CN114315779B - 一类具有降血糖作用的α-吡喃酮衍生物的制备及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一类具有降血糖作用的α‑吡喃酮衍生物的制备及其用途，涉及医药技术领域。一类具有降血糖作用的α‑吡喃酮衍生物的制备及其用途，其分别为化合物1a/2a和化合物1‑10，其具体的制备步骤如下：1)制备提取物浸膏：将干燥的厚壳桂属植物wrayi粉碎后用乙醇按浸渍法提取，得提取液，将提取液减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏。本发明通过化合物1‑10以及化合物1a/2a进行CHO‑K1/GLUT4细胞摄取葡萄糖试验，结果表明化合物1‑10以及化合物1a/2a对细胞有显著的促进葡萄糖摄取活性，因此，可用来制备葡萄糖摄取活性激动剂，用于制备2型糖尿病治疗药物。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体地涉及一类从樟科厚壳桂属植物wrayi中分离得到的具有降血糖作用的α-吡喃酮类化合物及该类化合物的制备和应用。
背景技术
厚壳桂属植物为樟科植物中一个非常重要的属，全世界约有200多种，分布于热带和亚热带地区，远达澳大利亚及中美洲的智利，其主产马来西亚。在中国，主要产自四川、广西、广东、福建和台湾等地区。
GLUT4是13种葡萄糖协助转运蛋白之一，是SLC2A4基因编码的12次跨膜的膜蛋白，主要分布于肌肉、脂肪和肾脏等组织中，GLUT-4的转位受损或表达降低是2型糖尿病主要病理特征之一，因此，促进GLUT-4表达和转位进而导致葡萄糖吸收增加可以用于治疗2型糖尿病及其并发症，而厚壳桂属植物中存在着大量具有活性的α-吡喃酮衍生物类化合物，其对2型糖尿病治疗药物的研究具有重要的意义和前景，因此本发明提出一种从厚壳桂属植物wrayi中提取分离、制备的α-吡喃酮类化合物3-10和化合物1a/2a在葡萄糖摄取激动剂药物的制备中进行应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一类具有降血糖作用的α-吡喃酮衍生物的制备及其用途，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一类具有降血糖作用的α-吡喃酮衍生物，其分别为化合物1a/2a和化合物1-10，其具体化学结构式如下：
其具体的制备步骤如下：
1)制备提取物浸膏
将干燥的厚壳桂属植物wrayi粉碎后用乙醇按浸渍法提取，得提取液，将提取液减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏；
2)分离纯化
首先将步骤1)中得到的粗浸膏分散于水中成混悬液，将混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，所得乙酸乙酯相浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏；
再将得到的乙酸乙酯浸膏进行MCI柱层析，以甲醇/水梯度洗脱，根据T LC显色合并相似流份得到7个组分Fr.1-Fr.7；
将Fr.7组分在SephadexLH-20(EtOH)凝胶柱上分离得到4个亚组分，其分别为Fr.7A-Fr.7D；
将Fr.7C组分经硅胶柱层析(石油醚/丙酮8∶1→2∶1，体积比)分离得到四个亚组分，其分别为Fr.7C1-Fr.7C4；
将Fr.5组分用SephadexLH-20(EtOH)凝胶柱分离得到三个亚组分，其分别为Fr.5A-Fr.5C；
将Fr.5C组分进一步经硅胶柱层析(石油醚/丙酮3∶1→0∶1，体积比)得三个亚组分，其分别为Fr.5C1-Fr.5C3；
将Fr.5A经硅胶柱层析(石油醚/丙酮3∶1→0∶1，体积比)分离得到三个亚组分，其分别为Fr.5A1-Fr.5A3；
将Fr.5A2用半制备HPLC(CH3CN/H20，38∶62，3.0mL/min)纯化得到化合物1和化合物2；
