CN112654363A - 组织特异性wnt信号增强分子和其用途 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了组织特异性Wnt信号增强分子和使用这些分子增加肝组织中的Wnt信号传导的相关方法。

Description

组织特异性WNT信号增强分子和其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年7月9日提交的美国临时申请第62/695,509号、于2018年11月20日提交的美国临时申请第62/770,026号和于2019年3月22日提交的美国临时申请第62/822,731号的优先权，所述美国临时申请中的每个美国临时申请通过全文引用的方式并入本文。
关于序列表的声明
与本申请相关的序列表以文本格式提供以代替纸质副本并且在此通过引用并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称为SRZN_010_03WO_ST25.txt。文本文件为661KB、创建于2019年7月9日并且通过EFS-Web以电子方式提交。
技术领域
本公开涉及组织特异性Wnt信号增强分子(例如，融合蛋白)以及使用组织特异性Wnt信号增强分子介导E3连接酶、ZNRF3/RNF43的组织特异性内化或螯合从而以组织特异性方式稳定Wnt受体并增强Wnt信号传导并治疗和预防各种疾病和病症的相关方法，所述组织特异性Wnt信号增强分子包括结合E3泛素连接酶、ZNRF3或RNF43的结构域和组织特异性细胞表面受体结合结构域。
背景技术
Wnt(“无翅相关整合位点”或“无翅和Int-1”或“无翅-Int”)配体和其信号在控制许多基本器官和组织(包含骨、肝、皮肤、胃、肠、肾、中枢神经系统、乳腺、口腔粘膜、味蕾、卵巢、耳蜗和许多其它组织)的发育、内稳态和再生中发挥了关键作用(例如，由Clevers、Loh和Nusse,2014；346:1248012综述)。对Wnt信号传导通路的调节具有治疗变性疾病和组织损伤的潜力。为了实现此目标，期望开发以组织特异性或细胞类型特异性的方式调节Wnt信号传导活性的策略以避免不希望的效果。将调节Wnt信号传导作为治疗的挑战之一是存在多种Wnt配体和Wnt受体、卷曲蛋白1-10(Fzd1-10)，其中许多组织表达多种Fzd和重叠的Fzd。典型Wnt信号还涉及作为共受体的低密度脂蛋白(LDL)受体相关蛋白5(LRP5)或低密度脂蛋白(LDL)受体相关蛋白6(LRP6)，所述共受体在除了Fzd之外的各种组织中广泛表达。
R-脊椎蛋白1-4是扩增Wnt信号的配体家族。R-脊椎蛋白中的每一个通过受体复合物起作用，所述受体复合物在一端含有锌指和环指3(ZNRF3)或环指蛋白43(RNF43)并且在另一端含有含富亮氨酸重复的G蛋白偶联受体4-6(LGR4-6)(例如，由Knight和Hankenson,2014,《基质生物学(Matrix Biology)》；37:157-161综述)。R-脊椎蛋白也可能通过另外的作用机制发挥作用。ZNRF3和RNF43是两种膜结合的E3连接酶，其特异性地靶向Wnt受体(Fzd1-10和LRP5或LRP6)以进行降解。R-脊椎蛋白与ZNRF3/RNF43和LGR4-6的结合使三元复合物清除或螯合，所述三元复合物从Wnt受体中移除E3连接酶并稳定Wnt受体，从而导致Wnt信号增强。每个R-脊椎蛋白含有两个弗林蛋白酶结构域(1和2)，其中弗林蛋白酶结构域1与ZNRF3/RNF43结合，并且弗林蛋白酶结构域2与LGR4-6结合。含有弗林蛋白酶结构域1和2的R-脊椎蛋白的片段足以使Wnt信号传导扩增。虽然R-脊椎蛋白效果依赖于Wnt信号，但由于LGR4-6和ZNRF3/RNF43两者在各种组织中广泛表达，因此R-脊椎蛋白的效果是非组织特异性的。
本领域明显需要用于治疗和预防具体疾病和病症的组织特异性Wnt信号增强分子。本发明通过提供可用于以组织特异性方式增强Wnt活性的组合物和方法来解决此需要。
发明内容
本发明涉及组织特异性Wnt信号增强分子以及其例如在增加靶组织中的Wnt信号传导并治疗将会受益于增加的Wnt信号传导的疾病和病状方面的用途。在特定实施例中，所述组织为肝。
在一个实施例中，本发明提供了一种组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐，所述组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐包括第一结构域和第二结构域，所述第一结构域特异性地结合选自ZNRF3和RNF43的一种或多种跨膜E3泛素连接酶，所述第二结构域特异性地结合组织特异性细胞表面分子，其中所述分子增加组织中的Wnt信号传导。在某些实施例中，所述Wnt信号增强分子是肝特异性的，并且所述第二结构域特异性地结合肝特异性细胞表面分子并增加肝或肝细胞中的Wnt信号传导。在各种实施例中，所述第一结构域和所述第二结构域中的任一者或两者是多肽、抗体、小分子、天然配体、非天然配体或其变体。
在Wnt信号增强分子的特定实施例中，所述第一结构域包括第一多肽序列和/或所述第二结构域包括第二多肽序列。在特定实施例中，所述分子是包括所述第一多肽序列和所述第二多肽序列的融合蛋白。在某些实施例中，所述第一多肽序列包括R-脊椎蛋白序列或其片段或者变体。在特定实施例中，所述R-脊椎蛋白是R-脊椎蛋白-1、R-脊椎蛋白-2、R-脊椎蛋白-3或R-脊椎蛋白-4，例如，人R-脊椎蛋白-1-4。在某些实施例中，所述第一多肽序列包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或其片段或者变体。在特定实施例中，所述第一多肽序列是野生型R-脊椎蛋白衍生的序列或经过修饰的序列。另外，所述第一多肽序列与LGR4-6的结合相比于对应的天然全长R-脊椎蛋白可以有所增加、类似或有所降低。在一些实施例中，所述R-脊椎蛋白或所述R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1与存在于SEQ ID NO:1-4中的R-脊椎蛋白或R-脊椎蛋白弗林蛋白酶1结构域中的任何一个具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的同一性。在某些实施例中，所述第一多肽是特异性地结合ZNRF3和/或RNF43的抗体或其抗原结合片段。在特定实施例中，所述第一多肽是抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：a)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或b)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。在特定实施例中，所述第一多肽是抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括表2B或SEQ ID NO:78-150或165-170中所示的纳米抗体、VH或VL序列或其片段或者变体。
在某些实施例中，所述第二多肽序列是多肽、抗体或其片段或者变体或配体或其片段或者变体。在某些实施例中，第二多肽是特异性地结合ASGR1和/或ASGR2的抗体或其抗原结合片段。在特定实施例中，第二多肽是抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：a)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或b)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。在特定实施例中，所述第一多肽是抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括表3B或SEQ ID NO:47-77、151-154、171-179或274-305中所示的纳米抗体、VH或VL序列或其片段或者变体。
在本文公开的组织特异性Wnt信号增强分子的某些说明性实施例中：组织是骨组织，并且细胞表面受体是甲状旁腺激素受体1(PTH1R)；组织是肝组织，并且细胞表面受体是脱唾液酸糖蛋白受体1(ASGR1)、脱唾液酸糖蛋白受体2(ASGR2)、转铁蛋白受体2(TFR2)或溶质载体家族10成员1(SLC10A1)；或者组织是口腔粘膜组织，并且细胞表面受体是含LY6/PLAUR结构域的蛋白3(LYPD3)或桥粒芯糖蛋白3(DSG3)。在特定实施例中，所述第二多肽是抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括表3C或SEQ ID NO:180-186中所示的纳米抗体、VH或VL序列或其片段或者变体。
在本文公开的组织特异性Wnt信号增强分子的某些说明性实施例中：细胞表面分子是PTH1，并且所述第二多肽序列特异性地结合PTH1R；细胞表面分子是ASGR1，并且所述第二多肽序列特异性地结合ASGR1；细胞表面分子是ASGR2，并且所述第二多肽序列特异性地结合ASGR2；细胞表面分子是SLC10A1，并且所述第二多肽序列特异性地结合SLC10A1；细胞表面分子是TFR2，并且所述第二多肽序列特异性地结合TFR2；细胞表面分子是LYPD3，并且所述第二多肽序列特异性地结合LYPD3；或者细胞表面分子是DSG3，并且所述第二多肽序列特异性地结合DSG3，其中所述第二多肽是细胞表面分子的抗体或其片段、小分子或配体或其片段或者变体。
在本文描述的组织特异性Wnt信号增强分子的特定实施例中，所述第一结构域和所述第二结构域通过接头部分连接。在某些实施例中，所述接头部分是肽基接头序列。在特定实施例中，所述肽基接头序列包括选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸：甘氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸和丙氨酸。
在特定实施例中，本文描述的组织特异性Wnt信号增强分子由单一多肽(例如，包括第一结构域和第二结构域的融合蛋白)组成。在某些实施例中，本文描述的组织特异性Wnt信号增强分子包括两种或更多种多肽，如包括两种或更多种融合蛋白的二聚体或多聚体，所述两种或更多种融合蛋白各自包括第一结构域和第二结构域，其中所述两种或更多种多肽例如通过接头部分或经由所述两种或更多种多肽中的每种多肽的氨基酸残基之间的键例如半胱氨酸残基之间的分子间二硫键来连接。在特定实施例中，本文描述的组织特异性Wnt信号增强分子包括两个或更多个多肽序列。例如，组织特异性Wnt信号增强分子可以包括构成第一结构域或第二结构域的抗体重链和抗体轻链(或其抗原结合片段)，其中另一个结构域(即，第二结构域或第一结构域)作为融合蛋白或通过接头部分与所述抗体重链或所述抗体轻链连接。在特定实施例中，另一个结构域与重链的N端、重链的C端、轻链的N端或轻链的C端连接。这种结构在本文中可以称为附加IgG支架或格式。
在相关实施例中，本发明包含一种核酸序列，所述核酸序列针对本文公开的组织特异性Wnt信号增强融合蛋白或其亚单位，例如具有附加的或融合的第一结构域或第二结构域的抗体重链或抗体轻链进行编码。在进一步相关的实施例中，本发明包含一种载体，所述载体包括所述核酸序列。在一些实施例中，所述载体是表达载体，所述表达载体包括例如以适合于在细菌细胞或真核细胞中表达的方式操作性地连接到所述核酸序列的启动子序列。在另一个实施例中，所述载体被工程化成用于体外翻译和修饰功能性mRNA。在进一步相关的实施例中，本发明包含一种宿主细胞，所述宿主细胞包括所述载体。在又另一个进一步相关的实施例中，本发明包含一种用于产生本文描述的组织特异性Wnt信号增强融合蛋白的方法，所述方法包括在融合多肽由所述表达载体表达的条件下培养所述宿主细胞。在一些实施例中，所述方法进一步包括分离产生的融合多肽的步骤。
在另一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：本文描述的组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐；以及药学上可接受的稀释剂、佐剂或载体。
在另一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：多核苷酸，所述多核苷酸包括对本文描述的组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐进行编码的核酸序列；以及药学上可接受的稀释剂、佐剂或载体。在特定实施例中，所述核酸序列包括DNA或mRNA，任选地经过修饰的mRNA。
在另一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：载体，所述载体包括对组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐进行编码的核酸序列；以及药学上可接受的稀释剂、佐剂或载体。在特定实施例中，所述载体包括操作性地连接到所述核酸序列的启动子，所述启动子驱动所述组织特异性Wnt信号增强分子的表达。在某些实施例中，所述载体是表达载体或病毒载体。
在另一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：本文描述的组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐；Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂或其药学上可接受的盐；以及药学上可接受的稀释剂、佐剂或载体。
在另一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：多核苷酸，所述多核苷酸包括对本文描述的组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐进行编码的核酸序列；多核苷酸，所述多核苷酸包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂或其药学上可接受的盐进行编码的核酸序列；以及药学上可接受的稀释剂、佐剂或载体。在特定实施例中，所述核酸序列包括DNA或mRNA，任选地经过修饰的mRNA。
在另一个实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：载体，所述载体包括对组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐进行编码的核酸序列；载体，所述载体包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂或其药学上可接受的盐进行编码的核酸序列；以及药学上可接受的稀释剂、佐剂或载体。在特定实施例中，所述载体包括操作性地连接到所述核酸序列的启动子，所述启动子驱动所述组织特异性Wnt信号增强分子的表达。在某些实施例中，所述载体是表达载体或病毒载体。
在另外的实施例中，本发明包含一种用于增加靶组织中的Wnt信号传导的方法，所述方法包括使所述靶组织与本文描述的组织特异性Wnt信号增强分子接触，其中所述第二结构域特异性地结合所述靶组织上的细胞特异性表面分子，并且其中所述组织特异性Wnt信号增强分子结合所述靶组织并螯合选自ZNRF3和RNF43的一种或多种跨膜E3泛素连接酶或增加其在所述靶组织中的内吞作用。
在本文描述的方法中的任何一种方法的某些实施例中：所述组织是骨组织，并且细胞表面分子是PTH1R；所述组织是肝组织，并且细胞表面分子是ASGR1、ASGR2、TFR2或SLC10A1；或者所述组织是口腔粘膜组织，并且细胞表面受体是LYPD3或DSG3。在特定实施例中，使所述靶组织或所述靶细胞与包括对所述组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列的多核苷酸或包括对所述组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列的载体(例如，表达载体或病毒载体)接触。
在另外的实施例中，本发明包含一种用于增加靶组织中的Wnt信号传导的方法，所述方法包括使所述靶组织与以下接触：本文描述的组织特异性Wnt信号增强分子，其中所述第二结构域特异性地结合所述靶组织上的细胞特异性表面分子，并且其中所述组织特异性Wnt信号增强分子结合所述靶组织并螯合选自ZNRF3和RNF43的一种或多种跨膜E3泛素连接酶或增加其在所述靶组织中的内吞作用；以及Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂或其药学上可接受的盐。在特定实施例中，使所述靶组织或所述靶细胞与包括对所述组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列的多核苷酸和对所述Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂进行编码的核酸接触。在其它实施例中，使所述靶组织或所述靶细胞与包括对所述组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列的载体和对所述Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂进行编码的载体接触。
在又另一个相关的实施例中，本发明包含一种用于治疗或预防有需要的受试者的疾病或病状的方法，其中所述疾病或病状与减少的Wnt信号传导相关或者将受益于增加的Wnt信号传导，所述方法包括向所述受试者提供有效量的药物组合物，所述药物组合物单独地或与Wnt、Norrin或Wnt活化/模拟分子组合地包括所述组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐。在特定实施例中，单独地或与包括包含对所述Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列的多核苷酸(例如，DNA或mRNA)或包含对所述Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列的载体(例如，表达载体或病毒载体)的药物组合物组合地，使用包括包含对所述组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列的多核苷酸(例如，DNA或mRNA)或包含对所述组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列的载体(例如，表达载体或病毒载体)的药物组合物执行所述方法。
在本文描述的治疗方法中的任何一种治疗方法的特定实施例中，所述疾病或病症是肝疾病或组织的病症，所述肝疾病或组织的病症选自由以下组成的组：所有原因的急性肝衰竭、药物诱导的急性肝衰竭、酒精性肝病、所有原因的慢性肝衰竭、肝硬化、所有原因的肝纤维化、门脉高压、所有原因的慢性肝功能不全、终末期肝病(ESLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)(脂肪肝)、酒精性肝炎、丙型肝炎病毒诱导的肝病(HCV)、乙型肝炎病毒诱导的肝病(HBV)、其它病毒性肝炎(例如，甲型肝炎病毒诱导的肝病(HAV)和丁型肝炎病毒诱导的肝病(HDV))、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、肝脏外科手术、肝损伤、肝移植、肝脏外科手术和移植中的“小肝(small for size)”综合征、先天性肝疾病和病症、由遗传性疾病、变性、老化、药物或损伤引起的任何其它肝病症或缺陷。在本文描述的治疗或预防方法中的任何一种治疗或预防方法的特定实施例中，所述药物组合物全身性地、肠胃外地、口服地、肌内地、局部地(locally)或局部地(topically)被提供。在特定实施例中，所述受试者是哺乳动物，任选地人。
在另一个实施例中，本公开提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与RNF43多肽或ZNRF3多肽结合、包括包含以下的序列：(i)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或(ii)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。在某些实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括：包括与表2B或SEQ ID NO:78-150或165-170中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区；或包括表2B或SEQ ID NO:78-150或165-170中所示的氨基酸序列的重链可变区。在特定实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括：包括与表2B或SEQ ID NO:78-150或165-170中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或包括表2B或SEQ ID NO:78-150或165-170中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在另一个实施例中，本公开提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与ASGR1多肽或ASGR2多肽结合、包括包含以下的序列：(i)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或(ii)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。在某些实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括：包括与表3B或SEQ ID NO 47-77、151-154、171-179或274-305中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区；或包括表3B或SEQ ID NO 47-77、151-154、171-179或274-305中所示的氨基酸序列的重链可变区。在某些实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括：包括与表3B或SEQ ID NO:47-77、151-154、171-179或274-305中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或包括表3B或SEQ ID NO:47-77、151-154、171-179或274-305中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在特定实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区或轻链可变区，所述重链可变区或轻链可变区包括与表3C或SEQ ID NO:180-185中所示的氨基酸序列或其片段或者变体具有至少90％同一性的氨基酸序列。
本公开还提供了与本文所描述的抗体或其抗原结合片段中的任何抗体或其抗原结合片段竞争结合的抗体或其抗原结合片段。
在相关实施例中，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括本文所描述的抗体或其抗原结合片段中的任何抗体或其抗原结合片段。
在另外的实施例中，本公开提供了一种用于增加肝与体重之比、促进肝再生、增加肝细胞增殖或有丝分裂、任选地在慢性肝损伤后减少肝纤维化、增加肝细胞功能或减少肝中的凝血时间的方法，所述方法包括向有需要的受试者提供有效量的药物组合物，所述药物组合物包括本文公开的与ASGR1多肽或ASGR2多肽结合的抗体或其抗原结合片段。
附图说明
本专利或申请文件含有至少一幅彩色附图。在请求并支付必要的费用后，将由专利局提供带有一幅或多幅彩色附图的本专利或专利申请公开物的副本。
在所附权利要求中具体阐述了本公开的特征。通过参考阐述了说明性实施例的以下详细描述以及附图，将获得对本发明的这些特征和优势的更好理解，在所述说明性实施例中利用了本发明的原理。
图1A-1D：组织特异性Wnt信号传导增强子分子的设计。(图1A)所有四种人R-脊椎蛋白(Rspo1(SEQ ID NO:1)；Rspo2(SEQ ID NO:2)；Rspo3(SEQ ID NO:3)；和Rspo4(SEQ IDNO:4))的比对，其中弗林蛋白酶结构域1(Fu1)和弗林蛋白酶结构域2(Fu2)分别以浅色和深色阴影阴影化。Fu1结构域通常对应于：SEQ ID NO:1的约氨基酸残基38-94；SEQ ID NO:2的约氨基酸残基37-93；SEQ ID NO:3的约氨基酸残基39-95；以及SEQ ID NO:4的约氨基酸残基32-88。Fu2结构域通常对应于：SEQ ID NO:1的约氨基酸残基97-144；SEQ ID NO:2的约氨基酸残基96-143；SEQ ID NO:3的约氨基酸残基98-144；以及SEQ ID NO:4的约氨基酸残基91-137。(图1B)说明性设计分子的方案。将跨越Fu1结构域和Fu2结构域(作用模块)的RSPO2的片段与scFv抗体(靶向模块)的C端融合以生成图1B中示出的构建体，所述构建体对应于SEQ ID NO:5-16中所示的多核苷酸和多肽序列。指示了Fu1结构域和Fu2结构域中的特异性突变。(图1C)对LGR5与抗GFP系列和抗ASGR1系列融合蛋白的结合的生物层干涉法分析，如所指示的。在顶部示出了用111nM RSPO2衍生的融合蛋白进行的结合测定的全部步骤。插入框中单独示出了由缔合相和解离相构成的结合反应。通过稳态分析，分析了来自7个不同浓度的缔合相介于140到145秒之间的平均反应，以确定KD值(底部)。(图1D)对指示的构建体与RNF43和ZNRF3的结合的分析，如所指示的(SEQ ID NO:43-46)。
图2A-2C：肝细胞特异性Wnt信号传导增强子分子的体外活性。(图2A)对HEK293、Huh-7和A431细胞中的ASGR1和ASGR2(顶部)以及TFRC(底部)基因表达水平的半定量PCR分析(针对每个基因从左往右示出)。信号相对于ACTB标准化。(图2B)在外源性Wnt源(30％Wnt3a条件培养基)存在(左图)或不存在(右图)的情况下HEK293(上图)或Huh-7(下图)中的指定蛋白(SEQ ID NO:5-16)的SuperTop Flash(STF)报告基因活性。(图2C)对Huh-7细胞中的LRP6受体和DVL2磷酸化的蛋白质印迹分析。星号指示通过所使用的抗体在Huh-7中检测到的非特异性带。由箭头指示的下方的带对应于具有或不具有磷酸化的DVL2。微管蛋白(TUB)用作上样对照。
图3A-3C：特异性Wnt信号增强子活性对靶向受体的依赖性。(图3A)在外源性Wnt源(30％Wnt3a条件培养基)存在(左图)或不存在(右图)的情况下，用TFRC(编码转铁蛋白受体TFR1作为对照，顶部)、ASGR1(中部)以及ASGR1和ASGR2(下部)瞬时转染的HEK293细胞的STF活性。(图3B)具有如所指定的TFRC或ASGR1过表达的A431细胞中的STF的活性。(图3C)对Fzd蛋白的细胞表面水平的流式细胞术分析。将HEK293细胞用仅ZNRF3(顶部)或ASGR1和ZNRF3(底部)转染、用10nM指定融合蛋白处理、然后用pan-Fzd抗体18R5染色。
图4A-4E：用靶向不同受体TFR1的另一个分子对机制的验证。(图4A)通过生物层干涉法分析抗TFR1系列融合构建体(SEQ ID NO:17-22)的LGR5结合。在顶部示出了用111nMRSPO2衍生的融合蛋白进行的结合测定的全部步骤。插入框中单独示出了由缔合相和解离相构成的结合反应。通过稳态分析，分析了来自7个不同浓度的缔合相介于140到145秒之间的平均反应，以确定KD值(底部)。(图4B)对抗TFR1系列融合构建体与RNF43(左)和ZNRF3(右)的结合的分析，其中下图中从左往右为αTFR-RSPO2、αTFR-RSPO2-RA和αTFR-RPOS-5mut的稳态拟合分析。(图4C)在存在(左)或不存在(右)外源性Wnt源(30％Wnt3a条件培养基)时HEK293(顶部)或Huh-7(底部)上的指定蛋白的STF活性。(图4D)对HEK293细胞中的LRP6受体和DVL2磷酸化的蛋白质印迹分析。微管蛋白(TUB)用作上样对照。(图4E)对Fzd蛋白在用融合蛋白或对照处理之后的细胞表面水平的流式细胞术分析。将HEK293细胞用ZNRF3瞬时转染、用10nM指定融合蛋白处理并且然后用pan-Fzd抗体18R5染色。
图5A-5D：通过肝细胞特异性Wnt信号增强分子进行的Wnt反应基因Axin2诱导。(图5A)在外源性Wnt源(30％Wnt3a条件培养基)存在(左)或不存在(右)的情况下，IgG格式的靶向Wnt信号增强分子(SEQ ID NO:23-34)在HEK293(顶部)或Huh-7(底部)中的STF活性。(图5B)研究设计。在腹膜内注射α-GFP-IgG(SEQ ID NO:25-26和33-34)、Fc-RSPO2-WT(SEQ IDNO:23-24)、αGFP-RSPO2-RA-IgG(SEQ ID NO:25-28)或αASGR1-RSPO2-RA-IgG(SEQ ID NO:29-31)后8小时Axin2的(图5C)肝和(图5D)小肠表达(n＝8只小鼠/组)。使用单向ANOVA执行统计分析：(ns)不显著，(*)p<0.05，(**)p<0.01，(***)p<0.001。
图6A-6E：肝细胞特异性Wnt信号增强分子(SEQ ID NO:25-34)对增殖标志物Ki-67的肝特异性诱导。(图6A)研究设计。(图6B)对在如所指定的处理后48小时Mki67的肝表达的半定量PCR分析(n＝10只小鼠/组)。(图6C)处理后在10倍物镜下的每个视场中肝中的Ki-67+薄壁组织的细胞核的平均数量。使用单向ANOVA执行统计分析：(**)P<0.01，(****)p<0.0001。(图6D)Ki67蛋白的经过染色的肝切片的代表性图像。(图6E)对小肠中的Mki67表达的半定量PCR分析。
图7A-7C：针对hASGR1/2的结合剂的表征的实例。(图7A)对通过噬菌体展示鉴别的三种Fab抗体(024S-D03、-E03和-A04；SEQ ID NO:47-52)与hASGR1的结合的生物层干涉法分析。在顶部为传感图，并且在底部为用于确定KD的稳态拟合分析。(图7B)两种Fab(ABV-3D11和-10B8；SEQ ID NO:151-154)针对来自杂交瘤发展的hASGR2的结合。(图7C)两种Fab(LP1-2I13和LP1-8M24；SEQ ID NO:284-285和298-299)针对来自杂交瘤发展的hASGR1的结合。
图8：说明性肝特异性Wnt信号传导增强子的方案。在某些实施例中，靶向模块可以是针对hASGR1或hASGR2的IgG抗体，和/或作用模块可以是具有野生型或突变活性的RSPO衍生物。RSPO衍生物可以附加到IgG的不同位置(轻链或重链的N端或C端)。在某些配置中，活化结构域可以是与人ZNRF3/RNF43结合的抗体或其抗原结合片段，例如呈纳米抗体(nAb)、单链可变区(scFv)、Fab片段或全IgG形式。与nAb和scFv不同，Fab含有两条多肽链，这两条多肽链都可以例如以共价方式连接到靶向模块。混合IgG是另一种任选的配置，其含有一个Fab作为靶向模块和另一个Fab作为作用模块。另外，在某些配置中，靶向模块可以呈nAb/scFv/Fab形式，而作用模块呈IgG形式(未示出)。
图9A-9D：原初健康小鼠中肝特异性Wnt信号传导增强子的剂量滴定。(图9A)对用于构建αASGR1-RSPO2-RA-IgG(表达为Fab，SEQ ID NO:29-30和161-162)的ASGR1抗体的跨物种反应性的生物层干涉法分析。使用了人和小鼠ASGR1 ECD(SEQ ID NO:35-36和163-164)。指示了通过曲线模型拟合确定的Kd。在腹膜内注射指定蛋白后48小时通过半定量PCR分析了肝(上图)和小肠(下图)中的(图9B)Axin2和(图9C)Ki67表达(n＝8只小鼠/组)。使用单向ANOVA执行统计分析：(ns)不显著，(*)p<0.05，(**)p<0.01，(***)p<0.001。(图9D)来自10mg/kg处理组的肝样品的免疫组织化学染色。抗β-半乳糖苷酶(α-β-Gal-IgG、SEQ ID NO:155-158)是用作对照的中和抗体。其它被测试蛋白的SEQ ID NO如图5的图例所描述的。
图10A-10D：靶向RSPO模拟物在TAA小鼠慢性肝病模型中的功效。(图10A)对正常小鼠和经过TAA处理的小鼠的Wnt配体和Rspo基因的半定量PCR分析。(图10B)研究设计。(图10C)对肝(上)和小肠(底部)中的Axin2(左)和Ki67(右)基因表达的半定量PCR分析。(n＝10只小鼠/组)。(图10D)处理期间凝血酶原时间的国际标准化比率(INR)。使用单向ANOVA执行统计分析：(**)p<0.01，(****)p<0.0001(n＝10只小鼠/组)。抗β-半乳糖苷酶(α-β-Gal-IgG，SEQ ID NO:155-156和159-160)是用作对照的中和抗体。其它被测试蛋白的SEQ ID NO如图5的图例所描述的。
图11A-11BR：Wnt信号增强子组分的序列。
图12：说明性CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型的方案和处理方案。在首个10天内用CCl4(在第1天、第4天、第7天、第10天时0.5mL/kg，蓝色箭头)加上烯丙醇(在第2天、第5天、第8天时0.0125mL/kg，黄色箭头)间歇地处理8-9周大的C57BL/6雄性小鼠(杰克逊实验室(Jackson Laboratories))，然后进行每周两次为期8周的CCl4处理(0.5mL/kg，蓝色箭头)。在CCl4处理之后，用蛋白质向小鼠给药2周。处理组如下：无蛋白对照，n＝8；10mpk抗βGal，n＝8(每周两次给药)；4.6mpk RSPO2，n＝7(每周两次给药)；10mpk抗eGFP-mutRspo2，n＝8(每天给药)；10mpkαASGR1-RSPO2-RA-IgG2，n＝8(每天给药)。另外的对照组包含：无CCl4处理(橄榄油载体，0.5mL/kg)，n＝8；原初对照，n＝7。在第69天、第72天、第76天取小鼠血液进行INR(国际标准化比率)测试。所有小鼠均于第83天被终结。
图13：CCl4诱导的纤维化模型的各个治疗组的天狼星红染色百分比。图13为示出在两周的蛋白质处理后小鼠肝中的胶原蛋白的天狼星红染色的图，如所指示的。*表示αASGR-1-RSPO2-RA-IgG相对于αeGFP-mutRSPO2的统计显著性(p<0.05)；**表示Fc-RSPO2-WT相对于αeGFP-mutRSPO2的统计显著性；***表示αASGR-1-RSPO2-RA-IgG相对于αβgal的统计显著性；****表示Fc-RSPO2-WT相对于αβgal的统计显著性。
图14A-14D：用内部杂交瘤衍生的ASGR1结合剂构建的RSPO模拟分子的体外肝细胞特异性活性。通过将突变RSPO2连接到IgG2重链的C端(图14A和图14B)或ASGR1结合剂的IgG1(N297G)重链的N端(图14C和图14D)来构建融合蛋白(SEQ ID NO:190-271)。在外源性Wnt替代物分子(100pM R2M3-26，描述于WO 2019126398中)存在的情况下，测试经过纯化的蛋白在HEK293(上图)或Huh-7(下图)中的SuperTop Flash(STF)报告基因活性。使用的对照为：Fc-RSPO2-WT(SEQ ID NO:23-24)、αGFP-RSPO2-RA-IgG(附加到重链的N端的RSPO2，SEQID NO:25-28；或附加到重链的C端的RSPO2，SEQ ID NO:25-26和188-189)或α-β-Gal-RSPO2-RA-IgG(附加到重链的C端的RSPO2，SEQ ID NO:155-156和186-187)。在每幅图中提供了总结与Fc-RSPO阳性对照比较的EC50和Emax的表。
图15：通过衍生自内部杂交瘤结合剂的RSPO模拟分子进行的Wnt反应基因肝Axin2诱导。在蛋白质给药前五天分别向小鼠注射1×1011个基因组颗粒的AAV-TBG-hASGR1和AAV-TBG-hASGR2。蛋白质给药后24小时收集肝样品并对其进行处理以便进行半定量PCR分析。(A)研究中使用的序列ID编号、名称、剂量和小鼠数量。(B)腹膜内注射后Axin2的肝表达。使用单向ANOVA执行统计分析：(**)p<0.01，(***)p<0.001
具体实施方式
本公开提供了组织特异性Wnt信号增强分子，其中在某些实施例中，所述分子：1)与组织特异性或细胞特异性细胞表面受体选择性地结合；2)在靶向组织或细胞类型中介导ZNRF3/RNF43的内化或螯合；和/或3)以组织特异性方式增强Wnt信号传导。在某些实施例中，分子是融合蛋白。在某些实施例中，分子是具有另外的附加结合结构域的抗体。还提供了药物组合物和用于使用本文所公开的组合物中的任何组合物增强即增加靶向组织或细胞类型中的Wnt信号传导例如以治疗或预防疾病或病症的方法。在特定实施例中，分子结合肝组织并且可以用于增加肝组织或肝细胞中的Wnt信号传导。在阅读如下文更全面地描述的组合物和方法的细节后，本发明的这些和其它目的、优势和特征对本领域技术人员而言将变得显而易见。
定义
本文所使用的“载体”是指包括多核苷酸或与多核苷酸缔合并且可以用于介导多核苷酸到细胞的递送的大分子或大分子缔合物。说明性载体包含例如质粒、病毒载体、脂质体和其它基因递送媒剂。
术语“多核苷酸”是指任何长度的核苷酸的聚合形式，包含脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或者其类似物。多核苷酸可以包括经过修饰的核苷酸如甲基化核苷酸和核苷酸类似物并且可以被非核苷酸组分打断。如果存在，则对核苷酸结构的修饰可以在组装聚合物之前或之后进行。如本文所使用的，术语多核苷酸可互换地指双链分子和单链分子。除非另外指定或需要，否则是多核苷酸的本文所描述的本发明的任何实施例既涵盖双链形式，也涵盖已知或预测构成双链形式的两种互补的单链形式中的每种单链形式。
多核苷酸或多肽与另一种多核苷酸或多肽具有一定比例的“序列同一性”，这意味着，当比对时，所述比例的碱基或氨基酸在对这两个序列进行比较时是相同的。序列相似性可以通过多种不同的方式来确定。为了确定序列同一性，可以使用包含可通过万维网ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/获得的BLAST在内的方法和计算机程序来比对序列。另一种比对算法是FASTA，可从牛津分子集团有限公司(Oxford Molecular Group,Inc.)的全资子公司、来自美国威斯康星州麦迪逊市(Madison,Wis.,USA)的遗传学计算机集团(GeneticsComputing Group)(GCG)的软件包中获得。以下中描述了用于比对的其它技术：《酶学方法(Methods in Enzymology)》,第266卷:用于大分子序列分析的计算机方法(ComputerMethods for Macromolecular Sequence Analysis)(1996),Doolittle编,学术出版社有限公司(Academic Press,Inc.),美国加利福尼亚州圣地亚哥哈考特布瑞斯公司(HarcourtBrace&Co.,San Diego,Calif.,USA)的分公司。特别关注了允许序列中有空位的比对程序。Smith-Waterman是允许序列比对中有空位的一种类型的算法。参见《分子生物学方法(Meth.Mol.Biol.)》70:173-187(1997)。而且，可以利用使用Needleman和Wunsch比对方法的GAP程序来比对序列。参见《分子生物学期刊(J.Mol.Biol.)》48:443-453(1970)
关注了使用Smith和Waterman的局部同源性算法(《应用数学进展(Advances inApplied Mathematics)》2:482-489(1981))来确定序列同一性的BestFit程序。空位生成罚分的范围通常将为1到5、经常为2到4并且在许多实施例中将为3。空位生成罚分的范围通常将为0.01到0.20并且在许多情况下将为0.10。程序具有由被输入以进行比较的序列确定的默认参数。优选地，序列同一性是使用由程序确定的默认参数来确定的。此程序也可从来自美国威斯康星州麦迪逊市的遗传学计算集团(GCG)的软件包获得。
关注的另一个程序是FastDB算法。以下中描述了FastDB：序列比较和分析的当前方法(Current Methods in Sequence Comparison and Analysis),《大分子测序与合成所选方法与应用(Macromolecule Sequencing and Synthesis,Selected Methods andApplications)》,第127-149页,1988,Alan R.Liss有限公司(Alan R.Liss,Inc.)。基于以下参数通过FastDB来计算序列同一性百分比：不匹配罚分：1.00；空位罚分：1.00；空位大小罚分：0.33；以及连接罚分：30.0。
如应用于多核苷酸的“重组”意味着，多核苷酸是克隆、限制或连接步骤和产生不同于天然存在的多核苷酸的构建体的其它程序的各种组合的产物。
“控制元件”或“控制序列”是参与分子相互作用的核苷酸序列，所述相互作用有助于多核苷酸的功能调节，包含多核苷酸的重复、复制、转录、剪接、翻译或降解。调节会影响过程的频率、速度或特异性并且在本质上会具有增强或抑制性。本领域中已知的控制元件包含例如转录调节序列，如启动子和增强子。启动子是在某些条件下能够结合RNA聚合酶并且启动对通常位于启动子下游(沿3'方向)的编码区进行转录的DNA区域。
“操作性地连接”或“可操作地连接”是指遗传元件的并置，其中所述元件处于允许所述元件以预期方式操作的关系中。例如，如果启动子帮助启动对编码序列的转录，则启动子与编码区域操作性地连接。只要维持这一功能关系，启动子与编码区域之间就会存在插入残基。
“表达载体”是包括对关注的基因产物进行编码的区域的载体并且被用于引发基因产物在预期靶细胞中的表达。表达载体还包括与编码区域操作性地连接以促进基因产物在靶标中表达的控制元件。控制元件和其所可操作地连接以用于表达的一个或多个基因的组合有时被称为“表达盒”，所述控制元件中的许多控制元件在本领域是已知且可获得的或者可以由本领域中可获得的组分容易地构建。
如本文所使用的，术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”是指任何长度的氨基酸的聚合物。所述术语还涵盖已被修饰的氨基酸聚合物；例如，以包含二硫键形成、糖基化、脂化、磷酸化或与标记组分缀合。
如本文所使用的，术语“抗体”意指包括特异性地结合抗原表位所必需的可变区序列的分离结合剂或重组结合剂。因此，抗体是展现出期望的生物活性(例如，结合特异性靶抗原)的抗体或其片段的任何形式。因此，抗体最广义地使用并且具体覆盖单克隆抗体(包含全长单克隆抗体)、多克隆抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、纳米抗体、双抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，所述抗体片段包含但不限于scFv、Fab和Fab2，只要所述抗体和抗体片段展现出期望的生物活性即可。
“抗体片段”包括完整抗体的一部分，例如完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包含：Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段和Fv片段；双抗体；线性抗体(例如，Zapata等人,《蛋白质工程(Protein Eng.)》,8(10):1057-1062(1995))；单链抗体分子(例如，scFv)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。木瓜蛋白酶消化抗体产生了：两个相同的抗原结合片段，被称为“Fab”片段，每个抗原结合片段具有单个抗原结合位点；以及残留的“Fc”片段，这一名称反映了容易结晶的能力。胃蛋白酶处理得到具有两个抗原组合位点并且仍然能够交联抗原的F(ab')2片段。
“包括”意味着，所列举要素在例如组合物、方法、试剂盒等中是必需的，但是其它元素也可以包含在内以在权利要求的范围内形成例如组合物、方法、试剂盒等。例如，“包括”对与启动子可操作地连接的治疗性多肽进行编码的基因的表达盒是除基因和启动子以外还可以包含其它元件(例如，聚腺苷酸化序列、增强子元件、其它基因、接头结构域等)的表达盒。
“基本上由……组成”意指对例如针对不实质影响例如组合物、方法、试剂盒等的一种或多种基本和新颖特性的指定材料或步骤所描述的组合物、方法、试剂盒等的范围的限制。例如“基本上由对与启动子可操作地连接的治疗性多肽进行编码的基因以及多腺苷酸化序列组成”的表达盒可以包含另外的序列，例如接头序列，只要所述另外的序列不实质影响基因的转录或翻译即可。作为另一个实例，“基本上由列举的序列组成”的变体或突变多肽片段具有列举的序列的、基于全长初始多肽在序列的边界处加上或减去约10个氨基酸残基的氨基酸序列，例如比列举的结合氨基酸残基少10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个残基或者比列举的结合氨基酸残基多1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个残基，所述氨基酸序列源自所述全长初始多肽。
“由……组成”意指从组合物、方法或试剂盒中排除权利要求中未指定的任何要素、步骤或成分。例如，“由列举的序列组成”的多肽或多肽结构域仅含有列举的序列。
如本文所使用的，“表达载体”涵盖载体(例如，如本文所讨论或如本领域中已知的质粒、微环、病毒载体、脂质体等，包括对关注的基因产物进行编码的多核苷酸)并且被用于引发基因产物在预期靶细胞中的表达。表达载体还包括与编码区域操作性地连接以促进基因产物在靶标中表达的控制元件。控制元件例如促进子、增强子、UTR、miRNA靶向序列等和其所可操作地连接以用于表达的一个或多个基因的组合有时被称为“表达盒”。许多这种控制元件在本领域是已知且可获得的或者可以由本领域中可获得的组分容易地构建。
如本文所使用的，“启动子”涵盖引导RNA聚合酶的结合并且由此促进RNA合成的DNA序列，即，足以引导转录的最小序列。启动子和对应的蛋白质或多肽表达可以是普遍存在的，这意味着在广泛范围的细胞、组织和物种中具有强活性或者细胞类型特异性、组织特异性或物种特异性。启动子可以是“组成型”(意指持续活性)或“诱导型”(意指启动子可以通过生物因子或非生物因子的存在或不存在而活化或失活)。本发明的核酸构建体或载体中还包含增强子序列，所述增强子序列可以或可以不与启动子序列邻接。增强子序列影响启动子依赖性基因表达并且可以位于天然基因的5'区或3'区。
如本文所使用的，术语“天然”或“野生型”是指存在于野生型细胞、组织、器官或生物体中的核苷酸序列(例如，基因)或基因产物(例如，RNA或蛋白质)。如本文所使用的，术语“变体”是指参考多核苷酸或多肽序列的突变体，例如天然多核苷酸或多肽序列，即，与参考多核苷酸或多肽序列具有小于100％的序列同一性。换句话说，变体相对于参考多核苷酸序列包括至少一个氨基酸差异(例如，氨基酸取代、氨基酸插入、氨基酸缺失)，例如天然多核苷酸或多肽序列。例如，变体可以是与全长天然多核苷酸序列具有50％或更多、60％或更多或者70％或更多序列同一性的多核苷酸，例如与全长天然多核苷酸序列具有75％或80％或更多同一性，如85％、90％或95％或更多，例如98％或99％同一性。作为另一个实例，变体可以是与全长天然多肽序列有70％或更多序列同一性的多肽，例如与全长天然多肽序列有75％、80％或更多同一性，如85％、90％、95％或更多，例如98％或99％同一性。变体还可以包含参考例如天然序列的与参考例如天然序列的片段共享70％或更多序列同一性的变体片段，例如与天然序列有75％、80％或更多同一性，如85％、90％、95％或更多，例如98％或99％同一性。
如本文所使用的，术语“生物活性(biological activity)”和“生物活性(biologically active)”是指归因于细胞中的特定生物元素的活性。例如，R-脊椎蛋白或其片段或者变体的“生物活性”是指增强Wnt信号的能力。作为另一个实例，多肽或其功能性片段或者变体的生物活性是指多肽或其功能性片段或者变体实施其天然功能例如结合的能力、酶活性等。作为第三实例，基因调节元件例如启动子、增强子、Kozak序列等的生物活性是指调节元件或其功能性片段或者变体分别对其可操作地连接的基因的表达的翻译进行调节即促进、增强或活化的能力。
如本文所使用的，术语“施用”或“引入”或“提供”是指向细胞、向受试者的细胞、组织和/或器官或者向受试者递送组合物。这种施用或引入可以在体内、在体外或离体地发生。
术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”等在本文中用于通常意指获得期望的药理学和/或生理学效应。效果在完全或部分地预防疾病或其症状方面可以是预防性的，例如降低受试者体内发生疾病或其症状的可能性，和/或在部分或完全治愈疾病和/或由疾病引起的不良反应方面可以是治疗性的。如本文所使用的，“治疗”覆盖了对哺乳动物的疾病的任何治疗并且包含：(a)防止疾病在可能倾向于患有疾病但尚未被诊断为患有疾病的受试者身上发生；(b)抑制疾病，即，中止疾病发展；或者(c)缓解疾病，即，使疾病消退。可以在疾病或损伤发作之前、期间或之后施用治疗剂。特别关注了对发展中的疾病的治疗，其中所述治疗稳定或减少了患者的不期望的临床症状。理想的是，在受影响组织的功能完全丧失之前执行这种治疗。理想的是，将在疾病的症状期期间并且在一些情况下在疾病的症状期之后施用主题疗法。
术语“个体”、“宿主”、“受试者”和“患者”在本文中可互换使用并且是指哺乳动物，包含但不限于：人和非人灵长类动物，包含猿猴和人类；哺乳类运动动物(例如，马)；哺乳类农场动物(例如，绵羊、山羊等)；哺乳类宠物(狗、猫等)；以及啮齿动物(例如，小鼠、大鼠等)。
下面描述了本发明的各种组合物和方法。尽管本文例示了特定的组合物和方法，但是应当理解，多个替代性组合物和方法中的任何替代性组合物和方法均是适用的并且适于用于实践本发明。还应当理解，可以使用本领域中标准的程序对本发明的表达构建体和方法进行评估。
除非另有指示，否则本发明的实践将采用细胞生物学、分子生物学(包含重组技术)、微生物学、生物化学和免疫学的常规技术，所述技术在本领域技术人员的范围内。文献中充分解释了这种技术，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A LaboratoryManual)》,第二版(Sambrook等人,1989)；《寡核苷酸合成(Oligonucleotide Synthesis)》(M.J.Gait编,1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》(R.I.Freshney编,1987)；《酶学方法(Methods in Enzymology)》(学术出版社有限公司)；《实验免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology)》(D.M.Weir和C.C.Blackwell编)；《哺乳动物细胞用基因转移载体(Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells)》(J.M.Miller和M.P.Calos编,1987)；《当代分子生物学方法(Current Protocols in MolecularBiology)》(F.M.Ausubel等人编,1987)；《PCR:聚合酶链反应(PCR:The Polymerase ChainReaction)》(Mullis等人编,1994)；以及《当代免疫学方法(Current Protocols inImmunology)》(J.E.Coligan等人编,1991)，所述文献中的每个文献均通过引用明确并入本文。
下文参考用于说明的示例应用说明了本发明的若干方面。应理解，阐述了许多具体细节、关系和方法以提供对本发明的充分理解。然而，相关领域普通技术人员将很容易认识到，可以在没有所述具体细节中的一个或多个具体细节的情况下或者用其它方法来实践本发明。本发明不受所展示的活动或事件的顺序的限制，因为一些活动可以按不同的顺序和/或与其它活动或事件同时地发生。此外，实施根据本发明的方法并不需要所有展示的活动或事件。
本文所使用的术语是出于仅描述特定实施例的目的并且不旨在限制本发明。如本文所使用的，除非上下文另外清楚地指示，否则单数形式“一个/一种(a、an)”和“所述(the)”旨在也包含复数形式。此外，在详细描述和/或权利要求中使用术语“包含(including)”、“包含(include)”、“具有(having)”、“具有(has)”、“具有(with)”或其变体的情况下，这种术语旨在以类似于术语“包括(comprising)”的方式是包含性的。
术语“约(about)”或“大约(approximately)”意指在如由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，这将部分地取决于所述值是如何测量或确定的，即，测量系统的局限性。例如，根据本领域的实践，“约”可以意指在1个或大于1个标准偏差内。可替代地，“约”可以意指给定值的至多20％、优选地至多10％、更优选地至多5％并且还更优选地至多1％的范围。可替代地，特别是对于生物系统或过程，所述术语可以意指在值的数量级内，优选地在5倍内并且更优选地在2倍内。当在本申请和权利要求中描述特定值时，除非另外指出，否则应当假设术语“约”意指在特定值的可接受误差范围内。
本文所提及的所有公开均通过引用并入本文，以披露和描述引用公开所结合的方法和/或材料。应当理解，在存在矛盾的情况下，本公开代替所并入公开的任何公开内容。
