CN112695031B - 一种鉴定番茄品种dna指纹的方法及其使用的snp引物组合 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鉴定番茄品种DNA指纹的方法及其使用的SNP引物组合。该方法包括如下步骤：分别检测待测番茄和441个番茄品种基于40个SNP位点的基因型，然后进行如下判断：如果待测番茄基于40个SNP位点的基因型和441个番茄品种中某品种完全一致，则待测番茄与该番茄品种属于同一个品种。本发明提供的方法可用于对番茄品种在种子或幼苗期进行早期鉴定，保证品种的真实性，切实保护生产者和育种家的权益，并为番茄种质资源和新品种保护提供技术支持。本发明提供的方法既可以对未知番茄品种进行鉴定，也可以对已知品种的真实性进行鉴定。本发明提供的方法具有高通量、准确、低成本、操作简单、节约人力、物力等有点，具有十分广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定番茄品种DNA指纹的方法及其使用的SNP引物组合，该方法可应用于生物技术推广服务，为番茄种质资源和品种保护提供技术支持。
背景技术
番茄，原产于拉丁美洲，属于茄科番茄属的一年生或多年生草本植物。番茄适应性强，产量高，口味酸甜又富含多种营养物质，一直以来都备受广大消费者的喜爱，其栽培面积也不断扩大。目前市场对番茄的需求量逐年增多，番茄产业也越来越发达，在农民增收和提高居民的生活水平方面发挥了重要作用。由于我国栽培气候各异、番茄种植区域广泛，鲜有适应全国多个产区的番茄品种。加上各省市之间品种审定相互不协调，“同种异名”或“同名异种”现象严重，存在较多假冒伪劣品种，种子生产质量事故时有发生。截至2019年10月，农业部公布的申请登记番茄品种达2425个，获准登记的番茄品种1309个，占申请登记品种的54％，因此急需对市场中的番茄品种进行有效监管。然而，传统基于形态学、细胞学及同工酶进行番茄品种鉴定的方法，其结果易受环境条件影响，且多态性较低，应用范围收到限制。DNA分子标记为番茄品种鉴定开辟了新的技术手段，可以从分子遗传水平上直接了解番茄品种间的差异。根据《非主要农作物品种登记指南》的要求，涉及品种特性和品种DUS测试报告中涉及的有关性状如有明确关联基因的，可直接提交DNA检测结果。因此，建立一套基于DNA指纹有效进行番茄品种真实性的标准显得尤为重要。
目前，我国进行番茄品种鉴定的DNA方法采用Indel分子标记。但Indel标记开发未考虑其真实的序列变异，检测方式极易导致不真实、假阳性、假阴性结果；且不能适应自动化、高通量、大规模检测的要求。
随着高通量测序技术的发展，SNP作为第三代分子标记技术因其分布广、通量大、遗传稳定、易于标准化操作等优点备受关注。SNP自身的特性也决定了其更适合于番茄品种DNA指纹研究。与Indel标记相比，SNP具有适于快速、规模化筛查等多个方面的优势：变异清晰稳定容易检测，真实性准确性高；每个作物均有数以百万计SNP可供选择；适宜于高通量、低成本、自动化快速检测；SNP分型无需对照品种，以准确的碱基呈现结果，可减少人为误差。基于番茄高通量测序的变异组大数据，挖掘适合番茄品种鉴定的SNP位点。采用等位基因竞争性特异PCR法，可以开发其特异性引物，最终获得样本在SNP位点的基因型。
发明内容
本发明的目的是鉴定番茄品种，尤其是441个番茄品种。
本发明首先保护引物组合，可包括用于扩增LeSNP01位点的引物组1、用于扩增LeSNP02位点的引物组2、用于扩增LeSNP03位点的引物组3、用于扩增LeSNP04位点的引物组4、用于扩增LeSNP05位点的引物组5、用于扩增LeSNP06位点的引物组6、用于扩增LeSNP07位点的引物组7、用于扩增LeSNP08位点的引物组8、用于扩增LeSNP09位点的引物组9、用于扩增LeSNP10位点的引物组10、用于扩增LeSNP11位点的引物组11、用于扩增LeSNP12位点的引物组12、用于扩增LeSNP13位点的引物组13、用于扩增LeSNP14位点的引物组14、用于扩增LeSNP15位点的引物组15、用于扩增LeSNP16位点的引物组16、用于扩增LeSNP17位点的引物组17、用于扩增LeSNP18位点的引物组18、用于扩增LeSNP19位点的引物组19、用于扩增LeSNP20位点的引物组20、用于扩增LeSNP21位点的引物组21、用于扩增LeSNP22位点的引物组22、用于扩增LeSNP23位点的引物组23、用于扩增LeSNP24位点的引物组24、用于扩增LeSNP25位点的引物组25、用于扩增LeSNP26位点的引物组26、用于扩增LeSNP27位点的引物组27、用于扩增LeSNP28位点的引物组28、用于扩增LeSNP29位点的引物组29、用于扩增LeSNP30位点的引物组30、用于扩增LeSNP31位点的引物组31、用于扩增LeSNP32位点的引物组32、用于扩增LeSNP33位点的引物组33、用于扩增LeSNP34位点的引物组34、用于扩增LeSNP35位点的引物组35、用于扩增LeSNP36位点的引物组36、用于扩增LeSNP37位点的引物组37、用于扩增LeSNP38位点的引物组38、用于扩增LeSNP39位点的引物组39和用于扩增LeSNP40位点的引物组40。
所述LeSNP01位点—所述LeSNP40位点为番茄基因组的40个SNP位点。所述LeSNP01位点可为01号染色体上的第348230位核苷酸。所述LeSNP02位点可为01号染色体上的第96236598位核苷酸。所述LeSNP03位点可为02号染色体上的第21501063位核苷酸。所述LeSNP04位点可为02号染色体上的第49543571位核苷酸。所述LeSNP05位点可为02号染色体上的第54974528位核苷酸。所述LeSNP06位点可为03号染色体上的第54028位核苷酸。所述LeSNP07位点可为03号染色体上的第55127223位核苷酸。所述LeSNP08位点可为03号染色体上的第67744592位核苷酸。所述LeSNP09位点可为04号染色体上的第7963671位核苷酸。所述LeSNP10位点可为04号染色体上的第12055310位核苷酸。所述LeSNP11位点可为04号染色体上的第62364170位核苷酸。所述LeSNP12位点可为05号染色体上的第742938位核苷酸。所述LeSNP13位点可为05号染色体上的第63162476位核苷酸。所述LeSNP14位点可为06号染色体上的第3245469位核苷酸。所述LeSNP15位点可为06号染色体上的第45112865位核苷酸。所述LeSNP16位点可为07号染色体上的第2872268位核苷酸。所述LeSNP17位点可为09号染色体上的第146411位核苷酸。所述LeSNP18位点可为09号染色体上的第35373639位核苷酸。所述LeSNP19位点可为11号染色体上的第12936227位核苷酸。所述LeSNP20位点可为11号染色体上的第52432079位核苷酸。所述LeSNP21位点可为12号染色体上的第484221位核苷酸。所述LeSNP22位点可为12号染色体上的第9314047位核苷酸。所述LeSNP23位点可为12号染色体上的第63959459位核苷酸。所述LeSNP24位点可为01号染色体上的第77078036位核苷酸。所述LeSNP25位点可为02号染色体上的第29842772位核苷酸。所述LeSNP26位点可为03号染色体上的第30086625位核苷酸。所述LeSNP27位点可为05号染色体上的第20276546位核苷酸。所述LeSNP28位点可为05号染色体上的第32956216位核苷酸。所述LeSNP29位点可为06号染色体上的第25208704位核苷酸。所述LeSNP30位点可为07号染色体上的第22003807位核苷酸。所述LeSNP31位点可为07号染色体上的第60492484位核苷酸。所述LeSNP32位点可为08号染色体上的第12554724位核苷酸。所述LeSNP33位点可为08号染色体上的第34128862位核苷酸。所述LeSNP34位点可为08号染色体上的第54523933位核苷酸。所述LeSNP35位点可为09号染色体上的第5645300位核苷酸。所述LeSNP36位点可为09号染色体上的第63944850位核苷酸。所述LeSNP37位点可为10号染色体上的第4708532位核苷酸。所述LeSNP38位点可为10号染色体上的第64912107位核苷酸。所述LeSNP39位点可为11号染色体上的第55259183位核苷酸。所述LeSNP40位点可为12号染色体上的第19676827位核苷酸。
所述引物组合中，所述引物组1可由SEQ ID NO:1所示的正向引物01F1、SEQ IDNO:2所示的正向引物01F2和SEQ ID NO:3所示的反向引物01R组成。所述引物组2可由SEQID NO:4所示的正向引物02F1、SEQ ID NO:5所示的正向引物02F2和SEQ ID NO:6所示的反向引物02R组成。所述引物组3可由SEQ ID NO:7所示的正向引物03F1、SEQ ID NO:8所示的正向引物03F2和SEQ ID NO:9所示的反向引物03R组成。所述引物组4可由SEQ ID NO:10所示的正向引物04F1、SEQ ID NO:11所示的正向引物04F2和SEQ ID NO:12所示的反向引物04R组成。所述引物组5可由SEQ ID NO:13所示的正向引物05F1、SEQ ID NO:14所示的正向引物05F2和SEQ ID NO:15所示的反向引物05R组成。所述引物组6可由SEQ ID NO:16所示的正向引物06F1、SEQ ID NO:17所示的正向引物06F2和SEQ ID NO:18所示的反向引物06R组成。所述引物组7可由SEQ ID NO:19所示的正向引物07F1、SEQ ID NO:20所示的正向引物07F2和SEQ ID NO:21所示的反向引物07R组成。所述引物组8可由SEQ ID NO:22所示的正向引物08F1、SEQ ID NO:23所示的正向引物08F2和SEQ ID NO:24所示的反向引物08R组成。所述引物组9可由SEQ ID NO:25所示的正向引物09F1、SEQ ID NO:26所示的正向引物09F2和SEQ ID NO:27所示的反向引物09R组成。所述引物组10可由SEQ ID NO:28所示的正向引物10F1、SEQ ID NO:29所示的正向引物10F2和SEQ ID NO:30所示的反向引物10R组成。所述引物组11可由SEQ ID NO:31所示的正向引物11F1、SEQ ID NO:32所示的正向引物11F2和SEQID NO:33所示的反向引物11R组成。所述引物组12可由SEQ ID NO:34所示的正向引物12F1、SEQ ID NO:35所示的正向引物12F2和SEQ ID NO:36所示的反向引物12R组成。所述引物组13可由SEQ ID NO:37所示的正向引物13F1、SEQ ID NO:38所示的正向引物13F2和SEQ IDNO:39所示的反向引物13R组成。所述引物组14可由SEQ ID NO:40所示的正向引物14F1、SEQID NO:41所示的正向引物14F2和SEQ ID NO:42所示的反向引物14R组成。所述引物组15可由SEQ ID NO:43所示的正向引物15F1、SEQ ID NO:44所示的正向引物15F2和SEQ ID NO:45所示的反向引物15R组成。所述引物组16可由SEQ ID NO:46所示的正向引物16F1、SEQ IDNO:47所示的正向引物16F2和SEQ ID NO:32所示的反向引物16R组成。所述引物组17可由SEQ ID NO:49所示的正向引物17F1、SEQ ID NO:50所示的正向引物17F2和SEQ ID NO:51所示的反向引物17R组成。