CN112715426B - 一种可观察转移鸡胚孵化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种可观察转移鸡胚孵化技术，包括构建孵化装置、转蛋孵化，在现有的替代蛋壳鸡胚培养方法的基础上，对孵化装置的结构以及具体的孵化过程进行了优化，所述孵化装置包括外层硬质容器、中层蛋型容器、内层蛋壳；所述外层硬质容器内部盛有抑菌水，侧面有至少一个开孔，所述开孔使用棉球封堵；所述中层蛋型容器为膜制蛋型容器；所述内壳蛋壳为异壳蛋壳，在所述异壳蛋壳上设置观察口；所述转蛋孵化包括转移含有鸡胚的蛋液至所述孵化装置中、构建抑菌孵化环境、第一恒温孵化阶段、换气、第二恒温孵化阶段。在便于观察鸡胚孵化过程的同时，提高了孵化率，出雏的健康状况也得以改善。
Description
技术领域
本发明涉及一种孵化方法，具体是涉及一种可观察转移鸡胚孵化方法。
背景技术
自然状态下，鸡胚在原种蛋内孵化，此时，由于蛋壳的包围，只能通过照蛋辨别透明度观察孵化进程，难以清晰观察到鸡胚的孵化变化情况以及难以对鸡胚进行处理实验。将鸡胚转移至其他载体内孵化，创造可观察的窗口，是克服上述缺陷的一种思路。
目前已存在将鸡胚转移到保鲜膜内的孵化方法，具体包括以玻璃器皿、塑料容器等为载体的完全无壳鸡胚培养方法和使用鸭蛋壳、鹅蛋壳等替代蛋壳的鸡胚无壳培养方法。其中，完全无壳鸡胚培养方法存在孵化过程中缺钙和缺氧问题，存活率和孵化成功率极低。虽然可以通过添加乳酸钙作为钙补充剂、借助通气管道补充氧气等方法，来提高完全无壳鸡胚培养的孵化成功率，但是，由于乳酸钙的添加量不易控制，且目前鸡胚在孵化过程中对乳酸钙中钙质的利用机制及表观利用率尚不明确，导致孵化鸡胚的畸形率很高，容易发生骨骼发育异常，胚体也比正常孵化的鸡胚小。替代蛋壳鸡胚培养方法是将鸡胚转移到切割后的鸭蛋壳、鹅蛋壳等内、再覆盖上保鲜膜的方法，相较于前者，该方法解决了鸡胚孵化过程中的缺钙问题，但是，现有技术中的替代壳鸡胚培养方法在将鸡胚转移到切割后的替代壳之前，原种蛋要先进行预孵化，来克服胚胎早期启动困难的问题，致使孵化效率低下，并且仍然存在缺氧和细菌污染难以兼顾的问题，整体上，孵化的成功率仍低于50％。
发明内容
为了克服上述问题，本发明提供了一种可观察转移鸡胚孵化方法，在现有的替代蛋壳鸡胚培养方法的基础上，对替代壳载体的结构、培养中的助剂以及具体的培养过程进行了优化，在便于观察鸡胚孵化过程的同时，也提高了孵化率，出雏的健康状况也得以改善。
本发明采用的技术方案如下：
一种可观察转移鸡胚孵化方法，包括构建孵化装置、转蛋孵化，其特征在于：
所述孵化装置包括外层硬质容器、中层蛋型容器、内层蛋壳；所述外层硬质容器内部盛有抑菌水，侧面有至少一个开孔，所述开孔使用棉球封堵；所述中层蛋型容器为膜制蛋型容器；所述内壳蛋壳为异壳蛋壳，在所述异壳蛋壳上设置观察口；
所述转蛋孵化包括转移含有鸡胚的蛋液至所述孵化装置中、构建抑菌孵化环境、第一恒温孵化阶段、换气、第二恒温孵化阶段；
优选的，所述膜制蛋型容器的成型方法为：
在所述外层硬质容器的开口处覆盖保鲜膜，用鸡蛋下压形成蛋型形状，成型后在下压保鲜膜上均匀烫孔、固定后得到所述膜制蛋型容器；
所述转蛋孵化具体包括以下步骤：
