CN112739424A

CN112739424A - 白冷杉树树枝精油用于对抗皮肤衰老迹象的用途

Info

Publication number: CN112739424A
Application number: CN201980046825.8A
Authority: CN
Inventors: 安妮-索菲·布维尔; 泽维尔·费尔南德兹; 帕斯卡尔·波尔特斯; 让-查尔斯·勒霍梅特
Original assignee: Blue Coast University; Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Laboratoires M&L SA
Current assignee: Blue Coast University; Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Universite de Nice Sophia Antipolis UNSA; Laboratoires M&L SA
Priority date: 2018-07-24
Filing date: 2019-06-25
Publication date: 2021-04-30
Anticipated expiration: 2039-06-25
Also published as: EP3826725B1; WO2020021175A1; FR3084260B1; CN112739424B; KR20210025116A; JP2021524497A; JP7225372B2; KR102344234B1; FR3084260A1; JP2022179699A; ES2928383T3; EP3826725A1

Abstract

本发明涉及白冷杉树(Abies alba)树枝精油作为弹性蛋白酶抑制剂用于对抗皮肤衰老迹象的用途，尤其是用于限制和/或减少皮肤弹性纤维的降解、皮肤松弛和/或皮肤弹性丧失和/或皱纹出现的用途。

Description

白冷杉树树枝精油用于对抗皮肤衰老迹象的用途

发明主题

本发明涉及银冷杉(Abies alba)树枝精油作为弹性蛋白酶抑制剂用于对抗皮肤衰老迹象的用途，尤其是用于限制和/或减少皮肤弹性纤维的降解、皮肤松弛和/或皮肤弹性丧失和/或皱纹出现的用途。

背景技术

皮肤包含两个相互作用的部分，一个是表面的表皮，另一个是更深的真皮。天然的人表皮主要由三种类型的细胞组成，即占绝大多数的角质形成细胞、黑素细胞和朗格汉斯细胞。所述真皮为所述表皮提供坚实的支撑。它也是表皮的滋养元素。它主要由成纤维细胞和细胞外基质组成，所述细胞外基质主要由胶原蛋白、弹性蛋白和一种称为基础物质(ground substance)的物质组成，所述基础物质包含硫酸化(例如硫酸软骨素)或非硫酸化(例如透明质酸)的糖胺聚糖、蛋白聚糖和各种蛋白酶。这些成分是由成纤维细胞合成的。也存在白细胞、肥大细胞和组织巨噬细胞。最后，所述真皮被血管和神经纤维穿过。所述表皮和所述真皮之间的凝聚是由真皮-表皮连接(dermal-epidermal junction)提供的。

在所述真皮的组分中，弹性蛋白是在皮肤的弹性和柔软性中起重要作用的蛋白质。

已知在可能是化学、物理或细菌起源的表面皮肤应激期间，所述表皮的表面层中的角质形成细胞释放能够吸引某些浸润性皮肤细胞的生物介导物，其本身负责维持短暂的局部刺激。然后，这些浸润所刺激或攻击的区域的细胞释放酶，其中可提及白细胞弹性蛋白酶。在这种酶的作用下，结缔组织的弹性细胞外支撑纤维可能被降解。因此，从长远来看，例如由长时间暴露于UV光或由刺激剂产生的表面皮肤微应激的总和可能导致由结缔组织的弹性纤维形成的网络的破坏。结果是失去了皮肤的弹性和柔软性并加重了皱纹。

本发明的目的是提出该问题的解决方案，且尤其是提出可用于美容品中以限制皮肤衰老、且尤其是由弹性蛋白降解产生的衰老的新化合物。

为此，申请人已经证明了银冷杉(Abies alba)精油具有抗弹性蛋白酶活性，优于被认为对该生物靶点起作用的其他植物提取物。

所述银冷杉，也称为普通冷杉或欧洲银冷杉，以植物学术语Abies alba Mill.(或Abies pectinata Lam.DC或Abies excelsa Lam.或Pinus picea L.或Abies picea L.)为人所知。它是一种原产于欧洲的针叶树，其树枝上长有常绿的针叶(或叶子)以及带有苞片的球果(松果)。

