CN112755033A - 视黄酸类化合物在制备抗肝癌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了视黄酸类化合物在制备抗肝癌药物中的应用，属于医药技术领域。该抗肝癌药物以治疗有效量的视黄酸类衍生物、或其联合索拉非尼和/或伦伐替尼作为有效成分，视黄酸类化合物选自具有如式

所示通式结构的化合物、其对映异构体、非对映异构体或药学上可接受的盐。本发明的视黄酸类化合物对肝癌干细胞的抑制率好，同时能显著增强索拉非尼、伦伐替尼的抗肝癌活性，与索拉非尼、伦伐替尼在抗肝癌方面产生协同作用，为肝癌患者的治疗提供新的用药途径。

Description

视黄酸类化合物在制备抗肝癌药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及视黄酸类化合物在制备抗肝癌药物中的应用。

背景技术

原发性肝细胞癌(Hepato cellular carcinoma，HCC)简称肝癌，致死率高居癌症死亡率前列，是严重威胁人类生命健康的重大疾病。肝癌以起病隐匿、高转移率和高复发率和高度异质性为特点，早期易转移与治疗后易复发成为引起患者死亡的最主要原因。进入21世纪以来，伴随基因测序、靶向药物等精准医疗技术突飞猛进的发展，非小细胞肺癌、乳腺癌等癌症患者的生存期得到极大改善；但是针对肝癌的靶向药物进展仍非常有限。近20年来，全世界仅有索拉非尼、伦伐替尼两种具有肝癌适应症的激酶抑制剂靶向药物问世，且面临生存期改善有限的难题。癌症干细胞(CSCs)或称为肿瘤启动细胞(TICs)是一种自我更新的、高度致瘤的肿瘤细胞亚群，它们在癌症的发生和发展中起着至关重要的作用，CSCs或TICs对传统的靶向药物和化疗表现出高度的耐药，是靶向治疗或化疗后癌症复发的关键因素之一。因此，针对性开发肝癌干细胞的靶向抑制药物成为癌症深层次治疗的有效方式。

美国UIUC的汪宁教授等2012年首次提出了与肿瘤干细胞具有高度相似性的肿瘤再生细胞(tumor-repopulating cells)的概念(Nat.Mater.2012,11,734)。根据上述研究结果，采用一种来自深海大马哈鱼的软三维纤维蛋白胶的新型细胞培养载体，通过对黑素恶性肿瘤细胞的培养，模拟肿瘤再生细胞在体内软微环境中的增殖过程(Nat.Comm.,2014,5,4619)，发现有一小部分细胞依然可以存活，而更为重要的是，存活的这部分细胞显示出与众不同的特性，不但生命力顽强，而且生长速度比较快，可以认定为传统方法难以甄别的肿瘤再生细胞。该研究表明，在体内软微环境中，肿瘤再生细胞可以保持强自我更新能力，不断地进行增生，进而形成原位肿瘤；而在硬微环境下，肿瘤再生细胞则进入休眠状态。但是一旦肿瘤再生细胞周围的微环境发生改变，硬度降低，那么肿瘤再生细胞就会复苏，并发生侵袭和转移，形成新的恶性肿瘤，最终导致个体死亡，如果能够准确识别并诱导肿瘤再生细胞凋亡，将为癌症治愈带来更多的希望。研究证实，肿瘤再生细胞与肿瘤干细胞具有高度的类似性，包括极强的自我更新能力与动物体内成瘤性，极强的侵袭及转移能力等。因此，鉴于批量获取肿瘤再生细胞的便捷性，其为肿瘤干细胞的研究提供了极佳的范式平台，为肿瘤干细胞靶向药物的研究提供了很好的模型。