另外应注意，权利要求可以被撰写成不包括任何任选的要素。因此，本声明旨在充当结合所列权利要求要素使用如“仅(solely)”、“仅(only)”等排他性术语或使用“否定型”限制的前提基础。
除非另有指示，否则本文所使用的所有术语具有与本领域技术人员所知的含义相同的含义，并且本发明的实践将采用在本领域技术人员的知识范围内的微生物学常规技术和重组DNA技术。
组织特异性Wnt信号增强分子
在某些方面，本公开提供了能够以组织特异性或细胞特异性方式增强Wnt活性的新颖的组织特异性Wnt信号增强分子。在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子是双功能分子，所述双功能分子包括与一个或多个ZNRF3和/或RNF43连接酶结合的第一结构域和以组织特异性或细胞特异性方式与一种或多种靶向组织或细胞类型结合的第二结构域。第一结构域和第二结构域中的每个结构域分别可以是能够与连接酶复合物或者靶向组织或靶向细胞结合的任何部分。例如，第一结构域和第二结构域中的每个结构域可以是但不限于选自以下的部分：多肽(例如，抗体或其抗原结合片段或者不同于抗体的肽或多肽)、小分子和天然配体或其变体、片段或者衍生物。在某些实施例中，天然配体是多肽、小分子、离子、氨基酸、脂质或糖分子。第一结构域和第二结构域可以是彼此相同的类型的部分，或者第一结构域和第二结构域可以是不同类型的部分。在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子与组织特异性或细胞特异性细胞表面受体结合。在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子，例如与阴性对照相比，使Wnt信号传导增加或增强至少50％、至少两倍、至少三倍、至少五倍、至少十倍、至少二十倍、至少三十倍、至少四十倍或至少五十倍。
组织特异性Wnt信号增强分子可以具有不同的格式。图1A和图8中描绘了说明性格式。在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子是融合蛋白，所述融合蛋白包括与ZNRF3/RNF43结合的第一多肽序列和以组织特异性或细胞特异性方式与一种或多种靶向组织或细胞类型结合的第二多肽序列(参见例如图1A)。在某些实施例中，所述两个多肽序列可以直接融合或通过接头融合。在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子包括两种或更多种多肽，如包括两种或更多种融合蛋白的二聚体或多聚体，所述两种或更多种融合蛋白各自包括第一结构域和第二结构域，其中所述两种或更多种多肽例如通过接头部分或经由所述两种或更多种多肽中的每种多肽的氨基酸残基之间的键(例如，半胱氨酸残基之间的分子间二硫键)来连接。在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子是包括构成第一结构域或第二结构域的抗体重链和轻链的抗体(或其抗原结合片段)，其中另一个结构域(即，第二结构域或第一结构域)与抗体重链或轻链连接成融合蛋白或经由接头部分与抗体重链或轻链连接。在特定实施例中，另一个结构域与重链的N端、重链的C端、轻链的N端或轻链的C端连接。这种结构在本文中可以称为附加IgG支架或格式。例如，组织特异性Wnt信号增强分子可以是结合ZNRF3/RNF43的抗体，其中结合组织特异性或细胞特异性受体的结合结构域融合或附加到结合ZNRF3/RNF43的抗体的重链或轻链。在另一个实例中，组织特异性Wnt信号增强分子可以是结合组织特异性或细胞特异性受体的抗体，其中结合ZNRF3/RNF43的结合结构域融合或附加到结合组织特异性或细胞特异性受体的抗体的重链或轻链。在特定实施例中，肝特异性Wnt信号增强分子是结合ASGR1或ASGR2的抗体或其抗原结合片段，其中结合ZNRF3/RNF43的结合结构域融合或附加到抗体或其抗原结合片段的重链或轻链(参见例如图8)。在特定实施例中，结合ZNRF3/RNF43的结合结构域包括Fu1结构域和Fu2结构域，其中Fu1结构域和Fu2结构域任选地包括一个或多个氨基酸修饰，包含本文公开的氨基酸修饰中的任何氨基酸修饰，例如F105R和/或F109A。
在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子包括结合ZNRF3/RNF43的第一结构域(“作用模块”)和例如以高亲和力结合组织特异性或细胞特异性受体的第二结构域(“靶向模块”)。在某些实施例中，这两个结构域中的每个结构域具有大幅降低的活性或者在自身增强Wnt信号时无活性。然而，当组织特异性Wnt信号增强分子与表达组织特异性受体的靶组织接合时，E3连接酶ZNRF3/RNF43被募集到与组织特异性受体的三元复合物，从而使E3连接酶ZNRF3/RNF43被螯合和/或经由受体介导的内吞作用从细胞表面清除。最终结果是以组织特异性方式增强Wnt信号。
在某些实施例中，作用模块是与ZNRF3/RNF43 E3连接酶的结合剂并且可以基于R-脊椎蛋白(例如，R-脊椎蛋白-1-4，包含但不限于人R-脊椎蛋白-1-4)进行设计。在某些实施例中，作用模块是R-脊椎蛋白(例如，野生型R-脊椎蛋白-1-4，任选地人R-脊椎蛋白-1-4)或其变体或者片段。在特定实施例中，作用结构域是R-脊椎蛋白-1-4中的任何R-脊椎蛋白的变体，所述变体与对应的野生型R-脊椎蛋白-1-4序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白的弗林蛋白酶结构域1(例如，结合ZNRF3/RNF43的R-脊椎蛋白1-4中的任何R-脊椎蛋白)或由其组成。也可以使用弗林蛋白酶结构域1的延伸版本(包含但不限于具有与LGR4-6不再结合或已经降低了与LGR4-6的结合的突变弗林蛋白酶结构域2的那些)或工程化抗体或任何其它衍生物或与能够与ZNRF3/RNF43特异性地结合的抗体不同的任何工程化多肽。在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白的一个或多个弗林蛋白酶结构域1。在某些实施例中，作用结构域不包括R-脊椎蛋白的弗林蛋白酶结构域2，或者作用结构域包括R-脊椎蛋白的经过修饰的或变体弗林蛋白酶结构域2，例如与野生型弗林蛋白酶结构域2相比具有降低的活性的弗林蛋白酶结构域2。在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白的弗林蛋白酶结构域1但不包括弗林蛋白酶结构域2。在某些实施例中，作用模块包括两个或更多个弗林蛋白酶结构域1或者弗林蛋白酶结构域1的多聚体。作用模块可以包括R-脊椎蛋白的一个或多个野生型弗林蛋白酶结构域1。在特定实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白的经过修饰的或变体弗林蛋白酶结构域1，所述经过修饰的或变体弗林蛋白酶结构域1与野生型弗林蛋白酶结构域1相比具有增加的活性，例如与ZNRF3/RNF43的结合。可以例如通过筛选包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1的变体的噬菌体或酵母展示文库来鉴别出与ZNRF3/RNF43具有增加的结合的变体。还可以通过筛选鉴别出与R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1不相关但与ZNRF3/RNF43具有增加的结合的肽或多肽。作用模块可以进一步包括另外的部分或多肽序列例如的另外的氨基酸残基以稳定作用模块的或作用模块所存在于的组织特异性Wnt信号增强分子的结构。
在某些实施例中，作用模块包括特异性地结合ZNRF3和/或RNF43的抗体或其抗原结合片段。在特定实施例中，作用模块是抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：a)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或b)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。在特定实施例中，作用模块是包括纳米抗体、表2B中所示的VH或VL序列或SEQID NO:78-150或者其片段或变体的抗体或其抗原结合片段。
在另外的实施例中，作用模块包括降低或阻止ZNRF3/RNF43活性或表达的另一个抑制部分，如核酸分子，例如反义寡核苷酸；小干扰RNA(siRNA)；短发夹RNA(shRNA)；微RNA(miRNA)；或核酶。如本文所使用的，“反义”是指与核酸序列互补的核酸序列，无论其长度如何。在某些实施例中，反义RNA是指单链RNA分子，所述单链RNA分子可以被引入到单独的细胞、组织或受试者中并通过不一定依赖于内源性基因沉默通路的机制使靶基因的表达减少。反义核酸可以含有经过修饰的主链例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或本领域已知的其它物质或者可以含有非天然核苷间键。反义核酸可以包括例如锁核酸(LNA)。在特定实施例中，另一个抑制剂部分抑制ZNRF3/RNF43中的一者或两者的活性或抑制ZNRF3/RNF43中的一者或两者的基因、mRNA或蛋白质表达。在某些实施例中，抑制部分是与ZNRF3/RNF43基因或mRNA结合的核酸分子或其补体。
如本文所使用的，“RNA干扰”是指使用通过内源性基因沉默通路(例如，Dicer和RNA诱导的沉默复合物(RISC))降解靶mRNA来减少靶基因的表达的药剂。RNA干扰可以使用各种药剂来实现，包含shRNA和siRNA。“短发夹RNA”或“shRNA”是指可以用于通过RNA干扰(RNAi)使靶基因表达沉默的具有发夹弯的双链的人工RNA分子。细胞中的shRNA的表达通常通过质粒的递送或通过病毒或细菌载体来完成。shRNA是RNAi的有利介体，因为其具有相对低的降解和转换率。小干扰RNA(siRNA)是通常长度为20-25个碱基对、类似于miRNA并在RNA干扰(RNAi)通路内操作的一类双链RNA分子。siRNA通过在转录后降解mRNA来干扰具有互补核苷酸序列的特定基因的表达，从而阻止翻译。在某些实施例中，siRNA的长度为18个、19个、20个、21个、22个、23个或24个核苷酸并且在其3'端处具有2个碱基的突出端。siRNA可以被引入到单独细胞和/或培养系统中并导致靶mRNA序列降解。如本文所使用的，“吗啉代”是指经过修饰的核酸寡聚体，其中标准核酸碱基与吗啉环结合并通过磷酸二酰胺酯(phosphorodiamidate)键连接。类似于siRNA和shRNA，吗啉代与互补mRNA序列结合。然而，吗啉代通过立体抑制mRNA翻译和改变mRNA剪接而非靶向互补mRNA序列进行降解来发挥作用。
在某些实施例中，靶向模块与细胞特异性表面分子例如细胞特异性表面受体特异性地结合并且可以是例如天然配体、抗体或合成化学品。在特定实施例中，细胞特异性表面分子优先表达在靶器官、组织或细胞类型上，例如期望增强Wnt信号传导例如以治疗或预防疾病或病症的器官、组织或细胞类型。在特定实施例中，细胞特异性表面分子例如与一个或多个其它非靶向器官、组织或细胞类型相比，在靶器官、组织或细胞类型上的表达增加或增强，例如期望增强Wnt信号传导例如以治疗或预防疾病或病症的器官、组织或细胞类型。在某些实施例中，分别与一种或多种其它器官、组织或细胞类型相比，细胞特异性表面分子优先表达在靶器官、组织或细胞类型的表面上。例如，在特定实施例中，与分别在一种或多种、五种或更多种所有其它器官、组织或细胞中或者在平均的所有其它器官、组织或细胞中表达相比，如果在靶器官、组织或细胞中表达细胞表面受体的水平高至少两倍、至少五倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍，则细胞表面受体被认为是组织特异性或细胞特异性细胞表面分子。在某些实施例中，组织特异性或细胞特异性细胞表面分子是细胞表面受体，例如包括位于细胞表面膜内的区域和靶向模块可以结合的细胞外区域的多肽受体。在各种实施例中，本文所描述的方法可以通过以下来实践：特异性地靶向仅表达在靶组织或包含靶组织的组织子集上的细胞表面分子；或特异性地靶向与所有、大多数或大量其它组织相比在靶组织上具有更高表达水平的细胞表面分子，例如，与在至少两个、至少五个、至少十个或至少二十个其它组织上相比在靶组织上具有更高的表达。
组织特异性和细胞特异性细胞表面受体在本领域中是已知的。组织特异性和细胞特异性表面受体的实例包含但不限于ASGR1(用于肝特异性)、ASGR2(用于肝特异性)、TFR2(用于肝特异性)、SLC10A1(用于肝特异性)、PTH1R(用于骨和肾特异性)、LYPD3(用于口腔粘膜特异性)、DSG3(用于口腔粘膜特异性)等。例如Yan等人,《肿瘤生物学(Tumor Biology)》,2015；36:55-67描述了针对肝递送的另外的受体。
在某些实施例中，靶向模块包括特异性地结合ASGR1和/或ASGR2的抗体或其抗原结合片段。在特定实施例中，第二多肽是抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：a)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或b)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。在特定实施例中，作用模块是纳米抗体、表3B中所示的VH或VL序列或SEQ IDNO:47-77或151-154或者其片段或变体的抗体或其抗原结合片段。
在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐包括特异性地结合选自锌指和环指3(ZNRF3)和环指蛋白43(RNF43)的一种或多种跨膜E3泛素连接酶的第一结构域和特异性地结合脱唾液酸糖蛋白受体1(ASGR1)和/或脱唾液酸糖蛋白受体2(ASGR2)的第二结构域，其中(a)所述第一结构域包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：(i)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或(ii)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代；和/或(b)所述第二结构域包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：(i)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或(ii)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐包括与SEQ ID NO:47-77或151-154中的任何一个具有至少90％同一性的多肽。在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子或其药学上可接受的盐是包括抗体或其抗原结合片段的肝特异性Wnt信号增强分子，所述抗体或其抗原结合片段包括：(i)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或(ii)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。
“与特定细胞表面多肽或受体特异性地结合”或“针对特定细胞表面多肽或受体具有特异性”的作用模块或靶向模块例如抗体或其抗原结合片段是在基本上不与任何其它多肽或多肽表位结合的情况下与所述特定多肽或受体结合的模块。在一些实施例中，本公开的作用模块和靶向模块分别与ZNRF3/RNF43或组织特异性细胞表面分子(例如，受体)特异性地结合，其中当在约4℃、25℃、37℃或42℃的温度下测量时，解离常数(Kd)等于或小于1000nM、等于或小于100nM、等于或小于10nM、等于或小于1nM、等于或小于0.5nM、等于或小于0.1nM、等于或小于0.01nM、等于或小于0.005nM、等于或小于0.001nM或者等于或小于0.0005nM。使用常规技术，可以容易地确定结合剂例如抗体的亲和力，常规技术例如由Scatchard等人所描述的那些(《美国纽约科学院年刊(Ann.N.Y.Acad.Sci.USA)》51:660(1949)，ELISA测定、生物层干涉法(BLI)测定和表面等离子体共振(SPR)测定)。通常可以使用免疫检测法来确定和估计抗体与其抗原、细胞或组织的结合性质，所述免疫检测法包含例如基于免疫荧光的测定，如免疫组织化学(IHC)和/或荧光活化细胞分选(FACS)。
在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子的作用模块和/或靶向模块是多肽，而在其它实施例中，组织特异性Wnt信号传导分子的作用模块和/或靶向模块是有机小分子。在某些实施例中，作用模块和靶向模块两者都是多肽，例如抗体或其抗原结合片段。在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子的作用模块和靶向模块彼此共价结合。在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强融合分子的作用模块和靶向模块彼此非共价结合。在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子的作用模块和靶向模块存在于相同的融合蛋白内。在其它实施例中，作用模块存在于进一步包括第一结合结构域的第一多肽内，并且靶向模块存在于进一步包括第二结合结构域的第二多肽内，其中所述第一结合结构域和所述第二结合结构域彼此结合。在一些实施例中，第一结合结构域和第二结合结构域是相同的或者是其变体，例如Fc多肽。在一些实施例中，第一结合结构域和第二结合结构域不同于彼此。在特定实施例中，本发明包含使用本文所描述的靶向模块或作用模块中的任何模块的片段或变体，包含参考分子的功能性片段或变体。
在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子(例如，融合蛋白)具有选自以下的式：R1-L-R2和R2-L-R1，其中R1是结合ZNRF3/RNF43的作用模块，R2是结合组织特异性细胞表面受体的靶向模块并且L是接头，并且其中L可以不存在或存在。R1和R2各自分别可以是本文所描述的各个作用模块和靶向模块中的任何模块。R1和R2各自分别可以是能够与E3连接酶(ZNRF3或RNF43)或者靶向组织或细胞中的一个或多个结合的任何部分。例如，R1和R2各自可以是但不限于选自以下的部分：多肽(例如，抗体或其抗原结合片段或者不同于抗体的肽或多肽)、小分子和天然配体或其变体、片段或者衍生物。在某些实施例中，天然配体是多肽、小分子、离子、氨基酸、脂质或糖分子。作用模块和靶向模块(即，R1和R2)可以是彼此相同类型的部分，或者作用模块和靶向模块可以是不同类型的部分。在特定实施例中，R2是其抗原结合片段的抗体，并且在某些实施例中，R2包括Fc蛋白或其类似物。
在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子包括单个分子(例如，多肽)，而在其它实施例中，Wnt信号增强融合分子包括彼此结合(例如，彼此非共价结合)的两个或更多个分子(例如，多肽)。例如，在一个实施例中，组织特异性Wnt信号增强融合物包括分别具有式R3-L1和R4-L2的两个分子，其中R3是作用模块，R4是靶向模块，并且其中L1基团和L2基团彼此结合例如以形成二聚体。在各种实施例中，L1基团和L2基团彼此相同或彼此不同。L1基团或L2基团的一个实例是Fc序列，例如鼠类Fc2b或人Fc1，鼠类Fc2b或人Fc1中的每一个在本领域中是已知的。R3和R4各自分别可以是本文所描述的各个作用模块和靶向模块中的任何模块。R3和R4各自分别可以是能够与E3连接酶(ZNRF3和/或RNF43)或者靶向组织或细胞中的一个或多个结合的任何部分。在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子包括结合E3连接酶(ZNRF3和/或RNF43)中的一个或多个连接酶的抗体或其结合片段，其中抗体重链和/或抗体轻链包括结合靶向组织或细胞的附加结合结构域。在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子包括结合靶向组织或细胞的抗体或其结合片段，其中抗体重链和/或抗体轻链包括结合E3连接酶(ZNRF3和/或RNF43)中的一个或多个连接酶的附加结合结构域。附加结合结构域可以与抗体的N端或C端直接融合，例如作为重链或轻链融合蛋白，或者附加结合结构域可以经由接头部分附加到重链或轻链，例如到重链或轻链的N端、C端或内部氨基酸。在某些实施例中，抗体是IgG。
在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子(例如，融合蛋白)增加与融合蛋白接触的肝组织或肝细胞中的Wnt信号传导。在特定实施例中，肝组织或细胞类型中的Wnt信号传导增加了至少50％、至少两倍、至少三倍、至少四倍、至少五倍或至少十倍。
组织特异性Wnt信号增强分子可以通过本领域中已知且可获得的有机合成和分子生物学的标准方法来产生。例如，组织特异性Wnt信号增强融合蛋白可以通过融合靶向模块(例如，结合ASGR1或ASGR2的抗体或其抗原结合片段)与作用模块(例如，对应于氨基酸残基N37-R95的单独的人R-脊椎蛋白2弗林蛋白酶结构域1或者人R-脊椎蛋白2弗林蛋白酶结构域1、然后是弗林蛋白酶结构域2，其中弗林蛋白酶结构域2与LGR蛋白的相互作用通过点突变例如F105A和F109A单独地或组合地被消除或受损)来生成。在某些实施例中，靶向模块和作用模块通过接头例如甘氨酸-丝氨酸接头与位于组织特异性Wnt信号增强分子的N端的任一结构域融合。在某些实施例中，靶向模块和作用模块通过蛋白接头(例如，白蛋白)融合。“融合”靶向模块与作用模块的另外的方式包含但不限于例如“杵臼结构(knob-in-hole)”或亮氨酸拉链介导的二聚化。可以使对靶向模块、作用模块(和任选地接头)进行编码的DNA序列基因工程化以对期望的融合蛋白进行编码。
对于包含抗体重链和轻链的组织特异性Wnt信号增强融合分子，对融合蛋白的不同部分进行编码的DNA序列可以使用标准分子克隆技术插入到细菌或真核表达载体中并且在适合的宿主细胞中进行表达。被表达的融合蛋白可以使用蛋白质科学中的标准技术例如亲和、离子交换和尺寸排阻色谱法纯化到均质。本公开还包含本文所描述的多肽作用模块、靶向模块和融合蛋白中的任何多肽作用模块、靶向模块和融合蛋白的功能性片段和变体，包含与本文所描述的作用模块、靶向模块或融合蛋白具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的多肽序列同一性的变体。与本文所公开的序列中的任何序列相比，这种变体可以包括一个或多个氨基酸修饰，例如一个或多个氨基酸缺失、插入或取代。在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强融合蛋白的功能性片段和变体与其源自的组织特异性Wnt信号增强融合蛋白相比，具有至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更多的Wnt信号增强活性。在某些实施例中，多肽作用模块的功能性片段和变体与其源自的作用模块相比，具有至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更多的Wnt信号增强活性(当在整个组织特异性Wnt信号增强分子的背景下测量时)。在某些实施例中，靶向模块的功能性片段和变体与其源自的靶向模块相比，具有至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％或更多的结合活性。
本公开还包含对本文所描述的一个或多个组织特异性Wnt信号增强分子或其组分例如融合蛋白或其变体进行编码的多核苷酸或核酸序列、包括这些多核苷酸的载体以及包括这些载体的细胞，所述载体包含表达载体。在某些实施例中，多核苷酸或核酸序列是DNA或RNA。在特定实施例中，RNA是信使RNA(mRNA)。在某些实施例中，RNA是包括一个或多个经过修饰的核苷的经过修饰的mRNA。包括一个或多个经过修饰的核苷的经过修饰mRNA已经被描述为相比于未经过修饰的mRNA具有优势，所述优势包含稳定性增加、表达水平更高和免疫原性降低。例如，以下中描述了可以根据本发明使用的经过修饰的mRNA的非限制性实例：PCT专利申请公开第WO2011/130624号、第WO2012/138453号、第WO 2013052523号、第WO2013151666号、第WO2013/071047号、第WO2013/078199号、第WO 2012045075号、第WO2014081507号、第WO2014093924号、第WO 2014164253号；美国专利申请第US 8,278,036号(描述了包括假尿苷的经过修饰的mRNA)、第US 8,691,966号(描述了包括假尿苷和/或N1-甲基假尿苷的经过修饰的mRNA)、第US 8,835,108号(描述了包括5-甲基胞苷的经过修饰的mRNA)、第US 8,748,089号(描述了包括假尿苷或1-甲基假尿苷的经过修饰的mRNA)。在特定实施例中，与未经过修饰的A、G、U或C核糖核苷相比，对组织特异性Wnt信号增强多肽进行编码的经过修饰的mRNA序列包括至少一个修饰。在特定实施例中，所述至少一个经过修饰的核苷包含N1-甲基假尿苷和/或5-甲基胞苷。在特定实施例中，经过修饰的mRNA包括5'端帽序列、接着是对组织特异性Wnt信号增强多肽进行编码的序列、接着是3'拖尾序列，如polyA或polyA-G序列。
在特定实施例中，多核苷酸是载体，例如表达载体，并且表达载体包括对与启动子序列可操作地连接的本文所描述的组织特异性Wnt信号增强融合分子(例如，融合蛋白或者附加的抗体的一条链或两条链)进行编码的多核苷酸序列，所述启动子序列例如驱动多核苷酸在细胞中的表达的启动子序列。在某些实施例中，载体是病毒载体，例如包括多核苷酸的病毒，所述多核苷酸包括表达盒，所述表达盒包括与对组织特异性Wnt信号增强多肽进行编码的DNA或RNA序列可操作地连接的启动子。在特定实施例中，表达盒包括5'和/或3'细胞或病毒UTR或其衍生物。
本公开还包含本文所描述的多核苷酸的功能性片段和变体，包含与本文所描述的多核苷酸具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的多核苷酸序列同一性的变体。与本文所公开的序列中的任何序列相比，这种变体可以包括一个或多个核苷酸或核苷修饰，例如一个或多个核苷酸缺失、插入或取代。在特定实施例中，本文所描述的多核苷酸被密码子优化，例如以增强经过编码的多肽在宿主细胞中的表达。在特定实施例中，多核苷酸变体包括一个或多个经过修饰的核苷酸或核苷。
本公开还包含包括对本文所描述的组织特异性Wnt信号增强分子例如融合蛋白进行编码的多核苷酸或载体的细胞。在某些实施例中，细胞是宿主细胞，例如可以用于产生组织特异性Wnt信号增强融合蛋白的HEK293细胞。在制备主题组合物时，可以采用任何宿主细胞，包含但不限于例如哺乳动物细胞(例如，293细胞)、昆虫细胞(例如，SF9细胞)、微生物和酵母。在某些实施例中，细胞对用本文所描述的组织特异性Wnt信号增强多肽治疗的受试者而言是异源或自体的。在特定实施例中，细胞从受试者获得并且用本文所描述的病毒载体进行转导。在特定实施例中，经过转导的细胞被递送到受试者以用于治疗。
本公开还包含包括一种或多种组织特异性Wnt信号增强分子(例如，融合蛋白)或者一种或多种多核苷酸或载体的药物组合物，所述一种或多种多核苷酸或载体包括对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的序列。
可以使用本领域中已知且可获得的技术和测定来测量Wnt信号传导。在某些实施例中，使用对应于靶组织或细胞类型的细胞系来确定Wnt信号传导的增加。在特定实施例中，在Wnt信号反应性启动子的控制下，细胞系含有具有标志物基因(例如，荧光素酶基因)的报告基因质粒。通过单独添加弗林蛋白酶结构域1(或与弗林蛋白酶结构域2、F105A点突变和/或F109A点突变一起)作为阴性对照或添加功能性R-脊椎蛋白(全长或弗林蛋白酶结构域1和2)作为阳性对照，可以确定细胞响应于Wnt3a、Wnt3a条件培养基或Wnt3a重组源的增强的报告基因活性。响应于组织特异性Wnt信号增强分子的报告基因活性还可以通过使报告基因细胞系与组织特异性Wnt信号增强分子接触来确定。阴性对照的报告基因活性可以是基本上、显著地或完全阴性的，并且在报告基因活性增加时，组织特异性Wnt信号增强分子和阳性对照应当示出增加的Wnt信号传导反应。另外的对照可以包含单独的抗ASGR1抗体(阴性)、使用抗GFP抗体代替抗ASGR1抗体的融合蛋白(阴性)以及完整的弗林蛋白酶结构域1-弗林蛋白酶结构域2蛋白(阳性)。可以通过类似地测量响应于用除靶向细胞类型或组织之外的细胞类型或组织中的组织特异性Wnt信号增强分子进行的治疗的报告基因活性来确定组织特异性Wnt信号增强分子的组织特异性。在某些实施例中，通过组织特异性Wnt信号增强分子结合的靶向组织中的报告基因活性比非靶向组织高，例如高至少50％、至少两倍、至少三倍、至少四倍、至少五倍或至少十倍。
在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强多肽包括作用模块和靶向模块的任何组合，所述组合包含本文所描述的作用模块和靶向模块中的任何模块的任何组合。在特定实施例中，作用模块和靶向模块通过接头例如白蛋白(例如，人血清白蛋白)、肽基接头或非肽基接头连接，其中所述靶向模块和所述作用模块处于接头例如Fc或白蛋白、肽基接头或非肽基接头的N端和C端。
组织特异性Wnt信号增强分子还可以如本领域中已知的与如聚乙二醇(PEG)、Fc、白蛋白等部分连接，以增强体内稳定性。
组织特异性Wnt信号增强分子的说明性非限制性实例包含以下：
a)骨组织特异性Wnt信号增强多肽，所述骨组织特异性Wnt信号增强多肽包括：作用模块，所述作用模块包括增强Wnt信号传导的能力降低的R-脊椎蛋白(例如，人R-脊椎蛋白2)的变体或片段；以及靶向模块，所述靶向模块与PTH1R特异性地结合，其中所述组织特异性Wnt信号增强多肽增加了骨组织中的Wnt信号传导并且可以用于治疗骨组织疾病或病状；
b)肝组织特异性Wnt信号增强多肽，所述肝组织特异性Wnt信号增强多肽包括：作用模块，所述作用模块包括增强Wnt信号传导的能力降低的R-脊椎蛋白(例如，人R-脊椎蛋白2)的变体或片段；以及靶向模块，所述靶向模块与ASGR1、ASGR2、TFR2或SLC10A1特异性地结合，其中所述组织特异性Wnt信号增强多肽增加了肝组织中的Wnt信号传导并且可以用于治疗肝组织疾病或病状；或者
c)口腔粘膜组织特异性Wnt信号增强多肽，所述口腔粘膜组织特异性Wnt信号增强多肽包括：作用模块，所述作用模块包括增强Wnt信号传导的能力降低的R-脊椎蛋白(例如，人R-脊椎蛋白2)的变体或片段；以及靶向模块，所述靶向模块与LYPDS3或DSG3特异性地结合，其中所述组织特异性Wnt信号增强多肽增加了口腔粘膜组织中的Wnt信号传导并且可以用于治疗口腔粘膜组织疾病或病状。
组织特异性Wnt信号增强分子的说明性非限制性实例包含随附的实例和序列中描述的那些，包含但不限于表1中描述的那些。在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子包括本文所公开的两个或更多个多肽序列，例如呈附加IgG或抗体格式。本文公开的多肽包含但不限于包括与表1所示的序列中的任何序列以及其片段和变体具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的同一性的序列或由其组成的多肽。在特定实施例中，多肽包括表1所示的序列(例如，所述序列可能缺乏标签(例如，His标签或Flag标签)或其它另外的序列)中的任何序列以及其片段和变体内存在的作用模块或靶向模块。在某些实施例中，多肽具有作为作用模块和/或靶向模块的活性。
本文所公开的多核苷酸的说明性非限制性实例包含对本文所描述的多肽、变体和片段中的任何多肽、变体和片段进行编码的任何多核苷酸，包含上文所描述的那些。在某些实施例中，多核苷酸对具有作为功能性结构域和/或靶向模块的活性的多肽进行编码。
表1.序列标识符的描述
Figure BDA0002940321710000301
Figure BDA0002940321710000311
Figure BDA0002940321710000321
Figure BDA0002940321710000331
作用模块
R-脊椎蛋白能够放大Wnt信号。R-脊椎蛋白的最小功能性单元由两个弗林蛋白酶结构域即与ZNRF3/RNF43 E3连接酶结合的弗林蛋白酶结构域1和与LGR4-6结合的弗林蛋白酶结构域2构成，从而使R-脊椎蛋白、LGR和E3连接酶在一起形成三元复合物。这导致整个复合物内化并且ZNRF3/RNF43从ZNRF3/RNF43的破坏靶标中移除。单独的弗林蛋白酶结构域1不具有功能性，但是能够与ZNRF3和RNF43两者结合。
本文所描述的组织特异性Wnt信号增强分子的作用模块可以是但不限于可以与ZNRF3/RNF43连接酶结合的任何功能性部分，例如多肽或有机化学品。在特定实施例中，作用模块例如包括R-脊椎蛋白的弗林蛋白酶结构域1的多肽单独地或与靶向模块一起在非靶组织中基本上无活性，以便使潜在的脱靶效应最小化。在组织特异性Wnt信号增强分子的背景下，作用模块与靶向模块融合或结合，并且当组织特异性Wnt信号增强分子与表达组织特异性受体的靶组织接合时，E3连接酶ZNRF3/RNF43被募集到与组织特异性受体的第三复合物，从而使E3连接酶ZNRF3/RNF43重定位在细胞表面上、被螯合和/或从细胞表面清除。
在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白多肽(例如，R-脊椎蛋白1-4中的任何R-脊椎蛋白)的片段或变体或者R-脊椎蛋白多肽的功能性片段或变体。在特定实施例中，作用模块包括野生型R-脊椎蛋白的片段，并且在其它实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白的片段，所述片段包括一个或多个氨基酸修饰。R-脊椎蛋白可以是本领域中已知的任何R-脊椎蛋白或其同源物，包含来自任何动物物种的R-脊椎蛋白，所述动物物种包含但不限于哺乳动物物种，如人R-脊椎蛋白。已经鉴别和描述了R-脊椎蛋白，并且其多肽和编码多核苷酸序列在本领域中是已知且可获得的。在特定实施例中，R-脊椎蛋白多肽是人R-脊椎蛋白或在其它脊椎动物或非脊椎动物中发现的同源物，例如小鼠R-脊椎蛋白。图1和SEQ ID NO:1-4中分别提供了人R-脊椎蛋白1、人R-脊椎蛋白2、人R-脊椎蛋白3和人R-脊椎蛋白4以及其弗林蛋白酶结构域1的氨基酸序列。其同源物和变体可从通用数据库搜索中获得，如https://www.dot.ncbi.dot.nlm.dot.nih.dot.gov/protein/。本发明包含(但不限于)作用模块，所述作用模块包括这些或其它R-脊椎蛋白中的任何R-脊椎蛋白的片段和变体或由其组成。在各种实施例中，与野生型R-脊椎蛋白多肽相比，R-脊椎蛋白多肽中的任何R-脊椎蛋白多肽的变体和其片段包括一个或多个氨基酸修饰，例如缺失、添加或取代。所述一个或多个修饰可以存在于R-脊椎蛋白的变体或其片段的任何区域中，所述区域包含但不限于弗林蛋白酶结构域1和/或弗林蛋白酶结构域2。应当理解，弗林蛋白酶结构域1或弗林蛋白酶结构域2外部的氨基酸修饰可以改变所得变体，从而使得所得变体与野生型R-脊椎蛋白或其片段相比具有降低的LGR4-6结合活性。
在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白序列或其变体或者片段或由其组成，例如全长或野生型R-脊椎蛋白-1、全长或野生型R-脊椎蛋白-2、全长或野生型R-脊椎蛋白-3或者全长或野生型R-脊椎蛋白-4，任选地人R-脊椎蛋白-1、人R-脊椎蛋白-2、人R-脊椎蛋白-3或人R-脊椎蛋白-4。在特定实施例中，作用结构域是R-脊椎蛋白-1-4中的任何R-脊椎蛋白的变体，所述变体与对应的野生型R-脊椎蛋白-1-4序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。在某些实施例中，作用模块包括包含一个或多个氨基酸修饰的全长R-脊椎蛋白(例如，R-脊椎蛋白-1-4中的任何R-脊椎蛋白)或由其组成，所述一个或多个氨基酸修饰包含但不限于本文所公开的那些氨基酸修饰中的任何氨基酸修饰。在某些实施例中，作用模块包括野生型或经过修饰的R-脊椎蛋白(例如，R-脊椎蛋白-1-4中的任何R-脊椎蛋白)的片段或由其组成。在特定实施例中，片段能够与ZNRF3和/或RNF43结合。在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白的弗林蛋白酶结构域1或者R-脊椎蛋白蛋白的片段或变体。在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白(例如，R-脊椎蛋白-1-4)的一个或多个(例如，一个、两个、三个或更多个)弗林蛋白酶结构域1或其变体，所述变体与R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶1结构域或其变体或者片段以及R-脊椎蛋白弗林蛋白酶2结构域或其变体或者片段。在某些实施例中，作用模块包括结合ZNRF3/RNF43的抗体或其抗原结合片段。在特定实施例中，作用模块与ZNRF3或RNF43特异性地结合。
在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白例如人R-脊椎蛋白1或人R-脊椎蛋白2的一个或多个弗林蛋白酶结构域1或其变体。在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白的一个或多个弗林蛋白酶结构域1，但不包括R-脊椎蛋白的弗林蛋白酶结构域2。在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白的一个或多个弗林蛋白酶结构域1，并且作用模块包括R-脊椎蛋白的经过修饰的或变体弗林蛋白酶结构域2，例如与野生型弗林蛋白酶结构域2相比具有降低的活性的弗林蛋白酶结构域2。在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白，所述R-脊椎蛋白具有R-脊椎蛋白的经过修饰的或变体弗林蛋白酶结构域2，例如与野生型弗林蛋白酶结构域2相比具有降低的活性的弗林蛋白酶结构域2。在某些实施例中，作用模块包括两个或更多个弗林蛋白酶结构域1或其变体或者弗林蛋白酶结构域1或其变体的多聚体。在某些实施例中，作用模块包括变体R-脊椎蛋白弗林蛋白酶1结构域，所述变体R-脊椎蛋白弗林蛋白酶1结构域包括例如在对应于人R-脊椎蛋白2的K58、H76、S77、R86和/或N91的氨基酸残基处的一个或多个点突变。在某些实施例中，作用模块包括变体R-脊椎蛋白弗林蛋白酶2结构域，所述变体R-脊椎蛋白弗林蛋白酶2结构域包括例如在对应于人R-脊椎蛋白2的F105、F109和/或K121的氨基酸残基处的一个或多个点突变。在特定实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白的经过修饰的或变体弗林蛋白酶结构域1，所述经过修饰的或变体弗林蛋白酶结构域1与野生型弗林蛋白酶结构域1相比具有增加的活性，例如与ZNRF3/RNF43的结合。作用模块可以进一步包括另外的部分或多肽序列例如的另外的氨基酸残基以稳定作用模块的或作用模块所存在于的组织特异性Wnt信号增强分子的结构。在某些实施例中，作用模块在与R-脊椎蛋白不具有明显的/强烈的序列同源性的情况下包括肽或多肽，但是与ZNRF3/RNF43的结合亲和力与R-脊椎蛋白与ZNRF3/RNF43的亲和力相当或比其更高。
在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白多肽(例如，人R-脊椎蛋白)的弗林蛋白酶结构域1或者其功能性片段或变体以及R-脊椎蛋白多肽(例如，人R-脊椎蛋白)的经过修饰的或变体弗林蛋白酶结构域2，其中所述经过修饰的弗林蛋白酶结构域2与对应的野生型弗林蛋白酶结构域2相比，与LGR4-6具有降低的结合亲和力(参见图1和4)。在某些实施例中，弗林蛋白酶结构域2包括例如在对应于人R-脊椎蛋白2的F105和/或F109的氨基酸残基处的一个或多个点突变。通过比较其它R-脊椎蛋白多肽的氨基酸序列与人R-脊椎蛋白2，技术人员可以容易地确定其它R-脊椎蛋白多肽中的对应的氨基端残基。在某些实施例中，作用模块包括弗林蛋白酶结构域1或其变体和弗林蛋白酶结构域2或其变体，其中所述弗林蛋白酶结构域1和/或所述弗林蛋白酶结构域2包括一个或多个点突变。作用模块内的所述一个或多个点突变(相比于对应的野生型R-脊椎蛋白序列)可以发生在弗林蛋白酶结构域1和/或弗林蛋白酶结构域2内的任何氨基酸残基处，所述氨基酸残基包含但不限于例如氨基酸残基K58、H76、S77、R86、N91、F105、F109或K121以及可以被修饰以降低与LGR4-6的结合亲和力的其它残基。已经鉴别出对人R-脊椎蛋白1的功能活性重要的人R-脊椎蛋白1的弗林蛋白酶结构域1和弗林蛋白酶结构域2的区域，所述区域包含保守的亲水残基S48、N51、R66、R70和Q71以及保守性较低的疏水残基L46、L54、I62和L64，所述残基对与E3连接酶的结合而言具有重要性。另外，在人R-脊椎蛋白1弗林蛋白酶结构域1中，氨基酸残基K59、S78、D85、R87、N88和N92与LGR5形成亲水相互作用表面，并且FSHNF氨基酸序列已经被鉴别为对疏水表面而言具有重要性的环。在特定实施例中，包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1和/或弗林蛋白酶结构域2的作用模块可以包括在这些区域、表面或氨基酸残基中的任何区域、表面或氨基酸残基内的一个或多个突变。在特定实施例中，包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1和/或弗林蛋白酶结构域2的作用模块可以包括在这些区域、表面或氨基酸残基外的一个或多个突变或其它改变，所述一个或多个突变或其它改变通过影响结合表面的结构和/或稳定性间接损害了LGR4-6结合。在某些实施例中，包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1和/或弗林蛋白酶结构域2的作用模块可以包括任何氨基酸残基处的一个或多个突变，所述一个或多个突变包含但不限于随附的实例中描绘的那些突变中的任何突变。在特定实施例中，作用模块包括经过修饰的弗林蛋白酶结构域2，所述弗林蛋白酶结构域2包括氨基酸残基F105和/或F109处的氨基酸取代。在特定实施例中，作用模块包括弗林蛋白酶1结构域和经过修饰的弗林蛋白酶结构域2，所述弗林蛋白酶1结构域和经过修饰的弗林蛋白酶结构域2包括氨基酸残基F105和/或F109处的氨基酸取代。在特定实施例中，作用模块包括经过修饰的弗林蛋白酶1结构域和经过修饰的弗林蛋白酶2结构域，其中在某些实施例中，所述经过修饰的弗林蛋白酶1结构域在氨基酸R65、R69和/或Q70处包括一个或多个氨基酸修饰，并且所述经过修饰的弗林蛋白酶结构域在氨基酸F105和/或F109处包括一个或多个氨基酸修饰。在特定实施例中，经过修饰的弗林蛋白酶结构域2与LGR4-6的结合亲和力比对应的野生型弗林蛋白酶结构域2的结合低80％、50％、20％或10％，例如在全长R-脊椎蛋白的背景下。
在某些实施例中，作用模块包括R-脊椎蛋白多肽(例如，人R-脊椎蛋白)的弗林蛋白酶结构域1或其功能性片段或者变体和R-脊椎蛋白多肽(例如，人R-脊椎蛋白)的未经过修饰的弗林蛋白酶结构域2。虽然在某些实施例中，更期望与对应的野生型弗林蛋白酶结构域2相比与LGR4-6具有降低的结合亲和力的经过修饰的弗林蛋白酶结构域2来增加组织靶向特异性，但是在特定实施例中，与靶向模块组合的未经过修饰的弗林蛋白酶结构域2与没有靶向模块的野生型R-脊椎蛋白相比具有经过改进的组织靶向性并且在某些背景下具有实用性。
在某些实施例中，作用模块包括例如来自R-脊椎蛋白-1、R-脊椎蛋白-2、R-脊椎蛋白-3、R-脊椎蛋白-4中的任何R-脊椎蛋白，任选地人R-脊椎蛋白-1、人R-脊椎蛋白-2、人R-脊椎蛋白-3或人R-脊椎蛋白-4的野生型或经过修饰的R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1。在特定实施例中，作用模块包括例如来自R-脊椎蛋白-1、R-脊椎蛋白-2、R-脊椎蛋白-3、R-脊椎蛋白-4中的任何R-脊椎蛋白，任选地人R-脊椎蛋白-1、人R-脊椎蛋白-2、人R-脊椎蛋白-3或人R-脊椎蛋白-4的R-脊椎蛋白弗林蛋白酶1结构域和野生型或经过修饰的R-脊椎蛋白弗林蛋白酶2结构域。在特定实施例中，作用模块包括例如来自R-脊椎蛋白-1、R-脊椎蛋白-2、R-脊椎蛋白-3、R-脊椎蛋白-4中的任何R-脊椎蛋白，任选地人R-脊椎蛋白-1、人R-脊椎蛋白-2、人R-脊椎蛋白-3或人R-脊椎蛋白-4的第一R-脊椎蛋白弗林蛋白酶1结构域和第二野生型或经过修饰的R-脊椎蛋白弗林蛋白酶1结构域。在特定实施例中，相比于对应的野生型弗林蛋白酶结构域2的结合，经过修饰的弗林蛋白酶结构域2与LGR4-6具有相当的结合亲和力或与LGR4-6具有小于80％、小于50％、小于20％或小于10％的结合亲和力，例如在全长R-脊椎蛋白的背景下。
在某些实施例中，作用模块包括特异性地结合ZNRF3和/或RNF43的抗体或其抗原结合片段。在特定实施例中，作用模块包括与人RNF43(hRNF43，NCBI参考序列XP_011523257.1，残基44-198；SEQ ID NO:43-44)或人ZNRF3(hZNRF3；NCBI参考序列NP_001193927.1，残基56-219；SEQ ID NO:45-46)结合的抗体或其抗原结合片段。在特定实施例中，作用模块是抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：a)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或b)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。在特定实施例中，分离的抗体或其抗原结合片段包括重链可变区、轻链、纳米抗体或scFv序列，所述重链可变区、轻链、纳米抗体或scFv序列包括与这些抗体中的任何抗体的重链可变区、轻链、纳米抗体或scFv具有至少90％同一性的氨基酸序列，例如，SEQ ID NO:78-154或165-170中的任何氨基酸序列。VL指示可变轻链，并且VH指示可变重链序列。
表2A：针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的克隆ID和CDR序列
Figure BDA0002940321710000381
Figure BDA0002940321710000391
表2A(续)
Figure BDA0002940321710000392
Figure BDA0002940321710000401
Figure BDA0002940321710000411
表2B.序列标识符的描述
Figure BDA0002940321710000412
Figure BDA0002940321710000421
Figure BDA0002940321710000431
Figure BDA0002940321710000441
Figure BDA0002940321710000451
Figure BDA0002940321710000461
表2C：E3连接酶结合剂的结合数据
克隆ID 特异性 Octet KD(M) Octet KD(M)
020S-E06 RNF43 未测试 未测试
020S-F06 RNF43 未测试 未测试
028S-B01 RNF43 未测试 未测试
028S-E01 RNF43 NB NB
028S-G01 RNF43 未测试 未测试
028S-H01 RNF43 NB NB
028S-B02 RNF43 NB NB
028S-C02 RNF43 NB NB
024S-A02 RNF43、ZRNF3 1.01E-05 *
028S-D02 ZNRF3 3.32E-06 *
020S-H06 ZNRF3 NB NB
020S-A07 ZNRF3 NB NB
020S-B07 ZNRF3 NB NB
020S-D07 RNF43、ZNRF3 NB NB
020S-E07 ZNRF3 NB NB
020S-F07 RNF43、ZNRF3 NB NB
028S-H02 ZNRF3 2.63E-06 *
028S-C03 ZNRF3 2.51E-08 ***
028S-A04 ZNRF3 3.62E-08 ***
028S-B04 ZNRF3 2.56E-07 **
028S-C04 ZNRF3 1.64E-07 **
028S-D04 ZNRF3 8.74E-07 **
028S-E04 ZNRF3 9.53E-08 ***
028S-H04 ZNRF3 4.80E-08 ***
028S-B06 ZNRF3 7.64E-07 **
028S-G06 ZNRF3 1.09E-07 **
028S-B07 ZNRF3 6.54E-08 ***
028S-H07 ZNRF3 NB NB
028S-D08 ZNRF3 1.39E-06 *
028S-E08 ZNRF3 3.90E-06 *
028S-F08 ZNRF3 1.04E-06 *
028S-A09 ZNRF3 1.25E-05 *
028S-D09 ZNRF3 3.54E-07 **
028S-E10 ZNRF3 4.16E-06 *
028S-G10 ZNRF3 6.84E-07 **
028S-A11 ZNRF3 2.03E-07 **
SC-01 RNF43 未测试 未测试
SC-02 RNF43 未测试 未测试
NV-01 ZNRF3 未测试 未测试
*指示KD≥1uM，**指示1uM>KD≥100nM，***指示100nM>KD，
NB指示无结合
结合特异性通过ELISA确定
靶向模块
特异性组织内的特异性细胞类型和细胞可以包括一个或多个细胞特异性或组织特异性表面分子，如细胞表面受体。如本文所使用的，如果与一种或多种其它细胞或组织类型或者任何其它细胞或组织类型相比，特异性细胞或组织类型中存在更大数量的分子，则所述分子被认为具有细胞特异性或组织特异性。在某些实施例中，与所述一种或多种其它细胞或组织类型或者任何其它细胞或组织类型中的数量相比，所述更大数量为至少两倍、至少五倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍或至少100倍。在特定实施例中，细胞特异性表面分子例如与一个或多个其它非靶向器官、组织或细胞类型相比，在靶器官、组织或细胞类型上的表达增加或增强，例如期望增强Wnt信号传导例如以治疗或预防疾病或病症的器官、组织或细胞类型。在某些实施例中，分别与一种或多种其它器官、组织或细胞类型相比，细胞特异性表面分子优先表达在靶器官、组织或细胞类型的表面上。例如，在特定实施例中，与分别在一种或多种、五种或更多种所有其它器官、组织或细胞中或者在平均的所有其它器官、组织或细胞中表达相比，如果在靶器官、组织或细胞中表达细胞表面受体的水平高至少两倍、至少五倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍，则细胞表面受体被认为是组织特异性或细胞特异性细胞表面分子。在某些实施例中，组织特异性或细胞特异性细胞表面分子是细胞表面受体，例如包括位于细胞表面膜内的区域和靶向模块可以结合的细胞外区域的多肽受体。在各种实施例中，本文所描述的方法可以通过以下来实践：特异性地靶向仅表达在靶组织或包含靶组织的组织子集上的细胞表面分子；或特异性地靶向与所有、大多数或大量其它组织相比在靶组织上具有更高表达水平的细胞表面分子，例如，与在至少两个、至少五个、至少十个或至少二十个其它组织上相比在靶组织上具有更高的表达。
在特定实施例中，靶向模块与表达在关注的靶细胞或组织类型上的组织特异性表面分子结合，即期望增强或增加Wnt信号传导活性的细胞或组织类型。与每个组织特异性表面分子结合的靶向模块可以是但不限于抗体或其抗原结合片段、肽、组织特异性或细胞特异性受体的天然配体或其衍生物以及合成的小分子等。
通过靶向模块结合的靶向组织可以是任何组织，例如任何哺乳动物组织或细胞类型。在某些实施例中，靶向组织可以存在于任何器官中。在某些实施例中，靶组织是骨组织、肝组织、皮组织、胃组织、肠组织、口腔粘膜组织、肾组织、中枢神经系统组织、乳腺组织、味蕾组织、卵巢组织、内耳组织(包含耳蜗组织和前庭组织)、毛囊、胰腺组织、视网膜组织、角膜组织、心脏组织或肺组织，并且靶向模块分别与优先表达在以下组织上的组织特异性细胞表面分子(例如，细胞表面受体)结合：骨组织、肝组织、皮组织、胃组织、肠组织、口腔粘膜组织、肾组织、中枢神经系统组织、乳腺组织、味蕾组织、卵巢组织、内耳组织(包含耳蜗组织和前庭组织)、毛囊、胰腺组织、视网膜组织、角膜组织、心脏组织或肺组织。
靶向模块可以与任何细胞类型结合，例如任何组织、器官或动物内的任何细胞，所述动物包含但不限于哺乳动物，如人。在某些实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子与特异性细胞类型结合，例如与靶组织相关的特异性细胞类型。例如，在肝组织中，靶向模块可以与肝细胞、肝细胞的前体和干细胞、胆道细胞和/或内皮细胞或其它血管细胞结合。例如，在骨组织中，靶向模块可以结合产生骨组织中存在的骨细胞、软骨细胞和/或其它细胞的成骨细胞、成骨细胞的前体、间充质干细胞、干细胞和前体细胞。包含但不限于本文所描述的组织的各个组织中存在的细胞类型在本领域中是已知的，并且在各种实施例中，本文所描述的组织特异性Wnt信号增强分子可以结合所述组织类型中的任何组织类型。在某些实施例中，靶向模块与肝组织或肝细胞结合。
脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)包含ASGR1和ASGR2(例如Stockert、Morell和Ashwell,1991,《靶向诊断和疗法(Targeted Diagnostics and Therapy)》4:41-64所综述的)。这个受体是跨膜蛋白，所述跨膜蛋白通过介导具有暴露的末端半乳糖或N-乙酰半乳糖胺残基的糖蛋白的内吞作用和溶酶体降解而在血清糖蛋白稳态中发挥关键作用。因此，AGPR的天然配体和合成配体包含但不限于半乳糖化胆碱酯酶、半乳糖(Gal)和N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、含有GalNAc的分子如GalNAc封端的糖蛋白以及含有的单糖、寡糖或聚糖的分子或纳米颗粒(例如D'Souza和Devarajan,2015,《控释期刊(Journal of ControlledRelease)》,203:126-139所综述的)。
SLC10家族以钠依赖性方式运输胆汁酸、硫酸化溶质和其它异生物质。创始成员SLC10A1(NTCP)和SLC10A2(ASBT)用于维持胆汁酸的肠肝循环。SLC10A的天然配体和合成配体的实例包含但不限于胆酸盐、Na(+)/胆汁酸、Na(+)/牛磺胆酸盐以及乙型肝炎病毒的preS1结构域以及其片段或变体(例如Yan等人,2012《e生命(eLife)》,1:e00049所报告的)。
转铁蛋白受体2(TFR2)是转铁蛋白受体1(TFR1)的同源物，即通过受体介导的二价铁转铁蛋白(Fe2TF)的内吞作用将铁递送到细胞中的蛋白质。TFR2还结合Fe2TF，但TFR2似乎主要用于调节系统性铁稳态(例如Worthen和Enns,2014,《药理学前沿(Frontiers inPharmacology)》5:34所综述的)。TFR2的天然配体和合成配体以及结合配偶体的实例包含但不限于转铁蛋白如二价铁转铁蛋白和血色沉着症(HFE)蛋白以及其片段和变体。
甲状旁腺激素(PTH)和PTH相关肽(PTHrP)的1型受体(PTH1R)高度地表达在骨和肾中(例如Mannstadt、Juppner和Gardella,1999,《美国生理学期刊(American Journal ofPhysiology)》277:F665-F675所综述的)。甲状旁腺激素受体1(PTH1R)的天然配体和合成配体包含但不限于PTH、PTHrP以及其片段和变体。
含Ly6/PLAUR结构域的蛋白3(LYPD3)是在于如口腔粘膜、皮肤和食管等组织中发现的复层鳞状上皮中展现出高度特异性表达的GPI锚定蛋白。在伤口愈合期间在迁移的角化细胞中以及在各种癌中也观察到了LYPD3表达上调(例如Jacobsen、Kriegbaum、Santoni-Rugiu和Ploug,2014,《世界临床肿瘤学期刊(World Journal of Clinical Oncology)》,5(4):621-32)所综述的)。尽管已经报道了LYPD3表达，但是其确切功能仍不清楚，因为缺乏LYPD3基因的动物在鳞状上皮的发育中可存活、可繁殖且没有明显的缺陷。各个分子已经被鉴别为LYPD3的结合配偶体。层粘连蛋白1、层粘连蛋白5和半乳凝素-3与LYPD3缔合以促进细胞迁移(Paret、Bourouba、Beer、Miyazaki、
Figure BDA0002940321710000491
Fiedler和
Figure BDA0002940321710000492
《国际癌症期刊(International Journal of Cancer)》.2005年7月10日；115(5):724-33)。前梯度2(Anterior gradient 2)AGR2与LYPD3相互作用并且促进胰腺导管腺癌(PDAC)的癌生长、转移和对疗法的抗性(Arumugam、Deng、Bover、Wang、Logsdon和Ramachandran,《分子癌症治疗学(Molecular Cancer Therapeutics)》.2015年4月；14(4):941-51)。在缺氧条件下，LYPD3与α6β4整合素和基质金属蛋白酶14(MMP14)形成复合物，所述复合物通过病灶化层粘连蛋白332降解促进了癌细胞的运动性。(Ngora、Galli、Miyazaki和
Figure BDA0002940321710000493
《肿瘤形成(Neoplasia)》.2012年2月；14(2):95-107)。
桥粒芯蛋白3(DSG3)对属于蛋白质的钙粘蛋白细胞粘附分子超家族的成员的钙结合跨膜糖蛋白进行编码。DSG3表达在细胞与细胞粘附的特殊结构桥粒中、在上皮和粘膜中。DSG3具有含有DSG3细胞间相互作用所需的Ca2+结合位点的五个细胞外钙粘蛋白结构域(ECD)(例如Thomason、Scothern、McHarg和Garrod,2010,《生物化学期刊(BiochemicalJournal)》,429(3):419-433所综述的)。DSG3细胞间相互作用由其N端附近的反式同嗜性相互作用(trans-homophilic interaction)介导。动物体内DSG3的损耗会导致非常严重的口腔粘膜糜烂和断奶时脱发，这表明了这个基因对这些组织中的上皮细胞的完整性的重要性。单分子原子力显微镜实验已经示出了经由细胞外钙粘蛋白结构域的同嗜性反式DSG3结合(Heupel、Zillikens、Drenckhahn和Waschke《免疫学期刊(Journal of Immunology》2008年8月1日,181(3)1825-1834)。
在各种实施例中，组织特异性表面分子是组织特异性细胞表面受体。对于肝脏，组织特异性细胞表面受体包含但不限于ASGR1、ASGR2、TFR2、SLC10A1等。在某些实施例中，靶向模块是结合ASGR1、ASGR2、TFR2、SLC10A1、LYPD3或DSG3的天然配体或其功能性变体或者片段或抗体或者其抗原结合片段。对于骨或肾，这种组织特异性细胞表面受体包含但不限于甲状旁腺激素受体1(PTH1R)等。在某些实施例中，靶向模块是结合PTH1R的天然配体或其功能性变体或者片段或抗体或者其抗原结合片段。对于口腔粘膜，这种组织特异性细胞表面受体包含但不限于LYPD3和DSG3。在某些实施例中，靶向模块是结合LYPD3或DSG3的天然配体或其功能性变体或者片段或抗体或者其抗原结合片段。
在特定实施例中，靶向模块与人ASGR1(hASGR1；NCBI参考序列NP_001662.1，残基62-291；SEQ ID NO:35-36)、人ASGR2(hASGR2；NCBI参考序列NP_550436.1，残基66-292；SEQID NO:37-38)、猕猴ASGR1(cynoASGR1，序列ID XP_005582755.1，残基62-291；SEQ ID NO:39-40)或猕猴ASGR2(cynoASGR2；SEQ ID NO:41-42)结合。
在某些实施例中，靶向模块包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：针对表3A中所列抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。在特定实施例中，分离的抗体或其抗原结合片段包括重链可变区、轻链、纳米抗体或scFv序列，所述重链可变区、轻链、纳米抗体或scFv序列包括与这些抗体中的任何抗体的重链可变区、轻链、纳米抗体或scFv具有至少90％同一性的氨基酸序列(例如，SEQID NO:47-77、151-154、171-179、180-185或274-305中的任何氨基酸序列)(参见例如表3B或3C)。
表3A：针对hASGR1/2的结合剂的克隆ID和CDR序列
Figure BDA0002940321710000501
Figure BDA0002940321710000511
Figure BDA0002940321710000521
表3A(续)
Figure BDA0002940321710000522
Figure BDA0002940321710000531
表3B.序列标识符的描述(ASGR靶向模块)
Figure BDA0002940321710000541
Figure BDA0002940321710000551
Figure BDA0002940321710000561
Figure BDA0002940321710000571
Figure BDA0002940321710000581
表3C.序列标识符的描述(替代性靶向模块)
Figure BDA0002940321710000582
Figure BDA0002940321710000591
组织特异性Wnt信号增强分子的说明性非限制性实例包含包括以下的融合蛋白：1)包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或其变体的第一结构域和包括特异性地结合ASGR1或ASGR2的抗体或其片段的第二结构域；2)包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或其变体的第一结构域和包括特异性地结合SLC10A1的抗体或其片段的第二结构域；3)包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或其变体的第一结构域和包括特异性地结合TFR2的抗体或其片段的第二结构域；4)包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或其变体的第一结构域和包括特异性地结合PTH1R的配体衍生物、抗体或其片段的第二结构域；5)包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或其变体的第一结构域和包括特异性地结合LYPD3的配体衍生物、抗体或其片段的第二结构域；6)包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或其变体的第一结构域和包括特异性地结合DSG3的配体衍生物、抗体或其片段的第二结构域；以及7)包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或其变体的第一结构域和包括特异性地结合TFR1的配体衍生物、抗体或其片段的第二结构域。组织特异性Wnt信号增强分子的另外的说明性非限制性实例包含包括以下的融合蛋白：1)包括特异性地结合ZNRF3和/或RNF43的抗体或其片段的第一结构域和包括特异性地结合ASGR1或ASGR2的抗体或其片段的第二结构域；2)包括特异性地结合ZNRF3和/或RNF43的抗体或其片段的第一结构域和包括特异性地结合SLC10A1的抗体或其片段的第二结构域；3)包括特异性地结合ZNRF3和/或RNF43的抗体或其片段的第一结构域和包括特异性地结合TFR2的抗体或其片段的第二结构域；4)包括特异性地结合ZNRF3和/或RNF43的抗体或其片段的第一结构域和包括特异性地结合PTH1R的配体衍生物、抗体或其片段的第二结构域；5)包括特异性地结合ZNRF3和/或RNF43的抗体或其片段的第一结构域和包括特异性地结合LYPD3的配体衍生物、抗体或其片段的第二结构域；6)包括特异性地结合ZNRF3和/或RNF43的抗体或其片段的第一结构域和包括特异性地结合DSG3的配体衍生物、抗体或其片段的第二结构域；以及7)包括特异性地结合ZNRF3和/或RNF43的抗体或其片段的第一结构域和包括特异性地结合TFR1的配体衍生物、抗体或其片段的第二结构域。在特定实施例中，第一结构域包括包含表2中所示的重链或轻链CDR序列的集合中的任何重链或轻链CDR序列的抗体，和/或第二结构域包括包含表3中所示的重链或轻链CDR序列的组中的任何重链或轻链CDR序列的抗体。在特定实施例中，所述两个结构域通过接头例如多肽接头连接。在某些实施例中，接头是白蛋白，例如人血清白蛋白，其中靶向模块和作用模块处于白蛋白的N端和C端。在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子具有包括抗体重链和抗体轻链(或任一条链或两条链的片段或其变体)的附加抗体(例如，IgG)格式，其中一条链或两条链进一步包括一个或多个另外的结合结构域。在特定实施例中，组织特异性Wnt信号增强分子具有附加抗体(例如，IgG)格式，其中第二结构域包括抗体重链和抗体轻链(或任一条链或两条链的片段或其变体)，并且其中包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或变体的第一结构域例如在任一条链或两条链的N端和/或C端处附加到抗体重链和/或轻链中的一条链或两条链。在特定实施例中，第一结构域例如在N端或C端处附加或融合到重链。在特定实施例中，第一结构域例如在N端或C端处附加或融合到轻链。
接头
在某些实施例中，靶向模块和作用模块彼此直接结合或融合，而在其它实施例中，靶向模块和作用模块通过接头例如多肽接头或非肽基接头等分离。在特定实施例中，接头是Fc接头，例如能够与另一个Fc接头例如经由一个或多个二硫键二聚化的抗体Fc结构域的区域。在另一个特定实施例中，接头是白蛋白，例如人血清白蛋白，其中靶向模块和作用模块处于白蛋白的N端和C端。
在某些实施例中，特别是当连接两个多肽时，接头由通过肽键连接在一起的氨基酸构成。在特定实施例中，接头的长度包括1个直到约40个氨基酸残基、1个直到约20个氨基酸残基或1个到约10个氨基酸残基。在某些实施例中，接头中的氨基酸残基来自这二十个经典氨基酸，并且在某些实施例中，选自半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和/或丝氨酸。在某些实施例中，接头包括一个或多个非天然氨基酸。在一些实施例中，肽基接头由无空间位阻的大多数氨基酸构成，如通过肽键连接的甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸。某些接头包含聚甘氨酸、聚丝氨酸和聚丙氨酸或这些氨基酸中的任何氨基酸的组合。一些示例性肽基接头是poly(Gly)1-8、尤其是(Gly)3、(Gly)4(SEQ ID NO:698)、(Gly)5(SEQ IDNO:699)和(Gly)7(SEQ ID NO:700)以及poly(Gly)4Ser(SEQ ID NO:701)、poly(Gly-Ala)2-4和poly(Ala)1-8。肽基接头的其它具体实例包含(Gly)5Lys(SEQ ID NO:702)和(Gly)5LysArg(SEQ ID NO:703)。为了解释以上命名法，例如(Gly)3Lys(Gly)4(SEQ ID NO:704)意指Gly-Gly-Gly-Lys-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO:704)。Gly和Ala的其它组合也是有用的。另外，肽基接头还可以包括非肽基区段，如式--CH2--CH2--CH2--CH2--CH2--CH2--的6碳脂肪族分子。可以改变肽基接头以形成如本文所描述的衍生物。
说明性非肽基接头包含例如烷基接头，如--NH--(CH2)s--C(O)--，其中s＝2-20。这些烷基接头可以进一步被任何无空间位阻的基团取代，如低级烷基(例如，C1-C6)、低级酰基、卤素(例如，Cl、Br)、CN、NH2、苯基等。可以通过常规有机化学反应合成本发明的物质组合物的非肽部分，如非肽基接头或非肽半衰期延伸部分。如本领域中已知的，可用于连接结合结构域的化学基团包含：氨基甲酸酯；酰胺(胺加羧酸)；酯(醇加羧酸)、硫醚(卤代烷加巯基；马来酰亚胺加巯基)、席夫碱(Schiff's base)(胺加醛)、尿素(胺加异氰酸酯)、硫脲(胺加异硫氰酸酯)、磺胺(胺加磺酰氯)、二硫化物；腙、脂质等。
结构域之间的连接可以包括间隔基(spacer)，例如烷基间隔基，所述间隔基可以是直链的或支链的，通常是直链的，并且可以包含一个或多个不饱和键；通常具有一个到约300个碳原子；更通常具有约一个到25个碳原子；并且可以是约三个到12个碳原子。这种类型的间隔基还可以包括杂原子或官能团，包含胺、醚、磷酸二酯等。关注的具体结构包含：(CH2CH2O)n，其中n为1到约12；(CH2CH2NH)n，其中n为1到约12；[(CH2)n(C＝O)NH(CH2)m]z，其中n和m为1到约6，并且z为1到约10；[(CH2)nOPO3(CH2)m]z，其中n和m为1到约6，并且z为1到约10。这种接头可以包含聚乙二醇，聚乙二醇可以是直链的或支链的。
在某些实施例中，结构域可以通过同双功能或异双功能接头连接。说明性实体包含：叠氮基苯甲酰基酰肼、N-[4-(对-叠氮基水杨基氨基)丁基]-3'-[2'-吡啶基二硫]丙酰胺)、双-磺基琥珀酰亚胺基辛二酸酯、二亚胺代己二酸二甲酯(dimethyladipimidate)、二琥珀酰亚胺基酒石酸酯(disuccinimidyltartrate)、N-γ-马来酰亚胺基丁酰基氧琥珀酰亚胺酯(N-γmaleimidobutyryloxysuccinimide ester)、N-羟基磺基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基苯甲酸酯、N-琥珀酰亚胺基[4-叠氮基苯基]-1,3'-二硫代丙酸酯、N-琥珀酰亚胺基[4-碘代乙酰基]氨基苯甲酸酯、戊二醛、NHS-PEG-MAL；琥珀酰亚胺基4-[N-马来酰亚胺甲基]环己烷-1-甲酸酯；3-(2-吡啶基二硫)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(SPDP)；N,N'-(1,3-亚苯基)双马来酰亚胺；N,N'-乙烯-双-(碘代乙酰胺)；或4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(SMCC)；间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)；以及MBS的延伸链类似物琥珀酰亚胺4-(对马来酰亚胺苯基)丁酸酯(SMPB)。在某些实施例中，这些交联剂的琥珀酰亚胺基与伯胺反应，并且硫醇反应性马来酰亚胺与半胱氨酸残基的硫醇形成共价键。
有用的其它试剂包含：包含双马来酰亚胺己烷(“BMH”)的同双功能交联剂；p,p'-二氟代-m,m'-二硝基二苯砜(与氨基和酚基形成不可逆交联)；二甲基胺代己二酸酯(针对氨基具有特异性)；苯酚-1,4-二磺酰氯(主要与氨基反应)；六亚甲基二异氰酸酯或二异硫氰酸酯或偶氮苯基对二异氰酸酯(主要与氨基反应)；双重氮联苯胺(主要与酪氨酸和组氨酸反应)；邻苯并三唑基四甲基脲六氟磷酸酯(O-benzotriazolyloxy tetramethuluroniumhexafluorophosphate)(HATU)、二环己基碳二酰亚胺、溴代-三(吡咯烷基)溴化磷(PyBroP)；N,N-二甲氨基吡啶(DMAP)；4-吡咯烷基吡啶；N-羟基苯并三唑；等等。
抗体和其用途
在各种实施例中，本发明提供了抗RNF43、抗ZNRF3和抗ASGR1/2抗体和其抗原结合片段以及相关使用方法。
在一个实施例中，本公开提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与RNF43、ZNRF3、ASGR1或ASGR2(任选地人)结合、包括包含以下的序列：(i)针对表2A或3A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或(ii)针对表2A或3A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。在特定实施例中，抗体或其抗原结合片段包括：包括与表2B或表3B中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区；或包括表2B或表3B中所示的氨基酸序列的重链可变区。在特定实施例中，抗体或其抗原结合片段包括：包括与表2B或表3B中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或包括表2B或表3B中所示的氨基酸序列的轻链可变区。
在特定实施例中，抗体或其抗原结合片段中的任何一种抗体或其抗原结合片段是人源化的。在某些实施例中，抗体或其抗原结合片段中的任何一种抗体或其抗原结合片段是单链抗体、scFv、缺乏铰链区的单价抗体、纳米抗体或微抗体。在特定实施例中，抗体或其抗原结合片段中的任何一种抗体或其抗原结合片段是VHH纳米抗体。在特定实施例中，抗体或其抗原结合片段中的任何一种抗体或其抗原结合片段是Fab或Fab'片段。
在某些实施例中，抗体或其抗原结合片段中的任何一种抗体或其抗原结合片段是融合蛋白。
在相关实施例中，本公开提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与本文公开的抗体中的任何一种抗体竞争与其靶标ZNRF3、RNF43或ASGR1/2的结合。在特定实施例中，抗体或其抗原结合片段中的任何一种抗体或其抗原结合片段以50μm或更低的KD与其靶标结合。
在一个实施例中，本发明包括一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人ASGR结合并且抑制ASGR与配体的结合。在另一个实施例中，本发明包括一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人ASGR-1结合并且抑制ASGR-1与配体的结合和/或ASGR-1与ASGR-2的相互作用。在另一个实施例中，本发明包括一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人ASGR-2结合并且抑制ASGR-2与配体的结合和/或ASGR-2与ASGR-1的相互作用。在又另一个实施例中，本发明包括一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人ASGR-1和人ASGR-2结合并且抑制ASGR-1和/或ASGR-2与配体的结合。在一些实施例中，分离的抗体或其抗原结合片段与人ASGR、ASGR-1和/或ASGR-2特异性地结合。
在特定实施例中，抗体或其抗原结合片段中的任何一种抗体或其抗原结合片段调节细胞，任选地哺乳动物细胞中的Wnt信号传导通路。在特定实施例中，抗体或其抗原结合片段中的任何一种抗体或其抗原结合片段增加通过细胞中的Wnt信号传导通路进行的信号传导。在特定实施例中，抗体或其抗原结合片段中的任何一种抗体或其抗原结合片段减少通过细胞中的Wnt信号传导通路进行的信号传导。在某些实施例中，Wnt信号传导通路是典型的Wnt信号传导通路或非典型的Wnt信号传导通路。
在另外的相关实施例中，本公开提供了一种对本文公开的抗体或其抗原结合片段进行编码的分离的多核苷酸。在某些实施例中，本公开提供了一种包括分离的多核苷酸的表达载体和包括所述表达载体的分离的宿主细胞。
在另一个实施例中，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括生理学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体以及治疗有效量的本文公开的分离的抗体或其抗原结合片段。
本公开提供了用于检测例如生物样品(例如，细胞或组织)中的ZNRF3、RNF43或ASGR1/2多肽的存在度或表达水平的方法，所述方法包括使所述生物样品与特异性地结合靶多肽的本文公开的抗体或其抗原结合片段接触。在某些实施例中，抗体或其抗原结合片段例如通过荧光标签进行可检测地标记。因此，抗体可以用于对表达抗体靶多肽的细胞进行染色。例如，抗ASGR1/2抗体和其抗原结合片段可以用于对肝细胞进行检测或染色。
本文公开的抗体或其抗原结合片段还可以用于向所述抗体或其抗原结合片段所结合的细胞递送药物。例如，可以将抗ASGR1/2抗体和其抗原结合片段缀合到治疗剂以向肝细胞，例如正常或癌症肝细胞递送治疗剂。
在另外的实施例中，本公开提供了一种用于激动细胞中的Wnt信号传导通路的方法，所述方法包括使所述细胞与本文公开的增加Wnt信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段接触。在另一个实施例中，本公开提供了一种用于抑制细胞中的Wnt信号传导通路的方法，所述方法包括使所述细胞与本文公开的抑制Wnt信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段接触。
在另一个实施例中，本公开包含一种用于治疗患有与减少的Wnt信号传导相关的疾病或病症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包括本文公开的作为Wnt信号传导通路的激动剂的分离的抗体或其抗原结合片段。在特定实施例中，所述疾病或病症是本文所公开的通过组织特异性Wnt信号增强分子治疗的那些疾病或病症中的任何疾病或病症。
在一些实施例中，本公开包含一种减少患上冠状动脉疾病或患有MI的风险的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效剂量的本文公开的抗ASGR抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，抗体结合ASGR-1，并且在一些实施例中，抗体结合ASGR-2。在一些实施例中，抗体是ASGR-1和/或ASGR-2的抑制剂。在一些实施例中，与未经治疗的受试者相比，经过治疗的受试者的冠状动脉疾病或MI的相对风险降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％。
在一些实施例中，本公开提供了一种降低受试者的血液LDL胆固醇水平的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效剂量的本文公开的抗ASGR抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，抗体结合ASGR-1，并且在一些实施例中，抗体结合ASGR-2。在一些实施例中，抗体是ASGR-1和/或ASGR-2的抑制剂。在一些实施例中，经过治疗的受试者的血液LDL胆固醇水平与受试者的给药前血液LDL胆固醇水平相比降低至少约15％。在本发明的此方面的一些实施例中，所述受试者的血液LDL胆固醇水平与受试者的给药前血液LDL胆固醇水平相比降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％。
在一些实施例中，本公开提供了一种降低受试者的非HDL胆固醇水平的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效剂量的本文公开的抗ASGR抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，抗体结合ASGR-1，并且在一些实施例中，抗体结合ASGR-2。在一些实施例中，抗体是ASGR-1和/或ASGR-2的抑制剂。在一些实施例中，受试者的非HDL胆固醇水平与受试者的给药前非HDL胆固醇水平相比降低至少约5％。在本发明的此方面的一些实施例中，所述患者的非HDL胆固醇水平与患者的给药前非HDL胆固醇水平相比降低至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％。
在一些实施例中，本公开提供了一种通过抑制ASGR活性来提高患者的ALP水平的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效剂量的本文公开的抗ASGR抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，抗体结合ASGR-1，并且在一些实施例中，抗体结合ASGR-2。在一些实施例中，抗体是ASGR-1和/或ASGR-2的抑制剂。在一些实施例中，患者的ALP水平与患者的给药前ALP水平相比提高至少约30％。在本发明的此方面的一些实施例中，所述受试者的ALP水平与受试者的给药前ALP水平相比提高至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％。在一些实施例中，ALP水平比治疗前提高至少约1.25倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍和5倍。
在一些实施例中，本公开提供了一种拮抗受试者的ASGR、ASGR-1和/或ASGR-2的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效剂量的本文公开的抗ASGR抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，抗体结合ASGR-1，并且在一些实施例中，抗体结合ASGR-2。在一些实施例中，抗体是ASGR-1和/或ASGR-2的抑制剂。
在一些实施例中，提供了一种治疗或预防心血管疾病的方法，并且所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效剂量的本文公开的抗ASGR抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，抗体结合ASGR-1，并且在一些实施例中，抗体结合ASGR-2。在一些实施例中，抗体是ASGR-1和/或ASGR-2的抑制剂。在一些实施例中，患者的心血管事件的相对风险降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％。
Wnt分子、Norrin分子和Wnt信号增强分子
本公开进一步涉及Wnt多肽、Norrin多肽和Wnt信号传导激动剂分子以及其用于增加Wnt信号传导和治疗或预防Wnt相关疾病或病症的用途，包含本文所描述的那些疾病或病症。在某些实施例中，单独地或与本文所描述的一种或多种组织特异性Wnt信号增强分子组合地向受试者提供Wnt多肽、Norrin多肽和Wnt信号传导激动剂分子。
Wnt多肽和Wnt编码多核苷酸序列是本领域中已知的并且包含任何和所有Wnt多肽或多核苷酸，包含属于任何和所有物种的那些Wnt多肽或多核苷酸，包含哺乳动物Wnt多肽和多核苷酸，如人Wnt多肽和多核苷酸。说明性Wnt多肽包含Wnt1、Wnt2、Wnt2B、Wnt3、Wnt3A、Wnt4、Wnt5A、Wnt5B、Wnt6、Wnt7A、Wnt7B、Wnt8A、Wnt8B、Wnt9A、Wnt9B、Wnt10A、Wnt10B、Wnt11和Wnt16以及前述Wnt中的任何Wnt的功能性变体和片段。Wnt多肽涵盖天然Wnt多肽、Wnt多肽变体、Wnt多肽片段和嵌合Wnt多肽。在特定实施例中，Wnt多肽是天然人全长成熟Wnt蛋白。
例如，本申请中关注的人天然序列Wnt蛋白包含但不限于以下：Wnt1(GenBank登录号NM_005430)；Wnt-2(GenBank登录号NM_003391)；Wnt2B(Wnt-13)(GenBank登录号NM_004185(同种型1)、NM_024494.2(同种型2))、Wnt3(RefSeq.:NM_030753)、Wnt3A(GenBank登录号NM_033131)、Wnt4(GenBank登录号NM_030761)、Wnt5A(GenBank登录号NM_003392)、Wnt5B(GenBank登录号NM_032642)、Wnt6(GenBank登录号NM_006522)、Wnt7A(GenBank登录号NM_004625)、Wnt7B(GenBank登录号NM_058238)、Wnt8A(GenBank登录号NM_058244)、Wnt8B(GenBank登录号NM_003393)、Wnt9A(Wnt-14)(GenBank登录号NM_003395)、Wnt9B(Wnt15)(GenBank登录号NM_003396)、Wnt1 OA(GenBank登录号NM_025216)、Wnt10B(GenBank登录号NM_003394)、Wnt11(GenBank登录号NM_004626)、Wnt16(GenBank登录号NM_016087)。尽管每个成员与家族具有不同程度的序列同一性，但是所有成员均对含有间距高度保守的23-24个保守半胱氨酸残基的较小(即，39-46kD)、酰化、棕榈酰化、分泌的糖蛋白进行编码(McMahon,A P等人,《遗传学趋势(Trends Genet.)》1992；8:236-242；Miller,JR.,《基因组生物学(Genome Biol.)》2002；3(1):3001.1-3001.15)。关注的其它天然序列Wnt多肽包含来自任何哺乳动物的上述直系同源物，所述哺乳动物包含家养和农场动物以及动物园、实验室或宠物动物，如狗、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔、大鼠、小鼠、青蛙、斑马鱼、果蝇、蠕虫等。
Norrin多肽和Norrin编码多核苷酸序列也是本领域中已知的并且包含任何物种的Norrin多肽或多核苷酸以及其功能性变体和片段，包含哺乳动物Norrin多肽和多核苷酸，如人Norrin多肽和多核苷酸。
Wnt信号传导激动剂分子包含激动Wnt信号传导的任何类型的分子。在特定实施例中，Wnt信号传导激动剂分子描述于PCT专利申请公开第WO 2016/040895号中。Wnt信号传导激动剂可以是任何分子，例如在某些实施例中具有水溶性的蛋白质或药物(例如，有机小分子)，所述分子通过与一种或多种Fzd蛋白和与Lrp5/6结合来直接活化经典Wnt信号传导。在特定实施例中，Wnt信号传导激动剂分子是小分子，所述小分子可以小于约15Kd。在其它实施例中，Wnt信号传导激动剂分子是多肽。另外，某些Wnt信号传导激动剂可以包括多肽区域或结构域和非多肽区域或结构域两者。
在本发明的一些实施例中，Wnt信号传导激动剂分子是多肽，所述多肽可以包括Fzd和Lrp5/6的独立的或连续的结合结构域或元件。多肽Wnt信号传导激动剂可以是单链、二聚体或更高阶多聚体。Fzd结合结构域/元件和Lrp5/6结合结构域/元件可以直接连接，或者可以通过接头例如多肽接头或非肽接头等分离。
在多肽实施例中，Fzd结合结构域可以选自以高亲和力结合Fzd的任何结构域，例如KD为至少约1×10-7M、至少约1×10-8M、至少约1×10-9M或至少约1×10-10M。适合的Fzd结合结构域包含但不限于：重新设计的Fzd结合蛋白、抗体衍生的结合蛋白例如scFv、Fab等以及与一种或多种Fzd蛋白特异性地结合的抗体的其它部分；纳米抗体衍生的结合结构域；基于打结素的工程化支架；Norrin和由其衍生的工程化结合片段、天然存在的Fzd结合结构域等等。
在一些实施例中，Fzd结合结构域与一种、两种、三种、四种、五种或更多种不同的卷曲蛋白结合，例如人卷曲蛋白Fz1、Fz2、Fz3、Fz4、Fz5、Fz6、Fz7、Fz8、Fz9、Fz10中的一种或多种人卷曲蛋白。在一些实施例中，基于抗体的信号传导激动剂与Fz1、Fz2、Fz5、Fz7和Fz8结合。在其它实施例中，卷曲蛋白结合部分对关注的一种或多种卷曲蛋白具有选择性，例如相对于其它卷曲蛋白，针对所述一种或多种期望的卷曲蛋白具有至少10倍、25倍、50倍、100倍、200倍或更多倍的特异性。
在某些实施例中，卷曲蛋白结合结构域包括泛特异性卷曲蛋白抗体OMP-18R5(泛替妥人单抗(vantictumab))的六个CDR区域。在某些实施例中，卷曲蛋白结合结构域是包括泛特异性卷曲蛋白抗体OMP-18R5(泛替妥人单抗)的六个CDR区域的scFv。参见例如通过引用明确并入本文的美国专利第8507442号。例如，OMP-18R5的CDR序列包含：包括GFTFSHYTLS(SEQ ID NO:705)的重链CDR1、包括VISGDGSYTYYADSVKG(SEQ ID NO:706)的重链CDR2和包括NFIKYVFAN(SEQ ID NO:707)的重链CDR3；以及(ii)包括SGDKLGKKYAS(SEQ ID NO:708)或SGDNIGSFYVH(SEQ ID NO:709)的轻链CDR1、包括EKDNRPSG(SEQ ID NO:710)或DKSNRPSG(SEQ ID NO:711)的轻链CDR2和包括SSFAGNSLE(SEQ ID NO:712)或QSYANTLSL(SEQ ID NO:713)的轻链CDR3。在特定实施例中，卷曲蛋白结合结构域是抗体或其衍生物，包含但不限于ScFv、微抗体、纳米抗体和包括OMP-18R5的CDR序列的各种抗体模拟物。在某些实施例中，与OMP-18R5的CDR序列相比，这些CDR序列包括一个或多个氨基酸修饰。
在其它实施例中，Fzd结合结构域包括来自多种卷曲蛋白特异性抗体中的任何一种卷曲蛋白特异性抗体的可变区序列或其CDR，所述多种卷曲蛋白特异性抗体是本领域中已知的并且可商购获得或者可以从头生成。卷曲蛋白多肽中的任何一种卷曲蛋白多肽可以用作免疫原或在筛选测定法中用于开发抗体。“Fz”、“Fz蛋白”和“Fz受体”在本文中用于指代卷曲蛋白受体家族的蛋白质。这些蛋白质是包括CRD结构域的七次跨膜蛋白(Ingham,P.W.(1996)《遗传学趋势(Trends Genet.)》12:382-384；Yang-Snyder,J.等人(1996)《当代生物学(Curr.Biol.)》6:1302-1306；Bhanot,P.等人(1996)《自然(Nature)》382:225-230)。Fz家族中有十个已知成员(Fz1到Fz10)，所述十个成员中的任何成员均可以充当Wnt的受体。人卷曲蛋白参考序列的Genbank登录号如下：FZD1(NM_003505)；FZD2(NM_001466)；FZD3(NM_145866)；FZD4(NM_012193)；FZD5(NM_003468)；FZD6(NM_003506)；FZD7(NM_003507)；FZD8(NM_031866)；FZD9(NM_003508)；FZD10(NM_007197)。[0076]卷曲蛋白结合结构域的非限制性实例包含：可从Biolegend公司获得的抗体，例如，对人卷曲蛋白4具有特异性的克隆CH3A4A7(CD344)、对人Fz9具有特异性的克隆W3C4E11(CD349)；可从Abeam公司获得的抗体，例如，对Fz7具有特异性的ab64636、对人Fz4具有特异性的ab83042、对人Fz7具有特异性的ab77379、对人Fz8具有特异性的ab75235、对人Fz9具有特异性的ab102956；等等。适合的抗体的其它实例尤其描述于以下中：美国专利申请20140105917；美国专利申请20130230521；美国专利申请20080267955；美国专利申请20080038272；美国专利申请20030044409。
替代物的卷曲蛋白结合部分可以是被选择用于与Wnt蛋白的卷曲蛋白结合区域的结构同源的工程化蛋白。这种蛋白质可以通过筛选结构数据库的同源性来鉴别。由此鉴别出初始蛋白，例如微生物Bh1478蛋白。然后，天然蛋白被工程化以提供增加亲和力的氨基酸取代，并且可以通过亲和力成熟进行进一步的选择以便在与期望的卷曲蛋白结合时具有增加的亲和力和选择性。卷曲蛋白结合部分的非限制性实例包含PCT专利申请公开第WO2016/040895号的图1中展示的Fz27蛋白和Fz27-B12蛋白。
在某些多肽实施例中，Lrp5/6结合结构域或元件可以选自以高亲和力结合Lrp5/6的任何结构域，例如KD为至少约1×10"7M、至少约1×10"8M、至少约1×10"9M、至少约1×10"10M。适合的Lrp5/6结合结构域包含但不限于：重新设计的Lrp5/6结合蛋白、抗体衍生的结合蛋白例如scFv、Fab等和与一种或多种Fzd蛋白特异性地结合的抗体的其它部分；纳米抗体衍生的结合结构域；基于打结素的工程化支架；天然存在的Lrp5/6结合蛋白或多肽，包含但不限于Norrin、DKK1、DKK2、DKK3、DKK4、骨硬化蛋白；等等。在某些实施例中，Lrp5/6结合结构域是DKK1的C端部分。
Lrp5/6结合结构域可以选自以高亲和力结合Lrp5或Lrp6的任何结构域，例如其中KD为至少约1×10"7M、至少约1×10"8M、至少约1×10"9M、至少约1×10"10M1。“LRP”、“LRP蛋白”和“LRP受体”在本文中用于指代低密度脂蛋白受体相关蛋白家族的蛋白质。这些受体是在受体介导的内吞作用过程中结合并且内化配体的单次跨膜蛋白。LRP蛋白LRP5(GenBank登录号NM 002335.2)和LRP6(GenBank登录号NM 002336.2)包含在Wnt受体复合物中。
适合的Lrp5/6结合结构域包含但不限于：重新设计的Lrp5/6结合蛋白、抗体衍生的结合蛋白例如scFv、Fab等和与一种或多种Fzd蛋白特异性地结合的抗体的其它部分；纳米抗体衍生的结合结构域；基于打结素的工程化支架；天然存在的Lrp5/6，包含但不限于DKK1、DKK2、DKK3、DKK4、骨硬化蛋白；Wise；包括上述中的任何一种的融合蛋白；上述中的任何一种的衍生物；上述中的任何一种的变体；以及上述中的任何一种的生物活性片段；等等。可以亲和选择Lrp5/6结合结构域以增强结合。
Dickkopf(Dkk)基因家族的成员(参见Krupnik等人(1999)《基因(Gene)》238(2):301-13)包含Dkk-1、Dkk-2、Dkk-3和Dkk-4，并且Dkk-3相关蛋白Soggy(Sgy.)hDkk 1-4含有两个不同的富含半胱氨酸的结构域，其中10个半胱氨酸残基的位置在家族成员之间高度保守。人Dkk基因和蛋白质的示例性序列是可公开获得的，例如Genbank登录号：NM_014419(soggy-1)；NM_014420(DKK4)；AF177394(DKK-1)；AF177395(DKK-2)；NM_015881(DKK3)；以及NM_014421(DKK2)。在本发明的一些实施例中，Lrp6结合部分是DKK1肽，包含但不限于人DKK1的C端结构域。如图5所示，C端结构域可以包括序列KMYHTKGQEGSVCLRSSDCASGLCCARHFWSKICKPVLKEGQVCTKHRRKGSHGLEIFQRC YCGEGLSCRIQKDHHQASNSSRLHTCQRH(SEQ ID NO:714)(参见Genbank登录号NP_036374)或其生物活性片段。
例如在以下中讨论了DKK蛋白与LRP5/6的结合：Brott和Sokol《分子与细胞生物学(Mol.Cell.Biol.)》22(17),6100-6110(2002)；以及Li等人《生物化学期刊(J.Biol.Chem.)》277(8),5977-5981(2002)，所述文献各自通过引用明确并入本文。人DKK2(Genbank参考NP_055236)的对应区域可以包括序列KMSHIKGHEGDPCLRSSDCIEGFCCARHFWTKICKPVLHQGEVCTKQRKKGSHGLEIFQRCDCAKGLSCKVWKDATYSSKARLHVCQK(SEQ ID NO:715)或其生物活性片段。
与Lrp5或Lrp6特异性地结合的抗体是本领域中已知的并且可商购获得或者可以重新生成。Lrp5、Lrp6或其片段可以用作免疫原或用于筛选测定中以开发抗体。已知抗体的实例包含但不限于以下中描述的那些：Gong等人(2010)《PLoS One》5(9):e12682；Marvin等人(2010)《美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci U S A.)》107(35):15473-8；以及可从例如以下商购的那些：圣克鲁兹生物技术公司(Santa Cruz biotechnology)抗体克隆1A12，所述抗体克隆是针对人类来源的合成LRP5/6培育的并且与小鼠和人类来源的LRP 6和LRP 5的全长和蛋白水解片段两者结合；单克隆抗体2B11；对目录号为5731的LRP5(D80F2)具有特异性的信号传导技术公司(Cell Signaling Technology)抗体；等。
多肽和结合结构域还可以包含上述多肽的衍生物、变体和生物活性片段。“变体”多肽意指如下文所限定的与所提供序列具有小于100％的序列同一性的生物活性多肽。这种变体包含：与所提供序列相比包括一个或多个氨基酸修饰例如插入、缺失或取代的多肽，例如，其中在天然序列的N端或C端处或者在天然序列内添加一个或多个氨基酸残基；约一个到四十个氨基酸残基缺失，并且任选地被一个或多个氨基酸残基取代；以及上述多肽的衍生物，其中氨基酸残基已被共价修饰，使得所得产物具有非天然存在的氨基酸。在某些实施例中，生物活性变体将具有与天然序列多肽有至少约90％、至少约95％或至少约99％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。序列的“功能性变体”是与初始序列一样具有定性生物学性质的化合物。“功能性变体”包含但不限于序列片段和序列的变体，前提条件是其共同具有生物学活性。术语“变体”涵盖多肽的氨基酸序列变体和其共价修饰两者。
Fzd结合结构域和Lrp5/6结合结构域在一个球状结构域内可以是连续的，或者可以通过接头分离，例如多肽接头或非肽接头等，包含但不限于本文所描述的那些接头中的任何接头。接头的长度以及因此结合结构域之间的间距可以用来调节信号强度并且可以根据Wnt信号传导激动剂的期望用途进行选择。结合结构域之间的加强距离可以有所变化，但在某些实施例中可以小于约100埃、小于约90埃、小于约80埃、小于约70埃、小于约60埃或小于约50埃。
在一些实施例中，接头是刚性接头，在其它实施例中，接头是柔性接头。在接头是肽接头的情况下，在某些实施例中，接头在长度上可以为约1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个或更多个氨基酸，并且具有足够的长度和氨基酸组成来加强结合结构域之间的距离。在一些实施例中，接头包括一个或多个甘氨酸和/或丝氨酸残基或由其组成。
本公开还包含对一种或多种Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的多核苷酸或核酸序列以及包括这些多核苷酸的载体以及包括这些载体的细胞，所述载体包含表达载体。在某些实施例中，多核苷酸或核酸序列是DNA或RNA。在特定实施例中，RNA是信使RNA(mRNA)。在某些实施例中，RNA是包括一个或多个经过修饰的核苷的经过修饰的mRNA。包括一个或多个经过修饰的核苷的经过修饰mRNA已经被描述为相比于未经过修饰的mRNA具有优势，所述优势包含稳定性增加、表达水平更高和免疫原性降低。例如，以下中描述了可以根据本发明使用的经过修饰的mRNA的非限制性实例：PCT专利申请公开第WO2011/130624号、第WO2012/138453号、第WO 2013052523号、第WO 2013151666号、第WO2013/071047号、第WO2013/078199号、第WO 2012045075号、第WO 2014081507号、第WO2014093924号、第WO 2014164253号；美国专利申请第US 8,278,036号(描述了包括假尿苷的经过修饰的mRNA)、第US 8,691,966号(描述了包括假尿苷和/或N1-甲基假尿苷的经过修饰的mRNA)、第US 8,835,108号(描述了包括5-甲基胞苷的经过修饰的mRNA)、第US 8,748,089号(描述了包括假尿苷或1-甲基假尿苷的经过修饰的mRNA)。在特定实施例中，与未经过修饰的A、G、U或C核糖核苷相比，对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的经过修饰的mRNA序列包括至少一个修饰。在特定实施例中，所述至少一个经过修饰的核苷包含N1-甲基假尿苷和/或5-甲基胞苷。在特定实施例中，经过修饰的mRNA包括5'端帽序列、接着是对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的序列、接着是3'拖尾序列，如polyA或polyA-G序列。
在特定实施例中，多核苷酸是载体，例如表达载体，并且表达载体包括对与启动子序列可操作地连接的本文所描述的Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的多核苷酸序列，所述启动子序列例如驱动多核苷酸在细胞中的表达的启动子序列。在某些实施例中，载体是病毒载体，例如包括多核苷酸的病毒，所述多核苷酸包括表达盒，所述表达盒包括与对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的DNA或RNA序列可操作地连接的启动子。在特定实施例中，表达盒包括5'和/或3'细胞或病毒UTR。
本公开还包含本文所描述的多核苷酸的功能性片段和变体，包含与本文所描述的多核苷酸具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的多核苷酸序列同一性的变体。与本文所公开的序列中的任何序列相比，这种变体可以包括一个或多个核苷酸或核苷修饰，例如一个或多个核苷酸缺失、插入或取代。在特定实施例中，本文所描述的多核苷酸被密码子优化，例如以增强经过编码的多肽在宿主细胞中的表达。在特定实施例中，多核苷酸变体包括一个或多个经过修饰的核苷酸或核苷。
本公开还包含包括对本文所描述的Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的多核苷酸或载体的细胞。在某些实施例中，细胞是宿主细胞，例如可以用于产生Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子的HEK293细胞。在制备主题组合物时，可以采用任何宿主细胞，包含但不限于例如哺乳动物细胞(例如，293细胞)、昆虫细胞(例如，SF9细胞)、微生物和酵母。在某些实施例中，细胞对用本文所描述的Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子治疗的受试者而言是异源或自体的。在特定实施例中，细胞从受试者获得并且用本文所描述的病毒载体进行转导。在特定实施例中，经过转导的细胞被递送到受试者以用于治疗。本公开还包含包括一种或多种Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子或者一种或多种多核苷酸或载体的药物组合物，所述一种或多种多核苷酸或载体包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的序列。
药物组合物
还公开了包括本文所描述的组织特异性Wnt信号增强分子或抗体或其抗原结合片段和一种或多种药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂的药物组合物。在特定实施例中，药物组合物进一步包括本文所描述的一种或多种Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子。
在另外的实施例中，还公开了包括多核苷酸和一种或多种药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂的药物组合物，所述多核苷酸包括对本文所描述的本文所描述的组织特异性Wnt信号增强分子或抗体或其抗原结合片段进行编码的核酸序列。在特定实施例中，药物组合物进一步包括一种或多种多核苷酸，所述一种或多种多核苷酸包括对本文所描述的Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列。在某些实施例中，多核苷酸是DNA或mRNA，例如经修饰的mRNA。在特定实施例中，多核苷酸是进一步包括5'帽序列和/或3'拖尾序列(例如polyA尾)的经修饰的mRNA。在其它实施例中，多核苷酸是包括与编码序列操作性地连接的启动子的表达盒。在某些实施例中，对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列和对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列存在于相同的多核苷酸中。
在另外的实施例中，还公开了包括表达载体例如病毒载体和一种或多种药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂的药物组合物，所述载体包括多核苷酸，所述多核苷酸包括对本文所描述的本文所描述的组织特异性Wnt信号增强分子或抗体或其抗原结合片段进行编码的核酸序列。在特定实施例中，药物组合物进一步包括表达载体，例如病毒载体，所述表达载体包括多核苷酸，所述多核苷酸包括对本文所描述的Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列。在某些实施例中，对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列和对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列存在于相同的多核苷酸例如表达盒中。
本发明进一步设想了包括细胞和一种或多种药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂的药物组合物，所述细胞包括表达载体，所述表达载体包括多核苷酸，所述多核苷酸包括与对本文所描述的本文所描述的组织特异性Wnt信号增强分子或抗体或其抗原结合片段进行编码的核酸操作性地连接的启动子。在特定实施例中，药物组合物进一步包括细胞，所述细胞包括表达载体，所述表达载体包括多核苷酸，所述多核苷酸包括与对本文所描述的Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列操作性地连接的启动子。在某些实施例中，对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列和对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列存在于相同的多核苷酸例如表达盒中和/或在相同的细胞中。在特定实施例中，细胞是从待治疗受试者获得的异源细胞或自体细胞。在特定实施例中，细胞是干细胞，例如脂肪源干细胞或造血干细胞。
本公开设想了包括用于递送组织特异性Wnt信号增强分子作为第一活性剂的第一分子和用于递送Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂作为第二活性剂的第二分子的药物组合物。第一分子和第二分子可以是相同类型的分子或不同类型的分子。例如，在某些实施例中，第一分子和第二分子可以各自独立地选自以下类型的分子：多肽、有机小分子、对第一活性剂或第二活性剂进行编码的核酸(任选地，DNA或mRNA，任选地，经过修饰的RNA)、包括对第一活性剂或第二活性剂进行编码的核酸序列的载体(任选地，表达载体或病毒载体)以及包括对第一活性剂或第二活性剂进行编码的核酸序列的细胞(任选地，表达盒)。