将Fr.4经SephadexLH-20(EtOH)凝胶柱色谱分离得到两个亚组分，Fr.4A和Fr.4B；
将Fr.4B利用硅胶柱层析(石油醚/丙酮8∶1→0∶1，体积比)纯化得到八个亚组分，其分别为Fr.4B1-Fr.4B8；
3)α-吡喃酮衍生物的制备
将步骤2)中的化合物1或者化合物2与醋酸酐在干燥吡啶中室温反应过夜，反应混合物用二氯甲烷萃取三次，减压浓缩除掉溶剂后经半制备HPLC(M eCN/H20，42：58，体积比)纯化得到化合物1a/2a；
将Fr.5A1经半制备HPLC(CH3CN/H2O，40∶60，3.0mL/min)纯化得化合物3；
将Fr.5C2组分采用半制备HPLC(CH3CN/H2O，30∶70，3.OmL/min)纯化得到化合物4和化合物7；
将Fr.7C3组分经半制备HPLC(CH3CN/H2O，37∶63，3.0mL/min)纯化得化合物5；
将Fr.7C2组分进一步经半制备HPLC(CH3CN/H2O，40∶60，3.0mL/min)纯化得化合物6；
将Fr.5A3经半制备HPLC(CH3CN/H2O，30∶70，3.0mL/min)纯化得化合物8；
将Fr.5C1组分用半制备HPLC(CH3CN/H2O，40∶60，3.0mL/min)纯化得化合物9；
将Fr.4B6经半制备HPLC(CH3CN/H2O，30∶70，3.0mL/min)纯化得到化合物10。
本技术方案中优选的，步骤1)中所使用的乙醇为体积分数为95％的乙醇。
本技术方案中优选的，在步骤3)中，将Fr.7C2组分是用半制备型HPLC以乙腈/水40∶60，流速3.0mL/min在保留时间40.2min得到化合物6；将Fr.7C3组分采用半制备型HPLC以乙腈/水37∶63，流速3.0mL/min在保留时间59.5min得到化合物5；将Fr.5C1组分用半制备HPLC以乙腈/水40∶60，流速3.0mL/min在保留时间22.5min得到化合物9；将Fr.5C2组分用半制备HPLC以乙腈/水30∶70，流速3.0mL/min在保留时间28.5min得到化合物4和在保留时间33.7min得到7；将Fr5A2组分经半制备HPLC以乙腈/水38∶62，流速3.0mL/min在保留时间21.5min得到化合物1和保留时间为26.2min的化合物2；将Fr.5A1组分用半制备HPLC以乙腈/水40∶60，流速3.0mL/min在保留时间32.0min得到化合物3；将Fr5A3组分经半制备HPLC以乙腈/水30∶70，流速3.0mL/min在保留时间37.3min得到化合物8；将Fr4B6经半制备HPLC以乙腈/水30∶70，流速3.0mL/min，在保留时间29.2min得化合物10。
其具体的应用如下：将化合物1a/2a和化合物3-10中的任意一种或者多种的组合物应用在CHO-K1/GLUT4细胞中的葡萄糖摄取活性中的降血糖。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明中所提出的α-吡喃酮衍生物中的化合物1-6和化合物1a/2a为新化合物，目前尚未有人公开这些化合物，同时通过化合物1-10以及化合物1a/2a进行CHO-K1/GLUT4细胞摄取葡萄糖试验，结果表明化合物1-10以及化合物1a/2a对细胞有显著的促进葡萄糖摄取活性，因此，可用来制备葡萄糖摄取活性激动剂，用于制备2型糖尿病治疗药物。
附图说明
图1为本发明所提出的α-吡喃酮衍生物促进CHO-K1/GLUT4细胞的葡萄糖摄取效果图；
图2为本发明所提出的α-吡喃酮衍生物对CHO-K1细胞的增值抑制活性图；
图3为本发明所提出的化合物1的1H-NMR谱(氘代试剂：CDCl3)；
图4为本发明所提出的化合物1的13C-NMR谱(氘代试剂：CDCl3)；
图5为本发明所提出的化合物1的HSQC谱(氘代试剂：CDCl3)；
图6为本发明所提出的化合物1的HMBC谱(氘代试剂：CDCl3)；
图7为本发明所提出的化合物1的1H-1HCOSY谱(氘代试剂：CDCl3)；
图8为本发明所提出的化合物1的ROESY谱(氘代试剂：CDCl3)；
图9为本发明所提出的化合物1的(+)-HRESIMS谱；
