CN108392634A

CN108392634A - B7s1抑制剂在制备肝癌药物中的用途

Info

Publication number: CN108392634A
Application number: CN201810266177.4A
Authority: CN
Inventors: 董晨; 黎静; 倪凌
Original assignee: Tsinghua University
Current assignee: Tsinghua University
Priority date: 2018-03-28
Filing date: 2018-03-28
Publication date: 2018-08-14

Abstract

本发明提出了治疗肝癌的新靶点B7S1，所述靶点降低肝癌中细胞毒性T淋巴细胞的活性。靶向B7S1的抑制剂可促进CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞表面的CD107a表达；促进Granzyme B、perforin或IFN‑γ表达，从而治疗或减轻肝癌。

Description

B7S1抑制剂在制备肝癌药物中的用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及B7S1在治疗或减轻肝癌中的用途、药物组合物以及筛选药物的方法。

背景技术

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是高发的，危害极大的恶性肿瘤。同时肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)——一种与炎症高度相关的癌症——肿瘤微环境中存在大量的PD-1⁺衰竭型CD8⁺T细胞，anti-PD-1免疫治疗在HCC病人中的总体应答率只有20％(El-Khoueiry et al.,2017)。

肝癌的治愈率低，寻找肝癌新的治疗靶点以及新的治疗方法具有深远意义。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

发明人发现，肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)病人外周血中髓系抗原呈递细胞上B7S1(B7family member 1，也称B7-H4或B7x)的表达水平均显著高于健康人；而且，HCC病人的血清可诱导髓系抗原呈递细胞表达B7S1，说明肝癌疾病相关因子可以使外周血中的抗原呈递细胞上调B7S1。因此，申请人认为，B7S1在外周血中的表达或许可以作为HCC诊断的参考生物标志物之一。并且发明人通过进一步地研究发现，在Hepa1-6小鼠模型中阻断B7S1信号也可以增强肿瘤中CTL的活性，B7S1拮抗剂与anti-PD-1联合用药在Hepa1-6小鼠模型中可协同地增强抗肿瘤免疫反应。因此，申请人认为，B7S1可以作为肝癌肿瘤免疫治疗的新靶点。

基于上述发现，在本发明的第一方面，本发明提出了B7S1在治疗或减轻肝癌中的用途。发明人发现，B7S1可以作为肝癌肿瘤免疫治疗的新靶点。根据本发明的具体实施例，所述用途是通过拮抗B7S1的功能或抑制B7S1的表达来实现的。根据本发明的再一具体实施例，所述治疗或减轻肝癌是通过促进肝癌中细胞毒性T淋巴细胞的活性；促进CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞表面的CD107a表达；促进Granzyme B、perforin或IFN-γ表达来实现的。

发明人通过实验发现，肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)病人外周血中髓系抗原呈递细胞上B7S1的表达水平均显著高于健康人；在Hepa1-6小鼠模型中，阻断B7S1信号可抑制HCC的进展，增强肿瘤中细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活性，CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)表面的CD107a表达增加、刺激后Granzyme B、perforin和IFN-γ表达水平上调。进而，拮抗B7S1的功能或抑制B7S1表达，在促进肝癌中细胞毒性T淋巴细胞的活性，促进CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞表面的CD107a表达，促进Granzyme B、perforin或IFN-γ表达，治疗或减轻肝癌方面具有显著效果。

根据本发明的实施例，上述用途还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述B7S1表达于髓系抗原呈递细胞。发明人发现，在HCC模型中，B7S1高表达于髓系抗原呈递细胞，但在CD3阳性的T细胞上表达水平低，在CD45阴性的非免疫细胞上不表达；抑制B7S1在髓系抗原呈递细胞上功能发挥或表达，在治疗或减轻肝癌方面效果更加显著。

根据本发明的实施例，所述髓系抗原呈递细胞包括选自CD11b阳性、F4/80阳性和CD11c阳性的抗原呈递细胞的至少之一。发明人发现，B7S1在CD11b阳性、F4/80阳性和CD11c阳性的髓系抗原呈递细胞中的表达量更高，拮抗B7S1在CD11b阳性、F4/80阳性和CD11c阳性的髓系抗原呈递细胞中的功能或抑制B7S1在CD11b阳性、F4/80阳性和CD11c阳性的髓系抗原呈递细胞中表达，在治疗或减轻肝癌方面效果更加显著。

B7S1拮抗剂或用于拮抗B7S1的功能或抑制B7S1的表达的试剂不受特别限制，只要具有拮抗B7S1的功能或抑制B7S1的表达的功能即可，包括但不限于anti-B7S1抗体、B7S1-shRNA、anti-B7S1R抗体、B7S1R-shRNA或其他任何可以拮抗B7S1的功能的小分子化合物。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种药物组合物。根据本发明的实施例，所述药物组合物包括：第一试剂，所述第一试剂用于拮抗B7S1的功能或抑制B7S1的表达。发明人通过实验发现，肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)病人外周血中髓系抗原呈递细胞上B7S1的表达水平均显著高于健康人；在Hepa1-6小鼠模型中，阻断B7S1信号可抑制HCC的进展，增强肿瘤中细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活性，CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)表面的CD107a表达增加、刺激后Granzyme B、perforin和IFN-γ表达水平上调。进而，包含具有拮抗B7S1的功能或抑制B7S1的表达的第一试剂的药物组合物在促进肝癌中细胞毒性T淋巴细胞的活性；促进CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞表面的CD107a表达；促进Granzyme B、perforin或IFN-γ表达；治疗或减轻抑制肝癌方面具有显著效果。

根据本发明的实施例，上述药物组合物还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包括：第二试剂，所述第二试剂用于抑制PD-1通路。发明人通过实验发现，对B7S1和PD-1通路的双重阻断可以通过作用于同一细胞中的共同下游信号通路来协同地激活抗肿瘤CD8⁺TIL。进一步包括所述第二试剂的药物组合物可同时阻断B7S1和PD-1通路，协同地增强抗肿瘤免疫反应，扭转T细胞衰竭，改善肿瘤免疫治疗的疗效。

