CN112710840A - S100β蛋白检测试剂盒和S100β蛋白检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种S100β蛋白检测试剂盒和S100β蛋白检测方法。其中，所述S100β蛋白检测试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂为包被有S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒混悬液；所述第二试剂为标记物标记S100β抗体的结合物。本发明的技术方案能够缩短S100β蛋白的检测时间，同时提高其检测灵敏度。
Description
技术领域
本发明涉及S100β蛋白检测技术领域，特别涉及一种S100β蛋白检测试剂盒和S100β蛋白检测方法。
背景技术
S100β蛋白又叫中枢神经特异蛋白，也有学者将S100β蛋白描述为脑的“C反应蛋白”。S100β蛋白是一种酸性钙结合蛋白，分子量21KD，主要存在于中枢神经系统各部的星状神经胶质细胞的胞液中。S100β蛋白由α和β两种亚基组成两种不同的形式：S100αβ和S100ββ；S100β主要存在于神经胶质细胞和外周神经系统的Schwann细胞内，某些神经元细胞以及黑色素细胞、脂肪细胞中。中枢星型胶质细胞、少突胶质细胞，外周的Schwann及卫星细胞含有丰厚的S100β蛋白。其基因表达水平与细胞增殖和分化状态有关，S100β由脑内活化的胶质细胞分泌，是星型胶质细胞激活的标志之一，是S100β蛋白家族中最具活性的成分。S100β由胶质细胞产生，作用于神经元及其周围的环境，是神经胶质细胞和神经元相互联系的中介物质之一，在脑的发育过程中和脑损伤时，S100β是一种神经营养因子，适当表达对脑组织起到了营养保护作用。神经胶质细胞表达过量时，加速神经系统炎症的恶化，并导致神经系统功能紊乱。S100β的表达与脑损伤严重程度有密切关系，因此它具有多种生理功能：1)促进轴突向外生长；2)增强ATP酶的活性，影响微管、微丝的解聚；3)作为细胞内的正常成分参与细胞内外钙离子水平的调节；4)在体外可诱导神经元和神经胶质细胞凋亡；5)具有神经营养作用，神经胶质细胞可以旁分泌和自分泌S100β蛋白，作用于神经元和神经胶质细胞，从而促进神经的生长和损伤的修复，但高水平的S100β蛋白却可以产生神经毒性。
目前，市场用于检测S100β蛋白的试剂盒主要基于电化学发光法、化学发光法、免疫层析法、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、胶乳增强免疫比浊法等。其中，免疫层析法操作简便快捷，但灵敏度较低，易受杂散光干扰； ELISA法试剂盒具有操作流程繁琐，检测时间长，产生较多具有样本污染的废液等缺点；市面上的胶乳增强免疫比浊法、电化学发光法成本较高、检测时间长，且需要价格昂贵的配套全自动分析系统进行检测。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种S100β蛋白检测试剂盒和S100β蛋白检测方法，旨在克服目前S100β蛋白检测方法中存在的缺陷，缩短S100β蛋白的检测时间，同时提高其检测灵敏度。
为实现上述目的，本发明提出的S100β蛋白检测试剂盒，包括：第一试剂，所述第一试剂为包被有S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒混悬液；和第二试剂，所述第二试剂为标记物标记S100β抗体的结合物。
可选地，所述第一试剂包括：50-200mmol/L缓冲液、50-200mmol/L电解质、0.2-1g/L表面活性剂、0.2-1g/L稳定剂、0.2-1g/L防腐剂、0.02ng/ml- 1.6ng/ml S100β抗体及0.05-0.4mg/ml甲苯磺酰基化的磁珠。
可选地，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-1乙烷磺酸缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸缓冲液、2-吗啉乙磺酸、3-吗啉丙磺酸缓冲液、硼酸缓冲液中的至少一种，所述缓冲液的pH值为7.0-8.0；，所述稳定剂为酪蛋白、去激素人血清、牛血清白蛋白或小牛血清中的至少一种；和/或，所述防腐剂为 Proclin150、Proclin200、Proclin300、Proclin5000中的至少一种。
可选地，所述甲苯磺酰基化的磁珠的粒径为1-3um。
