CN109536596B

CN109536596B - 影响脂肪代谢和儿童生长发育的基因slc22a18

Info

Publication number: CN109536596B
Application number: CN201710861969.1A
Authority: CN
Inventors: 乔荆
Original assignee: Shanghai Hongzhun Biomedical Technology Co ltd
Current assignee: Shanghai Hongzhun Biomedical Technology Co ltd
Priority date: 2017-09-21
Filing date: 2017-09-21
Publication date: 2022-06-07
Anticipated expiration: 2037-09-21
Also published as: CN109536596A

Abstract

本发明涉及影响脂肪代谢和小儿生长发育的基因SLC22A18。具体地，本发明提供了SLC22A18基因、mRNA、cDNA、或蛋白或其检测试剂的用途，用作检测脂代谢异常的标志物；和/或用于制备检测脂代谢异常的诊断试剂或试剂盒。SLC22A18基因与矮(瘦)小症及儿童肥胖关系密切，可作为发育异常、代谢异常的生物标志物，为小儿肥胖或矮小找到新的潜在的临床治疗靶点。

Description

影响脂肪代谢和儿童生长发育的基因SLC22A18

技术领域

本发明涉及遗传学领域，更具体地涉及影响脂肪代谢和儿童生长发育的基因SLC22A18。

背景技术

儿童生长发育一直是健康领域社会最关注的重心之一。2013年统计，上海北京等发达地区已达到21％的发胖率，即每5个儿童人就有一名小胖子的高发程度。儿童代谢异常，容易引起内分泌异常，最常见的临床表现包括甲状腺疾病、性早熟、身材矮小和肥胖症代谢综合征。我们主要关注和脂代谢异常相关的小儿生长发育异常，包括身材矮(瘦)小症和肥胖症。

导致矮(瘦)小症的病因复杂多样，病因构成比大致相仿,目前认为的前5位病因为：生长激素缺乏症、体质性青春期延迟、家族性矮小、宫内发育迟缓、甲状腺功能减低。一些矮小症还具有遗传学方面的改变,多数为基因突变导致,如：生长激素缺乏症和软骨发育不全,也有染色体畸形,如：先天性卵巢发育不全。原因复杂多变，治疗起来也就很费力，目前最常用的就是皮下注射生长激素，但是生长激素的注射也需要很多临床指征。目前最常用的就是皮下注射生长激素，但是生长激素的注射也需要很多临床指征。除此之外，目前尚无其他有效的临床治疗措施，更缺乏早期精准分型诊断和预警手段。

“小胖墩“已成为儿科常见病，肥胖儿童青少年不仅易患呼吸系统、循环系统等疾病，原发性高血压、脂代谢异常、糖尿病的检出率高于体重正常的儿童青少年，且随着超重程度增加，检出率呈上升趋势。目前临床主要应对和治疗措施包括戒食、药物、运动及外科手术，但是，由于儿童处在生长发育期，人生特定的阶段决定了16岁下下的儿童不能进行戒食、药物、剧烈运动及外科手术。因此，儿童肥胖症的控制，实际上我们束手无策。

进入本世纪以来，与脂代谢以及肥胖相关的高血脂、糖尿病等慢性病呈现低龄化和高发病率的趋势，肥胖症每年会消耗社会2万亿资产，而且肥胖人数一直在激增，有超过三分之一的美国、加拿大人都是肥胖个体，且其背后还隐藏着一个潜在的高危人群-肥胖儿童。因此，迫切需要的是了解过度肥胖的生理和病理机制，掌握小儿发育过程中脂代谢的调控通路和关键调控基因，筛查影响小儿发育、代谢的基因突变或异常，以期达到小儿发育异常或者脂代谢异常的基因诊断标签和治疗靶点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种影响脂肪代谢和儿童生长发育的基因SLC22A18。