B7S1拮抗剂或用于拮抗B7S1的功能或抑制B7S1的表达的第一试剂不受特别限制，只要具有拮抗B7S1的功能或抑制B7S1的表达的功能即可，包括但不限于anti-B7S1抗体、B7S1-shRNA、anti-B7S1R抗体、B7S1R-shRNA或其他任何可以拮抗B7S1的功能的小分子化合物。

根据本发明的实施例，所述第二试剂包括anti-PD-1抗体，anti-PD-L1抗体，PD-1-shRNA,PD-L1-shRNA的至少之一。

根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶媒或它们的组合。

根据本发明的实施例，所述药物组合物更进一步地包含其它抗增殖剂，所述抗增殖剂是美法仑、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链脲佐菌素、顺铂、卡铂、奥沙利铂、达卡巴嗪、替莫唑胺、丙卡巴肼、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他滨、巯基嘌呤、氟达拉滨、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇、多西紫杉醇、拓扑替康、伊立替康、依托泊苷、曲贝替定、更生霉素、多柔比星、表柔比星、道诺霉素、米托蒽醌、博来霉素、丝裂霉素C、伊沙匹隆、他莫昔芬、氟他胺、戈那瑞林类似物、甲地孕酮、强的松、地塞米松、甲泼尼龙、沙利度胺、干扰素α、亚叶酸钙、西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司、阿法替尼、阿西替尼、博舒替尼、卡博替尼、色瑞替尼、克卓替尼、达拉菲尼、达沙替尼、厄洛替尼、吉非替尼、依鲁替尼、盐酸埃克替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕唑帕尼、哌加他尼、普纳替尼、拉多替尼、瑞格菲尼、鲁索利替尼、索拉菲尼、舒尼替尼、托法替尼、曲美替尼、凡德他尼、威罗菲尼、甲磺酸阿帕替尼、马赛替尼、丙氨酸布立尼布、西地尼布、达可替尼、福他替尼、二磷酸莫替沙尼、来那替尼、司美替尼、替吡法尼、巴非替尼、多维替尼、塞卡替尼、替拉替尼、替沃扎尼、阿仑单抗、贝伐单抗、贝伦妥单抗维多汀、卡妥索单抗、西妥昔单抗、地诺单抗、吉妥珠单抗、伊匹单抗、尼妥珠单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、idelalisib、duvelisib、gilteritinib、buparlisib、taselisib、copanlisib、voxtalisib、pilaralisib、sonolisib、perifosine、alectinib、ibrutinib、pertuzumab、nintedanib、cobimetinib、temsirolimus、sirolimus、pixantrone或它们的任意组合。

在本发明的第三方面，本发明提出了一种筛选药物的方法，所述药物用于治疗或减轻肝癌。根据本发明的实施例，所述方法包括将候选药物与肝癌微环境接触；比较所述接触前后肝癌微环境中抗原呈递细胞上B7S1的功能或表达，其中，所述接触后，肝癌微环境中抗原呈递细胞上B7S1功能受到抑制或表达量下降，是所述候选药物为目标药物的指示。如前所述，发明人发现，拮抗B7S1的功能或抑制B7S1的表达，可有效阻断B7S1信号，进而可有效抑制肝癌的生长和进展，B7S1可以作为肝癌治疗的新靶点。进而通过上述方法筛选出的目标药物可用于治疗或减轻肝癌。

根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述方法进一步包括比较所述接触前后肝癌微环境中细胞毒性T淋巴细胞的活性，其中，所述接触后，肝癌微环境中细胞毒性T淋巴细胞的活性增强是所述候选药物为目标药物的指示。如前所述，发明人发现，在Hepa1-6小鼠模型中，阻断B7S1信号可增强肿瘤中细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活性，进而如果候选药物使得肝癌微环境中细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活性增强，那么筛选获得的目标药物在抑制肝癌的生长效果方面更加显著。

根据本发明的实施例，所述方法进一步包括比较所述接触前后肝癌微环境中CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞表面的CD107a表达量，其中，肝癌微环境中CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞表面的CD107a表达量增多，是所述候选药物为目标药物的指示。如前所述，在Hepa1-6小鼠模型中，阻断B7S1信号后，CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)表面的CD107a表达增加，肿瘤中细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活性增强。进而，如果候选药物使得肝癌微环境中CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞表面的CD107a表达量增多，那么筛选获得的目标药物在抑制肝癌的生长效果方面更加显著。

根据本发明的实施例，所述方法进一步包括比较所述接触前后肝癌微环境中CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞中Granzyme B、perforin或IFN-γ表达量，其中，所述接触后，GranzymeB、perforin或IFN-γ表达量增多，是所述候选药物为目标药物的指示。如前所述，发明人发现，在Hepa1-6小鼠模型中，阻断B7S1信号后，Granzyme B、perforin和IFN-γ表达水平上调，进而，如果候选药物使得CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞Granzyme B、perforin和IFN-γ表达水平上调，筛选获得的目标药物在治疗肝癌的效果方面更加显著。

