CN112716953A - Cdn1163在制备缓解或者治疗神经性疼痛的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了CDN1163在制备缓解或治疗神经性疼痛的药物中的应用，所述CDN1163能作用于神经性疼痛包括中枢神经性疼痛和周围神经性疼痛一种或多种，改善大鼠慢性坐骨神经压迫性损伤导致的机械痛敏感和热痛敏感，改善腰椎间孔5背根神经节的神经元皱缩与星形胶质细胞的活化，抑制腰椎间孔4‑6背根神经节的神经元兴奋性升高，能有效减轻神经性疼痛症状，且反复注射可显著逆转机械性痛觉过敏和热痛觉过敏，且没有耐受迹象，停药后能维持治疗效果，应用在制备缓解或治疗持续时间长且难以治疗的神经性疼痛的药物中。

Description

CDN1163在制备缓解或者治疗神经性疼痛的药物中的应用

技术领域

本发明属于神经类药物技术领域，具体涉及一种CDN1163在制备缓解或者治疗神经性疼痛的药物中的应用。

背景技术

神经性疼痛多是由于机体受到机械损伤、病毒感染、神经毒素、炎症以及肿瘤浸润等造成外周或中枢神经系统损害或功能障碍引起的疼痛。据调查显示神经性疼痛的发病率在7-10％左右，且有逐年增加的趋势，发病时会产生刺痛、灼热痛等自发性疼痛以及痛觉过敏、痛觉超敏等刺激诱发样疼痛，严重影响患者的工作与生活。全球领先的制药与医疗保健顾问公司Decision Resources在一份报告中预测2028年全球7大主要市场(美、日、法、德、意、英及西班牙)疼痛治疗市值在380亿美元左右，其中200亿以上用于神经性疼痛的治疗。但是在治疗效果上，只有30％患者的疼痛症状能够得到有效控制。

现行世界神经病理性疼痛指南表明，用于治疗神经性疼痛的一线药物主要有加巴喷丁、普瑞巴林和三环类抗抑郁药(TCA)等；二线药物主要有8％辣椒素贴剂、利多卡因贴剂和曲马多等；三线药物主要有强阿片类药物等。但是，临床调研发现指南推荐的一线治疗药物使用率明显偏低，且长期使用这些药物用于疼痛治疗时，除了口干、嗜睡、眩晕、周围性水肿、心肌毒性等副作用外，阿片类药物因其具有强大的致依赖性，容易作为毒品滥用等缺点限制了其临床应用，使它们很难成为治疗神经性疼痛的常用药。因此，开发一种安全有效，且适用于治疗神经性疼痛的新型药物具有非常广阔的前景。

内质网是真核细胞内一个承担着重要生理功能的细胞器，是蛋白质的合成、折叠、运输和细胞内钙储存的主要场所，同时也是脂质代谢及类固醇激素合成的细胞器之一。当细胞受到一些内外界刺激(缺氧缺血、营养过剩或缺失、氧化应激、病毒感染、基因突变等)时，都有可能引起内质网上钙离子通道的改变，出现钙剥夺或钙超载，引起内质网应激。最新研究报道表明内质网应激(Endoplasmic reticulum stress，ER stress)是引起乃至维持神经性疼痛的重要原因之一。研究人员在I型糖尿病诱导的周围神经痛大鼠的后爪皮肤以及坐骨神经发现了内质网应激相关蛋白的活化，引起外周神经系统敏化；并发现腹腔给予一种内质网应激的抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA，150mg/kg)可以抑制内质网应激，达到缓解疼痛的作用。不仅如此，L₅脊神经结扎(Spinal nerve ligation，SNL)的神经性疼痛模型大鼠脊髓背角处存在明显的内质网应激效应，导致双链RNA依赖的蛋白激酶样ER激酶(PERlike ER kinase，PERK)、1型ER转膜蛋白激酶(Type-1 ER transmembrane proteinkinase，IRE1)和活化转录因子(Activating transcription factor6，ATF-6)等未折叠蛋白的响应分子显著增强，腹腔给予ATF6的抑制剂能明显减轻SNL大鼠的机械痛敏。这些证据都说明了内质网应激通路在调节疼痛系统活性方面的重要作用，为治疗神经性疼痛提供了一个新的思路。