所述引物组18可由SEQ ID NO:52所示的正向引物18F1、SEQ ID NO:53所示的正向引物18F2和SEQ ID NO:54所示的反向引物18R组成。所述引物组19可由SEQID NO:55所示的正向引物19F1、SEQ ID NO:56所示的正向引物19F2和SEQ ID NO:57所示的反向引物19R组成。所述引物组20可由SEQ ID NO:58所示的正向引物20F1、SEQ ID NO:59所示的正向引物20F2和SEQ ID NO:60所示的反向引物20R组成。所述引物组21可由SEQ IDNO:61所示的正向引物21F1、SEQ ID NO:62所示的正向引物21F2和SEQ ID NO:63所示的反向引物21R组成。所述引物组22可由SEQ ID NO:64所示的正向引物22F1、SEQ ID NO:65所示的正向引物22F2和SEQ ID NO:66所示的反向引物22R组成。所述引物组23可由SEQ ID NO:67所示的正向引物23F1、SEQ ID NO:68所示的正向引物23F2和SEQ ID NO:69所示的反向引物23R组成。所述引物组24可由SEQ ID NO:70所示的正向引物24F1、SEQ ID NO:71所示的正向引物24F2和SEQ ID NO:72所示的反向引物24R组成。所述引物组25可由SEQ ID NO:73所示的正向引物25F1、SEQ ID NO:74所示的正向引物25F2和SEQ ID NO:75所示的反向引物25R组成。所述引物组26可由SEQ ID NO:76所示的正向引物26F1、SEQ ID NO:77所示的正向引物26F2和SEQ ID NO:78所示的反向引物26R组成。所述引物组27可由SEQ ID NO:79所示的正向引物27F1、SEQ ID NO:80所示的正向引物27F2和SEQ ID NO:81所示的反向引物27R组成。所述引物组28可由SEQ ID NO:82所示的正向引物28F1、SEQ ID NO:83所示的正向引物28F2和SEQ ID NO:84所示的反向引物28R组成。所述引物组29可由SEQ ID NO:85所示的正向引物29F1、SEQ ID NO:86所示的正向引物29F2和SEQ ID NO:87所示的反向引物29R组成。所述引物组30可由SEQ ID NO:88所示的正向引物30F1、SEQ ID NO:89所示的正向引物30F2和SEQ ID NO:90所示的反向引物30R组成。所述引物组31可由SEQ ID NO:91所示的正向引物31F1、SEQ ID NO:92所示的正向引物31F2和SEQ ID NO:93所示的反向引物31R组成。所述引物组32可由SEQ ID NO:94所示的正向引物32F1、SEQ ID NO:95所示的正向引物32F2和SEQ ID NO:96所示的反向引物32R组成。所述引物组33可由SEQ ID NO:97所示的正向引物33F1、SEQ ID NO:98所示的正向引物33F2和SEQ ID NO:99所示的反向引物33R组成。所述引物组34可由SEQ ID NO:100所示的正向引物34F1、SEQ ID NO:101所示的正向引物34F2和SEQ ID NO:102所示的反向引物34R组成。所述引物组35可由SEQ ID NO:103所示的正向引物35F1、SEQ ID NO:104所示的正向引物35F2和SEQ ID NO:105所示的反向引物35R组成。所述引物组36可由SEQ ID NO:106所示的正向引物36F1、SEQ ID NO:107所示的正向引物36F2和SEQ ID NO:108所示的反向引物36R组成。所述引物组37可由SEQ ID NO:109所示的正向引物37F1、SEQ ID NO:110所示的正向引物37F2和SEQ ID NO:111所示的反向引物37R组成。所述引物组38可由SEQ ID NO:112所示的正向引物38F1、SEQ ID NO:113所示的正向引物38F2和SEQ ID NO:114所示的反向引物38R组成。所述引物组39可由SEQ ID NO:115所示的正向引物39F1、SEQ ID NO:116所示的正向引物39F2和SEQ ID NO:117所示的反向引物39R组成。所述引物组40可由SEQ ID NO:118所示的正向引物40F1、SEQ ID NO:119所示的正向引物40F2和SEQ ID NO:120所示的反向引物40R组成。
所述引物组合中，所述引物组1可由SEQ ID NO:1自5’末端起第22至43位所示的正向引物01F1、SEQ ID NO:2自5’末端起第22至44位所示的正向引物01F2和SEQ ID NO:3所示的反向引物01R组成。所述引物组2可由SEQ ID NO:4自5’末端起第22至46位所示的正向引物02F1、SEQ ID NO:5自5’末端起第22至47位所示的正向引物02F2和SEQ ID NO:6所示的反向引物02R组成。所述引物组3可由SEQ ID NO:7自5’末端起第22至47位所示的正向引物03F1、SEQ ID NO:8自5’末端起第22至46位所示的正向引物03F2和SEQ ID NO:9所示的反向引物03R组成。所述引物组4可由SEQ ID NO:10自5’末端起第22至50位所示的正向引物04F1、SEQ ID NO:11自5’末端起第22至50位所示的正向引物04F2和SEQ ID NO:12所示的反向引物04R组成。所述引物组5可由SEQ ID NO:13自5’末端起第22至48位所示的正向引物05F1、SEQ ID NO:14自5’末端起第22至47位所示的正向引物05F2和SEQ ID NO:15所示的反向引物05R组成。所述引物组6可由SEQ ID NO:16自5’末端起第22至48位所示的正向引物06F1、SEQ ID NO:17自5’末端起第22至47位所示的正向引物06F2和SEQ ID NO:18所示的反向引物06R组成。所述引物组7可由SEQ ID NO:19自5’末端起第22至47位所示的正向引物07F1、SEQ ID NO:20自5’末端起第22至48位所示的正向引物07F2和SEQ ID NO:21所示的反向引物07R组成。所述引物组8可由SEQ ID NO:22自5’末端起第22至45位所示的正向引物08F1、SEQ ID NO:23自5’末端起第22至47位所示的正向引物08F2和SEQ ID NO:24所示的反向引物08R组成。所述引物组9可由SEQ ID NO:25自5’末端起第22至44位所示的正向引物09F1、SEQ ID NO:26自5’末端起第22至44位所示的正向引物09F2和SEQ ID NO:27所示的反向引物09R组成。所述引物组10可由SEQ ID NO:28自5’末端起第22至48位所示的正向引物10F1、SEQ ID NO:29自5’末端起第22至49位所示的正向引物10F2和SEQ ID NO:30所示的反向引物10R组成。所述引物组11可由SEQ ID NO:31自5’末端起第22至45位所示的正向引物11F1、SEQ ID NO:32自5’末端起第22至45位所示的正向引物11F2和SEQ ID NO:33所示的反向引物11R组成。所述引物组12可由SEQ ID NO:34自5’末端起第22至47位所示的正向引物12F1、SEQ ID NO:35自5’末端起第22至46位所示的正向引物12F2和SEQ ID NO:36所示的反向引物12R组成。所述引物组13可由SEQ ID NO:37自5’末端起第22至47位所示的正向引物13F1、SEQ ID NO:38自5’末端起第22至46位所示的正向引物13F2和SEQ ID NO:39所示的反向引物13R组成。所述引物组14可由SEQ ID NO:40自5’末端起第22至43位所示的正向引物14F1、SEQ ID NO:41自5’末端起第22至43位所示的正向引物14F2和SEQ ID NO:42所示的反向引物14R组成。所述引物组15可由SEQ ID NO:43自5’末端起第22至46位所示的正向引物15F1、SEQ ID NO:44自5’末端起第22至45位所示的正向引物15F2和SEQ ID NO:45所示的反向引物15R组成。所述引物组16可由SEQ ID NO:46自5’末端起第22至45位所示的正向引物16F1、SEQ ID NO:47自5’末端起第22至45位所示的正向引物16F2和SEQ ID NO:32所示的反向引物16R组成。所述引物组17可由SEQ ID NO:49自5’末端起第22至47位所示的正向引物17F1、SEQ ID NO:50自5’末端起第22至48位所示的正向引物17F2和SEQ ID NO:51所示的反向引物17R组成。所述引物组18可由SEQ ID NO:52自5’末端起第22至46位所示的正向引物18F1、SEQ ID NO:53自5’末端起第22至45位所示的正向引物18F2和SEQ ID NO:54所示的反向引物18R组成。所述引物组19可由SEQ ID NO:55自5’末端起第22至44位所示的正向引物19F1、SEQ ID NO:56自5’末端起第22至43位所示的正向引物19F2和SEQ ID NO:57所示的反向引物19R组成。所述引物组20可由SEQ ID NO:58自5’末端起第22至43位所示的正向引物20F1、SEQ ID NO:59自5’末端起第22至45位所示的正向引物20F2和SEQ ID NO:60所示的反向引物20R组成。所述引物组21可由SEQ ID NO:61自5’末端起第22至45位所示的正向引物21F1、SEQ ID NO:62自5’末端起第22至44位所示的正向引物21F2和SEQ ID NO:63所示的反向引物21R组成。所述引物组22可由SEQ ID NO:64自5’末端起第22至43位所示的正向引物22F1、SEQ ID NO:65自5’末端起第22至42位所示的正向引物22F2和SEQ ID NO:66所示的反向引物22R组成。所述引物组23可由SEQ ID NO:67自5’末端起第22至46位所示的正向引物23F1、SEQ ID NO:68自5’末端起第22至45位所示的正向引物23F2和SEQ ID NO:69所示的反向引物23R组成。所述引物组24可由SEQ ID NO:70自5’末端起第22至45位所示的正向引物24F1、SEQ ID NO:71自5’末端起第22至44位所示的正向引物24F2和SEQ ID NO:72所示的反向引物24R组成。所述引物组25可由SEQ ID NO:73自5’末端起第22至49位所示的正向引物25F1、SEQ ID NO:74自5’末端起第22至47位所示的正向引物25F2和SEQ ID NO:75所示的反向引物25R组成。所述引物组26可由SEQ ID NO:76自5’末端起第22至43位所示的正向引物26F1、SEQ ID NO:77自5’末端起第22至43位所示的正向引物26F2和SEQ ID NO:78所示的反向引物26R组成。所述引物组27可由SEQ ID NO:79自5’末端起第22至45位所示的正向引物27F1、SEQ ID NO:80自5’末端起第22至43位所示的正向引物27F2和SEQ ID NO:81所示的反向引物27R组成。所述引物组28可由SEQ ID NO:82自5’末端起第22至46位所示的正向引物28F1、SEQ ID NO:83自5’末端起第22至45位所示的正向引物28F2和SEQ ID NO:84所示的反向引物28R组成。所述引物组29可由SEQ ID NO:85自5’末端起第22至47位所示的正向引物29F1、SEQ ID NO:86自5’末端起第22至45位所示的正向引物29F2和SEQ ID NO:87所示的反向引物29R组成。所述引物组30可由SEQ ID NO:88自5’末端起第22至50位所示的正向引物30F1、SEQ ID NO:89自5’末端起第22至50位所示的正向引物30F2和SEQ ID NO:90所示的反向引物30R组成。