附图说明

图1是根据发明实施例的B7S1在健康人和HCC病人外周血中髓系细胞亚群上的表达水平的结果图；

图2是根据本发明实施例的用健康人或HCC病人的血清培养健康人外周血单核细胞，后用流式细胞技术分析pDC(a)和mDC(b)细胞表面B7S1的表达水平的结果图；

图3是根据本发明实施例的B7S1在HCC病人不同组织中的髓系细胞亚群上的表达水平的结果图；

图4是根据本发明实施例的B7S1在HCC病人肝组织中M1型和M2型巨噬细胞上的表达水平的结果图；

图5是根据本发明实施例的B7S1在HCC病人的正常肝组织、癌旁组织和肿瘤中的表达水平的结果图；

图6是根据本发明实施例的PD-L1在HCC病人不同组织中髓系细胞亚群上的表达水平的结果图；

图7是根据本发明实施例的PD-L1在HCC病人的正常肝组织、癌旁组织和肿瘤中的表达的结果图；

图8是根据本发明实施例的B7S1R在健康人和HCC病人外周血中淋巴细胞亚群上的表达水平的结果图；

图9是根据本发明实施例的B7S1R在HCC病人不同组织中的淋巴细胞亚群上的表达水平的结果图；

图10是根据本发明实施例的肿瘤中CD8⁺T细胞的功能缺陷与B7S1或PD-L1的表达水平的相关性的结果图；

图11是根据本发明实施例的B7S1在小鼠Hepa1-6肿瘤中的表达水平的结果图；

图12是根据本发明实施例的B7S1R在小鼠Hepa1-6肿瘤中淋巴细胞上的表达水平的结果图；

图13是根据本发明实施例的阻断B7S1信号对小鼠Hepa1-6肿瘤生长影响的结果图；

图14是根据本发明实施例的野生型小鼠和B7S1敲除鼠的Hepa1-6荷瘤小鼠不同组织中T细胞亚群的比例的结果图；以及

图15是根据本发明实施例的野生型小鼠和B7S1敲除鼠的Hepa1-6荷瘤小鼠中CD8⁺T细胞的效应功能的结果图。

具体实施方式

定义和一般术语

除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。

术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。

如本发明所使用的术语“治疗”任何疾病或病症，在其中一些实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一些实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在另一些实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在另一些实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发生或恶化。

药物组合物

本发明提供了一种药物组合物，包括用于拮抗B7S1的功能或抑制B7S1表达的第一试剂。任选地，所述药物组合物进一步包含于抑制PD-1通路的第二试剂。任选地，所述药物组合物进一步包含至少一种药学上可接受的载体、佐剂或赋形剂，以及任选地，其它的治疗和/或预防成分。

合适的载体、佐剂和赋形剂对于本领域技术人员是熟知的并且详细描述于例如Ansel H.C.et al.,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems(2004)Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia；Gennaro A.R.et al.,Remington：The Science and Practice of Pharmacy(2000)Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia；和Rowe R.C.,Handbook of Pharmaceutical Excipients(2005)Pharmaceutical Press,Chicago中。

本发明所用“药学上可接受的赋形剂”意指与给药剂型或药物组合物一致性相关的药学上可接受的材料、混合物或溶媒。每种赋形剂在混合时必须与药物组合物的其它成分相容，以避免对患者给药时会大大降低本发明药物组合物活性成分的功效。此外，每种赋形剂必须是药学上可接受的，例如，具有足够高的纯度。

合适的药学上可接受的赋形剂会依所选具体剂型而不同。此外，可根据它们在组合物中的特定功能来选择药学上可接受的赋形剂。例如，可选择能有助于生产均一剂型的某些药学上可接受的赋形剂。可选择能有助于生产稳定剂型的某些药学上可接受的赋形剂。可选择对患者给药时有助于携带或运输本发明药物组合物活性成分从身体的一个器官或部分到身体的另一个器官或部分的某些药学上可接受的赋形剂。可选择增强患者依从性的某些药学上可接受的赋形剂。

合适的药学上可接受的赋形剂包括以下类型的赋形剂：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、造粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、矫味剂、掩味剂、着色剂、防结块剂、保湿剂、螯合剂、塑化剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域技术人员可认识到，某些药学上可接受的赋形剂可提供不止一种功能，并提供可供选择的功能，这取决于制剂中存在多少该赋形剂和制剂中存在哪些其他赋形剂。

技术人员掌握本领域的知识和技能，以使他们能选择用于本发明的适当量的合适的药学上可接受的赋形剂。此外，存在大量技术人员可获得的资源，他们描述药学上可接受的赋形剂，并用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington'sPharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company),The Handbook ofPharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited),and The Handbook ofPharmaceutical Excipients(the American Pharmaceutical Association and thePharmaceutical Press)。

在Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st edition,2005,ed.D.B.Troy,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,and Encyclopedia ofPharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrick and J.C.Boylan,1988-1999,MarcelDekker,New York中披露了用于配置药学上可接受的组合物的各种载体，和用于其制备的公知技术，这些文献各自的内容通过引用并入本发明。除任何诸如因产生任何不期望的生物作用，或以有害方式与药学上可接受组合物中的任何其它成分发生相互作用而与本发明药物组合物活性成分不相容的任何常用载体外，关注其应用属于本发明的范围。

本发明药物组合物活性成分通常被配制成适合于通过所需途径对患者给药的剂型。例如，剂型包括那些适合于以下给药途径的剂型：(1)口服给药，例如片剂、胶囊剂、囊片剂、丸剂、含片剂、粉剂、糖浆剂、酏剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、香包剂和扁囊剂；(2)胃肠外给药，例如无菌溶液剂、混悬剂和复溶粉末；(3)透皮给药，例如透皮贴片剂；(4)直肠给药，例如栓剂；(5)吸入，例如气雾剂、溶液剂和干粉剂；和(6)局部给药，例如乳膏剂、油膏剂、洗剂、溶液剂、糊剂、喷雾剂、泡沫剂和凝胶剂。

也应认识到，本发明的药物组合物中的某些活性成分可以以游离形式存在用于治疗，或者如果适当可以以其药学上可接受的衍生物的形式存在。药学上可接受衍生物的一些非限制性的实施方案包括药学上可接受的前药，盐，酯，这些酯的盐，或者对有需要的患者给药时能直接或间接提供本发明药物组合物中的活性成分或其代谢产物或残留物的任何另外的加合物或衍生物。

在一实施方案中，本发明药物组合物可以配制成口服剂型。在另一实施方案中，本发明药物组合物可以配制成吸入剂型。在另一实施方案中，本发明药物组合物可以配制成经鼻给药剂型。在又一实施方案中，本发明药物组合物可以配制成透皮给药剂型。还在一实施方案中，本发明药物组合物可以配制成局部给药剂型。

本发明提供的药物组合物可以以压制片、研制片、可咀嚼锭剂、速溶片、复压片、或肠溶片、糖衣或薄膜衣片来提供。肠溶片是用能抗胃酸作用但在肠中溶解或崩解的物质包衣的压制片，从而防止了活性成分接触胃的酸性环境。肠包衣包括，但不限于，脂肪酸、脂肪、水杨酸苯酯、蜡、紫胶、氨化紫胶和邻苯二甲酸乙酸纤维素酯。糖衣片为糖衣包围的压制片，其可利于掩盖令人不愉快的味道或气味并且能防止片剂氧化。薄膜包衣片为用水溶性物质的薄层或薄膜覆盖的压制片。薄膜包衣包括，但不限于，羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000和邻苯二甲酸乙酸纤维素酯。薄膜包衣赋有和糖包衣相同的一般特性。复压片为经过超过一个压缩周期制备的压制片，包括多层片、和压制包衣或干包衣片。

