CN112763722A - 一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物分析领域中的一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，所述方法包括如下步骤：称取样品置于玻璃瓶中，取对照滤纸片、蛋白滤纸片各3至6张，标记后置于上述玻璃瓶中，再加稀盐酸溶液，使所述玻璃瓶做圆周转动，判定亲和力情况，该方法具有检测结果直观准确、检测速度快、检测所需的原材料易得、成本低等特点。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法。
技术背景
硫糖铝(Sucralfate)，无味，有引湿性。本品是有效的抗消化性溃疡药，具有保护溃疡面，促进溃疡愈合的作用。其作用机制是在酸性环境下，本品解离出硫酸蔗糖复合离子，复合离子聚合成不溶性的带负电荷的胶体，能与溃疡面带正电荷的蛋白质渗出物相结合，形成一层保护膜覆盖于溃疡面，促进溃疡愈合。还具有吸附胃蛋白酶和胆汁酸的作用；促进内源性前列腺素的合成以及吸附表皮生长因子(EGF)，使之在溃疡处浓集利于粘膜再生。
硫糖铝分子结构复杂，没有一个固定的分子式。其蛋白亲和力是硫糖铝的关键药理因素，决定了本品的药效。但目前缺少对硫糖铝与蛋白亲和力大小的有效检测手段。因此，研制开发一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法是目前亟待解决的新课题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其具有检测结果直观准确、检测速度快、检测所需的原材料易得、成本低等特点。
本发明的目的是这样实现的：一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)试剂与材料
硫糖铝样品、稀盐酸溶液、蛋白标准液、滤纸片；
所述蛋白标准液为经搅拌至无粘性的蛋清；
(2)蛋白滤纸片的制备
将所述滤纸片浸渍在蛋白标准液中，取出，干燥，作为蛋白滤纸片；
(3)对照滤纸片
将所述滤纸片作为对照滤纸片；
(4)操作方法
称取所述硫糖铝样品置于玻璃瓶中，取对照滤纸片、蛋白滤纸片各3至6张，标记后置于上述玻璃瓶中，再加所述稀盐酸溶液，使所述玻璃瓶做圆周转动，判定亲和力情况；
所述稀盐酸溶液的浓度为0.05-0.13mol/L，所述蛋清选自禽类的蛋清，所述禽类的蛋清选自鸡蛋清、鸭蛋清、鹅蛋清、鹌鹑蛋清中的一种或几种；所述蛋白滤纸片密封于棕色瓶中，置暗处储存备用；所述滤纸为定量滤纸，所述滤纸的形状为圆形，所述滤纸的直径为2-20mm；所述滤纸的直径为5mm；在步骤(2)中，所述浸渍的时间为1-5小时；所述干燥的温度为15-35℃，所述干燥的时间为12-96小时；在步骤(4)中，所述稀盐酸溶液的用量为2-20ml；在步骤(2)中，所述干燥的时间为18-96小时；在步骤(4)中，所述稀盐酸溶液的用量为4-10ml；所述硫糖铝样品的用量为0.01-2g；所述玻璃瓶为平底带盖的玻璃瓶，所述玻璃瓶的容积为10-500ml；所述标记为在所述对照滤纸片上做标记；所述硫糖铝样品的用量为0.1-1g；所述玻璃瓶的容积为10-100ml；所述使所述玻璃瓶做圆周转动为始终沿顺时针方向或始终沿逆时针方向转动，所述圆周转动的直径为5-30cm，所述圆周转动的时间为3-8min，所述圆周转动的转速为每分钟10-60转；所述判定亲和力合格的标准为所有蛋白滤纸片均与硫糖铝团聚物亲合在一起，沉在了玻璃瓶底部，所有对照滤纸片均不与硫糖铝亲合，且均在所述稀盐酸溶液中自由快速浮动；所述判定亲和力不合格的标准为其中一个或一个以上的蛋白滤纸片不与硫糖铝团聚物亲合在一起，所有对照滤纸片均不与硫糖铝亲合，且上述不与硫糖铝团聚物亲和的蛋白滤纸片和对照滤纸片均在所述稀盐酸溶液中自由快速浮动；所述圆周转动的直径为10-30cm，所述圆周转动的转速为每分钟20-40转。