图10为本发明所提出的化合物1的(-)-HRESIMS谱；
图11为本发明所提出的化合物2的1H-NMR谱(氘代试剂：CDCl3)；
图12为本发明所提出的化合物2的13C-NMR谱(氘代试剂：CDCl3)；
图13为本发明所提出的化合物2的HSQC谱(氘代试剂：CDCl3)；
图14为本发明所提出的化合物2的HMBC谱(氘代试剂：CDCl3)；
图15为本发明所提出的化合物2的1H-1HCOSY谱(氘代试剂：CDCl3)；
图16为本发明所提出的化合物2的ROESY谱(氘代试剂：CDCl3)；
图17为本发明所提出的化合物2的(+)-HRESIMS谱；
图18为本发明所提出的化合物2的(-)-HRESIMS谱；
图19为本发明所提出的化合物3的1H-NMR谱(氘代试剂：CD3OD)；
图20为本发明所提出的化合物3的13C-NMR谱(氘代试剂：CD30D)；
图21为本发明所提出的化合物3的HSQC谱(氘代试剂：CD3OD)；
图22为本发明所提出的化合物3的HMBC谱(氘代试剂：CD3OD)；
图23为本发明所提出的化合物3的1H-1HCOSY谱(氘代试剂：CD3OD)；
图24为本发明所提出的化合物3的ROESY谱(氘代试剂：CD3OD)；
图25为本发明所提出的化合物3的(+)-HRESIMS谱；
图26为本发明所提出的化合物4的1H-NMR谱(氘代试剂：CD3OD)；
图27为本发明所提出的化合物4的13C-NMR谱(氘代试剂：CD3OD)；
图28为本发明所提出的化合物4的HSQC谱(氘代试剂：CD3OD)；
图29为本发明所提出的化合物4的HMBC谱(氘代试剂：CD3OD)；
图30为本发明所提出的化合物4的1H-1HCOSY谱(氘代试剂：CD3OD)；
图31为本发明所提出的化合物4的ROESY谱(氘代试剂：CD3OD)；
图32为本发明所提出的化合物4的(+)-HRESIMS谱；
图33为本发明所提出的化合物5的1H-NMR谱(氘代试剂：CDCl3)；
图34为本发明所提出的化合物5的13C-NMR谱(氘代试剂：CDCl3)；
图35为本发明所提出的化合物5的HSQC谱(氘代试剂：CDCl3)；
图36为本发明所提出的化合物5的HMBC谱(氘代试剂：CDCl3)；
图37为本发明所提出的化合物5的1H-1HCOSY谱(氘代试剂：CDCl3)；
图38为本发明所提出的化合物5的ROESY谱(氘代试剂：CDCl3)；
图39为本发明所提出的化合物5的(+)-HRESIMS谱；
图40为本发明所提出的化合物6的1H-NMR谱(氘代试剂：CDCl3)；
图41为本发明所提出的化合物6的13C-NMR谱(氘代试剂：CDCl3)；
图42为本发明所提出的化合物6的HSQC谱(氘代试剂：CDCl3)；
图43为本发明所提出的化合物6的HMBC谱(氘代试剂：CDCl3)；
图44为本发明所提出的化合物6的1H-1HCOSY谱(氘代试剂：CDCl3)；
图45为本发明所提出的化合物6的ROESY谱(氘代试剂：CDCl3)；
图46为本发明所提出的化合物6的(+)-HRESIMS谱；
图47为本发明所提出的化合物1a/2a的1H-NMR谱(氘代试剂：CDCl3)；
图48为本发明所提出的化合物1a/2a的(+)-HRESIMS谱。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，在本发明的描述中，术语“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，并不是指示或暗示所指的装置或元件所必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
此外，应当理解，为了便于描述，附图中所示出的各个部件的尺寸并不按照实际的比例关系绘制，例如某些层的厚度或宽度可以相对于其他层有所夸大。
应注意的是，相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一顶在一个附图中被定义或说明，则在随后的附图的说明中将不需要再对其进行进一步的具体讨论和描述。
