CN101393205A - 硫酸酯化多糖中硫酸基的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种硫酸酯化多糖中硫酸基含量的测定方法。该法包括将含硫酸基团的糖复合物与氯化氢浓度为0.5～1.8mol/L水溶液在超级微量恒温器上进行水解反应1～12小时。反应完后用慢速定性滤纸过滤，滤液中加入BaCl2溶液和HNO3溶液，温和加热30分钟，取下静置4小时。用慢速定量滤纸过滤，将滤纸及沉淀物转移至恒重的瓷坩埚中，置于电炉上灰化，然后转移到马福炉中于400℃加热1小时，再于650～850℃加热至恒重。根据公式计算SO4 2－的含量。可作为实验室质量控制，仲裁分析，以及含硫酸酯化多糖的食品、保健食品、药品中硫酸基的分析方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基的测定方法，属于化学分析方法领域。
技术背景
含有硫酸集团的糖复合物(glycoconjugates)，如糖蛋白(glycoprotein)、肽聚糖(peptidoglycans)、蛋白聚糖(proteoglycan)以及硫酸酯化多糖(sulfatedpolysaccharides，SPS)是一大类重要的生物活性物质。具有抗凝血、活血化瘀、调节血脂、抗肿瘤、抗病毒、增强细胞免疫和体液免疫功能、抗衰老、对机体细胞的保护等作用。
该类多糖的重要特征就是含有硫酸基，为多糖大分子链中单糖残基的某一羟基被硫酸基所取代。许多生物活性功能除与多糖结构、水溶性、分子量大小等有关外，与硫酸基的含量有着直接的联系。如藻酸硫酸化后具有抗凝血作用，含硫量为5.15％，具有强的类似肝素的阻凝作用；当硫量达17％，呈现显著的抗凝血作用；硫酸盐阴离子对硫酸酯化多糖抑制HIV是必须的离子结构，其抑制作用不仅与浓度呈量效关系，而且与分子中硫酸基含量有关，含量越高，其抗HIV的作用越强，显然硫酸基在抑制HIV的生长过程中起了重要作用。
目前多糖中硫酸基常用的测定方法有灰分法、盐酸水解—硫酸钡法、硫酸钡浊度法、联苯胺法等。在这些方法中前两种属常量分析，后两种为微量分析。如硫酸钡浊度法，称样量为1～3mg，还要经水解等一系列样品处理，其绝对误差和相对误差大在所难免。而灰分法和盐酸水解—硫酸钡重量法报道叙述不具体、不规范，且两种方法测定结果相差甚远。
发明内容
本发明目的在于提供一种可靠的硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基的测定方法，对硫酸酯化多糖及相关食品、功能食品、药品中硫酸基的测定方法进行统一、规范操作程序，使其分析方法具有可比性。
上述目的是这样实现的：硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基含量的测定方法，测定步骤如下：
1)称取待测样品0.1～0.4克(精确至0.0001克)，置于20ml带盖玻璃瓶中，用少许去离子水润湿，加入摩尔浓度为0.5～1.8mol/L的HCl溶液5～18ml，拧紧瓶盖，在旋涡混合器上充分混匀，在超级微量恒温器上，于50～100℃下加热水解1～12小时，在水解过程中，间歇有规律地摇动小瓶。
2)取出玻璃瓶并冷却至室温，以慢速定性滤纸过滤，用去离子水洗涤残渣至无SO4 2-(以2mol/L BaCl2溶液检验，滤液收集约200ml)，搅拌下徐徐加入2mol/L BaCl2溶液5ml，并加入2mol/L HNO3溶液5ml，温和加热30分钟，取下静置4小时。
3)用慢速定量滤纸过滤；再用去离子水洗至无Cl-(1％AgNO3溶液检验)，将滤纸及沉淀物转移至已在650～850℃恒重并称重的瓷坩埚中，置于电炉上灰化，注意不能让其燃烧，然后转移到马福炉中于400℃加热1小时，650～850℃加热1小时；取出室温冷却5分钟，放入装有CaCl2的干燥器中，冷至室温，称量记录；再在650～850℃加热0.5小时，冷却，称量记录；重复上述操作，直至二次称量相差不大于0.0002克。
4)然后计算SO4 2-的含量。