本发明的要点在于检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其检测原理是：(1)溶液中的待测样品在转动中粘合形成团聚物，在团聚物周围解离出硫酸蔗糖复合离子，复合离子聚合成不溶性的带负电荷的胶体，能与蛋白滤纸片上的蛋白相亲和，蛋白滤纸片会吸附在团聚物表面。滤纸片为直径3-7mm圆形定量滤纸片，圆形可以尽量减少滤纸边缘的周长面积比，减少滤纸片被酸液腐蚀速度。(2)滤纸片尺寸不应过大或过小，过小的滤纸片无法呈现良好的试验现象，过大的滤纸片会在转动中发生弯折。滤纸片应为定量滤纸，该种滤纸杂质含量较低，可以避免杂质对试验产生的干扰。(3)玻璃瓶为15ml-50ml平底带盖的玻璃瓶，玻璃瓶可以耐酸腐蚀，平底可以保证玻璃瓶可以稳定放置和转动，带盖可以保证转动过程中，内容物不会溢出，过小的玻璃瓶会导致转动时，内容液体无法充分搅动，过大的玻璃瓶会导致液体液面过低无法实现转动。(4)经试验，滤纸片浸渍在经处理的蛋白标准液中至少1小时方能保证滤纸片被充分浸润，一般浸渍2小时为宜。(5)经试验，于室温下(15-35℃)自然干燥18小时可以使滤纸片完全干透，密封于棕色瓶中置暗处储存可以防止光照影响，高温或长时间暴露在光照中会导致蛋白质变性影响实验效果。(6)盐酸溶液的浓度为0.05-0.13mol/L，盐酸溶液浓度应与人体中胃酸浓度相近，建立体外胃环境模型。过低的盐酸浓度将无法使硫糖铝解离出硫酸蔗糖复合离子，过高的盐酸浓度将破坏硫糖铝在蛋白滤纸片上形成的薄膜，使实验失败。经试验，优选的盐酸溶液的浓度为0.1mol/L。(7)加盐酸液量为4-10ml，过少的加液量在转动时无法将滤纸片全部浸入，过多的加液量会导致溶液液面在转动时溢出。(8)经实验，密塞并始终沿顺时针或逆时针方向，使小瓶做圆周转动(圆周转动的直径为15—30cm)。转动3—8分钟，每分钟约20-40转，可使硫糖铝在适宜的酸性条件下(符合胃酸pH值范围)离析出硫酸蔗糖复合离子，且复合离子聚合成不溶性的带负电荷的胶体与蛋白进行充分的“亲和”反应，过短的反应时间蛋白“亲和”反应不显著，过于剧烈或非圆周转动的搅动会使溶液产生扰流导致蛋白滤纸形成的薄膜遭到物理破坏，使实验失败。
本发明所述检测方法为检测硫糖铝蛋白亲和力的独创方法，可以精准地找到对不同生产工艺生产的硫糖铝产品，其理化指标检测数据无显著性差异，但临床疗效迥异的根源，为科学、客观地判定产品质量优劣的一种有效方法。这种方法具有直观准确(检测结果肉眼可见)、检测速度快(材料可预先准备，测试5-10分钟即可检出结果)、检测成本低(试剂材料价格较低，无需复杂检测设备)等特点。
具体实施方式
下述实例将有助于对本发明的了解，但这些实施例仅为了对本发明加以说明，本发明并不限于这些内容。
实施例一
(1)试剂与材料
硫糖铝样品(东北制药集团股份有限公司生产)，0.1mol/L盐酸溶液、蛋白标准液(经搅拌至无粘性的鸡蛋清)、直径5mm圆形滤纸片(定量滤纸，沈阳市民政滤纸厂生产)；
(2)蛋白滤纸片的制备
将直径5mm圆形滤纸片浸渍在蛋白标准液中2小时，取出，于室温下(15-35℃)自然干燥24小时，密封于棕色瓶中，置暗处储存备用；
(3)对照滤纸片的制备
将直径5mm圆形滤纸片作为对照滤纸片；
(4)操作方法
称取硫糖铝样品0.25g，置于20ml平底带盖的玻璃瓶中，用镊子依序取对照滤纸片、蛋白滤纸片各3张，在对照滤纸片上做标记后，同时置于上述玻璃瓶中。再加0.1mol/L盐酸溶液6ml，盖好瓶盖，并始终沿顺时针方向，使上述玻璃瓶做直径为20cm的圆周转动。转动5分钟，每分钟30转。