所述引物组31可由SEQ ID NO:91自5’末端起第22至47位所示的正向引物31F1、SEQ ID NO:92自5’末端起第22至46位所示的正向引物31F2和SEQ ID NO:93所示的反向引物31R组成。所述引物组32可由SEQ ID NO:94自5’末端起第22至47位所示的正向引物32F1、SEQ ID NO:95自5’末端起第22至50位所示的正向引物32F2和SEQ ID NO:96所示的反向引物32R组成。所述引物组33可由SEQ ID NO:97自5’末端起第22至47位所示的正向引物33F1、SEQ ID NO:98自5’末端起第22至47位所示的正向引物33F2和SEQ ID NO:99所示的反向引物33R组成。所述引物组34可由SEQ ID NO:100自5’末端起第22至47位所示的正向引物34F1、SEQ ID NO:101自5’末端起第22至46位所示的正向引物34F2和SEQ ID NO:102所示的反向引物34R组成。所述引物组35可由SEQ ID NO:103自5’末端起第22至43位所示的正向引物35F1、SEQ ID NO:104自5’末端起第22至43位所示的正向引物35F2和SEQ ID NO:105所示的反向引物35R组成。所述引物组36可由SEQ ID NO:106自5’末端起第22至49位所示的正向引物36F1、SEQ ID NO:107自5’末端起第22至50位所示的正向引物36F2和SEQ ID NO:108所示的反向引物36R组成。所述引物组37可由SEQ ID NO:109自5’末端起第22至44位所示的正向引物37F1、SEQ ID NO:110自5’末端起第22至42位所示的正向引物37F2和SEQ ID NO:111所示的反向引物37R组成。所述引物组38可由SEQ ID NO:112自5’末端起第22至45位所示的正向引物38F1、SEQ ID NO:113自5’末端起第22至43位所示的正向引物38F2和SEQ ID NO:114所示的反向引物38R组成。所述引物组39可由SEQ ID NO:115自5’末端起第22至45位所示的正向引物39F1、SEQ ID NO:116自5’末端起第22至44位所示的正向引物39F2和SEQ IDNO:117所示的反向引物39R组成。所述引物组40可由SEQ ID NO:118自5’末端起第22至45位所示的正向引物40F1、SEQ ID NO:119自5’末端起第22至45位所示的正向引物40F2和SEQID NO:120所示的反向引物40R组成。
上述任一所述引物组中，名称中含有“F1”的引物、名称中含有“F2”的引物和名称中含有“R”的引物的摩尔比具体可为2:2:5。
上述任一所述引物组合具体可由所述引物组1—所述引物组40组成。
上文中，SEQ ID NO:1自5′末端起第1至21位所示的核苷酸序列为荧光标签序列(即FAM荧光标签序列)，荧光信号具体为蓝色。SEQ ID NO:2自5′末端起第1至21位所示的核苷酸序列也为荧光标签序列(即HEX荧光标签序列)，荧光信号具体为红色。
含有上述任一所述引物组合的试剂盒也属于本发明的保护范围。
所述试剂盒的制备方法也属于本发明的保护范围。所述试剂盒的制备方法包括将上述任一所述引物组中的各条引物分别单独包装的步骤。
所述试剂盒的应用也属于本发明的保护范围。所述试剂盒的应用可为x3)或x4)：x3)鉴定441个番茄品种；x4)鉴别441个番茄品种真伪性。
本发明还保护上述任一所述引物组合的应用，可为x1)至x4)中的任一种：x1)制备用于鉴定441个番茄品种的试剂盒；x2)制备用于鉴别441个番茄品种真伪性的试剂盒；x3)鉴定441个番茄品种；x4)鉴别441个番茄品种真伪性。
本发明还保护一种鉴定待测番茄属于441个番茄品种中哪个品种的方法，可包括如下步骤：分别检测待测番茄和441个番茄品种基于所述40个SNP位点的基因型，然后进行如下判断：如果待测番茄基于所述40个SNP位点的基因型和441个番茄品种中某品种基于所述40个SNP位点的基因型完全一致，则待测番茄与该番茄品种属于同一个品种；如果待测番茄基于所述40个SNP位点的基因型和441个番茄品种中各个品种基于所述40个SNP位点的基因型均不一致，则待测番茄与441个番茄品种的品种均不相同。
上述方法中，所述“检测待测番茄和441个番茄品种基于40个SNP位点的基因型”的步骤可如下：
(1)分别以待测番茄的基因组DNA和441个番茄品种的基因组DNA为模板，分别采用上述任一所述引物组合中引物组的进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
(2)完成步骤(1)后，采用仪器检测PCR扩增产物的荧光信号，根据荧光信号的颜色获得待测番茄和441个番茄品种基于所述40个SNP位点的基因型。
上述方法中，所述“检测待测番茄和441个番茄品种基于40个SNP位点的基因型”的步骤可如下：
(1)分别以待测番茄的基因组DNA和441个番茄品种的基因组DNA为模板，分别采用上述任一所述引物组合中引物组的进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
(2)取步骤(1)得到的PCR扩增产物，测序；
(3)根据步骤(2)得到的测序结果，获得待测番茄和441个番茄品种基于所述40个SNP位点的基因型。
本发明还保护一种鉴定待测番茄属于441个番茄品种中哪个品种的方法，可包括如下步骤：
(1)以待测番茄的基因组DNA为模板，分别采用上述任一所述引物组合中引物组的进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；以标准番茄品种群中的各个番茄品种的基因组DNA为模板，分别采用上述任一所述引物组合中引物组的进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；所述标准番茄品种群由441个番茄品种组成；
(2)将待测番茄得到的各个PCR扩增产物与每个标准番茄品种对应的PCR扩增产物进行聚类分析，聚类分析中待测番茄与哪个标准番茄品种为同一类，该待测番茄与该标准番茄品种即属于同一个品种。
上述任一所述的方法中，“分别采用上述任一所述引物组合中引物组的进行PCR扩增”的反应程序具体可为：94℃预变性，15min；94℃变性20s，61℃-55℃(选用touch down程序，每循环降低0.6℃)，1min，扩增10个循环；94℃变性20s，55℃复性&延伸1min，继续扩增26个循环。若PCR扩增结束后荧光信号弱，影响数据分析，可以加循环(94℃变性20s，55℃复性及延伸1min，5个循环)，直至结果满意为止。
上述任一所述441个番茄品种可为多丽、金棚一号、博菲特319、金陵粉玉、诺盾0471、齐达利、09FP5-2、09FP53、HR26、红宝304、HR57、HT12044、黑珍珠、京番白玉堂、宝莱、SV9905TG、保冠、DRW7806、露地金冠、津钻801、粉多纳、中杂206、NS03、中杂208、皖红16、中樱6号、天福365、卡依罗、浙杂204、冀番137、GBS103、奥林12、09FP253、09FP29-4、09FP126、09FP47-1、SV0384TG、卓粉225、爱吉红裕、倍盈、瑞星5号、爱吉红秀、辉腾2号、惠丽、辉腾5号、辉腾、浙粉202、迷彩1号、苏粉16号、美帅、东方美2号、德澳特2030、伯爵、粉2331、苏粉8号、米兰达、星宇203、金棚九号、黎曼、罗曼娜、寿研矮生红樱、小汤姆、寿研黄樱、苏抗7号、寿研红樱、京鲁3号、瑞星五号、欧尚、SV7845TH、SV7846TH、航遗2号、TP1303、圣宴2号、御宴、红穗、迪兰尼2号、华美204、俄MNP-1、华美201、大王、辽粉2号、辽园多丽、冠群二号、冠群五号、东风一号、冠群三号、冠群六号、江蔬152、吉丽601、欢喜、金红4号、多利亚、宝禄、中宝、粉宴6号、粉宴1号、宝石捷5号、紫桃一号、金桃一号、紫贝贝、紫金香、红杂35、H9776、正粉、百灵、百利、格雷、中杂108、浦红10号、浦红968、中杂105、中杂9号、新番15号、浙杂205、7898C、金冠七号、L-402、交杂1号、皇冠、莎龙、美丽莎、合航1号、东农712、金棚1号、东农715、东农713、东农706、申粉V-1、申粉998、雪莉、航F5261、夏红1号、L-420、迪芬尼、飞跃、尼瑞萨、金鹏一号、欧冠、欧盾126、皖杂15、皖粉3号、天福501、苏粉9号、粉提1号、HNX12880189、西农2011、明女、小红、思贝德、科砧1号、浙杂203、中杂101、神舟17005、神舟17006、瑞亨1号、瑞亨4号、绿裕16315、绿裕16316、绿裕16321、1603F1、1601F1、T503、R5号、美利达5号、美利达、科比2号、科比3号、科比4号、科比5号、保罗2号、爱米莉2号、安娜2号、斯马特、拉克多粉、112春旺、威敌6号、威霸7号、威尼斯、粉利得、粉红太郎三号、SD1603、SD1604、SD1505、SD1526、SD1542、SD1580、海艳1号、海胜1号、满田3214、满田3125、捷粉一号、捷粉二号、捷粉三号、中科618、粉彤、中蔬1622、中蔬1627、中蔬1628、中蔬162h628、中蔬1645、中蔬1649、圣迪、KT-11、朝研269、朝研279、朝研298-1、朝研385、CY378、朝研387、朝研399、R6号、R4号、R3号、R2号、R1号、钻红八号、钻红十号、钻红美艳TL-98、T305、钻红美惠、芭芭拉、红米达、红米达2号、红米达3号、红米达5号、米兰达2号、米兰达3号、奥美拉、久比2号、久比3号、秦川紫衣、北研789、北研810、北研475-1、北研555、北研556、北研776、ws4043、ws4057、ws4061、ws4063、ws4069、法瑞斯2号、粉果16001号、粉果16004号、粉果16005号、粉果16006号、粉果16007号、粉果16008号、粉果16010号、粉果16011号、粉果16012号、粉果16014号、粉果16016号、粉果16017号、粉果16200号、粉果16201号、粉果16203号、粉果16206号、粉果16207号、粉果16074号、粉果16077号、粉果16079号、粉果16080号、粉果16081号、粉果16087号、粉果16088号、佳美8号、红果16030、红果16031、红果16032、红果16034、红果16038、红果16075、辽粉186、辽粉184、16FQ9014、16FQ9036、16FQ9061、番茄1016、ND107、ND1611、凯瑞568、凯瑞6807、凯瑞樱桃69、凯瑞01、福瑞特1419、福瑞特1503、福瑞特1639、维特24号、福瑞特1619、福瑞特1629、娜日苏2号、福瑞特1616、福瑞特1640、福瑞特TM 07、福瑞特1642、福瑞特1501、福瑞特TM 03、福瑞特TM 06、福瑞特TM 08、福瑞特TM 10、福瑞特1620、福瑞特1647、维特30号、千禧、金珠、爱珠、HT16393(精品大果)、HT16398(天马54)、HT15256(齐达利)、HT15096(贝贝)、HT16304(圣桃六号)、HT16454(碧娇)、维康3号、维康13号、维康31号、维康161、绿裕1326、绿裕1327、绿裕1328、钻红一号、TZ1601、小公主、钻黄樱、钻粉、1604F1、1602F1、钻粉1号、2F1645、R7号、钻红五号、瑞丽、红米达4号、奥美拉2号、迷红10号、福童2号、甜皇、橙皇、拉克多1657、拉克多1688、丰利、迈丰娜、红桃K、海迈T110、海迈T310、金锣、彩贝、甜妮儿、碧桃、甜思美、甜思妮、红升二号、SD1608、SD1610、满田2029、满田2031、黄洋梨、红洋梨、魔鬼、红色盆栽樱桃番茄、翡翠、紫珍珠、中科518、赛禧、粉多多、欧亚88、精品206、中杂109、中蔬1666、中杂302、中蔬1463、中蔬1662、KT-10、朝研398、朝研C929、1616、1618、1622、天福360、天福363、天福601、美好、5323、5343、73-816、73-910、73-912、73-907、73-903、瑞粉880、黄玫瑰、1655、仙客5号、ws4065、ws4066、ws4067、金玉、ws4052、京番黄星3号、金妃、FRT-BX6、富农阳光、抗TY阳光、金玲珑、FT1541、T16115、白金樱1号、金樱3号、满田2026、金串、冬韵、ws4064、ws4014、ws4043、喀秋莎、樱红3号、樱红4号、京番红星1号、京番红星5号、京番红星6号、碧娇、京番红罗1号、京番红罗2号、京番弹头3号、卷珠帘、红娘10号、红美3号、小桃红、FT066、FT1579、FT1038、粉秀、罗马番茄-829F1、玛丽、状元红、曼西娜、摩斯特、诺瓦拉、美红串和小明。