银冷杉球果精油在香水业中是已知的(D.L.J.Opdyke，芳香原料专论(Monographson Fragrance Raw Materials)，Pergamon Press，1979)。此外，通过蒸汽蒸馏源自亚洲的银冷杉的树枝和针叶获得的精油已经被描述为具有抗自由基的特性(SA Yang等，Journalof Clinical Biochemistry and Nutrition，2009，44(3)，253-259)。然而，尚未提出该精油的抗弹性蛋白酶作用，该作用将允许其用于皮肤衰老的治疗。

此外，已经提出为了美容的目的使用除精油以外的银冷杉树枝和/或叶的提取物。具体来说，申请WO 2017/044050公开了通过用沸水从银冷杉树枝中提取并回收水相获得的多酚作为抗皱活性剂的用途。就其部分而言，文件FR 1 525 945公开了通过醇提取获得的银冷杉叶提取物作为抗衰老活性剂的用途。

最后，在专利申请JP 2014-224073中描述了除银冷杉以外的冷杉树提取物的抗弹性蛋白酶特性。该文件中描述的方法尤其使用了马氏冷杉(Todo pine，Abies mariesii)的乙二醇提取物。

因此，据申请人所知，从未有人提出来自银冷杉树枝的精油能够抑制弹性蛋白酶并因此可以用于旨在对抗皮肤衰老迹象的美容组合物中。

发明内容

本发明的一个目的是银冷杉(Abies alba)树枝精油作为弹性蛋白酶抑制剂用于对抗皮肤衰老迹象的用途。

本发明的另一个目的是用于对抗皮肤衰老迹象、尤其是用于限制和/或减少皮肤弹性纤维的降解、皮肤松弛和/或皮肤弹性丧失和/或皱纹出现的美容方法，所述方法包含将含有银冷杉(Abies alba)树枝精油的美容组合物局部应用于皮肤。

具体实施方式

本发明使用银冷杉树枝精油。

在本说明书中，“树枝”应理解为是指所有树枝和它们携带的针叶，不包括球果。在本说明书中，“精油”应理解为是指所述银冷杉树枝中存在的挥发性有机化合物的蒸馏(即干蒸馏或水蒸馏或蒸汽蒸馏)产物。水蒸馏和蒸汽蒸馏的方法优选用于本发明。在这些方法中，植物中所含的气味分子被释放并被蒸汽机械夹带，所述蒸汽要么通过沸腾添加了所述植物的水而形成(常规水蒸馏)，要么通过沸腾植物中所含的水而形成(微波水蒸馏)，或由锅炉提供并循环通过所述植物(蒸汽蒸馏)。可能地，这些方法可以在真空或压力下进行。

更优选地，根据本发明所用的精油通过水蒸馏获得。所述水蒸馏法可以进行1至48小时、优选地3至24小时、且更好地6至12小时的时间。事实上已经观察到，当蒸馏时间超过2天时，所述银冷杉精油的抗弹性蛋白酶活性降低。

这种精油有利地来源于在欧洲、优选地在法国生长的银冷杉的树枝，并因此其在组成上与其他冷杉物种或相同物种但起源于亚洲的冷杉的精油的不同之处在于，大量存在的柠檬烯、α-蒎烯和莰烯(总计占所述精油的超过50％)以及中等含量的乙酸冰片酯。

更精确地，根据本发明所用的精油含有柠檬烯作为主要成分，以及α-蒎烯、莰烯和乙酸冰片酯作为次要成分，通过气相色谱法测量的柠檬烯与乙酸冰片酯的摩尔比在2:1至20:1，优选地5:1至10:1的范围内。

就其部分而言，通过气相色谱法测量的莰烯与α-蒎烯的摩尔比通常在0.5:1和2:1之间，优选地在1:1和1.5:1之间，和/或莰烯与乙酸冰片酯的摩尔比在1:1和5:1之间，优选地在2:1和3:1之间。

