CN112933092A - Mdm2抑制剂在调控结肠癌化疗药物敏感性中的应用 - Google Patents
Mdm2抑制剂在调控结肠癌化疗药物敏感性中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112933092A CN112933092A CN202110302950.XA CN202110302950A CN112933092A CN 112933092 A CN112933092 A CN 112933092A CN 202110302950 A CN202110302950 A CN 202110302950A CN 112933092 A CN112933092 A CN 112933092A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nutlin
- colon cancer
- trail
- cells
- mdm2 inhibitor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 103
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 96
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 38
- 239000012819 MDM2-Inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 229940083338 MDM2 inhibitor Drugs 0.000 title claims abstract description 33
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title abstract description 24
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 title abstract description 9
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 title abstract description 4
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 81
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 claims abstract description 78
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 7
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 claims description 9
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 2
- BDUHCSBCVGXTJM-IZLXSDGUSA-N Nutlin-3 Chemical group CC(C)OC1=CC(OC)=CC=C1C1=N[C@H](C=2C=CC(Cl)=CC=2)[C@H](C=2C=CC(Cl)=CC=2)N1C(=O)N1CC(=O)NCC1 BDUHCSBCVGXTJM-IZLXSDGUSA-N 0.000 claims 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 claims 1
- BDUHCSBCVGXTJM-WUFINQPMSA-N 4-[[(4S,5R)-4,5-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methoxy-2-propan-2-yloxyphenyl)-4,5-dihydroimidazol-1-yl]-oxomethyl]-2-piperazinone Chemical group CC(C)OC1=CC(OC)=CC=C1C1=N[C@@H](C=2C=CC(Cl)=CC=2)[C@@H](C=2C=CC(Cl)=CC=2)N1C(=O)N1CC(=O)NCC1 BDUHCSBCVGXTJM-WUFINQPMSA-N 0.000 abstract description 126
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 abstract description 76
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 31
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 abstract description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 6
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 abstract description 4
- 102000046283 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Human genes 0.000 abstract 3
- 101000830565 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 10 Proteins 0.000 abstract 1