本发明建立了基于等位基因竞争性特异PCR法鉴定番茄品种真实性的DNA指纹数据库，可用于对番茄品种在种子或幼苗期进行早期鉴定，保证品种的真实性，切实保护生产者和育种家的权益，并为番茄种质资源和新品种保护提供技术支持。本发明提供的方法既可以对未知番茄品种进行鉴定，也可以对已知品种的真实性进行鉴定。本发明提供的方法具有高通量、准确、低成本、操作简单、节约人力、物力等有点，具有十分广阔的应用前景。本发明具有重要的应用价值。
附图说明
图1为40个引物组在部分供试番茄品种中的SNP分型效果。
图2为建立在40个SNP引物组上的441个供试番茄品种的聚类图。
图3为SNP标记个数(即SNP位点个数)与区分441个供试番茄品种的关系图。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂公司购买得到的。
以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
实施例1、用于鉴定番茄品种真实性的引物组合的获得
一、40个SNP位点的发现
本发明基于65份番茄代表资源的重测序数据，获得40个SNP位点。这65份番茄资源类型丰富：鲜食番茄(35份)、加工番茄(10份)、樱桃番茄(20份)，基本包括了番茄主要的生态类型，在生育期、果形、果色等农艺性状方面具有较高的遗传多样性，尽可能多地体现了种质代表性。
具体的，SNP位点的筛选标准如下：在全基因组范围内选择位置均匀、多态性好、杂合度小、MAF>0.3、PCA聚类效果好、区分度高且两翼50bp序列保守(无InDel，无SSR，无其它SNP)的SNP位点。
40个SNP位点的基本信息详见表1中第1至4列。其中SNP位点在染色体上的位置是基于番茄参考基因组SL3.0序列比对确定的(网址为：https://solgenomics.net/ organism/Solanum_lycopersicum/genome)。
表1.40个SNP位点的基本信息
二、用于鉴定番茄品种真实性的引物组合的获得
根据步骤一发现的40个SNP位点，开发出具有较高的多态性信息量(PIC值)(见表1中第5列)且适合用等位基因竞争性特异PCR法鉴定番茄品种真实性的引物组合。
引物组合由40个引物组组成。每个引物组的名称见表2中第2列。每个引物组由3条引物序列组成，用于扩增一个SNP位点。40个引物组中各个引物的核苷酸序列如表2中第4列所示。
表2.40个引物组及其引物的核苷酸序列
注：单下划线为FAM荧光标签序列，双下划线为HEX荧光标签序列。
实施例2、实施例1开发的引物组合的有效性检验
随机选择441个供试番茄品种对实施例1开发的引物组合进行有效性检验。
441个供试番茄品种的基本信息见表3。441个供试番茄品种均为常见的优良品种或部分国外引进品种。
表3.441个供试番茄品种的基本信息
1、供试番茄品种的基因组DNA的获得
采用CTAB法分别提取441个供试番茄品种的叶片(混取30粒种子的真叶)的基因组DNA，得到供试番茄品种的基因组DNA。
供试番茄品种的基因组DNA的质量和浓度均须满足PCR要求，达标标准为：琼脂糖电泳显示DNA条带单一，没有明显弥散；紫外分光光度计Nanodrop2000(Thermo)检测A260/A280比值在1.8左右，A260/A230比值大于1.8；供试番茄品种的基因组DNA的浓度在10-30ng/μL。
2、分别以441个供试番茄品种的基因组DNA为模板，分别采用40个引物组进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。各个PCR反应体系中，名称中含有“F1”的引物、名称中含有“F2”的引物和名称中含有“R”的引物的浓度比为2:2:5。
反应程序为：94℃预变性，15min；94℃变性20s，61℃-55℃(选用touch down程序，每循环降低0.6℃)，1min，扩增10个循环；94℃变性20s，55℃复性&延伸1min，继续扩增26个循环。
3、完成步骤2后，待PCR扩增产物温度降至40℃以下时通过酶标仪的FAM、HEX光束扫描读取荧光值(FAM荧光标签序列在激发光485nm，发射光520nm波长下观察读值，HEX荧光标签序列在激发光528nm，发射光560nm波长下观察读值)，根据荧光信号颜色判断441个供试番茄品种基于每个SNP位点的基因型。具体的判断原则如下：如果某供试番茄品种基于某SNP位点显示蓝色荧光信号，则该供试番茄品种基于该SNP位点的基因型为“扩增该SNP位点且名称中含有“F1”的引物的3’末端第1个碱基的互补碱基”纯合型；如果某供试番茄品种基于某SNP位点显示红色荧光信号，则该供试番茄品种基于该SNP位点的基因型为“扩增该SNP位点且名称中含有“F2”的引物的3’末端第1个碱基的互补碱基”纯合型；如果某供试番茄品种基于某SNP位点显示绿色荧光信号，则该供试番茄品种基于该SNP位点的基因型为杂合型，一个碱基为“扩增该SNP位点且名称中含有“F1”的引物的3’末端第1个碱基的互补碱基”，另一个碱基“扩增该SNP位点且名称中含有“F2”的引物的3’末端第1个碱基的互补碱基”。
需要说明的是，若PCR扩增结束后荧光信号弱，影响数据分析，可以加循环(94℃变性20s，55℃复性及延伸1min，5个循环)，直至结果满意为止。
部分结果见图1。结果表明，各个引物组在供试番茄品种中可以得到很好的分型效果。
4、聚类分析
根据441个供试番茄品种基于40个SNP位点的基因型，利用MiniMarker和MEGA7软件对441个供试番茄品种进行聚类分析。
建立在40个引物组上的441个供试番茄品种的聚类图如图2所示。结果表明，40个引物组可以完全区分表3中的441个供试番茄品种。由此可见，实施例1开发的引物组合可以应用于番茄品种DNA指纹数据库构建和品种真实性鉴定。
5、效率评价
品种真实性鉴定可以采用序贯分析方式减少工作量。本发明的发明人比较了SNP标记个数(即引物组数)与区分441个供试番茄品种区分率的关系。
实验结果表明(图3)，40个引物组(即40个SNP标记个数)在441个供试番茄品种中的区分率达到100％。
实施例3、建立检测待测番茄属于实施例2中441个番茄品种中哪个品种的方法
一、建立检测待测番茄属于实施例2中441个番茄品种中哪个品种的方法
1、待测番茄的基因组DNA的获得
按照实施例2中步骤1的方法，将“供试番茄品种的叶片”替换为“待测番茄的叶片”，其它步骤均不变，得到待测番茄的基因组DNA。
2、以待测番茄的基因组DNA为模板，分别采用40个引物组进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。各个PCR反应体系中，名称中含有“F1”的引物、名称中含有“F2”的引物和名称中含有“R”的引物的浓度比为2:2:5。
反应程序为：94℃预变性，15min；94℃变性20s，61℃-55℃(选用touch down程序，每循环降低0.6℃)，1min，扩增10个循环；94℃变性20s，55℃复性&延伸1min，继续扩增26个循环。
3、完成步骤2后，待PCR扩增产物温度降至40℃以下时通过酶标仪的FAM、HEX光束扫描读取荧光值(FAM荧光标签序列在激发光485nm，发射光520nm波长下观察读值，HEX荧光标签序列在激发光528nm，发射光560nm波长下观察读值)，根据荧光信号颜色判断待测番茄基于每个SNP位点的基因型。需要说明的是，若PCR扩增结束后荧光信号弱，影响数据分析，可以加循环(94℃变性20s，55℃复性及延伸1min，5个循环)，直至结果满意为止。
具体的判断原则同实施例2中步骤3的判断原则。
4、完成步骤3后进行如下判断：如果待测番茄基于40个SNP位点的基因型和441个番茄品种中某品种相应的SNP位点的基因型完全一致，则待测番茄与该番茄品种属于同一个品种；如果待测番茄基于40个SNP位点的基因型和441个番茄品种中各个品种相应的SNP位点的基因型均不一致，则待测番茄与441个供试番茄品种的品种均不相同。
二、步骤一建立的方法的准确性鉴定
待测番茄1-待测番茄5的品种依次为圣迪、KT-11、朝研269、朝研279和朝研298-1。待测番茄1-待测番茄5的叶片均取自北京市农林科学院蔬菜研究中心试验基地。
1、按照步骤一中1-3的方法，获得待测番茄1-待测番茄5基于40个SNP位点的基因型。
2、将待测番茄1-待测番茄5基于40个SNP位点的基因型和441个番茄品种基于40个SNP位点的基因型进行比较。
结果表明，待测番茄1基于40个SNP位点的基因型和圣迪相应的SNP位点的基因型完全一致，待测番茄1属于圣迪；待测番茄2基于40个SNP位点的基因型和KT-11相应的SNP位点的基因型完全一致，待测番茄2属于KT-11；待测番茄3基于40个SNP位点的基因型和朝研269相应的SNP位点的基因型完全一致，待测番茄3属于朝研269；待测番茄4基于40个SNP位点的基因型和朝研279相应的SNP位点的基因型完全一致，待测番茄4属于朝研279；待测番茄5基于40个SNP位点的基因型和朝研298-1相应的SNP位点的基因型完全一致，待测番茄5属于朝研298-1。检测结果与预期结果完全一致。
由此可见，步骤一建立的方法具有较高的准确性。
<110>北京市农林科学院
<120>一种鉴定番茄品种DNA指纹的方法及其使用的SNP引物组合
<160>120
<170> PatentIn version 3.5
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<210> 35
<211> 46
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 35
gaaggtcgga gtcaacggat tgaaatagct atccagaagt ctctcg 46
<210> 36
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 36
cagaccaatt gggtaacaaa gaaaatctag 30
<210> 37
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 37
gaaggtgacc aagttcatgc tctcagcaaa tattggactg caaacat 47
<210> 38
<211> 46
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 38
gaaggtcgga gtcaacggat ttcagcaaat attggactgc aaacac 46
<210> 39
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 39
cctgttctga cttacactaa aatatctcac 30