所述银冷杉树枝精油通过抑制白细胞弹性蛋白酶来对抗皮肤衰老迹象，并且可以更特别地用于限制和/或减少皮肤弹性纤维的降解、皮肤松弛和/或皮肤弹性丧失和/或皱纹出现。

它通常被包含在适合局部应用于皮肤的美容组合物中。基于根据本发明的组合物的总重量，所述银冷杉树枝精油有利地占0.001至5重量％且优选地占0.01至0.5重量％。

该组合物通常含有生理上可接受的，尤其是美容上可接受的介质，即，其不会产生与美容用途不相容的刺痛或发红，没有令人不愉快的气味并且与局部给药途径相容。该介质优选地包含任选地与水相结合的脂肪相。因此可以以无水形式(含有至多5重量％的水)、以水包油或油包水的乳液或水包油的分散液的形式提供所述组合物。

当存在时，所述水相含有水和任选地至少一种选自多元醇和水性胶凝剂的组分。水有利地占所述组合物总重量的40至80％。所述多元醇尤其可以选自甘油、丙二醇、丁二醇、戊二醇及其混合物，并且其可以占所述组合物总重量的3至30％。

“水性胶凝剂”指能够通过水合固定水分子并因此增加水相粘度的聚合化合物。这样的胶凝剂可选自：多糖，例如纤维素及其衍生物、改性淀粉、卡拉胶、琼脂、黄原胶和植物胶例如瓜尔胶或刺槐豆胶；合成聚合物且尤其是任选地交联的丙烯酸钠均聚物，以及丙烯酸共聚物，尤其是丙烯酸钠和/或烷基(甲基)丙烯酸酯和/或羟烷基(甲基)丙烯酸酯和/或(聚乙氧基)烷基(甲基)丙烯酸酯，任选地与至少一种其他单体、有利地为2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸(AMPS)的共聚物，这些共聚物任选地被交联；及其混合物。

就其部分而言，脂肪相可以包含一种或多种挥发性的和/或非挥发性的油。挥发性油的实例为支链烷烃例如异十二烷，和直链C₁₀-C₁₃烷烃。作为非挥发性油，尤其可提及以下这些：

-酸和一元醇的酯，所述酯选自：直链饱和C2-C10(优选地C6-C10)酸和直链饱和C10-C18(优选地C10-C14)一元醇的单酯和聚酯、直链饱和C10-C20酸和支链或不饱和C3-C20(优选地C3-C10)一元醇的单酯和聚酯；支链或不饱和C5-C20酸和支链或不饱和C5-C20一元醇的单酯和聚酯；支链或不饱和C5-C20酸和直链C2-C4一元醇的单酯和聚酯；

-C6-C12脂肪酸甘油三酯，例如辛酸和癸酸甘油三酯和三庚酸甘油酯；

-支链和/或不饱和C10-C20脂肪酸(例如亚油酸、月桂酸和肉豆蔻酸)；

-支链和/或不饱和C10-C20脂肪醇(例如辛基十二烷醇和油醇)；

-烃例如角鲨烷(C30)，尤其是从橄榄油提取的植物角鲨烷，和半角鲨烷(C15)；

-二烷基碳酸酯例如二辛基碳酸酯和二乙基己基碳酸酯；

-二烷基醚例如二辛基醚；以及

-其混合物。

还可以提及包含一种或多种上述组分的植物油。

作为酸和一元醇的酯，可以提及单酯，例如椰油醇辛酸酯和癸酸酯的混合物、澳洲坚果油酸乙酯、乳木果油乙酯、异硬脂酸异硬脂酯、异壬酸异壬酯、异壬酸乙基己酯、新戊酸己酯、新戊酸乙基己酯、新戊酸异硬脂酯、新戊酸异癸酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸辛基十二醇酯、棕榈酸异丙酯、棕榈酸乙基己酯、月桂酸己酯、月桂酸异戊酯、壬酸酮基硬脂酯、辛酸丙基庚酯及其混合物。其他可用的酯为酸和一元醇的二酯，例如己二酸二异丙酯、己二酸二乙基己基酯、癸二酸二异丙酯和癸二酸二异戊酯。