可选地，所述第一试剂为用由50mmol/LTris、1.5％BSA、0.1％吐温- 20、0.1％Proclin300、及0.9％NaCl组成的pH值为7.4的溶液稀释的包被有 S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒混悬液。
可选地，所述标记物标记S100β抗体的结合物中，所述标记物为酶标记物、HRP标记物、荧光微球标记物、胶乳标记物、荧光素标记物、藻红蛋白标记物中的至少一种。
可选地，所述标记物为酶标记物，所述第二试剂包括：50-200mmol/L缓冲液、50-200mmol/L电解质、0.2-1g/L表面活性剂、0.2-1g/L稳定剂、0.2- 1g/L防腐剂、0.02ng/ml-1.6ng/mlS100β抗体、0.02ng/ml-1.6ng/ml羊二抗及 0.02ng/ml-1.6ng/ml酶。
可选地，所述第二试剂为用由50mmol/LHEPES、1.5％BSA、0.1％吐温- 20、0.1％Proclin300、0.9％氯化钠及5mmol/L MgCl2组成的pH值为7.4的溶液稀释的酶标记S100β单抗-羊二抗复合物的结合物。
可选地，所述S100β蛋白检测试剂盒还包括校准品和质控品，所述校准品和所述质控品均为含有S100β蛋白的校准品稀释液，所述校准品稀释液为含有0.1‰～10‰(w/v)防腐剂、1％～10％(w/v)蛋白质类稳定剂的MES缓冲液；和/或，所述S100β蛋白检测试剂盒还包括底物液，所述底物液为碱性磷酸酶底物液或辣根过氧酶底物液。
本发明还提出了一种S100β蛋白的检测方法，采用如前所述的S100β蛋白检测试剂盒，包括以下步骤：
混合待测样本、第一试剂及第二试剂，反应后进行磁分离清洗，之后加入底物液；
检测底物液的相对发光强度，并根据检测到的相对发光强度，计算 S100β的浓度；
其中，所述第一试剂为包被有S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒混悬液，所述第二试剂为标记物标记S100β抗体的结合物。
本发明的技术方案至少能够取得以下技术效果：本发明S100β蛋白检测试剂盒以包被有S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒为固相，以标记物标记的S100β抗体偶联磁性微球，作为通用的分离试剂，不仅使免疫反应更容易混匀和分离，而且大大提高了反应速度，具有灵敏度高，检测时间短，特异性好、操作简便的优点。同时使用的是甲苯磺酰基化磁微粒，工艺成熟，不会出现磁珠团聚等问题。进一步地，采用酶标记单抗-二抗复合物的方法，可以放大发光信号，从而提高检测信号值。采用本发明S100β蛋白检测试剂盒用于检测S100β蛋白时，检测时间在10min以内即可，且检测灵敏度较高，其灵敏度0.02ng/ml远远小于临床cutoff值0.105ng/ml，能充分保证正常值与异常值的区分。并且，能达到罗氏试剂盒的性能要求，且与它一致性极高，临床比对几乎没有差异。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。
图1为实施例二的线性范围检测结果图；
图2为实施例四中本发明检测试剂盒与罗氏电化学发光法检测试剂盒比对的相关性图；
图3为实施例四中本发明检测试剂盒与罗氏电化学发光法测试结果的一致性图。
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。
本发明提出一种S100β蛋白检测试剂盒，用于人外周血样本中S100β蛋白的测定。
目前市面上S100β蛋白检测方法主要以罗氏的电化学发光法为主，虽然灵敏度和性能较好，但是检测时间较长需要18min以上，且价格昂贵，而其他的免疫荧光层析方法、酶联免疫、免疫生化法及化学发光法在性能方面尤其是灵敏度方面达不到临床要求。
在本发明S100β蛋白检测试剂盒一实施例中，S100β蛋白检测试剂盒包括：第一试剂，第一试剂为包被有S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒混悬液；和第二试剂，第二试剂为标记物标记S100β抗体的结合物。
在本发明S100β蛋白检测试剂盒中，第一试剂为磁微粒混悬液，磁微粒为甲苯磺酰基化的磁微粒，S100β抗体与甲苯磺酰基化的磁微粒偶联结合，其中，磁微粒被甲苯磺酰基化，因而磁微粒的表面被亲水聚合物覆盖，提高了磁微粒结合S100β抗体的特异性。同时，甲苯基基团作为活性基团结合在磁微粒的表面上，使得磁微粒可以在不使用偶联剂的情况下与S100β抗体偶联成偶联抗体，简化了操作步骤。第二试剂为酶标记S100β抗体的结合物，其中酶可选为碱性磷酸酶。