<210> 40
<211> 43
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 40
gaaggtgacc aagttcatgc tactcgacgc catccttgat aac 43
<210> 41
<211> 43
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 41
gaaggtcgga gtcaacggat tactcgacgc catccttgat aag 43
<210> 42
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 42
acttataata tctggtggtg tgatgtcc 28
<210> 43
<211> 46
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 43
gaaggtgacc aagttcatgc tgctttagat accgagtctg aaagga 46
<210> 44
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 44
gaaggtcgga gtcaacggat tctttagata ccgagtctga aaggg 45
<210> 45
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 45
ttagtttcat tgattccagt gcactcac 28
<210> 46
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 46
gaaggtgacc aagttcatgc tatgggccaa ctgatggaat tgcta 45
<210> 47
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 47
gaaggtcgga gtcaacggat tatgggccaa ctgatggaat tgctt 45
<210> 48
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 48
catggtcaca tcaatattat atctttccaa atc 33
<210> 49
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 49
gaaggtgacc aagttcatgc tttgctccta tattattcga gttctgc 47
<210> 50
<211> 48
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 50
gaaggtcgga gtcaacggat tattgctcct atattattcg agttctgt 48
<210> 51
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 51
tcatcatcaa cacccgcagc cc 22
<210> 52
<211> 46
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 52
gaaggtgacc aagttcatgc tgatggtgta ccagttatcg tgttgt 46
<210> 53
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 53
gaaggtcgga gtcaacggat tatggtgtac cagttatcgt gttgc 45
<210> 54
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 54
gtggcaagca acaaaacaca tgaacc 26
<210> 55
<211> 44
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 55
gaaggtgacc aagttcatgc tagtgtcgta gagattcgga tgct 44
<210> 56
<211> 43
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 56
gaaggtcgga gtcaacggat tgtgtcgtag agattcggat gcc 43
<210> 57
<211> 31
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 57
aatcttgtct aatttgtatg accacacatt c 31
<210> 58
<211> 43
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 58
gaaggtgacc aagttcatgc taacaggcaa caaatcctca ggc 43
<210> 59
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 59
gaaggtcgga gtcaacggat tacaacaggc aacaaatcct caggt 45
<210> 60
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 60
gactaatatg ttgaggactg tgattgag 28
<210> 61
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 61
gaaggtgacc aagttcatgc tctcatggcc tactggcaac taaat 45
<210> 62
<211> 44
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 62
gaaggtcgga gtcaacggat ttcatggcct actggcaact aaac 44
<210> 63
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 63
gtgtctagat gtgcatcctc aaagatg 27
<210> 64
<211> 43
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 64
gaaggtgacc aagttcatgc tcatgctgtc tgcgagtatg cga 43
<210> 65
<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 65
gaaggtcgga gtcaacggat tatgctgtct gcgagtatgc gg 42
<210> 66
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 66
gatgtgatca atatggactt catcacag 28
<210> 67
<211> 46
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 67
gaaggtgacc aagttcatgc tgagtccaat ccagaggatg tttcta 46
<210> 68
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 68
gaaggtcgga gtcaacggat tagtccaatc cagaggatgt ttctc 45
<210> 69
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 69
ctgtcatctg atgttgattg tctaacaag 29
<210> 70
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 70
gaaggtgacc aagttcatgc tgttattaat gcggagcacg tggat 45
<210> 71
<211> 44
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 71
gaaggtcgga gtcaacggat tttattaatg cggagcacgt ggac 44
<210> 72
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 72
cagtagtagc gttatccaca agagatac 28
<210> 73
<211> 49
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 73
gaaggtgacc aagttcatgc taataaacct caggaattct ttggagaat 49
<210> 74
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 74
gaaggtcgga gtcaacggat ttaaacctca ggaattcttt ggagaac 47
<210> 75
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 75
catcatcgga atcaacgtca atggc 25
<210> 76
<211> 43
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 76
gaaggtgacc aagttcatgc tgttgccctg ggtgagatct aca 43
<210> 77
<211> 43
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 77
gaaggtcgga gtcaacggat tgttgccctg ggtgagatct act 43
<210> 78
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 78
cagagtctgc taatttagag tccataac 28
<210> 79
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 79
gaaggtgacc aagttcatgc ttgatagagc ttaccagctg acagt 45
<210> 80
<211> 43
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 80
gaaggtcgga gtcaacggat tatagagctt accagctgac agg 43
<210> 81
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 81
gtgcattctc taacggtaga tacgaac 27
<210> 82
<211> 46
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 82
gaaggtgacc aagttcatgc tggtggaagc aatttctgca attcct 46
<210> 83
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 83