试验结果：3个蛋白滤纸片均与硫糖铝团聚物亲合在一起，沉在了玻璃瓶底部；3个对照滤纸片均不与硫糖铝亲合，且均在0.1mol/L盐酸溶液中自由快速浮动。结果表明，本实施例中，硫糖铝样品的蛋白亲和力符合规定。
实施例二
(1)试剂与材料
硫糖铝样品(国外某厂家生产的硫糖铝产品)，0.1mol/L盐酸溶液、蛋白标准液(经搅拌至无粘性的鸡蛋清)、直径5mm圆形滤纸片(定量滤纸，沈阳市民政滤纸厂生产)；
(2)蛋白滤纸片的制备
将直径5mm圆形滤纸片浸渍在蛋白标准液中2小时，取出，于室温下(15-35℃)自然干燥24小时，密封于棕色瓶中，置暗处储存备用；
(3)对照滤纸片的制备
将直径5mm圆形滤纸片作为对照滤纸片；
(4)操作方法
称取硫糖铝样品0.25g，置于20ml平底带盖的玻璃瓶中，用镊子依序取对照滤纸片、蛋白滤纸片各3张，在对照滤纸片上做标记后，同时置于上述玻璃瓶中。再加0.1mol/L盐酸溶液6ml，盖好瓶盖，并始终沿顺时针方向，使上述玻璃瓶做直径为20cm的圆周转动。转动5分钟，每分钟30转。
试验结果：3个蛋白滤纸片均不与硫糖铝团聚物亲合在一起，3个对照滤纸片均不与硫糖铝亲合，且上述蛋白滤纸片和对照滤纸片均在0.1mol/L盐酸溶液中自由快速浮动。结果表明，本实施例中，硫糖铝样品的蛋白亲和力不符合规定。
实施例三
(1)试剂与材料
硫糖铝样品(东北制药集团股份有限公司生产)，0.1mol/L盐酸溶液、蛋白标准液(经搅拌至无粘性的鸡蛋清)、直径5mm圆形滤纸片(定量滤纸，沈阳市民政滤纸厂生产)；
(2)蛋白滤纸片的制备
将直径5mm圆形滤纸片浸渍在蛋白标准液中2小时，取出，于室温下(15-35℃)自然干燥24小时，密封于棕色瓶中，置暗处储存备用；
(3)对照滤纸片的制备
将直径5mm圆形滤纸片作为对照滤纸片；
(4)操作方法
称取硫糖铝样品0.25g，置于20ml平底带盖的玻璃瓶中，用镊子依序取对照滤纸片、蛋白滤纸片各3张，在对照滤纸片上做标记后，同时置于上述玻璃瓶中。再加0.1mol/L盐酸溶液6ml，盖好瓶盖，并始终沿顺时针方向，使上述玻璃瓶做直径为20cm的圆周转动。转动时间及亲和现象见表1，每分钟30转。
试验结果：
表1：不同转动时间的亲和现象
结果表明：摇晃约2分钟后。滤纸片陆续开始发生亲和，在摇晃约17分钟后，滤纸片陆续开始脱落，可能原因为硫糖铝在较短的摇晃时间内无法解离出足够的硫酸蔗糖复合离子，而在较长时间的摇晃后，盐酸溶液会使已经形成的薄膜分解，蛋白滤纸片发生脱落。
实施例四
(1)试剂与材料
硫糖铝样品(东北制药集团股份有限公司生产)，盐酸溶液(浓度见表2)、蛋白标准液(经搅拌至无粘性的鸡蛋清)、直径5mm圆形滤纸片(定量滤纸，沈阳市民政滤纸厂生产)；
(2)蛋白滤纸片的制备
将直径5mm圆形滤纸片浸渍在蛋白标准液中2小时，取出，于室温下(15-35℃)自然干燥24小时，密封于棕色瓶中，置暗处储存备用；
(3)对照滤纸片的制备
将直径5mm圆形滤纸片作为对照滤纸片；
(4)操作方法
称取硫糖铝样品0.25g，置于20ml平底带盖的玻璃瓶中，用镊子依序取对照滤纸片、蛋白滤纸片各3张，在对照滤纸片上做标记后，同时置于上述玻璃瓶中。再加盐酸溶液(浓度见表2)6ml，盖好瓶盖，并始终沿顺时针方向，使上述玻璃瓶做直径为20cm的圆周转动。转动5分钟(特殊转动时间见表2)，亲和现象见表2，每分钟30转。
试验结果：
表2：不同盐酸浓度对测试结果的影响
结论：盐酸浓度小于0.03mol/L或大于0.15mol/L时，蛋白滤纸片难以亲和，可能原因为较低的盐酸浓度使硫糖铝解离出硫酸蔗糖复合离子较少，亲和力较差；较高的盐酸浓度长时间作用在蛋白滤纸片上，使已经形成的薄膜分解，蛋白滤纸片脱落。
Claims (10)