需要说明的是，S100β抗体可以为单克隆抗体，也可以为多克隆抗体，在此不作限制。
进一步地，采用酶标记单抗-二抗复合物的方法，可以放大发光信号，从而提高检测信号值。
本发明S100β蛋白检测试剂盒以包被有S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒为固相，以标记物标记的S100β抗体偶联磁性微球，作为通用的分离试剂，不仅使免疫反应更容易混匀和分离，而且大大提高了反应速度，具有灵敏度高，检测时间短，特异性好、操作简便的优点。同时使用的是甲苯磺酰基化磁微粒，工艺成熟，不会出现磁珠团聚等问题。采用本发明S100β蛋白检测试剂盒用于检测S100β蛋白时，检测时间在10min以内即可，且检测灵敏度较高，其灵敏度0.02ng/ml远远小于临床cutoff值0.105ng/ml，能充分保证正常值与异常值的区分。并且，能达到罗氏试剂盒的性能要求，且与它一致性极高，临床比对几乎没有差异。
可选的实施例中，第一试剂包括：50-200mmol/L缓冲液、50-200mmol/L 电解质、0.2-1g/L表面活性剂、0.2-1g/L稳定剂、0.2-1g/L防腐剂、 0.02ng/ml-1.6ng/ml S100β抗体及0.05-0.4mg/ml甲苯磺酰基化的磁珠。
可选地，缓冲液为磷酸盐缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-1乙烷磺酸(HEPES)缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)、3-吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液、硼酸缓冲液中的至少一种，缓冲液的pH值为7.0-8.0。需要说明的是，第一试剂除了含有上述成分外，还有水，水的体积为 3.5ml。
可选地，电解质可选用为阳离子电解质，比如含有Na+、K+、Mg2+或 Zn2+，当然也可选用阴离子电解质，比如含有Cl-、HCO3-、SO4 2-，在此不作限制，均在本发明的保护范围以内。
可选地，表面活性剂可选为吐温-20。
可选地，稳定剂为酪蛋白、去激素人血清、牛血清白蛋白或小牛血清中的至少一种。
可选地，防腐剂为Proclin150、Proclin200、Proclin300、Proclin5000中的至少一种。
可选地，甲苯磺酰基化的磁珠的粒径为1-3um。这里磁珠为甲苯磺酰基化的磁珠，基本材质为Fe2O3和聚苯乙烯，其表面涂层导入了甲苯磺酰基基团。其粒径可选为1um、2um或3um。
在本发明的一实施例中，第一试剂为用由50mmol/LTris、1.5％BSA、 0.1％吐温-20、0.1％Proclin300、及0.9％NaCl组成的pH值为7.4的溶液稀释的包被有S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒混悬液。需要说明的是，其中 1.5％BSA、0.1％吐温-20、0.1％Proclin300、及0.9％NaCl均为质量百分数。
可选地，标记物标记S100β抗体的结合物中，标记物为酶标记物、HRP 标记物、荧光微球标记物、胶乳标记物、荧光素标记物、藻红蛋白标记物中的至少一种。标记物可选用上述的一种或多种，优选地，标记物为酶标记物，酶标记物可选为碱性磷酸酶或辣根过氧酶。
可选的实施例中，标记物为酶标记物，第二试剂包括：50-200mmol/L缓冲液、50-200mmol/L电解质、0.2-1g/L表面活性剂、0.2-1g/L稳定剂、0.2- 1g/L防腐剂、0.02ng/ml-1.6ng/mlS100β抗体及0.02ng/ml-1.6ng/ml酶。
这里缓冲液可选为磷酸盐缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-1乙烷磺酸(HEPES)缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)、3-吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液、硼酸缓冲液中的一种或多种混合液；缓冲液的pH值为 7.0-8.0。电解质可选用为阳离子电解质，比如含有Na+、K+、Mg2+或Zn2+，当然也可选用阴离子电解质，比如含有Cl-、HCO3-、SO4 2-。表面活性剂可选为吐温-20，稳定剂可选为酪蛋白、去激素人血清、牛血清白蛋白或小牛血清中的一种或两种以上的混合物。防腐剂是Proclin150、Proclin200、 Proclin300、Proclin5000中的一种或两种以上的混合物；酶可选为碱性磷酸酶。需要说明的是，第二试剂除了含有上述成分外，还有水，水的体积为 6.5ml。