- 102000044949 human TNFSF10 Human genes 0.000 abstract 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 122
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 13
- 102100029855 Caspase-3 Human genes 0.000 description 13
- 101000911513 Homo sapiens Uncharacterized protein FAM215A Proteins 0.000 description 13
- 102100026728 Uncharacterized protein FAM215A Human genes 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 102000012199 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Human genes 0.000 description 4
- 108050002772 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Proteins 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 3
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 2
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 2
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 2
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 2
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 238000011226 adjuvant chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 2
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 102100026548 Caspase-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000006275 Ubiquitin-Protein Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010083111 Ubiquitin-Protein Ligases Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004791 biological behavior Effects 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 230000005773 cancer-related death Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 1
- 238000013042 tunel staining Methods 0.000 description 1
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 1
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1793—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及MDM2抑制剂在调控结肠癌化疗药物敏感性中的应用。本发明所述MDM2抑制剂为Nutlin‑3a,本发明通过实验证明,将Nutlin‑3a与5‑FU或TRAIL联合使用,可以显著增加结肠癌细胞对5‑FU、重组人TRAIL的敏感性,具有协同增效的效果。Nutlin‑3a与5‑FU或TRAIL联合使用后显著抑制结肠癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡;且联合用药能够显著抑制裸鼠皮下瘤模型的生长。本发明提供了Nutlin‑3a和5‑FU以及Nutlin‑3a和TRAIL联合用药治疗结肠癌的一种新方案,具有推动肿瘤临床治疗的巨大开发潜力和应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域,具体涉及MDM2抑制剂与结肠癌化疗药物联合使用,用于增加结肠癌化疗敏感性。
背景技术
结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是一种常见的胃肠道恶性肿瘤,是造成人类癌症相关死亡的第二大原因。目前对于结直肠癌的治疗仍以手术结合放化疗的方案为主,其中辅助化疗的敏感性是影响患者生存期的主要因素之一。研究显示,大多数患者在各种辅助化疗后3-12个月就会出现药物敏感性低、化疗耐受等现象。因此迫切需要寻找和补充新的更有效的克服耐药策略,从而实现更好的治疗效果。
