CN112708573A - 特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素b12检测方法 - Google Patents

特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素b12检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法，涉及食品检测技术领域，通过首先制备菌种，并制备标准工作溶液及标准系列，然后试样提取液的制作，再制备样品测定液，然后培养，最后测定与计算出特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的含量。

Description

特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12检测方法
技术领域
本发明涉及食品检测技术领域，尤其涉及一种特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法。
背景技术
特殊食品是指为满足某些特殊人群的生理需要，或某些疾病患者的营养需要，按照特殊配方而专门加工的食品。
叶酸是一种水溶性维生素，因绿叶中含量十分丰富而得名，又名喋酰谷氨酸。在自然界中有几种存在形式，其母体化合物是由喋啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸3种成分结合而成。
生物素又称维生素H、辅酶R，是水溶性维生素，也属于维生素 B族，B7。它是合成维生素C的必要物质，是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物质。是一种维持人体自然生长、发育和正常人体机能健康必要的营养素。
维生素B12又叫钴胺素，是唯一含金属元素的维生素。自然界中的维生素B12都是微生物合成的，高等动植物不能制造维生素B12。维生素B12是唯一的一种需要一种肠道分泌物(内源因子)帮助才能被吸收的维生素。有的人由于肠胃异常，缺乏这种内源因子，即使膳食中来源充足也会患恶性贫血。
现有技术中，较国家标准提供的方法能够提高检测的灵敏度和选择性，但是其检出限仍有待提高，且功能饮料食品基质、成分单一，杂质少，对于特殊食品中的生物素、叶酸和维生素B12的检测无法适应。
发明内容
本发明提出了一种特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素 B12的检测方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法，包括以下步骤：
(1)制备菌种：
分别制备植物乳杆菌、莱士曼氏乳酸杆菌、鼠李糖乳杆菌，并配成三种菌悬液；
(2)制备标准工作溶液及标准系列：
生物素标准曲线工作液浓度为0.1ng/mL；维生素B12标准曲线工作液浓度为0.01ng/mL；叶酸标准曲线工作液浓度为0.200ng/mL；将上述三种标准曲线工作液用蒸馏水分别配制成若干个标准系列；
(3)试样提取液的制作：
对生物素、维生素B12、叶酸三种样品进行稀释，分别制成生物试样素提取液、维生素B12试样提取液、叶酸试样提取液；
(4)制备样品测定液：
将若干份不同浓度的生物素试样提取液、维生素B12试样提取液、叶酸试样提取液分别放入不同的试管中，并分别加入对应的测定用培养液，并混匀；
(5)培养：
给所有的试管盖上试管帽，放入灭菌釜内进行灭菌处理；
在相对应的灭菌后的试管中加入相对应种类的菌悬液，混匀，置于37℃±1℃恒温培养箱中；生物素、维生素B12培养19h～20h，叶酸培养20h～48h，直至获得最大混浊度，即再培养2h透光率无明显变化，从而得到若干培养好的测定管；
(6)测定与计算：
将培养好的测定管用漩涡混匀器混匀，用厚度为1cm比色杯在相应波长处，生物素、维生素B12：550nm；叶酸：540nm；以接种空白管调节吸光度为0，依次测定标准系列管、试样系列管吸光值；平行测试管之间吸光值偏差小于10％的为有效数值；
以标准系列管的含量为横坐标，吸光度为纵坐标作标准曲线；
从标准曲线查得样液相应含量(CX)；