单独的或组合的主题分子可以与可用于制备通常安全、无毒且理想的调配物的药学上可接受的载体、稀释剂和试剂进行组合，并且包含可接受以供哺乳动物例如人或灵长类动物使用的赋形剂。这种赋形剂可以是固体、液体、半固体或在气雾组合物的情况下为气态的。这种载体或稀释剂的实例包含但不限于水、盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液和5％人血清白蛋白。补充性活性化合物也可以并入调配物中。用于调配物的溶液或悬浮液可以包含：无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌化合物，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合化合物，如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；洗涤剂，如用于防止聚合的吐温(Tween)20；以及用于调节张力的化合物，如氯化钠或右旋糖。可以用酸或碱(如盐酸或氢氧化钠)调节pH。在特定实施例中，药物组合物是无菌的。
药物组合物可以进一步包含无菌水溶液或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包含生理盐水、抑菌水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在一些情况下，组合物是无菌的并且应当具有易于注射的程度的流动性。在某些实施例中，组合物在制造和储存条件下是稳定的并且抵抗如细菌和真菌等微生物的污染作用进行保存。载体可以是例如含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)和其适合的混合物的溶剂或分散介质。可以例如通过使用如卵磷脂的包衣、通过在分散情况下保持所需粒度以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。防止微生物的作用可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如，对羟苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等)来实现。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨醇)、氯化钠。可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸铝和明胶)来实现内服组合物的延长吸收。
无菌溶液可以根据需要通过将所需量的组织特异性Wnt信号增强分子并入具有上文所列举成分中的一种成分或其组合的适当溶剂中、之后进行过滤灭菌来制备。通常，通过将活性化合物并入无菌媒剂中来制备分散液，所述无菌媒剂含有基础分散介质和来自以上列举的那些的其它所需成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法为真空干燥和冷冻干燥，这些干燥产生活性成分加来自其先前经无菌过滤溶液的任何另外的所需成分的粉末。
在一个实施例中，药物组合物与保护融合蛋白免于从体内快速消除的载体一起制备，如控释调配物，包含植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解、生物相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备这种调配物的方法对本领域技术人员而言是显而易见的。材料也可以商购获得。脂质体悬浮液也可以用作药学上可接受的载体。这些脂质体悬浮液可以根据本领域技术人员已知的方法制备。
以易于施用和实现剂量均匀性的剂量单位形式来配制药物组合物可以是有利的。如本文所用，剂量单位形式是指作为针对有待治疗的受试者的单一剂量适合的物理上离散单位；每单位含有经计算以与所需的药物载体的联合产生所期望的治疗效果的预定量的活性化合物。本发明的单位剂型的规格由如下决定并且直接依赖于：活性化合物的独特特征和待实现的特定治疗效果，和本领域中配制用于治疗个体的这种活性化合物的固有局限性。
药物组合物可以与施用说明书一起包含在容器、包装或分配器中，分配器例如注射器，例如载药注射器。
本发明的药物组合物涵盖任何药学上可接受的盐、酯或这种酯的盐或在施用于包括人在内的动物时能够(直接地或间接地)提供生物活性组织特异性Wnt信号增强分子的任何其它化合物。
本发明包含本文所描述的组织特异性Wnt信号增强分子的药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的生理学上可接受的盐和药学上可接受的盐：即，保留了亲本化合物的期望生物活性并且不对亲本化合物产生不期望的毒理效果的盐。各种药学上可接受的盐是本领域已知的并且描述于例如以下中：《雷明顿药学大全(Remington's Pharmaceutical Sciences)》,第17版,Alfonso R.Gennaro(编),美国宾夕法尼亚州伊斯顿Mark出版公司(Mark Publishing Company,Easton,PA,USA),1985(以及其最近的版本)；《制药技术百科全书(Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology)》,第3版,James Swarbrick(编),美国纽约州美国英富曼卫生保健(有限公司)(InformaHealthcare USA(Inc.),NY,USA),2007；以及《药物科学期刊(J.Pharm.Sci.)》66:2(1977)。而且，有关适合的盐的综述，参见Stahl和Wermuth的《“药用盐手册：性质、选择和使用(Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use)”》(Wiley-VCH,2002)。
用如碱金属和碱土金属或有机胺等金属或胺形成药学上可接受的碱加成盐。用作阳离子的金属包括钠、钾、镁、钙等。胺包括N-N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、二环己胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因(参见例如Berge等人,“药用盐(Pharmaceutical Salts)”,《药物科学期刊(J.Pharma Sci)》,1977,66,119)。酸性化合物的碱加成盐是通过使游离酸形式与足量的期望的碱相接触以常规方式产生盐来制备的。游离酸形式可以通过使盐形式与酸相接触并且以常规方式分离游离酸来再生。游离酸形式在某些物理性质方面如在极性溶剂中的溶解度与其各自的盐形式略有不同，但是出于本发明的目的，盐等同于其各自的游离酸。
在一些实施例中，本文所提供的药物组合物包括与药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂混合的治疗有效量的本文所描述的组织特异性Wnt信号增强分子，所述药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂例如盐水、磷酸盐缓冲盐水、磷酸盐和氨基酸、聚合物、多元醇、糖、缓冲剂、防腐剂和其它蛋白质。示例性氨基酸、聚合物和糖等是辛基苯氧基聚乙氧基乙醇化合物、聚乙二醇单硬脂酸酯化合物、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯、蔗糖、果糖、右旋糖、麦芽糖、葡萄糖、甘露醇、葡聚糖、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、木糖醇、乳糖、海藻糖、牛或人血清白蛋白、柠檬酸酯、乙酸酯、林格氏和汉克氏溶液、半胱氨酸、精氨酸、肉碱、丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、缬氨酸、亮氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯和二醇。优选地，此调配物在4℃下在至少六个月内是稳定的。
在一些实施例中，本文所提供的药物组合物包括缓冲液，如磷酸盐缓冲盐水(PBS)或磷酸钠/硫酸钠、tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、无菌水以及本领域普通技术人员已知的其它缓冲液，如Good等人(1966)《生物化学(Biochemistry)》5:467中描述的那些缓冲液。所述缓冲液的pH值可以处于6.5到7.75的范围内，优选地7到7.5并且最优选地7.2到7.4。
用于增加Wnt活性或Wnt受体细胞表面表达的方法
本文关于融合蛋白所例证的组织特异性Wnt信号增强分子可以用于增加靶向组织或细胞类型中的Wnt信号传导。在特定实施例中，Wnt信号传导是经典Wnt信号传导。因此，在一些方面，本发明提供了一种用于增加或增强靶组织或靶细胞中的Wnt信号传导的方法，所述方法包括使靶组织或靶细胞与有效量的本文所公开的组织特异性Wnt信号增强分子接触，其中所述分子包括以组织特异性或细胞特异性方式与靶组织或靶细胞上的细胞表面受体结合的靶向模块。在一些实施例中，接触在体外、离体地或在体内发生，例如向受试者施用或提供主题组织特异性Wnt信号增强分子。在特定实施例中，细胞是培养细胞，并且接触发生在体外。
在某些实施例中，所述方法包括进一步使靶组织或靶细胞与本文所描述的一种或多种Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子接触。本公开设想了使靶组织或靶细胞与用于递送组织特异性Wnt信号增强分子作为第一活性剂的第一分子和用于递送Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂作为第二活性剂的第二分子接触。第一分子和第二分子可以是相同类型的分子或不同类型的分子。例如，在某些实施例中，第一分子和第二分子可以各自独立地选自以下类型的分子：多肽、有机小分子、对第一活性剂或第二活性剂进行编码的核酸(任选地，DNA或mRNA，任选地，经过修饰的RNA)、包括对第一活性剂或第二活性剂进行编码的核酸序列的载体(任选地，表达载体或病毒载体)以及包括对第一活性剂或第二活性剂进行编码的核酸序列的细胞(任选地，表达盒)。
在相关方面，本发明提供了一种用于增加靶组织或靶细胞中的Wnt信号传导的方法，所述方法包括使靶组织或靶细胞与有效量的包括对本文所公开的组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列的多核苷酸接触，其中所述分子包括以组织特异性或细胞特异性方式与靶组织或靶细胞上的细胞表面受体结合的靶向模块。在某些实施例中，还使靶组织或靶细胞与包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂进行编码的核酸序列的多核苷酸接触。在某些实施例中，多核苷酸是DNA或mRNA，例如经修饰的mRNA。在特定实施例中，多核苷酸是进一步包括5'帽序列和/或3'拖尾序列(例如polyA尾)的经修饰的mRNA。在其它实施例中，多核苷酸是包括与编码序列操作性地连接的启动子的表达盒。在某些实施例中，对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列和对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列存在于相同的多核苷酸中。
在相关方面，本发明提供了一种用于增加靶组织或靶细胞中的Wnt信号传导的方法，所述方法包括使靶组织或靶细胞与有效量的包括对本发明的组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列的载体接触，其中所述分子包括以组织特异性或细胞特异性方式与靶组织或靶细胞上的细胞表面受体结合的靶向模块。在某些实施例中，还使靶组织或靶细胞与包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂进行编码的核酸序列的载体接触。在某些实施例中，载体是表达载体并且可以包括与核酸序列操作性地连接的启动子序列。在特定实施例中，载体是病毒载体。在某些实施例中，对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列和对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列存在于相同的载体中，例如在相同的表达盒中。
在相关方面，本发明提供了一种用于增加靶组织中的Wnt信号传导的方法，所述方法包括使靶组织与有效量的包括对本发明的组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列的细胞接触，其中所述分子包括以组织特异性或细胞特异性方式与靶组织或靶细胞上的细胞表面受体结合的靶向模块。在某些实施例中，还使靶组织与包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂进行编码的核酸序列的细胞接触。在某些实施例中，对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列和对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列存在于相同的细胞中。在特定实施例中，细胞是从待治疗受试者获得的异源细胞或自体细胞。在某些实施例中，用包括对组织特异性Wnt信号增强分子或者Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的表达盒的载体对细胞进行转导。在特定实施例中，细胞是干细胞，例如脂肪源干细胞或造血干细胞。
本文所描述的用于增加Wnt信号传导的方法中的任何方法也可以用于增加靶向细胞，例如肝组织细胞的表面上的卷曲蛋白(Fz)受体的数量。在某些实施例中，靶向细胞的表面的Fz受体的数量增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少两倍、至少五倍或至少10倍。在特定实施例中，Fz受体包含人卷曲蛋白Fz1、Fz2、Fz3、Fz4、Fz5、Fz6、Fz7、Fz8、Fz9、Fz10中的一种或多种人卷曲蛋白。例如，本公开提供了一种用于增加靶向细胞的表面上的Fz受体的方法，所述方法包括使细胞与有效量的本文所公开的组织特异性或细胞特异性Wnt信号增强分子接触，其中所述分子包括以组织特异性或细胞特异性方式与靶组织或靶细胞上的细胞表面受体结合的靶向模块。在特定实施例中，细胞是肝细胞，并且靶向模块结合ASGR1或ASGR2。在某些实施例中，靶向模块包括本文所公开的抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，接触在体外、离体地或在体内发生，例如向受试者施用或提供组织特异性Wnt信号增强分子。在特定实施例中，细胞是培养细胞，并且接触发生在体外。在某些实施例中，靶向细胞或靶向组织最初直接与Wnt信号增强分子接触，而在其它相关实施例中，细胞最初与对Wnt信号增强分子进行编码的多核苷酸接触，所述多核苷酸例如表达载体，由此，细胞吸收多核苷酸并且表达Wnt信号增强分子。在某些实施例中，所述方法包括进一步使靶向组织或靶向细胞与本文所描述的一种或多种Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子接触。
本文所描述的用于增加Wnt信号传导的方法中的任何方法也可以用于增加靶向细胞，例如肝组织细胞上的Ki-67。
用于治疗疾病和病症的方法
本文关于融合蛋白所例证的组织特异性Wnt信号增强分子可以用于治疗疾病、病症或病状，例如通过增加靶向细胞、组织或器官中的Wnt信号传导。因此，在一些方面，本发明提供了一种用于治疗有需要的受试者的疾病或病状(例如，与Wnt信号传导减少相关的疾病或病症或针对其增加Wnt信号传导将提供治疗益处的疾病或病症)的方法，所述方法包括使受试者与有效量的本公开的组合物接触。在特定实施例中，所述组合物是包括以下中的任何一种的药物组合物：组织特异性Wnt信号增强分子，例如小分子或多肽；多核苷酸，所述多核苷酸包括对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列，例如DNA或mRNA，任选地经过修饰的mRNA；载体，所述载体包括对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列，例如表达载体或病毒载体；或者细胞，所述细胞包括对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列，例如用对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的表达载体或病毒载体转导的细胞。在特定实施例中，疾病或病状是病理性疾病或病症或者损伤，例如由伤口引起的损伤。在某些实施例中，伤口可能是另一种治疗性治疗的结果。在某些实施例中，疾病或病状包括受损组织修复、愈合或再生，或者会受益于增加的组织修复、愈合或再生。在一些实施例中，在体内发生接触，即，向受试者施用主题组合物。
在某些实施例中，所述方法包括使受试者进一步接触药物组合物，所述药物组合物包括本文所描述的一种或多种Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子。本公开设想了使受试者接触用于递送组织特异性Wnt信号增强分子作为第一活性剂的第一分子和用于递送Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂作为第二活性剂的第二分子。第一分子和第二分子可以是相同类型的分子或不同类型的分子。例如，在某些实施例中，第一分子和第二分子可以各自独立地选自以下类型的分子：多肽、有机小分子、对第一活性剂或第二活性剂进行编码的核酸(任选地，DNA或mRNA，任选地，经过修饰的RNA)、包括对第一活性剂或第二活性剂进行编码的核酸序列的载体(任选地，表达载体或病毒载体)以及包括对第一活性剂或第二活性剂进行编码的核酸序列的细胞(任选地，表达盒)。
在相关方面，本发明提供了一种用于治疗疾病或病状的方法，所述疾病或病状例如与减少的Wnt信号传导相关的疾病或病症或者增加的Wnt信号传导将会提供治疗益处的疾病或病症，所述方法包括使有需要的受试者与包括有效量的多核苷酸的药物组合物接触，所述多核苷酸包括对本发明的组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列，其中所述分子包括以组织特异性或细胞特异性方式与靶组织或靶细胞上的细胞表面受体结合的靶向模块。在某些实施例中，还使受试者与包括有效量的多核苷酸的药物组合物接触，所述多核苷酸包括对Wnt多肽、诺里病蛋白多肽或Wnt信号传导激动剂进行编码的核酸序列。在某些实施例中，多核苷酸是DNA或mRNA，例如经修饰的mRNA。在特定实施例中，多核苷酸是进一步包括5'帽序列和/或3'拖尾序列(例如polyA尾)的经修饰的mRNA。在其它实施例中，多核苷酸是包括与编码序列操作性地连接的启动子的表达盒。在某些实施例中，对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列和对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列存在于相同的多核苷酸中。
在相关方面，本发明提供了一种用于治疗疾病或病状的方法，所述疾病或病状例如与减少的Wnt信号传导相关的疾病或病症或者增加的Wnt信号传导将会提供治疗益处的疾病或病症，所述方法包括使有需要的受试者与包括有效量的载体的药物组合物接触，所述载体包括对本发明的组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列，其中所述分子包括以组织特异性或细胞特异性方式与靶组织或靶细胞上的细胞表面受体结合的靶向模块。在某些实施例中，还使受试者与包括有效量的载体的药物组合物接触，所述载体包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂进行编码的核酸序列。在某些实施例中，载体是表达载体并且可以包括与核酸序列操作性地连接的启动子序列。在特定实施例中，载体是病毒载体。在某些实施例中，对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列和对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列存在于相同的载体中，例如在相同的表达盒中。
在相关方面，本发明提供了一种用于治疗疾病或病状的方法，所述疾病或病状例如与减少的Wnt信号传导相关的疾病或病症或者增加的Wnt信号传导将会提供治疗益处的疾病或病症，所述方法包括使有需要的受试者与包括有效量的细胞的药物组合物接触，所述细胞包括对本发明的组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列，其中所述分子包括以组织特异性或细胞特异性方式与靶组织或靶细胞上的细胞表面受体结合的靶向模块。在某些实施例中，还使受试者与包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂进行编码的核酸序列的细胞接触。在某些实施例中，对组织特异性Wnt信号增强分子进行编码的核酸序列和对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列存在于相同的细胞中。在特定实施例中，细胞是从待治疗受试者获得的异源细胞或自体细胞。在某些实施例中，用包括对组织特异性Wnt信号增强分子或者Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的表达盒的载体对细胞进行转导。在特定实施例中，细胞是干细胞，例如脂肪源干细胞或造血干细胞。
Wnt信号传导在干细胞的发育过程和维持中发挥着关键作用。Wnt信号的重新活化与损伤和疾病后大多数组织的再生和修复相关。组织特异性Wnt信号增强分子可以响应于损伤和疾病提供愈合和组织修复的益处。组织损害和损失的原因包含但不限于老化、变性、遗传性病状、感染和炎症、创伤性损伤、毒素/代谢诱导的毒性或其它病理性病状。已经示出Wnt信号和Wnt信号的增强子使成年组织驻留干细胞活化。在一些实施例中，施用本发明的化合物以用于治疗患病组织或受损组织、用于组织再生以及用于细胞生长和增殖和/或用于组织工程化。
与Wnt通路的突变相关的人类疾病针对治疗和预防疾病中Wnt信号的增强提供了有力证据。临床前体内和体外研究提供了许多疾病病状中涉及Wnt信号的另外的证据，并且进一步支持将组织特异性Wnt信号增强分子用于各种人类疾病。例如，本发明的组合物可以用于促进或增加骨生长或再生、骨移植、骨折愈合、骨质疏松症和骨质疏松性骨折的治疗、脊柱融合、矫形装置的骨整合、腱-骨整合、牙齿生长和再生、牙种植、牙周疾病、颌面重建和颌骨坏死。本发明的组合物还可以用于：治疗脱发；增强感觉器官的再生(例如，治疗听力丧失，包含内和外听觉毛细胞的再生)、治疗前庭功能减退、治疗黄斑变性、治疗视网膜病变(包含玻璃体视网膜病变、糖尿病性视网膜病变或其它视网膜变性疾病)、富克斯氏营养不良(Fuchs'dystrophy)、其它角膜疾病等；治疗中风、创伤性脑损伤、阿尔茨海默病、多发性硬化症和影响血脑屏障的变性或完整性的其它病状；治疗脊髓损伤、其它脊髓疾病。本发明的组合物还可以用于治疗口腔粘膜炎、肠粘膜炎；治疗短肠综合征、炎性肠疾病(IBD)，包含但不限于克罗恩氏病(Crohn's disease)(CD)和溃疡性结肠炎(UC)，具体地是伴有瘘管形成的CD和UC、其它胃肠病症；治疗代谢综合征；治疗糖尿病；治疗胰腺炎、其中外分泌或内分泌胰腺组织受损的病状、其中期望增强的表皮再生例如表皮伤口愈合的病状；治疗糖尿病足溃疡、涉及牙齿、指甲或真皮发育不全等的综合征、其中血管生成有益的病状；治疗心肌梗死、冠状动脉疾病、心力衰竭；增强造血细胞的生长，例如增强来自骨髓的造血干细胞移植、动员外周血；治疗免疫缺陷、移植物抗宿主疾病等；治疗急性肾损伤、慢性肾病；治疗肺病、慢性阻塞性肺病(COPD)、特发性肺纤维化、肺组织的增强的再生，具体地是肺干细胞(例如，AT2和AT1细胞)的增殖和分化。本发明的组合物还可以用于增强肝细胞再生，例如肝再生、治疗肝硬化、增强肝移植、治疗急性肝衰竭、治疗经历肝炎(甲型、乙型或丙型)病毒感染或抗病毒后药物疗法的慢性肝病、酒精性肝病(包含酒精性肝炎)、伴有脂肪变性或脂肪性肝炎的非酒精性肝病等。本发明的组合物可以治疗疾病和病症，包含但不限于其中期望再生性细胞生长的病状。
涉及Wnt信号传导组分中的功能丧失突变或功能获得突变的人类遗传学示出了支持增强Wnt信号以用于骨生长的有力证据。其中期望增强的骨生长的病状可以包含但不限于骨折、移植、在假体装置周围向内生长、骨质疏松症、骨质疏松性骨折、脊柱融合、颌骨坏死、牙种植、牙周疾病、颌面重建等。组织特异性Wnt信号增强分子增强和促进了对促进骨再生至关重要的Wnt信号。用于使骨组织再生的方法受益于施用本发明的化合物，所述施用可以是全身性的或局部化的。在一些实施例中，使骨髓细胞暴露于本发明的分子，从而使得所述骨髓内的干细胞活化。
在一些实施例中，通过使反应性细胞群与有效剂量的本发明的分子接触来增强骨再生，所述反应性细胞群例如骨髓、骨祖细胞、骨干细胞等。用于使骨组织再生的方法受益于施用本发明的化合物，所述施用可以是全身性的或局部化的。在一些这种实施例中，在体内执行接触。在其它这种实施例中，离体地执行接触。分子可以例如通过加载到任选地可生物降解的基质上而定位到作用位点，并且任选地提供活性剂的缓释。基质载体包含但不限于可吸收的胶原海绵、陶瓷、水凝胶、高分子微球、纳米颗粒、骨水泥等。
包括本发明的分子中的一种或多种分子的组合物可以用于在体内治疗骨骼组织缺陷。“骨骼组织缺陷”意指骨骼或其它骨骼结缔组织在期望恢复骨骼或结缔组织的任何位点处的缺陷，无论缺陷是如何引起的，例如无论是手术干预、肿瘤切除、溃疡、植入、骨折还是其它创伤性或变性病状的结果。本发明的组合物可以用作用于恢复结缔组织的软骨功能、用于修复软骨组织的缺损或损伤的方案的一部分，所述软骨组织的缺损或损伤如变性磨损和关节炎、组织创伤、半月板撕裂移位、半月板切除、由韧带撕裂、关节不齐、骨折或遗传性疾病引起的关节脱位。
本发明的组合物还可以用于治疗牙周病。牙周病是牙齿脱落的主要原因并且与多种全身性病状有关。在一些实施例中，通过接触反应性细胞群来增强牙齿或下层骨再生。在一些这种实施例中，在体内执行接触。在其它这种实施例中，离体地执行接触，随后植入活化的干细胞或祖细胞。分子可以例如通过加载到任选地可生物降解的基质上而定位到作用位点，并且任选地提供活性剂的缓释。基质载体包含但不限于可吸收的胶原海绵、陶瓷、水凝胶、骨水泥、聚合物微球、纳米颗粒等。
研究已经表明，Wnt信号传导和R-脊椎蛋白的生物学能够在损伤、老化或变性后促进内耳中的感觉毛细胞再生。听力丧失或前庭功能减退所涉及的内耳中感觉毛细胞的损失也可以受益于本发明的组合物。在内耳中，听觉器官容纳将声音振动转化为电脉冲所需的机械敏感毛细胞。包括半规管(SSC)、椭圆囊和球囊的前庭器官还含有感觉毛细胞，以检测头部位置和头部运动。本发明的组合物可以用于例如：输注；基质或其它储库系统；或者到耳朵的其它局部应用以增强听觉再生。
本发明的组合物还可以用于视网膜组织再生。在成年哺乳动物视网膜中，穆勒神经胶质细胞(Muller glia cell)能够例如在体内神经毒性损伤后之后使视网膜细胞(包含光感受器)再生。Wnt信号传导和Wnt信号的增强子可以促进穆勒神经胶质源视网膜祖细胞在损害后或在变性期间增殖。本发明的组合物还可以用于使眼中的组织和其它细胞类型再生。例如，年龄相关性黄斑变性(AMD)、其它视网膜变性疾病、角膜病、富克斯氏营养不良、玻璃体视网膜病变、遗传性疾病等可以受益于本发明的组合物。AMD的特征在于渐进性降低的中心视觉和视敏度。富克斯氏营养不良症的特征在于角膜内皮细胞逐渐丧失。Wnt信号和Wnt信号的增强可以促进眼部组织中角膜内皮、视网膜上皮等的再生。在其它实施例中，本发明的组合物可以用于例如：输注；基质或其它储库系统；或者到眼睛的其它局部应用以使视网膜再生并治疗黄斑变性。
已经通过谱系示踪研究鉴别出用于肝细胞的稳态更新的特定增殖细胞群，例如中心周围区的Axin2阳性细胞。谱系示踪研究还鉴别出了另外可能的肝脏祖细胞，包含但不限于Lgr阳性细胞。包含Lgr5阳性细胞和Axin2阳性细胞在内的自我更新肝细胞和其它可能祖细胞群被鉴别为能够在损伤后响应于Wnt信号和/或R-脊椎蛋白进行再生。急性肝损伤和衰竭以及慢性肝病的许多临床前模型示出肝细胞的恢复和再生受益于增强Wnt信号。在某些实施例中，本发明的组合物可以用于治疗例如(所有原因的)急性肝衰竭、急性酒精性肝损伤、经历丙型肝炎或乙型肝炎病毒感染或抗病毒后药物疗法的慢性肝病、慢性酒精性肝病、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)(脂肪肝)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、所有原因的重度慢性肝病、所有原因的急性肝衰竭、药物诱导的急性肝衰竭、酒精性肝病、(所有原因的)慢性肝衰竭、所有原因的肝纤维化、门脉高压、所有原因的慢性肝功能不全、酒精性肝炎、丙型肝炎病毒诱导的肝病(HCV)、乙型肝炎病毒诱导的肝病(HBV)、其它病毒性肝炎(例如，甲型肝炎病毒诱导的肝病(HAV)和丁型肝炎病毒诱导的肝病(HDV))、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、肝脏外科手术、肝损伤、肝移植、肝脏外科手术和移植中的“小肝”综合征、先天性肝疾病和病症、由遗传疾病、变性、老化、药物或损伤引起的任何其它肝病症或缺陷。本发明的组合物还可以用于在体内或在体外增强肝细胞的再生。用于使肝组织再生的方法受益于施用本发明的化合物，所述施用可以是全身性的或局部化的。这些方法包含但不限于全身性施用方法和局部化施用方法，例如通过注射到肝组织中、通过注射到通向肝脏的静脉或血管中、通过植入缓释调配物等。
本发明的组合物可以用于治疗终末期肝病(ESLD)。ESLD或慢性肝衰竭通常是重度肝硬化和所产生的肝纤维化的结果。ESLD通过发展有腹水、静脉曲张出血、肝性脑病变和/或肝功能受损(例如，代偿失调的肝病)而表现出来。与ESLD相关的常见疾病或病症包含：酒精性肝炎、慢性丙型肝炎感染、慢性乙型肝炎感染、慢性丁型肝炎感染、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)(包含非酒精性脂肪性肝炎(NASH))以及如囊性纤维化、α-1抗胰蛋白酶缺乏、血色沉着病、威尔逊病(Wilson disease)、半乳糖血症和糖原贮积病等遗传性疾病。长期暴露于药物、毒性化学品、寄生虫感染以及伴有肝淤血的重复心力衰竭也可能导致ESLD。
Wnt信号在各种上皮组织的再生中发挥着重要作用。各种表皮病状受益于用本发明的化合物进行的治疗。当附在胃肠道上的快速分开的上皮细胞破裂从而使粘膜组织易于溃疡和感染时，发生粘膜炎。上皮层(epithelial lining)的覆盖口腔的部分，被称为口腔粘膜，是身体最敏感的部位之一，并且特别容易受到化疗和放射的伤害。口腔粘膜炎可能是癌症治疗特别是化疗和放射中最常见的使人衰弱的并发症。另外，本发明的组合物还可以有益于治疗肠道粘膜炎、短肠综合征、炎性肠病(IBD)或其它胃肠病症。其它表皮病状包含表皮伤口愈合、糖尿病足溃疡、涉及牙齿、指甲或皮肤发育不全的综合征等。本发明的分子可以用于所有这些病状，其中再生性细胞与本发明的化合物接触。用于使上皮组织再生的方法受益于施用本发明的化合物，所述施用可以是全身性的或局部化的。接触可以是例如局部的，包含皮内、皮下，以施加在靶向位点等处的凝胶、洗剂、乳膏等形式。
除皮肤和胃肠道外，Wnt信号以及Wnt信号的增强和促进还在临床前模型中在包含胰腺、肾和肺在内的组织的修复和再生中发挥着重要作用。组织特异性Wnt信号增强分子可以有益于涉及外分泌和内分泌胰腺、肾或肺的各种疾病病状。本发明的组合物可以用于：治疗代谢综合征；治疗糖尿病；治疗急性或慢性胰腺炎、外分泌胰腺功能不全；治疗急性肾损伤、慢性肾病；治疗肺病，包含但不限于慢性阻塞性肺病(COPD)、特发性肺纤维化、导致肺上皮组织缺失的其它病状。用于使这些组织再生的方法受益于施用本发明的化合物，所述施用可以是全身性的或局部化的。
与经由其它发育因子进行的信号传导协调的表皮Wnt信号传导对成人毛囊再生至关重要。脱发是常见问题，并且雄激素性脱发，通常称为男性型秃发，是男性最常见的脱发形式。在一些实施例中，通过使反应性细胞群与本发明的分子接触来增强毛囊再生。在一些这种实施例中，在体内执行接触。在其它这种实施例中，离体地执行接触。分子可以定位到作用位点处，例如外用洗剂、凝胶、乳膏等。
可以用本发明的组织特异性Wnt信号增强分子治疗中风、创伤性脑损伤、阿尔茨海默病、多发性硬化和影响血脑屏障(BBB)的其它病状。血管生成对确保向贯穿全身的许多组织供应氧气和营养物至关重要，并且对CNS而言尤其重要，因为神经组织对缺氧和缺血极其敏感。形成BBB的CNS内皮细胞与非神经组织中的内皮细胞的不同之处在于，CNS内皮细胞是通过紧密连接保持在一起的高度极化细胞并且表达特定转运蛋白。Wnt信号传导调节CNS血管形成和/或功能。BBB受损的病状可以受益于施用本发明的化合物，所述施用可以是全身性的或局部化的，例如通过直接注射、鞘内施用、植入缓释配制物等。另外，Wnt信号积极参与神经发生并且在损伤后发挥神经保护的作用。本发明的组合物还可以用于治疗脊髓损伤、其它脊髓疾病、中风、创伤性脑损伤等。
Wnt信号还在血管生成中发挥作用。组织特异性Wnt信号增强分子可以有益于血管生成有利的病状、治疗心肌梗死、冠状动脉疾病、心力衰竭等以及源自遗传性疾病的病状。用于使这些组织再生的方法受益于施用本发明的化合物，所述施用可以是全身性的或局部化的。
在某些实施例中，本发明的方法促进组织再生，例如在经受损害或者组织或细胞减少或损耗的组织中。损耗或损害可以是导致细胞数量减少的任何事物，包含疾病或损伤。例如，事故、自身免疫病症、治疗副作用或疾病状态可能会构成创伤。组织再生增加了组织内的细胞数量，并且优选地使组织的细胞之间能够重新建立连接，并且更优选地使组织能够重新获得功能。
在特定实施例中，组合物是肠胃外施用的，例如，静脉内、口服、直肠或通过注射施用。在一些实施例中，局部地，例如局部地或肌内地施用药物组合物。在一些实施例中，组合物施用于靶组织，例如骨、关节、耳组织、眼组织、胃肠道、皮肤、伤口部位或脊髓。可以在体内或离体地实践本发明的方法。在一些实施例中，离体地执行靶细胞或靶组织与组织特异性Wnt信号增强分子的接触，随后将细胞或组织例如活化的干细胞或祖细胞植入到受试者体内。技术人员可以基于正在治疗的疾病或病症确定适合的施用位点和施用途径。
剂量和剂量方案可以取决于医师容易确定的各种因素，如疾病或病症的性质、受试者的特性和受试者的病史。在特定实施例中，向受试者施用或提供的组织特异性Wnt信号增强分子例如融合蛋白的量的范围为受试者体重的约0.01mg/kg到约50mg/kg、0.1mg/kg到约500mg/kg或约0.1mg/kg到约50mg/kg。
在某些实施例中，受试者可以是任何哺乳动物，例如人、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠、沙鼠)、兔、猫科动物、犬科动物、山羊、绵羊、猪、马科动物、牛科动物或灵长类动物。
在一些实施例中，主题方法产生了治疗益处，例如预防病症的发展、停止病症的进展、逆转病症的进展等。在一些实施例中，主题方法包括检测到已经达到治疗益处的步骤。本领域内普通技术人员应了解，治疗功效的这种量度将适用于正被修饰的特定疾病，并且应认识到用于测量治疗功效的适当检测方法。
在某些实施例中，本公开提供了一种用于治疗或预防与减少的Wnt信号传导相关或者将会受益于骨组织中增加的Wnt信号传导活性的疾病或病症的方法，所述疾病或病症例如期望骨生长的本文所公开的病状中的任何病状，所述方法包括向有需要的受试者提供包括Wnt信号增强分子的药物组合物，所述Wnt信号增强分子包括结合骨组织的靶向模块，例如与PTH1R特异性地结合的靶向模块，其中所述Wnt信号增强分子增加或增强了受试者的骨组织中的Wnt信号传导。在某些实施例中，药物组合物口服或全身性地例如肠胃外施用。在特定实施例中，Wnt信号增强分子包括作用模块，所述作用模块包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或其片段或者变体以及任选地突变的弗林蛋白酶结构域2或其片段或者变体。
在某些实施例中，本公开提供了一种用于治疗或预防与减少的Wnt信号传导相关或者将会受益于肝组织中增加的Wnt信号传导活性的疾病或病症的方法，所述疾病或病症例如将会受益于肝再生的本文所公开的疾病或病症中的任何疾病或病症，所述方法包括向有需要的受试者提供包括Wnt信号增强分子的药物组合物，所述Wnt信号增强分子包括结合肝组织的靶向模块，例如与ASGR1、ASGR2、TFR2或SLC10A1特异性地结合的靶向模块，其中所述Wnt信号增强分子增加或增强了受试者的肝组织中的Wnt信号传导。在某些实施例中，药物组合物口服或全身性地例如肠胃外施用。在特定实施例中，Wnt信号增强分子包括作用模块，所述作用模块包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或其片段或者变体以及任选地突变的弗林蛋白酶结构域2或其片段或者变体。
在某些实施例中，本公开提供了一种用于治疗或预防与减少的Wnt信号传导相关或者将会受益于口腔粘膜组织中增加的Wnt信号传导活性的疾病或病症例如口腔粘膜炎的方法，所述方法包括向有需要的受试者提供包括Wnt信号增强分子的药物组合物，所述Wnt信号增强分子包括结合口腔粘膜组织的靶向模块，例如与LYPD3或DSG3特异性地结合的靶向模块，其中所述Wnt信号增强分子增加或增强了受试者的口腔粘膜组织中的Wnt信号传导。在某些实施例中，药物组合物口服或全身性地例如肠胃外施用。在特定实施例中，Wnt信号增强分子包括作用模块，所述作用模块包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1或其片段或者变体以及任选地突变的弗林蛋白酶结构域2或其片段或者变体。
本说明书中提及的和/或在申请数据表中列出的所有上述美国专利、美国专利申请公开、美国专利申请、外国专利、外国专利申请和非专利公开均通过全文引用的方式并入本文。
从上文应理解的是，虽然出于说明的目的已经在本文中描述了本发明的特定实施例，但可以在不偏离本发明的精神和范围的情况下进行各种修改。因此，除所附的权利要求之外本发明不受限制。
实例
提出以下实例以便向本领域普通技术人员提供如何形成和使用本发明的完整公开和描述并且不旨在限制诸位发明人考虑作为其发明的范围，所述实例也不旨在表示以下实验是执行的全部或仅有的实验。虽然已尽力确保所用数字(例如，量、温度等)的准确性，但仍应考虑一些实验误差和偏差。除非另有指示，否则份是重量份、分子量是重均分子量、温度是以摄氏度为单位并且压力是处于或接近于大气压。
可以在这种标准教科书中找到分子生物学、细胞生物学和生物化学的一般方法，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)第3版》(Sambrook等人,港口实验室出版社(HaRBor Laboratory Press)2001)；《精编分子生物学实验指南(Short Protocols in Molecular Biology)第4版》(Ausubel等人编,约翰威利父子公司(John Wiley&Sons)1999)；《蛋白质方法(Protein Methods)》(Bollag等人,约翰威利父子出版公司,1996)；《基因疗法的非病毒载体(Nonviral Vectors for Gene Therapy)》(Wagner等人编,学术出版社1999)；《病毒载体(Viral Vector)》(Kaplift和Loewy,编辑,学术出版社,1995)；《免疫学方法手册(Immunology Methods Manual)》(I.Lefkovits编辑,学术出版社,1997)；和《细胞和组织培养：生物技术实验室程序(Cell and Tissue Culture:Laboratory Procedures in Biotechnology)》(Doyle和Griffiths,约翰威利父子出版公司,1998)，所述标准教科书的公开内容通过引用并入本文。本公开中提及的用于基因操纵的试剂、克隆载体和试剂盒可从如伯乐公司(BioRad)、斯特拉塔基因公司(Stratagene)、英杰公司(Invitrogen)、西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)和酷龙技术公司(ClonTech)等商业供应商获得。
以下实例中所采用的材料与方法包含以下。
已发表的ASGR1结合剂：原型抗ASGR1结合剂(RO-01)和几种其它结合剂(RO-02、RO-03和RO-04)选自PCT专利申请公开第WO2014/023709号。抗TFR1序列选自PCT专利申请公开第WO2016/081640号。抗LYPD3序列选自PCT专利申请公开第WO2017/0158775号。抗DSG3序列选自PCT专利申请公开第WO2010/092457号。ZNRF3结合剂SC-01和SC-02选自PCT专利申请公开第WO2015/164392号。RNF43结合剂NV-01选自PCT专利申请公开第WO 2013/054307号。
蛋白质产生：除非另外指明，否则所有重组蛋白均通过瞬时转染在Expi293F细胞(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific))中产生。所有含有scFv的融合物都含有FLAG-His标签并且首先遵循供应商推荐的程序使用完整的his标签纯化树脂(西格玛奥德里奇公司)进行纯化。将所有基于IgG并且含有Fc的构建体首先用蛋白A树脂纯化并且用pH 3.5的0.1M甘氨酸洗脱。然后将所有蛋白质在HBS缓冲液(10mM HEPES pH 7.2，150mMNaCl)中通过尺寸排阻柱进行抛光。将蛋白质用甘油补充至10％，以便在-80℃下长期储存。对于体外受体结合分析，将人RNF3(Q44-D198)和ZNRF3(K56-M219)以及ASGR1(Q62-L291)在N端处用His-Avi标签表达，并且将小鼠ASGR1(Q61-N284)的的细胞外结构域在C端处用His-Avi标签表达。将所述蛋白质通过His标签树脂纯化、如所描述地生物素化(Janda等人,2017；《自然》545:234)、然后通过尺寸排阻色谱法进一步纯化。对于亲和力测量，将ASGR1结合剂的Fab版本用人IgG1CH1结构域的C端处的(His)6标签、之后是5聚体接头(GSGSG)来形成并且通过His标签树脂、然后通过尺寸排阻色谱法纯化。将所有测试的蛋白质通过SDS-聚丙烯酰胺电泳进行检查并且估计纯度为至少90％。
SuperTop Flash(STF)测定：使用含有由报告的(Janda等人,2017；《自然》545:234)Wnt反应性启动子(Super Top Flash报告基因测定，STF)控制的荧光素酶基因的细胞系来测量Wnt信号传导活性。简而言之，处理前24小时将细胞以每孔10,000个的密度接种在96孔板中，然后将细胞单独地或与30％Wnt3a条件培养基一起用RSPO或模拟蛋白处理过夜。Wnt3a条件培养基遵循供应商推荐的条件由ATCC-CRL-2647 Wnt3a分泌性L细胞制备。用荧光素酶细胞培养裂解试剂(普洛麦格公司(Promega))来裂解细胞，并且使用供应商建议的程序用荧光素酶测定系统(普洛麦格公司)测量活性。一式三份地将数据绘制成均值-/+标准偏差并且使用Prism(GraphPad软件)通过非线性回归进行拟合。对于外源性受体的过表达，将细胞在真核表达启动子下用含有关注的受体(ASGR1是来自金斯瑞公司(GenScript)的克隆OHU03658D，ASGR2是内部克隆的同种型d/NP_001188281.1，并且TFRC是来自赛诺生物技术有限公司(SinoBiologicals)的克隆HG11020-UT)的质粒瞬时转染，然后将细胞分到96孔板(每孔20,000个细胞)中，以在转染后24小时进行STF测定。
亲和力测量：通过生物层干涉法(BLI)使用Octet Red 96(加利福尼亚州佛瑞蒙的PALL ForteBio公司(PALL ForteBio,Fremont,CA))仪器在30℃以1000 rpm利用链霉亲和素(SA)生物传感器或抗hIgG Fc捕获(AHC)生物传感器来测定RSPO衍生的蛋白质与LGR5、RNF43或ZNRF3的结合动力学以及抗ASGR Fab与人和/或小鼠ASGR1的结合。在分别捕获到SA生物传感器和AHC生物传感器的运行缓冲液(PBS、0.05％吐温-20、0.5％BSA，pH 7.2)中将RNF43或ZNRF3或ASGR1的生物素化细胞外结构域(ECD)和人IgG1融合的LGR5-ECD(R&D系统公司(R&D systems))的Fc部分稀释到50 nM，直到偶联水平达到约1.0 nm。在捕获RNF43、ZNRF3或LGR5的ECD之后，将生物传感器浸入含有在运行缓冲液中的7种不同浓度下的相关测试分子的孔以及仅将运行缓冲液作为参考通道的孔中。基于缔合相在介于140到145秒之间对与LGR5、RNF43和ZNRF3的结合的平均反应通过稳态分析来测定KD。对于与ASGR的结合，使用
Figure BDA0002940321710000881
Red数据分析软件(Fortebio公司)通过曲线模型拟合来测定KD。
细胞流式细胞术：将HEK293细胞单独或与ASGR1一起用过表达ZNRF3(金斯瑞公司OHu22977)的质粒瞬时转染并且然后在10 nM最终浓度下在具有或不具有10％Wnt3a条件培养基的情况下用RSPO衍生分子处理24小时。将细胞使用Gibco公司(Gibco)无酶解离缓冲液解离、洗涤并重悬于FACS缓冲液(具有1％BSA和0.02％叠氮化钠的1X PBS)中。将细胞与1nM 18R5 IgG(泛卷曲蛋白)温育1小时。洗涤之后，将细胞与山羊抗人IgG Alexa Fluor 647(英杰公司)温育40分钟。将细胞用FACS缓冲液洗涤并且使用BD Accuri C6+流式细胞仪进行多通道分析。用FlowJo软件对数据进行处理，并且以直方绘图显示荧光信号。
细胞蛋白的蛋白质印迹分析：用补充有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液(50mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1％IGEPAL CA630、0.5％脱氧胆酸钠、0.1％SDS和1mM EDTA)对细胞进行裂解。将细胞裂解物在4℃以15,000 rpm旋转5分钟，并且将上清液通过SDS-PAGE溶解、转移到硝酸纤维素膜并且用一级抗体进行探测、然后是HRP缀合的二级抗体和ECL膜检测。抗LRP6一级抗体、抗磷酸-LRP6一级抗体(Ser1490)和抗DLV2一级抗体来自细胞信号传导科技公司(Cell Signaling Technology)。抗α微管蛋白抗体来自西格玛奥德里奇公司。
基因表达的半定量PCR分析：使用Qiagen RNeasy微试剂盒(凯杰公司(Qiagen)，74004)从人细胞培养物(HEK293、Huh-7和A431)中提取RNA。使用SuperScriptTM VILOTMcDNA合成试剂盒(赛默飞世尔公司(ThermoFisher)，11754050)产生cDNA。通过使用
Figure BDA0002940321710000891
快速高级主混合物(Fast Advanced Master Mix)(赛默飞世尔公司，4444963)以及Hs01005019_m1 ASGR1、Hs00154160_m1 ASGR2和Hs00951083_m1 TFRC探针(赛默飞世尔公司，4331182)来测量人ASGR1、ASGR2和TFRC表达。使用Hs01060665_m1探针(赛默飞世尔公司，4331182)将值相对于组成型肌动蛋白B基因的表达标准化。使用MagMAXTM mirVanaTM总RNA分离试剂盒(赛默飞世尔公司，A27828)从小鼠组织(肝样品和小肠样品)中提取RNA。使用高容量cDNA逆转录试剂盒(赛默飞世尔公司，43-688-14)或SuperScriptTM IV VILOTM主混合物(赛默飞世尔公司，目录号11756050)产生cDNA。通过使用
Figure BDA0002940321710000892
快速高级主混合物(赛默飞世尔公司，4444963)以及Mm00443610_m1 Axin2、Mm01278617_m1 Ki67、Mm01300555_g1 wnt1、Mm00470018_m1 wnt2、Mm00437336_m1 wnt3、Mm01194003_m1 wnt4、Mm00437347_m1 wnt5a、Mm01183986_m1 wnt5b、Mm00437353_m1 wnt6、Mm00437356_m1wnt7a、Mm01301717_m1 wnt7b、Mm01157914_g1 wnt8a、Mm00457102_m1 wnt9b、Mm00442104_m1 wnt10b、Mm00437327_g1 wnt11、Mm00446420_m1 wnt16、Mm00507077_m1 rspo1、Mm00555790_m1 rspo2、Mm01188251_m1 rspo3和Mm00615419_m1 rspo4探针(赛默飞世尔公司，4331182)来测定小鼠Axin2和Ki67 mRNA表达。使用Mm02619580_g1探针(赛默飞世尔公司，4351368)将值相对于组成型肌动蛋白B基因的表达标准化。
动物研究：从杰克逊实验室(美国缅因州巴港)(Bar Harbor,ME,USA)获得六周龄的C57Bl/6J雄性小鼠，并且将其分组饲养。所有动物实验均符合国家科学院(NationalAcademy of Sciences)制定的“实验室动物护理和使用指南(Guide for the Care andUse of Laboratory Animals)”的准则。用于动物实验的方案得到了Surrozen机构动物护理和使用委员会(Surrozen Institutional Animal Care and Use Committee)批准。在开始实验之前至少两天，使小鼠适应环境。使小鼠无限制地饮用纯化的实验室级酸化水并且随意喂养(2018Teklad全球18％蛋白质啮齿动物饮食)。保持小鼠在30％到70％的湿度环境和20℃到26℃范围内的室温下处于12/12小时光照/黑暗循环。
在小鼠针对人ASGR基因表达被人源化的情况下，在第0天向每只小鼠静脉内给药1×1011个ssAAV8-CAG-hASGR1基因组拷贝(宾夕法尼亚州马尔文的载体生物实验室(VectorBiolabs,Malvern,PA))。在第7天，向小鼠腹膜内注射(i.p.)αGFP、Fc-RSPO2-WT、αGFP-RSPO2-RA或αASGR1-RSPO2-RA。在蛋白质给药后的指示时间，用异氟醚麻醉小鼠，并且通过心脏穿刺取得血液。收集肝左叶和十二指肠的一部分以供分析。
实例1
组织特异性WNT信号传导增强分子的表征
为了产生组织特异性RSPO样Wnt信号传导增强子分子，靶向脱唾液酸糖蛋白受体(ASGR)。ASGR是由两种多肽ASGR1和ASGR2构成的异源寡聚体，所述两种多肽主要表达在肝细胞上并且经历快速的内吞作用。将ASGR1抗体(例如，RO-01)转换成scFv格式并且将其融合到不同RSPO2变体的N端以产生αASGR1-RSPO2-WT、αASGR1-RSPO2-RA或αASGR1-RSPO2-5mut(SEQ ID NO:11-16，图1B，右图)。在此设计中，融合物的抗体部分充当引导细胞/组织特异性的“靶向模块”，而RSPO2组分充当与E3连接酶相互作用的“作用模块”(图1B)。为了消除LGR结合，将点突变引入到RSPO2的Fu2结构域内的据报告对与LGR蛋白的结合至关重要的两个高度保守的疏水残基中，引入了F105R和F109A(图1B，名为αASGR1-RSPO2-RA)。为了验证Fu1结构域在E3连接酶中的参与，还添加了Fu1结构域中的据报告对此相互作用至关重要的另外的点突变(R65A/R69A/Q70A)(图1B，含有Fu1和Fu2两者中所有5个突变F105R/F109A/R65A/R69A/Q70A的αASGR1-RSPO2-5mut)。作为靶向模块的阴性对照，将针对绿色荧光蛋白(GFP)的scFv抗体融合到相同的人Rspo2片段和人Rspo2突变体(α-GFP-Rspo2-WT、α-GFP-Rspo2-RA和α-GFP-Rspo2-5mut；SEQ ID NO:5-10，图1B；左图)。
在Octet系统上使用生物层干涉法来验证Fu1和Fu2突变对LGR和E3连接酶结合的影响。测量了野生型(αGFP-RSPO2-WT)或突变体(αGFP-RSPO2-RA或αGFP-RSPO2-5mut)与重组LGR5蛋白的结合，并且观察到了野生型的结合，但未观察到两个Fu2突变RSPO变体的结合(图1C)。由于αGFP-RSPO2-RA与E3连接酶、ZNRF3和RNF3的结合未受影响，所以Fu2突变的效果对LGR相互作用具有特异性(图1D)，而在Fu1结构域中含有突变的αGFP-RSPO2-5mut另外地影响了与E3连接酶的相互作用(图1D)。
在HEK293和Huh-7 Wnt反应性STF细胞中测试Fu1和Fu2突变对RSPO2增强Wnt信号传导的能力的影响。如图2B的右图中示出的，在不存在任何添加的Wnt的情况下，RSPO2蛋白均不活化Wnt信号传导。在存在Wnt3a条件培养基(CM)的情况下，αGFP-RSPO2-WT以剂量反应性方式增强Wnt3a活性，然而Fu1(αGFP-RSPO2-RA)或Fu1+Fu2(αGFP-RSPO2-5mut)中的突变完全无活性，这与RSPO2活性依赖于接合E3连接酶和LGR蛋白两者的能力的预期一致。
