CN116650474A - 苍耳亭的医药新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及天然药物领域，更为具体的说是涉及苍耳亭的医药新用途。本发明首次发现了苍耳亭能够显著性的抑制BxPC‑3细胞及PANC‑1细胞的细胞活性，并且这种抑制作用呈现出显著的浓度依赖性，同时能够显著抑制BxPC‑3细胞及PANC‑1细胞的克隆及分裂增殖能力，并且苍耳亭还能够显著抑制BxPC‑3细胞的迁移能力，此外苍耳亭能够诱导BxPC‑3细胞凋亡，从而为制备用于治疗胰腺癌的药物提供了新的思路。以苍耳亭或苍耳亭与其他药物联用后制备得到的药物制剂安全、有效，是一种新的胰腺癌治疗方法。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及天然药物领域，更为具体的说是涉及苍耳亭的医药新用途。
背景技术
苍耳亭(Xanthatin)是从传统中药苍耳子中提取的倍半萜类单体成分，其结构式如下：
胰腺癌是一种恶性程度极高的消化道肿瘤。近年胰腺癌的发病率在国内外均呈上升趋势。由于缺乏早期诊断方法，胰腺癌在发现时多为晚期转移阶段，所以其5年生存率仅为9％～10％。美国癌症协会数据显示，2022年胰腺癌死亡率预计列居相关恶性肿瘤的第三位，其发病率逐年增加。中国国家癌症中心数据显示，2022年胰腺癌预计占我国恶性肿瘤相关死亡率第六位，在男性中发病率显著升高。在过去十几年里，胰腺癌的发病率和死亡率均显著上升，且随着我国人口增长及老龄化增加，未来胰腺癌的发病率会越来越高。
胰腺癌具有恶性程度高，发展迅速，死亡率高的特点。根据2022年胰腺癌诊疗指南，胰腺癌的治疗方式主要包括手术、放疗、化疗、介入、免疫治疗等。手术虽是根治胰腺癌的唯一方法，但是由于大多数胰腺癌在发现时处于局部晚期转移状态，因此目前仍以化疗作为治疗胰腺癌的重要手段。在化疗用药中，根据胰腺癌患者的体能状态，一般是以吉西他滨联合白蛋白紫杉醇、顺铂、卡培他滨、替吉奥等方案作为一线治疗方案。但是化疗药物通常会对人体产生毒副作用，此外，化疗还面临耐药性的问题。因此，为了提高胰腺癌患者的生存率，改善胰腺癌患者的生活质量，当前寻找安全有效的治疗药物显得尤为迫切。
发明内容
本发明旨在寻找适用于胰腺癌治疗的新型中药化合物。
本发明提供了苍耳亭的新的医药用途之一，所述新的医药用途是指苍耳亭在制备抑制BxPC-3细胞活力药物中的应用。
同时，本发明还提供了苍耳亭的第二种新的医药用途，所述新的医药用途是指苍耳亭在制备抑制BxPC-3细胞克隆、分裂能力药物中的应用。
本发明还提供了苍耳亭的第三种新的医药用途，所述新的医药用途是指苍耳亭在制备抑制BxPC-3细胞迁移药物中的应用。
本发明还提供苍耳亭的第四种新的医药用途，所述新的医药用途是指苍耳亭在制备诱导BxPC-3细胞凋亡药物中的应用。
另外，本发明还提供了苍耳亭的第五种新的医药用途，所述新的医药用途是指苍耳亭在制备抑制PANC-1细胞活力药物中的应用。
同时，本发明还提供了苍耳亭的第六种新的医药用途，所述新的医药用途是指苍耳亭在制备抑制PANC-1细胞克隆、分裂能力药物中的应用。
最后，本发明还提供了苍耳亭在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。
一种药物组合物在制备治疗胰腺癌的药物中的应用，所述药物组合物包括苍耳亭。
本发明的优势在于，首次发现了苍耳亭能够显著性的抑制BxPC-3细胞及PANC-1细胞的细胞活性，并且这种抑制作用呈现出显著的浓度依赖性，同时能够显著抑制BxPC-3细胞及PANC-1细胞的克隆及分裂增殖能力，并且苍耳亭还能够显著抑制BxPC-3细胞的迁移能力，此外苍耳亭能够诱导BxPC-3细胞凋亡，从而为制备用于治疗胰腺癌的药物提供了新的思路。以苍耳亭或苍耳亭与其他药物联用后制备得到的药物制剂安全、有效，是一种新的胰腺癌治疗方法。
