CN108159047A

CN108159047A - 阿帕替尼在制备肿瘤耐药性基因抑制剂中的用途

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Publication number: CN108159047A
Application number: CN201810034425.2A
Authority: CN
Inventors: 杨盛力; 刘利平; 柳湘洁; 黄早早; 何晓晓; 陈耀兵
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2018-01-15
Filing date: 2018-01-15
Publication date: 2018-06-15

Abstract

本发明属于生物医药研究领域，具体涉及阿帕替尼在制备肿瘤耐药性基因抑制剂中的用途。本发明经过广泛而深入的研究，首次研究发现，无论是在mRNA还是蛋白水平，阿帕替尼都表现出了下调肿瘤多药耐药相关基因MDR1、LRP、GST‑pi表达的作用。

Description

阿帕替尼在制备肿瘤耐药性基因抑制剂中的用途

技术领域

本发明属于生物医药研究领域，具体涉及阿帕替尼在制备肿瘤耐药性基因抑制剂中的用途。

背景技术

原发性肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一，其全球范围内发病率都在不断的上升。目前化疗仍是肝细胞癌综合治疗的重要方法之一，但多药耐药(Multidrugresistance,MDR)现象却严重影响了化疗的疗效，多药耐药的逆转是近年来肿瘤治疗的研究热点。引起肿瘤细胞多药耐药性的主要机制是转运蛋白的活性增加，将细胞内的化疗药物泵出胞外，从而降低细胞内的有效药物浓度，产生典型的耐药性。其中最主要的一个原因是多药耐药MDR1(ABCB1)基因激活介导的P-糖蛋白(P-gp)的过度表达。此外，多药耐药相关蛋白(MRP)，肺耐药相关蛋白(LRP)，谷胱甘肽-S-转移酶-pi(GST-pi)和拓扑异构酶IIα(Topo IIα)在化疗的多药耐药中也起到了重要的作用。

阿帕替尼(YN968D1)是一种新型的小分子抗血管生成剂，能够靶向抑制血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)酪氨酸激酶的活性，从而达到抑制肿瘤血管生成，发挥抗肿瘤的作用。目前阿帕替尼已经在多种实体肿瘤中开展了临床研究，阿帕替尼显示出了对晚期胃癌和肝细胞癌的显著疗效和良好耐受性，并且研究表明其可使晚期患者得到潜在的生存获益。

同样可以抑制VEGFR-2的多激酶抑制剂索拉非尼已被证实除了能够抑制肿瘤生长外，还能逆转肝癌细胞多药耐药基因的表达。那么阿帕替尼是否也可以逆转肝癌细胞的化疗耐药性呢？目前尚未见文献报道。为此，我们建立了裸鼠皮下肝癌移植瘤模型，探讨其对肝癌细胞多药耐药相关基因(MDR1，MRP2，LRP，GST-pi，Topo IIα)表达的影响。

发明内容

为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供阿帕替尼在制备肿瘤耐药性基因抑制剂中的用途。

为了实现上述目的以及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供了阿帕替尼在制备肿瘤多药耐药性相关基因抑制剂中的用途。