将靶向模块从抗GFP切换到抗ASGR1对RSPO2与E3连接酶或LGR5蛋白的相互作用没有明显影响。αASGR1-RSPO2-WT与E3连接酶和LGR5两者结合，αASGR1-RSPO2-RA丧失了与LGR5相互作用的能力，并且αASGR1-RSPO2-5mut丧失了与LGR5和E3连接酶两者相互作用的能力(图1C和1D)。
还在HEK293 STF Wnt反应性报告基因细胞和Huh-7 STF Wnt反应性报告基因细胞两者中评估这些分子调节Wnt信号传导的能力。在HEK293 STF细胞中，由于这些分子不表达ASGR1(如通过半定量PCR分析验证的，图2A)，因此抗ASGR1-RSPO2融合蛋白几乎与其抗GFP对应物相同地表现(图2B)。在不存在添加的Wnt的情况下，αASGR1-RSPO2蛋白均不活化Wnt信号传导(图2B，右图)。在存在Wnt3a条件培养基(CM)的情况下，αASGR1-RSPO2-WT以类似于αGFP-RSPO2-WT的剂量反应性方式增强Wnt3a活性，而αASGR1-RSPO2-RA和αASGR1-RSPO2-5mut无活性(图2B)。相比之下，在表达ASGR1的人肝癌细胞系Huh-7 STF细胞中，αASGR1scFv的融合显著地挽救了RSPO2-RA突变体增强Wnt3a诱导的信号传导的能力(图2B，左下图)。αASGR1-RSPO2-5mut保持无活性，这证明观察到的αASGR1-RSPO2-RA的活性依赖于其接合E3连接酶的能力。有趣的是，相比于αGFP-RSPO2-WT，αASGR1 scFv与WT RSPO2的融合αASGR1-RSPO2-WT还在剂量反应曲线中示出了显著的约6倍的左移(图2B)，这表明新的靶向模块αASGR1 scFv的连接可能已经与LGR协同以进一步增强WT RSPO2功能。
除了STF报告基因系统之外，还通过蛋白质印迹分析来直接检查Wnt信号传导活性。如图2C中示出的，虽然用10％Wnt3a CM处理Huh-7细胞未诱导显著的变化，但αGFP-RSPO2-WT的添加除了增加LRP6蛋白的总水平之外还增强了Wnt3a反应并且显著地增加了磷酸化LRP6蛋白和DVL2蛋白两者。如在αGFP-RSPO2-RA处理的细胞中所看到的，Fu2中的突变消除了此增强活性。然而，与αASGR scFv的融合αASGR1-RSPO2-RA挽救了与αGFP-RSPO2-RA的功能表型的损失、略微增加了总LRP6蛋白并且显著增加了磷酸化水平LRP6以及在较小程度上DVL2(图2C)。
为了进一步证实抗ASGR1 RSPO2-RA融合蛋白的细胞类型特异性活性依赖于靶向受体ASGR的存在，用对全长人ASGR1 cDNA进行编码的质粒瞬时转染HEK293细胞。由于ASGR1和ASGR2形成复合物，因此除了转染不相关的受体人转铁蛋白受体1(TFR1，由TFRC基因编码)作为阴性对照外，还执行两个ASGR cDNA的共转染。与未转染的亲本HEK293细胞类似，在用TFRC转染的细胞中，仅与αGFP或αASGR1的RSPO2-WT融合蛋白以Wnt依赖性方式增强了Wnt信号传导(比较图2B的顶部图与图3A的顶部图)。相比之下，在单独用ASGR1转染或用ASGR1和ASGR2两者共转染的细胞中，αASGR1 scFv的融合部分地挽救了RSPO2-RA突变体增强Wnt信号传导能力的功能损失。αASGR1的融合也使RSPO2-WT蛋白的剂量反应向左移位，这与在Huh-7细胞中观察到的类似(比较图2B的下图与图3A的中间图和下图)。αASGR1-RSPO融合分子的活性也完全依赖于Wnt配体的存在(图3A，右图)。
在另一种ASGR1阴性细胞系A431中也证实了ASGR1依赖性活性，所述A431衍生自人表皮样癌并且不表达ASGR基因(图2A)。与HEK293转染研究类似，αASGR1-RSPO2-RA仅在表达ASGR1的A431细胞中，但未在表达阴性对照受体TFR1的A431细胞中挽救RSPO2-RA活性(图3B)。此外，αASGR1 scFv也使RSPO2-WT剂量反应曲线向左移位，并且所有RSPO衍生物的活性完全依赖于Wnt配体的存在(图3B，右图)。来自图2和3的所有结果一起证明，RSPO介导的Wnt信号增强活性可以通过靶向不同细胞表面受体ASGR1而不是LGR来置换。所得RSPO模拟分子在Wnt依赖和其通过E3连接酶的作用方面类似于WT RSPO，但不同之处在于其Wnt信号传导增强是细胞类型特异性的。
为了进一步验证RSPO衍生分子的作用机制，检查了细胞表面上的卷曲蛋白(FZD)受体水平。为了使系统敏感，在处理前通过瞬时转染来过表达ZNRF3。使用泛卷曲蛋白抗体18R5(基于专利EP2331136A4进行克隆)对细胞进行染色，并且发现与未经处理的细胞相比，αGFP-RSPO2-WT明显增加了信号(如所预期的)，并且在用αGFP-RSPO2-RA或αASGR1-RSPO2-RA处理时未观察到这种位移(图3C，顶部)。这与HEK293细胞中缺乏这两种RSPO-RA构建体的活性一致。另一方面，当细胞用ZNRF3和ASGR1两者共转染时，αASGR1-RSPO2-RA就像αGFP-RSPO2-WT一样增加泛FZD染色，从而使αGFP-RSPO2-RA与未经处理的细胞类似(图3C，底部)。这与通过RSPO或RSPO模拟物来移除ZNRF3/RNF43 E3连接酶一致，所述移除使Wnt受体稳定。
为了验证组织特异性Wnt信号增强分子在另外的细胞类型中增强Wnt信号传导的能力，测试靶向不同细胞表面受体转铁蛋白受体1(TFR1)的第二新颖双特异性构建体。TFR1由TFRC基因编码并且在许多细胞类型中广泛表达。据报告，TFR1经历了连续的内吞作用。构建并表征含有与人TFR1的scFv结合剂的融合蛋白RSPO2-WT、RSPO2-RA或RSPO2-5mut(SEQIDNO:17-22)。除了抗GFP组分或抗ASGR1组分被抗TFR1 scFv置换之外，这些融合蛋白的设计类似于图1B。与抗GFP融合蛋白或抗ASGR1融合蛋白类似，αTFR1-RSPO2-RA蛋白丧失了与LGR5相互作用的能力，并且αTFR1-RSPO2-5mut丧失了与LGR5和E3连接酶两者相互作用的能力(图4A-B)。当在存在Wnt源的情况下在HEK293 STF报告基因测定中检测时，TFR1靶向的RSPO2-RA(αTFR1-RSPO2-RA)刺激Wnt信号传导并且展现出比野生型RSPO(αGFP-RSPO2-WT)大约20倍的效力。(图4C)。抗TFR1 RSPO2-WT融合物αTFR1-RSPO2-WT进一步将EC50又提高了约20倍，这与αGFP-RSPO2-WT相比效力提高了近400倍。在Huh-7 STF细胞中也获得了类似的结果，这与两种细胞系中靶向受体的表达一致(图2A)。与RSPO的机制一致的是，在不存在Wnt配体的情况下，未观察到抗TFR1 RSPO模拟分子的Wnt信号传导(图4C，右图)。观察到抗TFR1 RSPO2融合蛋白有更强有力的活性表明，受体和结合剂的特定结合可以在组织特异性Wnt信号增强分子的活性中发挥作用。
如用αGFP-RSPO2-WT看到的，αTFR1-RSPO2-RA而非αASGR1-RSPO2-RA在HEK293 STF细胞中存在Wnt刺激的情况下刺激了LRP6和DVL2的磷酸化并且增加了总LRP6蛋白水平(图4D)。通过流式细胞术分析还检查了RSPO模拟分子对细胞表面上的FZD受体水平的影响。如图4E中示出的，用αGFP-RSPO2-WT处理HEK293细胞，αTFR1-RSPO2-RA而非αGFP-RSPO2-RA增加了这些细胞上的通过泛FZD抗体测量的FZD受体水平。
实例2
使用原型肝特异性WNT信号传导增强分子的体内肝效果
为了证明αASGR1-RSPO2-RA可以在体内以组织特异性方式活化Wnt信号传导通路，用αASGR1-RSPO2-RA和对照蛋白对小鼠进行处理。由于scFv-RSPO2融合蛋白的分子量在约40kDa的范围内，因此为了增加其血浆半衰期，将结合剂的scFv切换为IgG格式，其中RSPO2融合到IgG重链的N端。αASGR1-RSPO2-RA-IgG(SEQ ID NO:29-32)在HEK293细胞中具有与αGFP-RSPO2-RA-IgG(SEQ ID NO:25-28)类似的效力，但在Huh-7细胞中远比后者更具效力且有效(图5A)。实际上，在100pM时的活性αASGR1-RSPO2-RA-IgG与10nM时αGFP-RSPO2-RA-IgG的活性相当(图5A，左下图)，这表明以IgG格式保存了强靶向效果。
通过IV注射ssAAV8-CAG-hASGR1诱导了人ASGR1在小鼠肝中的表达，在用重组蛋白处理前7天，示出每只小鼠1×1011个基因组颗粒的剂量实现了与内源性肝Asgr1mRNA相当的转基因表达水平(数据未示出)。
在第一研究中(图5B)，向小鼠腹膜内注射等摩尔剂量的αGFP-IgG(SEQ ID NO:25-26和33-34)(1mg/kg)、Fc-RSPO2-WT(SEQ ID NO:23-24)(0.46mg/kg)、αGFP-RSPO2-RA-IgG(SEQ ID NO:25-28)(1mg/kg)或αASGR1-RSPO2-RA-IgG(SEQ ID NO:29-32)(1mg/kg)重组蛋白(具有大约匹配的摩尔浓度，n＝8只小鼠/组)。8小时后收集肝和小肠样品，以供表达分析。与用αGFP阴性对照或αGFP-RSPO2-RA-IgG阴性对照处理的小鼠体内的肝Axin2表达相比，用Fc-RSPO2-WT和αASGR1-RSPO2-RA-IgG处理显著地诱导了肝Axin2表达(图5C)。相比之下，用Fc-RSPO2-WT但不用αASGR1-RSPO2-RA-IgG处理显著增加了小肠Axin2表达(图5D)。这些结果表明，αASGR1-RSPO2-RA-IgG可以在体内以组织特异性方式活化Wnt通路。
在第二研究中(图6A)，向小鼠腹膜内注射αGFP-IgG(1mg/kg)、αGFP-RSPO2-RA-IgG(1mg/kg)或αASGR1-RSPO2-RA-IgG(1mg/kg)重组蛋白(n＝10只小鼠/组)。48小时后收集肝和小肠样品，以供表达分析和组织免疫化学。用αASGR1-RSPO2-RA-IgG处理诱导了细胞增殖标志物基因Mki67的表达(图6B)，并且与用αGFP-IgG阴性对照或αGFP-RSPO2-RA-IgG阴性对照处理的小鼠相比显著增加了肝中Ki-67阳性细胞的数量(图6C-D)。相比之下，在小肠中未观察到通过αASGR1-RSPO2-RA-IgG诱导的此Mki67表达(图5E)。这些结果表明，αASGR1-RSPO2-RA-IgG可以在肝实质细胞中以组织特异性方式刺激增殖。
实例3
抗体的生成
对针对ASGR、ZNRF3和RNF43多肽序列的抗体进行鉴别。对于用于抗体筛选和免疫的重组蛋白的产生，将以下蛋白质的细胞外结构域(ECD)克隆到具有His/Avi标签的pcDNA真核表达载体中：人ASGR1(hASGR1，NCBI参考序列NP_001662.1，残基62-291；SEQ ID NO:35-36(分别为多核苷酸和多肽))、人ASGR2(hASGR2，NCBI参考序列NP_550436.1，残基66-292；SEQ ID NO:37-38(分别为多核苷酸和多肽))、猕猴ASGR1(cynoASGR1，序列ID XP_005582755.1，残基62-291；SEQ ID NO:39-40(分别为多核苷酸和多肽))、猕猴ASGR2(cynoASGR2，序列克隆自来自Fisher/Zyagen实验室(Fisher/Zyagen Labs)的猕猴肝cDNA样品；SEQ ID NO:41-42(分别为多核苷酸和多肽))、人RNF43(hRNF43，NCBI参考序列XP_011523257.1，残基44-198；SEQ ID NO:43-44(分别为多核苷酸和多肽))、ZNRF3(hZNRF3；NCBI参考序列NP_001193927.1，残基56-219；SEQ ID NO:45-46(分别为多核苷酸和多肽))。将构建体用Expi293F细胞(赛默飞世尔科技公司)表达、通过Ni-NTA树脂、然后通过尺寸排阻色谱法纯化。对于噬菌体展示，将蛋白质根据已发表的方法(Janda等人,《自然》；545:234)生物素化。
将生物素化的抗原固定以便针对噬菌体展示文库进行淘选，并且对阳性克隆进行测序。进行进一步分析，所述进一步分析包含在Expi293F细胞中的表达和对抗原结合的表征。
还使用非生物素化的抗原对小鼠进行免疫以生成杂交瘤。通过ELISA针对具有含有相同的纯化标签作为对照的对照蛋白针对免疫原并且通过流式细胞术分析(ASGR表达性Huh-7作为测试系，并且ASGR非表达性HEK293作为对照)对杂交瘤系进行筛选。对所选择的杂交瘤系进行测序，并且因此生成重组Fab或IgG以便进一步结合表征。
使用具有链霉亲和素(SA)涂覆的生物传感器(PALL ForteBio公司)的OctetRed96平台(加利福尼亚州佛瑞蒙的PALL ForteBio公司)通过生物层干涉法(BLI)进行重组Fab或IgG的结合表征。将生物素化的抗原稀释到50nM以便固定到传感器上。在固定后，将传感器浸入到含有七种浓度的测试分子的样品中。通过以1:1结合模型对所得数据进行拟合来测定KD的值。表2C提供了精选克隆的结合数据。
图7提供了示出被鉴别为hASGR1(图7A和7C)或hASGR2(图7B)的说明性抗体的结合的数据。
实例4
原初健康小鼠中抗ASGR1-RSPO2-RA的体内剂量滴定和组织特异性
在健康原初小鼠中进一步检查IgG格式的ASGR1靶向分子和对照分子的活性。这些研究中使用的αASGR1抗体(例如，RO-01)与人和鼠类ASGR1受体两者具有类似的亲和力(图9A)。
在此研究中，向六周龄C57Bl/6J雄性小鼠腹膜内注射(i.p.)指示剂量的α-β-Gal-IgG、Fc-RSPO2-WT、αGFP-RSPO2-RA或αASGR1-RSPO2-RA(n＝8只/组)。在蛋白质给药后48小时，用异氟醚麻醉小鼠，并且通过心脏穿刺取得血液。收集肝左叶和十二指肠的各部分并且将其速冻以进行qPCR分析或固定在福尔马林中24小时，然后转移到70％EtOH以进行免疫组织化学分析。
与αGFP-RSPO2-RA-IgG(SEQ ID NO:25-28)和其它对照相比，针对αASGR1-RSPO2-RA-IgG(SEQ ID NO:29-32)执行剂量反应，以检查Wnt靶基因Axin2的诱导。小鼠接受从0.1mg/kg到30mg/kg的范围的被测试蛋白质的腹膜内(i.p.)注射。48小时后收集肝和小肠样品，以进行基因表达分析。以1mg/kg和10mg/kg处理时，Fc-RSPO2-WT(SEQ ID NO:23-24)增加了在肝和小肠两者中的Axin2表达(图9B)。相比之下，10mg/kg和30mg/kg的αASGR1-RSPO2-RA-IgG诱导了仅在肝中的Axin2表达，但在小肠中未诱导。重要的是，此特异性依赖于αASGR1靶向模块，因为未靶向分子αGFP-RSPO2-RA-IgG在高达30mg/kg处理时在任一组织中均未示出对Axin2表达的体内影响(图9B)。用0.01mg/kg和10mg/kg的对照抗体抗β-半乳糖苷酶(α-β-Gal-IgG，SEQ ID NO:155-158)未观察到影响。
在增殖标志物Ki67基因的表达中也观察到了αASGR1-RSPO2-RA-IgG的类似组织特异性和对靶向模块的依赖性(图9C)。为了检查肝细胞中是否发生增殖，用针对Ki67蛋白具有特异性的抗体和成熟肝细胞标志物之一HNF4α对肝样品进行共染色。用αASGR1-RSPO2-RA-IgG和Fc-RSPO2-WT处理的肝似乎增加了用HNF4α共定位的Ki67阳性核的数量，而用αGFP-RSPO2-RA-IgG或α-β-Gal-IgG处理的肝似乎具有少得多的Ki67染色(图9D)。这些结果合起来表明，αASGR1-RSPO2-RA-IgG可以在体内以肝特异性方式活化Wnt通路，并且肝细胞是响应于此刺激的主要细胞群。
实例5
组织靶向RSPO模拟物对慢性硫代乙酰胺诱导的小鼠肝纤维化模型中的肝功能的影响
用硫代乙酰胺(TAA)对六周龄C57Bl/6J雄性小鼠进行处理。在1号研究(Wnt和Rspo基因表达谱)中，将TAA以200mg/L的浓度添加到饮用水中二十七周以诱导肝纤维化。另外，在TAA条件作用的最后四周期间，每周3次向小鼠腹膜内施用TAA。在2号研究(在第3天和第7天时的肝和小肠Axin2和Ki67表达)中，将TAA以200mg/L的浓度添加到饮用水中二十周以诱导肝纤维化。另外，在TAA条件作用的最后六周期间，每周3次向小鼠腹膜内施用TAA。在3号研究(在第3天、第7天和第14天时的INR分析)中，将TAA添加到饮用水中十八周。在TAA暴露的最后九周期间每周3次还向小鼠腹膜内施用200mg/kg TAA。在用重组蛋白给药前2天中断TAA处理，并且使小鼠恢复饮用经过纯化的实验室级酸化饮用水。向小鼠腹膜内(i.p.)注射重组α-β-gal-IgG(10mpk)或Fc-RSPO2-WT(10mpk)每周两次或者αASGR1-RSPO2-RA-IgG(10mpk)每天一次。在指示的时间，使用Roche CoaguChek——XS+来测量INR。在开始给药后3天、7天或14天，用异氟醚麻醉小鼠，并且通过心脏穿刺取得血液。收集肝左叶和十二指肠的一部分以供分析。将福尔马林固定并且石蜡包埋的肝样品切片并且用抗Ki-67兔抗体(Abcam公司，ab15580)染色。使用Image J对每个随机选择的场(使用10倍物镜的100倍放大率)的Ki-67-阳性核的数量进行计数。
在慢性硫代乙酰胺(TAA)模型中检查αASGR1-RSPO2-RA-IgG的活性和功效，其中观察到了广泛的肝纤维化并且肝功能受损。在此模型中，包含对许多Wnt配体进行编码的基因的Wnt信号传导通路组分上调(图10A)。相比之下，四个R-脊椎蛋白的表达保持不变或者甚至在Rspo2的情况下减少。Rspo4在小鼠肝中几乎不可检测到(图10A)。因此，肝特异性RSPO模拟物的施用可以是有益的(图10A)。
图10B中概述了实验设计，所述实验设计概述了TAA预处理和随后的蛋白质处理(αASGR1-RSPO2-RA-IgG和对照蛋白SEQ ID NO:23-24、29-32、155-156和159-160)的持续时间。进行了类似设计的两项研究。在一项研究中，在开始蛋白质处理后的0天、3天和7天终结小鼠。在第二研究中，在开始蛋白质处理后的0天和14天终结小鼠(图10B)。收集肝和小肠样品，并且评估其基因表达的变化。如所预期的，αASGR1-RSPO2-RA-IgG在第3天和第7天时使Axin2表达的肝特异性增加，而Fc-RSPO-WT在肝和小肠两者中均诱导了Axin2(图10C)。用α-β-Gal-IgG对照处理时未观察到变化。αASGR1-RSPO2-RA-IgG还以肝特异性方式增加了Ki67表达(图10C)。
为了监测肝功能，在处理期间在指示的时间取血液样品，并且将血液样品用于测量凝血酶原时间的国际标准化比率(INR)。正常小鼠具有大约0.9的INR。由于严重的肝损害，TAA处理使INR增加到1.1(图10D)。TAA移除后，已知小鼠展现出肝损害的一些自然消退，这与未经处理的动物体内观察到的INR从第0天的1.1降至第14天的<1.0一致。然而，αASGR1-RSPO2-RA-IgG加速了INR恢复，因为经过100％的αASGR1-RSPO2-RA-IgG处理的小鼠到第3天具有0.9的INR。在第7天，经过Fc-RSPO2-WT处理的小鼠的INR与经过α-β-Gal处理的小鼠相比有所降低并且在第14天达到与αASGR1-RSPO2-RA-IgG相同的效果。因此，肝特异性αASGR1-RSPO2-RA-IgG分子可以改善慢性肝病模型中的肝合成功能。
实例6
组织靶向RSPO模拟物对慢性CCL4诱导的小鼠肝纤维化模型中的肝功能的影响
在用CCl4加烯丙醇生成的第二小鼠肝纤维化模型中检查αASGR1-RSPO2-RA-IgG的活性和功效。在10天内用CCl4(在第1天、第4天、第7天、第10天时0.5mL/kg)加烯丙醇(在第2天、第5天、第8天时0.0125mL/kg)间歇地处理五十四只8-9周龄C57BL/6雄性小鼠(杰克逊实验室)，然后进行8周的CCl4处理(0.5mL/kg，两次/周)。图12中展示了处理方案。在CCl4处理后，以不连续的CCl4处理用蛋白质向小鼠给药2周。处理组如下：10mg/kgαASGR1-RSPO2-RA-IgG2，n＝8(每天给药)；10mg/kgαGFP-RSPO2-RA-IgG，n＝8(每天给药)；4.6mg/kg Fc-RSPO2-WT，n＝7(两次/周给药)；10mg/kgα-β-Gal-IgG，n＝8(两次/周给药)；非蛋白对照，n＝8。另外的对照组包含非CCl4处理(橄榄油载体(0.5mL/kg))，n＝8；原初对照，n＝7。在第0天、第3天、第7天(蛋白质给药的第一天表示为第0天)取小鼠血液进行INR(国际标准化比率)测试。在第14天终结所有小鼠。
处死后，测量总体重和肝重，对血液、肝和小肠组织进行收集和保存以进行测试。在用RSPO2阳性对照处理的组以及用RSPO模拟物αASGR1-RSPO2-RA-IgG2处理的那些组中，肝重示出了上升趋势。当测量肝/体重比时，仅经过RSPO2处理的小鼠具有统计学上显著的增加。
在蛋白质处理的第0天、第7天和第14天，测量小鼠血液中III型前胶原N端肽(P3NP)，作为组织修复和纤维化的度量。与经过橄榄油处理的组和原初对照相比，在用CCl4处理的所有组中均观察到显著增加，这与标记的肝纤维化一致。与用αGFP-RSPO2-RA-IgG(缺乏对肝的组织靶向)处理的动物(其中P3NP回降至原初小鼠中的水平(数据未示出))相比，用RSPO模拟物αASGR1-RSPO2-RA-IgG2处理的动物中P3NP水平保持较高，从而表明组织修复和细胞外基质周转正在进行。
在两周的蛋白质处理后，作为血凝结时间的度量的凝血酶原时间(PT)指示未看到时间增加，并且在用RSPO2蛋白处理的动物中，时间实际上显著减少(数据未示出)。
在蛋白质处理一周和两周后的时间点，在血清中进行标准肝图测量。在第7天时从尾部放血并且在第14天时从终末放血收集小鼠血清。将血清送到IDEXX实验室(加利福尼亚州佛瑞蒙)以进行肝图血清化学测量。每组含有6-8只小鼠，并且数据在表4和5中作为平均值±SEM呈现。
表4.蛋白质处理后一周和两周在动物血液中测量的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)水平。
Figure BDA0002940321710000981
Figure BDA0002940321710000991
*统计学上不同于经过α-β-Gal-IgG和αGFP-RSPO2-RA-IgG处理的组，p<0.0001；**统计学上不同于经过α-β-Gal-IgG(p＝0.0012)和αGFP-RSPO2-RA-IgG(p<0.0001)处理的组；单向ANOVA。
如表4中所示出的，ALT值和AST值与蛋白质处理和对照中的任何蛋白质处理和对照都没有统计学上的差异。然而，在一周时间点和两周时间点两者时，ALP在统计学上更高，这与如在ASGR1 KO小鼠模型中描述的由于ASGR受体的消除而引起的碱性磷酸酶蛋白水平的上调一致(参见例如《细胞宿主微生物(Cell Host Microbe)》.2018年10月10日；24(4):500-513)。
表5.蛋白质处理后一周和两周在动物的血液中测量的白蛋白和胆红素水平。
Figure BDA0002940321710000992
*统计学上不同于经过α-β-Gal-IgG处理的组，Fc-RSPO2-WT为p<0.0001，并且αASGR1-RSPO2-RA-IgG2为p＝0.0009；**统计学上不同于经过α-β-Gal-IgG(p<0.0001)和α-GFP-RSPO2_RA-IgG(p<0.0009)处理的组；单向ANOVA。
虽然在处理后一周对白蛋白、胆红素水平没有显著影响，但在蛋白质处理两周后与α-β-Gal-IgG蛋白对照和α-GFP-RSPO2_RA-IgG蛋白对照相比在RSPO2阳性对照和RSPO模拟物(αASGR1-RSPO2-RA-IgG2)处理组两者中观察到血液中的白蛋白显著减少。此结果表明，由于增加的Wnt信号传导诱导中心周围肝细胞扩张增加，门静脉周围肝细胞的功能出现预期的临时关闭。
使用半定量PCR来测量用蛋白质处理的肝和小肠中基因表达的变化(表6)。
表6.如通过qPCR测量的肝和小肠中Wnt诱导型基因和增殖标志物基因的表达的变化
Figure BDA0002940321710001001
*统计学上不同的变化以粗体示出。Axin2：αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α-GFP-RSPO2-RA-IgG，p＝0.0092。Hal：Fc-RSPO2-WT相对于α-βGal-IgG，p＝0.0259；αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α--Gal-IgG，p＝0.0042；αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α-GFP-RSPO2-RA-IgG，p＝0.0018。Ki67：Fc-RSPO2-WT相对于α-βGal-IgG，p＝0.0010；αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α-βGal-IgG，p＝0.0135。细胞周期蛋白D1：FcRSPO2-WT相对于α-βGal-IgG，p＝0.0004。通过单向ANOVA计算。
用Fc-RSPO2-WT阳性对照蛋白或RPSO模拟蛋白αASGR1-RSPO2-RA-IgG2处理小鼠均引起肝中Wnt诱导型Axin2基因的表达增加并且Wnt阻遏型Hal基因的表达减少。所测量的统计学上显著的变化在表6中以粗体示出。小肠中Axin2表达没有显著变化。这些数据表明，Wnt信号传导是以组织特异性方式诱导的。
用Fc-RPSO2-WT和αASGR1-RSPO2-RA-IgG2处理还揭示出Ki67增殖标志物和细胞周期蛋白D1增殖标志物在肝中增加但在小肠中没有增加。达到统计显著性的变化以粗体示出。用任何处理在小肠中均未看到显著的变化(表6)。这些数据表明，增殖是以组织特异性方式诱导的。
进行了另外的qPCR分析以测量具体肝细胞类型中的变化，包含肝细胞、胆管细胞、不成熟肝细胞和卵圆细胞(表7)。
表7.如通过qPCR测量的用作用蛋白质处理的肝细胞类型的标志物的基因的表达的变化
Figure BDA0002940321710001002
Figure BDA0002940321710001011
*统计学上不同的变化以粗体示出。CK8：αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α-βGal-IgG，p＝0.0001；αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α-GFP-RSPO2-RA-IgG，p<0.0001。Afp：Fc-RSPO2-WT相对于α-βGal-IgG，p＝0.0002；αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α-βGal-IgG，p<0.0001；αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α-GFP-RSPO2-RA-IgG，p＝0.0001。通过单向ANOVA计算。
对肝细胞标志物CK8中有统计学上显著的变化但胆管细胞标志物CK19没有的评估表明，肝中的增殖性反应限于肝细胞。此外，Afp的统计学上显著的增加揭示出不成熟肝细胞的激增(表7)。卵圆细胞没有显著变化。
表8.如通过半定量PCR测量的用蛋白质处理的肝细胞和门静脉周围肝细胞的功能相关的基因表达的变化
Figure BDA0002940321710001012
*统计学上不同的变化以粗体示出。因子X：Fc-RSPO2-WT相对于α-β-Gal-IgG，p＝0.0463。Cyp1a2：αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α-βGal-IgG，p＝0.0044；αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于αGFP-RSPO2-RA-IgG，p＝0.0001。Cyp2e1：αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α-β-Gal-IgG，p<0.0001；αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于αGFP-RSPO2-RA-IgG，p<0.0001。Cyp2f2：Fc RSPO2-WT相对于α-βGal-IgG，p<0.0001；αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α-βGal-IgG，p<0.0001；αASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于αGFP-RSPO2-RA-IgG，p<0.0001。通过单向ANOVA计算。
Wnt信号传导主要控制中心周围肝细胞(参考)中两种CypP450酶Cyp2e1和Cyp1a2的表达。用RSPO模拟物处理小鼠显著地增加了这两种酶的基因的表达(表xx)。另外，显著较低的Cyp2f2表明，由于中心周围区的临时扩张，门静脉周围肝细胞功能临时下降。
在蛋白质处理两周后，用天狼星红对小鼠肝进行染色以测量所有小鼠中天狼星红染色的胶原含量的水平(图13和表9)。将小鼠通过异氟醚吸入麻醉、心脏放血并且然后进行颈脱位法。新鲜收获肝并且将其立即浸没到10％中性缓冲福尔马林中以温育过夜。第二天，将肝转移到70％乙醇并且准备进行石蜡包埋。将肝组织切成5μm厚、脱蜡并且按酒精梯度水化。将切片用Picro天狼星红溶液(西格玛奥德里奇公司)染色并且用酸化水洗涤。用三种变化的100％乙醇脱水、在二甲苯中澄清、风干并且用盖玻片封固。通过Image J(NIH)对经过天狼星红染色的区域进行定量，并且相对于经过抗βgal对照处理的CCl4小鼠的肝进行标准化(设置为100％)。每组含有7-8只小鼠，并且数据作为平均值±SD呈现。
表9.相对于经过抗βGal处理的CCl4小鼠标准化的肝组织的天狼星红染色的定量
Figure BDA0002940321710001021
*统计学上不同的变化以粗体示出。Fc-RSPO2-WT相对于α-β-Gal-IgG，p<0.0001；Fc-RSPO2-WT相对于αGFP-RSPO2-RA-IgG，p＝0.0059；α-ASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于α-β-Gal-IgG，p＝0.0003；α-ASGR1-RSPO2-RA-IgG2相对于αGFP-RSPO2-RA-IgG，p＝0.0410；通过单向ANOVA计算。
处理后，使用天狼星红对本研究中所有小鼠的肝纤维化的量进行定量。对于此方法，将小鼠通过异氟醚吸入麻醉、心脏放血并且然后进行颈脱位法。新鲜收获肝并且将其立即浸没到10％中性缓冲福尔马林中以温育过夜。第二天，将肝转移到70％乙醇并且准备进行石蜡包埋。将肝组织切成5μm厚、脱蜡并且按酒精梯度水化。将切片用Picro天狼星红溶液(西格玛奥德里奇公司)染色并且用酸化水洗涤。用三种变化的100％乙醇脱水、在二甲苯中澄清、风干并且用盖玻片封固。通过Image J(NIH)对经过天狼星红染色的区域进行定量，并且相对于经过α-β-Gal-IgG对照处理的CCl4小鼠的肝进行标准化(设置为100％)。每组含有7-8只小鼠，并且数据作为平均值±SD呈现。
在用Fc-RSPO2-WT或RPSO模拟物αASGR1-RSPO2-RA-IgG2处理两周后，经过CCl4处理的小鼠的天狼星红染色比在用对照蛋白处理的小鼠中看到的减少约40％，这表明肝纤维化在这些小鼠中比在用对照蛋白处理的小鼠中消退得更快(图13和表9)
利用免疫组织化学进行另外的实验，从而在此研究中对来自所有动物的石蜡固定的肝组织上的HNF4α和Ki67进行染色。在经过Fc-RSPO2-WT和αASGR1-RSPO2-RA-IgG2两者处理的小鼠中，在整个肝中看到了HNF4α肝细胞标志物和Ki67增殖标志物的显著共定位(数据未示出)。相比之下，在经过α-β-Gal-IgG处理的对照小鼠中看到的双染色细胞少得多。这些结果证实，Fc-RSPO2-WT和αASGR1-RSPO2-RA-IgG2可以诱导这些小鼠的肝细胞增殖。
这些数据一起表明，RSPO模拟物αASGR1-RSPO2-RA-IgG2对此纤维化肝病模型中小鼠可以消退纤维化并再生功能性肝细胞的速率具有显著影响。
实例7
使用新颖ASGR1结合剂对肝靶向RSPO模拟分子的构建
人ASGR1的新颖结合剂作为杂交瘤被开发，所述杂交瘤是针对人ASGR1培育的并且基于与重组人和猕猴ASGR1 ECD结构域的交叉反应性而选择的。对杂交瘤进行进一步排名以通过流式细胞术对Huh-7细胞进行特异性染色(使用HEK293作为对照)。对所选命中进行亚克隆并测序以推断其VH序列和VL序列(SEQ ID NO:274-305)。为了制成肝特异性RSPO模拟物，制成了融合蛋白，其中ASGR1结合剂表达为含有无效应子突变N297G的人IgG2或人IgG1，而突变RSPO模块通过接头(SEQ ID NO:190-271)融合到重链的N端和C端。重组蛋白通过瞬时转染表达在Expi293细胞中并且通过蛋白A树脂、然后通过尺寸排阻色谱法纯化。在重组WNT替代物R2M3-26存在的情况下比较Huh-7和HEK293 STF报告基因细胞系中的活性的荧光素酶测定中，对肝细胞特异性Wnt信号增强进行分析(参见例如WO2019/126398)。图12证明了Huh-7细胞中16个新颖ASGR1靶向RSPO模拟分子作为IgG1或IgG2融合物的特异性活性。
实例8
小鼠肝中的组织靶向RSPO模拟物的药效动力学(PD)分析
为了测量肝靶向RSPO模拟物的体内活性，将5-6周龄C57BL/6雄性小鼠JAX(共56只小鼠)人源化以进行人ASGR基因表达。向小鼠注射(IV)表达hASGR1基因和hASGR2基因的AAV8载体(1×1011个基因组拷贝/小鼠)。
6天后，通过腹膜内注射以5mg/kg的剂量向小鼠施用多种ASGR1靶向RSPO模拟物以及对照(图15A)。
24小时后，使小鼠安乐死；将肝切下并速冻以进行RNA分离。进行mRNA分析以确定Axin2的相对表达。使用半定量PCR来测量来自经过处理的小鼠的肝组织中的相对基因表达。将值相对于组成型肌动蛋白B基因表达的表达标准化(图15B)。
与α-β-Gal-IgG相比，αASGR1-IgG(RO-01)未诱导Axin2表达，这表明此结合剂自身对Wnt信号传导没有影响。类似地，αGFP-RSPO2-RA-IgG未诱导Axin2，这证实突变RSPO2模块自身也不具有活性。相比之下，αASGR1-RSPO2-RA-IgG(用结合剂RO-01构建的原型肝靶向RSPO模拟物)证明肝中有强有力的Axin2诱导，这与靶向模块的要求一致。
所有另外的ASGR1靶向RSPO模拟分子(用内部消除的结合剂构建)示出Axin2表达的趋势或显著诱导。通过单向ANOVA，基于7B13、8M24、2I13和9M16的RSPO模拟分子与α-β-Gal-IgG对照相比在刺激Axin2表达方面示出了统计学上显著的增加，而3A24、2I22、1P13、1N15、3E20示出刺激Axin2表达的趋势(图15B)。
上述各种实施例可以被组合以提供另外的实施例。在本说明书中引用和/或在申请数据表中列出的所有美国专利、美国专利申请公开、美国专利申请、外国专利、外国专利申请和非专利公开以全文引用的方式并入本文。如果有必要，则可以修改实施例的各方面以采用各个专利、申请和公开的概念来提供又另外的实施例。
鉴于以上详细描述，可以对实施例作出这些和其它改变。总之，在以下权利要求中，所使用的术语不应当被解释为将权利要求限制于本说明书和权利要求中所公开的具体实施例，而是应当被解释为包含所有可能的实施例连同这种权利要求有权获得的等同物的整个范围。因此，权利要求并不受本公开的限制。
参考文献：
Clevers H、Loh KM和Nusse R.2014,“用于组织更新和再生的完整程序：Wnt信号传导和干细胞控制(An integral program for tissue renewal and regeneration:Wntsignaling and stem cell control)”,《科学(Science)》346(6205):1248012。
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序列表
<110> 瑟罗泽恩公司（Surrozen, Inc）
张正健(Zhang, Zhengjian)
李阳(Li, Yang)
叶文琛(Yeh, Wen-Chen)
袁之邺(Yuan, Tom Zhiye)
海琳·巴里博(Baribault, Helene)
<120> 组织特异性Wnt信号增强分子和其用途
<130> SRZN-010/03WO 328202-20469
<160> 715
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 263
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
Met Arg Leu Gly Leu Cys Val Val Ala Leu Val Leu Ser Trp Thr His
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Arg Gly Ile Lys Gly Lys Arg Gln Arg Arg Ile
20 25 30
Ser Ala Glu Gly Ser Gln Ala Cys Ala Lys Gly Cys Glu Leu Cys Ser
35 40 45
Glu Val Asn Gly Cys Leu Lys Cys Ser Pro Lys Leu Phe Ile Leu Leu
50 55 60
Glu Arg Asn Asp Ile Arg Gln Val Gly Val Cys Leu Pro Ser Cys Pro
65 70 75 80
Pro Gly Tyr Phe Asp Ala Arg Asn Pro Asp Met Asn Lys Cys Ile Lys
85 90 95
Cys Lys Ile Glu His Cys Glu Ala Cys Phe Ser His Asn Phe Cys Thr
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Lys Cys Lys Glu Gly Leu Tyr Leu His Lys Gly Arg Cys Tyr Pro Ala
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<210> 2
<211> 243
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
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<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 4
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Met Leu Ala Leu Asn Arg Arg Lys Lys Gln Val Gly Thr Gly Leu Gly
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<210> 5
<211> 1119
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗GFP和RSPO2野生型融合序列
<400> 5
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ggatccggag gcggaggaag cggaggaggg ggttcagaca tcgaactcac ccagcccccg 420
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ggcgacgacg aaaggccgtc aggcatccca gagcgcttct ccggctccaa ctccgggaat 600
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<210> 6
<211> 372
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗GFP和RSPO2野生型融合序列
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
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<210> 7
<211> 1119
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗GFP和RSPO2突变体融合序列
<400> 7
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<211> 372
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗GFP和RSPO2突变体融合序列
<400> 8
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<210> 9
<211> 1119
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗GFP和RSPO2突变体融合序列
<400> 9
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gacaagggct cccaccatca ccaccatcat caccactag 1119
<210> 10
<211> 372
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗GFP和RSPO2突变体融合序列
<400> 10
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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<210> 11
<211> 1125
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗ASGR1和RSPO2野生型融合序列
<400> 11
gaagtgcagc tgctggaatc cgggggcgga ctggtgcaac ccgggggatc cctcagactg 60
tcctgtgccg catcgggttt cactttctcc tcctacgcga tgtcatgggt cagacaggcc 120
cctggaaaag gcctcgaatg ggtgtcggct atctccggat cggggggatc tacttactac 180
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aactccctgg agcggattgg atacctgagc tacgtgtttg gtggcggcac gaagctcacc 720
gtgctgggaa gcggtggatc aaacccaatt tgcaagggat gcctgagctg tagcaaggac 780
aacggatgtt cacggtgcca gcaaaagctg tttttcttcc tccggcggga aggaatgcgg 840
cagtacggcg aatgtctcca ctcctgcccc tcggggtatt acggacaccg cgcgcctgac 900
atgaaccgat gcgccagatg ccggatcgag aactgcgata gctgcttcag caaggacttc 960
tgcactaagt gcaaagtcgg cttctacctt caccggggca gatgttttga cgaatgcccg 1020
gatggcttcg ccccgctgga ggagactatg gaatgcgtgg agggcggaga ctacaaggac 1080
gacgatgaca agggctccca ccatcaccac catcatcacc actag 1125
<210> 12
<211> 374
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗ASGR1和RSPO2野生型融合序列
<400> 12
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Phe Ser Ser Arg Arg Trp Tyr Leu Glu Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser
130 135 140
Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu
145 150 155 160
Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
165 170 175
Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr
195 200 205
Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Leu Glu
210 215 220
Arg Ile Gly Tyr Leu Ser Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
225 230 235 240
Val Leu Gly Ser Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser
245 250 255
Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe
260 265 270
Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser
275 280 285
Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys
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340 345 350
Val Glu Gly Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Ser His His
355 360 365
His His His His His His
370
<210> 13
<211> 1125
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗ASGR1和RSPO2突变体融合序列
<400> 13
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<210> 14
<211> 374
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗ASGR1和RSPO2突变体融合序列
<400> 14
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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Ala Lys Asp Phe Ser Ser Arg Arg Trp Tyr Leu Glu Tyr Trp Gly Gln
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
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195 200 205
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<210> 15
<211> 1125
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗ASGR1和RSPO2突变体融合序列
<400> 15
gaagtgcagc tgctggaatc cgggggcgga ctggtgcaac ccgggggatc cctcagactg 60
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tacggaaaga acaaccgccc gtccggaatt ccagacaggt tcagcggatc cagctcgggg 600
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atgaaccgat gcgccagatg ccggatcgag aactgcgata gctgccgcag caaggacgcc 960
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gatggcttcg ccccgctgga ggagactatg gaatgcgtgg agggcggaga ctacaaggac 1080
gacgatgaca agggctccca ccatcaccac catcatcacc actag 1125
<210> 16
<211> 374
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗ASGR1和RSPO2突变体融合序列
<400> 16
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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370
<210> 17
<211> 1134
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗TFR1和RSPO2野生型融合序列
<400> 17
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<210> 18
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗TFR1和RSPO2野生型融合序列
<400> 18
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
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195 200 205
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Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr
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Lys Leu Glu Ile Arg Gly Ser Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly
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Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys
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<210> 19
<211> 1134
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗TFR1和RSPO2突变体融合序列
<400> 19
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<210> 20
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗TFR1和RSPO2突变体融合序列
<400> 20
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
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Ala Met His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Thr Tyr Phe Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
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Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Leu Ser Gly Asn Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
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115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Phe Gln Ser Pro Ala Ser