在如下的实施例中所指的化合物1-10和化合物1a/2a的化学结构式如下所示(结构式中的阿拉伯数字是化学结构中碳原子的标位)：
本发明提供一类具有降血糖作用的α-吡喃酮衍生物的制备方法技术方案：其具体的制作步骤如下：
1)制备厚壳桂属植物wrayi提取物浸膏
(1)制备提取液
将6.Okg干燥的厚壳桂属植物wrayi小枝用30L的浓度为95％乙醇于室温浸渍提取三次，每次浸渍7天，合并提取液；将提取液减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏。
(2)制备提取物浸膏
将上述提取液在温度≤45℃减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏285.0g；
2)分离纯化
首先将上述提取物浸膏分散于水中成混悬液，将混悬液用乙酸乙酯(1.5L)萃取三次，所得萃取液减压浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏(38.5g)；
再将乙酸乙酯提取物(38.5g)采用MCI树脂柱层析纯化，利用甲醇/水梯度洗脱，(30∶70→100∶0，体积比)分离得到七个组分，其分别为Fr.1-Fr.7；将Fr.7(3.5g)利用SephadexLH-20(EtOH)凝胶柱分离得到四个亚组分，其分别为Fr.7A-Fr.7D，将Fr.7C组分(476.8mg)经硅胶柱层析(石油醚/丙酮8∶1→2∶1，体积比)分离得到四个亚组分，其分别为Fr.7C1-Fr.7C4；将Fr.5(3.47g)用Sep hadexLH-20(EtOH)凝胶柱分离得到三个亚组分，其分别是Fr.5A-Fr.5C，将Fr.5C(206.0mg)进一步经硅胶柱层析(石油醚/丙酮3∶1→0∶1，体积比)得三个亚组分，其分别是Fr.5C1-Fr.5C3；将Fr.5A(170.3mg)经硅胶柱层析(石油醚/丙酮3∶1→0∶1，体积比)分离得到三个亚组分，其分别是Fr.5A1-Fr.5A3；将Fr.4(2.8g)经SephadexLH-20(EtOH)凝胶柱色谱分离得到两个亚组分，其分别为Fr.4A和Fr.4B，将Fr.4B(1.0g)利用硅胶柱层析(石油醚/丙酮8∶1→0∶1，体积比)纯化得到八个亚组分，Fr.4B1-Fr.4B8。
3)α-吡喃酮衍生物的制备
(1)化合物1和化合物的制备
将步骤2)中得到的Fr.5A2(21.6mg)采用半制备HPLC(CH3CN/H20，38∶62，3.0mL/min)纯化得到化合物1(6.6mg，tR＝21.5min)和化合物2(3.7mg，tR＝26.2min)。
(2)化合物3的制备
将步骤2)中得到的Fr.5A1(14.9mg)经半制备HPLC(CH3CN/H2O，40∶60，3.0mL/min)纯化得化合物3(1.3mg，tR＝32.0min)。
(3)化合物4和化合物7的制备
将步骤2)中得到的Fr.5C2(23.6mg)采用半制备HPLC(CH3CN/H2O，30∶70，3.0mL/min)纯化得到化合物4(0.6mg，tR＝28.5min)和7(1.7mg，tR＝33.7min)。
(4)化合物5的制备
将步骤2)中得到的Fr.7C3(62.0mg)经半制备HPLC(CH3CN/H2O，37∶63，3.0mL/min)纯化得化合物5(0.7mg，tR＝59.5min)。
(5)化合物6的制备
将步骤2)中得到的Fr.7C2(104.8mg)进一步经半制备HPLC(CH3CN/H2O，40∶60，3.0mL/min)纯化得化合物6(2.0mg，tR＝40.2min)。
(6)化合物8的制备
将步骤2)中得到的Fr.5A3(14.9mg)经半制备HPLC(CH3CN/H2O，30∶70，3.0mL/min)纯化得化合物8(0.8mg，tR＝37.3min)。
(7)化合物9的制备
将步骤2)中得到的Fr.5C1(10.0mg)用半制备HPLC(CH3CN/H2O，40∶60，3.0mL/min)纯化得化合物9(0.8mg，tR＝22.5min)。
(8)化合物10的制备
