-alquil-7-hidroxi-3-ona como intermedios para la producción de moduladores FXR de esteroides
EA033603B1 (ru) 2014-11-19 2019-11-08 Nzp Uk Ltd 6-альфа-алкил-6,7-дионовые стероиды в качестве промежуточных соединений для получения стероидных модуляторов fxr
US10538550B2 (en) 2014-11-19 2020-01-21 NZP UK Limited 6.alpha.-alkyl-3,7-dione steroids as intermediates for the production of steroidal FXR modulators
US10208081B2 (en) 2014-11-26 2019-02-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bile acid derivatives as FXR/TGR5 agonists and methods of use thereof
WO2016086115A1 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Tetrazole derivatives of bile acids as fxr/tgr5 agonists and methods of use thereof
US10519191B2 (en) * 2014-11-26 2019-12-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bile acid analogs as FXR/TGR5 agonists and methods of use thereof
WO2016086134A1 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bile acid derivatives as fxr/tgr5 agonists and methods of use thereof
CN105348365A (zh) 2014-12-03 2016-02-24 四川百利药业有限责任公司 一种胆酸衍生物及其制备方法、药物组合物和用途
US11311557B2 (en) 2015-02-06 2022-04-26 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions for combination therapy
MX2017010376A (es) 2015-02-11 2017-12-20 Enanta Pharm Inc Análogos de ácido biliar como agonistas de fxr/tgr5 y métodos para el uso de los mismos.
MX2017011399A (es) 2015-03-09 2018-03-16 Intercept Pharmaceuticals Inc Métodos para modular la densidad ósea.
CN107531741A (zh) 2015-03-10 2018-01-02 美莱斯股份有限公司 氟化和烷基化胆酸
US20160279393A1 (en) 2015-03-25 2016-09-29 Covidien Lp Guidewire retrieval catheter
SG11201707263XA (en) 2015-03-31 2017-10-30 Enanta Pharm Inc Bile acid derivatives as fxr/tgr5 agonists and methods of use thereof
KR20170132879A (ko) 2015-04-07 2017-12-04 인터셉트 파마슈티컬즈, 인크. 조합 요법을 위한 약제학적 조성물
PE20180690A1 (es) 2015-04-27 2018-04-23 Intercept Pharmaceuticals Inc Composiciones de acido obeticolico y metodos de uso
CN107531743B (zh) 2015-04-29 2020-05-05 正大天晴药业集团股份有限公司 鹅去氧胆酸衍生物
CN106210599B (zh) 2015-04-30 2021-02-12 中兴通讯股份有限公司 一种多画面调整方法、装置及多点控制单元
JP6861703B2 (ja) 2015-06-19 2021-04-21 インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｔｇｒ５修飾物質およびその使用方法
CA2993540A1 (en) 2015-07-30 2017-02-02 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Methods for preparation of bile acids and derivatives thereof
WO2017027396A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Methods for preparation of bile acids and derivatives thereof
JP6824966B2 (ja) 2015-09-21 2021-02-03 インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 肝臓の再生を促進する方法
MX2018003649A (es) 2015-09-24 2018-05-11 Intercept Pharmaceuticals Inc Metodos e intermedios para la preparacion de derivados de acido biliar.
CR20180201A (es) 2015-10-07 2018-08-24 Intercept Pharmaceuticals Inc Modularores del receptor x farnesoide
WO2017079062A1 (en) 2015-11-06 2017-05-11 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Methods for the preparation of obeticholic acid and derivatives thereof
MX2018007776A (es) 2015-12-22 2018-08-09 Intercept Pharmaceuticals Inc Formas polimorficas cristalinas del acido obeticolico.
CN105646634A (zh) 2016-01-29 2016-06-08 中国药科大学 奥贝胆酸杂质的制备方法
US10323061B2 (en) 2016-02-23 2019-06-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Heteroaryl containing bile acid analogs as FXR/TGR5 agonists and methods of use thereof
WO2017147159A1 (en) 2016-02-23 2017-08-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Deuterated bile acid derivatives as fxr/tgr5 agonists and methods of use thereof
US10323060B2 (en) 2016-02-23 2019-06-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Benzoic acid derivatives of bile acid as FXR/TGR5 agonists and methods of use thereof
CN108883305B (zh) 2016-03-11 2021-03-16 英特塞普特医药品公司 3-脱氧衍生物及其药物组合物
GB201608777D0 (en) 2016-05-18 2016-06-29 Dextra Lab Ltd Compounds
GB201608779D0 (en) 2016-05-18 2016-06-29 Dextra Lab Ltd Methods and compounds
GB201608776D0 (en) 2016-05-18 2016-06-29 Dextra Lab Ltd Methods and compounds

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016073767A1 (en) * 2014-11-06 2016-05-12 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bile acid analogs an fxr/tgr5 agonists and methods of use thereof
WO2016173493A1 (en) * 2015-04-28 2016-11-03 Shanghai De Novo Pharmatech Co. Ltd. Sulfonylaminocarbonyl derivative, pharmaceutical composition and uses thereof
EP3290429A1 (en) * 2015-04-28 2018-03-07 Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co., Ltd. Cholic acid derivative, and preparation method and medical use thereof
CN106518946A (zh) * 2015-09-10 2017-03-22 上海迪诺医药科技有限公司 磺酰脲衍生物、其药物组合物及应用

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