MDM2(murine doubleminute 2,鼠双微体基因2)MDM2是一种E3泛素连接酶,通过与靶蛋白结合对其进行泛素化修饰介导蛋白质的降解,从而参与多种细胞生物学行为的调控。当细胞中MDM2高表达时,p53活性受到强烈抑制,导致p53无法发挥作用,造成细胞持续增殖从而诱导肿瘤的发生。对此,人们研发了多种MDM2抑制剂,其中Nutlin-3a是研究最为深入和广泛的一个靶向MDM2-p53相互作用的小分子抑制剂。
5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)作为胃肠道恶性肿瘤的一线治疗药物,单药或联合用药在结直肠癌的临床治疗中取得良好效果。然而,5-FU治疗的临床获益往往是短暂的,使用5-FU的患者易对其产生耐药性而使得总体有效率较低,大大降低化疗效果。
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosisinducing ligand,TRAIL)能够选择性地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无毒性作用,具有极大的临床应用前景。然而,相当多的肿瘤细胞对TRAIL具耐药阻碍了TRAIL的应用。
发明内容
本发明的目的是提供临床治疗结肠癌的新的用药趋势。发明人在临床实践中,发现MDM2抑制剂可改善结肠癌化疗药物的敏感性。在同等浓度下,将MDM2抑制剂与结肠癌化疗药物(5-FU及TRAIL)联合使用,可增强化疗药物对肿瘤细胞的抑制能力。
第一方面,本发明提供MDM2抑制剂在调控结肠癌对化疗药物敏感性中的应用。
第二方面,本发明提供MDM2抑制剂在制备提高结肠癌对化疗药物敏感性药物中的应用。所述MDM2抑制剂可用于制备提高结肠癌对TRAIL敏感性的药物;所述MDM2抑制剂用于制备提高结肠癌对5-氟脲嘧啶敏感性的药物。
在本发明所提供的应用中,Nutlin-3a通过诱导内质网应激从而增加结肠癌化疗敏感性,或Nutlin-3a通过诱导自噬增加结肠癌化疗敏感性。
第三方面,本发明提供一种组合物在制备治疗结肠癌药物中的应用,所述组合物包含MDM2抑制剂、5-氟脲嘧啶和/或肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL);在本发明所提供的药物组合物中,所述MDM2抑制剂为Nutlin-3a。
本发明提供的组合物,可抑制结肠癌细胞的生长、增殖或克隆;也可诱导结肠癌细胞的凋亡。
本发明提供的组合物,可抑制人结肠癌细胞RKO或人结肠癌细胞HCT116的生长、增殖或克隆;或抑制裸鼠结肠癌皮下实体瘤的生长。
第四方面,本发明还提供上述应用在制备提高结肠癌治疗效果的药物中的应用。具体地,为了制备提高结肠癌治疗效果的药物,将MDM2抑制剂与5-氟脲嘧啶或肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合使用。
本发明的有益效果至少在于:
(1)本发明通过实验证明,将Nutlin-3a和5-FU联合使用,可以显著增强5-FU的治疗效果;将Nutlin-3a和TRAIL联合使用,可以显著增强TRAIL的治疗效果,联合使用后显著抑制结肠癌细胞的生长、增殖,诱导结肠癌细胞的凋亡;
(2)本发明通过体外实验证实,将Nutlin-3a和5-FU联合使用或Nutlin-3a和TRAIL联合使用增强了裸鼠皮下瘤模型中的抗肿瘤效果,实现了协同增效的作用;
(3)本发明提供的Nutlin-3a和5-FU联用以及Nutlin-3a和TRAIL联合用药治疗结肠癌的新方案,为结肠癌的治疗提供了一种新的治疗药物和治疗途径,解决了临床治疗中结直肠癌患者经常发生化疗敏感性差的问题,还为MDM2抑制剂Nutlin-3a的应用提供了新的领域。
附图说明
图1为实施例1中不同浓度Nutlin-3a处理下的人结肠癌细胞存活率图。
图2为实施例1中不同浓度Nutlin-3a处理下的人结肠癌细胞克隆形成图。
图3为实施例1中不同浓度Nutlin-3a处理下的人结肠癌细胞凋亡情况图。
图4为实施例1中不同浓度Nutlin-3a处理人结肠癌细胞后的凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3的Western blotting结果图。
图5为实施例2中应用CompuSyn软件分析得到的RKO细胞各联合实验组的联合指数CI图。
图6为实施例2中应用CompuSyn软件分析得到的HCT116细胞各联合实验组的联合指数CI图。
图7为实施例2中Nutlin-3a单独用药或联合5-FU或联合TRAIL处理时,人结肠癌RKO细胞中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的Western blotting结果图。
图8为实施例2中Nutlin-3a单独用药或联合5-FU或联合TRAIL处理时,人结肠癌HCT116细胞中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的Western blotting结果图。
图9为实施例2中MDM2抑制剂Nutlin-3a单独用药或联合5-FU或联合TRAIL处理下的结肠癌细胞RKO细胞凋亡情况图。
图10为实施例2中MDM2抑制剂Nutlin-3a单独用药或联合5-FU或联合TRAIL处理下的结肠癌细胞HCT116细胞凋亡情况图。
图11为实施例3中Nutlin-3a单独用药或分别与5-FU、TRAIL联合用药处理下,结肠癌细胞增殖情况图。
图12为实施例3中Nutlin-3a单独用药或分别与5-FU、TRAIL联合用药处理下,结肠癌细胞成瘤图。
图13为实施例3中Nutlin-3a单独用药或分别与5-FU、TRAIL联合用药处理下裸鼠皮下结肠癌模型实体瘤TUNEL检测凋亡情况图,图示标尺为100μm。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