将步骤2)中得到的Fr.4B6(20.0mg)经半制备HPLC(CH3CN/H2O，30∶70，3.0mL/min)纯化得到化合物10(1.8mg，tR＝29.2min)。
(9)化合物1a/2a的制备
将步骤3)中得到的1.2mg化合物1或者化合物2与2.0mL醋酸酐在干燥吡啶(100μL)中室温反应过夜，反应混合物用二氯甲烷萃取三次(5mL×3)，减压浓缩除掉溶剂后经半制备HPLC(MeCN/H2O，42：58，体积比)纯化得化合物1a/2a。
按常规经NMR、HRESIMS、ECD和UV等多种现代光谱技术，确定了化合物1-6和化合物1a/2a的化学结构，其理化性质如下：
化合物1：黄色胶状物；
UVλmax(logε)252(2.99)nm；ECD(c2.0×10-4gmL-1，MeOH)λ(Δε)203(+8.58)，236(+1.20)，254(+2.43)nm；1H-NMR(400MHz)和13C-NMR(100MHz)数据，见表1；(+)-HRESI-MSm/z353.1363[M+Na]+(calcdforC19H22O5Na，353.1365)，(-)-HRESI-MSm/z329.1393[M-H]-(cal cdforC19H21O5，329.1389)。
化合物2：黄色胶状物；
UVλmax(logε)292(2.64)nm；ECD(c2.0×10-4gmL-1，MeOH)λ(Δε)203(+7.41)，236(+1.02)，255(+2.03)nm；1H-NMR(400MHz)和13C-NMR(100MHz)数据，见表1；(+)-HRESI-MSm/z353.1363[M+Na]+(calcdforC19H22O5Na，353.1365)，(-)-HRESI-MSm/z329.1393[M-H]-(calcdforC19H21O5，329.1389)。
化合物3：黄色胶状物；
UVλmax(logε)251(3.97)nm；ECD(c2.0×10-4gmL-1，MeOH)λ(Δε)204(+2.26)，223(-1.39)，253(+1.44)nm；1H-NMR(400MHz)和13C-NMR(100MHz)数据，见表2；(+)-HRESI-MSm/z683.2817[2M+Na]+(calcdforC38H44O10Na，683.2832)。
化合物4：黄色胶状物；
UVλmax(logε)220nm(2.51)，288nm(2.57)；ECD(c2.0×10-4gmL-1，MeOH)λ(Δε)200(+0.40)，223(-0.57)，282(+0.55)nm；1H-NMR(400MHz)和13C-NMR(100MHz)数据，见表2；(+)-HRESI-MSm/z287.1281[M+H]+(calcdforC17H19O4，287.1283)，m/z309.1086[M+Na]+(calcdforC17H18O4Na，309.1097)。
化合物5：黄色胶状物；
UVλmax(logε)285(3.46)nm；ECD(c2.0×10-4gmL-1，MeOH)λ(Δε)200(-1.26)，207(-2.39)，283(+0.31)nm；1H-NMR(400MHz)和13C-NMR(100MHz)数据，见表3；(+)-HRESI-MSm/z293.1163[M+Na]+(calcdforC17H18O3Na，293.1154)。
化合物6：黄色胶状物；
UVλmax(logε)242(3.26)nm；ECD(c2.0×10-4gmL-1，MeOH)λ(Δε)200(-2.46)，206(-4.26)，243(+1.69)nm；1H-NMR(400MHz)和13C-NMR(100MHz)数据，见表3；(+)-HRESI-MSm/z271.1326[M+H]+(calcdforC17H19O3，271.1334)。