本发明目的在于筛查与矮(瘦)小症相关的关键基因，达到预警及靶向治疗。发明人发现，与脂代谢异常密切相关的基因SLC22A18，与矮小症及儿童肥胖关系密切，可以作为儿童生长发育及脂代谢异常预警标志物，并具有潜力发展为脂代谢异常临床治疗靶点。

具体的，本发明提供了以下内容：

i)SLC22A18基因与脂肪代谢异常疾病的定量与定性关系，进而阐明了脂肪内脏蓄积的机理及临床意义；

ii)SLC22A18基因在儿童生长发育矮(瘦)小症的形成中的发生、发展作用；

iii)SLC22A18基因有望成为脂代谢异常疾病预防、早期诊断及精准治疗的目的基因。

在本发明的第一方面，提供了一种SLC22A18基因、mRNA、cDNA、或蛋白或其检测试剂的用途，(i)用作检测脂代谢异常的标志物；和/或(ii)用于制备检测脂代谢异常的诊断试剂或试剂盒。

在另一优选例中，所述诊断试剂包括抗体、引物、探针、测序文库、核酸芯片(如DNA芯片)或蛋白质芯片。

在另一优选例中，所述的蛋白包括全长蛋白或蛋白片段。

在另一优选例中，所述的SLC22A18基因、mRNA、cDNA、或蛋白来源于哺乳动物，较佳地来源于啮齿动物(如小鼠、大鼠)、灵长动物和人。

在另一优选例中，所述SLC22A18基因的登录号为NG_011512.1。

在另一优选例中，所述SLC22A18mRNA的登录号为NM_001315501.1。

在另一优选例中，所述SLC22A18蛋白的登录号为NP_001302430.1。

在另一优选例中，所述检测是体液样本检测。

在另一优选例中，所述检测是血液样本检测和/或血清样本检测。

在另一优选例中，所述检测是外周血单核巨噬细胞的检测。

在另一优选例中，所述检测试剂包括SLC22A18的特异性抗体、SLC22A18的特异性结合分子、特异性扩增引物、探针或芯片。

在另一优选例中，所述的SLC22A18蛋白或其特异性抗体或特异性结合分子偶联有或带有可检测标记。

在另一优选例中，所述可检测标记选自下组：生色团、化学发光基团、荧光团、同位素或酶。

在另一优选例中，所述SLC22A18的特异性抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。

在另一优选例中，所述的检测脂代谢异常指检测脂代谢异常是否已发生，和/或判断发生脂代谢异常的可能性(易感性)大小。

在另一优选例中，所述判断包括预先判断(预测)。

在另一优选例中，所述的脂代谢异常包括脂代谢异常相关的生长发育异常，优选地为脂代谢异常相关的小儿生长发育异常。

在另一优选例中，所述的生长发育异常选自下组：

甲状腺疾病、性早熟、身材矮(瘦)小症、肥胖症、或其组合。

在另一优选例中，所述的脂代谢异常包括选自下组疾病：高血脂、脂肪肝、或其组合。

在另一优选例中，所述的脂代谢异常包括小儿脂代谢异常和成人脂代谢异常。

在本发明的第二方面，提供了一种用于检测脂代谢异常的诊断试剂盒，所述的试剂盒含有一容器，所述容器中含有检测SLC22A18基因、mRNA、cDNA、或蛋白的检测试剂；以及标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于检测脂代谢异常。

在另一优选例中，所述的检测SLC22A18基因、mRNA、cDNA、或蛋白的检测试剂包括：

(a)抗SLC22A18蛋白的特异性抗体；和/或

(b)特异性扩增SLC22A18的mRNA或cDNA的特异性引物。

在另一优选例中，所述的特异性引物如SEQ ID NO.:1和/或SEQ ID NO.:2所示。

在另一优选例中，所述检测是外周血单核巨噬细胞的检测。

在另一优选例中，所述的标签或说明书中注明以下内容：

当检测对象(subject)外周血单核巨噬细胞SLC22A18的表达阳性率≤85％，则有脂肪代谢异常趋势(临界值)，阳性率≤50％时，则提示该检测对象存在脂代谢(显著)异常。