样液中维生素浓度c＝测样液含量CX/试样稀释液体积VX；
维生素的含量
Figure BDA0002606838670000031
f为样品稀释倍数；m为样品质量。
进一步地，所述植物乳杆菌的制备方法为：将菌种植物乳杆菌转接至乳酸杆菌琼脂培养基中，在37℃±1℃恒温培养箱中培养20h～ 24h；用接种环将活化的菌株转种至已灭菌的乳酸杆菌肉汤中，于37℃±1℃恒温培养箱中培养16h～20h，取出后将菌悬液离心弃去上清液，再用氯化钠溶液(0.85％)振匀并离心弃去上清液，如此三次；最后用氯化钠溶液(0.85％)稀释至透光率60％～80％；将调好透光率的菌悬液按照1：1的比例加入甘油，分装在1.5mL的PP小管中，-80℃冻存备用。
进一步地，所述莱士曼氏乳酸杆菌的制备方法为：将菌种莱士曼氏乳酸杆菌转接至乳酸杆菌琼脂培养基中，在37℃±1℃恒温培养箱中培养20h～24h；用接种环将活化的菌株转种至已灭菌的乳酸杆菌肉汤中，于37℃±1℃恒温培养箱中培养16h～20h，取出后将菌悬液离心弃去上清液，再用氯化钠溶液振匀并离心弃去上清液，如此三次；最后用氯化钠溶液稀释至透光率60％～80％；将调好透光率的菌悬液按照1：1的比例加入甘油，分装在1.5mL的PP小管中，-80℃冻存备用。
进一步地，所述鼠李糖乳杆菌的制备方法为：将菌种鼠李糖乳杆菌转接至乳酸杆菌琼脂培养基中，在37℃±1℃恒温培养箱中培养 20h～24h；用接种环将活化的菌株转种至含2mL叶酸标准工作液与 4mL叶酸测定用培养液的灭菌管中，于37℃土1℃恒温培养箱中培养 20h～24h；取出后将种子培养液混悬，无菌操作下用无菌移液器吸取 0.5mL转种至另两支已消毒但不含叶酸的培养液中，于37℃士1℃再培养6h；振荡混匀，制成接种液；接种液按照1：1的比例加入甘油，分装在1.5mL的PP小管中，-80℃冻存备用。
进一步地，所述生物试样素提取液的制备方法为：准确称取适量样品，所述样品含0.2μg～0.5μg生物素，加入生物素提取液100mL， 121℃水解30min，冷却后、调节pH，过滤，稀释，使稀释后试样提取液中生物素含量在0.01ng/mL～0.1ng/mL范围内。
进一步地，所述维生素B12试样提取液的制备方法为：称一定量的样品，所述样品含50ng～100ng维生素B12，用10mL维生素B12提取液，再加150mL水，于121℃水解10min，冷却后调pH，过滤，稀释，使稀释后试样提取液中维生素B12的质量浓度约在0.01ng/mL～0.02ng/mL范围内。
进一步地，所述叶酸试样提取液的制备方法为：准确称取固体试样0.1g～0.5g，加入80mL叶酸提取液，具塞，超声振荡2h～4h至试样完全溶解或分散，用水定容至刻度，稀释，使试样稀释液中叶酸含量在0.2ng/mL～0.6ng/mL范围内。
进一步地，所述生物素、维生素B12测定液：取4支试管，分别加入1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL试样提取液，补水至5.0mL，加入5.0mL生物素或B12测定用培养液，混匀。
进一步地，所述叶酸测定液：取3支试管，分别加入0.5mL、1.0mL、 2.0mL试样提取液，补水至5.0mL，加入5.0mL叶酸测定用培养液，混匀。
本发明具有以下有益之处：本发明通过首先制备菌种，并制备标准工作溶液及标准系列，然后试样提取液的制作，再制备样品测定液，然后培养，最后测定与计算出特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的含量。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
一种特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法：
材料：
试验菌株：生物素试验菌株为植物乳杆菌 Lactobacillusplantarum(ATCC8014)；B12试验菌株为莱士曼氏乳酸杆菌 (Lactobacillusleichmannii)ATCC7830；叶酸是试验菌株为鼠李糖乳杆菌Lactobacilluscaseispp.rhamnosus(ATCC7469)。