内质网是细胞中储存钙的场所，当有效应到达胞质时，位于内质网膜上的Ca²⁺通道，兰尼碱受体(Ryanodine receptor，RyR)及1,4,5-三磷酸肌醇(Inositol 1,4,5-trisphosphate，IP3)受体被激活将内质网中的Ca²⁺释放到细胞质内发挥作用，待效应过后，内质网膜上Ca²⁺依赖的三磷酸腺苷(ATP)酶利用ATP水解所释放出来的能量帮助细胞质内Ca²⁺逆浓度梯度泵入ER钙库，从而可以实现细胞内钙离子的稳态。SERCA(sarco/endoplasmic reticulum Ca²⁺-ATPase)是一种跨膜10次的阳离子转运ATP酶，能够催化ATP水解使Ca²⁺逆浓度梯度从细胞质转移到内质网的内腔。SERCA家族有3种亚型，SERCA1-3，每种亚型又有各自的剪切变异体。其中SERCA2参与维持内质网Ca²⁺的转运，并且与细胞经外界刺激在细胞质产生的钙振荡密切相关。因此，SERCA2的功能障碍可能影响内质网应激和内质网内腔的Ca²⁺浓度，导致其蛋白功能异常，产生疾病。例如在口腔癌、甲状腺癌、肺癌和结肠癌患者的体细胞中SERCA2表达大幅度降低，而在直肠癌和前列腺癌中SERCA2的表达有所提高，这都揭示SERCA2基因表达异常已经直接或间接成为某些癌变的早期事件；在毛囊角化病等遗传性疾病中SERCA2功能约下降了一半，导致了内质网中钙存储减少，钙离子依赖的伴侣蛋白的功能也发生紊乱；SERCA2a蛋白水平和活性的降低也与心脏衰竭有关，通过SERCA2a过表达可以缓解心脏衰竭；在糖尿病周围神经痛大鼠DRG中也发现SERCA2 mRNA表达的下降，提示SERCA2表达下降与神经性疼痛密切相关。前期研究主要集中在SERCA2对癌症、心肌系统的调节作用，均未涉及SERCA2对神经性疼痛的治疗作用。

CDN1163是一种肌膜/内质网Ca²⁺-ATPase(SERCA)的变构激活剂，可改善Ca²⁺稳态，CAS号为892711-75-0，分子式：C₂₀H₂₀N₂O₂，分子量：320.39g/mol结构式如下：

现有文献报导的主要治疗作用有：CDN1163以浓度依赖性地降低高糖诱导的大鼠心肌细胞的脂肪因子抵抗素，减少活化T细胞的核因子(Nuclear Factor Of Activated TCells,NFATc)的表达以及促进AMPKα的磷酸化，改善肥胖、胰岛素抵抗和糖尿病状态。(Singh R,et al.Sci Rep.2018)

CDN1163(雄性ob/ob小鼠腹腔注射,50mg/kg/day,5d；)降低ob/ob小鼠的血糖水平，改善代谢参数和糖异生基因表达，逆转肝脂肪变性，改善肝脏Ca²⁺转运活性。增加SERCA2活性，降低内质网(ER)应激诱导的细胞死亡，提高线粒体效率。(Kang S,et al.J BiolChem.2016)

CDN1163可以增加ER钙含量，体外可以抑制ER应激诱导的细胞死亡，并在大鼠6-羟基多巴胺(6-OHDA)模拟的帕金森模型上显示出显著的疗效。(Dahl R.Bioorganic&medicinal chemistry,2016)

CDN1163治疗完全恢复了SERCA活性，并逆转了未经治疗的肌无力小鼠腓肠肌重量的减少。CDN1163还逆转了肌无力小鼠线粒体中ROS生成和氧化损伤的增加。(Rizwan,etal.Redox Biology,2018)

至今为止，未有含有SERCA2激动剂CDN1163的药物具有治疗神经性疼痛的有关报道，通过CDN1163已知的性质无法推断其是否通过激动SERCA2，在药物中发挥缓解神经性疼痛的作用。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种CDN1163在制备缓解或者治疗神经性疼痛的药物中的应用。