gaaggtcgga gtcaacggat tgtggaagca atttctgcaa ttccc 45
<210> 84
<211>25
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 84
gcgaccaaag tcacgaacaa aactc 25
<210> 85
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 85
gaaggtgacc aagttcatgc tatcattcaa caatactcac accgctt 47
<210> 86
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 86
gaaggtcgga gtcaacggat tcattcaaca atactcacac cgctc 45
<210> 87
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 87
ggagaaaata tctgcaaaat aggcgatac 29
<210> 88
<211> 50
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 88
gaaggtgacc aagttcatgc tactttacaa agaattacca tcactgcttt 50
<210> 89
<211> 50
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 89
gaaggtcgga gtcaacggat tactttacaa agaattacca tcactgctta 50
<210> 90
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 90
cattcatgag ctaccacgga ggg 23
<210> 91
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 91
gaaggtgacc aagttcatgc ttgacgaatt cgagttttcc agcaaat 47
<210> 92
<211> 46
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 92
gaaggtcgga gtcaacggat tgacgaattc gagttttcca gcaaac 46
<210> 93
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 93
gcgcagcagt ttaattgaca agctatc 27
<210> 94
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 94
gaaggtgacc aagttcatgc tgataattag gtgattcctc catacag 47
<210> 95
<211> 50
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 95
gaaggtcgga gtcaacggat taaagataat taggtgattc ctccatacat 50
<210> 96
<211>22
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 96
tagggggtac tctcgagtcg tg 22
<210>97
<211>47
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>97
gaaggtgacc aagttcatgc ttaaaaatga cccaactcac aatcggt 47
<210>98
<211>47
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>98
gaaggtcgga gtcaacggat ttaaaaatga cccaactcac aatcgga 47
<210>99
<211>31
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>99
ctttatgcaa tttatttcta actcgtgctt g 31
<210>100
<211>47
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>100
gaaggtgacc aagttcatgc tcctaattca caggacacag aatgtaa 47
<210>101
<211>46
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>101
gaaggtcgga gtcaacggat tctaattcac aggacacaga atgtag 46
<210>102
<211>28
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>102
ttgtcgtttt caggacaaat cctacaac 28
<210>103
<211>43
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>103
gaaggtgacc aagttcatgc tgtgcgtaga acactgcttg gta 43
<210>104
<211>43
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>104
gaaggtcgga gtcaacggat tgtgcgtaga acactgcttg gtg 43
<210>105
<211>25
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>105
tcaaagccag gcaaattgga aggac 25
<210>106
<211>49
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>106
gaaggtgacc aagttcatgc tataaataat gccacgtgtc atcatattc 49
<210>107
<211>50
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>107
gaaggtcgga gtcaacggat tgataaataa tgccacgtgt catcatattt 50
<210>108
<211>33
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>108
ctctttgcta ctttttattc cacttaaatc ttc 33
<210>109
<211>44
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>109
gaaggtgacc aagttcatgc ttacgtcaac aagcttcggg gaaa 44
<210>110
<211>42
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>110
gaaggtcgga gtcaacggat tcgtcaacaa gcttcgggga ag 42
<210>111
<211>28
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>111
tatgaatcta cttatgcttc ttggggtg 28
<210>112
<211>45
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>112
gaaggtgacc aagttcatgc taacttgggt atgcaccttt tcggt 45
<210>113
<211>43
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>113
gaaggtcgga gtcaacggat tcttgggtat gcaccttttc ggc 43
<210>114
<211>28
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>114
ccttactcat atcgcaattt agcacttg 28
<210>115
<211>45
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>115
gaaggtgacc aagttcatgc tgaatcagtg cacaaactgg cttca 45
<210>116
<211>44
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>116
gaaggtcgga gtcaacggat taatcagtgc acaaactggc ttcg 44
<210>117
<211>28
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>117
gatataacta ccaccaagga ctataagc 28
<210>118
<211>45
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>118
gaaggtgacc aagttcatgc ttattgctag tcaccacgtc aacca 45
<210>119
<211>45
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>119
gaaggtcgga gtcaacggat ttattgctag tcaccacgtc aacct 45
<210>120
<211>27
<212>DNA
<213>Artificial sequence
<400>120
gttgtagaaa gaagaagtgt gggatcg 27
Claims (4)
1.引物组合甲，由引物组1-引物组40组成；
所述引物组1由SEQ ID NO:1所示的正向引物01F1、SEQ ID NO:2所示的正向引物01F2和SEQ ID NO:3所示的反向引物01R组成；
所述引物组2由SEQ ID NO:4所示的正向引物02F1、SEQ ID NO:5所示的正向引物02F2和SEQ ID NO:6所示的反向引物02R组成；
所述引物组3由SEQ ID NO:7所示的正向引物03F1、SEQ ID NO:8所示的正向引物03F2和SEQ ID NO:9所示的反向引物03R组成；
所述引物组4由SEQ ID NO:10所示的正向引物04F1、SEQ ID NO:11所示的正向引物04F2和SEQ ID NO:12所示的反向引物04R组成；
所述引物组5由SEQ ID NO:13所示的正向引物05F1、SEQ ID NO:14所示的正向引物05F2和SEQ ID NO:15所示的反向引物05R组成；
所述引物组6由SEQ ID NO:16所示的正向引物06F1、SEQ ID NO:17所示的正向引物06F2和SEQ ID NO:18所示的反向引物06R组成；
所述引物组7由SEQ ID NO:19所示的正向引物07F1、SEQ ID NO:20所示的正向引物07F2和SEQ ID NO:21所示的反向引物07R组成；