植物油的实例尤其为小麦胚芽、葵花、摩洛哥坚果、木槿、香菜、葡萄籽、芝麻、玉米、杏、蓖麻、乳木果、牛油果、橄榄、大豆、甜杏仁、棕榈、油菜籽和棉花籽的油、榛子、澳洲坚果、荷荷巴、苜蓿、罂粟、南瓜、芝麻、西葫芦、黑醋栗、月见草、薰衣草、玻璃苣、小米、大麦、藜麦、黑麦、红花、桐实、西番莲、麝香蔷薇、蓝蓟、亚麻荠或山茶油。

所述脂肪相可能还包含至少一种脂肪相结构剂。“脂肪相结构剂”是指能使所述组合物中所含的油增稠的化合物，尤其选自蜡、脂肪相胶凝剂和糊状脂肪及其混合物。

根据一个优选实施方式，该组合物还包含至少一种抗衰老活性剂，尤其是适合于防止和/或治疗皱纹、皮肤下垂和/或色素斑形成的活性剂，其尤其可选自抗自由基剂、刺激角质形成细胞和/或成纤维细胞分化和/或增殖的药剂；刺激糖胺聚糖和/或胶原蛋白和/或真表皮锚定纤维合成的药剂；防止胶原蛋白和/或糖胺聚糖和/或真表皮锚定纤维降解的药剂；抗糖基化剂；去色素剂和/或黑色素生成抑制剂及其混合物。

此类抗衰老活性剂的实例尤其为：抗坏血酸、其盐、其醚及其酯，尤其是抗坏血酸葡萄糖苷；腺苷；核糖；蜂蜜提取物；蛋白和糖蛋白，尤其提取自甜杏仁；水解植物蛋白，尤其来自大米、木槿籽或羽扇豆；多肽或假二肽，例如脱羧肌肽盐酸盐、由SEDERMA分别以商品名

3000和

Synthe’6销售的棕榈酸五肽-4(Pal-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser)和棕榈酸三肽-38、由LUCAS MEYER公司以商品名

销售的棕榈酸三肽-8、由LIPOTEC公司以商品名

Solution销售的五肽-18、由SANDREAM公司以商品名

销售的sh-十肽-9和由INFINITEC公司以商品名X50

Powder销售的棕榈酸六肽-52；硅烷类，例如甲基硅烷醇甘露糖醛酸酯；阿拉伯木聚糖，尤其提取自黑麦面粉；和半乳糖阿拉伯聚糖，尤其来自落叶松；透明质酸及其盐；多酚，尤其提取自含羞草；α-羟基酸，包括提取自柠檬的那些；植物提取物(通常为水性)，例如水生三叶草、野生三色堇、问荆、金纽扣(Acmella oleracea)、苏格兰蓟(Onopordum acanthium)、蓍草(Achilleamillefolium，尤其是包含于来自BASF公司的产品

)、酸藤子(Embeliaconcinna，如SEPPIC公司所售)、刺梨(Opuntia ficus indica，尤其由MIBELLE AGBIOCHEMISTRY以商品名AquaCacteen销售)、鼠尾草(Salvia offocinalis，尤其是由PROVITAL GROUP销售)、黄荆(Vitex negundo，尤其由LABORATOIRES EXPANSCIENCE以商品名

销售)、栗子、木瓜、摩洛哥坚果、燕麦、葵花、雏菊、牡丹或莳萝；藻类且尤其是珊瑚藻、叉珊藻(Jania rubens)、裙带菜(Ungaria pinnatifada)、翅藻(Alariaesculenta)、或微绿球藻(Nannochlorosis oculata)的水性提取物；精油，包括桃金娘的精油；葡萄糖酸锌和/或葡萄糖酸铜；及其混合物。

作为替代或另外，根据本发明所用的组合物可包含至少一种张紧聚合物(tensorpolymer)，即能够通过机械作用紧缩皮肤并由此减少皱纹和细纹的出现。这可以是合成聚合物或天然聚合物，尤其是多糖，尤其是藻类或海洋浮游生物提取物或者植物胶。