S1：所述转移含有鸡胚的蛋液至所述孵化装置中，包括打开种蛋的蛋壳，将所述蛋液缓慢倒入膜制蛋型容器内，再将所述蛋液转移至所述异壳蛋壳内；
S2：所述构建抑菌孵化环境，包括配制80～120IU/ml的青霉素和链霉素各一份，在所述蛋液表面各滴入1～2滴；再在所述外层硬质容器的开口覆盖一层封口膜，将所述封口膜密封固定，得到目标孵化体系；
S3：所述第一恒温孵化阶段持续6～8天，恒温孵化温度为37.8℃，相对湿度为40％～60％，每天转蛋不少于8次；
S4：所述换气，包括使用针状物质在所述封口膜上开出小孔，再在所述封口膜上覆盖1层抑菌过滤层；
S5：所述第二恒温孵化阶段持续至第21天，恒温孵化温度为37.8℃相对湿度为40％～60％。
优选的，所述外层硬质容器为塑料容器、玻璃容器中的任一种。
优选的，所述异壳蛋壳为鸭蛋壳、鹅蛋壳、双黄蛋壳中的任一种，所述观察口通过切割除去所述异壳蛋壳的气室形成。
优选的，在所述S1中，所述蛋液与所述观察口的边缘相差0.4～0.7cm。
优选的，在所述S3中，所述小孔数为15～20个。
优选的，在所述S4中，所述抑菌过滤层为医用口罩。
优选的，在所述S5中，将转蛋操作持续至第19天，每天不少于6次，再继续孵化至第21天，出雏。
本发明的有益效果是：
本发明可用于转移鸡胚孵化，并可以清楚地观察鸡胚的孵化过程。具体的，本发明具有下述进步：
1.通过设置观察口，可清晰地观察鸡胚的孵化变化过程，便于后续开展鸡胚处理的孵化实验；
2.外层硬质容器的抑菌水有利于保湿，同时配合抑菌剂青霉素和链霉素提高了孵化体系的抑菌能力，外层硬质容器侧面塞棉球的开孔则有利于通风、抑菌。
3.中层蛋型容器一则可以固定内壳蛋壳，二则可以避免内壳蛋壳与抑菌水直接接触。基于膜内外抑菌需求的不同，膜外的抑菌环境主要靠抑菌水维持，膜内(具体指内壳蛋壳内)的抑菌环境主要靠抑菌剂青霉素和链霉素维持，且使用薄膜制备成型的中层蛋型容器便于与外层硬质容器固定，成本低廉。
4.内壳蛋壳使用异壳蛋壳，解决了鸡胚孵化过程中，缺乏钙质的问题，相较于添加人工钙源如乳酸钙，钙质的供应量、利用率等更稳定；
5.设计具有3层复合结构的孵化装置，便于后续的换气和添加试剂等操作，同时，为整个孵化体系提供了双重抑菌环境，扩大了孵化体系的空气容量，后期补充氧气更方便、效率也更高。
可见，使用本发明的技术方案，可以有效解决转移鸡胚孵化过程中提供钙物质和氧气的难题，提高孵化率、改善出雏的健康状况。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步说明。
图1为孵化装置加上封口膜后的实物图；
图2为图1另一方向上的实物图；
图3为孵化第6天的鸡胚和无精蛋的对照状况；
图4为孵化第9天的鸡胚；
图5为孵化第11天的鸡胚；
图6为孵化第16天的鸡胚；
图7为孵化第20天的鸡胚；
图8为存储图1～图7彩色图片的二维码地址。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本实施例中，孵化装置包括外层硬质容器、中层蛋型容器、内层蛋壳；在本实施例中，所述外层硬质容器为塑料杯，内部盛有抑菌水，侧面设置了3个开孔，所述开孔使用医用脱脂棉球封堵；所述中层蛋型容器为膜制蛋型容器；所述内壳蛋壳为异壳蛋壳，在本实施例中，使用鸭蛋壳作为异壳蛋壳。在所述鸭蛋上设置观察口。在本实施例中，所述膜制蛋型容器的成型方法是：在塑料杯的杯口处覆盖保鲜膜，用鸡蛋下压形成蛋型形状，成型后在下压保鲜膜上均匀烫孔，再使用皮筋固定。所述鸭蛋壳上的观察口是通过切割除去鸭蛋的气室所得。