进一步地，所述肿瘤为肝癌。亦即，肝细胞癌。

进一步地，所述多药耐药性相关基因选自MDR1、LRP、GST-pi。

进一步地，所述阿帕替尼对多药耐药性相关基因具有抑制效果。

对于多药耐药性相关基因具有抑制效果包括但不限于：抑制多药耐药性相关基因所对应蛋白的活性，或者抑制多药耐药性相关基因转录或表达。

所述肿瘤多药耐药性相关基因抑制剂必然包括阿帕替尼，并以阿帕替尼作为前述功用的有效成分。

所述肿瘤多药耐药性相关基因抑制剂中，发挥前述功用的有效成分可仅为阿帕替尼，亦可包含其他可起到类似功用的分子。

亦即，阿帕替尼为所述肿瘤多药耐药性相关基因抑制剂的唯一有效成分或有效成分之一

所述肿瘤多药耐药性相关基因抑制剂可以为单成分物质，亦可为多成分物质。

所述肿瘤多药耐药性相关基因抑制剂的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。

所述肿瘤多药耐药性相关基因抑制剂主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。

本发明的第二方面，提供阿帕替尼在制备针对肝癌多药耐药性相关基因MDR1的抑制剂中的用途。

进一步地，所述阿帕替尼对肝癌多药耐药性相关基因MDR1具有抑制效果。

对于多药耐药性相关基因MDR1具有抑制效果包括但不限于：抑制MDR1蛋白的活性，或者抑制MDR1基因转录或表达。如下调MDR1mRNA水平或下调MDR1蛋白水平。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因MDR1的抑制剂必然包括阿帕替尼，并以阿帕替尼作为前述功用的有效成分。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因MDR1的抑制剂中，发挥前述功用的有效成分可仅为阿帕替尼，亦可包含其他可起到类似功用的分子。

亦即，阿帕替尼为所述针对肝癌多药耐药性相关基因MDR1的抑制剂的唯一有效成分或有效成分之一。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因MDR1的抑制剂可以为单成分物质，亦可为多成分物质。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因MDR1的抑制剂的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因MDR1的抑制剂主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。

所述的对象可以为哺乳动物或哺乳动物的肝癌细胞。所述哺乳动物优选为啮齿目动物、偶蹄目动物、奇蹄目动物、兔形目动物、灵长目动物等。所述灵长目动物优选为猴、猿或人。所述肝癌细胞可以为离体肝癌。

所述对象可以是罹患肝癌的患者或者期待治疗的肝癌的个体。或者所述对象为肝癌患者或者期待治疗肝癌的个体的肝癌细胞。

本发明的第三方面，提供阿帕替尼在制备针对肝癌多药耐药性相关基因LRP的抑制剂中的用途。

进一步地，所述阿帕替尼对肝癌多药耐药性相关基因LRP具有抑制效果。

对于多药耐药性相关基因LRP具有抑制效果包括但不限于：抑制LRP蛋白的活性，或者抑制LRP基因转录或表达。如下调LRP mRNA水平或下调LRP蛋白水平。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因LRP的抑制剂必然包括阿帕替尼，并以阿帕替尼作为前述功用的有效成分。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因LRP的抑制剂中，发挥前述功用的有效成分可仅为阿帕替尼，亦可包含其他可起到类似功用的分子。

亦即，阿帕替尼为所述针对肝癌多药耐药性相关基因LRP的抑制剂的唯一有效成分或有效成分之一。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因LRP的抑制剂可以为单成分物质，亦可为多成分物质。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因LRP的抑制剂的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因LRP的抑制剂主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。

本发明的第四方面，提供帕阿替尼在制备针对肝癌多药耐药性相关基因GST-pi的抑制剂中的用途。

对于多药耐药性相关基因GST-pi具有抑制效果包括但不限于：抑制GST-pi蛋白的活性，或者抑制GST-pi基因转录或表达。如下调GST-pi mRNA水平或下调GST-pi蛋白水平。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因GST-pi的抑制剂必然包括阿帕替尼，并以阿帕替尼作为前述功用的有效成分。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因GST-pi的抑制剂中，发挥前述功用的有效成分可仅为阿帕替尼，亦可包含其他可起到类似功用的分子。

亦即，阿帕替尼为所述针对肝癌多药耐药性相关基因GST-pi的抑制剂的唯一有效成分或有效成分之一。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因GST-pi的抑制剂可以为单成分物质，亦可为多成分物质。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因GST-pi的抑制剂的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。