附图说明
图1为不同浓度苍耳亭对胰腺癌BxPC-3细胞活力的影响的结果示意图。
图2为不同浓度苍耳亭对胰腺癌PANC-1细胞活力的影响的结果示意图。
图3为不同浓度苍耳亭对胰腺癌BxPC-3细胞克隆形成能力的影响的结果示意图。
图4为不同浓度苍耳亭对胰腺癌PANC-1细胞克隆形成能力的影响的结果示意图。
图5为不同浓度苍耳亭对胰腺癌BxPC-3细胞分裂能力的影响的结果示意图。
图6为不同浓度苍耳亭对胰腺癌PANC-1细胞分裂能力的影响的结果示意图。
图7为不同浓度苍耳亭作用于胰腺癌BxPC-3细胞0～24h后对细胞迁移能力的影响的结果示意图。
图8为不同浓度苍耳亭对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的影响的结果示意图。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面我们结合具体的实施例对本发明进行进一步的阐述。
以下各实施例中苍耳亭均采购自湖州展舒生物科技有限公司；人胰腺癌细胞株BxPC-3、PANC-1购自中科院上海细胞库；CCK购自大连美仑生物技术有限公司；结晶紫购自天津市大茂化学试剂厂；CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒购自美国BD公司。
实施例1
分别将人胰腺癌细胞株BxPC-3细胞、PANC-1细胞接种于96孔板中，置于细胞培养箱中培养，待细胞贴壁且生长至约60％～70％左右的密度，分别用含有终浓度分别为0μM、10μM、20μM、30μM的苍耳亭的培养基作用于细胞24h后，吸取并弃掉含药培养液，将预先配置好的CCK-8溶液以每孔100μl加入96孔板，置培养箱中孵育1～2h，用酶标仪测量450nm处的OD值并计算细胞活力，实验结果分别参考图1和图2。
结果表明，苍耳亭能够显著性的抑制胰腺癌BxPC-3、PANC-1细胞活力，并且随着苍耳亭浓度的增加，其对胰腺癌细胞活力的抑制作用越强并呈剂量依赖性。与空白组相比，10μM、20μM、30μM苍耳亭作用时BxPC-3细胞的活力率分别为(74.92±2.56)％，(61.36±7.30)％，(49.98±3.56)％，10μM、20μM、30μM苍耳亭作用时PANC-1细胞的活力率分别为(88.93±4.91)％，(47.06±4.97)％，(40.07±3.32)％。
实施例2
分别将人胰腺癌细胞株BxPC-3细胞、PANC-1细胞以每孔3×103个细胞的密度接种于6孔板中，置于细胞培养箱中，待细胞贴壁后分别用含有终浓度分别为0μM、10μM、20μM、30μM苍耳亭的培养基作用于细胞24h，吸取并弃掉含药的培养基，然后在6孔板中加入含10％胎牛血清的完全培养基，2至3天进行一次换液，当6孔板内出现肉眼可见的克隆团后，终止培养，吸取并弃掉培养基，用PBS洗2次后加入多聚甲醛固定20～30min，吸取并弃掉多聚甲醛，用结晶紫染色后拍照。实验结果分别参考图3和图4。
结果表明，苍耳亭能够浓度依赖性地抑制胰腺癌BxPC-3、PANC-1细胞克隆形成能力。以空白组的克隆团数量为参照基准，即将空白组的克隆团数量作为100％，则与空白组相比，10μM、20μM、30μM苍耳亭作用时BxPC-3细胞克隆形成率分别为0.72±0.10，0.29±0.09，0.060±0.02，10μM、20μM、30μM苍耳亭作用时PANC-1细胞克隆形成率分别为0.85±0.03，0.59±0.07，0.06±0.05。可以看到在苍耳亭的作用下，BxPC-3细胞和PANC-1细胞克隆形成率均有明显下降。
实施例3