1.一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)试剂与材料
硫糖铝样品、稀盐酸溶液、蛋白标准液、滤纸片；
所述蛋白标准液为经搅拌至无粘性的蛋清；
(2)蛋白滤纸片的制备
将所述滤纸片浸渍在蛋白标准液中，取出，干燥，作为蛋白滤纸片；
(3)对照滤纸片
将所述滤纸片作为对照滤纸片；
(4)操作方法
称取所述硫糖铝样品置于玻璃瓶中，取对照滤纸片、蛋白滤纸片各3至6张，标记后置于上述玻璃瓶中，再加所述稀盐酸溶液，使所述玻璃瓶做圆周转动，判定亲和力情况。
2.根据权利要求1所述的一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其特征在于：所述稀盐酸溶液的浓度为0.05-0.13mol/L，所述蛋清选自禽类的蛋清，所述禽类的蛋清选自鸡蛋清、鸭蛋清、鹅蛋清、鹌鹑蛋清中的一种或几种；所述蛋白滤纸片密封于棕色瓶中，置暗处储存备用。
3.根据权利要求1所述的一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其特征在于：所述滤纸为定量滤纸，所述滤纸的形状为圆形，所述滤纸的直径为2-20mm。
4.根据权利要求3所述的一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其特征在于：所述滤纸的直径为5mm。
5.根据权利要求1所述的一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述浸渍的时间为1-5小时；所述干燥的温度为15-35℃，所述干燥的时间为12-96小时；在步骤(4)中，所述稀盐酸溶液的用量为2-20ml。
6.根据权利要求5所述的一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述干燥的时间为18-96小时；在步骤(4)中，所述稀盐酸溶液的用量为4-10ml。
7.根据权利要求1所述的一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其特征在于：所述硫糖铝样品的用量为0.01-2g；所述玻璃瓶为平底带盖的玻璃瓶，所述玻璃瓶的容积为10-500ml；所述标记为在所述对照滤纸片上做标记。
8.根据权利要求7所述的一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其特征在于：所述硫糖铝样品的用量为0.1-1g；所述玻璃瓶的容积为10-100ml。
9.根据权利要求1所述的一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其特征在于：所述使所述玻璃瓶做圆周转动为始终沿顺时针方向或始终沿逆时针方向转动，所述圆周转动的直径为5-30cm，所述圆周转动的时间为3-8min，所述圆周转动的转速为每分钟10-60转；所述判定亲和力合格的标准为所有蛋白滤纸片均与硫糖铝团聚物亲合在一起，沉在了玻璃瓶底部，所有对照滤纸片均不与硫糖铝亲合，且均在所述稀盐酸溶液中自由快速浮动；所述判定亲和力不合格的标准为其中一个或一个以上的蛋白滤纸片不与硫糖铝团聚物亲合在一起，所有对照滤纸片均不与硫糖铝亲合，且上述不与硫糖铝团聚物亲和的蛋白滤纸片和对照滤纸片均在所述稀盐酸溶液中自由快速浮动。
10.据权利要求9述的一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法，其特征在于：所述圆周转动的直径为10-30cm，所述圆周转动的转速为每分钟20-40转。
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