所述针对肝癌多药耐药性相关基因GST-pi的抑制剂主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。

本发明的第五方面，提供一种肝癌联合治疗药物组合，包括有效量的阿帕替尼和至少一种其他肝癌治疗药物。

进一步地，所述其他肝癌治疗药物为肝癌化疗药物。

本发明的第六方面，提供一种治疗肝癌的方法，为向对象施用有效量的阿帕替尼以及向对象施用有效量的其他肝癌治疗药物和/或向对象实施其他肝癌治疗手段。

可以同步地或顺序地给予有效量的阿帕替尼和至少一种有效量的其他肝癌治疗药物。

进一步地，所述其他肝癌治疗药物为肝癌化疗药物。

进一步地，所述其他肝癌治疗手段为化疗。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明经过广泛而深入的研究，首次研究发现，无论是在mRNA还是蛋白水平，阿帕替尼都表现出了下调肿瘤多药耐药相关基因MDR1、LRP、GST-pi表达的作用。

附图说明

图1：阿帕替尼处理组和对照组BALB/c裸鼠的皮下肝癌移植瘤生长曲线对比，可见阿帕替尼处理组瘤体生长速度较对照组明显减缓。

图2：药物处理2周后阿帕替尼处理组与对照组裸鼠离体肿瘤大小对比，阿帕替尼处理组肿瘤大小较对照组明显减小。

图3：使用实时定量PCR分析阿帕替尼处理组与对照组耐药相关基因MDR1，MRP，LRP，GST-pi和TopoIIα在mRNA水平的相对表达量。

图4：免疫组织化学分析检测阿帕替尼处理组与对照组耐药相关蛋白P-gp，MRP2，LRP，GST-pi和TopoIIα的表达情况。

图5：Western blot检测阿帕替尼处理组和对照组P-gp，MRP2，LRP，GST-pi andTopoIIα在蛋白水平的表达。

具体实施方式

本发明研究目的：研究靶向药物阿帕替尼对肝细胞化疗耐药相关基因表达的影响。方法：建立裸鼠皮下移植瘤模型，随机分为阿帕替尼实验组和对照组，灌胃给药2周，收获肿瘤组织。Real-time PCR、免疫组织化学和Western blot检测肝癌细胞中多药耐药基因MDR1，MRP2，LRP，GST-pi和TopoIIα的表达。结果：与对照组相比，实验组裸鼠皮下肝癌移植瘤生长缓慢，体积较小，差异具有统计学意义(P<0.05)。Real-time PCR结果示实验组肝癌细胞多药耐药基因MDR1、LRP、GST-pi mRNA表达水平明显降低，结果具有统计学意义(P<0.05)，而MRP2和TopoIIαmRNA的表达在两组之间无明显统计学差异(P＝0.372；P＝0.801)。免疫组化和Western blot分析结果显示阿帕替尼能在蛋白水平下调MDR1、LRP、GST-pi的表达，与real-time PCR结果相一致；结论：阿帕替尼除抑制肝癌细胞生长外，还可能可以逆转肝癌细胞化疗耐药性。

MDR1/P-gp

MDR1/P-gp属于现有技术，具体是指多药耐药基因1/P-糖蛋白，Genebank登录号是NM_000927.4。

LRP

LRP属于现有技术，具体是指肺耐药相关蛋白，Genebank登录号是NM_001293204.1。

GST-pi

GST-pi属于现有技术，具体是指谷胱甘肽-S-转移酶-pi，Genebank登录号是NM_000852.3。

MRP2

MRP2属于现有技术，具体是指多药耐药相关蛋白2，Genebank登录号是NM_000392.4。

TopoIIα

TopoIIα属于现有技术，具体是指拓扑异构酶IIα，Genebank登录号是NM_001067.3。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；theseries METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS INENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。