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Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser
145 150 155 160
Glu Ser Val Asp Asp Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu
180 185 190
Glu Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr
210 215 220
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Glu Ile Arg Gly Ser Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly
245 250 255
Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys
260 265 270
Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys
275 280 285
Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met
290 295 300
Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser Cys Arg Ser
305 310 315 320
Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly
325 330 335
Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr
340 345 350
Met Glu Cys Val Glu Gly Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly
355 360 365
Ser His His His His His His His His
370 375
<210> 21
<211> 1134
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗TFR1和RSPO2突变体融合序列
<400> 21
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aaattggaaa ttaggggaag cggtggatca aacccaattt gcaagggatg cctgagctgt 780
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ggaatggccg catacggcga atgtctccac tcctgcccct cggggtatta cggacaccgc 900
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gaatgcccgg atggcttcgc cccgctggag gagactatgg aatgcgtgga gggcggagac 1080
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<210> 22
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗TFR1和RSPO2突变体融合序列
<400> 22
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Thr Tyr Phe Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Ser Gly Asn Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Phe Gln Ser Pro Ala Ser
130 135 140
Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser
145 150 155 160
Glu Ser Val Asp Asp Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu
180 185 190
Glu Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp
195 200 205
Phe Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr
210 215 220
Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Glu Ile Arg Gly Ser Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly
245 250 255
Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys
260 265 270
Leu Phe Phe Phe Leu Arg Ala Glu Gly Met Ala Ala Tyr Gly Glu Cys
275 280 285
Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met
290 295 300
Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser Cys Arg Ser
305 310 315 320
Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly
325 330 335
Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr
340 345 350
Met Glu Cys Val Glu Gly Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly
355 360 365
Ser His His His His His His His His
370 375
<210> 23
<211> 1053
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的Fc-RSPO2融合序列
<400> 23
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgcgggggg accgtcagtc 60
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 120
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 240
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 300
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcggagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 360
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 420
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 480
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 540
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 600
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 660
ctctccctgt ctccgggtaa aggtggtggt ggctcgggag gaggaggctc cggtggcggt 720
ggcagctcaa atcccatttg caagggttgt ttgtcttgtt caaaggacaa tgggtgtagc 780
cgatgtcaac agaagttgtt cttcttcctt cgaagagaag ggatgcgcca gtatggagag 840
tgcctgcatt cctgcccatc cgggtactat ggacaccgag ccccagatat gaacagatgt 900
gcaagatgca gaatagaaaa ctgtgattct tgctttagca aagacttttg taccaagtgc 960
aaagtaggct tttatttgca tagaggccgt tgctttgatg aatgtccaga tggttttgca 1020
ccattagaag aaaccatgga atgtgtggaa tga 1053
<210> 24
<211> 350
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的Fc-RSPO2融合序列
<400> 24
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp
245 250 255
Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg
260 265 270
Glu Gly Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly
275 280 285
Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg
290 295 300
Ile Glu Asn Cys Asp Ser Cys Phe Ser Lys Asp Phe Cys Thr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro
325 330 335
Asp Gly Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu
340 345 350
<210> 25
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗GFP轻链序列
<400> 25
gacatcgaac tcacccagcc cccgtcagtg tccgtggccc ctggacagac tgcgcgcatc 60
tcctgctccg gcgacaacct ggggaagaaa tacgtgtact ggtaccagca gaagccaggt 120
caagcccctg tgctggtcat ctacggcgac gacgaaaggc cgtcaggcat cccagagcgc 180
ttctccggct ccaactccgg gaatactgcc acccttacca tttccggaac ccaggccgag 240
gatgaagcgg attactattg cgcgagctac gatagcagcc acatcctgat cgtgtttgga 300
ggcggtacca agcttaccgt cctaggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 360
ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 420
ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 480
gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 540
agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600
gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642
<210> 26
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗GFP轻链序列
<400> 26
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Gly Lys Lys Tyr Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Asp Asp Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Tyr Asp Ser Ser His Ile Leu
85 90 95
Ile Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 27
<211> 1695
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的RSPO2突变体和抗GFP重链IgG2融合多核苷酸
<400> 27
aacccaattt gcaagggatg cctgagctgt agcaaggaca acggatgttc acggtgccag 60
caaaagctgt ttttcttcct ccggcgggaa ggaatgcggc agtacggcga atgtctccac 120
tcctgcccct cggggtatta cggacaccgc gcgcctgaca tgaaccgatg cgccagatgc 180
cggatcgaga actgcgatag ctgccgcagc aaggacgcct gcactaagtg caaagtcggc 240
ttctaccttc accggggcag atgttttgac gaatgcccgg atggcttcgc cccgctggag 300
gagactatgg aatgcgtgga gggtggtggt ggctcgggag gaggaggctc cggtggcggt 360
ggcagccagg tccagttggt ggaatccgga gggggtttgg tccagcctgg tggaagcctg 420
cgcctctcat gcgccgctag cggattcacc ttctcccgat acggcatgca ttgggtcaga 480
caggcacccg gaaaaggact cgaatgggtg tcgggcattt cctcgatcgg gtcaaacacc 540
tattacgccg actccgtgaa gggacggttc accattagcc gggataacag caagaacact 600
ctgtacttgc aaatgaactc cctgcgggct gaggacaccg ccgtgtacta ctgtgcgcgg 660
tggtacaaga cctatattga cgtctgggga cagggtaccc tcgtgaccgt gtcgagtgct 720
agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 780
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 840
aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccag ctgtcctaca gtcctcagga 900
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca acttcggcac ccagacctac 960
acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa 1020
tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc 1080
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 1140
gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg 1200
gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg 1260
gtcagcgtcc tcaccgttgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 1320
gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag 1380
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1440
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1500
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccatgctgga ctccgacggc 1560
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1620
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1680
ctgtctccgg gtaaa 1695
<210> 28
<211> 565
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的RSPO2突变体和抗GFP重链IgG2融合多肽
<400> 28
Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys
1 5 10 15
Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met
20 25 30
Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly
35 40 45
His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn
50 55 60
Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly
65 70 75 80
Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe
85 90 95
Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
130 135 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Gly Met His Trp Val Arg
145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Ser Ile
165 170 175
Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
180 185 190
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
195 200 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Tyr Lys Thr
210 215 220
Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
225 230 235 240
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser
245 250 255
Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
260 265 270
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
275 280 285
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
290 295 300
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr
305 310 315 320
Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr
325 330 335
Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro
340 345 350
Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
355 360 365
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
370 375 380
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
385 390 395 400
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
405 410 415
Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu
420 425 430
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala
435 440 445
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
450 455 460
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
465 470 475 480
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
485 490 495
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
500 505 510
Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
515 520 525
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
530 535 540
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
545 550 555 560
Leu Ser Pro Gly Lys
565
<210> 29
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗ASGR1轻链多核苷酸
<400> 29
gacatcgagc tcacccagga ccccgctgtg tccgtggcct tgggacagac cgtgcgcatc 60
acatgccagg gcgatagcct gcggagctat tacgcctcgt ggtaccagca gaagcctggt 120
caagcgccgg tcctggtcat ctacggaaag aacaaccgcc cgtccggaat tccagacagg 180
ttcagcggat ccagctcggg gaacaccgcc tcactgacta tcaccggagc acaggccgaa 240
gatgaagccg actactactg caactccctg gagcggattg gatacctgag ctacgtgttt 300
ggtggcggta ccaagcttac cgtcctaggt cagcccaagg ctgccccctc ggtcactctg 360
ttcccgccct cctctgagga gcttcaagcc aacaaggcca cactggtgtg tctcataagt 420
gacttctacc cgggagccgt gacagtggcc tggaaggcag atagcagccc cgtcaaggcg 480
ggagtggaga ccaccacacc ctccaaacaa agcaacaaca agtacgcggc cagcagctat 540
ctgagcctga cgcctgagca gtggaagtcc cacagaagct acagctgcca ggtcacgcat 600
gaagggagca ccgtggagaa gacagtggcc cctacagaat gttca 645
<210> 30
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的抗ASGR1轻链多肽
<400> 30
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Leu Glu Arg Ile Gly Tyr Leu
85 90 95
Ser Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro
130 135 140
Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala
145 150 155 160
Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala
165 170 175
Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg
180 185 190
Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr
195 200 205
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 31
<211> 1344
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的RSPO2突变体和抗ASGR1重链IgG2融合多核苷酸
<400> 31
caggtccagt tggtggaatc cggagggggt ttggtccagc ctggtggaag cctgcgcctc 60
tcatgcgccg ctagcggatt caccttctcc cgatacggca tgcattgggt cagacaggca 120
cccggaaaag gactcgaatg ggtgtcgggc atttcctcga tcgggtcaaa cacctattac 180
gccgactccg tgaagggacg gttcaccatt agccgggata acagcaagaa cactctgtac 240
ttgcaaatga actccctgcg ggctgaggac accgccgtgt actactgtgc gcggtggtac 300
aagacctata ttgacgtctg gggacagggt accctcgtga ccgtgtcgag tgctagcacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa atga 1344
<210> 32
<211> 568
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的RSPO2突变体和抗ASGR1重链IgG2融合多肽
<400> 32
Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys
1 5 10 15
Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met
20 25 30
Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly
35 40 45
His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn
50 55 60
Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly
65 70 75 80
Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe
85 90 95
Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
130 135 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg
145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser
165 170 175
Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
180 185 190
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
195 200 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Phe Ser Ser
210 215 220
Arg Arg Trp Tyr Leu Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys
245 250 255
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
260 265 270
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
275 280 285
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
290 295 300
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr
305 310 315 320
Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
325 330 335
Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
340 345 350
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
355 360 365
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
370 375 380
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
385 390 395 400
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
405 410 415
Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln
420 425 430
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
435 440 445
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro
450 455 460
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
465 470 475 480
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
485 490 495
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
500 505 510
Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
515 520 525
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
530 535 540
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
545 550 555 560
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
565
<210> 33
<211> 1344
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的SZC-09033-pFUSEss-aGFP-VH-CHIg-hG1融合多核苷酸
<400> 33
caggtccagt tggtggaatc cggagggggt ttggtccagc ctggtggaag cctgcgcctc 60
tcatgcgccg ctagcggatt caccttctcc cgatacggca tgcattgggt cagacaggca 120
cccggaaaag gactcgaatg ggtgtcgggc atttcctcga tcgggtcaaa cacctattac 180
gccgactccg tgaagggacg gttcaccatt agccgggata acagcaagaa cactctgtac 240
ttgcaaatga actccctgcg ggctgaggac accgccgtgt actactgtgc gcggtggtac 300
aagacctata ttgacgtctg gggacagggt accctcgtga ccgtgtcgag tgctagcacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa atga 1344
<210> 34
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的SZC-09033-pFUSEss-aGFP-VH-CHIg-hG1融合多肽
<400> 34
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Ile Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Lys Thr Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 35
<211> 693
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 35
cagaacagcc agctccagga agaactgagg ggcctccgcg aaaccttctc caacttcacg 60
gcttcgaccg aagctcaagt caaggggttg tccacacaag gcggcaacgt cggacgcaag 120
atgaagtcgc tggagtccca gctggaaaag cagcagaagg atctctccga ggatcacagc 180
tcactgctgt tgcacgtgaa gcagttcgtg tcggacctga ggtccctgag ctgtcagatg 240
gcggcactgc agggaaacgg ttccgaaaga acttgctgcc ctgtgaattg ggtggagcac 300
gagagaagct gctactggtt ctcgcggtcc ggcaaagcct gggcggacgc cgacaactat 360
tgtcggctgg aggatgcgca cctggtggtc gtgacctcct gggaggaaca gaagtttgtg 420
cagcaccata tcggtcccgt gaacacttgg atggggctgc acgaccaaaa cggaccgtgg 480
aaatgggtgg atgggactga ttacgaaacc ggattcaaga actggcgccc agagcagccc 540
gacgattggt acggacatgg actggggggc ggagaggact gcgcccactt caccgacgac 600
ggccggtgga acgacgacgt gtgccagcgg ccgtaccgct gggtctgcga aaccgagctg 660
gacaaggcca gccaggagcc acctctcctt tga 693
<210> 36
<211> 230
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 36
Gln Asn Ser Gln Leu Gln Glu Glu Leu Arg Gly Leu Arg Glu Thr Phe
1 5 10 15
Ser Asn Phe Thr Ala Ser Thr Glu Ala Gln Val Lys Gly Leu Ser Thr
20 25 30
Gln Gly Gly Asn Val Gly Arg Lys Met Lys Ser Leu Glu Ser Gln Leu
35 40 45
Glu Lys Gln Gln Lys Asp Leu Ser Glu Asp His Ser Ser Leu Leu Leu
50 55 60
His Val Lys Gln Phe Val Ser Asp Leu Arg Ser Leu Ser Cys Gln Met
65 70 75 80
Ala Ala Leu Gln Gly Asn Gly Ser Glu Arg Thr Cys Cys Pro Val Asn
85 90 95
Trp Val Glu His Glu Arg Ser Cys Tyr Trp Phe Ser Arg Ser Gly Lys
100 105 110
Ala Trp Ala Asp Ala Asp Asn Tyr Cys Arg Leu Glu Asp Ala His Leu
115 120 125
Val Val Val Thr Ser Trp Glu Glu Gln Lys Phe Val Gln His His Ile
130 135 140
Gly Pro Val Asn Thr Trp Met Gly Leu His Asp Gln Asn Gly Pro Trp
145 150 155 160
Lys Trp Val Asp Gly Thr Asp Tyr Glu Thr Gly Phe Lys Asn Trp Arg
165 170 175
Pro Glu Gln Pro Asp Asp Trp Tyr Gly His Gly Leu Gly Gly Gly Glu
180 185 190
Asp Cys Ala His Phe Thr Asp Asp Gly Arg Trp Asn Asp Asp Val Cys
195 200 205
Gln Arg Pro Tyr Arg Trp Val Cys Glu Thr Glu Leu Asp Lys Ala Ser
210 215 220
Gln Glu Pro Pro Leu Leu
225 230
<210> 37
<211> 684
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 37
aggggcgcac agctgcaagc cgagctgcgg tccctgaagg aagctttctc aaacttctcg 60
agctcgaccc tcaccgaagt gcaggccatt agcacccacg ggggttccgt gggggacaag 120
atcacctcgc tgggagcgaa gctggagaag cagcagcaag acctcaaggc cgaccacgac 180
gcgctgctgt tccacttgaa gcacttccca gtggacttgc ggttcgtggc gtgccagatg 240
gagctgctgc actccaatgg gagccagaga acttgttgcc ctgtgaactg ggtggaacac 300
cagggatcct gctactggtt tagccactcc ggaaaggcct gggccgaagc cgagaagtac 360
tgccagcttg agaacgcgca cctggtcgtg atcaactcct gggaagaaca gaagttcatt 420
gtgcaacaca ctaacccgtt caacacctgg atcggcctga ccgactccga cggctcatgg 480
aaatgggtgg acggaaccga ttaccggcat aactataaga actgggccgt gactcagccg 540
gataattggc acggacacga gctgggtgga tccgaggact gcgtcgaagt gcagcccgac 600
ggcagatgga acgatgactt ctgtctgcaa gtgtaccgct gggtctgcga gaagcgccgc 660
aacgccactg gcgaagtggc ttga 684
<210> 38
<211> 227
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 38
Arg Gly Ala Gln Leu Gln Ala Glu Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ala Phe
1 5 10 15
Ser Asn Phe Ser Ser Ser Thr Leu Thr Glu Val Gln Ala Ile Ser Thr
20 25 30
His Gly Gly Ser Val Gly Asp Lys Ile Thr Ser Leu Gly Ala Lys Leu
35 40 45
Glu Lys Gln Gln Gln Asp Leu Lys Ala Asp His Asp Ala Leu Leu Phe
50 55 60
His Leu Lys His Phe Pro Val Asp Leu Arg Phe Val Ala Cys Gln Met
65 70 75 80
Glu Leu Leu His Ser Asn Gly Ser Gln Arg Thr Cys Cys Pro Val Asn
85 90 95
Trp Val Glu His Gln Gly Ser Cys Tyr Trp Phe Ser His Ser Gly Lys
100 105 110
Ala Trp Ala Glu Ala Glu Lys Tyr Cys Gln Leu Glu Asn Ala His Leu
115 120 125
Val Val Ile Asn Ser Trp Glu Glu Gln Lys Phe Ile Val Gln His Thr
130 135 140
Asn Pro Phe Asn Thr Trp Ile Gly Leu Thr Asp Ser Asp Gly Ser Trp
145 150 155 160
Lys Trp Val Asp Gly Thr Asp Tyr Arg His Asn Tyr Lys Asn Trp Ala
165 170 175
Val Thr Gln Pro Asp Asn Trp His Gly His Glu Leu Gly Gly Ser Glu
180 185 190
Asp Cys Val Glu Val Gln Pro Asp Gly Arg Trp Asn Asp Asp Phe Cys
195 200 205
Leu Gln Val Tyr Arg Trp Val Cys Glu Lys Arg Arg Asn Ala Thr Gly
210 215 220
Glu Val Ala
225
<210> 39
<211> 690
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 39
caaaacgccc agctgcagcg ggagctgcgg ggcctgagag agacgctcag caacttcaca 60
gcgagcaccg aggcccaggt caagggcttg agcacccagg gaggcaatgt gggaagaaag 120
atgaagtcgc tggagtccca gctggagaaa cagcagaagg acttgagtga agatcactcc 180
agcctgctgc tccacgtgaa gcagttcgtg tctgacctgc ggagcctgag ctgtcagatg 240
gcggcgctcc agggcaatgg ctcggaaagg gcctgctgcc cagtcaactg ggtggagcac 300
gagcgcagct gctactggtt ctctcgctcc gggaaggcct gggccgacgc cgacaactac 360
tgccggctgg aggacgcgca cctggtggtg gtcacgtcct gggaggagca gaaatttgtc 420
cagcaccaca taggtcctgt gaacacctgg atgggcctcc acgaccaaaa cgggccctgg 480
aagtgggtgg acgggacgga ctacgagacg ggcttcaaga actggagacc ggagcagccg 540
gacgactggt acggccacgg gctcggggga ggggaggact gtgcccactt caccgacgac 600
ggccgctgga acgacgacgt ctgccagagg ccctaccgct gggtctgcga gacagagctg 660
gacaaggcca gtcaggagcc acctctcctt 690
<210> 40
<211> 230
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 40
Gln Asn Ala Gln Leu Gln Arg Glu Leu Arg Gly Leu Arg Glu Thr Leu
1 5 10 15
Ser Asn Phe Thr Ala Ser Thr Glu Ala Gln Val Lys Gly Leu Ser Thr
20 25 30
Gln Gly Gly Asn Val Gly Arg Lys Met Lys Ser Leu Glu Ser Gln Leu
35 40 45
Glu Lys Gln Gln Lys Asp Leu Ser Glu Asp His Ser Ser Leu Leu Leu
50 55 60
His Val Lys Gln Phe Val Ser Asp Leu Arg Ser Leu Ser Cys Gln Met
65 70 75 80
Ala Ala Leu Gln Gly Asn Gly Ser Glu Arg Ala Cys Cys Pro Val Asn
85 90 95
Trp Val Glu His Glu Arg Ser Cys Tyr Trp Phe Ser Arg Ser Gly Lys
100 105 110
Ala Trp Ala Asp Ala Asp Asn Tyr Cys Arg Leu Glu Asp Ala His Leu
115 120 125
Val Val Val Thr Ser Trp Glu Glu Gln Lys Phe Val Gln His His Ile
130 135 140
Gly Pro Val Asn Thr Trp Met Gly Leu His Asp Gln Asn Gly Pro Trp
145 150 155 160
Lys Trp Val Asp Gly Thr Asp Tyr Glu Thr Gly Phe Lys Asn Trp Arg
165 170 175
Pro Glu Gln Pro Asp Asp Trp Tyr Gly His Gly Leu Gly Gly Gly Glu
180 185 190
Asp Cys Ala His Phe Thr Asp Asp Gly Arg Trp Asn Asp Asp Val Cys
195 200 205
Gln Arg Pro Tyr Arg Trp Val Cys Glu Thr Glu Leu Asp Lys Ala Ser
210 215 220
Gln Glu Pro Pro Leu Leu
225 230
<210> 41
<211> 684
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 41
caaagtgcac agctgcaagc agagatgcgg agcctgaagg aagctttcag caacttctcc 60
tcgagcacgc tggtggaggt ccatgctctc ggcacccacg gaggcagcgt gggtgacaag 120
atcacatccc taggagacaa gttggagaaa cagcagcacg acctgaaagc agatcatgac 180
atcctgctcc tccatctgaa gcacttcccc gtggacctgc gcttcgtggc ctgccagatg 240
gagctcctcc acagcaacgg ctcccaaagg acctgctgcc ctgtcaactg ggtggagcac 300
caaggcagct gctactggtt ctctcgctcc gggaaggcct gggccgaggc ggagaagtac 360
tgccagctgg agaactcaca cctggtggtc atcaactcct gggaggagca gaaattcatt 420
gtacaacaca cgaacccctt caatacctgg ataggtctca cggacagtga tggctcctgg 480
aaatgggtgg acggcacaga ctataggcac aactacaaga actgggctgt cactcagcca 540
gatgattggc acgggcatga gctgggcgga agtgaagact gtgttgaagt ccggccggat 600
ggccgctgga acgatgattt ctgcctgcag gtgcaccgct gggtgtgtga gaagaggcgg 660
aatgccaccg gcgaggcagc ctga 684
<210> 42
<211> 227
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 42
Gln Ser Ala Gln Leu Gln Ala Glu Met Arg Ser Leu Lys Glu Ala Phe
1 5 10 15
Ser Asn Phe Ser Ser Ser Thr Leu Val Glu Val His Ala Leu Gly Thr
20 25 30
His Gly Gly Ser Val Gly Asp Lys Ile Thr Ser Leu Gly Asp Lys Leu
35 40 45
Glu Lys Gln Gln His Asp Leu Lys Ala Asp His Asp Ile Leu Leu Leu
50 55 60
His Leu Lys His Phe Pro Val Asp Leu Arg Phe Val Ala Cys Gln Met
65 70 75 80
Glu Leu Leu His Ser Asn Gly Ser Gln Arg Thr Cys Cys Pro Val Asn
85 90 95
Trp Val Glu His Gln Gly Ser Cys Tyr Trp Phe Ser Arg Ser Gly Lys
100 105 110
Ala Trp Ala Glu Ala Glu Lys Tyr Cys Gln Leu Glu Asn Ser His Leu
115 120 125
Val Val Ile Asn Ser Trp Glu Glu Gln Lys Phe Ile Val Gln His Thr
130 135 140
Asn Pro Phe Asn Thr Trp Ile Gly Leu Thr Asp Ser Asp Gly Ser Trp
145 150 155 160
Lys Trp Val Asp Gly Thr Asp Tyr Arg His Asn Tyr Lys Asn Trp Ala
165 170 175
Val Thr Gln Pro Asp Asp Trp His Gly His Glu Leu Gly Gly Ser Glu
180 185 190
Asp Cys Val Glu Val Arg Pro Asp Gly Arg Trp Asn Asp Asp Phe Cys
195 200 205
Leu Gln Val His Arg Trp Val Cys Glu Lys Arg Arg Asn Ala Thr Gly
210 215 220
Glu Ala Ala
225
<210> 43
<211> 468
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 43
cagaaagcta ttatcagagt gatccccttg aaaatggacc ccacaggaaa actgaatctc 60