在另一优选例中，所述的检测对象为人。

在本发明的第三方面，提供了一种检测脂代谢异常的方法，所述方法包括：

a)提供来自检测对象的测试样品；

b)检测测试样品中SLC22A18蛋白的表达情况；和

c)将步骤b)中所测定的SLC22A18蛋白的表达情况与对照进行比较。

在另一优选例中，所述的受试者为人或非人哺乳动物。

在另一优选例中，所述测试样品为血液样本和/或血清样本。

在另一优选例中，所述方法为非诊断和非治疗性的。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示分子学实验结果，SLC22A18在mRNA水平上，患者外周血中表达量明显低于正常人，且具有家族倾向。

图2显示分子学实验结果，SLC22A18在mRNA水平上，患者外周血中表达量的降低具有家族遗传性。

图3显示流式细胞仪荧光检测结果，患者SLC22A18基因在外周血B细胞表达丰富，与正常人没有显著性区别。

图4显示流式细胞仪荧光检测结果，患者SLC22A18基因在外周血T细胞表达极低水平，与正常人没有显著性区别。

图5显示流式细胞仪荧光检测结果，患者SLC22A18在外周血单核巨噬细胞表达明显低于正常人。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入地研究，首次意外地发现一种影响脂肪代谢和小儿生长发育的基因SLC22A18。通过对100多例临床代谢综合征病人血液中SLC22A18基因的研究，发现病人SLC22A18mRNA、蛋白表达与正常人比较均显著减低表达。因此，诊断血液SLC22A18的表达量可作为发育异常、代谢异常的生物标志物，为小儿肥胖或矮小找到新的潜在的临床治疗靶点。

具体地，本发明从基因组角度，找到一个新的与小儿生长发育异常、矮小症和儿童胖瘦密切相关的基因SLC22A18，并且研究发现：

(1)基因SLC22A18与小儿发育异常有关，可导致BMI指数升高；

(2)基因SLC22A18与小儿脂代谢异常有关，包括游离脂肪酸升高，成年后肥胖体质及脂肪肝

(3)基因SLC22A18与小儿矮小症有关；

(4)基因SLC22A18与小儿胖瘦有关；

(5)SLC22A18在mRNA水平上，患者外周血中表达量明显低于正常人，且具有家族遗传倾向；

(6)分子学实验证明，SLC22A18在mRNA水平上，患者外周血中表达量的降低具有家族遗传性；

(7)流式细胞仪荧光检测实验证明，患者SLC22A18基因在外周血B细胞表达丰富，与正常人没有显著性区别；

(8)流式细胞仪荧光检测实验证明，患者SLC22A18基因在外周血T细胞表达极低水平，与正常人没有显著性区别；

(9)流式细胞仪荧光检测实验证明，患者SLC22A18在外周血单核巨噬细胞表达明显低于正常人；

(10)基因SLC22A18检测可作为小儿发育异常及脂代谢异常的生物标志物，单独或者联合用于相关疾病的诊断、预警、预后等；

(11)基因SLC22A18可作为小儿发育异常及脂代谢异常的治疗靶点，单独或者联合用于相关疾病的治疗等。

样品

本文中使用的术语“样品”或“样本”是指与受试者特异地相关联的材料，从其中可以确定、计算或推断出与受试者有关的特定信息。样品可以全部或部分由来自受试者的生物材料构成。样品也可以是以某种方式与受试者接触过的材料，这种接触方式使得对样品进行的测试可以提供与受试者有关的信息。样品也可以是已经与其它材料接触过的材料，这种其它材料不是受试者的，但是能够使第一材料随后被测试以确定与受试者有关的信息，例如样品可以是探针或解剖刀的清洗液。样品可以为接触受试者之外的生物材料源，只要本技术领域的专业人员仍然能够从样品确定与受试者有关的信息就行。