片剂剂型可以由呈粉末、结晶或颗粒状的活性成分单独的或与本发明描述的一种或多种载体或赋形剂组合来制备，所述载体和赋形剂包括粘合剂、崩解剂、控释聚合物、润滑剂、稀释剂和/或着色剂。增香剂和甜味剂在形成咀嚼片和锭剂时特别有用。

本发明提供的药物组合物可以以软胶囊或硬胶囊来提供，其可以由明胶、甲基纤维素、淀粉或海藻酸钙来制备。所述硬明胶胶囊也称为干填充胶囊(DFC)，由两段组成，一段塞入另一段中，因此完全包封了活性成分。软弹性胶囊(SEC)是软的、球形壳，比如明胶壳，其通过加入甘油、山梨醇或类似的多元醇塑化。软明胶壳可以包含防腐剂来预防微生物生长。合适的防腐剂为如本发明所述的那些，包括尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，以及山梨酸。本发明提供的液体、半固体和固体剂型可以包囊在胶囊中。合适的液体和半固体剂型包括在碳酸丙烯酯、植物油或甘油三酯中的溶液和混悬剂。包含这样的溶液的胶囊可以如在美国专利U.S.Pat.Nos.4,328,245；4,409,239和4,410,545中描述的来制备。所述胶囊也可以采用如本领域技术人员已知的涂层，从而改善或维持活性成分的溶出。

本发明提供的药物组合物可以以液体和半固体剂型来提供，包括乳剂、溶液、混悬剂、酏剂和糖浆剂。乳剂为二相系统，其中一种液体以小球形式完全分散在另一种液体中，其可以是水包油型或油包水型。乳剂可以包括药学上可接受的非水液体和溶剂、乳化剂和防腐剂。混悬剂可以包括药学上可接受的助悬剂和防腐剂。含水醇溶液可以包括药学上可接受的缩醛，比如低级烷基醛的二(低级烷基)缩醛，例如乙醛二乙基缩醛；和具有一个或多个羟基的水溶性溶剂，比如丙二醇和乙醇。酏剂是透明的、甜味的水醇溶液。糖浆剂是浓的糖例如蔗糖的水溶液，并且还可以包含防腐剂。对于液体剂型，例如，在聚乙二醇中的溶液可以用足量的药学上可接受的液体载体例如水稀释，以精确方便地给药。

本发明提供的药物组合物可以配制成适于对患者吸入给药的任何剂型，例如干粉剂、气雾剂、混悬剂或溶液组合物。在一实施方案中，本发明所公开的药物组合物可以配制成适于用干粉剂对患者吸入给药的剂型。在又一实施方案中，本发明所公开的药物组合物可以配制成适于通过喷雾器对患者吸入给药的剂型。通过吸入递送至肺的干粉组合物通常包含精细粉末状得本发明所公开的化合物和一种或多种精细粉末状的药学上可接受的赋形剂。特别适合用作干粉剂的药学上可接受的赋形剂为本领域技术人员所知晓，其包括乳糖、淀粉、甘露醇、和单-、二-和多糖。精细粉末可通过例如微粉化和研磨制备得到。一般来说，尺寸减小的(如微粉化的)化合物可以通过约1至10微米的D₅₀值(例如，用激光衍射法测量的)来定义。

适合于透皮给药的药物组合物可制备成不连续的贴片剂，意在与患者的表皮保持紧密接触一段延长的时间。例如，可通过离子渗透从贴片剂中递送活性成分，如Pharmaceutical Research,3(6),318(1986)中的一般描述。

适合于局部给药的药物组合物可以被配制成油膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。例如，油膏剂、乳膏剂和凝胶剂可以用水或油基质，和适合的增稠剂和/或凝胶剂和/或溶剂来配置。这样的基质可以包括，水，和/或油例如液体液体石蜡和植物油(例如花生油或蓖麻油)，或溶剂例如聚乙二醇。根据基质性质使用的增稠剂和凝胶剂包括软石蜡、硬脂酸铝、鲸蜡硬脂醇、聚乙二醇、羊毛脂、蜂蜡、聚羧乙烯和纤维素衍生物，和/或单硬脂酸甘油脂和/或非离子型乳化剂。

本发明药物组合物活性成分也可以与作为靶向药物载体的可溶性聚合物结合。这样的聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或棕榈酰残基取代的聚氧乙烯聚赖氨酸。此外，本发明所公开的药物组合物的活性成分可以与在实现药物的控制释放中使用的一类生物可降解的聚合物结合，例如，聚乳酸、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。

本发明提供的药物组合物可以通过注射、输注或植入肠胃外给药，用于局部或全身给药。如本发明使用的肠胃外给药包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内、滑膜内和皮下给药。

本发明提供的药物组合物可以配制成适于肠胃外给药的任何剂型，包括溶液、混悬剂、乳剂、胶束、脂质体、微球、纳米体系和适于在注射前在液体中制成溶液或混悬液的固体形式。这样的剂型可以根据药物科学领域的技术人员已知的常规方法来制备(参见Remington:The Science和Practice of Pharmacy,同上)。

预期用于肠胃外给药的药物组合物可以包括一种或多种药学上可接受的载体和赋形剂，包括，但不限于，含水运载体、水混溶性运载体、非水运载体、抗微生物剂或抗微生物生长的防腐剂、稳定剂、溶解增强剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧剂、局部麻醉剂、助悬剂和分散剂、湿润剂或乳化剂、络合剂、多价螯合剂或螯合剂、防冻剂、冷冻保护剂、增稠剂、pH调节剂和惰性气体。

本发明提供的药物组合物可以配制成立即或改性释放剂型，包括延迟-、缓释-、脉冲-、控制-、靶向-和程序化释放形式。

本发明提供的药物组合物可以配制成单剂量或多剂量给药。所述单剂量制剂被包装在安瓿剂、小瓶或注射器中。所述多剂量肠胃外制剂必须包含抑菌或抑真菌浓度的抗微生物剂。所有的肠胃外制剂都必须是无菌的，如本领域已知和实践的。