实施例1

一、实验材料与方法

1、试剂

Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM)、胎牛血清(FBS)和胰酶购于Hyclone Company；DMSO购于MP Biomedicals；SP试剂盒、BCA试剂盒购于Wuhan Googlebiotechnology Co.,Ltd；RNA提取试剂Trizol和PCR试剂PowerGreen PCR MasterMix购于Life Technologies；PCR引物合成由Life Technologies完成；MDR1(sc-55510)抗体购于Santa Cruz Biotechnology，MRP2(24893-1-AP)、LRP(16478-1-AP)、GST-pi(15902-1-AP)和TopoIIα(20233-1-AP)抗体均购于Proteintech Group；阿帕替尼购于JiangsuHengrui Medicine Co.，化学成分：N-[4-(氰基环戊基苯基)][2-[(4-吡啶甲基)氨基](3-吡啶)]甲酰胺，剂型为425mg/片，用100％的DMSO溶解并用PBS稀释成0.2g/ml的阿帕替尼溶液，DMSO的终浓度小于0.1％，4℃保存。

2、细胞及培养条件

人肝癌细胞株HepG2细胞，购自中国典型培养物保藏中心(China Center forType Culture Collection)。细胞复苏后，用含10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素的DMEM培养基在37℃、5％CO₂饱和湿度温箱中培养，培养基2-3天常规更换一次。

3、动物及肿瘤建模

肝癌皮下移植瘤模型的建立过程为现有技术，可同之前的文献(Yang S,Liu L,Niu L,et al.Downregulation and pro-apoptotic effect of hypoxia-induciblefactor 2alpha in hepatocellular carcinoma[J].Oncotarget,2016,7(23):34571)。待成瘤后，用游标卡尺测量瘤体的最大径(A)和最小径(B)，根据以下公式计算肿瘤体积：V(mm³)＝AB²/2。1周后，瘤体体积达100mm³左右时，将裸鼠随机分为两组(阿帕替尼处理组：阿帕替尼，50mg/kg qd，溶剂对照组：生理盐水，0.1ml/day；灌胃给药)，每组8只，连续给药2周。每3天测量一次瘤体直径，计算瘤体体积，绘制肿瘤生长曲线，用以比较两组裸鼠皮下肝癌移植瘤生长速度。末次给药24h后，颈脱法处死裸鼠，剥离瘤体，观察瘤体大小。取部分组织液氮冻存用于Real-time PCR和Western blot检测，另留取部分肿瘤组织用100g/L甲醛固定用于免疫组织化学染色。

4、Real-time PCR assay以及western blot

RNA的提取，cDNA的合成，quantitative real-time PCR反应以及Western blot为现有技术，可同之前发表的文章(Yu C,Yang S L,Fang X,et al.Hypoxia disrupts theexpression levels of circadian rhythm genes in hepatocellular carcinoma[J].Mol Med Rep,2015,11(5):4002-4008)。PCR引物详见表1，β-actin在PCR和Western blot中被用做为内参。

表1.Real-Time PCR用引物

5、免疫组化分析多药耐药性基因的表达

剥离的肿瘤组织用甲醛固定、石蜡包埋，常规行HE染色，切片，按试剂盒说明操作，采用SP法行免疫组织化学染色。P-gp、MRP2、LRP、GST-pi和TopoIIα表达结果的判定如下：对免疫组化染色结果进行半定量评分，染色肿瘤细胞百分比在0-1％之间记为0分，弱染色的肿瘤细胞大于1％记为1分，中等染色比例大于1％记为2分，强染色的比例大于1％记为3分，0分和1分定义为阴性，2分和3分定义为阳性。

6、数据分析

数据资料用均数±标准差表示，用SPSS 22.0统计分析软件进行数据的统计分析，独立样本t检验进行两组间比较，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

二、实验结果

1、动物模型一般情况的观察

接种人肝癌细胞HepG2约3天后，裸鼠右侧腋窝皮下接种部位均出现3mm～5mm的肿瘤结节，成瘤率为100％。16只裸鼠均存活，随机分为阿帕替尼处理组和溶剂对照组，治疗期间两组裸鼠存活良好，无一例死亡。随着瘤体体积的增加，对照组裸鼠逐渐出现精神萎靡、活动迟缓，食欲、体重较前下降。实验组裸鼠也有上述症状出现，但程度与对照组相比较轻。