化合物1a/2a：黄色胶状物；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δH7.37(2H，d，J＝7.2Hz，H-2″/H-6″)，7.32(2H，t，J＝7.2Hz，H-3″/H-5″)，7.26(1H，H-4″，overlapped)，6.86(1H，ddd，J＝9.6，6.0，2.4Hz，H-4)，6.61(1H，d，J＝16.0Hz，H-6′)，6.10(1H，dd，J＝16.0，7.2Hz，H-5′)，6.01(1H，dd，J＝9.6，2.8Hz，H-3)，5.49(1H，q，J＝6.8Hz，H-4′)，5.12(1H，m，H-2′)，4.50(1H，m，H-6)，2.45(1H，ddd，J＝18.4，5.2，4.4Hz，H-5a)，2.30(1H，ddt，J＝18.4，11.6，2.4Hz，H-5b)，2.09(3H，s，4′-OAc)，2.06(3H，s，2′-OAc)；(+)-HRESI-MSm/z395.1462[M+Na]+(calcdforC21H24O6Na，395.1465)，m/z767.3038[2M+Na]+(calcdforC42H48O12Na，767.3038)。
α-吡喃酮衍生物在CHO-K1/GLUT4细胞中的葡萄糖摄取活性中的降血糖的应用实验：
利用过表达GLUT4慢病毒感染CHO-K1细胞(中国仓鼠卵巢)得CHO-K1/GLUT4细胞株，CHO-K1和CHO-K1/GLUT4细胞以3×103个/孔的密度接种于Costar48孔板中，孵育过夜粘附。然后分别用胰岛素(150μg/mL，阳性对照)或测试样品(50、5和0.5μg/mL)处理细胞。培养48h后，用4％甲醛室温固定15min，然后滗析固定液。用100μLPBS冲洗3次，使用葡萄糖测定试剂盒(中国南京建成)测定血糖水平。
细胞毒活性测试：CCK8法检测野生型CHO-K1细胞增值活性。96孔培养板中的CHO-K1细胞用不同浓度的试验化合物处理。加入100μL培养基孵育指定时间后，每孔加入10μLCCK8试剂，37℃孵育2h。细胞用200μLDMSO处理，使用WD-2102B酶标仪(六一生物科技有限公司)。
实验结果：除化合物4以外的所有其它α-吡喃酮类化合物均在CHO-K1/GLUT4细胞株上进行了葡萄糖摄取活性评价，结果如图1所示。与CHO-K1/GLUT4组相比，阳性对照胰岛素在150μg/ml时显示出约1.42±0.14倍的葡萄糖摄取量增加。大多数测试化合物在0.5μg/ml和5.0μg/ml浓度下显著促进细胞葡萄糖吸收。与胰岛素(150μg/ml)相比，化合物1a/2a、2、3和10在0.5μg/ml下葡萄糖摄取量分别提高1.36±0.08，1.27±0.12，1.28％±0.12和1.25±0.12倍。所有α-吡喃酮从5.0μg/ml到50μg/ml呈现葡萄糖摄取能力下降趋势，表明它们在高浓度下对CHO-K1细胞具有细胞毒性。化合物1、2、5、6和8-10在50μg/ml时显著损伤CHO-K1细胞并导致细胞代谢能力下降。计算结果表示为“均值±标准误”，每组实验采用六个复孔，平行操作三次；*p＜O.05，**p＜0.01，***p＜0.001，and****p＜0.0001，对比CHO-K1/GLUT4组；#p＜0.001，对比胰岛素组。采用CCK8法，进一步评估1a/2a、2、3和8等α-吡喃酮类化合物对野生型CHO-K1细胞的增殖抑制活性，结果如图2所示。其IC50值分别为：1a/2a(938.0μM)、2(34.8μM)、3(602.2μM)和8(87.3μM)，其中计算结果表示为“均值±标准差”，每组实验采用5个复孔，平行三次操作；*p＜0.05，与对照组相比。
表1化合物1和2的1H-NMR和13C-NMR数据
表2化合物3和4的1H-NMR和13C-NMR数据
表3化合物5和6的1H-NMR和13C-NMR数据
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (5)
1.一类具有降血糖作用的α-吡喃酮衍生物，其特征在于：其分别为化合物1、化合物2、化合物1a/2a、化合物3、化合物5和化合物6，其具体化学结构式如下：
2.制备如权利要求1中所述的一类具有降血糖作用的α-吡喃酮衍生物的方法，其特征在于：其制备步骤如下：