在本发明的一实施例中，第二试剂为用由50mmol/LHEPES、 1.5％BSA、0.1％吐温-20、0.1％Proclin300、0.9％氯化钠及5mmol/L MgCl2 组成的pH值为7.4的溶液稀释的酶标记S100β单抗-羊二抗复合物的结合物。
这里稀释液中加入了MgCl2，降低了抗原-抗体反应过程中普遍存在的非特异性吸附情况，从而提升了S100β蛋白检测试剂盒的分析灵敏度。并且，采用酶标记单抗-二抗复合物的方法，可以放大发光信号，从而提高检测信号值。
进一步地，S100β蛋白检测试剂盒还包括校准品和质控品，所述校准品和所述质控品均为含有S100β蛋白的校准品稀释液，校准品稀释液为含有 0.1‰～10‰(w/v)防腐剂、1％～10％(w/v)蛋白质类稳定剂的MES缓冲液。
需要说明的是，这里S100β蛋白可选为定量的S100β蛋白的重组蛋白或者是从人血清中提取出来的天然S100β蛋白。
这里防腐剂可选为Proclin150、Proclin200、Proclin300、Proclin5000中的一种或两种以上的混合物，蛋白质类稳定剂可选为酪蛋白、去激素人血清、牛血清白蛋白或小牛血清中的一种或两种以上的混合物。
进一步地，S100β蛋白检测试剂盒还包括底物液，底物液为碱性磷酸酶底物液或辣根过氧酶底物液，其中，碱性磷酸酶底物液可选用Medsun-phos 530(迈盛生物，货号：MEDSUN-AKP01)、AMPPD、CSPD、ADP-Star、 CDS-STAR、Lumi-Phos 530的一种，辣根过氧酶底物液为过氧化物和供氢体(DH2)，可选用OPD、TMB、DBA的一种，在此不作限制，均在本发明的保护范围之内。
本发明S100β蛋白检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：
(1)第一试剂的制备
取2mg甲苯磺酰基化的磁微粒悬浮液，置于磁力架上，静置2min后磁分离上清，加入1ml的0.1M pH值为9.0的硼酸盐缓冲液清洗3次，再加入200ul的硼酸盐缓冲液重悬。
加入100uL 3M硫酸铵溶液后加入40ug的S100β抗体，37℃下混悬 12h-24h。反应完成后取出磁分离去上清后，用1ml 0.1M的硼酸盐溶液清洗 1次，加入200ul0.1M硼酸盐溶液，150ul 3M硫酸铵溶液，100ul 50mM的Tris缓冲液反应16-24h，后取出磁分离去上清，加入1ml 50mM的Tris缓冲液清洗1次，用200ul50mM的Tris缓冲液重悬，得到ST2抗体的磁微粒。
取S100β单克隆抗体的磁微粒，用50mM Tris、0.1％吐温-20、0.1％ Proclin300、0.9％NACL、1.2％BSA pH值为7.4的溶液将磁珠稀释到 0.2mg/ml的浓度，即为第一试剂，放于2-8℃保存。
(2)第二试剂的制备：
取0.1ug S100β单克隆抗体及0.1ug/ml羊二抗混匀5min形成S100β抗 体-羊二抗复合物，加入250ul浓度为0.1M，pH值为7.0的PBS缓冲液中混 匀，加入新配置的10.0mg/mlEDC水溶液(体积为20-50ul)，活化30分 钟，然后加入浓度为5mg/ml的碱性磷酸酶溶液(体积为20-25ul)混匀，室 温避光保存2小时后取出，用30KD的超滤柱除盐纯化，收集的剩余体积溶 液加一半甘油，保存于-20度备用。
取碱性磷酸酶标记的S100β抗体-羊二抗复合物酶标记物，用 50mHEPES、1.5％BSA、0.1％吐温-20、0.1％Proclin300、0.9％氯化钠及5mM MgCl2组成的pH值为7.4的溶液按1:600倍稀释为1ng/ml，即为第二试剂。
本发明还提出一种S100β蛋白的检测方法，采用如前所述的S100β蛋白检测试剂盒，包括以下步骤：
混合待测样本、第一试剂及第二试剂，反应后进行磁分离清洗，之后加入底物液；
检测底物液的相对发光强度，并根据检测到的相对发光强度，计算 S100β的浓度；
其中，第一试剂为包被有S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒混悬液，所述第二试剂为酶标记物标记S100β抗体-羊二抗复合物的结合物。