下面结合具体实施例对本申请作出详细说明。本发明使用针对于MDM2的小分子抑制剂Nutlin-3a以及化疗药物5-FU以及TRAIL,以下所述实施例中所使用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径获得,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。本发明具体实施例中主要说明Nutlin-3a能够增强结肠癌细胞对化疗药物5-FU以及TRAIL的敏感性,为临床癌症治疗提供新型的药物联合使用的范例。
本发明进行实验所要用到的材料与试剂:
细胞来源:人源结肠癌细胞HCT116细胞和RKO细胞购自美国American typeculture collection(ATCC)公司。
本研究中用到的细胞有人结肠癌HCT1160细胞和RKO细胞,两种细胞用DMEM培养基培养。细胞培养基购买于Gibco公司,用于培养细胞前加入10%胎牛血清和1%的青霉素与链霉素。
本研究用到的抗体详细信息见表1。
表1抗体信息表
抗体名称 | 抗体厂家 | 抗体货号 |
Tublin | SIGMA | T8203 |
Cleaved caspase 3 | Cell Signaling | 9661s |
Cleaved caspase 8 | Cell Signaling | 9496s |
Anti-Rabbit | abm | SH026 |
Anti-Mouse | abm | SH024 |
药物来源:MDM2抑制剂Nutlin-3a购自Sigma公司;5-FU和TRAIL均购自MCE公司。
MDM2抑制剂Nutlin-3a粉末用DMSO配成10mM初浓度,从MCE公司购买的5-FU粉末用DMSO配成10mM初浓度,TRAIL粉末用DMSO配成1mM初浓度。使用时加到培养基中的Nutlin-3a浓度范围为12.5-100μM,联合用药时,其中Nutlin-3a固定使用浓度为45uM,5-FU固定使用浓度为50ug/ml,TRAIL固定使用浓度为100ng/ml。
实施例1 MDM2抑制剂Nutlin-3a对结肠癌细胞存活、增殖和凋亡的影响
1、MDM2抑制剂Nutlin-3a对结肠癌细胞存活率的影响
选取人的结肠癌细胞HCT-116和人结肠癌细胞RKO,用含有10%FBS和1%双抗的DMEM培养基,常规培养于37℃、5%CO2的湿润培养箱中。待细胞长势良好时,将细胞消化后以1.2×104个细胞/每孔接种于96孔板中,每种细胞设6个副孔,共设置5组,待细胞完全贴壁后,用DMEM培养基稀释Nutlin-3a至浓度为12.5μM、25μM、50μM、100μM;每孔100μL,加入相应的96孔板中,对照组加100μL DMEM培养基;连续观察20h小时,每孔加入10μL CCK8,将96孔板避光放于孵箱中孵育2h后,用酶标仪测定450nm的吸光值,并根据公式计算细胞存活率。
细胞存活率(cell viability rate)=A用药组/A对照组×100%。
结果如图1所示,结肠癌细胞RKO和HCT116经过不同浓度MDM2抑制剂Nutlin-3a后,细胞存活率明显下降。
Nutlin-3a浓度为12.5μM时,人结肠癌细胞RKO的存活率平均值为66.51%;Nutlin-3a浓度为25μM时,人结肠癌细胞RKO的存活率平均值为35.55%;Nutlin-3a浓度为50μM时,人结肠癌细胞RKO的存活率平均值为24.97%;Nutlin-3a浓度为100μM时,人结肠癌细胞RKO的存活率平均值为23.28%。
Nutlin-3a浓度为12.5μM时,人结肠癌细胞HCT-116的存活率平均值为92.77%;Nutlin-3a浓度为25μM时,人结肠癌细胞HCT-116的存活率平均值为82.16%;Nutlin-3a浓度为50μM时,人结肠癌细胞HCT-116的存活率平均值为28.08%;Nutlin-3a浓度为100μM时,人结肠癌细胞HCT-116的存活率平均值为15.09%。
表明MDM2抑制剂Nutlin-3a能够有效降低结肠癌细胞的存活率并且呈浓度依赖性。
2、MDM2抑制剂Nutlin-3a对结肠癌细胞增殖的影响
将处于对数生长期的结直肠癌细胞RKO、HCT-116弃去培养瓶中培养液,加入1ml0.25%胰蛋白酶消化细胞1~2分钟,制成细胞悬液,取每孔500个细胞均匀铺到六孔板中,待细胞完全贴壁后,更换含不同浓度Nutlin-3a的培养基,继续在37℃培养箱中孵育细胞,孔板中出现肉眼可见克隆时终止培养,吸去培养基,用PBS小心清洗,4%的组织固定液固定细胞20分钟,弃去固定液,用结晶紫染色20分钟,PBS清洗,在空气中风干后拍照。
结果如图2所示,结肠癌细胞RKO和HCT116经过不同浓度MDM2抑制剂Nutlin-3a后,克隆形成数目明显下降,表明MDM2抑制剂Nutlin-3a可以显著抑制结肠癌细胞RKO和HCT116克隆形成能力,抑制其增殖能力。
3、MDM2抑制剂Nutlin-3a对结肠癌细胞凋亡的影响
将对数生长期的RKO和HCT116细胞用胰酶消化后,取5×105细胞均匀铺到六孔板中,待细胞贴壁后,更换成含有0μM、35μM、50uM、75uM Nutlin-3a的培养基孵育结肠癌细胞;孵育20小时以后消化细胞,根据凋亡检测试剂盒的方法处理细胞,Annexin V和PI染色完成以后,在1小时以内通过利用流式细胞仪分析各组处于正常存活、早期凋亡及晚期凋亡的细胞比例;Q1-LR代表早期凋亡,Q1-UR代表晚期凋亡和坏死细胞,Q1-UL代表损伤细胞数,Q1-LL代表正常活细胞数。