本发明提供的药物组合物可以与不会损害预期的治疗作用的其它活性成分共同配制，或者与补充预期的作用的物质共同配制。

在一实施方案中，本发明的治疗方法包括对有需要的患者给予安全有效量的本发明的药物组合物。本发明各实施方案包括通过对有需要的患者给予安全有效量的本发明药物组合物，来治疗本发明提及的疾病。

在一实施方案中，本发明药物组合物可以通过任何适合的给药途径来给药，包括全身给药和局部给药。全身给药包括口服给药、胃肠外给药、透皮给药和直肠给药。典型的胃肠外给药是指通过注射或输注给药，包括静脉内、肌内和皮下注射或输注给药。局部给药包括施用于皮肤以及眼内、耳、阴道内、吸入和鼻内给药。在一个实施方案中，本发明药物组合物可以是口服给药。在另一实施方案中，本发明药物组合物可以是吸入给药。还有一实施例中，本发明药物组合物可以是经鼻内给药。

在一实施方案中，本发明药物组合物可以一次性给药，或者根据给药方案，在指定时间段内，在不同的时间间隔给药若干次。例如，每天给药一次、两次、三次或四次。在一实施方案中，每天给药一次。在又一实施方案中，每天给药两次。可以给药直至达到想要的治疗效果或无限期地维持想要的治疗效果。本发明药物组合物的合适给药方案取决于其中活性成分的药代动力学性质，例如吸收、分布和半衰期，这些可以由技术人员测定。此外，本发明药物组合物的合适给药方案，包括实施该方案的持续时间，取决于被治疗的疾病，被治疗疾病的严重程度、被治疗患者的年龄和身体状况、被治疗患者的医疗史、同时疗法的性质、想要的治疗效果等在技术人员知识和经验范围内的因素。这样的技术人员还应该理解，对于个体患者对给药方案的反应，或随着时间推移个体患者需要变化时，可要求调整事宜的给药方案。

本发明药物组合物可以与一种或多种其它治疗剂同时，或在其之前或之后给药。本发明药物组合物与其他治疗剂通过相同或不同给药途径分别给药，或与之以同以药物组合物形式给药。

本发明药物组合物可以与其他抗增殖剂联合使用，也即形成本发明所述的药物联合，例如：美法仑、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链脲佐菌素、顺铂、卡铂、奥沙利铂、达卡巴嗪、替莫唑胺、丙卡巴肼、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他滨、巯基嘌呤、氟达拉滨、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇、多西紫杉醇、拓扑替康、伊立替康、依托泊苷、曲贝替定、更生霉素、多柔比星、表柔比星、道诺霉素、米托蒽醌、博来霉素、丝裂霉素C、伊沙匹隆、他莫昔芬、氟他胺、戈那瑞林类似物、甲地孕酮、强的松、地塞米松、甲泼尼龙、沙利度胺、干扰素α、亚叶酸钙、西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司、阿法替尼、阿西替尼、博舒替尼、卡博替尼、色瑞替尼、克卓替尼、达拉菲尼、达沙替尼、厄洛替尼、吉非替尼、依鲁替尼、盐酸埃克替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕唑帕尼、哌加他尼、普纳替尼、拉多替尼、瑞格菲尼、鲁索利替尼、索拉菲尼、舒尼替尼、托法替尼、曲美替尼、凡德他尼、威罗菲尼、甲磺酸阿帕替尼、马赛替尼、丙氨酸布立尼布、西地尼布、达可替尼、福他替尼、二磷酸莫替沙尼、来那替尼、司美替尼、替吡法尼、巴非替尼、多维替尼、塞卡替尼、替拉替尼、替沃扎尼、阿仑单抗、贝伐单抗、贝伦妥单抗维多汀、卡妥索单抗、西妥昔单抗、地诺单抗、吉妥珠单抗、伊匹单抗、尼妥珠单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、idelalisib、duvelisib、gilteritinib、buparlisib、taselisib、copanlisib、voxtalisib、pilaralisib、sonolisib、perifosine、alectinib、ibrutinib、pertuzumab、nintedanib、cobimetinib、temsirolimus、sirolimus、pixantrone或它们的任意组合。

此外，本发明药物组合物活性成分可以以前药形式给药。在本发明中，本发明药物组合物活性成分的“前药”是对患者给药时，最终能在体内释放出本发明药物组合物活性成分的功能性衍生物。以前药形式给予本发明药物组合物活性成分时，本领域技术人员可实施下列方式中的一种及以上：(a)变更化合物的体内起效时间；(b)变更化合物的体内作用持续时间；(c)变更化合物的体内输送或分布；(d)变更化合物的体内溶解度；及(e)克服化合物所面临的副作用或其他难点。用于制备前药的典型的功能性衍生物，包含在体内以化学方式或酶的方式裂解的化合物的变体。包含制备磷酸盐、酰胺、酯、硫代酯、碳酸盐及氨基甲酸盐的这些变体对本领域技术人员来讲是众所周知的。

