CN113049300B

CN113049300B - 一种植物根系分泌物的分离收集装置及分离收集方法

Info

Publication number: CN113049300B
Application number: CN202110175379.XA
Authority: CN
Inventors: 苏益
Original assignee: Hunan Agricultural University
Current assignee: Hunan Agricultural University
Priority date: 2021-02-09
Filing date: 2021-02-09
Publication date: 2022-03-11
Anticipated expiration: 2041-02-09
Also published as: CN113049300A

Abstract

本发明公开了一种植物根系分泌物的分离收集装置及分离收集方法。植物根系分泌物的分离收集装置，包括：下瓶体，下瓶体设有瓶口；无底的上瓶体，上瓶体设有瓶口，上瓶体的底部设有隔板，隔板上设有若干通孔，隔板的上表面覆盖有膜层，上瓶体和下瓶体能够上下对接连通装配；瓶盖，可盖装在上瓶体的瓶口上。利用本申请的分离收集装置收集植物根系分泌物，整个分离收集装置的结构简单，下瓶体收集的液体包含了植物根系分泌物，而且是无菌状态，没有微生物干扰，更能反映植物的本身状态，收集液可以直接用于代谢组、蛋白质组等组学分析。

Description

一种植物根系分泌物的分离收集装置及分离收集方法

技术领域

本发明涉及植物科学技术领域，特别是涉及一种植物根系分泌物的分离收集装置及分离收集方法。

背景技术

目前植物学研究非常重视根系分泌物，然而植物的根系分泌物很难，特别是陆生植物。通过土壤培养几乎无法获得根系分泌物；采用液体培养法培养植物可以获得根系分泌物，但是液体培养法培养装置和培养过程控制比较复杂，特别是对于陆生植物。植物也可以在培养瓶中用固体培养基进行培养，但利用市场上已有的组培瓶，固体培养基中的根系分泌物依然很难收集。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种植物根系分泌物的分离收集装置,能够更好的实现植物根系分泌物的分离和收集。

本发明还提出一种具有上述分离收集装置的植物根系分泌物的分离收集方法。

根据本发明的第一方面实施例的植物根系分泌物的分离收集装置，包括：下瓶体，所述下瓶体设有瓶口；无底的上瓶体，所述上瓶体设有瓶口，所述上瓶体的底部设有隔板，所述隔板上设有若干通孔，所述隔板的上表面覆盖有膜层，所述上瓶体和所述下瓶体能够上下对接连通装配；瓶盖，可盖装在所述上瓶体的瓶口上。

根据本发明实施例的植物根系分泌物的分离收集装置，至少具有如下有益效果：利用本申请的分离收集装置收集植物根系分泌物，整个分离收集装置的结构简单，下瓶体收集的液体包含了植物根系分泌物，而且是无菌状态，没有微生物干扰，更能反映植物的本身状态，收集液可以直接用于代谢组、蛋白质组等组学分析。

根据本发明的一些实施例，所述上瓶体和所述下瓶体的装配端设有对应的螺纹连接部。

根据本发明的一些实施例，所述膜层为玻璃纸。

根据本发明的一些实施例，所述隔板上的通孔均匀布置。

根据本发明的第二方面实施例的植物根系分泌物的分离收集方法，包括：权上述的植物根系分泌物的分离收集装置及以下步骤：

S100、分离收集装置组装灭菌：将所述分离收集装置组装好后，对所述分离收集装置进行灭菌处理，灭菌完成后，立即完全拧紧所述瓶盖，避免细菌进入所述分离收集装置；

S200、配置固体培养基b：按不同培养基营养成分配置液状培养基a，并向所述液状培养基a中加入凝固剂，并灭菌，之后将所述液状培养基a转移至所述上瓶体中，并盖上所述瓶盖，待所述液状培养基a凝固，获得偏软的固体培养基b，取下所述下瓶体，用针状物穿过所述隔板的通孔在所述膜层上扎密集的小孔，再重新装上所述下瓶体；

S300、植物接种：将无菌植物接种到所述固体培养基b中，并培养；

S400、收集植物根系分泌物：无菌植物培养成型后，定期由所述上瓶体的瓶口加入所述液状培养基a，所述液状培养基a依次流经所述固体培养基b、膜层和隔板后滴入所述下瓶体中，获得植物根系分泌物。

根据本发明实施例的植物根系分泌物的分离收集方法，至少具有如下有益效果：利用上述的分离收集装置收集植物根系分泌物，下瓶体收集的液体包含了植物根系分泌物，而且是无菌状态，没有微生物干扰，更能反映植物的本身状态，收集液可以直接用于代谢组、蛋白质组等组学分析。