2、裸鼠皮下肝癌移植瘤体积及生长曲线

给药前，实验组和对照组肿瘤体积分别为(116.23±25.78)mm³和(109.20±22.31)mm³，差异无统计学意义(P＝0.569)。随着给药时间的增加，两组移植瘤体积出现差异。末次给药24小时后测量瘤体体积，实验组和对照组肿瘤分别为(207.93±57.75)mm³和(152.52±34.45)mm³，差异有统计学意义(P＜0.05)。给药过程中，每3天测量并计算一次肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线，可见阿帕替尼处理组肿瘤体积增长速度明显减缓，见图1。2周后，颈脱法处死裸鼠并剥离瘤体，肉眼观可见实验组瘤体体积较对照组明显减小，见图2。

3、肝癌细胞中多药耐药相关基因MDR1、MRP2、LRP、GST-pi和TopoIIαmRNA的表达

Real-time PCR结果如图3所示，与DMSO对照组相比，阿帕替尼处理组肝癌细胞中多药耐药基因MDR1、LRP、GST-pi mRNA表达水平明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05)，其中，阿帕替尼对MDR1mRNA表达水平的下调作用最明显。而MRP2、TopoIIαmRNA表达水平在两组之间的差异无明显统计学意义(MRP2，P＝0.372；TopoIIα，P＝0.801)，详细数据资料见表2。

表2.阿帕替尼组和对照组耐药相关基因MDR1，MRP2，LRP，GST-pi和TopoIIαg基因在mRNA水平的表达

4、肝癌细胞中MDR1/P-gp、MRP2、LRP、GST-pi和TopoIIα在蛋白水平的表达

免疫组化结果显示(图4)，阿帕替尼处理组P-gp、LRP、GST-pi阳性表达率分别为(20.83±7.22)％，(29.17±14.43)％和(45.83±14.43)％,对照组的阳性表达率分别为(58.33±19.09)％，(58.33±19.09)％和(87.5±12.5)％,其中P-gp(P＝0.033)和GST-pi(P＝0.019)的表达差异具有统计学意义。但是，MRP2和TopoIIα的阳性表达率在实验组和对照组无明显差异(P＞0.05)。为了进一步验证免疫组化结果，我们还进行Western blot分析。如图5所示：与对照组相比，阿帕替尼处理组的P-gp、LRP、GST-pi蛋白电泳条带变浅，其中以P-gp条带最为明显(见图5)，表明阿帕替尼可以抑制MDR1、LRP、GST-pi基因在蛋白水平的表达，这与免疫组化的结果相一致。

三、讨论

研究表明，肝细胞癌占原发性肝癌的90％左右，是最常见的一种病理类型。全世界范围内，肝细胞癌(HCC)在所有的常见癌症类型中占第六位，并且是癌症死亡的第三大常见原因。由于诊断时大多数HCC病人已进展至肝内或肝外转移的晚期阶段而丧失手术机会，对于这些病人，化疗成为了一种最重要的治疗手段。然而，HCC的化疗却面临着一个巨大的挑战，由于耐药基因的表达，HCC对目前使用的很多细胞毒性药物都出现了耐药现象。

血管生成是肿瘤生长和转移的重要标志，抑制血管内皮生长因子信号通路是抗癌治疗的有效靶点之一。阿帕替尼，作为VEGFR-2小分子抑制剂，被证实具有广谱的抗实体瘤作用，包括胃癌，非小细胞肺癌，乳腺癌和肝细胞癌。在中国，阿帕替尼已批准用于标准化疗后仍有进展或转移的晚期胃癌患者。本研究中，我们利用人肝癌细胞株HepG2细胞成功建立了裸鼠皮下肝癌移植瘤模型，通过观察裸鼠一般情况发现，阿帕替尼治疗的裸鼠在精神、饮食、活动上较对照组有所改善。并且通过绘制移植瘤体的生长曲线直观的看到了阿帕替尼明显减缓肿瘤生长速度的作用。因此，我们在前期临床研究及个案报道的基础上，再次通过动物模型实验，验证了阿帕替尼对肝细胞癌瘤体生长的抑制作用。