具体地，以全自动化学发光仪(CL-2000)为检测工具，方法学模式为双抗体夹心法，即仪器依次加入20μL的样本、50μL S100β单克隆抗体包被的甲苯磺酰基化的磁微粒悬浮液、再加入100μL碱性磷酸酶标记的S100β抗体-羊二抗复合物酶标记物，反应5min后，进行磁分离清洗，清洗完后仪器自动加入底物300μL后，将反应杯移到光电模块中采集光电值，仪器自动转换为浓度，显示测试结果。
实施例一、灵敏度的检测
空白限LoB：准备5份接近0值的临床样本，每个样本重复3次，总共做4天，得到60个数据；
检出限LoD：准备5份浓度范围为1-5倍LoB的系列临床样本，每个样本重复3次，总共做4天，得到60个数据；
功能灵敏度FS：采用LoD实验中的数据，5个浓度样本每天测3次，总共测4天，每个样本得到12个结果，计算每个样本的均值、SD和 CV％，最接近20％的浓度为功能灵敏度。
第二试剂选用不含MgCl2的稀释液和含有5mM MgCl2的稀释液，结果如表1和表2所示。
表1灵敏度检测结果-不含MgCl2
| 指标 | 第1批(ng/ml) | 第2批(ng/ml) | 第3批(ng/ml) |
| LoB | 0.201 | 0.314 | 0.360 |
| LoD | 0.568 | 0.611 | 0.496 |
| FS | 0.830 | 0.956 | 1.037 |
表2灵敏度检测结果-含有5mM MgCl2
| 指标 | 第1批(ng/ml) | 第2批(ng/ml) | 第3批(ng/ml) |
| LoB | 0.001 | 0.001 | 0.002 |
| LoD | 0.008 | 0.009 | 0.010 |
| FS | 0.018 | 0.019 | 0.021 |
从表1和表2对比数据可知，含有5mM MgCl2的第二试剂稀释液试剂盒LoD、LoB和FS三个指标结果均远低于不含MgCl2的第二试剂稀释液试剂盒，不含MgCl2的试剂盒功能灵敏度(FS约为0.95ng/ml)结果比含有 5mM MgCl2试剂盒功能灵敏度(FS灵敏度约为0.02ng/ml)高出50倍，由此可见，样品稀释液中MgCl的使用大大降低了抗原-抗体反应过程中的非特异性吸附情况，从而提升了试剂盒的分析灵敏度和准确性；
经分析发现：可能与S100β蛋白的结构有关，S100β蛋白为钙结合蛋白，除了有两个钙结合部位外，还有一个辅助的Zn2+结合部位，血样中 S100β与Ca2+或Zn2+结合后均会发生蛋白构象变化，增加Mg2+浓度可能一定程度抑制Ca或Zn离子与S100β结合，另外Mg2+还有加持碱性磷酸酶的活性和稳定性，从而提升该试剂盒的灵敏度；
实施例二、线性范围检测
对浓度为0.0ng/mL、0.02ng/mL、8ng/mL、16ng/mL、24ng/mL、 32ng/mL、39ng/mL定标品做线性分析
第二试剂选用S100β单抗酶标记物和S100β-羊二抗复合物酶标记物参照图1，图1中横坐标为样本浓度值(IU/L)，纵坐标为相对发光值(RLU)。
表3线性检测数据表
从表3可知，S100β抗体结合羊二抗进行酶标记后将检测发光值增大了约3倍，这样可以解决S100β试剂灵敏度较低的情况，使检测限达到cutoff 值以下，使得S100β具有临床检测意义；
原理分析：发光系统检测发光值通过酶催化底物而发出光子，实质是酶的多少决定了发光值的大小；将S100β单抗结合羊二抗复合物再进行酶标记，复合物上的酶结合基团较S100β单抗的酶结合基团多，同样的一个抗原抗体结合的话，复合物标记的酶较S100β单抗结合的酶多出几倍，从而使得检测发光值放大；
实施例三、精密度检测
取浓度为0.1ng/mL及5ng/mL两个S100β样品，每个样本浓度各做3个平行测试，用三批试剂盒进行检测，计算试剂盒批内及批间差，结果表明该试剂盒批内及批间差均小于8％。
表4试剂盒批内差数据
表5试剂盒批间差数据
从表4数据可以看出，三批试剂盒两个浓度质控品分析内变异系数均小于6％，从表5数据可以看出三批试剂盒两个浓度质控品批间变异均小于 5％，说明本发明试剂盒的精密性较好。
实施例四、与同类产品临床比对
采集医院检测S-100β的血液样本200份，用本发明的试剂盒和罗氏电化学发光法检测S-100β蛋白试剂盒两种方法进行检测比较。本发明试剂盒中，测试同一血液采用对比系统罗氏电化学发光法检测S-100β蛋白试剂盒进行浓度检测。两种方法检测结果进行线性分析，如图2所示，其相关性很好r＝0.9980＞0.975，k＝0.9783∈(0.8,1.2)，另外200例配对数据的95％一致性界限为(-1.0ng/mL，1.2ng/mL)，4.5％(9/200)的点在一致性界限以外，191/200例配对数据均在95％一致性界限内，如图3所示。在一致性界限范围外的数据，均属于高值样本，不影响样本的临床辅助诊断，这种差值幅度在临床上可以接受。因此认为天辰试剂盒与罗氏试剂盒的检测结果具有良好的一致性。