根据本发明的一些实施例，步骤S100中，采用121℃普通高压灭菌锅灭菌20min，灭菌时，所述瓶盖不用拧紧，使得瓶内与外界连通。

根据本发明的一些实施例，步骤S200中，加入的所述凝固剂量为使得所述液状培养基a充分凝固的70％-90％。

根据本发明的一些实施例，所述步骤S200中，加入的所述凝固剂量为使得所述液状培养基a充分凝固的80％。

根据本发明的一些实施例，所述步骤S200中，对所述液状培养基a采用121℃普通高压灭菌锅灭菌20min，随后取出所述液状培养基a冷却至65-75℃，之后将所述液状培养基a转移至所述上瓶体中。

根据本发明的一些实施例，步骤S200中，由所述上瓶体的瓶口加入所述液状培养基a的间隔周期为两天以上，每次加入量为瓶内所述固体培养基b体积的25％。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述

中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1为本发明实施例植物根系分泌物的分离收集装置的分解图；

图2为隔板的平面示意图；

图3膜层覆盖在隔板上后的局部剖视图；

图4为进行植物根系分泌物分离收集的示意图。

附图标记：

下瓶体100、上瓶体200、隔板300、通孔310、膜层400、瓶盖500、固体培养基b。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

在本发明的描述中，需要理解的是，涉及到方位描述，例如上、下、前、后、左、右等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

在本发明的描述中，若干的含义是一个或者多个，多个的含义是两个以上，大于、小于、超过等理解为不包括本数，以上、以下、以内等理解为包括本数。如果有描述到第一、第二只是用于区分技术特征为目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量或者隐含指明所指示的技术特征的先后关系。

本发明的描述中，除非另有明确的限定，设置、安装、连接等词语应做广义理解，所属技术领域技术人员可以结合技术方案的具体内容合理确定上述词语在本发明中的具体含义。

另外，本发明各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。

下面参考图1到图4描述根据本发明实施例的植物根系分泌物的分离收集装置。

如图1到图4所示，根据本发明实施例的植物根系分泌物的分离收集装置，包括：

下瓶体100，下瓶体100设有瓶口；

无底的上瓶体200，上瓶体200设有瓶口，上瓶体200的底部设有隔板300，隔板300上设有若干通孔310，隔板300的上表面覆盖有膜层400，上瓶体200和下瓶体100能够上下对接连通装配；

瓶盖500，可盖装在上瓶体200的瓶口上。

具体的，在本实施例中，下瓶体100和上瓶体200都采用圆柱形的瓶体结构，上瓶体200和下瓶体100之间设有可以对接安装的结构，比如螺纹连接的方式，也可以是卡接的结构等，使得二者之间能形成密闭空间，避免外界异物进入。

上瓶体200的底部设置的隔板300主要起到支撑膜层400的作用，膜层400为一层致密性的薄膜层，在将液状培养基a倒入上瓶体200的时候，保证液状培养基a不能流走，但是厚度比较薄，这样才能在液状培养基a凝固成固体培养基b便于在膜层400上进行扎孔，所扎的孔需要保证液状培养基a能流过，但是固体培养基b不能通过。

在本发明的一些实施例中，上瓶体200和下瓶体100的装配端设有对应的螺纹连接部。具体的，瓶体100上端的内壁设有内螺纹，上瓶体200的下端外壁设有外螺纹，上瓶体200和下瓶体100通过螺纹结构可以拧装在一起，形成密闭的培育空间。

在本发明的一些实施例中，膜层400为玻璃纸。玻璃纸透明、无毒无味。对植物的培育不会产生影响，玻璃纸足够薄，便于进行扎孔，同时玻璃纸本身比较耐热，可在190℃的高温下不变形，在对分离收集装置进行高温灭菌的时候，不会发生变形，使得培育空间保持一个无菌的培养环境。

在本发明的一些实施例中，隔板300上的通孔310均匀布置，这样在对膜层400进行扎孔的时候，所扎的孔出的更加均匀，有助于液状培养基a流出。

根据本发明第二方面实施例的植物根系分泌物的分离收集方法，其包括：上述的植物根系分泌物的分离收集装置及以下步骤：

S100、分离收集装置组装灭菌：将分离收集装置组装好后，对分离收集装置进行灭菌处理，灭菌完成后，立即完全拧紧瓶盖500，避免细菌进入分离收集装置；

S200、配置固体培养基b：按不同培养基营养成分配置液状培养基a，并向液状培养基a中加入凝固剂，并灭菌，之后将液状培养基a转移至上瓶体200中，并盖上瓶盖500，待液状培养基a凝固，获得偏软的固体培养基b，取下下瓶体100，用针状物穿过隔板300的通孔310在膜层400上扎密集的小孔，再重新装上下瓶体100；