actttggaag gtgtgtttgc tggtgttgct gaaataactc cagcagaagg aaaattaatg 120
cagtcccacc cgctgtacct gtgcaatgcc agtgatgacg acaatctgga gcctggattc 180
atcagcatcg tcaagctgga gagtcctcga cgggcccccc gcccctgcct gtcactggct 240
agcaaggctc ggatggcggg tgagcgagga gccagtgctg tcctctttga catcactgag 300
gatcgagctg ctgctgagca gctgcagcag ccgctggggc tgacctggcc agtggtgttg 360
atctggggta atgacgctga gaagctgatg gagtttgtgt acaagaacca aaaggcccat 420
gtgaggattg agctgaagga gcccccggcc tggccagatt atgattga 468
<210> 44
<211> 155
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 44
Gln Lys Ala Ile Ile Arg Val Ile Pro Leu Lys Met Asp Pro Thr Gly
1 5 10 15
Lys Leu Asn Leu Thr Leu Glu Gly Val Phe Ala Gly Val Ala Glu Ile
20 25 30
Thr Pro Ala Glu Gly Lys Leu Met Gln Ser His Pro Leu Tyr Leu Cys
35 40 45
Asn Ala Ser Asp Asp Asp Asn Leu Glu Pro Gly Phe Ile Ser Ile Val
50 55 60
Lys Leu Glu Ser Pro Arg Arg Ala Pro Arg Pro Cys Leu Ser Leu Ala
65 70 75 80
Ser Lys Ala Arg Met Ala Gly Glu Arg Gly Ala Ser Ala Val Leu Phe
85 90 95
Asp Ile Thr Glu Asp Arg Ala Ala Ala Glu Gln Leu Gln Gln Pro Leu
100 105 110
Gly Leu Thr Trp Pro Val Val Leu Ile Trp Gly Asn Asp Ala Glu Lys
115 120 125
Leu Met Glu Phe Val Tyr Lys Asn Gln Lys Ala His Val Arg Ile Glu
130 135 140
Leu Lys Glu Pro Pro Ala Trp Pro Asp Tyr Asp
145 150 155
<210> 45
<211> 495
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 45
aaggagacgg cgttcgtgga ggtggtgctg ttcgagtcga gcccaagcgg cgattacacc 60
acctacacca ccggcctcac gggccgcttc tcgcgggccg gggccacgct cagcgccgag 120
ggcgagatcg tgcagatgca cccactgggc ctatgtaata acaatgacga agaggacttg 180
tatgaatatg gctgggtagg agtggtgaag ctggaacagc cagaattgga cccgaaacca 240
tgcctcactg tcctaggcaa ggccaagcga gcagtacagc ggggagctac tgcagtcatc 300
tttgatgtgt ctgaaaaccc agaagctatt gatcagctga accagggctc tgaagacccg 360
ctcaagaggc cggtggtgta tgtgaagggt gcagatgcca ttaagctgat gaacatcgtc 420
aacaagcaga aagtggctcg agcaaggatc cagcaccgcc ctcctcgaca acccactgaa 480
tactttgaca tgtga 495
<210> 46
<211> 164
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 46
Lys Glu Thr Ala Phe Val Glu Val Val Leu Phe Glu Ser Ser Pro Ser
1 5 10 15
Gly Asp Tyr Thr Thr Tyr Thr Thr Gly Leu Thr Gly Arg Phe Ser Arg
20 25 30
Ala Gly Ala Thr Leu Ser Ala Glu Gly Glu Ile Val Gln Met His Pro
35 40 45
Leu Gly Leu Cys Asn Asn Asn Asp Glu Glu Asp Leu Tyr Glu Tyr Gly
50 55 60
Trp Val Gly Val Val Lys Leu Glu Gln Pro Glu Leu Asp Pro Lys Pro
65 70 75 80
Cys Leu Thr Val Leu Gly Lys Ala Lys Arg Ala Val Gln Arg Gly Ala
85 90 95
Thr Ala Val Ile Phe Asp Val Ser Glu Asn Pro Glu Ala Ile Asp Gln
100 105 110
Leu Asn Gln Gly Ser Glu Asp Pro Leu Lys Arg Pro Val Val Tyr Val
115 120 125
Lys Gly Ala Asp Ala Ile Lys Leu Met Asn Ile Val Asn Lys Gln Lys
130 135 140
Val Ala Arg Ala Arg Ile Gln His Arg Pro Pro Arg Gln Pro Thr Glu
145 150 155 160
Tyr Phe Asp Met
<210> 47
<211> 103
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 47
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Phe Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Thr Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Arg Arg Thr Phe Gly Arg
85 90 95
Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100
<210> 48
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 48
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Met Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Ser Arg Met Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Arg Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Leu Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Asn His Glu Glu His Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 49
<211> 103
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 49
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Phe Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Thr Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Arg Arg Thr Phe Gly Arg
85 90 95
Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100
<210> 50
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 50
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Ala Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Gly Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Asn His Glu Glu His Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 103
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 51
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Phe Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Thr Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Arg Arg Thr Phe Gly Arg
85 90 95
Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100
<210> 52
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 52
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Val Ala Trp Asn Trp Met Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Tyr Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Thr Arg Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 53
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 53
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Leu Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 54
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Ser Asp Gly Tyr Asp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 55
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 55
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
His Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ile Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Val
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 56
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 56
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Phe Gly Val Gly Ala Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 57
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 57
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asp Gly His Asn Tyr Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Leu Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Thr His Trp Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 58
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 58
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Ala Gly Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 59
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 59
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Tyr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 60
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
His Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Val Phe Gly Ala Pro Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 61
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 61
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Tyr Asp Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 62
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Thr Gly Ala Thr Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 63
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 63
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 64
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 64
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Asn
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Met Phe Gly Thr Val Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 65
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 65
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ala Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Val
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 66
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 66
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Tyr Asn Ser His Thr Asn Asp Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Ala Val Ala Ala Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 67
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 67
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Thr Ile Pro Ile
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 68
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 68
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Trp Ile Asn Pro Lys Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 69
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 69
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Thr Pro Leu
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 70
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 70
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
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Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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65 70 75 80
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Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 71
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 71
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 72
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 72
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115
<210> 73
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 73
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro
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65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 74
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 74
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
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Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Asp Ser Pro Ile Val Arg Arg Gly Glu Arg Gly Arg Tyr Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 75
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 75
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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50 55 60
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 76
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 76
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Thr Gly Asn Thr Ala Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115
<210> 77
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 77
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Asp
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly His Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Ala Arg Trp Gly Ala Gly Ser Leu Phe Ala Ser Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 78
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 78
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Arg Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 79
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 79
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Gln Gly Val Trp Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 80
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 80
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Gly Ala Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 81
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 81
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 82
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 82
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Thr
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100 105 110
<210> 83
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 83
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Asn Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Phe Gly Val Ala Gly Thr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 84
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 84
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Asp Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 85
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 85
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Gly Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 86
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 86
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile His Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 87
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 88
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 88
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Asp Trp
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
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<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 89
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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100 105 110
Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 90
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 90
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 91
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 91
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Asp Gln Gly His Asp Tyr Gly Asp Tyr Glu Ile Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 92
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 92
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asp Tyr Pro Leu
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 93
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 93
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Pro Val Arg Gly Ile Ser Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 94
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 94
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Pro Ala Leu Tyr
100 105 110
Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 95
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 95
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
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Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
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Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 96
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 96
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Ala Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Gln Thr Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 97
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 97
Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Ser Arg
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
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Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Arg
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Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 98
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 98
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Tyr Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
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100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 99
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 99
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
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100 105
<210> 100
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
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100 105 110
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115 120
<210> 101
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 101
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Arg Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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100 105
<210> 102
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 102
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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100 105 110
Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 103
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 103
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Gly Gln Ser Ile Ser Arg Phe
20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 104
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 104
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Arg Ala Leu Lys Gly Ser Tyr Thr Ser Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 105
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 105
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Tyr Ser Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 106
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 106
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Thr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Gly Gly Arg Ser Gly Trp Ile Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 107
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 107
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Arg Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 108
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ser Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Arg Arg Gly Ser Thr Arg Tyr Ala Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Leu Gly Val Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 109
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Pro Pro His
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 110
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 110
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Arg Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Asp Gly Tyr Asn Trp Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 111
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 111
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Phe Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Ser Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 112
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 112
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Arg Ser Arg Gly Ser Ser Ser Leu Gly Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 113
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 113
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85 90 95
Leu Glu Ala Pro Leu Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 114
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 114
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Phe Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Arg Tyr Ala Gln Asn Leu
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Lys Gly Lys Ser Ser Ser Trp Phe Arg Phe Asp Pro
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 115
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 115
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Arg Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 116
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 116
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
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35 40 45
Gly Lys Ile Asn Pro Ser Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Ala Gly Met Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 117
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 117
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 118
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 118
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Arg Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 119
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 119
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ser Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 120
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 120
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 121
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 121
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 122
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 122
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Ser Pro Asn Arg Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Trp Leu Arg Gly Ala Trp Gly Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 123
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 123
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Thr Ser Ser Gln Ser Val Leu His Ser
20 25 30
Ser Asn Lys Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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100 105 110
Lys
<210> 124
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 124
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 125
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 125
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
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100 105 110
Lys
<210> 126
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 126
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Gly Tyr
20 25 30
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100 105 110
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115 120 125
<210> 127
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 127
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
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<210> 128
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 128
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
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50 55 60
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115 120
<210> 129
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 129
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
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85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 130
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 130
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Asn Phe
20 25 30
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35 40 45
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100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 131
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 131
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ala Ser
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 132
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 132
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Gly Arg Arg Ser Gly Leu Ser Pro Pro Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 133
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 133
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Pro Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 134
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 134
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Asp Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Ser Gly Asn Trp Lys Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 135
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 135
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly
85 90 95
Thr His Trp Pro Tyr Ala Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 136
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 136
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Asn Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 137
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 137
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Thr Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 138
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 138
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Thr Ser Ser Phe Ser Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 139
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 139
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 140
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 140
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Ala Gly Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Asp Ala Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gln Tyr Ser Gly Tyr Asp Thr His Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 141
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 141
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Ala Ser Ala Arg Ala Ala Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Arg Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 142
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 142
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Lys Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Ser Tyr Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 143
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 143
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 144