1)制备提取物浸膏
将干燥的厚壳桂属植物wrayi粉碎后用乙醇按浸渍法提取，得提取液，将提取液减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏；
2)分离纯化
首先将步骤1)中得到的粗浸膏分散于水中成混悬液，将混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，所得乙酸乙酯相浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏；
再将得到的乙酸乙酯浸膏进行MCI柱层析，以甲醇/水梯度洗脱，根据TLC显色合并相似流份得到7个组分Fr.1-Fr.7；
将Fr.7组分在SephadexLH-20凝胶柱上分离得到4个亚组分，其分别为Fr.7A-Fr.7D；
将Fr.7C组分经硅胶柱层析分离得到四个亚组分,其分别为Fr.7C1_Fr.7C4；
将Fr.5组分用SephadexLH-20凝胶柱分离得到三个亚组分,其分别为Fr.5A_Fr.5C；
将Fr.5C组分进一步经硅胶柱层析得三个亚组分，其分别为Fr.5C1_Fr.5C3；
将Fr.5A经硅胶柱层析分离得到三个亚组分,其分别为Fr.5A1_Fr.5A3；
将Fr.5A2用半制备HPLC纯化得到化合物1和化合物2；
将Fr.4经SephadexLH-20凝胶柱色谱分离得到两个亚组分,Fr.4A和Fr.4B；
将Fr.4B利用硅胶柱层析纯化得到八个亚组分,其分别为Fr.4B1_Fr.4B8；
3)α-吡喃酮衍生物的制备
将步骤2)中的化合物1或者化合物2与醋酸酐在干燥吡啶中室温反应过夜，反应混合物用二氯甲烷萃取三次，减压浓缩除掉溶剂后经半制备HPLC纯化得到化合物1a/2a；
将Fr.5A1经半制备HPLC纯化得化合物3；
将Fr.5C2组分采用半制备HPLC纯化得到化合物4和化合物7；
将Fr.7C3组分经半制备HPLC纯化得化合物5；
将Fr.7C2组分进一步经半制备HPLC纯化得化合物6；
将Fr.5A3经半制备HPLC纯化得化合物8；
将Fr.5C1组分用半制备HPLC纯化得化合物9；
将Fr.4B6经半制备HPLC纯化得到化合物10。
3.根据权利要求2所述的制备如权利要求1中所述的一类具有降血糖作用的α-吡喃酮衍生物的方法，其特征在于：步骤1)中所使用的乙醇为体积分数为95％的乙醇。
4.根据权利要求2所述的制备如权利要求1中所述的一类具有降血糖作用的α-吡喃酮衍生物的方法，其特征在于：在步骤3)中，将Fr.7C2组分是用半制备型HPLC以乙腈/水40:60，流速3.0mL/mi n在保留时间40.2min得到化合物6；将Fr.7C3组分采用半制备型HPLC以乙腈/水37:63，流速3.0mL/min在保留时间59.5min得到化合物5；将Fr.5C1组分用半制备HPLC以乙腈/水40:60，流速3.0mL/min在保留时间22.5min得到化合物9；将Fr.5C2组分用半制备HPLC以乙腈/水30:70，流速3.0mL/min在保留时间28.5min得到化合物4和在保留时间33.7min得到7；将Fr5A2组分经半制备HPLC以乙腈/水38:62，流速3.0mL/min在保留时间21.5min得到化合物1和保留时间为26.2min的化合物2；将Fr.5A1组分用半制备HPLC以乙腈/水40:60，流速3.0mL/min在保留时间32.0min得到化合物3；将Fr5A3组分经半制备HPLC以乙腈/水30:70，流速3.0mL/min在保留时间37.3min得到化合物8；将Fr4B6经半制备HPLC以乙腈/水30:70,流速3.0mL/min，在保留时间29.2min得化合物10。
5.权利要求1中所述的一种α-吡喃酮衍生物在制备具有降血糖功能的药物中的应用，其特征在于：将化合物1、化合物2、化合物1a/2a、化合物3、化合物5和化合物6中的任意一种或者多种的组合物应用在CHO-K1/GLUT4细胞中的葡萄糖摄取活性中的降血糖。
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