培养基：MRS培养基、乳酸杆菌琼脂培养基、乳酸杆菌肉汤培养基、生物素测定用培养基、维生素B12测定用培养基、叶酸测定用培养液。
标准品：生物素(d-Biotin或VitaminH)标准品(C10H16N2O3S):纯度≥ 99％；
维生素B12(VitaminB12或Cyanocobalamin)标准品(C63H88CoN14O14P)：纯度≥99％；
叶酸标准品(C19H19N706):纯度≥99％。
提取液：
生物素提取液：硫酸溶液(3％):量取30mL硫酸加入到1000mL水混匀。
维生素B12提取液：称取无水磷酸氢二钠1.3g，无水偏重亚硫酸钠1.0g，柠檬酸(含一个结晶水)1.2g，用100mL水溶解。
叶酸提取液：氢氧化钠乙醇溶液(0.01mol/L)：称取0.4g氢氧化钠，用乙醇溶液溶解并稀释至1L，混匀。
主要仪器：高压蒸汽灭菌锅、离心机：转速≥2000转/分钟；恒温培养箱：36℃±1℃、冰箱：2℃～5℃；紫外可见分光光度计。
菌种的制备：
将菌种植物乳杆菌Lactobacillusplantarum(ATCC8014)转接至乳酸杆菌琼脂培养基中，在37℃±1℃恒温培养箱中培养20h～24h。用接种环将活化的菌株转种至已灭菌的乳酸杆菌肉汤中，于37℃±1℃恒温培养箱中培养16h～20h，取出后将菌悬液离心弃去上清液，再用氯化钠溶液(0.85％)振匀并离心弃去上清液，如此三次。最后用氯化钠溶液(0.85％)稀释至透光率60％～80％。将调好透光率的菌悬液按照1： 1的比例加入甘油，分装在1.5mL的PP小管中，-80℃冻存备用。
所述莱士曼氏乳酸杆菌的制备方法为：将菌种莱士曼氏乳酸杆菌转接至乳酸杆菌琼脂培养基中，在37℃±1℃恒温培养箱中培养 20h～24h；用接种环将活化的菌株转种至已灭菌的乳酸杆菌肉汤中，于37℃±1℃恒温培养箱中培养16h～20h，取出后将菌悬液离心弃去上清液，再用氯化钠溶液振匀并离心弃去上清液，如此三次；最后用氯化钠溶液稀释至透光率60％～80％；将调好透光率的菌悬液按照1： 1的比例加入甘油，分装在1.5mL的PP小管中，-80℃冻存备用
所述鼠李糖乳杆菌的制备方法为：将菌种鼠李糖乳杆菌转接至乳酸杆菌琼脂培养基中，在37℃±1℃恒温培养箱中培养20h～24h；用接种环将活化的菌株转种至含2mL叶酸标准工作液与4mL叶酸测定用培养液的灭菌管中，于37℃土1℃恒温培养箱中培养20h～24h；取出后将种子培养液混悬，无菌操作下用无菌移液器吸取0.5mL转种至另两支已消毒但不含叶酸的培养液中，于37℃士1℃再培养6h；振荡混匀，制成接种液；接种液按照1：1的比例加入甘油，分装在 1.5mL的PP小管中，-80℃冻存备用。
标准工作溶液和标准系列制备：
生物素标准曲线工作液浓度为0.1ng/mL；维生素B12标准曲线工作液浓度为0.01ng/mL；叶酸标准曲线工作液浓度为0.200ng/mL。将3种标准曲线工作液用蒸馏水配置成8个标准系列，具体溶度如下表所示：
3种维生素标准系列浓度
Figure BDA0002606838670000081
取试管，每管中加入5mL标准系列浓度的溶液，加入5mL测定用培养基，平行样3份，同时做空白试验。
样品的处理：
生物素：准确称取适量样品(约含0.2μg～0.5μg生物素)，加入生物素提取液100mL，121℃水解30min，冷却后、调节pH，过滤，稀释，使稀释后试样提取液中生物素含量在0.01ng/mL～0.1ng/mL范围内。
维生素B12：称一定量的样品(约含50ng～100ng维生素B12)，用10mL维生素B12提取液，再加150mL水，于121℃水解10min，冷却后调pH，过滤，稀释，使稀释后试样提取液中维生素B12的质量浓度约在0.01ng/mL～0.02ng/mL范围内。
叶酸：准确称取固体试样0.1g～0.5g，加入80mL叶酸提取液，具塞，超声振荡2h～4h至试样完全溶解或分散，用水定容至刻度，稀释，使试样稀释液中叶酸含量在0.2ng/mL～0.6ng/mL范围内。
样品测定液的制备：
生物素、维生素B12测定液：取4支试管，分别加入1.0mL、2.0mL、 3.0mL、4.0mL试样提取液，补水至5.0mL，加入5.0mL生物素或B12 测定用培养液，混匀。每个梯度做3个平行。
