CN112724185A

CN112724185A - 一种天麻素杂质的制备方法

Info

Publication number: CN112724185A
Application number: CN202011566850.XA
Authority: CN
Inventors: 宋更申; 武峥; 王艳峰
Original assignee: Beijing Youcare Kechuang Pharmaceutical Technology Co ltd
Current assignee: Beijing Youcare Kechuang Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date: 2020-12-25
Filing date: 2020-12-25
Publication date: 2021-04-30

Abstract

本发明提供一种天麻素杂质的制备方法，该方法包括：1)以天麻素粗品为原料，甲醇‑乙酸乙酯为溶剂，重结晶得到母液，浓缩得固体样品；2)采用薄层色谱法和液相色谱法将所述固体样品进行分离，与杂质对照品进行对照，确定色谱条件和目标产物；3)采用柱层析法对所述固体样品进行分离，得到对羟基苯甲醛葡萄糖苷。本发明提供的天麻素杂质的制备方法，克服了对羟基苯甲醛葡萄糖苷需化学合成反应和成本高的问题，其操作简便，原料易得，成本低，产品纯度可达100％。

Description

一种天麻素杂质的制备方法

技术领域

本发明涉及柱层析分离领域，尤其涉及一种天麻素杂质(对羟基苯甲醛葡萄糖苷)的制备方法。

背景技术

天麻素是兰科植物天麻(Gastrodia elataBlum)的主要活性成分，具有镇静、抗惊厥、抗炎及增强机体免疫等作用，临床广泛用于眩晕、头疼(神经衰弱及神经衰弱综合症、血管性头疼、紧张性头疼、脑外伤综合症、偏头疼等)及癫痫的辅助治疗，化学结构式如下：

天麻素杂质I对羟基苯甲醛葡萄糖苷，是中国药品标准记录的天麻素原料药和制剂中的已知杂质，其结构式如下：

现有的方法多采用化学合成的方法得到该杂质，具体如下：

方法一：中国专利CN111057009A中以对羟基苯甲醛和五乙酰葡萄糖为原料，丙酮作溶剂加热回流反应，反应完浓缩，柱层析得四乙酰天麻素杂质，再以甲醇作溶剂，加入硼氢化钠反应，处理得粗品，柱层析得目标产物。

方法二：文献j.ejmech.2007.03.018报道以对羟基苯甲醛和溴代五乙酰葡萄糖作原料，氢氧化钠做碱，四丁基溴化铵做相转移催化剂，氯仿和水做溶剂，45℃反应6-18h浓缩得粗品，重结晶或者柱层析得产物，再加入甲醇钠和甲醇醇解，后处理得目标产物。

上述反应步骤较多，需要化学反应，柱层析纯化或者重结晶才能得到目标产物，且反应收率不高，纯化后更降低了收率，购买原料和试剂也增加了成本。

发明内容

本发明实施例提供一种天麻素杂质的制备方法，本发明提供的天麻素杂质对羟基苯甲醛葡萄糖苷的制备方法，克服了对羟基苯甲醛葡萄糖苷需化学合成反应和成本高的问题，而且具有操作简便、原料易得、成本低和纯度高等优势。