本发明所述药物组合物作为B7S1拮抗剂和/或PD-1通路的拮抗剂，对预防或治疗肝癌是有效的。

其中，本发明的药物组合对抑制肝癌的进展效果显著。

本发明的药物组合物除了对人类治疗有益以外，还可应用于兽医治疗宠物、引进品种的动物和农场的动物中的哺乳动物。另外一些动物的实例包括马、狗和猫。

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

在以下实施例中，所用到的实验材料与方法如下所述：

HCC病人标本的获取

肝细胞癌(HCC)病人的新鲜组织和外周血由中日友好医院提供。所有的实验已获伦理委员会批准。

小鼠肿瘤模型

Hepa1-6小鼠肝癌模型：小鼠肝细胞癌细胞系Hepa1-6可在Dulbecco’s ModifiedEagle Medium(DMEM)全培养基中贴壁生长，每隔2-3天按1:6传代。接种肿瘤前，用0.05％Trypsin/EDTA于37℃消化处于指数生长期的Hepa1-6约5min，加入全培养基终止消化，用移液枪上下吹打使其成为单细胞悬液，1500rpm离心5min后，移除上清并加入10mL PBS溶液，如此重复两次后，将Hepa1-6重悬于适量PBS溶液，取10μL稀释并与台盼蓝混合进行活细胞计数，根据计数结果用PBS将Hepa1-6稀释至7×10⁷/mL。取8-12周龄野生型或B7S1基因敲除C57BL/6雌鼠，腹腔注射阿佛丁(avertin)将小鼠麻醉，剃去小鼠背部右上侧的毛发，用酒精棉球擦拭暴露的皮肤，皮下注射7×10⁶Hepa1-6/100μL。注射肿瘤细胞5天后每2-3天测量肿瘤的长度和宽度并计算肿瘤的体积(肿瘤体积＝长×宽²/2)。B7S1拮抗剂治疗：第0天于野生型C57BL/6雌鼠皮下接种7×10⁶Hepa1-6/100μL，从第5天开始每隔一天腹腔注射B7S1拮抗剂或Rat IgG(同型对照)，并监测肿瘤生长。B7S1拮抗剂和anti-PD-1抗体联合治疗：第0天于野生型C57BL/6雌鼠皮下接种7×10⁶Hepa1-6/100μL，从第9天开始每隔两天腹腔注射Rat IgG+Hamster IgG、B7S1拮抗剂+Hamster IgG、Rat IgG+anti-PD-1(J43)或B7S1拮抗剂+anti-PD-1，并监测肿瘤生长。

PBMC及肿瘤浸润免疫细胞的分离

PBMC的分离：用抗凝管收集肝癌病人或健康志愿者的外周血，在生物安全柜内用PBS稀释4倍，50mL离心管中加入15mL淋巴分离液(上海华精)，用移液枪将稀释后外周血轻轻加到淋巴分离液的液面之上，2500rpm离心20min(升速9，降速2)，吸取中间层细胞，加入适量PBS，1200rpm离心8min，重悬于50mL PBS，900rpm离心10min，弃上清，离心管底部细胞即为外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，将所得细胞重悬于PBS中并进行细胞计数。

HCC病人肝组织中免疫细胞的分离：将从HCC病人中手术切除的正常肝组织、癌旁组织以及肿瘤组织剪碎，于含0.5mg/mL IV型胶原酶(Gibco)、10U/mL DNase I的全培养基中消化30min(25℃，200rpm)，加入低温全培养基终止消化，转移到孔径为100μm的细胞筛网(BD)上研磨，制备成单细胞悬液，50mL离心管中加入15mL淋巴分离液，用移液枪将单细胞悬液轻轻加到淋巴分离液的液面之上，2500rpm离心20min(升速9，降速2)，移除顶部细胞碎片，将中间层细胞收集于新离心管中，加入适量PBS，1200rpm离心8min，重悬于50mL PBS，900rpm离心10min，弃上清，将所得细胞重悬于PBS中并进行细胞计数。

下面详细描述本发明的实施例和实验结果

实施例1阻断B7S1信号可抑制肝癌的进展

为了探究B7S1作为肿瘤免疫治疗潜在靶点的可能性，发明人首先分析了在肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)病人外周血和组织中B7S1的表达。根据细胞表面标志物的不同，发明人可以圈出髓样树突状细胞(myeloid dendritic cell，mDC，Lin^-HLA-DR^hiCD11c⁺CD123^-)、浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell，pDC，Lin^-HLA-DR^hiCD11c^-CD123⁺)、CD14⁺HLA-DR^hi单核细胞或巨噬细胞前体、单核髓源抑制细胞(monocytic myeloid-derived suppressor cell，mMDSC，CD14⁺HLA-DR^low/-)等四种不同的抗原呈递细胞。流式分析结果表明，HCC病人外周血中这四种髓系抗原呈递细胞上B7S1的表达水平均显著高于健康人(结果参见图1，图1显示了利用流式细胞技术分析健康人(n＝8)和HCC病人(n＝12)外周血中mDC、pDC、CD14⁺HLA^-DR^hi和mMDSC等细胞表面的B7S1蛋白表达水平(*p<0.05，**p<0.01，****p<0.0001))。

而且，HCC病人的血清可诱导pDC和mDC表达B7S1，说明肝癌疾病相关因子可以使外周血中的抗原呈递细胞上调B7S1，B7S1在外周血中的表达或许可以作为HCC诊断的参考生物标志物之一(结果参见图2，图2显示了利用密度梯度离心法从健康人的外周血中分离出外周血单核细胞，重悬于含10％健康人或HCC病人血清的培养基中，在含5％CO₂的37℃培养箱中培养24小时，然后用流式细胞技术分析pDC(a)和mDC(b)细胞表面B7S1的表达水平(**p<0.01，***p<0.001))。接下来发明人还分析了HCC病人的外周血、正常肝组织、癌旁组织和肿瘤中抗原呈递细胞上B7S1的表达水平。流式结果表明，HCC病人肝组织中B7S1阳性的mDC和CD4⁺HLA-DR^hi巨噬细胞的比例高于外周血(结果参见图3，利用流式细胞技术分析HCC病人(n＝15)外周血、正常肝组织、癌旁组织和肿瘤中mDC、pDC、CD14⁺HLA^-DR^hi和mMDSC等细胞表面的B7S1蛋白表达水平(*p<0.05，**p<0.01))。CD4⁺HLA-DR^hi巨噬细胞还可以根据细胞膜上CD163的表达进一步划分为CD163阴性的M1型巨噬细胞和CD163阳性的M2型巨噬细胞。流式染色结果显示，肝组织中M2型巨噬细胞上B7S1的表达水平高于M1型巨噬细胞(结果参见图4，利用流式细胞技术分析HCC病人癌旁组织和肿瘤中M1型(CD163阴性)和M2型(CD163阳性)CD14⁺HLA-DR^hi巨噬细胞上的B7S1蛋白表达水平)。为了更全面地了解B7S1在肝组织中的分布，发明人用免疫荧光技术分析了正常肝组织、癌旁组织和肿瘤组织切片中B7S1的表达，同时发明人还用了DAPI标记细胞核的位置，以CD45和CD68分别作为组织中免疫细胞和巨噬细胞的标志物。免疫荧光结果显示，在肝组织中，B7S1主要表达于免疫细胞(CD45阳性)，且癌旁组织和肿瘤中B7S1的表达水平高于正常肝组织(结果参见图5，(a)利用免疫荧光染色检测HCC病人的正常肝组织、癌旁组织和肿瘤中B7S1蛋白的表达水平；(b)HCC病人的正常肝组织、癌旁组织和肿瘤中B7S1表达水平的荧光定量统计结果；(c)HBV阴性和HBV阳性HCC病人的肿瘤中B7S1表达水平。(*p<0.05，**p<0.01))。肿瘤中B7S1的表达水平与HBV阴阳性无关。由于目前已有医疗机构在HCC病人中开展anti-PD-1免疫治疗的临床试验，发明人还用流式细胞技术和免疫荧光染色分析了B7家族的另一成员、PD-1的配体PD-L1在HCC病人中的表达。结果显示，PD-L1主要表达于CD45阴性的非免疫细胞上，而且其表达水平在正常肝组织、癌旁组织和肿瘤中无显著差异(参见图6-利用流式细胞技术分析HCC病人(n＝12)外周血、正常肝组织、癌旁组织和肿瘤中mDC、pDC、CD14⁺HLA^-DR^hi和mMDSC等细胞表面的PD-L1蛋白表达水平-和图7(a)利用免疫荧光染色检测HCC病人的正常肝组织、癌旁组织和肿瘤中PD-L1蛋白的表达水平；(b)HCC病人的正常肝组织、癌旁组织和肿瘤中PD-L1表达水平的荧光定量统计结果)。