叶酸测定液：取3支试管，分别加入0.5mL、1.0mL、2.0mL试样提取液，补水至5.0mL，加入5.0mL叶酸测定用培养液，混匀。每个梯度做3个平行。
培养：
灭菌:所有的试管盖上试管帽，放入灭菌釜内，121℃灭菌5min。
将存有试验接种用菌悬液的PP小管恢复到室温，在每只灭菌试管中加入100μL菌悬液，混匀，置于37℃±1℃恒温培养箱中。生物素、维生素B12培养19h～20h，叶酸培养20h～48h，直至获得最大混浊度，即再培养2h透光率无明显变化。
测定与计算：
将培养好的测定管用漩涡混匀器混匀，用厚度为1cm比色杯在相应波长处(生物素、维生素B12：550nm；叶酸：540nm)，以接种空白管调节吸光度为0，依次测定标准系列管、试样系列管吸光值。平行测试管之间吸光值偏差小于10％的为有效数值：
以标准系列管的含量为横坐标，吸光度为纵坐标作标准曲线；
从标准曲线查得样液相应含量(CX)；
样液中维生素浓度c＝测样液含量CX/试样稀释液体积VX；
维生素的含量
Figure BDA0002606838670000101
f为样品稀释倍数；m为样品质量。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)制备菌种：
分别制备植物乳杆菌、莱士曼氏乳酸杆菌、鼠李糖乳杆菌，并配成三种菌悬液；
(2)制备标准工作溶液及标准系列：
生物素标准曲线工作液浓度为0.1ng/mL；维生素B12标准曲线工作液浓度为0.01ng/mL；叶酸标准曲线工作液浓度为0.200ng/mL；将上述三种标准曲线工作液用蒸馏水分别配制成若干个标准系列；
(3)试样提取液的制作：
生物素、维生素B12、叶酸三种样品进行稀释，分别制成生物试样素提取液、维生素B12试样提取液、叶酸试样提取液；
(4)制备样品测定液：
将若干份不同浓度的生物素试样提取液、维生素B12试样提取液、叶酸试样提取液分别放入不同的试管中，并分别加入对应的测定用培养液，并混匀；
(5)培养：
给所有的试管盖上试管帽，放入灭菌釜内进行灭菌处理；在相对应的灭菌后的试管中加入相对应种类的菌悬液，混匀，置于37℃±1℃恒温培养箱中；生物素、维生素B12培养19h～20h，叶酸培养20h～48h，直至获得最大混浊度，即再培养2h透光率无明显变化，从而得到若干培养好的测定管；
(6)测定与计算：
将培养好的测定管用漩涡混匀器混匀，用厚度为1cm比色杯在相应波长处，生物素、维生素B12：550nm；叶酸：540nm；以接种空白管调节吸光度为0，依次测定标准系列管、试样系列管吸光值；平行测试管之间吸光值偏差小于10％的为有效数值；
以标准系列管的含量为横坐标，吸光度为纵坐标作标准曲线；
从标准曲线查得样液相应含量(CX)；
样液中维生素浓度c＝测样液含量CX/试样稀释液体积VX；
维生素的含量
Figure FDA0002606838660000021
f为样品稀释倍数；m为样品质量。
2.根据权利要求1所述的特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法，其特征在于，所述植物乳杆菌的制备方法为：将菌种植物乳杆菌转接至乳酸杆菌琼脂培养基中，在37℃±1℃恒温培养箱中培养20h～24h；用接种环将活化的菌株转种至已灭菌的乳酸杆菌肉汤中，于37℃±1℃恒温培养箱中培养16h～20h，取出后将菌悬液离心弃去上清液，再用氯化钠溶液振匀并离心弃去上清液，如此三次；最后用氯化钠溶液稀释至透光率60％～80％；将调好透光率的菌悬液按照1：1的比例加入甘油，分装在1.5mL的PP小管中，-80℃冻存备用。
3.根据权利要求1所述的特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法，其特征在于，所述莱士曼氏乳酸杆菌的制备方法为：将菌种莱士曼氏乳酸杆菌转接至乳酸杆菌琼脂培养基中，在37℃±1℃恒温培养箱中培养20h～24h；用接种环将活化的菌株转种至已灭菌的乳酸杆菌肉汤中，于37℃±1℃恒温培养箱中培养16h～20h，取出后将菌悬液离心弃去上清液，再用氯化钠溶液振匀并离心弃去上清液，如此三次；最后用氯化钠溶液稀释至透光率60％～80％；将调好透光率的菌悬液按照1：1的比例加入甘油，分装在1.5mL的PP小管中，-80℃冻存备用。