本发明实施例提供一种天麻素杂质的制备方法，该制备方法包括：

1)以天麻素粗品为原料，甲醇-乙酸乙酯为溶剂，重结晶得到母液，浓缩得固体样品；

2)采用薄层色谱法和液相色谱法将所述固体样品进行分离，与杂质对照品进行对照，确定柱层析法条件和目标产物；

3)采用所述柱层析法对所述固体样品进行分离，得到对羟基苯甲醛葡萄糖苷。

本发明中，天麻素杂质对羟基苯甲醛葡萄糖苷的结构为：

本发明提供的天麻素杂质的制备方法，以柱层析分离的方法制备该杂质，操作简便，原料易得，成本低，产品纯度可达99％。

根据本发明实施例提供的一种天麻素杂质的制备方法，步骤1)中，乙酸乙酯与甲醇的体积比为10～30:1，优选为20：1。

根据本发明实施例提供的一种天麻素杂质的制备方法，步骤1)中，天麻素粗品与乙酸乙酯的质量体积比为1g:4.5～5mL。

根据本发明实施例提供的一种天麻素杂质的制备方法，步骤1)中，加入所述溶剂后，升温至75～85℃，优选为80℃。

根据本发明实施例提供的一种天麻素杂质的制备方法，步骤2)中，确认目标产物的峰为19min。

根据本发明实施例提供的一种天麻素杂质的制备方法，步骤2)中，展开剂选自石油醚、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸、甲酸和三氟乙酸中的一种或多种，优选含有二氯甲烷和甲醇，所述二氯甲烷和所述甲醇的体积比为5～15:1，优选为10:1。

根据本发明实施例提供的一种天麻素杂质的制备方法，步骤2)中，所述洗脱剂中含有乙酸，所述乙酸添加量为所述展开剂总体积的0.1％～1％。

根据本发明实施例提供的一种天麻素杂质的制备方法，步骤2)中，薄层板选自硅胶H、硅胶G、氧化铝G、硅胶GF₂₅₄中的一种或多种，优选为硅胶GF₂₅₄。

根据本发明实施例提供的一种天麻素杂质的制备方法，步骤3)中，所述柱层析中，流动相为含有二氯甲烷和甲醇的洗脱剂，所述二氯甲烷和所述甲醇的体积比为5～15:1，优选为10:1；洗脱剂流速为50～60ml/min；上样方法为干法上样或湿法上样，优选为干法上样，固定相为200～300目的硅胶GF₂₅₄。

根据本发明实施例提供的一种天麻素杂质的制备方法，所述天麻素原料选用高杂质含量的天麻素成品精制母液，优选的，所述天麻素原料的杂质含量为2％～3％。

本发明中，采用上述天麻素杂质制备方法的原料与分离方法，能够使得目标物更易获得，提高了制备目标物的效率；尤其是，通过采用重结晶方法，同时柱层析，在上述制备方法及优选参数下，能够更好的将粗品各组分分离，进而进一步提高目标物的收率，提高目标物纯度，从而更好的进行目标物检测。

本发明的有益效果至少在于：本发明提供的天麻素杂质的制备方法，操作简便，耗时较少，是天麻素产品精致后母液回收制得，节约了成本，纯度可以达到99％。

附图说明

为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例中样品液相图；

图2为本发明实施例中对照品液相图；

图3为本发明实施例中TLC对照示意图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明中的附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用仪器等未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。所述方法如无特别说明均为常规方法，所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径而得。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。

实施例1

本实施例提供一种天麻素杂质的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

S1:天麻素粗品的制备，反应方程式和操作过程如下，

向1.1kg天麻素中间体中加入4.3kg无水甲醇，15-20℃搅拌，氮气保护下，滴加入0.1kg甲醇钠甲醇溶液(30％)，保温反应4h，TLC监控反应完毕，活性炭脱色，阳离子交换树脂除钠离子，减压浓缩得天麻素粗品。

S2:向500.00g天麻素粗品(分子量286.11)中加入2381ml乙酸乙酯和119ml无水甲醇，升温至(80℃)回流，固体溶解，自然降温析晶，过滤，回收母液，浓缩得黄色固体样品120g。

S3:色谱条件的选择

取上述固体样品少量，用乙酸乙酯溶解后，采用薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)分别与杂质对照品进行对照(图1为样品液相图，图2为对照品液相图，图3为TLC对照示意图)。

从液相谱图中可以看出，杂质对照品保留时间19.054min，样品中19.822min的杂质峰，考虑到粗品其他杂质会有一定的干扰，确定主峰前极性稍小的峰(19.054min)即是目标产物。

对薄层色谱的分离条件进行实验，以筛选出后期柱层析的流动相类型及配比。

薄层板的选择，被分离物质的极性、酸碱性等性质是选择薄层板的主要依据，对硅胶H、硅胶G(含石膏15％-35％)、氧化铝G、硅胶GF₂₅₄(含石膏和在紫外波长254nm激发下显荧光的物质)进行了筛选，通过HPLC分析可知，该杂质有紫外吸收，所以本发明采用GF₂₅₄的硅胶板。