完成孵化装置的构建后，开始转蛋孵化。本实施例的转蛋孵化过程如下：
S1：种蛋用酒精棉球擦拭消毒后，打开种蛋的蛋壳，慢慢倒入保鲜膜上，移到切割的蛋壳内，蛋液表面的高度与所述观察口边缘的高度相差0.5cm；在其他实施例中，根据实际情况，蛋液与所述观察口的边缘相差的距离在0.4～0.7cm之间波动，但均不影响本发明发明目的的实现。
S2：构建抑菌孵化环境。配制100IU/ml的青霉素和链霉素，在蛋液表面各滴入1滴；在塑料杯的杯口覆盖一层平铺的封口膜，用皮筋扎紧，即得到了目标孵化体系，孵化装置加上封口膜后的实物图如附图1、附图2所示；
S3：第一恒温孵化阶段持续6天，恒温孵化温度为37.8℃，相对湿度为40％～60％，每天转蛋8～10次；孵化至第6天时，鸡胚的发育状况如附图3所示，此时，出现“双珠”。在其他实施例中，第一恒温孵化阶段持续6～8天之间，均可成功得到了与本发明预期相符的孵化率与健雏率。
S4：换气。孵化第7天，在杯口的保鲜膜上，用1毫升注射器针头扎孔15-20个，再覆盖1个医用口罩，便于换气和抑菌。孵化至第9天时，鸡胚的发育状况如附图4所示。
S5：随后进入第二恒温孵化阶段，恒温孵化温度为37.8℃，相对湿度为40％～60％，保持每天不少于6次的转蛋频率至第19天，期间可揭开口罩观察鸡胚变化情况。孵化至第11天时，鸡胚的发育状况如附图5所示；孵化至第16天时，鸡胚的发育状况如附图6所示；孵化至第21天时，鸡胚的发育状况如附图7所示，此时可以出雏。
对鸡胚孵化的过程进行观察、记录。为了便于公众了解本发明的技术内容，发明人补充存储图1～图7彩色图片的二维码地址，如附图8所示。
对比例1：
完全无壳的鸡胚培养方法。
将鸡胚脱离蛋壳，转移至塑料杯中，同时添加乳酸钙作为钙补充剂，并用保鲜膜封口，孵化第17天开始再通过通气管道为孵化体系补充氧气。孵化至第21天，出雏。
对比例2：
鸭蛋壳替代蛋壳的鸡胚无壳培养方法。
将鸡胚脱离蛋壳，转移至鸭蛋壳中，并用保鲜膜封口，孵化第8天再在保鲜膜上扎小孔以补充氧气。孵化至第21天，出雏。
表1孵化效果对比统计
根据表1的孵化效果可知，本发明的技术方案，相对于现有的完全无壳的鸡胚培养方法以及鸭蛋壳替代蛋壳的鸡胚无壳培养方法，除了便于观察鸡胚的发育进程之外，孵化率和健雏率也得到了显著的提升。
其中，对比例2中的原种蛋要孵化48小时后，才可以转移到鸭蛋壳中，随后在鸭蛋壳上直接覆盖保鲜膜。而根据本发明的技术方案，实施例1中的鸡胚则不需预孵化，可直接转移至鸭蛋壳中，具体地，实施例1是将含有鸡胚的蛋液转移到异壳蛋壳即鸭蛋壳中，再将异壳蛋壳装配至包括膜制蛋型容器和塑料杯(内部盛有抑菌水，侧面设置3个用脱脂棉球堵住地开孔)的组合结构中，形成具有3层结构的孵化装置。该法将保鲜膜无壳孵化和异壳替代蛋壳孵化方法结合了起来，可更好地模拟鸡胚孵化环境。其中，异壳蛋壳提供鸡胚发育的钙物质、保持蛋黄膜自然状态不易破裂、杯子底部装抑菌水起到抑菌和保湿作用、开孔塞脱脂棉可起到通气和滤菌作用、整个3层复合装置的空气容量更大、后期补充氧气效率更高、更方便。同时，在恒温孵化前，在蛋液表面滴入适量的青霉素和链霉素，强化本发明中鸡胚孵化体系的抑菌能力，解决了转移鸡胚孵化过程中提供钙物质和氧气的难题，从而进一步提高了鸡胚的孵化率和健雏率。