图3结果显示,对照组人结肠癌细胞RKO凋亡率为1.98%;Nutlin-3a浓度为35μM时,人结肠癌细胞RKO的凋亡率为3.73%;Nutlin-3a浓度为50μM时,人结肠癌细胞RKO的凋亡率为4.6%;Nutlin-3a浓度为75μM时,人结肠癌细胞RKO的凋亡率为14.43%;
对照组人结肠癌细胞HCT116凋亡率为2.48%;Nutlin-3a浓度为35μM时,人结肠癌细胞HCT116的凋亡率为3.13%;Nutlin-3a浓度为50μM时,人结肠癌细胞HCT116的凋亡率为8.72%;Nutlin-3a浓度为75μM时,人结肠癌细胞HCT116的凋亡率为11.13%。
Nutlin-3a处理组凋亡率高于对照组,并呈现剂量的依懒性。
取对数生长期的结肠癌细胞,常规胰酶消化细胞,消化后均匀接种到6cm的皿里,等到细胞完全贴壁后,换新鲜培养基并加药,Nutlin-3a浓度设置为:0μM、35μM、50μM、75μM;在显微镜下观察细胞形态,约20小时后,观察到最大加药浓度细胞大概有50%细胞皱缩、漂浮时,收集细胞,加入适量的裂解液使沉淀充分裂解,离心后取上清。按照说明书上的方法用BCA法测量蛋白浓度,根据蛋白浓度计算出上样体积,剩余蛋白样品加入适量5×的蛋白上样缓冲液,使5×的蛋白上样缓冲液在蛋白中稀释成1×,混匀,置于金属浴中,100℃加热10min变性,根据标准方法进行免疫印迹分析,相关抗体见抗体信息表。
结果如图4所示,Nutlin-3a浓度为0μM、35uM、50uM、75uM时,人结肠癌细胞RKO凋亡相关蛋白cleaved caspase-3灰度值与Tublin灰度比值分别为:0.20、0.51、0.75、0.95。人结肠癌细胞HCT116凋亡相关蛋白cleaved caspase-3灰度值与Tublin灰度比值分别为:0.06、0.13、0.57、1.52。
随着药物浓度的增加,Nutlin-3a诱导结肠癌细胞RKO和HCT116凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达逐渐增强。
实施例2 MDM2抑制剂Nutlin-3a分别与5-FU、TRAIL联合用药对结肠癌细胞存活、增殖和凋亡的影响
常规培养结肠癌细胞RKO、HCT116,消化后并将细胞以1.2×104个细胞/每孔接种于96孔板中,每种细胞设3个副孔,共设置15组,分别为对照组、5-FU组(50μg/ml)、5-FU组(60μg/ml)、TRAIL组(80ng/mL)、TRAIL组(100ng/mL)、Nutlin-3a(45μM)、Nutlin-3a(55μM)、5-FU+Nutlin-3a组(5-FU(50μM),Nutlin-3a(45μM))),5-FU+Nutlin-3a组(5-FU(50μM),Nutlin-3a(55μM))),5-FU+Nutlin-3a组(5-FU(60μM),Nutlin-3a(45μM))),5-FU+Nutlin-3a组(5-FU(60μM),Nutlin-3a(55μM))),TRAIL+Nutlin-3a组(TRAIL(80ng/mL),Nutlin-3a(45μM))),TRAIL+Nutlin-3a组(TRAIL(80ng/mL),Nutlin-3a(55μM))),TRAIL+Nutlin-3a组(TRAIL(100ng/mL),Nutlin-3a(45μM))),TRAIL+Nutlin-3a组(TRAIL(100ng/mL),Nutlin-3a(55μM))),根据不同分组应用药物作用细胞,作用20小时后,每孔加入10μL CCK8,将96孔板避光放于孵箱中孵育2h后,用酶标仪测定450nm的吸光值,为了明确探索5-FU/TRAIL与Nutlin-3a联合使用是否具有协同效果,应用CompuSyn软件分析各联合实验组的联合指数(combination index,CI),结果如表2及图5所示。
表2 RKO细胞不同药物处理组的联合指数CI
图5及表2结果显示,在RKO细胞中,5-FU与Nutlin-3a联用,其中给药浓度5-FU50ug/ml和Nutlin-3a 55uM时,CI<0.9,药物联合具有协同效果;TRAIL与Nutlin-3a联用,其中给药浓度TRAIL 100ng/ml和Nutlin-3a 55uM时,CI<0.9,药物协同效率最高。因此Nutlin-3a与5FU/TRAIL联用能够协同抑制RKO细胞的增殖,其中给药浓度为5-FU 50ug/ml、TRAIL 100ng/ml和Nutlin-3a 55uM。这表明在结肠癌细胞RKO中Nutli-3a对5-FU和TRAIL有很强的药物增敏作用。
Nutlin-3a与5FU/TRAIL联用在HCT116细胞中的协同增效探究结果如图6和表3所示。
表3结肠癌细胞HCT116不同药物处理组的联合指数CI
图6及表3结果显示,在HCT116细胞中5-FU与Nutlin-3a联用,大部分CI<0.9,因此5-FU与Nutlin-3a联用能够协同抑制HCT116细胞的存活率,其中给药浓度为5-FU 60ug/ml和Nutlin-3a 55uM时,药物协同效率最高。TRAIL与Nutlin-3a联用,其中给药浓度TRAIL100ng/ml和Nutlin-3a 55uM时,CI<0.9,二者具有协同作用。因此Nutlin-3a与5FU/TRAIL联用能够协同抑制HCT116细胞的增殖,其中给药浓度为5-FU 60ug/ml、TRAIL 100ng/ml和Nutlin-3a 55uM。这表明在结肠癌细胞HCT116中Nutli-3a对5-FU和TRAIL有很强的药物增敏作用。