已知B7S1可以与激活后的T细胞上表达的受体结合并抑制它们的增殖和功能(Prasad et al.,2003；Sica et al.,2003)，因此发明人利用生物素标记的人源B7S1胞外段和小鼠IgG2a Fc段的融合蛋白来检测HCC病人中B7S1受体(B7S1receptor，B7S1R)的表达。首先发明人比较了健康人和HCC病人外周血中淋巴细胞上B7S1R的表达水平。流式分析结果表明，HCC病人的外周血CD8⁺T细胞、CD4⁺T细胞和自然杀伤(Natural Killer，NK)细胞上B7S1R的表达高于健康人(结果参见图8，利用流式细胞技术分析健康人(n＝9)和HCC病人(n＝14)外周血中CD8⁺T、CD4⁺T、NK和NKT上的B7S1R表达水平(*p<0.05，n.s.，无显著差异))。肝组织中的CD8⁺T、CD4⁺T和natural killer T(NKT)细胞上的B7S1R表达高于外周血(结果参见图9，利用流式细胞技术分析HCC病人(n＝12)外周血、正常肝组织、癌旁组织和肿瘤中CD8⁺T、CD4⁺T、NK和NKT上的B7S1R表达水平(*p<0.05，**p<0.01))。发明人还对肿瘤中CD8⁺T细胞的功能缺陷与肿瘤中B7S1或PD-L1的表达水平的相关性进行了分析。结果表明，肿瘤中同时表达Granzyme B和Perforin的CD8⁺T细胞占总CD8⁺T细胞的比例与B7S1的表达水平呈负相关，而与PD-L1的表达水平不相关(结果参见图10，肿瘤中同时表达Granzyme B和Perforin的CD8⁺T细胞占总CD8⁺T细胞的比例与肿瘤中B7S1(a)和PD-L1(b)的表达水平的相关性分析(*p<0.05))，因此肿瘤微环境中B7S1的表达可能会抑制CD8⁺T细胞的功能。

上述研究结果表明，B7S1和B7S1R在肝组织中抗原呈递细胞和淋巴细胞上的表达可能会对HCC病人的肿瘤微环境中的抗肿瘤免疫反应产生抑制。为了进一步验证B7S1信号通路对肝癌中抗肿瘤免疫应答的负调控作用，发明人利用Hepa1-6小鼠模型——小鼠皮下移植肝细胞癌模型做了一系列的研究。首先，发明人在此小鼠HCC模型中检测了B7S1及其受体的表达。免疫荧光结果显示，在HCC肿瘤中，B7S1主要表达于CD45阳性的免疫细胞(图11a)，与HCC病人中的发现相似。流式分析结果表明，B7S1高表达于CD11b阳性、F4/80阳性或CD11c阳性的抗原呈递细胞，在CD3阳性的T细胞上也可检测到B7S1的低水平表达，在CD45阴性的非免疫细胞上不表达(图11b)。发明人用生物素标记的小鼠B7S1胞外段和人IgG2a Fc段的融合蛋白来检测小鼠HCC模型中B7S1受体的表达。流式结果表明，在Hepa1-6荷瘤小鼠的肿瘤微环境中，B7S1R主要表达于CD8⁺T细胞上(图12，利用流式细胞技术检测小鼠Hepa1-6模型中肿瘤浸润的CD8⁺T、Foxp3^-CD4⁺T、Treg(Foxp3⁺CD4⁺T)和NK细胞上B7S1R的表达水平)。接下来发明人探究在Hepa1-6小鼠模型中B7S1信号对抗肿瘤免疫反应的影响。发明人将7×10⁶Hepa1-6皮下注射到野生型小鼠和B7S1基因敲除小鼠，每隔2天测量皮下肿瘤的体积。B7S1基因敲除小鼠的皮下肿瘤生长速度明显慢于野生型小鼠(图13，野生型小鼠和B7S1基因敲除小鼠皮下Hepa1-6肿瘤生长曲线(左图)和第23天的肿瘤重量，*p<0.05，****p<0.0001。)。另外，发明人还验证了拮抗B7S1对已存在的Hepa1-6肿瘤的治疗效果。发明人在野生型小鼠皮下接种7×10⁶Hepa1-6五天后开始隔天腹腔注射Rat IgG或B7S1拮抗剂，B7S1拮抗剂治疗同样也可以抑制Hepa1-6肿瘤的生长这些实验结果表明，B7S1信号对HCC中抗肿瘤免疫反应起负调控作用，阻断B7S1信号可抑制HCC的进展。