所述引物组8由SEQ ID NO:22所示的正向引物08F1、SEQ ID NO:23所示的正向引物08F2和SEQ ID NO:24所示的反向引物08R组成；
所述引物组9由SEQ ID NO:25所示的正向引物09F1、SEQ ID NO:26所示的正向引物09F2和SEQ ID NO:27所示的反向引物09R组成；
所述引物组10由SEQ ID NO:28所示的正向引物10F1、SEQ ID NO:29所示的正向引物10F2和SEQ ID NO:30所示的反向引物10R组成；
所述引物组11由SEQ ID NO:31所示的正向引物11F1、SEQ ID NO:32所示的正向引物11F2和SEQ ID NO:33所示的反向引物11R组成；
所述引物组12由SEQ ID NO:34所示的正向引物12F1、SEQ ID NO:35所示的正向引物12F2和SEQ ID NO:36所示的反向引物12R组成；
所述引物组13由SEQ ID NO:37所示的正向引物13F1、SEQ ID NO:38所示的正向引物13F2和SEQ ID NO:39所示的反向引物13R组成；
所述引物组14由SEQ ID NO:40所示的正向引物14F1、SEQ ID NO:41所示的正向引物14F2和SEQ ID NO:42所示的反向引物14R组成；
所述引物组15由SEQ ID NO:43所示的正向引物15F1、SEQ ID NO:44所示的正向引物15F2和SEQ ID NO:45所示的反向引物15R组成；
所述引物组16由SEQ ID NO:46所示的正向引物16F1、SEQ ID NO:47所示的正向引物16F2和SEQ ID NO:32所示的反向引物16R组成；
所述引物组17由SEQ ID NO:49所示的正向引物17F1、SEQ ID NO:50所示的正向引物17F2和SEQ ID NO:51所示的反向引物17R组成；
所述引物组18由SEQ ID NO:52所示的正向引物18F1、SEQ ID NO:53所示的正向引物18F2和SEQ ID NO:54所示的反向引物18R组成；
所述引物组19由SEQ ID NO:55所示的正向引物19F1、SEQ ID NO:56所示的正向引物19F2和SEQ ID NO:57所示的反向引物19R组成；
所述引物组20由SEQ ID NO:58所示的正向引物20F1、SEQ ID NO:59所示的正向引物20F2和SEQ ID NO:60所示的反向引物20R组成；
所述引物组21由SEQ ID NO:61所示的正向引物21F1、SEQ ID NO:62所示的正向引物21F2和SEQ ID NO:63所示的反向引物21R组成；
所述引物组22由SEQ ID NO:64所示的正向引物22F1、SEQ ID NO:65所示的正向引物22F2和SEQ ID NO:66所示的反向引物22R组成；
所述引物组23由SEQ ID NO:67所示的正向引物23F1、SEQ ID NO:68所示的正向引物23F2和SEQ ID NO:69所示的反向引物23R组成；
所述引物组24由SEQ ID NO:70所示的正向引物24F1、SEQ ID NO:71所示的正向引物24F2和SEQ ID NO:72所示的反向引物24R组成；
所述引物组25由SEQ ID NO:73所示的正向引物25F1、SEQ ID NO:74所示的正向引物25F2和SEQ ID NO:75所示的反向引物25R组成；
所述引物组26由SEQ ID NO:76所示的正向引物26F1、SEQ ID NO:77所示的正向引物26F2和SEQ ID NO:78所示的反向引物26R组成；
所述引物组27由SEQ ID NO:79所示的正向引物27F1、SEQ ID NO:80所示的正向引物27F2和SEQ ID NO:81所示的反向引物27R组成；
所述引物组28由SEQ ID NO:82所示的正向引物28F1、SEQ ID NO:83所示的正向引物28F2和SEQ ID NO:84所示的反向引物28R组成；
所述引物组29由SEQ ID NO:85所示的正向引物29F1、SEQ ID NO:86所示的正向引物29F2和SEQ ID NO:87所示的反向引物29R组成；
所述引物组30由SEQ ID NO:88所示的正向引物30F1、SEQ ID NO:89所示的正向引物30F2和SEQ ID NO:90所示的反向引物30R组成；
所述引物组31由SEQ ID NO:91所示的正向引物31F1、SEQ ID NO:92所示的正向引物31F2和SEQ ID NO:93所示的反向引物31R组成；
所述引物组32由SEQ ID NO:94所示的正向引物32F1、SEQ ID NO:95所示的正向引物32F2和SEQ ID NO:96所示的反向引物32R组成；
所述引物组33由SEQ ID NO:97所示的正向引物33F1、SEQ ID NO:98所示的正向引物33F2和SEQ ID NO:99所示的反向引物33R组成；
所述引物组34由SEQ ID NO:100所示的正向引物34F1、SEQ ID NO:101所示的正向引物34F2和SEQ ID NO:102所示的反向引物34R组成；
所述引物组35由SEQ ID NO:103所示的正向引物35F1、SEQ ID NO:104所示的正向引物35F2和SEQ ID NO:105所示的反向引物35R组成；
所述引物组36由SEQ ID NO:106所示的正向引物36F1、SEQ ID NO:107所示的正向引物36F2和SEQ ID NO:108所示的反向引物36R组成；
所述引物组37由SEQ ID NO:109所示的正向引物37F1、SEQ ID NO:110所示的正向引物37F2和SEQ ID NO:111所示的反向引物37R组成；
所述引物组38由SEQ ID NO:112所示的正向引物38F1、SEQ ID NO:113所示的正向引物38F2和SEQ ID NO:114所示的反向引物38R组成；
所述引物组39由SEQ ID NO:115所示的正向引物39F1、SEQ ID NO:116所示的正向引物39F2和SEQ ID NO:117所示的反向引物39R组成；
所述引物组40由SEQ ID NO:118所示的正向引物40F1、SEQ ID NO:119所示的正向引物40F2和SEQ ID NO:120所示的反向引物40R组成。
2.引物组合乙，由引物组1-引物组40组成；
所述引物组1由SEQ ID NO:1自5’末端起第22至43位所示的正向引物01F1、SEQ ID NO:2自5’末端起第22至44位所示的正向引物01F2和SEQ ID NO:3所示的反向引物01R组成；
所述引物组2由SEQ ID NO:4自5’末端起第22至46位所示的正向引物02F1、SEQ ID NO:5自5’末端起第22至47位所示的正向引物02F2和SEQ ID NO:6所示的反向引物02R组成；
所述引物组3由SEQ ID NO:7自5’末端起第22至47位所示的正向引物03F1、SEQ ID NO:8自5’末端起第22至46位所示的正向引物03F2和SEQ ID NO:9所示的反向引物03R组成；
所述引物组4由SEQ ID NO:10自5’末端起第22至50位所示的正向引物04F1、SEQ IDNO:11自5’末端起第22至50位所示的正向引物04F2和SEQ ID NO:12所示的反向引物04R组成；
所述引物组5由SEQ ID NO:13自5’末端起第22至48位所示的正向引物05F1、SEQ IDNO:14自5’末端起第22至47位所示的正向引物05F2和SEQ ID NO:15所示的反向引物05R组成；
所述引物组6由SEQ ID NO:16自5’末端起第22至48位所示的正向引物06F1、SEQ IDNO:17自5’末端起第22至47位所示的正向引物06F2和SEQ ID NO:18所示的反向引物06R组成；
所述引物组7由SEQ ID NO:19自5’末端起第22至47位所示的正向引物07F1、SEQ IDNO:20自5’末端起第22至48位所示的正向引物07F2和SEQ ID NO:21所示的反向引物07R组成；
所述引物组8由SEQ ID NO:22自5’末端起第22至45位所示的正向引物08F1、SEQ IDNO:23自5’末端起第22至47位所示的正向引物08F2和SEQ ID NO:24所示的反向引物08R组成；
所述引物组9由SEQ ID NO:25自5’末端起第22至44位所示的正向引物09F1、SEQ IDNO:26自5’末端起第22至44位所示的正向引物09F2和SEQ ID NO:27所示的反向引物09R组成；
所述引物组10由SEQ ID NO:28自5’末端起第22至48位所示的正向引物10F1、SEQ IDNO:29自5’末端起第22至49位所示的正向引物10F2和SEQ ID NO:30所示的反向引物10R组成；
所述引物组11由SEQ ID NO:31自5’末端起第22至45位所示的正向引物11F1、SEQ IDNO:32自5’末端起第22至45位所示的正向引物11F2和SEQ ID NO:33所示的反向引物11R组成；
所述引物组12由SEQ ID NO:34自5’末端起第22至47位所示的正向引物12F1、SEQ IDNO:35自5’末端起第22至46位所示的正向引物12F2和SEQ ID NO:36所示的反向引物12R组成；
所述引物组13由SEQ ID NO:37自5’末端起第22至47位所示的正向引物13F1、SEQ IDNO:38自5’末端起第22至46位所示的正向引物13F2和SEQ ID NO:39所示的反向引物13R组成；
所述引物组14由SEQ ID NO:40自5’末端起第22至43位所示的正向引物14F1、SEQ IDNO:41自5’末端起第22至43位所示的正向引物14F2和SEQ ID NO:42所示的反向引物14R组成；
所述引物组15由SEQ ID NO:43自5’末端起第22至46位所示的正向引物15F1、SEQ IDNO:44自5’末端起第22至45位所示的正向引物15F2和SEQ ID NO:45所示的反向引物15R组成；
所述引物组16由SEQ ID NO:46自5’末端起第22至45位所示的正向引物16F1、SEQ IDNO:47自5’末端起第22至45位所示的正向引物16F2和SEQ ID NO:32所示的反向引物16R组成；
所述引物组17由SEQ ID NO:49自5’末端起第22至47位所示的正向引物17F1、SEQ IDNO:50自5’末端起第22至48位所示的正向引物17F2和SEQ ID NO:51所示的反向引物17R组成；
所述引物组18由SEQ ID NO:52自5’末端起第22至46位所示的正向引物18F1、SEQ IDNO:53自5’末端起第22至45位所示的正向引物18F2和SEQ ID NO:54所示的反向引物18R组成；
所述引物组19由SEQ ID NO:55自5’末端起第22至44位所示的正向引物19F1、SEQ IDNO:56自5’末端起第22至43位所示的正向引物19F2和SEQ ID NO:57所示的反向引物19R组成；
所述引物组20由SEQ ID NO:58自5’末端起第22至43位所示的正向引物20F1、SEQ IDNO:59自5’末端起第22至45位所示的正向引物20F2和SEQ ID NO:60所示的反向引物20R组成；
所述引物组21由SEQ ID NO:61自5’末端起第22至45位所示的正向引物21F1、SEQ IDNO:62自5’末端起第22至44位所示的正向引物21F2和SEQ ID NO:63所示的反向引物21R组成；
所述引物组22由SEQ ID NO:64自5’末端起第22至43位所示的正向引物22F1、SEQ IDNO:65自5’末端起第22至42位所示的正向引物22F2和SEQ ID NO:66所示的反向引物22R组成；