根据本发明的组合物还可以含有可被分散于乳液的脂肪相中和/或水相中的不同组分，条件是它们与皮肤的局部应用相容。

因此，它也可以含有至少一种水包油或油包水乳化剂，所述乳化剂通常是非离子的，例如聚氧乙烯酯，任选地聚乙氧基化山梨醇酐酯，任选地聚乙氧基化脂肪酸和甘油的酯，脂肪醇和糖的醚例如烷基糖苷，及其混合物。所述乳化剂可以占所述组合物总重量的2至10％。或者，根据本发明的组合物可能不含乳化剂。

根据本发明的组合物还可包含一种或多种粉末状填充剂，所述粉末状填充剂有利地为多孔或空心的微颗粒、优选多孔微颗粒的形式。这些微颗粒原则上基本上是球形的。这些填充剂尤其可以选自：

-有机填充剂，例如：多糖的粉末且尤其是天然淀粉、改性淀粉或纤维素的粉末；丙烯酸聚合物的粉末例如聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚酰胺或聚烯烃的粉末；干藻类的粉末例如水解珊瑚藻(Corallina officinalis)的粉末；

-无机填充剂，例如二氧化硅、黏土、珍珠岩和滑石；

-及其混合物。

基于所述组合物的总重量，这些填充剂可以占1至5重量％。

根据本发明的组合物还可包含添加剂，所述添加剂尤其选自有机和/或无机的光防护剂(在UVA和/或UVB中有活性)、芳香剂、抗氧化剂、螯合剂、pH调节剂、防腐剂、色素、染料及其混合物。

UV滤光剂的非限制性实例包括：二苯甲酮，例如由INCI名称二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯(来自BASF的

A Plus)和二苯甲酮-3标识的；苯并三唑，例如由INCI名称亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚(来自BASF的

M)标识的；三嗪类，例如由INCI名称乙基己基三嗪酮(来自BASF的

T150)和双乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(来自BASF的

S)标识的；苯并咪唑，例如由INCI名称苯基苯并咪唑磺酸(来自MERCK的

232)标识的；羟基苯甲酸酯，例如水杨酸乙基己酯(来自MERCK的

OS)和胡莫柳酯(来自MERCK的

HMS)；丁基甲氧基二苯甲酰甲烷(来自MERCK的

9020)；甲氧基肉桂酸乙基己酯(来自BASF的

MC 80)；氰基丙烯酸酯类，例如奥克立林(来自MERCK的

OCR)；及其混合物。

该组合物可以以适合局部应用于皮肤的任何形式且尤其是以乳液、霜、洗液、凝胶或膜的形式提供。它通常是免洗型组合物。

该组合物可以构成皮肤护理产品，尤其是用于面部的皮肤护理产品，尤其是抗衰老或抗皱产品；防晒或晒后产品；自晒黑产品；或皮肤化妆品例如粉底。或者，它可以是皮肤清洁组合物。优选地，根据本发明所用的组合物是抗衰老、抗皱和/或防晒组合物。

该组合物可以应用于显示出皮肤衰老迹象的人(例如至少30岁或甚至40岁的人)的至少一个身体区域，且更特别地在面部、颈部和/或领口上。或者，它可以应用于全身。它也可以在要治疗的区域上每日应用一次或多次，例如在早上和/或在晚上。