将RKO和HCT116细胞以5×106/皿均匀铺到8个6cm小皿中,共设置8组,分别为为对照组,5-FU(45μM),Nutlin-3a(55μM),Nutlin-3a+5-FU(Nutlin-3a(45μM),5-FU(50μM));对照组,TRAIL(100ng/mL),Nutlin-3a(55μM),Nutlin-3a+TRAIL(Nutlin-3a(45μM),TRAIL(100ng/mL));根据实验分组分别加药处理细胞,待合加药组30-40%细胞皱缩、漂浮时收样提取蛋白,用Western blot的方法检测每组细胞中凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3的表达量,以Tublin作为蛋白表达量的内参。结果如图7及图8。
图7结果显示,结肠癌RKO中:对照组,5-FU,Nutlin-3a,Nutlin-3a+5-FU凋亡相关蛋白cleaved caspase-3灰度值与Tublin灰度比值分别为:0.04、0.07、0.18、1.05;对照组,TRAIL,Nutlin-3a,Nutlin-3a+TRAIL凋亡相关蛋白cleaved caspase-3灰度值与Tublin灰度比值分别为:0.05、0.03、0.35、1.08。
图8结果显示结肠癌HCT116中:对照组,5-FU,Nutlin-3a,Nutlin-3a+5-FU凋亡相关蛋白cleaved caspase-3灰度值与Tublin灰度比值分别为:0.06、0.22、0.28、1.12;对照组,TRAIL,Nutlin-3a,Nutlin-3a+TRAIL凋亡相关蛋白cleaved caspase-3灰度值与Tublin灰度比值分别为:0.09、0.33、0.16、0.77。
合加药组结肠癌RKO和HCT116细胞的凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3蛋白水平均比单独加药组明显要高,这提示Nutlin-3a与5-FU和TRAIL联合使用能够显著增强5-FU和TRAIL诱导结肠癌细胞凋亡的能力。
将RKO和HCT116细胞用胰酶消化,以4×105个/孔均匀铺到六孔板的6个孔中,待细胞完全贴壁后,按照上诉实验分组分别加相应浓度药物处理细胞,孵育16小时以后收集细胞,并按照凋亡试剂盒说明书分组进行Annexin V和PI染色,在1小时以内利用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,结果如图9及图10所示。
图9结果显示,结肠癌RKO中:对照组,5-FU,TRAIL,Nutlin-3a,Nutlin-3a+5-FU,Nutlin-3a+TRAIL分别处理细胞后,RKO的凋亡率分别为:2.41%、10.18%、4.95%、5.9%,17.59%,17.69%。
图10结果显示,结肠癌HCT116中:对照组,5-FU,TRAIL,Nutlin-3a,Nutlin-3a+5-FU,Nutlin-3a+TRAIL分别处理细胞后,HCT116的凋亡率分别为:2.49%、5.36%、4.72%、10.85%,23.75%,18.24%。
5-FU和TRAIL联合药物组结肠癌RKO和HCT116细胞的凋亡相关蛋白Cleavedcaspase-3蛋白水平均比单独加药组明显要高,这提示Nutlin-3a与5-FU和TRAIL联合使用,显著增强了5-FU和TRAIL诱导细胞凋亡的效果。
实施例3 Nutlin-3a分别与5-FU和TRAIL联合使用在动物水平的抗肿瘤作用
实施例2的体外实验证明了在细胞水平上,Nutlin-3a分别与5-FU和TRAIL联合使用对RKO细胞和HCT116细胞具有明显的肿瘤杀伤作用。
本实施例进行动物水平的实验,具体步骤如下:
大量培养HCT116细胞,通过皮下注入约5周大的裸鼠体内,每只裸鼠皮下约注射1×107个细胞,注射体积为200μL。约7天左右将裸鼠随机分为5组(PBS组,5-FU组、TRAIL组、5-FU+Nutlin-3a组、TRAIL+Nutlin-3a组),分别应用相应药物治疗:PBS组:腹腔注射200ulPBS/天、5-FU组:腹腔注射5-FU(23mg/kg/天)、TRAIL组:瘤内注射TRAIL(1μg/天)、5-FU+Nutlin-3a组:口服Nutlin-3a(150mg/kg/天)同时腹腔注射5-FU(23mg/kg/天)、TRAIL+Nutlin-3a组:口服Nutlin-3a(150mg/kg/天)同时瘤内注射TRAIL(1μg/天)。每隔三天用游标卡尺测量肿瘤的长(a)和宽(b),并通过以下公式:体积V=0.5ab2计算肿瘤体积并记录。
图11的结果显示随着注射药物天数的增加,PBS组的裸鼠肿瘤体积增长的最快,其次是5-FU组,再是TRAIL组,而Nutlin-3a与5-FU和TRAIL药物联合组经过15天的测量,肿瘤体积几乎没有增长,说明药物联合处理对裸鼠体内的肿瘤具有很好的抑制作用。待药物处理15天时,我们把每组每只裸鼠的肿瘤组织切下并按组按大小排好,可以清楚的看到药物联合组对肿瘤的抑制作用非常明显(图12)。肿瘤的石蜡组织切片TUNEL染色显示药物联用的肿瘤组织中TUNEL荧光强度明显增强,凋亡率增加(图13)。这些与体外的细胞实验结果一致。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.MDM2抑制剂在调控结肠癌对化疗药物敏感性中的应用。
2.MDM2抑制剂在制备提高结肠癌化疗药物敏感性的药物中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述结肠癌化疗药物为TRAIL和/或5-氟脲嘧啶。