所述引物组23由SEQ ID NO:67自5’末端起第22至46位所示的正向引物23F1、SEQ IDNO:68自5’末端起第22至45位所示的正向引物23F2和SEQ ID NO:69所示的反向引物23R组成；
所述引物组24由SEQ ID NO:70自5’末端起第22至45位所示的正向引物24F1、SEQ IDNO:71自5’末端起第22至44位所示的正向引物24F2和SEQ ID NO:72所示的反向引物24R组成；
所述引物组25由SEQ ID NO:73自5’末端起第22至49位所示的正向引物25F1、SEQ IDNO:74自5’末端起第22至47位所示的正向引物25F2和SEQ ID NO:75所示的反向引物25R组成；
所述引物组26由SEQ ID NO:76自5’末端起第22至43位所示的正向引物26F1、SEQ IDNO:77自5’末端起第22至43位所示的正向引物26F2和SEQ ID NO:78所示的反向引物26R组成；
所述引物组27由SEQ ID NO:79自5’末端起第22至45位所示的正向引物27F1、SEQ IDNO:80自5’末端起第22至43位所示的正向引物27F2和SEQ ID NO:81所示的反向引物27R组成；
所述引物组28由SEQ ID NO:82自5’末端起第22至46位所示的正向引物28F1、SEQ IDNO:83自5’末端起第22至45位所示的正向引物28F2和SEQ ID NO:84所示的反向引物28R组成；
所述引物组29由SEQ ID NO:85自5’末端起第22至47位所示的正向引物29F1、SEQ IDNO:86自5’末端起第22至45位所示的正向引物29F2和SEQ ID NO:87所示的反向引物29R组成；
所述引物组30由SEQ ID NO:88自5’末端起第22至50位所示的正向引物30F1、SEQ IDNO:89自5’末端起第22至50位所示的正向引物30F2和SEQ ID NO:90所示的反向引物30R组成；
所述引物组31由SEQ ID NO:91自5’末端起第22至47位所示的正向引物31F1、SEQ IDNO:92自5’末端起第22至46位所示的正向引物31F2和SEQ ID NO:93所示的反向引物31R组成；
所述引物组32由SEQ ID NO:94自5’末端起第22至47位所示的正向引物32F1、SEQ IDNO:95自5’末端起第22至50位所示的正向引物32F2和SEQ ID NO:96所示的反向引物32R组成；
所述引物组33由SEQ ID NO:97自5’末端起第22至47位所示的正向引物33F1、SEQ IDNO:98自5’末端起第22至47位所示的正向引物33F2和SEQ ID NO:99所示的反向引物33R组成；
所述引物组34由SEQ ID NO:100自5’末端起第22至47位所示的正向引物34F1、SEQ IDNO:101自5’末端起第22至46位所示的正向引物34F2和SEQ ID NO:102所示的反向引物34R组成；
所述引物组35由SEQ ID NO:103自5’末端起第22至43位所示的正向引物35F1、SEQ IDNO:104自5’末端起第22至43位所示的正向引物35F2和SEQ ID NO:105所示的反向引物35R组成；
所述引物组36由SEQ ID NO:106自5’末端起第22至49位所示的正向引物36F1、SEQ IDNO:107自5’末端起第22至50位所示的正向引物36F2和SEQ ID NO:108所示的反向引物36R组成；
所述引物组37由SEQ ID NO:109自5’末端起第22至44位所示的正向引物37F1、SEQ IDNO:110自5’末端起第22至42位所示的正向引物37F2和SEQ ID NO:111所示的反向引物37R组成；
所述引物组38由SEQ ID NO:112自5’末端起第22至45位所示的正向引物38F1、SEQ IDNO:113自5’末端起第22至43位所示的正向引物38F2和SEQ ID NO:114所示的反向引物38R组成；
所述引物组39由SEQ ID NO:115自5’末端起第22至45位所示的正向引物39F1、SEQ IDNO:116自5’末端起第22至44位所示的正向引物39F2和SEQ ID NO:117所示的反向引物39R组成；
所述引物组40由SEQ ID NO:118自5’末端起第22至45位所示的正向引物40F1、SEQ IDNO:119自5’末端起第22至45位所示的正向引物40F2和SEQ ID NO:120所示的反向引物40R组成。
3.权利要求1所述引物组合甲或权利要求2所述引物组合乙的应用，为x1)至x4)中的任一种：x1)制备用于鉴定441个番茄品种的试剂盒；x2)制备用于鉴别441个番茄品种真伪性的试剂盒；x3)鉴定441个番茄品种；x4)鉴别441个番茄品种真伪性；
所述441个番茄品种为多丽、金棚一号、博菲特319、金陵粉玉、诺盾0471、齐达利、09FP5-2、09FP53、HR26、红宝304、HR57、HT12044、黑珍珠、京番白玉堂、宝莱、SV9905TG、保冠、DRW7806、露地金冠、津钻801、粉多纳、中杂206、NS03、中杂208、皖红16、中樱6号、天福365、卡依罗、浙杂204、冀番137、GBS103、奥林12、09FP253、09FP29-4、09FP126、09FP47-1、SV0384TG、卓粉225、爱吉红裕、倍盈、瑞星5号、爱吉红秀、辉腾2号、惠丽、辉腾5号、辉腾、浙粉202、迷彩1号、苏粉16号、美帅、东方美2号、德澳特2030、伯爵、粉2331、苏粉8号、米兰达、星宇203、金棚九号、黎曼、罗曼娜、寿研矮生红樱、小汤姆、寿研黄樱、苏抗7号、寿研红樱、京鲁3号、瑞星五号、欧尚、SV7845TH、SV7846TH、航遗2号、TP1303、圣宴2号、御宴、红穗、迪兰尼2号、华美204、俄MNP-1、华美201、大王、辽粉2号、辽园多丽、冠群二号、冠群五号、东风一号、冠群三号、冠群六号、江蔬152、吉丽601、欢喜、金红4号、多利亚、宝禄、中宝、粉宴6号、粉宴1号、宝石捷5号、紫桃一号、金桃一号、紫贝贝、紫金香、红杂35、H9776、正粉、百灵、百利、格雷、中杂108、浦红10号、浦红968、中杂105、中杂9号、新番15号、浙杂205、7898C、金冠七号、L-402、交杂1号、皇冠、莎龙、美丽莎、合航1号、东农712、金棚1号、东农715、东农713、东农706、申粉V-1、申粉998、雪莉、航F5261、夏红1号、L-420、迪芬尼、飞跃、尼瑞萨、金鹏一号、欧冠、欧盾126、皖杂15、皖粉3号、天福501、苏粉9号、粉提1号、HNX12880189、西农2011、明女、小红、思贝德、科砧1号、浙杂203、中杂101、神舟17005、神舟17006、瑞亨1号、瑞亨4号、绿裕16315、绿裕16316、绿裕16321、1603F1、1601F1、T503、R5号、美利达5号、美利达、科比2号、科比3号、科比4号、科比5号、保罗2号、爱米莉2号、安娜2号、斯马特、拉克多粉、112春旺、威敌6号、威霸7号、威尼斯、粉利得、粉红太郎三号、SD1603、SD1604、SD1505、SD1526、SD1542、SD1580、海艳1号、海胜1号、满田3214、满田3125、捷粉一号、捷粉二号、捷粉三号、中科618、粉彤、中蔬1622、中蔬1627、中蔬1628、中蔬162h628、中蔬1645、中蔬1649、圣迪、KT-11、朝研269、朝研279、朝研298-1、朝研385、CY378、朝研387、朝研399、R6号、R4号、R3号、R2号、R1号、钻红八号、钻红十号、钻红美艳TL-98、T305、钻红美惠、芭芭拉、红米达、红米达2号、红米达3号、红米达5号、米兰达2号、米兰达3号、奥美拉、久比2号、久比3号、秦川紫衣、北研789、北研810、北研475-1、北研555、北研556、北研776、ws4043、ws4057、ws4061、ws4063、ws4069、法瑞斯2号、粉果16001号、粉果16004号、粉果16005号、粉果16006号、粉果16007号、粉果16008号、粉果16010号、粉果16011号、粉果16012号、粉果16014号、粉果16016号、粉果16017号、粉果16200号、粉果16201号、粉果16203号、粉果16206号、粉果16207号、粉果16074号、粉果16077号、粉果16079号、粉果16080号、粉果16081号、粉果16087号、粉果16088号、佳美8号、红果16030、红果16031、红果16032、红果16034、红果16038、红果16075、辽粉186、辽粉184、16FQ9014、16FQ9036、16FQ9061、番茄1016、ND107、ND1611、凯瑞568、凯瑞6807、凯瑞樱桃69、凯瑞01、福瑞特1419、福瑞特1503、福瑞特1639、维特24号、福瑞特1619、福瑞特1629、娜日苏2号、福瑞特1616、福瑞特1640、福瑞特TM07、福瑞特1642、福瑞特1501、福瑞特TM03、福瑞特TM06、福瑞特TM08、福瑞特TM10、福瑞特1620、福瑞特1647、维特30号、千禧、金珠、爱珠、HT16393(精品大果)、HT16398(天马54)、HT15256(齐达利)、HT15096(贝贝)、HT16304(圣桃六号)、HT16454(碧娇)、维康3号、维康13号、维康31号、维康161、绿裕1326、绿裕1327、绿裕1328、钻红一号、TZ1601、小公主、钻黄樱、钻粉、1604F1、1602F1、钻粉1号、2F1645、R7号、钻红五号、瑞丽、红米达4号、奥美拉2号、迷红10号、福童2号、甜皇、橙皇、拉克多1657、拉克多1688、丰利、迈丰娜、红桃K、海迈T110、海迈T310、金锣、彩贝、甜妮儿、碧桃、甜思美、甜思妮、红升二号、SD1608、SD1610、满田2029、满田2031、黄洋梨、红洋梨、魔鬼、红色盆栽樱桃番茄、翡翠、紫珍珠、中科518、赛禧、粉多多、欧亚88、精品206、中杂109、中蔬1666、中杂302、中蔬1463、中蔬1662、KT-10、朝研398、朝研C929、1616、1618、1622、天福360、天福363、天福601、美好、5323、5343、73-816、73-910、73-912、73-907、73-903、瑞粉880、黄玫瑰、1655、仙客5号、ws4065、ws4066、ws4067、金玉、ws4052、京番黄星3号、金妃、FRT-BX6、富农阳光、抗TY阳光、金玲珑、FT1541、T16115、白金樱1号、金樱3号、满田2026、金串、冬韵、ws4064、ws4014、ws4043、喀秋莎、樱红3号、樱红4号、京番红星1号、京番红星5号、京番红星6号、碧娇、京番红罗1号、京番红罗2号、京番弹头3号、卷珠帘、红娘10号、红美3号、小桃红、FT066、FT1579、FT1038、粉秀、罗马番茄-829F1、玛丽、状元红、曼西娜、摩斯特、诺瓦拉、美红串和小明。
4.一种鉴定待测番茄属于权利要求3中所述441个番茄品种中哪个品种的方法，包括如下步骤：
(1)以待测番茄的基因组DNA为模板，分别采用权利要求2所述引物组合乙中的引物组的进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；以标准番茄品种群中的各个番茄品种的基因组DNA为模板，分别采用权利要求2所述引物组合乙中的引物组的进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；所述标准番茄品种群由441个番茄品种组成；
(2)将待测番茄得到的各个PCR扩增产物与每个标准番茄品种对应的PCR扩增产物进行聚类分析，聚类分析中待测番茄与哪个标准番茄品种为同一类，该待测番茄与该标准番茄品种即属于同一个品种。
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