视黄酸(RA)从上世纪80年代开始应用于诱导分化疗法治疗急性早幼粒细胞白血病，以后用途逐渐扩大。2018年，FDA正式批准了ATRA联合As₂O₃用于存在t(15；17)易位或PML-RARα融合基因表达的成人急性早幼粒细胞白血病一线治疗，标志着视黄酸治疗肿瘤取得了阶段性突破。生物学研究和多项临床实验都证实视黄酸与肝脏疾病之间存在密切联系，包括在肝癌细胞系中存在视黄酸活性的丧失，肝硬化和肝癌患者体内存在视黄酸储量的减少和视黄酸信号通路的改变等情况。2018年，日本科学家通过对130名接受过治疗的肝癌患者作为研究对象，在随访中发现口服RAR/RXR受体激动剂开环式视黄酸(Acyclicretinoid，ACR)的肝癌患者当中有43.7％的人没有复发，而服用安慰剂的对照组患者则有29.3％未复发，具有显著的统计学差异。这些研究结果为新一代维甲酸类肝癌干细胞靶向治疗药物的研究提供了坚实依据。

索拉非尼是一种新型多靶点抗肿瘤药物，可同时作用于肿瘤细胞和肿瘤血管，具有双重的抗肿瘤作用：既可通过阻断由RAF/MEK/ERK介导的细胞信号传导通路而直接抑制肿瘤细胞的增殖，还可通过抑制VEGFR和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)而阻断肿瘤新生血管的形成，间接地抑制肿瘤细胞的生长。2009年8月，中国国家食品药品监督管理局的批准索拉非尼正式进入中国肝癌治疗市场，用于不能手术的晚期肝癌患者治疗。

发明内容

本发明提供了视黄酸类化合物在制备抗肝癌药物中的应用，所述药物以治疗有效量的视黄酸类衍生物、或其联合索拉非尼和/或伦伐替尼作为有效成分，所述视黄酸类化合物选自具有如下式(1)所示通式结构的化合物、其对映异构体、非对映异构体或药学上可接受的盐：

式(1)中，X选自-O-、-S-、-S(＝O)-、-C(R₄R₅)-中的一种；

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅分别独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基中的一种；

Y₁、Y₂、Y₃、Y₄分别独立地选自-CH＝或-N＝；

L选自

中的一种。

优选地，所述视黄酸类化合物选自具有如下式(1-1)所示通式结构的化合物、其对映异构体、非对映异构体或药学上可接受的盐：

式(1-1)中，X选自-O-、-S-或-S(＝O)-；

R₁、R₂、R₃分别独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基中的一种；

Y₁、Y₂分别独立地选自-CH＝或-N＝，Y₃和Y₄均为-CH＝；

L为炔基。

优选地，所述视黄酸类化合物的结构式为

优选地，所述药物以所述视黄酸类化合物为有效成分时，所述视黄酸类化合物的应用剂量为0.1–20mg/kg，更优选为0.22–2.2mg/kg。

优选地，所述药物以所述视黄酸类化合物联合索拉非尼作为有效成分时，所述视黄酸类化合物的应用剂量为0.1–20mg/kg，所述索拉非尼的应用剂量为10–100mg/kg。

优选地，所述视黄酸类化合物在制备抑制肝癌干细胞药物中的应用。

优选地，所述视黄酸类化合物通过促进肝癌干细胞凋亡或抑制肝癌干细胞转移实现。

优选地，所述视黄酸类化合物联合索拉非尼和/或伦伐替尼在制备肝癌细胞受体络氨酸激酶抑制药物中的应用。

优选地，所述视黄酸类化合物联合索拉非尼和/或伦伐替尼在制备肝癌由RAF/MEK/ERK介导的细胞信号传导通路抑制药物中的应用。

优选地，所述肝癌包括但不限于原位肝癌、转移性肝癌或肝内胆管癌。

通过实验发现，视黄酸类化合物(2.2mg/kg)的原位肝癌抑瘤率高于索拉非尼(30mg/kg)的原位肝癌抑瘤率，视黄酸类化合物(2.2mg/kg)联合索拉非尼(30mg/kg)的原位肝癌抑瘤率高于索拉非尼(30mg/kg)的原位肝癌抑瘤率，说明本发明中治疗和(或)预防肝癌复发的药物(以视黄酸类化合物或其联合索拉非尼)对肝癌具有显著的治疗和(或)预防复发效果，视黄酸类化合物可显著增强索拉非尼、伦伐替尼的抗肝癌活性，与索拉非尼、伦伐替尼在抗肝癌方面产生协同作用，可以用于制备抗肝癌药物。