分别取人胰腺癌细胞株BxPC-3、PANC-1细胞，用CFDA标记后接种于6孔板内，置于细胞培养箱中生长至约为60％～70％左右的密度，用含有终浓度分别为0μM、10μM、20μM、30μM的苍耳亭的培养基作用于细胞24h后终止培养，收集细胞后用流式细胞仪检测细胞荧光强度，实验结果参考图5和图6。
流式细胞仪检测结果发现，随着苍耳亭浓度的增加，细胞荧光值升高，与空白组相比，30μM苍耳亭对BxPC-3细胞CFDA荧光值增加比率为1.37±0.10，30μM苍耳亭对PANC-1细胞CFDA荧光值增加比率为1.43±0.07，表明苍耳亭能够抑制胰腺癌细胞的细胞分裂能力。
实施例4
将对数生长期的人胰腺癌细胞株BxPC-3细胞接种于6孔板内，置细胞培养箱中待细胞贴壁并生长至约为80％～90％的密度后，用200μl枪头垂直于6孔板划出水平划痕，加入含有终浓度分别为0μM、10μM、20μM、30μM的苍耳亭的培养基，在加药后0h，12h，24h拍照观察细胞迁移情况，实验结果见图7。
显微镜下观察发现，随着苍耳亭浓度和作用时间的增加，细胞迁移距离减小，表明苍耳亭能够抑制胰腺癌细胞的迁移能力。
实施例5
将人胰腺癌细胞株BxPC-3细胞接种于6孔板内，置于细胞培养箱中培养，待细胞贴壁且生长至约为60％～70％的密度后，用含终浓度为0μM、10μM、20μM、30μM苍耳亭的培养基作用24h后终止培养，胰酶消化后离心收集细胞，用预冷的PBS清洗细胞后重悬，分别加入Annexin V-FITC染色液和PI染色液各5μl后混匀，置于室温下避光染色，15min后用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果见图8。
流式细胞仪分析结果表明，随着苍耳亭浓度的增加，胰腺癌细胞Annexin V阳性率增加，30μM苍耳亭作用下细胞Annexin V阳性率为(22.72±4.60)％，与空白组相比具有显著性差异，以上结果表明苍耳亭能够诱导胰腺癌细胞凋亡。
以上所述是本发明的具体实施方式。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.苍耳亭在制备抑制BxPC-3细胞活力药物中的应用。
2.苍耳亭在制备抑制BxPC-3细胞克隆、分裂能力药物中的应用。
3.苍耳亭在制备抑制BxPC-3细胞迁移药物中的应用。
4.苍耳亭在制备诱导BxPC-3细胞凋亡药物中的应用。
5.苍耳亭在制备抑制PANC-1细胞活力药物中的应用。
6.苍耳亭在制备抑制PANC-1细胞克隆、分裂能力药物中的应用。
7.苍耳亭在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。
8.一种药物组合物在制备治疗胰腺癌的药物中的应用，其特征在于：所述药物组合物包括苍耳亭。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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-
2022
- 2022-10-25 CN CN202211311712.6A patent/CN116650474A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117224697A (zh) * | 2023-09-20 | 2023-12-15 | 安徽省立医院(中国科学技术大学附属第一医院) | cRGD修饰的苍耳亭及其衍生物纳米药物及制备方法 |
| CN117224697B (zh) * | 2023-09-20 | 2024-06-07 | 安徽省立医院(中国科学技术大学附属第一医院) | cRGD修饰的苍耳亭及其衍生物纳米药物及制备方法 |
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