本方法测定结果可靠，精密度、准确度好，而且所用设备仪器简单，试剂易购，适用于一般实验室质量控制，仲裁分析，以及含硫酸酯化多糖的食品、保健食品、药品中硫酸基常量分析。
具体实施方式
硫酸酯化多糖(SPS)中硫酸基的测定方法，下面通过举例作进一步详细说明。
实施例1：
称取待测样品0.2克(精至0.0001克)，置于20ml带盖玻璃瓶中，以少许去离子水润湿，加入摩尔浓度为1mol/L的HCl溶液10ml，拧紧瓶盖，在旋涡混合器上充分混匀，在超级微量恒温器上，于50℃下加热水解4小时。在水解过程中，间歇有规律地摇动小瓶。取出玻璃瓶并冷却至室温。以慢速定性滤纸过滤，用去离子水洗涤残渣至无SO4 2-(以2mol/LBaCl2溶液检验，滤液收集约200ml)。搅拌下徐徐加入2mol/L BaCl2溶液5ml，并加入2mol/LHNO3溶液5ml，温和加热30分钟，取下静置4小时。用慢速定量滤纸过滤；用去离子水洗至无Cl-(1％AgNO3溶液检验)。将滤纸及沉淀物转移至已在650℃恒重并称重的瓷坩埚中，置于电炉上灰化，注意不能让其燃烧！然后转移到马福炉中于400℃加热1小时，650℃加热1小时。取出室温冷却5分钟，放入装有CaCl2的干燥器中，冷至室温，称量记录。再在650℃加热0.5小时，冷却，称量记录。重复上述操作，直至二次称量相差不大于0.0002克。
实施例2：
称取待测样品0.25克(精至0.0001克)，置于20ml带盖玻璃瓶中，以少许去离子水润湿，加入摩尔浓度为1mol/L的HCl溶液15ml，拧紧瓶盖，在旋涡混合器上充分混匀，在超级微量恒温器上，于100℃下加热水解2小时。在水解过程中，间歇有规律地摇动小瓶。取出玻璃瓶并冷却至室温。以慢速定性滤纸过滤，用去离子水洗涤残渣至无SO4 2-(以2mol/L BaCl2溶液检验，滤液收集约200ml)。搅拌下徐徐加入2mol/L BaCl2溶液5ml，并加入2mol/L HNO3溶液5ml，温和加热1小时，取下静置4小时。用慢速定量滤纸过滤；用去离子水洗至无Cl-(1％AgNO3溶液检验)。将滤纸及沉淀物转移至已在850℃恒重并称重的瓷坩埚中，置于电炉上灰化，注意不能让其燃烧！然后转移到马福炉中于400℃加热1小时，850℃加热1小时。取出室温冷却5分钟，放入装有CaCl2的干燥器中，冷至室温，称量记录。再在850℃加热0.5小时，冷却，称量记录。重复上述操作，直至二次称量相差不大于0.0002克。
实施例3：
称取待测样品0.3克(精至0.0001克)，置于20ml带盖玻璃瓶中，以少许去离子水润湿，加入摩尔浓度为1.8mol/L的HCl溶液18ml，拧紧瓶盖，在旋涡混合器上充分混匀，在超级微量恒温器上，于75℃下加热水解4小时。在水解过程中，间歇有规律地摇动小瓶。取出玻璃瓶并冷却至室温。以慢速定性滤纸过滤，用去离子水洗涤残渣至无SO4 2-(以2mol/LBaCl2溶液检验，滤液收集约200ml)。搅拌下徐徐加入2mol/L BaCl2溶液5ml，并加入2mol/LHNO3溶液5ml，温和加热30分钟，取下静置4小时。用慢速定量滤纸过滤；用去离子水洗至无Cl-(1％AgNO3溶液检验)。将滤纸及沉淀物转移至已在850℃恒重并称重的瓷坩埚中，置于电炉上灰化，注意不能让其燃烧！然后转移到马福炉中于400℃加热1小时，850℃加热1小时。取出室温冷却5分钟，放入装有CaCl2的干燥器中，冷至室温，称量记录。再在850℃加热0.5小时，冷却，称量记录。重复上述操作，直至二次称量相差不大于0.0002克。
上述实施案例中，按下式计算SO4 2-的含量：
式中：0.4112—将BaSO4质量换算为SO4 2-质量的换算因子；WBaSO4—BaSO4质量，g；G—样品质量，g；SO4 2-％—100克样品中SO4 2-的质量份数，即百分含量。
注：如果G为分析基质量，则为分析基含量；根据分析基水份可换算成干基含量。
附表1-7为本发明的测定实例，不再一一举例。
表1 水解时间对测定结果的影响 表2 水解盐酸浓度对sO4 2-测定结果的影响
表3 盐酸的用量对sO4 2-测定结果的影响 表4 样品称量对测定结果的影响
表5 硫酸基测定的重复性 表6 硫酸基添加回收结果
表7 实测样品结果举例