表达

如本文所用，术语“表达”包括mRNA从基因或基因部分的产生，并且包括由RNA或基因或基因部分所编码的蛋白质的产生，还包括与表达相关的检测物质的出现。例如，cDNA，结合配体(如抗体)与基因或其它寡核苷酸、蛋白质或蛋白质片段的结合以及结合配体的显色部分都包括在术语“表达”的范围内。因此，在免疫印迹如western印迹上半点密度的增加也处于以生物学分子为基础的术语“表达”的范围内。

参比值

如本文所用，术语“参比值”是指当与分析结果相比时与特定结果统计学相关的值。在优选的实施方案中，参比值是根据对比较SLC22A18基因的表达与已知的临床结果的研究进行的统计学分析来确定的。在本文的实施例部分中显示了一些这样的研究。但是，来自文献的研究和本文公开的方法的用户经验也可用于生产或调整参比值。参比值也可以通过考虑与患者的医疗史、遗传学、年龄和其它因素特别相关的情况和结果来确定。

在本发明中，所述参比值指截断值(cut-off值)，也就是血液中SLC22A18基因相对表达量，以荧光定量PCR扩增的ΔCt值(GAPDH作为内参)来衡量，为6-11，优选9。

SLC22A18蛋白和多核苷酸

在本发明中，术语“本发明蛋白”、“SLC22A18蛋白”、“SLC22A18多肽”可互换使用，都指具有SLC22A18氨基酸序列的蛋白或多肽。它们包括含有或不含起始甲硫氨酸的SLC22A18蛋白。此外，该术语还包括全长的SLC22A18及其片段。本发明所指的SLC22A18蛋白包括其完整的氨基酸序列、其分泌蛋白、其突变体以及其功能上活性的片段。

SLC22A18是近年来发现的一个新的候选抑癌基因，它位于人染色体11pl5.5，属父系印记基因。cDNA全长1.5kb，人的SLC22A18蛋白分子量43kD，由509个氨基酸组成(NM_001315501.1)，编码跨膜转运体相似蛋白，影响药物敏感性、细胞代谢和生长。SLC22A18编码的蛋白产物有10个跨膜区域，这种蛋白质可作为有机阳离子转运，承担着人们尚不清楚的体内物质运输作用。

在本发明中，术语“SLC22A18基因”、“SLC22A18多核苷酸”可互换使用，都指具有SLC22A18核苷酸序列的核酸序列。

人SLC22A18基因的基因组全长25526bp(NCBI GenBank登录号为NG_011512)，其转录产物mRNA序列全长1776bp(NCBI GenBank登录号为NM_001315501.1)。

需理解的是，当编码相同的氨基酸时，密码子中核苷酸的取代是可接受的。另外需理解的是，由核苷酸取代而产生保守的氨基酸取代时，核苷酸的变换也是可被接受的。

在得到了SLC22A18的氨基酸片段的情况下，可根据其构建出编码它的核酸序列，并且根据核苷酸序列来设计特异性探针。核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的SLC22A18核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。

目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码本发明蛋白(或其片段，衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子(如载体)和细胞中。

通过常规的重组DNA技术，可利用本发明的多核苷酸序列可用来表达或生产重组的SLC22A18多肽。一般来说有以下步骤：

(1).用本发明的编码SLC22A18多肽的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞；

(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。

本发明中，SLC22A18多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。

本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含SLC22A18编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。

此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。

包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；昆虫细胞；动物细胞等。

用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl₂法处理，所用的步骤在本领域众所周知。另一种方法是使用MgCl₂。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。

获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

在上面的方法中的重组多肽可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

特异性抗体

在本发明中，术语“本发明抗体”和“抗SLC22A18的特异性抗体”可互换使用。

本发明还包括对人SLC22A18多肽具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于人SLC22A18基因产物或片段。较佳地，指那些能与人SLC22A18基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本发明中抗体包括那些能够结合并抑制人SLC22A18蛋白的分子，也包括那些并不影响人SLC22A18蛋白功能的抗体。本发明还包括那些能与修饰或未经修饰形式的人SLC22A18基因产物结合的抗体。