参考以下详细说明更易于理解本申请的上述以及其他特征、方面和优点。

附图说明

通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更显著：

图1为WYC-209抑制肝癌细胞系和肝癌干细胞克隆的IC₅₀示意图。

图2为WYC-209抑制肝癌干细胞克隆形成的示意图。

图3为WYC-209诱导肝癌干细胞凋亡的示意图。

图4为WYC-209抑制肝癌干细胞侵袭、转移的示意图。

图5为WYC-209对肝癌干细胞增殖标记物Ki-67抑制的示意图。

图6为WYC-209对肝癌干细胞凋亡标记物Caspase3表达增强的示意图。

图7表示小鼠尾静脉注射10万个肝癌干细胞造模成瘤，给予WYC-209治疗以后小鼠肺转移肺组织的示意图。

图8表示注射50万个肝癌干细胞造模成瘤，给予WYC-209治疗以后小鼠皮下成瘤的肿瘤体积及重量。

图9表示注射50万个肝癌干细胞造模成瘤，给予WYC-209联合索拉非尼小鼠治疗以后皮下成瘤的肿瘤体积及重量。

图10表示不同表达水平人源SOS2肝癌组织形成的裸鼠PDX给予WYC-209治疗以后的结果示意图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例的附图，对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本发明的实施例，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

除非另作定义，此处使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本发明专利申请说明书以及权利要求书中使用的“第一”、“第二”以及类似的词语并不表示任何顺序、数量或者重要性，而只是用来区分不同的组成部分。同样，“一个”或者“一”等类似词语也不表示数量限制，而是表示存在至少一个。

以下实施例中使用的视黄酸类化合物WYC-209的结构式为

其制备方法如申请号为201610310944.8的专利文献所述，其他原料或产品如开环式视黄酸(ACR)、索拉非尼(Sora)、阿霉素(Dox)等如未经说明均为市售可得。

实施例1肝癌干细胞TRCs的分选与3D克隆培养

通过肝癌干细胞TRCs药物筛选研究平台(In Vitro&In Vivo)进行肝癌干细胞TRCs的分选与3D克隆培养，具体如下：

实验材料：肝癌细胞系Hep3B，PLC/PRF/5等，均从复旦大学肝癌研究所购买；其他主要试剂耗材包括fibrinogen(母液20mg/mL)，thrombin(0.1U/μL，工作浓度0.5units)，PBS，T7buffer，DMEM培养基，96孔板等。细胞培养在培养瓶中(Corning)，培养基为MEM，RPMI-1640或DMEM(Life Technologies)，含有10％(v/v)胎牛血清(GIBCO)及1％双抗(penicillin and streptomycin)(Life Technologies)，且所有实验步骤都在超净工作台完成。

实验方法：从-80℃冰箱取出fibrinogen、thrombin放于冰上。将MEM或DMEM培养基从4℃冰箱取出放于37℃水浴锅预热。准备细胞悬液并调整细胞浓度，用培养基将细胞调为1×10⁴/mL。用T7稀释母液至2mg/mL的fibrinogen溶液。将500μL稀释好的fibrinogen溶液与500μL细胞悬液1:1混合，即溶液终浓度为1mg/mL的fibrinogen和5×10³/mL细胞。将96孔板置于冰上，每孔中央加入1μL thrombin(0.1units)溶液。再每孔各加入50μL fibrinogen和细胞混合液。直接将50μL的fibrinogen&cell混合液加在1μL thrombin溶液上面，上下吸混合液2次，晃动96孔板，使混合液平铺于整个孔面，避免产生气泡。加完后，96孔板放入37度培养箱孵育30min，取出培养板，每孔各加入0.2mL培养液，37℃，5％CO₂培养箱培养。用徕卡倒置显微镜(DMI-6000B)记录每天克隆图片，并用Image J软件计算3D克隆半径/直径，克隆体积用公式v＝4/3πr³计算并记录。