研究表明，肝细胞癌对化疗药物的耐药性主要归因于MDR1基因的过表达，其表达产物P-gp是ATP结合盒转运超家族成员之一，在体内许多部位均有表达。随着多药耐药(MDR)药物的使用，P-gp的表达会逐渐上升。并且有研究认为，患者对化疗药物的敏感性与P-gp的表达呈反比。和P-gp一样，LRP以及GST-pi的过表达可以将细胞毒性药物排出细胞而使肿瘤组织对化疗产生强烈的抵抗。为进一步研究阿帕替尼对多药耐药基因表达的影响，本研究在裸鼠皮下肝癌移植瘤模型的基础上进行了real-time PCR、免疫组化和Westernblot分析。结果发现，无论是在mRNA还是蛋白水平，阿帕替尼都表现出了下调多药耐药相关基因MDR1、LRP、GST-pi表达的作用，其中对MDR1基因表达的抑制作用最为明显。这是阿帕替尼首次被证实具有逆转肿瘤细胞多药耐药基因表达的作用。

既往有报道认为，阿帕替尼逆转肿瘤细胞多药耐药性是通过抑制ATP结合盒转运蛋白的外排功能来实现的。其研究结果显示，用阿帕替尼处理多种实体肿瘤细胞株(KBv200,MCF-7/adr和S1-M1-80)后，MDR1基因的表达在mRNA和蛋白水平均无明显变化。与此不同，我们发现阿帕替尼能够显著下调肝细胞癌组织MDR1(P-gp)的表达，这是该药在逆转肿瘤细胞多药耐药性研究上的一个重要突破，但其作用机制还有待进一步的研究证实。

总之，阿帕替尼不仅具有良好的抗肝细胞癌作用，同时还能逆转肝癌细胞对化疗药物的多药耐药性。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。

序列表

<110> 杨盛力

刘利平

<120> 阿帕替尼在制备肿瘤耐药性基因抑制剂中的用途

<130> 176439

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atatcagcag cccacatcat 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

gaagcactgg gatgtccggt 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ccgtatcagg tttgccagtt 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

acctgttgga ggtgatccag 20

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

cagctggcca tcgagatca 19

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tccagtctct gagcctcatg c 21

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

accccagggc tctatgggaa 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

tgagggcaca agaagcccct 20

<210> 9

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

tgacagtgaa gaagacagc 19

<210> 10

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gagagacacc agaattcaa 19

<210> 11

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

agttgcgtta caccctttct tgac 24

<210> 12

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

gctcgctcca accgactgc 19

Claims

1.阿帕替尼在制备肿瘤多药耐药性相关基因抑制剂中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为肝癌。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述多药耐药性相关基因选自MDR1、LRP、GST-pi。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述阿帕替尼对多药耐药性相关基因具有抑制效果。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于阿帕替尼为所述肿瘤多药耐药性相关基因抑制剂的唯一有效成分或有效成分之一。

6.阿帕替尼在制备针对肝癌多药耐药性相关基因MDR1的抑制剂中的用途。

7.阿帕替尼在制备针对肝癌多药耐药性相关基因LRP的抑制剂中的用途。

8.阿替尼在制备针对肝癌多药耐药性相关基因GST-pi的抑制剂中的用途。

9.一种肝癌联合治疗药物组合，包括有效量的阿帕替尼和至少一种其他肝癌治疗药物。

10.根据权利要求9所述的肝癌联合治疗药物组合，其特征在于，所述其他肝癌治疗药物为肝癌化疗药物。