实施例2阻断B7S1信号可增强CTL活性

在Hepa1-6小鼠模型中，虽然B7S1敲除小鼠中CD8⁺TIL的百分比没有发生变化(图14，野生型小鼠和敲除小鼠的脾脏、远端淋巴结、肿瘤引流淋巴结和肿瘤中CD8⁺T、CD4⁺T细胞在T细胞中所占的百分比以及Treg在CD4⁺T细胞中所占的百分比。SPL，脾脏；LN，远端淋巴结；TDLN，肿瘤引流淋巴结；TIL，肿瘤。WT，野生型小鼠；KO，B7S1基因敲除小鼠。***p<0.001)，但CD8⁺TIL细胞表面的CD107a表达增加、Granzyme B、perforin表达水平上调和PMA/ionomycin刺激CD8⁺TIL细胞后，IFN-γ表达水平上调(结果参见图15，利用流式细胞技术检测WT和KO小鼠的肿瘤中CD8⁺T细胞膜表面CD107a的表达水平以及经PMA/ionomycin刺激4小时后Granzyme B、perforin和IFN-γ的表达水平。SPL，脾脏；LN，远端淋巴结；TDLN，肿瘤引流淋巴结；TIL，肿瘤。WT，野生型小鼠；KO，B7S1基因敲除小鼠。*p<0.05，**p<0.01)，说明在Hepa1-6小鼠模型中阻断B7S1信号也可以增强肿瘤中CTL的活性。

实施例3同时阻断B7S1和PD-1通路可协同地增强抗肿瘤免疫反应

发明人在皮下接种Hepa1-6小鼠模型第9天开始每3天腹腔注射Rat IgG+HamsterIgG、B7S1拮抗剂+Hamster IgG、Rat IgG+anti-PD-1(J43)或B7S1拮抗剂+anti-PD-1，以对比B7S1拮抗剂、anti-PD-1单独用药和联合用药的抑癌效果。实验结果显示，B7S1拮抗剂与anti-PD-1联合用药对Hepa1-6肿瘤生长的抑制作用强于B7S1拮抗剂或anti-PD-1单药治疗。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

1.B7S1在治疗或减轻肝癌中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述用途是通过拮抗B7S1的功能或抑制B7S1的表达来实现的。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述治疗或减轻肝癌是通过促进肝癌中细胞毒性T淋巴细胞的活性；促进CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞表面的CD107a表达；促进GranzymeB、perforin或IFN-γ表达来实现的。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述B7S1表达于髓系抗原呈递细胞；

任选地，所述髓系抗原呈递细胞为CD11b阳性、F4/80阳性或CD11c阳性的抗原呈递细胞。

5.一种药物组合物，其特征在于，包括：第一试剂，所述第一试剂用于拮抗B7S1的功能或抑制B7S1的表达。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，进一步包括：第二试剂，所述第二试剂用于抑制PD-1通路；

任选地，所述第二试剂包括anti-PD-1抗体，anti-PD-L1抗体，PD-1-shRNA，PD-L1-shRNA的至少之一；

任选地，进一步包含药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、溶媒或它们的组合。

7.根据权利要求5～6任一项所述的药物组合物，其特征在于，进一步地包含其它抗增殖剂，所述抗增殖剂是美法仑、环磷酰胺、异环磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链脲佐菌素、顺铂、卡铂、奥沙利铂、达卡巴嗪、替莫唑胺、丙卡巴肼、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他滨、巯基嘌呤、氟达拉滨、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇、多西紫杉醇、拓扑替康、伊立替康、依托泊苷、曲贝替定、更生霉素、多柔比星、表柔比星、道诺霉素、米托蒽醌、博来霉素、丝裂霉素C、伊沙匹隆、他莫昔芬、氟他胺、戈那瑞林类似物、甲地孕酮、强的松、地塞米松、甲泼尼龙、沙利度胺、干扰素α、亚叶酸钙、西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司、阿法替尼、阿西替尼、博舒替尼、卡博替尼、色瑞替尼、克卓替尼、达拉菲尼、达沙替尼、厄洛替尼、吉非替尼、依鲁替尼、盐酸埃克替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕唑帕尼、哌加他尼、普纳替尼、拉多替尼、瑞格菲尼、鲁索利替尼、索拉菲尼、舒尼替尼、托法替尼、曲美替尼、凡德他尼、威罗菲尼、甲磺酸阿帕替尼、马赛替尼、丙氨酸布立尼布、西地尼布、达可替尼、福他替尼、二磷酸莫替沙尼、来那替尼、司美替尼、替吡法尼、巴非替尼、多维替尼、塞卡替尼、替拉替尼、替沃扎尼、阿仑单抗、贝伐单抗、贝伦妥单抗维多汀、卡妥索单抗、西妥昔单抗、地诺单抗、吉妥珠单抗、伊匹单抗、尼妥珠单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、idelalisib、duvelisib、gilteritinib、buparlisib、taselisib、copanlisib、voxtalisib、pilaralisib、sonolisib、perifosine、alectinib、ibrutinib、pertuzumab、nintedanib、cobimetinib、temsirolimus、sirolimus、pixantrone或它们的任意组合。

8.权利要求5～7任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或减轻肝癌。

9.一种筛选药物的方法，所述药物用于治疗或减轻肝癌，其特征在于，包括：

将候选药物与肝癌微环境接触；

比较所述接触前后肝癌微环境中抗原呈递细胞上B7S1功能或表达，

其中，所述接触后，肝癌微环境中抗原呈递细胞上B7S1功能受到抑制或表达量下降，是所述候选药物为目标药物的指示。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，进一步包括比较所述接触前后肝癌微环境中细胞毒性T淋巴细胞的活性，其中，所述接触后，肝癌微环境中细胞毒性T淋巴细胞的活性增强是所述候选药物为目标药物的指示；

任选地，进一步包括比较所述接触前后肝癌微环境中CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞表面的CD107a表达量，其中，所述接触后，肝癌微环境中CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞表面的CD107a表达量增多，是所述候选药物为目标药物的指示；

任选地，进一步包括比较所述接触前后CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞的Granzyme B、perforin或IFN-γ表达量，其中，所述接触后，CD8⁺肿瘤浸润淋巴细胞的Granzyme B、perforin或IFN-γ表达量增多，是所述候选药物为目标药物的指示。