4.一种组合物在制备治疗结肠癌药物中的应用,其特征在于,所述组合物包含MDM2抑制剂和5-氟脲嘧啶和/或TRAIL。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述MDM2抑制剂为Nutlin-3a。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,抑制结肠癌细胞的生长、增殖或克隆或诱导结肠癌细胞的凋亡。
7.根据权利要求4-6任一项所述的应用,其特征在于,所述结肠癌细胞为人结肠癌细胞RKO或人结肠癌细胞HCT116。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,抑制结肠癌皮下实体瘤的生长。
9.权利要求1-3任一项所述应用或权利要求4-8任一项所述应用在制备提高结肠癌治疗效果的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,将MDM2抑制剂与5-氟脲嘧啶或TRAIL联合使用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110302950.XA CN112933092A (zh) | 2021-03-22 | 2021-03-22 | Mdm2抑制剂在调控结肠癌化疗药物敏感性中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110302950.XA CN112933092A (zh) | 2021-03-22 | 2021-03-22 | Mdm2抑制剂在调控结肠癌化疗药物敏感性中的应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112933092A true CN112933092A (zh) | 2021-06-11 |
Family
ID=76227569
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110302950.XA Pending CN112933092A (zh) | 2021-03-22 | 2021-03-22 | Mdm2抑制剂在调控结肠癌化疗药物敏感性中的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112933092A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113913519A (zh) * | 2021-10-08 | 2022-01-11 | 复旦大学附属中山医院 | Cul9作为分子标志物在制备调控结直肠癌铁死亡中的应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110302382A (zh) * | 2019-07-11 | 2019-10-08 | 重庆大学 | 一种靶向肿瘤细胞的药物 |
-
2021
- 2021-03-22 CN CN202110302950.XA patent/CN112933092A/zh active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110302382A (zh) * | 2019-07-11 | 2019-10-08 | 重庆大学 | 一种靶向肿瘤细胞的药物 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
MAMIKO IMANISHI ET AL.: "Augmented antitumor activity of 5-fluorouracil by double knockdown of MDM4 and MDM2 in colon and gastric cancer cells", 《CANCER SCIENCE》 * |
TAKESHI HORI ET AL.: "Nutlin-3 enhances tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)-induced apoptosis through up-regulation of death receptor 5 (DR5) in human sarcoma HOS cells and human colon cancer HCT116 cells", 《CANCER LETTERS》 * |
WENYUE LIU ET AL: "Bevacizumab‐enhanced antitumor effect of 5‐fluorouracil via upregulation of thymidine phosphorylase through vascular endothelial growth factor A/vascular endothelial growth factor receptor 2-specificity protein 1 pathway", 《CANCER SCIENCE》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113913519A (zh) * | 2021-10-08 | 2022-01-11 | 复旦大学附属中山医院 | Cul9作为分子标志物在制备调控结直肠癌铁死亡中的应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Lu et al. | Depletion of tumor-associated macrophages enhances the anti-tumor effect of docetaxel in a murine epithelial ovarian cancer | |