技术方案：本发明的CDN1163在制备缓解或治疗神经性疼痛的药物中的应用。

优选的，所述药物剂型为丸剂、膏剂、片剂、口服液剂、皮下注射剂和静脉注射剂中的一种或多种。

进一步的，当所述药物以上述剂型的形式被使用时，该药物还可以包括赋形剂、稳定化剂、保存剂、缓冲剂、助溶剂、乳化剂、稀释剂或等渗剂。

优选的，所述神经性疼痛包括中枢神经性疼痛和周围神经性疼痛一种或多种；所述神经性疼痛包括三叉神经痛、周围神经损伤所致疼痛、神经损伤导致的疼痛、糖尿病性神经病变引起的疼痛、化疗药物引起的神经痛、带状疱疹后遗神经痛、神经根痛、坐骨神经痛、脊髓损伤、脑损伤及多发性硬化所致神经性疼痛和卒中后中枢痛。

进一步的，所述神经性疼痛为坐骨神经缩窄、物理损伤引起的神经病理性疼痛。所述神经性疼痛的症状包括背根神经节神经元皱缩、神经元兴奋性增高、星形胶质细胞活化、大鼠手术侧后肢机械痛阈值降低、热痛阈值降低。

所述CDN1163可以显著性改善大鼠慢性坐骨神经压迫性损伤导致的机械痛敏感和热痛敏感，改善L₅DRG神经元皱缩，抑制CCI导致的L_4-6DRG神经元兴奋性升高，改善CCI导致的L₅DRG星形胶质细胞的活化，应用在制备缓解或治疗神经性疼痛的药物中。

所述CDN1163剂量为10μg/kg大鼠(鞘内注射)或10mg/kg大鼠(腹腔注射)或30mg/kg大鼠(口服给药)。

进一步的，所述注射剂的使用方法为：术后14天单次鞘内注射，和/或术后14天至21天每日一次连续鞘内注射，所述注射的时间为每天的9点(24小时制)。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：CDN1163通过改善大鼠慢性坐骨神经压迫性损伤导致的机械痛敏感和热痛敏感，改善腰椎间孔5背根神经节的神经元皱缩与星形胶质细胞的活化，抑制腰椎间孔4-6背根神经节的神经元兴奋性升高，重复给药CDN1163对神经病理性疼痛的镇痛作用无耐受性，且停药后维持其治疗效果，对疼痛具有治愈作用，CDN1163应用在制备缓解或治疗持续时间长且难以治疗的神经性疼痛的药物中，能有效缓解治疗神经性疼痛。

附图说明

图1、本发明中CDN1163对大鼠慢性坐骨神经压迫性损伤模型连接坐骨神经的腰椎间孔5背根神经节(L₅ DRG)的形态学改变的影响，比例尺为50μm。

图2、本发明中CDN1163对大鼠慢性坐骨神经压迫性损伤模型连接坐骨神经的腰椎间孔4-6背根神经节(L_4-6 DRG)神经元动作电位基强度的影响。

图3、本发明中CDN1163对大鼠慢性坐骨神经压迫性损伤模型L_4-6 DRG神经元动作电位发作频率的影响。

图4、本发明中CDN1163(多次)对大鼠慢性坐骨神经压迫性损伤模型L₅ DRG中GFAP的表达量，比例尺为25μm。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的技术方案作进一步说明。

以下实施例中，在没有特别说明的情况下，所使用的各种试剂和材料均来自市售。

在以下实施例中，使用大鼠慢性坐骨神经压迫性损伤(chronic constrictioninjury，CCI)模型，通过机械痛敏和热痛敏的测定评价药物对神经性疼痛的作用。CCI模型是目前应用最为广泛的评价药物对物理损伤外周神经引起的慢性神经性疼痛的模型。

在以下实施例中，通过膜片钳实验检测急性分离的L_4-6DRG神经元动作电位的发放，评价药物对神经性疼痛中神经元兴奋性的抑制作用。

在以下实施例中，通过免疫荧光染色实验检测L₅DRG中GFAP的表达量，评价药物对神经性疼痛的缓解作用。

在以下实施例中，所使用的实验用SPF级别SD大鼠均购自南京市江宁区青龙山动物繁殖场，雄性，体重180g-220g。

在以下实施例中，所述CDN1163的剂量优选为10μg/kg大鼠(鞘内注射)，更优选为30mg/kg大鼠(口服给药)或10mg/kg大鼠(腹腔注射)。

实施例1

本实施例用于说明本发明提供的CDN1163减轻慢性坐骨神经压迫性损伤(chronicconstriction injury,CCI)大鼠机械痛阈与热痛阈在制备缓解或治疗神经性疼痛药物中的应用。