以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (10)
1.一种S100β蛋白检测试剂盒，用于检测S100β蛋白，其特征在于，所述S100β蛋白检测试剂盒包括：
第一试剂，所述第一试剂为包被有S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒混悬液；和
第二试剂，所述第二试剂为标记物标记S100β的结合物。
2.如权利要求1所述的S100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂包括：50-200mmol/L缓冲液、50-200mmol/L电解质、0.2-1g/L表面活性剂、0.2-1g/L稳定剂、0.2-1g/L防腐剂、0.02ng/ml-1.6ng/ml S100β抗体及0.05-0.4mg/ml甲苯磺酰基化的磁珠。
3.如权利要求2所述的S100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-1乙烷磺酸缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸缓冲液、2-吗啉乙磺酸、3-吗啉丙磺酸缓冲液、硼酸缓冲液中的至少一种，所述缓冲液的pH值为7.0-8.0；和/或，
所述稳定剂为酪蛋白、去激素人血清、牛血清白蛋白或小牛血清中的至少一种；和/或，
所述防腐剂为Proclin150、Proclin200、Proclin300、Proclin5000中的至少一种。
4.如权利要求2所述的S100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述甲苯磺酰基化的磁珠的粒径为1-3um。
5.如权利要求2所述的S100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂为用由50mmol/LTris、1.5％BSA、0.1％吐温-20、0.1％Proclin300、及0.9％NaCl组成的pH值为7.4的溶液稀释的包被有S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒混悬液。
6.如权利要求1所述的S100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述标记物标记S100β抗体的结合物中，所述标记物为酶标记物、HRP标记物、荧光微球标记物、胶乳标记物、荧光素标记物、藻红蛋白标记物中的至少一种。
7.如权利要求6所述的S100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述标记物为酶标记物，所述第二试剂包括：50-200mmol/L缓冲液、50-200mmol/L电解质、0.2-1g/L表面活性剂、0.2-1g/L稳定剂、0.2-1g/L防腐剂、0.02ng/ml-1.6ng/mlS100β抗体及0.02ng/ml-1.6ng/ml酶。
8.如权利要求7所述的S100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述第二试剂为用由50mmol/LHEPES、1.5％BSA、0.1％吐温-20、0.1％Proclin300、0.9％氯化钠及5mmol/LMgCl2组成的pH值为7.4的溶液稀释的酶标记S100β抗体单抗-羊二抗复合物的结合物。
9.如权利要求1至8中任一项所述的S100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述S100β蛋白检测试剂盒还包括校准品和质控品，所述校准品和所述质控品均为含有S100β蛋白的校准品稀释液，所述校准品稀释液为含有0.1‰～10‰(w/v)防腐剂、1％～10％(w/v)蛋白质类稳定剂的MES缓冲液；和/或，
所述S100β蛋白检测试剂盒还包括底物液，所述底物液为碱性磷酸酶底物液或辣根过氧酶底物液。
10.一种S100β蛋白的检测方法，采用如权利要求1至9中任一项所述的S100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：
混合待测样本、第一试剂及第二试剂，反应后进行磁分离清洗，之后加入底物液；