Claims (1)
1.一种硫酸酯化多糖中硫酸基含量的测定方法，其特征在于：测定步骤如下：
1)称取待测样品0.1～0.4克，精确至0.0001克，置于20m1带盖玻璃瓶中，用去离子水润湿，加入摩尔浓度为0.5～1.8mol/L的HCl溶液5～18ml，拧紧瓶盖，在旋涡混合器上充分混匀，在超级微量恒温器上，于50～100℃下加热水解1～12小时，在水解过程中，间歇有规律地摇动小瓶；
2)取出玻璃瓶并冷却至室温，以慢速定性滤纸过滤，用去离子水洗涤残渣至无SO4 2-，以2mol/L BaCl2溶液检验，滤液收集约200ml，搅拌下徐徐加入2mol/L BaCl2溶液5ml，并加入2mol/L HNO3溶液5ml，温和加热30分钟，取下静置4小时；
3)用慢速定量滤纸过滤；再用去离子水洗至无Cl-，用1％ AgNO3溶液检验，将滤纸及沉淀物转移至已在650～850℃恒重并称重的瓷坩埚中，置于电炉上灰化并不能让其燃烧，然后转移到马福炉中于400℃加热1小时，650～850℃加热1小时；取出室温冷却5分钟，放入装有CaCl2的干燥器中，冷至室温，称量记录；再在650～850℃加热0.5小时，冷却，称量记录；重复上述操作，直至二次称量相差不大于0.0002克；
4)然后计算SO4 2-的含量。
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104330323A (zh) * | 2014-11-14 | 2015-02-04 | 国家电网公司 | 一种降低火电厂烟气的烟尘浓度测量误差的方法 |
| CN105987900A (zh) * | 2015-01-27 | 2016-10-05 | 张家港市国泰华荣化工新材料有限公司 | 一种锂离子电池用电解液中硫酸根离子的测定方法 |
| CN112763722A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-05-07 | 东北制药集团股份有限公司 | 一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法 |
| CN113049431A (zh) * | 2021-03-12 | 2021-06-29 | 安徽理工大学 | 一种糠醛渣中硫酸催化剂含量的测算方法 |
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2008
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104330323A (zh) * | 2014-11-14 | 2015-02-04 | 国家电网公司 | 一种降低火电厂烟气的烟尘浓度测量误差的方法 |
| CN105987900A (zh) * | 2015-01-27 | 2016-10-05 | 张家港市国泰华荣化工新材料有限公司 | 一种锂离子电池用电解液中硫酸根离子的测定方法 |
| CN105987900B (zh) * | 2015-01-27 | 2019-01-29 | 张家港市国泰华荣化工新材料有限公司 | 一种锂离子电池用电解液中硫酸根离子的测定方法 |
| CN112763722A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-05-07 | 东北制药集团股份有限公司 | 一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法 |
| CN112763722B (zh) * | 2020-12-24 | 2022-12-06 | 东北制药集团股份有限公司 | 一种检测硫糖铝蛋白亲和力的方法 |
| CN113049431A (zh) * | 2021-03-12 | 2021-06-29 | 安徽理工大学 | 一种糠醛渣中硫酸催化剂含量的测算方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20090325 |