本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab’或(Fab)₂片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子(Ladner等人，美国专利No.4,946,778)；或嵌合抗体，如具有鼠抗体结合特异性但仍保留来自人的抗体部分的抗体。

本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的人SLC22A18基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的，表达人SLC22A18蛋白或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备(见Kohler等人,Nature 256；495,1975；Kohler等人,Eur.J.Immunol.6：511,1976；Kohler等人,Eur.J.Immunol.6：292,1976；Hammerling等人,In Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas,Elsevier,N.Y.,1981)。本发明的抗体包括能阻断人SLC22A18蛋白功能的抗体以及不影响人SLC22A18蛋白功能的抗体。本发明的各类抗体可以利用人SLC22A18基因产物的片段或功能区，通过常规免疫技术获得。这些片段或功能区可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。与人SLC22A18基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞(例如E.Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生；与翻译后修饰形式结合的抗体(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核细胞(例如酵母或昆虫细胞)中产生的基因产物来免疫动物而获得。

检测方法和检测试剂盒

基于SLC22A18与脂代谢异常的相关性，即SLC22A18在MRNA水平上，脂代谢异常人群外周血中的表达量明显低于正常人群，且具有家族遗传倾向，并且SLC22A18在脂代谢异常人群外周血单核巨噬细胞的表达明显低于正常人，SLC22A18可以作为脂代谢异常的一种诊断标志物。

本发明还提供了一种检测脂代谢异常的方法和检测试剂盒，所述试剂盒含有检测SLC22A18基因、mRNA、cDNA、或蛋白的检测试剂；以及标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于检测脂代谢异常。

本发明涉及定量和定位检测人SLC22A18蛋白水平或mRNA水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的。试验中所检测的人SLC22A18蛋白水平，可以用于诊断(包括辅助诊断)脂代谢异常。

一种检测样品中是否存在SLC22A18蛋白的方法是利用SLC22A18蛋白的特异性抗体进行检测，它包括：将样品与SLC22A18蛋白特异性抗体接触；观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在SLC22A18蛋白。

SLC22A18蛋白或其多核苷酸可用于SLC22A18蛋白相关疾病的诊断和治疗。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列或DNA芯片上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。抗SLC22A18的抗体可以固定在蛋白质芯片上，用于检测样品中的SLC22A18蛋白。

本发明的主要优点

本技术从基因组角度，找到一个新的与小儿生长发育异常、矮(瘦)小症和小儿肥胖密切相关的基因SLC22A18，可以独立或者联合作为儿童脂代谢异常诊断、预警或预后的生物标志物，并具有潜力发展为相关疾病临床治疗靶点。与现有临床应用手段相比，其具有如下优点：

(1)疾病谱广泛：包括了儿童生长发育异常、内分泌异常、脂代谢异常、小儿矮小症和小儿肥胖，成人脂肪肝、高血脂、肥胖症等疾病；

(2)检测手段多样，快捷方便：可利用患儿外周血，通过流式细胞分析仪检测其在单核细胞的表达；可利用荧光定量PCR仪，检测其在外周血的总体表达；可利用DNA测序，检测其基因完整性或者可能的突变点。

(3)生物标志物：可单独或者联合用于相关疾病的诊断、预警、预后等；

(4)治疗靶点：可作为小儿发育异常及脂代谢异常等疾病的治疗靶点，单独或者联合用于相关疾病的靶向治疗。

(5)成人方面有望成为预防体内脂肪蓄积，脂肪肝早期诊断及精准治疗的基因原创试剂或和药物，并实现医学转化，开发出一系列与其相关产品。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

实施例1

SLC22A18全血mRNA表达量的检测

在本发明的实验方案中，首先发现一个临床症状的现象：矮小症患者幼年时期瘦小，BMI较低，血脂检测中发现游离脂肪酸均高于正常范围；中年时期出现肥胖症状，伴随着严重的脂肪肝。