实施例2肝癌干细胞Hep3B-TRCs3D克隆抑制实验

按照上述方法筛选和培养得到各种肝癌干细胞，于第0天或第3天加不同浓度的待测药物作为实验组，对照组为仅含有培养基组的blank组、含有0.1％DMSO的阴性对照组及10μM Dox的阳性对照组。从第0天开始，每天用DMI-6000B测量、记录每组克隆的大小，5天后计算每组药物克隆生长抑制率。对于不同肝癌细胞系Hep3B、PLC/PRF/5、Hep3B-TRC、PLC/PRF/5-TRC的WYC-209、ACR、Sora、Dox的IC₅₀结果如图1所示；将Hep3B和PLC/PRF/5细胞培养在90Pa纤维蛋白凝胶中，然后用DMSO(含0.1％DMSO的培养基)、ACR 10μM、Sora 10μM、Dox10μM和WYC-209(1.0μM、5.0μM或10μM)分别处理，肝癌干细胞3D克隆生长抑制率(％)＝(1-加药组细胞OD值/对照组细胞OD值)×100％，结果如图2所示，左图为第5天HCC-TRC克隆球的代表性图像，右图为第5天(n＝3)肝癌干细胞克隆球大小的定量结果，显示WYC-209可有效抑制肝癌细胞系及肝癌干细胞生长，并对肝癌干细胞的生长抑制显示出更优的选择性，并且以上抑制均呈现剂量依赖性。

实施例3以流式细胞术定量检测目标化合物诱导肝癌干细胞凋亡情况

将Hep3B-TRC、PLC/PRF/5-TRC培养在6孔板或种入3D fibrin胶中，待克隆形成至第四天时，分别加入WYC-209(1.0μM、5.0μM或10μM)、Sora、ACR、Dox处理48小时，用双染色凋亡试剂盒(FITC-conjugated Annexin-V&PI)通过分析型流式细胞仪定量分析肝癌干细胞诱导凋亡情况，结果如图3所示，显示WYC-209可有效促进肝癌干细胞高比例凋亡。

实施例4以Transwell实验检测目标化合物抑制肝癌干细胞侵袭、转移情况

将Hep3B-TRC、PLC/PRF/5-TRC培养在6孔板或种入3D fibrin胶中，待克隆形成至第四天时，用分散酶Ⅱ消化3D fibrin胶并离心收集肝癌干细胞。将细胞消化、离心、无血清重悬、并稀释成1×10⁵个/mL的细胞悬液。Transwell板中加入500μL含20％FBS的完全培养基，将小室放入板中。在Transwell小室中加入200μL的细胞悬液，分别加入WYC-209(1.0μM、5.0μM或10μM)、Sora、ACR、Dox处理48小时，将Transwell板37℃下于CO₂(含量5％)培养箱中。将小室取出，用PBS洗去培养基，小室上层用棉签轻轻擦去死去的未穿过的死细胞，结晶紫染色10min；去离子水将表面的结晶紫洗除干净，用棉签将上室中接种侧的细胞再次擦除干净，DMI-6000B设定为100倍，随机选择5个视野对非细胞接种侧拍照，每组重复三次，结果如图4所示，显示WYC-209可显著抑制肝癌干细胞引起的肿瘤侵袭、转移。

实施例5以免疫荧光实验检测目标化合物抑制肝癌干细胞增殖及促进凋亡情况

将Hep3B-TRC、PLC/PRF/5-TRC种入含3D fibrin胶中的共聚焦皿中，用组化笔在盖玻片中间细胞分布均匀的位置画圈(防止抗体流走)，加50–100μL破膜工作液，室温孵育20min，PBS洗3次，每次5min。在圈内滴加用3％BSA均匀覆盖组织，室温封闭30min(一抗是山羊来源用10％驴血清封闭，一抗其它来源的用3％BSA封闭)，轻轻甩掉封闭液，在细胞孔板里滴加PBS按一定比例配好的一抗，细胞培养板平放于湿盒内4℃孵育过夜，细胞孔板置于脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min，稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，室温孵育50min；爬片置于PBS(pH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min，切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min，爬片置于PBS(pH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min，玻片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片，切片于荧光显微镜下观察并采集图像(DAPI紫外激发波长330–380nm，发射波长420nm，发蓝光；FITC激发波长465–495nm，发射波长515–555nm，发绿光；CY3激发波长510–560，发射波长590nm，发红光)，结果如图5和6所示，WYC-209对比ACR、Sora，增殖标记物Ki67显著降低，凋亡标记物Caspase3显著升高，显示WYC-209可有效抑制肝癌干细胞增殖，并促进肝癌干细胞高比例凋亡。