1.实验动物

购自南京市江宁区青龙山动物繁殖场的50只雄性SD大鼠,实验前将大鼠放置在安静、避强光的环境中饲养一周以适应环境，光照与黑暗时间比为1:1，室温控制在22-25℃，湿度55％，大鼠能够自由进食和饮水。

2.实验药品与耗材

3.实验器材和设备

玻璃分针、消毒纱布、手巾、棉签、微量注射器。

4.实验方法

4.1随机分组

取10只笼子用标记笔依次编号，动物临时编号为第一笼1～5号，第二笼6～10号，依次至第10笼46～50号，随意抓取大鼠称重，每笼放入5只，并用苦味酸溶液按左前脚1、左后脚2、右前脚3、右后脚4、无标记为5的次序在大鼠的毛皮上临时记号。运用Excel软件将大鼠体重按从大到小排序，从统计学教科书中获取随机数字表，对动物进行重新分组。

4.2建立CCI模型

将50只大鼠随机分为5组，即假手术组(Sham)、模型组(CCI)、CDN1163低/中/高剂量组(CCI+低/中/高剂量CDN1163)，每组10只。每只大鼠腹腔注射1％戊巴比妥钠麻醉(6mL/kg)。待大鼠麻醉后，选择左后侧肢，常规备皮，消毒，切开皮肤及皮下组织，钝性分离肌肉和坐骨神经后，以4-0铬制肠线间隔1mm松结扎4道，至神经外膜稍受压，但不影响神经外膜血运为止，打结时可见小腿肌肉轻微震颤，冲洗后逐层缝合，假手术组除不结扎坐骨神经外，其余操作相同。术后14天使用微量注射器给予Sham组和CCI组大鼠鞘内注射溶剂对照(10体积％DMSO，10体积％吐温80，90体积％生理盐水)，给予CCI+CDN1163低、中、高剂量组大鼠鞘内注射1μg、5μg和10μg CDN1163(10％体积DMSO，10％体积吐温80，90％体积生理盐水)，于给药后0h、2h、4h、6h、8h、12h和24h测量机械缩足反射阈值(Paw withdraw mechanicalthreshold，PMT)与热缩足潜伏期(Paw withdraw thermal latency，PTL)，结果如表1与表2所示。如前所述，术后14天至21天，使用微量注射器给予Sham组、CCI组、CCI+CDN1163低、中、高剂量组大鼠鞘内连续注射溶剂或1μg、5μg和10μg CDN1163，每日一次。于14-28天测量机械缩足反射阈值(PMT)与热缩足潜伏期(PTL)，结果如表3与表4所示。

4.3痛阈测定

4.3.1测量机械缩足反射阈值

于单次给药后0h、2h、4h、6h、8h、12h和24h和多次给药后24h测量机械缩足反射阈值(PMT)。将大鼠放置于升高的网格状金属网上，盖以透明的有机玻璃罩。大鼠适应15分钟后，以一组强度递增的纤维丝对大鼠手术同侧足底以及对侧足底进行机械刺激，观察大鼠是否出现缩足反应，开始使用小力度刺激大鼠后趾，若大鼠没有缩足反应，则选择其上的一级力度刺激后趾；若有缩足反应，则选择其下的一级力度刺激后趾。照此下去，在出现这一次与上一次不同的反应(有缩足反应至无缩足反应或无缩足反应至有缩足反应)时，继续刺激3次，包括以前的2次，一共5次，即可完成机械缩足反射阈值测定。若需要使用的力度超过15g或者低于1g，则该侧机械缩足反射阈值直接记为15g或1g。

4.3.2测量热缩足反射潜伏期

于单次给药后0h、2h、4h、6h、8h、12h和24h和多次给药后24h测量热缩足潜伏期(PTL)。在安静的实验室中，保持实验室室内温度稳定于22℃，将有机玻璃箱置于6mm厚的玻璃板上，将大鼠置于有机玻璃箱内，待大鼠适应15分钟后，用可移动光束照射大鼠损伤侧足底中部，从光束照射开始到大鼠出现抬腿或舔足的时间为PTL(单位：秒，s)，自动切断时间设置为30s，用于防止光束照射过久导致组织损伤，设定光强度刺激使PTL基础值为15s左右，并在实验进展过程中保持一致。每只大鼠测定3次，间隔5分钟，取平均值。