S300、植物接种：将无菌植物接种到固体培养基b中，并培养；

S400、收集植物根系分泌物：无菌植物培养成型后，定期由上瓶体200的瓶口加入液状培养基a，液状培养基a依次流经固体培养基b、膜层和隔板后滴入下瓶体100中，获得植物根系分泌物。

利用上述的分离收集装置收集植物根系分泌物，下瓶体100收集的液体包含了植物根系分泌物，而且是无菌状态，没有微生物干扰，更能反映植物的本身状态，收集液可以直接用于代谢组、蛋白质组等组学分析。

在本发明的一些实施例中，步骤S100中，采用121℃普通高压灭菌锅灭菌20min，灭菌时，瓶盖500不用拧紧，使得瓶内与外界连通，避免在进行消毒的时候，瓶体破裂。

在本发明的一些实施例中，步骤S200中，步骤S200中，加入的所述凝固剂的量为使得所述液状培养基a充分凝固的到70％-90％。进一步优选为80％。

例如：正常情况下，按照配方，如果100mL培养基中要求加入1g凝固剂(如琼脂、植物凝胶)，在本方法中只需要加入0.8g，目的是使固体培养基比较软。此外，我们认为条件和凝固剂的不同，可以扩大到70％-90％。

在本发明的一些实施例中，步骤S200中，对液状培养基a采用121℃普通高压灭菌锅灭菌20min，随后取出液状培养基a冷却至65-75℃，之后将液状培养基a转移至上瓶体200中。

在本发明的一些实施例中，步骤S200中，由上瓶体200的瓶口加入液状培养基a的间隔周期为两天以上，每次加入量为瓶内固体培养基b体积的25％。

如果不加入液体，固体培养基中的液体(水)滴入下瓶较慢，可能收集不到足够的液体，因此加入一定量的同样液体在固体培养基上，可以起到加速液体滴入下瓶的作用；如果只做短期植物培养，用蒸馏水是可以的；如果培养时间较长，用液体培养基是为了保证营养；为了简单明了，此处直接改为每2天加入5-10mL液体培养基，连续加4次后，收集下瓶中的溶液进行后续测试工作。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims

1.一种植物根系分泌物的分离收集方法，其特征在于，包括分离收集装置，所述分离收集装置包括：

下瓶体，所述下瓶体设有瓶口；

无底的上瓶体，所述上瓶体设有瓶口，所述上瓶体的底部设有隔板，所述隔板上设有若干通孔，所述隔板的上表面覆盖有膜层，所述上瓶体和所述下瓶体能够上下对接连通装配；

瓶盖，可盖装在所述上瓶体的瓶口上；

基于所述分离收集装置包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的植物根系分泌物的分离收集方法，其特征在于：所述上瓶体和所述下瓶体的装配端设有对应的螺纹连接部。

3.根据权利要求1所述的植物根系分泌物的分离收集方法，其特征在于：所述膜层为玻璃纸。

4.根据权利要求1所述的植物根系分泌物的分离收集方法，其特征在于：所述隔板上的通孔均匀布置。

5.根据权利要求1所述的植物根系分泌物的分离收集方法，其特征在于：步骤S100中，采用121℃普通高压灭菌锅灭菌20min，灭菌时，所述瓶盖不用拧紧，使得瓶内与外界连通。

6.根据权利要求1所述的植物根系分泌物的分离收集方法，其特征在于：步骤S200中，加入的所述凝固剂量为使得所述液状培养基a充分凝固的70％-90％。

7.根据权利要求6所述的植物根系分泌物的分离收集方法，其特征在于：所述步骤S200中，加入的所述凝固剂量为使得所述液状培养基a充分凝固的80％。

8.根据权利要求1所述的植物根系分泌物的分离收集方法，其特征在于：所述步骤S200中，对所述液状培养基a采用121℃普通高压灭菌锅灭菌20min，随后取出所述液状培养基a冷却至65-75℃，之后将所述液状培养基a转移至所述上瓶体中。

9.根据权利要求1所述的植物根系分泌物的分离收集方法，其特征在于：步骤S200中，由所述上瓶体的瓶口加入所述液状培养基a的间隔周期为两天以上，每次加入量为瓶内所述固体培养基b体积的25％。