本实施例是对幼年时期瘦小，BMI较低的矮小症患者和BMI正常对照的mRNA进行检测，分为正常对照组和瘦小组以及正常对照和瘦小患者家庭两种分组方式进行比较。

分子学实验中，使用北京百泰克血液(液体样本)总RNA快速提取试剂盒(Cat：RP4002)提取全血RNA，取1ugRNA进行一次逆转录，逆转录使用Takara公司的PrimeScript^TMRT Reagent kit试剂盒(Cat#RR037A)，得到的cDNA使用Takara公司的SYBR Premix ExTaq^TM(Tli RNaseH Plus)试剂盒(Cat#RR420A)进行荧光定量PCR实验，试验中使用人GAPDH作为对照内参，SLC22A18特异性引物的序列为：

前引物5’AAGC AGTTT CTGTT CTGCC TG 3’(SEQ ID NO.:1)，

后引物5’TGACT GCTGT CCCTG CTGAAG 3’(SEQ ID NO.:2)。

结果证明，在这些具有矮小症临床症状的家族中，相较于正常人，基因SLC22A18在矮小症全血mRNA表达量较低(图1)，并且呈现家族遗传性(图2)。

实施例2

SLC22A18+阳性细胞的免疫荧光检测

对外周血细胞进行检测，分为正常对照组和矮小症组以及正常对照和矮小症患者家庭两种分组方式进行比较。

免疫荧光试验中，首先使用特异性抗体对血细胞进行分类标记:CD19+标记B细胞，CD11b+标记单核巨噬细胞，CD3+标记T细胞；分类后再分别标记SLC22A18+细胞，检测其阳性率。抗体均使用Abcam公司抗体。利用流式细胞仪进行荧光检测。

检测结果表明，SLC22A18在全血中的B细胞上表达丰富(图3)；T细胞表达量很低(图4)；在单核巨噬细胞表达明显下降(图5)。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

序列表

<110> 上海鸿准生物医药科技有限公司

<120> 影响脂肪代谢和儿童生长发育的基因SLC22A18

<130> P2017-1401

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

aagcagtttc tgttctgcct g 21

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

tgactgctgt ccctgctgaa g 21

Claims

1.一种外周血单核巨噬细胞中SLC22A18 mRNA、cDNA或蛋白的检测试剂在制备诊断脂代谢异常相关的小儿生长发育异常的诊断试剂或试剂盒中的用途，其中所述脂代谢异常相关的小儿生长发育异常为低BMI的身材矮小症或瘦小症；并且所述诊断试剂或试剂盒用于检测外周血单核巨噬细胞中的SLC22A18mRNA、cDNA或蛋白的水平。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测试剂包括抗体、引物、探针、测序文库、核酸芯片或蛋白质芯片。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的蛋白包括全长蛋白或蛋白片段。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测试剂包括SLC22A18mRNA或cDNA特异性扩增引物、探针或芯片。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测是SLC22A18+阳性细胞的外周血单核巨噬细胞的检测。

6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测试剂包括SLC22A18蛋白的特异性抗体。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的SLC22A18蛋白的特异性抗体偶联有可检测标记。

8.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的诊断脂代谢异常指检测脂代谢异常是否已发生，或判断发生脂代谢异常的可能性大小。

9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述判断包括预先判断。

10.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的诊断试剂或试剂盒包括标签或说明书，所述的标签或说明书中注明以下内容：

当检测对象外周血单核巨噬细胞SLC22A18的表达阳性率≤50％时，则提示该检测对象存在脂代谢显著异常。

11.如权利要求10所述的用途，其特征在于，所述的检测试剂为特异性扩增SLC22A18的mRNA或cDNA的特异性引物，所述的特异性引物如SEQ ID NO.:1和SEQ ID NO.:2所示。