检测底物液的相对发光强度，并根据检测到的相对发光强度，计算S100β的浓度；
其中，所述第一试剂为包被有S100β抗体的甲苯磺酰基化的磁微粒混悬液，所述第二试剂为标记物标记S100β抗体的结合物。
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Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102998463A (zh) * | 2012-11-29 | 2013-03-27 | 英科新创(厦门)科技有限公司 | 一种测量糖化血红蛋白的方法及试剂盒 |
| CN109061189A (zh) * | 2018-08-17 | 2018-12-21 | 深圳天辰医疗科技有限公司 | 一种肌钙蛋白i检测试剂盒及其制备方法 |
| CN109725152A (zh) * | 2018-12-13 | 2019-05-07 | 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司 | 一种抗病毒蛋白MxA微粒子化学发光免疫分析检测试剂盒 |
| CN110672849A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-01-10 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种s100蛋白的检测试剂盒 |
| US20200064341A1 (en) * | 2017-03-14 | 2020-02-27 | Nanotag Biotechnologies Gmbh | Target detection using a monovalent antibody |
| CN111007248A (zh) * | 2019-11-22 | 2020-04-14 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种检测风疹病毒IgM抗体的化学发光免疫分析试剂盒 |
-
2020
- 2020-12-15 CN CN202011480069.0A patent/CN112710840A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102998463A (zh) * | 2012-11-29 | 2013-03-27 | 英科新创(厦门)科技有限公司 | 一种测量糖化血红蛋白的方法及试剂盒 |
| US20200064341A1 (en) * | 2017-03-14 | 2020-02-27 | Nanotag Biotechnologies Gmbh | Target detection using a monovalent antibody |
| CN109061189A (zh) * | 2018-08-17 | 2018-12-21 | 深圳天辰医疗科技有限公司 | 一种肌钙蛋白i检测试剂盒及其制备方法 |
| CN109725152A (zh) * | 2018-12-13 | 2019-05-07 | 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司 | 一种抗病毒蛋白MxA微粒子化学发光免疫分析检测试剂盒 |
| CN110672849A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-01-10 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种s100蛋白的检测试剂盒 |
| CN111007248A (zh) * | 2019-11-22 | 2020-04-14 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种检测风疹病毒IgM抗体的化学发光免疫分析试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| JACQUES BAUDIER ET AL.: "Ions Binding to S100 Proteins", 《THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY》 * |
| 武汉医学院第一附属医院检验科, 湖北省革命委员会卫生局 * |
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