展开剂对石油醚、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸、甲酸和三氟乙酸的不同配比进行了筛选：石油醚/乙酸乙酯＝1/1、5/1、氯仿/乙酸乙酯＝10/1、2/1，二氯甲烷/甲醇＝20/1、15/1、10/1，最终选择二氯甲烷/甲醇＝10/1，加入两滴(展开剂总体积的0.1％)乙酸，可将天麻素和上方的杂点与目标产物有效分离，分离效果优于上述其它展开剂及配比条件，结果如上所述的附图。

液相结果显示，该杂质(对羟基苯甲醛葡萄糖苷)液相纯度约2.2％。

S4:在薄层色谱法优化的色谱条件基础上，采用柱层析法对天麻素母液回收的样品进行分离。称量100g硅胶GF₂₅₄(200-300目)，选择合适的玻璃柱装柱，压实。洗脱剂为体积比为10：1的二氯甲烷和甲醇，流速为50mL/min。

干法上样，称取约10g样品，加2ml乙酸乙酯溶解，加入装柱用的硅胶，减压浓缩干，装入柱子中，用棉花压紧，加入洗脱剂，打开下端活塞，开始洗脱。

采用湿法上样作为对照组：称取约10g样品，加2ml乙酸乙酯溶解，用滴管注入装好的硅胶柱内，用棉花塞进，加入洗脱剂，打开下端活塞，开始洗脱，两种方法的薄层色谱跟踪如下：

由色谱图看出湿法上样的分离效果较差，所以选择干法上样。

用100ml锥形瓶收集不同的组分，与对照品TLC比对后，舍去交叉部分，较纯的组分40℃减压旋除溶剂，得白色固体约95mg，纯度99％，收率0.95％。送结构确证，核磁结果如下表：

表1实施例1中核磁结果

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims

1.一种天麻素杂质的制备方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的天麻素杂质的制备方法，其特征在于，步骤1)中，乙酸乙酯与甲醇的体积比为10～30:1，优选为20：1。

3.根据权利要求2所述的天麻素杂质的制备方法，其特征在于，步骤1)中，天麻素粗品与乙酸乙酯的质量体积比为1g:4.5～5mL。

4.根据权利要求1所述的天麻素杂质的制备方法，其特征在于，步骤1)中，加入所述溶剂后，升温至75～85℃，优选为80℃。

5.根据权利要求1所述的天麻素杂质的制备方法，其特征在于，步骤2)中，确认目标产物的峰为19min。

6.根据权利要求5所述的天麻素杂质的制备方法，其特征在于，步骤2)中，展开剂选自石油醚、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸、甲酸和三氟乙酸中的一种或多种，优选含有二氯甲烷和甲醇，所述二氯甲烷和所述甲醇的体积比为5～15:1，优选为10:1。

7.根据权利要求6所述的天麻素杂质的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述展开剂中含有乙酸，所述乙酸添加量为所述展开剂总体积的0.1％～1％。

8.根据权利要求6所述的天麻素杂质的制备方法，其特征在于，步骤2)中，薄层板选自硅胶H、硅胶G、氧化铝G、硅胶GF₂₅₄中的一种或多种，优选为硅胶GF₂₅₄。

9.根据权利要求1所述的天麻素杂质的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述柱层析中，流动相为含有二氯甲烷和甲醇的洗脱剂，所述二氯甲烷和所述甲醇的体积比为5～15:1，优选为10:1；洗脱剂流速为50～60ml/min；上样方法为干法上样或湿法上样，优选为干法上样，固定相为200～300目的硅胶GF₂₅₄。

10.根据权利要求1-9任一项所述的天麻素杂质的制备方法，其特征在于，所述天麻素原料选用高杂质含量的天麻素成品精制母液，优选的，所述天麻素原料的杂质含量为2％～3％。