5.数据统计

用GraphPad Prism 6.0统计软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差

表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

实施例2

本实施例用于说明本发明提供的CDN1163改善L₅ DRG形态在制备缓解或治疗神经性疼痛药物中的应用。

1.实验药品与耗材

2.实验器材和设备

3.实验方法

3.1取材与固定

断头处死大鼠，截取L_4-6段脊髓，冰上选取L₅ DRG置于预冷的生理盐水中漂洗，立即投入4％多聚甲醛中，固定过夜。

3.2脱水与透明

将组织放入75％、85％、95％、100％、100％的乙醇中脱水。将脱水好的组织放入两次纯二甲苯中进行透明。

3.3浸蜡与包埋

将置于二甲苯的组织放入40℃烘箱中烘烤40min，再放入两次新石蜡，每次0.5h。将已溶化的石蜡倒入先制备好容器，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块。

3.4切片与贴片

将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5-8μm厚。切下的薄片在热水中展平后，贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。

3.5脱蜡与染色

按照纯二甲苯(15min)-纯二甲苯(15min)-100％乙醇(5min)-100％乙醇(5min)-95％乙醇(5min)-85％乙醇(5min)-75％乙醇(5min)-纯水冲洗(10s)进行脱蜡处理。将切片放入苏木精中染色10min后，用纯水冲洗1min。

3.6分化和漂洗

将切片放入1％盐酸乙醇中褪色2s，用纯水冲洗使其恢复蓝色。

3.7脱水Ι和复染

切片放入50％乙醇-70％乙醇-80％乙醇中进行脱水。用0.5％伊红乙醇液对比染色1-3min。

3.8脱水II和透明

将切片放入95％乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3-5min，最后吸净多余的乙醇，将切片放入新二甲苯中两次，每次3-5min。

3.9封藏

中性树胶封存，显微镜拍照。

实施例3

本实施例用于说明本发明提供的CDN1163抑制L_4-6 DRG神经元兴奋性在制备缓解或治疗神经性疼痛药物中的应用。

1.实验药品与耗材

2.实验器材和设备

3.实验溶液配制(试剂均购自美国Sigma公司)

3.1动作电位AP细胞内液

配方为140mM KCl，0.5mM EGTA，3mM Mg-ATP，5mM HEPES，使用KOH调pH至7.4。即称取521.85mg KCl，9.51mg EGTA，76.08mg Mg-ATP，59.58mg HEPES加入无菌水至40mL，使用KOH调pH至7.3-7.4，定容至50mL，0.22μm滤膜过滤，4℃保存。

3.2动作电位AP细胞外液

配方为140mM NaCl，3mM KCl，2mM CaCl₂，2mM MgCl₂，10mM HEPES，pH 7.4。即称取4090.8mg NaCl，111.83mg KCl，110.98mg CaCl₂，95.21mg MgCl₂，1191.55mg HEPES，加入无菌水至400mL，使用NaOH调pH至7.3-7.4，定容至500mL，0.22μm滤膜过滤，4℃保存。

4.实验方法

4.1急性分离Sham和CCI组大鼠L_4-6 DRG神经元

剪头处死各组大鼠，暴露大鼠背部皮肤，取腰椎4-6的脊柱，修剪脊柱外侧肌肉，沿肋骨垂直的方向将脊柱剪为两半，浸泡在DMEM培养基中。用显微镊挑出脊髓，再将脊椎管内粘附的一层脊膜剥离。使用弯头显微镊将各椎孔中的神经节取出，剪去神经节两端的纤维，再将神经节放入盛有少量DMEM的培养皿中。保留少量培养基，使用眼科剪将神经节剪碎并转入DRG消化液(1mg/ml胶原酶Ⅰ和0.5mg/ml胰酶)中，于100rpm，37℃恒温振荡酶解25min，每5min吹打消化液一次，消化结束后加入培养基终止消化。将消化液于1000rpm离心5min。细胞沉淀加入2mL细胞培养基重悬(90％Neurobasal+5％FBS+2％NS21+1％Glutamate+1％P/S+1％HEPES)，将细胞均分至PDL(10μg/mL)预先包被的35mm细胞皿中。将细胞放入5％CO₂，37℃的培养箱中培养，2-3h后即可用于电生理实验。

4.2全细胞电流钳

使用预热的细胞外液将35mm小皿的细胞清洗2次，加入1.5mL细胞外液，置于显微镜下。玻璃电极内加入约1/3体积的电极内液，将玻璃电极安装在微距操作器上，使用微距控制系统控制电极接近细胞，选用折光性好、结构完整的中、小直径的DRG细胞(20-35μm)。常规封接并破膜后，进行漏电流补偿，选择记录模式为C-clamp，给予0pA到280pA的输入电流，每次刺激增加20pA输入电流，持续1200ms，观察记录各输入电流下动作电位的发放阈值与发放频率。

5.统计学方法

用GraphPad Prism 6.0统计软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差

表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

实施例4

本实施例用于说明本发明提供的CDN1163抑制L₅ DRG星形胶质细胞活化在制备缓解或治疗神经性疼痛药物中的应用。

1.实验药品与耗材

2.实验器材和设备

3.实验方法

3.1脱蜡与水化

将实例2中各组石蜡切片按照纯二甲苯(15min)-纯二甲苯(15min)-100％乙醇(5min)-100％乙醇(5min)-95％乙醇(5min)-85％乙醇(5min)-75％乙醇(5min)-纯水冲洗(10s)进行脱蜡处理。将切片浸入纯水漂洗5min。

3.2抗原热修复

将切片放入高压锅中，使抗原修复液没过切片，高压热修复3min，用纯水冲洗使其快速冷却。

3.3透化

切片放入含1％Triton X-100的PBS溶液中，透化30min。

3.4封闭与一抗孵育

用免疫组化笔以切片上的DRG组织为圆心画圈，滴加适量的山羊血清封闭30min，吸净多余的封闭液，将鼠抗GFAP稀释液(1:800)滴加至切片上的DRG组织，切片放入湿盒中，4℃孵育过夜。

3.5二抗孵育

吸净多余的一抗，将山羊抗鼠的Alexa Fluor 555稀释液(1:800)滴加至切片上的DRG组织，室温孵育1h。

3.6细胞核染色

吸净多余的二抗，将DAPI稀释液(1:10)滴加至切片上的DRG组织，室温孵育10min。

3.7封藏

用含有Hoechst 33342的抗荧光淬灭剂封存，倒置荧光显微镜拍照。

4.统计学方法

用GraphPad Prism 6.0统计软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差(±SD)表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

实验结果

1.大鼠坐骨神经结扎手术前一天，各组大鼠的PMT无显著性差异；造模14天后，大鼠的PMT下降，与Sham组大鼠相比，具有显著性差异。为了确定CDN1163是否能缓解神经性疼痛导致的机械痛敏和热痛敏，在造模第14天给予各组大鼠鞘内注射低、中、高剂量CDN1163后，分别在给药后1、2、4、6、8、12、24小时进行行为学检测。如表1和表2所示，鞘内注射剂量为1,5,10μg/鼠的CDN1163显著增加CCI大鼠患侧足底的PMTs和PTLs，表明该鼠神经性疼痛症状减轻。PMTs和PTLs在给予药物2小时后显著上升，药物作用的持续时间能达到6-8小时，且镇痛作用与剂量呈正相关，提示CDN1163的镇痛作用具有剂量依赖性。

表1.单次给药后各组大鼠PMT的比较

注：与Sham组比较，^**P<0.01，与CCI组比较，^#P<0.05，^##P<0.01。

表2.单次给药后各组大鼠PTL的比较

注：与Sham组比较，^**P<0.01，与CCI组比较，^#P<0.05，^##P<0.01。

在造模第14天给予各组大鼠鞘内注射低中高剂量CDN1163，连续给予7天(14-21天)，停药7天(22-28天)，在给药24小时后进行行为学检测。如表3和表4所示，注射剂量为1,5,10μg/鼠的CDN1163显著增加CCI大鼠患侧足底的PMTs和PTLs，表明神经性疼痛症状减轻。反复注射CDN1163可显著逆转机械性痛觉过敏和热痛觉过敏，且没有耐受迹象。相比之下，注射溶剂对照的CCI大鼠的PMTs和PTLs无明显变化。这些结果表明，重复给药CDN1163对神经病理性疼痛的镇痛作用无耐受性，且停药后维持其治疗效果，提示CDN1163适用于治疗持续时间长、难治的神经性疼痛。

表3.连续给药后各组大鼠PMT的比较

注：与Sham组比较，^**P<0.01，与CCI组比较，^#P<0.05，^##P<0.01。

表4.连续给药后各组大鼠PTL的比较

注：与Sham组比较，^**P<0.01，与CCI组比较，^#P<0.05，^##P<0.01。

2.由图1所示，DRG神经元呈不规则椭圆形或球形，主要由感觉神经细胞和神经纤维组成。神经元体主要位于神经节浅层，神经纤维位于神经节深层。神经元间的基质主要包括卫星细胞、雪旺细胞和密集的血管网。光镜下，Sham组大鼠的DRG神经元形态规则，边界清晰，核仁完整且清晰，无明显炎性细胞浸润和组织增生。然而，CCI术后大鼠DRG神经元数量减少，胞体萎缩，细胞间质增宽，充血水肿，表明神经元发生坏死。而给予长时程不同剂量的CDN1163后神经元胞体数量显著增多，胞体较饱满，表明神经元活力明显增强；胞体之间的间隙较CCI组明显减小，炎性细胞浸润程度减轻，且呈剂量依赖性。

3.为了探讨CDN1163治疗神经性疼痛超敏是否通过调节CCI模型DRG神经元的兴奋性。如图2，图3和表5所示，与Sham组相比，CCI+Veh组急性分离的L_4-6 DRG神经元的动作电位基强度显著降低，200pA电流诱导的动作电位频率显著升高(P<0.01)。与CCI+Veh组相比，给予不同浓度的CDN1163干预后的大鼠L_4-6 DRG神经元的动作电位基强度显著增加，200pA电流诱导的动作电位频率显著降低(P<0.01)，这提示CDN1163可抑制CCI诱导的L_4-6 DRG神经元的兴奋性，发挥抑制疼痛的作用。

表5.连续给药后各组大鼠L_4-6 DRG神经元兴奋性的比较

注：与Sham组比较，^**P<0.01，与CCI组比较，^##P<0.01。

4.通过免疫荧光细胞化学法发现，CCI+Veh组大鼠L₅DRG中星形胶质细胞(GFAP⁺)数量较Sham组显著增多，占细胞总数的21.78±2.44％。而给予长时程不同剂量的CDN1163后可剂量依赖性的下调GFAP⁺细胞数，具体见表6和图4，图4第一排为GFAP染色星形胶质细胞，第二排为DAPI染色细胞核。

表6.连续给药后各组大鼠L₅ DRG中星形胶质细胞活化的比较

注：与Sham组比较，^**P<0.01，与CCI组比较，^#P<0.05。

由上述实施例的结果可以看出，本发明所述的CDN1163可以显著性改善大鼠慢性坐骨神经压迫性损伤导致的机械痛敏感和热痛敏感，改善L₅DRG神经元皱缩，抑制CCI导致的L_4-6DRG神经元兴奋性升高，改善CCI导致的L₅DRG星形胶质细胞的活化，将本发明所述的CDN1163应用于制备缓解或治疗疼痛的药物中具有良好的开发前景。

Claims (5)

1.一种CDN1163在制备缓解或治疗神经性疼痛的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物剂型为丸剂、膏剂、片剂、口服液剂、皮下注射剂和静脉注射剂中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还可以包括赋形剂、稳定化剂、保存剂、缓冲剂、助溶剂、乳化剂、稀释剂或等渗剂。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述神经性疼痛包括中枢神经性疼痛和周围神经性疼痛一种或多种。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述神经性疼痛包括三叉神经痛、周围神经损伤所致疼痛、神经损伤导致的疼痛、糖尿病性神经病变引起的疼痛、化疗药物引起的神经痛、带状疱疹后遗神经痛、神经根痛、坐骨神经痛、脊髓损伤、脑损伤及多发性硬化所致神经性疼痛和卒中后中枢痛。

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