实施例

参考以下实施例可以更加清楚地理解本发明，所述实施例仅出于说明的目的给出的并不旨在限制由随附的权利要求所定义的本发明的范围。

实施例1：银冷杉树枝精油的抗弹性蛋白酶作用

通过在la

收获的树枝(树枝和针叶)的水蒸馏，获得了Abies alba物种的银冷杉树枝精油。在回流蒸馏下，从1.15kg干燥和压碎的树枝进行水蒸馏4小时。

通过气相色谱偶联质谱法，分析所获得的精油。它主要含有柠檬烯(35％)、α-蒎烯(10.8％)和莰烯(12.3％)以及较少量的乙酸冰片酯(4.6％)。

通过与以下比较，体外评估它的弹性蛋白酶抑制活性：

-商业的Rubus idaeus L提取物(来自VITALAB的Hydraberry)，以及

-银冷杉树枝的醇提取物，其通过在搅拌下在乙醇中提取干燥并切细的树枝4小时来获得。

为此，使所述酶、底物(Ala-Ala-Ala-对硝基苯胺)和所述样品相接触并在410nm的波长处用分光光度法监测由弹性蛋白酶活性诱导的对硝基苯胺肽的释放。

所述测试精确地如下进行：

将150μL在Tris缓冲液(浓度为50mM且pH为8)中以0.171U/mL制备的猪胰弹性蛋白酶溶液分配到96孔板(Thermo Nunc)的孔中以便获得0.1U/mL的每孔酶的终浓度，并添加了7.5μL待评估提取物(在DMSO中稀释至3.433mg/mL)以获得100μg/mL的每孔终浓度。单独的DMSO构成阴性对照(OD_对照)。用黏性膜(Greiner Bio-One)密封所述板并在室温下温育20分钟。使用Spectramax Plus 384读板仪(Molecular Devices)在410nm处进行第一次读取以获得空白的光密度。然后向所述板的每个孔中添加100μL在Tris缓冲液中浓度为2.06mM的N-琥珀酰-Ala-Ala-对硝基苯胺(Suc-AAA-pNA)(每孔的Suc-AAA-pNA终浓度为0.8mM)。在室温下温育40分钟后，在410nm处测量吸光度以便评估抑制百分比。为此，使用SoftMaxPro软件(Molecular Devices)获取数据并使用Prism软件(GraphPad Software)根据以下公式计算抑制百分比：

I％＝[(OD_样品-OD_对照)/OD_对照]x 100,其中OD指光密度。

用对应于加入底物之前样品的吸光度的空白测量来校正每个光密度值。

所有测试均一式三份进行且结果以抑制百分比和相关的标准偏差表示。

结果

测量的抗弹性蛋白酶活性对于银冷杉精油来说大约为100％，而对于阳性对照来说仅为77.1±0.095％且对于醇提取物来说仅为69.6±0.015％。

实施例2：美容组合物

通过以表示的重量比例混合以下组分，以对于本领域技术人员来说常规的方式制备以下组合物。

Claims

1.一种银冷杉(Abies alba)树枝精油作为弹性蛋白酶抑制剂用于对抗皮肤衰老迹象的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述精油用于限制和/或减少皮肤弹性纤维的降解、皮肤松弛和/或皮肤弹性丧失和/或皱纹出现。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述精油通过在欧洲、优选地在法国生长的银冷杉的树枝的水蒸馏或蒸汽蒸馏获得，优选地通过水蒸馏获得。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其特征在于，所述精油含有柠檬烯作为主要成分，以及α-蒎烯、莰烯和乙酸冰片酯作为次要成分，通过气相色谱法测量的柠檬烯与乙酸冰片酯的摩尔比在2:1至20:1，优选地5:1至10:1的范围内。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，通过气相色谱法测量的莰烯与α-蒎烯的摩尔比在0.5:1和2:1之间，优选地在1:1和1.5:1之间，和/或莰烯与乙酸冰片酯的摩尔比在1:1和5:1之间，优选地在2:1和3:1之间。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的用途，其特征在于，所述精油被包含在适合局部应用于皮肤的美容组合物中，优选地所述美容组合物为抗老、抗皱和/或防晒组合物。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，基于所述组合物的总重量，所述精油占0.001至5重量％且优选地占0.01至0.5重量％。

8.一种用于对抗皮肤衰老迹象、尤其用于限制和/或减少皮肤弹性纤维的降解、皮肤松弛和/或皮肤弹性丧失和/或皱纹出现的美容方法，所述方法包含将含有银冷杉(Abiesalba)树枝精油的美容组合物局部应用于皮肤。