除上述优选实施例外，本发明还有其他的实施方式，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变和变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明权利要求书中所定义的范围。
Claims (7)
1.一种可观察转移鸡胚孵化方法，包括构建孵化装置、转蛋孵化，其特征在于：
所述孵化装置包括外层硬质容器、中层蛋型容器、内层蛋壳；所述外层硬质容器内部盛有抑菌水，侧面有至少一个开孔，所述开孔使用医用脱脂棉球封堵；所述中层蛋型容器为膜制蛋型容器；所述内层蛋壳为异壳蛋壳，在所述异壳蛋壳上设置观察口；
所述转蛋孵化包括转移含有鸡胚的蛋液至所述孵化装置中、构建抑菌孵化环境、第一恒温孵化阶段、换气、第二恒温孵化阶段；
所述膜制蛋型容器的成型方法为：
在所述外层硬质容器的开口处覆盖保鲜膜，用鸡蛋下压形成蛋型形状，成型后在下压保鲜膜上均匀烫孔、固定后得到所述膜制蛋型容器；
所述转蛋孵化具体包括以下步骤：
S1：所述转移含有鸡胚的蛋液至所述孵化装置中，包括打开种蛋的蛋壳，将所述蛋液缓慢倒入膜制蛋型容器内，再将所述蛋液转移至所述异壳蛋壳内；
S2：所述构建抑菌孵化环境，包括配制80～120IU/ml的青霉素和链霉素各一份，在所述蛋液表面各滴入1～2滴；再在所述外层硬质容器的开口覆盖一层封口膜，将所述封口膜密封固定；
S3：所述第一恒温孵化阶段持续6～8天，恒温孵化温度为37.8℃，相对湿度为40％～60％，每天转蛋不少于8次；
S4：所述换气，包括使用针状物质在所述封口膜上扎出小孔，再在所述封口膜上覆盖1层抑菌过滤层；
S5：所述第二恒温孵化阶段持续至第21天，恒温孵化温度为37.8℃，相对湿度为40％～60％。
2.根据权利要求1所述的一种可观察转移鸡胚孵化方法，其特征在于：
所述外层硬质容器为塑料容器、玻璃容器中的任一种。
3.根据权利要求1所述的一种可观察转移鸡胚孵化方法，其特征在于：
所述异壳蛋壳为鸭蛋壳、鹅蛋壳、双黄蛋壳中的任一种，所述观察口通过切割除去所述异壳蛋壳的气室形成。
4.根据权利要求1所述的一种可观察转移鸡胚孵化方法，其特征在于：
在所述S1中，所述蛋液与所述观察口的边缘相差0.4～0.7cm。
5.根据权利要求1所述的一种可观察转移鸡胚孵化方法，其特征在于：
在所述S3中，所述小孔数为15～20个。
6.根据权利要求1所述的一种可观察转移鸡胚孵化方法，其特征在于：
在所述S4中，所述抑菌过滤层为医用口罩。
7.根据权利要求1所述的一种可观察转移鸡胚孵化方法，其特征在于：
在所述S5中，将转蛋操作持续至第19天，每天不少于6次，再继续孵化至第21天，出雏。
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