Xu et al. | Anti‐invasion effect of rosmarinic acid via the extracellular signal‐regulated kinase and oxidation–reduction pathway in Ls174‐T cells | |
Kim et al. | Human neural stem cells target experimental intracranial medulloblastoma and deliver a therapeutic gene leading to tumor regression | |
Fischer et al. | Chemotherapeutic selectivity conferred by selenium: a role for p53-dependent DNA repair | |
Li et al. | Aiduqing formula inhibits breast cancer metastasis by suppressing TAM/CXCL1-induced Treg differentiation and infiltration | |
Li et al. | A novel chalcone derivative has antitumor activity in melanoma by inducing DNA damage through the upregulation of ROS products | |
Chen et al. | Oligo-Fucoidan supplementation enhances the effect of Olaparib on preventing metastasis and recurrence of triple-negative breast cancer in mice | |
Zhang et al. | Ophiopogonin B induces gastric cancer cell death by blocking the GPX4/xCT‑dependent ferroptosis pathway | |
EP3807410A1 (en) | Combination therapies comprising c/ebp alpha sarna | |
Lim et al. | Catechol inhibits epidermal growth factor-induced epithelial-to-mesenchymal transition and stem cell-like properties in hepatocellular carcinoma cells | |
Cao et al. | Knocking down of Polo-like kinase 2 inhibits cell proliferation and induced cell apoptosis in human glioma cells | |
CN112933092A (zh) | Mdm2抑制剂在调控结肠癌化疗药物敏感性中的应用 | |
TWI606835B (zh) | 基於靈芝多醣之組合物及治療癌症之方法 | |
WO2020181802A1 (zh) | 一种有效抗恶性肿瘤的药物组合物及其应用 | |
CN108888620B (zh) | 化合物knk437的新应用 | |
CN112263578B (zh) | Tipranavir在制备杀伤肿瘤干细胞和肿瘤细胞的癌症治疗药物中的用途 | |
CN112138163B (zh) | PPARG激活子联合SIRPα抗体在制备肿瘤免疫药物中的应用 | |
Huang et al. | Evidence that high-migration drug-surviving MOLT4 leukemia cells exhibit cancer stem cell-like properties | |
Si et al. | Chamaejasmin B decreases malignant characteristics of mouse melanoma B16F0 and B16F10 cells | |
Vanli et al. | Investigation of the effects of Theranekron and Sorafenib treatments on carcinogenesis, apoptosis and biochemical profile in hepatocellular carcinoma in rats | |
He et al. | Leukemoid reaction associated with transitional cell carcinoma: a case report and literature review | |
CN115869308B (zh) | 一种小分子化合物在制备抗结直肠癌药物中的应用 | |
CN118059099B (zh) | 帕罗西汀联合asct2抑制剂用于制备治疗肝癌的药物中的应用及药物组合物 | |
CN101502508B (zh) | 一种5-氧代-4-亚烯基-吡唑衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN114288410B (zh) | Src抑制剂和fak抑制剂在制备用于抑制肺癌转移的药物中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |