CN112661826B - 小肽ERpeptide及其在急性髓系白血病中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了小肽ERpeptide及其在急性髓系白血病中的应用。所述小肽ERpeptide由SEQ ID NO:1所示长链非编码RNA基因ASH1L‑AS1编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明研究表明，ERpeptide具有作为急性髓系白血病的分类器和指示治疗缓解的潜在临床作用，ASH1L‑AS1/ERpeptide可以作为急性髓系白血病的诊断标记物；同时ASH1L‑AS1/ERpeptide对急性髓系白血病的发生发展具有潜在调控作用，是治疗急性髓系白血病的潜在靶标，为靶向治疗急性髓系白血病提供了一种新的精准的治疗策略和遗传资源，具有重要的理论意义和应用价值。

Description

小肽ERpeptide及其在急性髓系白血病中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，更具体地，涉及小肽ERpeptide及其在急性髓系白血病中的应用。

背景技术

急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia，AML)是一类以造血干/祖细胞分化受阻以及恶性增殖为特点的恶性肿瘤，约占全部急性白血病的70％左右。目前，由于对急性髓系白血病的发病机制不清楚，导致其治疗困难，尤其是对于一些不适合化疗、难治或者复发的患者仍束手无措，其预后及生存率不理想。

研究表明，许多AML患者均存在基因突变和染色体异常，如FLT3、K/NRAS、TP53以及c-KIT等基因在AML中均有很高的突变率以及MLL基因染色体重排，这些变异会导致下游分子通路的紊乱来调控白血病的发生与发展。因此，对于不同类型急性髓系白血病中相同靶点的研究，将在白血病的治疗中有着举足轻重的作用。近年来由于测序技术的发展，越来越多的新型调控分子被发现，其中长链非编码RNA编码的小肽就是一类新型分子。

众所周知，蛋白由mRNA上的一段的开放阅读框(Open Reading Frame，ORF)序列翻译而来，而小肽则来源于sORF(small Open Reading Frame，ORF)。转录组测序结果显示，大量编码小肽的非编码RNA如lncRNA在癌症中存在异常表达的情况，这暗示着其编码的小肽可能参与到癌症发生发展中。现今的研究显示许多小肽在癌症中失调表达并调控了癌细胞的生长、侵袭以及转移等进程。例如Huang J Z等(2017)公开了lncRNA HOXB-AS3编码的一个53aa的小肽能够抑制结肠癌细胞的生长、克隆形成和侵袭转移(Huang J Z,Chen M,ChenD,et al.A Peptide Encoded by a Putative lncRNA HOXB-AS3 Suppresses ColonCancer Growth[J].Molecular Cell,2017,68(1):171-184.e6.)。近年来随着，ribosomeprofiling技术的发展也逐渐揭示了长链非编码RNA新的编码小肽在生命活动、疾病以及癌症中发挥着重要功能。但是目前对小肽的研究还处于初级阶段，许多小肽的功能尚未被挖掘，尤其是在白血病中更缺乏相关的研究，还未见有与急性髓系白血病诊断或治疗相关的小肽的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种由长链非编码RNA基因ASH1L-AS1编码的小肽ERpeptide。

本发明的第二个目的在于提供所述小肽ERpeptide在急性髓系白血病中的应用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

一种小肽ERpeptide，由SEQ ID NO:1所示长链非编码RNA基因ASH1L-AS1编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明发现了一个在急性髓系白血病中特异性高表达，而在正常生理条件下及其他类型癌症中相对低表达的lncRNA，将其命名为ASH1L-AS1(ENST00000456633.1，NR_147963.1)。ASH1L-AS1的基因座位(参考hg38)为人第1号染色体的反义DNA链上，其基因覆盖从155,562,042bp到155,563,646bp的范围，可以转录出长度为1232nt的lncRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。于此同时，本发明新鉴定，该lncRNA编码一个90氨基酸的短肽ERpeptide，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明通过实时定量PCR和western blot技术检测了白血病病人样品，发现ASH1L-AS1/ERpeptide在急性髓系白血病人中高表达。进一步研究发现，在疾病缓解的病人中，ASH1L-AS1/ERpeptide表达水平显著降低，说明ASH1L-AS1/ERpeptide具有作为急性髓系白血病的分类器和指示治疗缓解的潜在临床作用，ASH1L-AS1/ERpeptid可以作为急性髓系白血病的诊断标记物。

进一步地，本发明利用siRNA/shRNA技术敲低ASH1L-AS1/ERpeptide，发现该基因是以翻译的小肽ERpeptide发挥作用，而不是lncRNA ASH1L-AS1发挥功，并显著抑制急性髓系白血病细胞增殖，诱导凋亡。而且，NOD-SCID小鼠模型实验显示，shRNA敲低ERpeptide的急性髓系白血病细胞具有抑制肿瘤生长的作用，表明ASH1L-AS1/ERpeptide可作为急性髓系白血病的治疗靶点。

进一步对小肽ERpeptide的生物学分子机制进行研究，发现ERpeptide直接影响了整体蛋白的翻译水平。通过相关的分子生物学实验，证实了ERpeptide是通过与PABPC1结合调控翻译进程。

因此，本发明提供SEQ ID NO:1所示长链非编码RNA基因ASH1L-AS1或SEQ ID NO:2所示小肽ERpeptide作为诊断标记物在制备急性髓系白血病诊断产品中的应用。

本发明还提供用于检测SEQ ID NO:1所示长链非编码RNA基因ASH1L-AS1或SEQ IDNO:2所示小肽ERpeptide表达情况的试剂。

本发明还提供上述检测SEQ ID NO:1所示长链非编码RNA基因ASH1L-AS1或SEQ IDNO:2所示小肽ERpeptide表达情况的试剂在制备急性髓系白血病诊断产品中的应用。

本发明还提供一种急性髓系白血病诊断产品，包含检测小肽ERpeptide表达量的引物和抗体。所述产品通过检测待测样品中小肽ERpeptide的表达情况，从而进行急性髓系白血病的初步诊断。

优选地，所述产品为试剂、芯片或试剂盒等。

优选地，所述引物包含上游引物和下游引物，其序列依次如SEQ ID NO:3～4所示。通过提取待测样品组织RNA并采用qRT-PCR技术对ERpeptide进行特异性检测基因表达水平。

优选地，所述抗体的氨基酸序列为MADRAPRQPTSLGS。为利用内源性抗体分别在待测样品中，检测ERpeptide的蛋白表达水平。

优选地，SEQ ID NO:1所示长链非编码RNA基因ASH1L-AS1或SEQ ID NO:2所示小肽ERpeptide作为治疗靶点在筛选或制备用于治疗急性髓系白血病药物中的应用。

本发明还提供一种急性髓系白血病治疗药物，含有抑制SEQ ID NO:2所示小肽ERpeptide表达的抑制剂。

优选地，所述抑制剂为抑制小肽ERpeptide表达的siRNA或shRNA。

进一步优选地，所述siRNA选自siRNA-1或siRNA-2中的一种或多种，siRNA-1序列如SEQ ID NO:5～6所示，siRNA-2序列如SEQ ID NO:7～8所示。

进一步优选地，所述shRNA选自shRNA-1或shRNA-2中的一种或多种，shRNA-1序列如SEQ ID NO:9～10所示，shRNA-2序列如SEQ ID NO:11～12所示。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本专利提供了一种长链非编码RNA ASH1L-AS1编码的小肽ERpeptide。本发明研究表明，ERpeptide具有作为急性髓系白血病的分类器和指示治疗缓解的潜在临床作用，ASH1L-AS1/ERpeptide可以作为急性髓系白血病的诊断标记物；同时ASH1L-AS1/ERpeptide对急性髓系白血病的发生发展具有潜在调控作用，是治疗急性髓系白血病的潜在靶标，为急性白血病的药物研发提供了新的靶点也能为小肽在其他白血病者癌症中的作用机制和作为潜在治疗靶点提供积极的借鉴作用。

附图说明

图1为ASH1L-AS1编码小肽ERpeptide鉴定及定位。(A)质谱检测到的肽段结合ORFfinder分析表明ASH1L-AS1 ORF6可以编码小肽ERpeptide，大小为90个氨基酸。(B)ERpeptide翻译能力鉴定，分别构建HA标记的起始密码子ATG突变ATT的小肽和正常小肽。(C)小肽ERpeptide多克隆抗体制备的抗原表位。(D)利用制备的抗体检测HA标记的蛋白。(E)免疫荧光结果显示，小肽ERpeptide定位于内质网上。

图2为ASH1L-AS1/ERpeptide在急性髓系白血病表达。(A)qRT-PCR技术检测ASH1L-AS1/ERpeptide在急性髓系白血病初诊样品(n＝30)中的表达水平显著高于正常组(n＝5)和缓解组样品(n＝15)(**P<0.01；***P<0.001)。(B)western blot检测正常样品与急性髓系白血病初诊样品中的ERpeptide表达水平。(C)western blot检测急性髓系白血病初诊样品与缓解样品中的ERpeptide表达水平。

图3为ERpeptide在急性髓系白血病中敲低和表达效果。(A)qRT-PCR技术检测ERpeptide在THP1的敲低效果；星号表示通过t检验比较两组之间的差异具有统计学意义(*P<0.05；**P<0.01)。(B)构建稳定敲除ERpeptide细胞株，qRT-PCR和western blot技术分别检测ERpeptide的稳定敲低效果(**P<0.01)。(C)qRT-PCR和western blot技术分别检测过表达HA标记的起始密码子ATG突变ATT的小肽和正常的ERpeptide(***P<0.001)。

图4为ERpeptide而不是ASH1L-AS1调控急性髓系白血病的细胞学功能。(A)过表达HA标记的ERpeptide，显著抑制ATO诱导的MOLM-13凋亡；而过表达HA标记的起始密码子ATG突变ATT的小肽ERpeptideMut的细胞却不受影响(***P<0.001；NS,not significant)。(B)过表达HA标记的ERpeptide，显著抑制MOLM-13细胞分化；而过表达HA标记的起始密码子ATG突变ATT的小肽ERpeptideMut的细胞却不受影响(***P<0.001；NS,not significant)。

图5为敲低ERpeptide抑制急性髓系白血病细胞存活。(A)CCK-8技术检测敲低ERpeptide的情况下，急性髓系白血病细胞系的增殖水平显著降低。B)流式细胞术检测敲低ERpeptide的情况下，急性髓系白血病细胞系的凋亡水平显著增强。(C)流式细胞术检测敲低ERpeptide的情况下，急性髓系白血病细胞系的分化水平显著增强。本图中均采用三次重复的平均值±标准差，星号表示通过t检验比较两组之间的差异具有统计学意义(**P<0.01；***P<0.001)。

图6为ERpeptide调控急性髓系白血病的动物模型。(A)小鼠尾静脉模型显示，在接种敲低ERpeptide的MOLM-13组的器官：包括骨髓，血液，脾脏和肝脏中，细胞数量明显小于接种NC细胞组；注射PBS为空白对照；本图中均采用三次重复的平均值±标准差，星号表示通过t检验比较两组之间的差异具有统计学意义(**,p<0.01；***,p<0.001)。(B)利用生存曲线统计接种敲低ERpeptide的MOLM-13后，小鼠的生存周期；p值采用log-rank(Mantel-Cox)test统计方法(**,p<0.01)。

图7为ERpeptide调控整体蛋白的翻译水平。(A)SUnSET实验显示，敲低ERpeptide抑制嘌磷霉素插入，说明蛋白整体翻译水平降低。(B)多聚核糖体图谱技术表明，敲低ERpeptide抑制蛋白整体翻译水平。(C)免疫共沉淀实验证实，ERpeptide与翻译起始因子PABPC1紧密结合。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1 ASH1L-AS1编码小肽ERpeptide鉴定及定位

本发明发现了一个lncRNA ASH1L(ENST00000456633.1，NR_147963.1)编码的小肽ERpeptide(图1A)，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。为了进一步验证该小肽真实存在及定位，我们在ORF6的N端加了HA标签(图1B)，正向引物序列：5’-CTAGCTAGCATGTACCCTTATGACGTACCTGACTATGCTGCGGACCGAGCCCCACG-3’；反向引物序列：5’-CGGAATTCTATGTTTGCTTTGTTTTATTAACTCCTTGGAG-3’；同时还构建了突变起始密码子ATG为ATT的质粒作为对照，其正向引物序列：5’-CTAGCTAGCATTTACCCTTATGACGTACCTGACTATGCTGCGGACCGAGCCCCACG3-’；反向引物序列：5’-CGGAATTCTATGTTTGCTTTGTTTTATTAACTCCTTGGAG-3’。Western blot结果显示ASH1L-AS1的ORF6可以翻译小肽ERpeptide，同样在突变ATG为ATT的情况下，小肽则不能表达。与此同时，我们进一步鉴定小肽的内源表达情况。根据小肽特征肽段，我们定制了内源抗体(图1C)，western blot结果显示，敲低以及过表达小肽的情况下该抗体均能检测到小肽相应的趋势变化(图1D)，这些结果一方面说明了我们定制的抗体具有特异性，另一方面也说明了ASH1L-AS1编码的小肽在体内真实存在。最后，我们利用免疫荧光实验发现，小肽ERpeptide定位于内质网上(图1E)。

实施例2 ERpeptide表达分析及其临床价值评估

本发明发现一个在急性髓系白血病中特异性高表达，而在正常生理条件下及其他类型白血病低表达的小肽ERpeptide。为了进一步确定ERpeptide在急性髓系白血病中的表达特异性，我们重新从中山大学附属第一医院收集了一批病人骨髓样品进行检测分析，其中包括急性髓系白血病初诊样品30例，15例缓解白血病样品以及5例正常脐血样品。所有样品收集均受中山大学道德委会批准并获得病人知情同意。通过提取RNA并采用qRT-PCR技术对ERpeptide进行特异性检测。其用到的qRT-PCR的正向引物序列：5’-CGGTTGACCTGAGCCTACTTC-3’(SEQ ID NO:3)；反向引物序列：5’-CTGACTAGGCGACCGGCA-3’(SEQ ID NO:4)。实验发现，与正常脐血样品相比，ERpeptide在急性髓系白血病中显著高表达(p<0.001)(图2A)。而且，我们还发现，缓解样品具有更低的ERpeptide表达水平(p<0.01)，说明：ERpeptide的表达水平与疾病的发生度可能存在联系且可以指示急性髓系白血病的预后。随后，本发明利用内源性抗体分别在不同组样品中，检测ERpeptide的水平，得到与RNA一致的结果(图2B、2C)。这些结果预示着，ERpeptide具有潜在区分急性髓系白血病与正常样品的能力；且在一定程度上指示疾病预后。同时，高表达的ERpeptide是在白血病疾病中是一个危险因素，是治疗白血病的潜在靶标。

实施例3 ERpeptide在急性髓系白血病中的功能鉴定

为了解决ERpeptide参与急性髓系白血病调控的核心问题，我们拟进一步研究ERpeptide对急性髓系白血病的功能。我们首先鉴定该基因发挥功能的是小肽ERpeptide还是lncRNA ASH1L-AS1。首先设计过表达以及起始密码子ATG突变ATT的小肽ERpeptideMut的质粒，转染细胞后，过表达效果明显(图3C)。经过实验研究，本发明发现，过表达HA标记的ERpeptide，显著抑制ATO诱导的MOLM-13凋亡；而过表达HA标记的起始密码子ATG突变ATT的小肽ERpeptideMut的细胞却不受影响(图4A)；于此同时细胞分化实验显示，与阴性对照NC相比过表达ERpeptide可以抑制MOLM-13细胞的细胞分化；但是，过表达不产生蛋白形式只有RNA形式的ERpeptideMut对AML细胞分化没有任何影响(图4B)。以上结果说明，ERpeptide是通过蛋白形式发挥功能，而不是RNA形式。此外，通过siRNA干扰技术为ERpeptide分别设计2条不同的siRNA序列。siRNA-1的正向序列：5’-GGUUGACCUGAGCCUACUUdTdT-3’(SEQ IDNO:5)；siRNA-1的反向序列：5’-AAGUAGGCUCAGGUCAACCdTdT-3’(SEQ ID NO:6)；siRNA-2的正向序列：5’-GCGGAUCGAGGACUGCCUAdTdT-3’(SEQ ID NO:7)；siRNA-2的反向序列：3’-UAGGCAGUCCUCGAUCCGCdTdT-5’(SEQ ID NO:8)。在两个急性髓系白血病细胞系MOLM-13和NB4中，分别敲低ERpeptide，敲低效果见图3A。然后，利用CCK-8实验检测细胞的增殖情况。实验结果如图5A所示，在敲低ERpeptide的情况下，细胞增殖显著下降。这说明，ERpeptide在维持急性髓系白血病的增殖发挥着重要的功能。我们同样通过siRNA干扰技术敲低ERpeptide，利用流式细胞术检测细胞的凋亡情况。实验结果如图5B所示，在敲低ERpeptide的情况下，两种急性髓系白血病细胞系的早期凋亡和晚期凋亡率显著升高。我们进一步检测ERpeptide对急性髓系白血病细胞分化的影响，结果如图5C所示，急性髓系白血病细胞系的分化水平显著增强。因此，通过细胞增殖，凋亡及分化实验，我们推测ERpeptide对急性髓系白血病的发生发展具有潜在调控作用。

接下来，我们进一步验证了在成体水平验证ERpeptide对急性髓系白血病的调控作用。我们同样利用上述的siRNA序列，设计两条ERpeptide的shRNA序列：

shRNA-1的正向序列：

5’-GATCCGGTTGACCTGAGCCTACTTTTCAAGAGAAAGTAGGCTCAGGTCAACCTTTTTG-3’(SEQID NO:9)；

shRNA-1的反向序列：

5’-AATTCAAAAAGGTTGACCTGAGCCTACTTTTCAAGAGAAAGTAGGCTCAGGTCAACCG-3’(SEQID NO:10)；

shRNA-2的正向序列：

5’-GATCCGCGGATCGAGGACTGCCTATTCAAGAGATAGGCAGTCCTCGATCCGCTTTTTG-3’(SEQID NO:11)；

shRNA-2的反向序列：

5’-AATTCAAAAAGCGGATCGAGGACTGCCTATTCAAGAGATAGGCAGTCCTCGATCCGCG-3’(SEQID NO:12)。

利用System Biosciences公司表达载体pGreenPuro^TMshRNA Cloning andExpression Vector慢病毒表达系统构建ERpeptide的敲除的稳定表达株。通过嘌呤霉素筛选得到MOLM-13ERpeptide敲除细胞株，shRNA敲低效果见图3B。随后，将验证有效的稳定MOLM-13ERpeptide细胞株扩大培养，分别采用尾静脉注射接种到5周龄的NOD-SCID小鼠体内：共2组(sh-NC，sh-ERpeptide)，每组10只小鼠。注射PBS作为空白对照。动物实验经中山大学动物伦理委员会批准实施。接种三周后取每组小鼠的骨髓、外周血与器官，利用人类hCD45抗体进行人类白血病细胞表面标记，并进行检测。流式结果显示，PBS组中基本检测不到CD45阳性MOLM-13细胞，并且sh-ERpeptide组小鼠中，各个器官中的CD45阳性MOLM-13细胞均显著少于sh-NC组小鼠(图6A)。这些结果说明，ERpeptide具有促进急性髓系白血病的成瘤，并且影响这类白血病细胞的生长。随后，Log-rank(Mantel-Cox)Test生存曲线分析发现，敲低ERpeptide的小鼠组生存率高于对照组(图6B)。这说明ERpeptide可能是治疗急性髓系白血病的潜在靶标。

实施例4 ERpeptide结合PABPC1调控急性髓系白血病细胞蛋白翻译水平

无论从细胞水平还是体外小鼠实验，ERpeptide均显著的影响急性髓系白血病细胞的功能。本发明随后利用SUnSET实验发现，在NB4和MOLM-13细胞中敲低ERpeptide后，嘌呤霉素标记的肽段显著减少，说明ERpeptide的敲低可以抑制急性髓系白血病细胞的翻译水平(图7A)。本研究进一步采用polysome profiling实验精确测定多聚核糖体分布情况，并通过多聚核糖体分布的改变直接指示细胞内的翻译水平。在MOLM-13细胞中，相对于NC组，敲低ERpeptide组细胞的多聚核糖体减少、单体核糖体增加，意味着翻译水平的降低(图7B)，这个结果与SuNSET结果一致。这些结果说明，ERpeptide直接调控急性髓系白血病细胞的蛋白翻译水平。最后，本发明发现，利用免疫共沉淀技术鉴定，ERpeptide能够特异性的与蛋白翻译起始因子PABPC1互作(图7C)，这说明，ERpeptide通过与蛋白翻译起始因子PABPC1互作直接调控急性髓系白血病细胞蛋白翻译水平，从而影响细胞功能。

序列表

<110> 中山大学

<120> 小肽ERpeptide及其在急性髓系白血病中的应用

<141> 2020-12-25

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1232

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 1

gctctctcag agatccaggt ccgggagatg acagtggctc ccagaaagcc caggattcaa 60

tcgctgagag agtgcttagg cccgaatgcc ggcccaaatc gttctactca ccgtgtcgga 120

ggccgaggcc gaggccgaga gcgatgagag tgcagggaag tggggaagag ggggtggccg 180

ccaggctcct ccgcttccct gggtccacgg cggatccctc ccgcttgtca ggaggcggcc 240

agcgggggca ggagaggaag ggacgggccg agcgggtcgg ggcttgccgt ttgactggaa 300

ttgccagaat ggcggaccga gccccacgac aacctacctc cctgggctcc tcgccgcagc 360

gctgcggctc gcctccctct gctcctcctc ctccgccgga tcgcggcgag cggatcgagg 420

actgcctagc gcccctctgc ccaccggtgg ttggaggccg cggcggctgc gcgttgagtc 480

gtttcctgcc ggttgacctg agcctacttc gcagtagcag gaccgctgct gtggagctgg 540

tcgcaggcgg tgtgtgccgg tcgcctagtc aggagaacta gtcctcgact cacggtgagg 600

gaatggaccg acacgggtat tgtaccgctg agggaaagga gcgggactcc ggacctccag 660

gaggtaggga gtgaggccag taggaccggc gcgcctccgg ggggattcct cccgggcgtt 720

gagttgccaa cctgggaccc gaggaagatc ggcgtggtgg tgtgcttttt gttgttgtta 780

accctcctcg gatttctcga atttcacacc actgtccata tgcgatgatg tttgtttgcc 840

cttgacgcac ttactcatgg atggtacttc ttcagcctcg ttagacagcc tggtgatgga 900

ggatgaagaa accatgtgct tttcattcag ttctggactt agtctccctt ttcttccttc 960

agcaagttat ttttgttagt tccttatcaa aaagtgtaca taaaaattag gcaactccaa 1020

acatgcctcc agggttaatg tgtgaaataa taagataata tatgtaaagt ggaattagct 1080

cctaggcata gggaaagtgc agaatattgc cgtgttgtca tttacagttc tgttgatgtc 1140

gataacgttt gtgggtgtaa ttggtagtgt tctgtccctc caaggagtta ataaaacaaa 1200

gcaaacataa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 1232

<210> 2

<211> 90

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 2

Met Ala Asp Arg Ala Pro Arg Gln Pro Thr Ser Leu Gly Ser Ser Pro

1 5 10 15

Gln Arg Cys Gly Ser Pro Pro Ser Ala Pro Pro Pro Pro Pro Asp Arg

20 25 30

Gly Glu Arg Ile Glu Asp Cys Leu Ala Pro Leu Cys Pro Pro Val Val

35 40 45

Gly Gly Arg Gly Gly Cys Ala Leu Ser Arg Phe Leu Pro Val Asp Leu

50 55 60

Ser Leu Leu Arg Ser Ser Arg Thr Ala Ala Val Glu Leu Val Ala Gly

65 70 75 80

Gly Val Cys Arg Ser Pro Ser Gln Glu Asn

85 90

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 3

cggttgacct gagcctactt c 21

<210> 4

<211> 18

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 4

ctgactaggc gaccggca 18

<210> 5

<211> 21

<212> RNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 5

gguugaccug agccuacuud d 21

<210> 6

<211> 21

<212> RNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 6

aaguaggcuc aggucaaccd d 21

<210> 7

<211> 21

<212> RNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 7

gcggaucgag gacugccuad d 21

<210> 8

<211> 21

<212> RNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 8

uaggcagucc ucgauccgcd d 21

<210> 9

<211> 58

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 9

gatccggttg acctgagcct acttttcaag agaaagtagg ctcaggtcaa cctttttg 58

<210> 10

<211> 58

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 10

aattcaaaaa ggttgacctg agcctacttt tcaagagaaa gtaggctcag gtcaaccg 58

<210> 11

<211> 58

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 11

gatccgcgga tcgaggactg cctattcaag agataggcag tcctcgatcc gctttttg 58

<210> 12

<211> 58

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 12

aattcaaaaa gcggatcgag gactgcctat tcaagagata ggcagtcctc gatccgcg 58

Claims (7)

1.SEQ ID NO:1所示长链非编码RNA基因ASH1L-AS1或SEQ ID NO:2所示小肽ERpeptide作为诊断标记物在制备急性髓系白血病诊断产品中的应用。

2.检测SEQ ID NO:2所示小肽ERpeptide表达量的引物在制备急性髓系白血病诊断产品中的应用。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述引物包含上游引物和下游引物，其序列依次如SEQ ID NO:3～4所示。

4.SEQ ID NO:1所示长链非编码RNA基因ASH1L-AS1或SEQ ID NO:2所示小肽ERpeptide作为治疗靶点在筛选或制备用于治疗急性髓系白血病药物中的应用。

5.抑制SEQ ID NO:2所示小肽ERpeptide表达的抑制剂在制备用于治疗急性髓系白血病药物中的应用；所述抑制剂为抑制小肽ERpeptide表达的siRNA或shRNA。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述siRNA选自siRNA-1或siRNA-2中的一种或多种，siRNA-1序列如SEQ ID NO:5～6所示，siRNA-2序列如SEQ ID NO:7～8所示。

7.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述shRNA选自shRNA-1或shRNA-2中的一种或多种，shRNA-1序列如SEQ ID NO:9～10所示，shRNA-2序列如SEQ ID NO:11～12所示。

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