实施例6Hep3B-TRC、PLC/PRF/5-TRC肺部转移实验

为排除性别干扰，取4–6周龄雌性nude小鼠40只。实验方案：每只小鼠先尾静脉注射1×10⁵个Hep3B-TRC(PLC/PRF/5-TRC)，五天后，将小鼠分4组，每组5只。第一组为对照组，每只小鼠尾静脉注射0.1％DMSO，每两天注射一次；第二组为阳性对照组，每只小鼠尾静脉注射0.18mg/kg的ACR，每两天注射一次；第3–4组为实验组，每只小鼠尾静脉注射高低剂量(各相差10倍)的WYC-209，每两天注射一次，每次的给药体积为150μL。小鼠体重从注射TRCs后的第五天(注射WYC-209的第一天)为开始记录体重。第30天，处死并解剖所有小鼠，检查癌细胞肺、肝、胃、大脑等易发生转移组织肝癌转移情况。小鼠尾静脉注射10万个肝癌干细胞，给予WYC-209治疗以后的小鼠肺转移肺组织分析结果如图7所示，对比ACR给药组，WYC-209能更显著抑制裸鼠肺转移，并且WYC-209抑制肺转移呈现剂量依赖性。

实施例7小鼠Hep3B-TRC肝癌干细胞皮下瘤抑制实验

为排除性别干扰，取4–6周龄雌性nude小鼠40只。实验方案：每只小鼠前肢腋下注射5×10⁵个肝癌干细胞Hep3B-TRC，五天后，将小鼠分5组，每组6只。第一组为对照组，每只小鼠尾静脉注射0.1％DMSO，每两天注射一次；第二组为阳性对照组，每只小鼠尾静脉注射0.022mg/kg的WYC-209，每两天注射一次；第3–5组为实验组，每只小鼠尾静脉注射高剂量的WYC-209和联合用药组，每两天注射一次，每次的给药体积为150μL。小鼠体重从注射TRCs后的第五天(注射WYC-209的第一天)为开始记录体重。第30天，处死并解剖所有小鼠(鉴于肝癌干细胞成瘤性极强且发展迅速，阴性对照组荷瘤小鼠生存期一般在30天)，检查测量原位肝癌大小，并检查癌细胞肺、肝、胃、大脑等易发生转移组织肝癌转移情况。瘤组织切片免疫组化分析，图8表示注射50万个肝癌干细胞，给予WYC-209小鼠皮下成瘤的肿瘤体积及重量，显示在小鼠体内WYC-209可显著抑制肝癌干细胞引起的皮下肿瘤生长、转移。

实施例8 WYC-209联合索拉非尼抑制小鼠PLC/PRF/5-TRC肝癌干细胞原位瘤实验

为排除性别干扰，取4–6周龄雌性nude小鼠40只。实验方案：每只小鼠前肢腋下注射5×10⁵个肝癌干细胞PLC/PRF/5-TRC，五天后，将小鼠皮下瘤切成小块进行肝脏原位瘤种植(n＝6)。待肿瘤生长1周后，进行药物尾静脉注射，第一组为对照组，每只小鼠尾静脉注射0.1％DMSO，每两天注射一次；第二组为阳性对照组，每只小鼠尾静脉注射0.022mg/kg的WYC-209，每两天注射一次；第3–5组为实验组，每只小鼠尾静脉注射高剂量的WYC-209和联合用药组，每两天注射一次，每次的给药体积为150μL。小鼠体重从注射TRCs后的第五天(注射WYC-209的第一天)为开始记录体重。第30天，处死并解剖所有小鼠(鉴于肝癌干细胞成瘤性极强且发展迅速，阴性对照组荷瘤小鼠生存期一般在30天)，检查测量原位肝癌大小。图9表示注射50万个肝癌干细胞，给予WYC-209联合索拉非尼小鼠皮下成瘤的肿瘤体积及重量，结果显示WYC-209不仅可以显著抑制肝癌干细胞引起的原位肿瘤生长，与索拉非尼联合用药还能够进一步增强相应抗肿瘤效果。