4.根据权利要求1所述的特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌的制备方法为：将菌种鼠李糖乳杆菌转接至乳酸杆菌琼脂培养基中，在37℃±1℃恒温培养箱中培养20h～24h；用接种环将活化的菌株转种至含2mL叶酸标准工作液与4mL叶酸测定用培养液的灭菌管中，于37℃土1℃恒温培养箱中培养20h～24h；取出后将种子培养液混悬，无菌操作下用无菌移液器吸取0.5mL转种至另两支已消毒但不含叶酸的培养液中，于37℃士1℃再培养6h；振荡混匀，制成接种液；接种液按照1：1的比例加入甘油，分装在1.5mL的PP小管中，-80℃冻存备用。
5.根据权利要求1所述的特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法，其特征在于，所述生物试样素提取液的制备方法为：准确称取适量样品，所述样品含0.2μg～0.5μg生物素，加入生物素提取液100mL，121℃水解30min，冷却后、调节pH，过滤，稀释，使稀释后试样提取液中生物素含量在0.01ng/mL～0.1ng/mL范围内。
6.根据权利要求1所述的特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法，其特征在于，所述维生素B12试样提取液的制备方法为：称一定量的样品，所述样品含50ng～100ng维生素B12，用10mL维生素B12提取液，再加150mL水，于121℃水解10min，冷却后调pH，过滤，稀释，使稀释后试样提取液中维生素B12的质量浓度约在0.01ng/mL～0.02ng/mL范围内。
7.根据权利要求1所述的特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法，其特征在于，所述叶酸试样提取液的制备方法为：准确称取固体试样0.1g～0.5g，加入80mL叶酸提取液，具塞，超声振荡2h～4h至试样完全溶解或分散，用水定容至刻度，稀释，使试样稀释液中叶酸含量在0.2ng/mL～0.6ng/mL范围内。
8.根据权利要求1所述的特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法，其特征在于，所述生物素、维生素B12测定液：取4支试管，分别加入1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL试样提取液，补水至5.0mL，加入5.0mL生物素或B12测定用培养液，混匀。
9.根据权利要求1所述的特殊医学用途食品中叶酸、生物素、维生素B12的检测方法，其特征在于，所述叶酸测定液：取3支试管，分别加入0.5mL、1.0mL、2.0mL试样提取液，补水至5.0mL，加入5.0mL叶酸测定用培养液，混匀。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN114834865A (zh) * 2022-04-11 2022-08-02 石家庄学院 一种食品中叶酸的快速检测试剂、其制备方法及应用
CN115656060A (zh) * 2022-08-10 2023-01-31 广东产品质量监督检验研究院（国家质量技术监督局广州电气安全检验所、广东省试验认证研究院、华安实验室） 一种食品和乳品中叶酸的快速测定方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114834865A (zh) * 2022-04-11 2022-08-02 石家庄学院 一种食品中叶酸的快速检测试剂、其制备方法及应用
CN115656060A (zh) * 2022-08-10 2023-01-31 广东产品质量监督检验研究院（国家质量技术监督局广州电气安全检验所、广东省试验认证研究院、华安实验室） 一种食品和乳品中叶酸的快速测定方法

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