实施例9人源SOS2不同表达水平肝癌组织裸鼠PDX抑制实验

选取肝癌患者的新鲜肝癌标本，通过IHC染色检测相关组织SOS2的不同表达水平，并根据检测结果分为相关SOS2高表达与SOS2低表达组，并用NOG小鼠建立2组PDX模型。待肿瘤直径达到约1厘米时，将其解剖并皮下移植到裸鼠中进行下一代传代。然后将所得SOS2高表达与SOS2低表达两组PDX小鼠各自随机分为3亚组(n＝6)，并接受不同治疗，包括：给予DMSO作为阴性对照、给予0.22mg/kg及2.2mg/kg的WYC-209进行治疗，每两天静脉注射一次，共21天。结果显示，与对照组相比，WYC-209的低剂量或高剂量组均显著抑制了SOS2高表达小鼠的肿瘤体积和重量，尤其是SOS2高表达组的肿瘤体积和重量比SOS2低表达组的肿瘤体积和重量均显著减小，结果如图10所示。

通过上述实施例发现，视黄酸类化合物WYC-209(2.2mg/kg)组的原位肝癌抑瘤率高于索拉非尼(30mg/kg)组的原位肝癌抑瘤率，视黄酸类化合物WYC-209(2.2mg/kg)联合索拉非尼(30mg/kg)组的原位肝癌抑瘤率高于索拉非尼(30mg/kg)组的原位肝癌抑瘤率，说明本发明中治疗和(或)预防肝癌的药物对肝癌具有显著的治疗和(或)预防效果，视黄酸类化合物显著增强了索拉非尼抗肝癌活性，与索拉非尼在抗肝癌方面产生协同作用，可为肝癌患者的治疗提供新的用药途径。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点，对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这中叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (10)

1.视黄酸类化合物在制备抗肝癌药物中的应用，所述药物以治疗有效量的视黄酸类衍生物、或其联合索拉非尼和/或伦伐替尼作为有效成分，所述视黄酸类化合物选自具有如下式(1)所示通式结构的化合物、其对映异构体、非对映异构体或药学上可接受的盐：

式(1)中，X选自-O-、-S-、-S(＝O)-、-C(R₄R₅)-中的一种；

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅分别独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基中的一种；

Y₁、Y₂、Y₃、Y₄分别独立地选自-CH＝或-N＝；

L选自

中的一种。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述视黄酸类化合物选自具有如下式(1-1)所示通式结构的化合物、其对映异构体、非对映异构体或药学上可接受的盐：

式(1-1)中，X选自-O-、-S-或-S(＝O)-；

R₁、R₂、R₃分别独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基中的一种；

Y₁、Y₂分别独立地选自-CH＝或-N＝，Y₃和Y₄均为-CH＝；

L为炔基。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述视黄酸类化合物的结构式为

4.根据权利要求1至3任一项所述的应用，其特征在于，所述视黄酸类化合物在制备抑制肝癌干细胞药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述视黄酸类化合物通过促进肝癌干细胞凋亡或抑制肝癌干细胞转移实现。

6.根据权利要求1至3任一项所述的应用，其特征在于，所述视黄酸类化合物联合索拉非尼和/或伦伐替尼在制备肝癌细胞受体络氨酸激酶抑制药物中的应用。

7.根据权利要求1至3任一项所述的应用，其特征在于，所述视黄酸类化合物联合索拉非尼和/或伦伐替尼在制备肝癌由RAF/MEK/ERK介导的细胞信号传导通路抑制药物中的应用。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物以所述视黄酸类化合物为有效成分时，所述视黄酸类化合物的应用剂量为0.1–20mg/kg。

9.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物以所述视黄酸类化合物联合索拉非尼作为有效成分时，所述视黄酸类化合物的应用剂量为0.1–20mg/kg，所述索拉非尼的应用剂量为10–100mg/kg。

10.根据权利要求1至9任一项所述的应用，其特征在于，所述肝癌包括但不限于原位肝癌、转移性肝癌或肝内胆管癌。

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