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 144
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg His
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Leu Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 145
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 145
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Val Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Arg Ser Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 146
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 146
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Lys Ser Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Leu Arg Gly Ser Leu Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 147
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 147
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 148
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 148
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Arg Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Trp Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 149
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 149
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 150
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 150
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Met Tyr Ser Ser Ser Trp Leu Arg Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 151
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 151
Glu Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 152
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 152
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Glu Ser Met
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg Pro Arg Tyr Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 153
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 153
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ala Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Ala Ser Pro Lys Pro Leu
35 40 45
Ile His Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 154
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的链
<400> 154
Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Ile Tyr Tyr Val Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Glu Gly Thr Gly Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 155
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链多核苷酸序列
<400> 155
cagagcgtgt taacccagcc cgccagcgtg agcggcagcc ccggccagag catcaccatc 60
agctgcgccg gcaccagcag cgacgtgggc ggctacaact acgtgagctg gtaccagcag 120
caccccggca aggcccccaa gctgatgatc tacgaggaca gcaagagacc cagcggcgtg 180
agcaacagat tcagcggcag caagagcggc aacaccgcca gcctgaccat cagcggcctg 240
caggccgagg acgaggccga ctactactgc agcagctaca ccaccagaag caccagagtg 300
ttcggcggcg gcaccaagct ggccgtgctg ggtcagccca aggctgcccc ctcggtcact 360
ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata 420
agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag 480
gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc 540
tatctgagcc tgacgcctga gcagtggaag tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg 600
catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg gcccctacag aatgttca 648
<210> 156
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链多肽序列
<400> 156
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Ala Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Thr Arg
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Ala Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 157
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗β-Gal重链IgG1-LALAPG构建体
<400> 157
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcagc ctggtgaagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc aactacagca tgaactgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg gatcagcagc atcagcggca gcagcagata catctactac 180
gccgacttcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acgccaccaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgt gagaagcagc 300
atcaccatct tcggcggcgg catggacgtg tggggcagag gcaccctggt gaccgtgagc 360
agcgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agccgcgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcggag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 158
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗β-Gal重链IgG1-LALAPG构建体构建体
<400> 158
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Arg Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Thr Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Ser Ser Ile Thr Ile Phe Gly Gly Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 159
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗β-Gal重链IgG2多核苷酸序列
<400> 159
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcagc ctggtgaagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc aactacagca tgaactgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg gatcagcagc atcagcggca gcagcagata catctactac 180
gccgacttcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acgccaccaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgt gagaagcagc 300
atcaccatct tcggcggcgg catggacgtg tggggcagag gcaccctggt gaccgtgagc 360
agcgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccat gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa a 1341
<210> 160
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗β-Gal重链IgG2多肽序列
<400> 160
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Arg Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Thr Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Ser Ser Ile Thr Ile Phe Gly Gly Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 161
<211> 702
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗ASGR1 VH-CH1多核苷酸序列
<400> 161
gaagtgcagc tgctggaatc cgggggcgga ctggtgcaac ccgggggatc cctcagactg 60
tcctgtgccg catcgggttt cactttctcc tcctacgcga tgtcatgggt cagacaggcc 120
cctggaaaag gcctcgaatg ggtgtcggct atctccggat cggggggatc tacttactac 180
gccgactccg tgaagggccg gttcactatc tcgagggaca actccaagaa taccctgtac 240
ttgcaaatga actccctgcg cgccgaggat accgcggtgt attactgcgc caaggacttc 300
agctcacgcc ggtggtacct tgagtactgg ggacagggaa cccttgtcac cgtgtccagc 360
gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 660
aaatcttgtg gatccggctc cggacatcat catcaccatc ac 702
<210> 162
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗ASGR1 VH-CH1多肽序列
<400> 162
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Phe Ser Ser Arg Arg Trp Tyr Leu Glu Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly His His His His His His
225 230
<210> 163
<211> 765
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的鼠类ASGR1细胞外结构域——多核苷酸
<400> 163
caaaattccc aactccggga agatctgctg gctctaaggc agaatttcag caacctcact 60
gtgagcactg aggaccaggt caaggccctg agcacccagg gaagtagtgt gggaagaaag 120
atgaagttag tggagtcgaa gctggaaaaa cagcagaagg atctgactga agatcactcc 180
agtttgctac tgcacgtgaa gcagttagtg tctgacgtgc gaagcttgag ctgccagatg 240
gctgcatttc ggggcaatgg ctctgaaagg acctgctgcc ccatcaactg ggtggagtat 300
gaaggcagct gctactggtt ctccagctct gtgaggcctt ggactgaagc tgacaagtac 360
tgccagctgg aaaatgccca tctggtggtg gtgacctcca gggatgagca gaacttcctc 420
cagcgccaca tgggcccctt aaacacttgg attggcctaa ctgaccagaa cgggccctgg 480
aaatgggtgg atggaacaga ctacgagaca ggcttccaga attggagacc agagcagcca 540
gataactggt acggacatgg gcttggagga ggcgaggact gtgcccactt cacgacggat 600
ggccgctgga atgacgacgt ctgcaggagg ccctaccgct gggtctgtga gacaaagttg 660
gataaggcta attccggctc cggaggtctt aatgatattt tcgaggctca gaagattgag 720
tggcatgaag gatccggctc ccaccaccat catcaccacc accac 765
<210> 164
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成的鼠类ASGR1细胞外结构域——多肽
<400> 164
Gln Asn Ser Gln Leu Arg Glu Asp Leu Leu Ala Leu Arg Gln Asn Phe
1 5 10 15
Ser Asn Leu Thr Val Ser Thr Glu Asp Gln Val Lys Ala Leu Ser Thr
20 25 30
Gln Gly Ser Ser Val Gly Arg Lys Met Lys Leu Val Glu Ser Lys Leu
35 40 45
Glu Lys Gln Gln Lys Asp Leu Thr Glu Asp His Ser Ser Leu Leu Leu
50 55 60
His Val Lys Gln Leu Val Ser Asp Val Arg Ser Leu Ser Cys Gln Met
65 70 75 80
Ala Ala Phe Arg Gly Asn Gly Ser Glu Arg Thr Cys Cys Pro Ile Asn
85 90 95
Trp Val Glu Tyr Glu Gly Ser Cys Tyr Trp Phe Ser Ser Ser Val Arg
100 105 110
Pro Trp Thr Glu Ala Asp Lys Tyr Cys Gln Leu Glu Asn Ala His Leu
115 120 125
Val Val Val Thr Ser Arg Asp Glu Gln Asn Phe Leu Gln Arg His Met
130 135 140
Gly Pro Leu Asn Thr Trp Ile Gly Leu Thr Asp Gln Asn Gly Pro Trp
145 150 155 160
Lys Trp Val Asp Gly Thr Asp Tyr Glu Thr Gly Phe Gln Asn Trp Arg
165 170 175
Pro Glu Gln Pro Asp Asn Trp Tyr Gly His Gly Leu Gly Gly Gly Glu
180 185 190
Asp Cys Ala His Phe Thr Thr Asp Gly Arg Trp Asn Asp Asp Val Cys
195 200 205
Arg Arg Pro Tyr Arg Trp Val Cys Glu Thr Lys Leu Asp Lys Ala Asn
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu
225 230 235 240
Trp His Glu Gly Ser Gly Ser His His His His His His His His
245 250 255
<210> 165
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链序列
<400> 165
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 166
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变重链序列
<400> 166
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Lys Ala Asn Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Phe Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Leu Gly Gly Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 167
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链序列
<400> 167
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Arg Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 168
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变重链序列
<400> 168
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Lys Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Pro Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ala Ser Arg Thr Thr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Pro Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 169
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链序列
<400> 169
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Leu Gly Ser Tyr Tyr Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Arg Asn Lys Gln Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Tyr Asp Trp Met Tyr Ser Ser
85 90 95
Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 170
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变重链序列
<400> 170
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Ile Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Ala Ile Tyr Tyr Leu Glu Ala Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 171
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链序列
<400> 171
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Leu Glu Arg Ile Gly Tyr Leu
85 90 95
Ser Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 172
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链序列
<400> 172
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Leu Glu Arg Ile Gly Tyr Leu
85 90 95
Ser Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 173
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变重链序列
<400> 173
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Phe Ser Ser Arg Arg Trp Tyr Leu Glu Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 174
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链序列
<400> 174
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Leu Arg Ser Gly Lys Met
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 175
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变重链序列
<400> 175
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Trp Tyr Leu Pro Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 176
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链序列
<400> 176
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Lys Ser Ser Ser Lys Asn
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 177
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变重链序列
<400> 177
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Ser Phe Thr Phe Gly Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 178
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链序列
<400> 178
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Arg Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Arg Arg Gly Tyr Ser
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 179
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变重链序列
<400> 179
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Ser Phe Ser Tyr Leu Arg Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 180
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变重链序列
<400> 180
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ser Thr Tyr Phe Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ala Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Ser Gly Asn Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 181
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链序列
<400> 181
Asp Ile Val Leu Phe Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asp Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 182
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变重链序列
<400> 182
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Leu Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Thr Ser
115
<210> 183
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链序列
<400> 183
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Tyr Val Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Ala Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Arg
85 90 95
Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 184
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变重链序列
<400> 184
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Val Val Thr Ser Ala Ser Ser Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Glu Pro Thr Tyr Tyr Ser Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 185
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的可变轻链序列
<400> 185
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Pro Trp
35 40 45
Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 186
<211> 1707
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗β-Gal重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 186
gaggtgcagc tggtggagag cggcggcagc ctggtgaagc ccggcggcag cctgagactg 60
agctgcgccg ccagcggctt caccttcagc aactacagca tgaactgggt gagacaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg gatcagcagc atcagcggca gcagcagata catctactac 180
gccgacttcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acgccaccaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgt gagaagcagc 300
atcaccatct tcggcggcgg catggacgtg tggggcagag gcaccctggt gaccgtgagc 360
agcgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccat gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa aggtggtggt ggctcgggat ccggaggctc cggtggcggt 1380
ggcagcaacc caatttgcaa gggatgctta agctgtagca aggacaacgg atgttcacgg 1440
tgccagcaaa agctgttttt cttcctccgg cgggaaggaa tgcggcagta cggcgaatgt 1500
ctccactcct gcccctcggg gtattacgga caccgcgcgc ctgacatgaa ccgatgcgcc 1560
agatgccgga tcgagaactg cgatagctgc cgcagcaagg acgcctgcac taagtgcaaa 1620
gtcggcttct accttcaccg gggcagatgt tttgacgaat gcccggatgg cttcgccccg 1680
ctggaggaga ctatggaatg cgtggag 1707
<210> 187
<211> 569
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗β-Gal重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 187
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Arg Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Thr Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Ser Ser Ile Thr Ile Phe Gly Gly Gly Met Asp Val Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro
450 455 460
Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg
465 470 475 480
Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln
485 490 495
Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg
500 505 510
Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp
515 520 525
Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr
530 535 540
Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro
545 550 555 560
Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu
565
<210> 188
<211> 1707
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗GFP重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 188
caggtccagt tggtggaatc cggagggggt ttggtccagc ctggtggaag cctgcgcctc 60
tcatgcgccg ctagcggatt caccttctcc cgatacggca tgcattgggt cagacaggca 120
cccggaaaag gactcgaatg ggtgtcgggc atttcctcga tcgggtcaaa cacctattac 180
gccgactccg tgaagggacg gttcaccatt agccgggata acagcaagaa cactctgtac 240
ttgcaaatga actccctgcg ggctgaggac accgccgtgt actactgtgc gcggtggtac 300
aagacctata ttgacgtctg gggacagggt accctcgtga ccgtgtctag cgctagcacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacgg cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa aggtggtggt ggctcgggat ccggaggctc cggtggcggt 1380
ggcagcaacc caatttgcaa gggatgctta agctgtagca aggacaacgg atgttcacgg 1440
tgccagcaaa agctgttttt cttcctccgg cgggaaggaa tgcggcagta cggcgaatgt 1500
ctccactcct gcccctcggg gtattacgga caccgcgcgc ctgacatgaa ccgatgcgcc 1560
agatgccgga tcgagaactg cgatagctgc cgcagcaagg acgcctgcac taagtgcaaa 1620
gtcggcttct accttcaccg gggcagatgt tttgacgaat gcccggatgg cttcgccccg 1680
ctggaggaga ctatggaatg cgtggag 1707
<210> 189
<211> 569
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗GFP重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 189
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Ile Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Lys Thr Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro
450 455 460
Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg
465 470 475 480
Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln
485 490 495
Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg
500 505 510
Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp
515 520 525
Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr
530 535 540
Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro
545 550 555 560
Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu
565
<210> 190
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1F8轻链多核苷酸序列
<400> 190
gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctggctgtgt cagcaggaga gaaggtcact 60
atgagctgca agtccagtca gagtctgttc aacagtagaa cccgaaagaa ctacttggct 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tctactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gcaagcaatc ttattatctg 300
ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657
<210> 191
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1F8轻链多肽序列
<400> 191
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Tyr Tyr Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 192
<211> 1707
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1F8重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 192
gaagtgaaac tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt acctatacca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccggcgaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtagta ttggtgttaa cacctactat 180
ccagacagtg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaggaa caccctgtac 240
ctgcaagtga gcagtctgag gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagacatgtg 300
gattactacg atgggatttc ctttgactac tggggccaag gcaccactct cacagtctcc 360
agcgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccat gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa aggtggtggt ggctcgggat ccggaggctc cggtggcggt 1380
ggcagcaacc caatttgcaa gggatgctta agctgtagca aggacaacgg atgttcacgg 1440
tgccagcaaa agctgttttt cttcctccgg cgggaaggaa tgcggcagta cggcgaatgt 1500
ctccactcct gcccctcggg gtattacgga caccgcgcgc ctgacatgaa ccgatgcgcc 1560
agatgccgga tcgagaactg cgatagctgc cgcagcaagg acgcctgcac taagtgcaaa 1620
gtcggcttct accttcaccg gggcagatgt tttgacgaat gcccggatgg cttcgccccg 1680
ctggaggaga ctatggaatg cgtggag 1707
<210> 193
<211> 569
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1F8重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 193
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Ala Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Ile Gly Val Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Val Asp Tyr Tyr Asp Gly Ile Ser Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro
450 455 460
Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg
465 470 475 480
Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln
485 490 495
Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg
500 505 510
Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp
515 520 525
Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr
530 535 540
Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro
545 550 555 560
Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu
565
<210> 194
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1N15轻链多核苷酸序列
<400> 194
gacatcaaga tgacccagtc tccatcttcc atgtatgcat ctctaggaga gagagttact 60
atcacttgca aggcgagtca ggacattaat agccatttaa gctggttcca gcagaaacca 120
gggaaatctc ctaagaccct gatcattcgt gcaaacagat tggtagatgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccatcagcag cccggagtat 240
gaagaaatgg gaatttatta ctgtctacag tatgatgagt ttccgttcac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 195
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1N15轻链多肽序列
<400> 195
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser His
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Ile Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Pro Glu Tyr
65 70 75 80
Glu Glu Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 196
<211> 1683
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1N15重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 196
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgtaagg cttctggata cacattcact gactactaca tgaactgggt gaagcagagt 120
catggagaga gccttgagtg gattggacgt gttattccta gcaatggtgg tactaactac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg acagtagaca aatccctcac cacagcctac 240
atgcagctca acagcctgac atctgaagac tctgcggtct atttctgtgc aagagggatg 300
gactactggg gtccaggaac ctcagtcacc gtctccagcg ctagcaccaa gggcccatcg 360
gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc 420
ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc 480
agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta cagtcctcag gactctactc cctcagcagc 540
gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc acccagacct acacctgcaa cgtagatcac 600
aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca 660
ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac 780
gaagaccccg aggtccagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840
acaaagccac gggaggagca gttcaacagc acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt 900
gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc 960
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa accaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020
tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080
gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140
aacaactaca agaccacgcc tcccatgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200
aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260
catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaaggt 1320
ggtggtggct cgggatccgg aggctccggt ggcggtggca gcaacccaat ttgcaaggga 1380
tgcttaagct gtagcaagga caacggatgt tcacggtgcc agcaaaagct gtttttcttc 1440
ctccggcggg aaggaatgcg gcagtacggc gaatgtctcc actcctgccc ctcggggtat 1500
tacggacacc gcgcgcctga catgaaccga tgcgccagat gccggatcga gaactgcgat 1560
agctgccgca gcaaggacgc ctgcactaag tgcaaagtcg gcttctacct tcaccggggc 1620
agatgttttg acgaatgccc ggatggcttc gccccgctgg aggagactat ggaatgcgtg 1680
gag 1683
<210> 197
<211> 561
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1N15重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 197
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Glu Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Val Ile Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Leu Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Met Asp Tyr Trp Gly Pro Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
115 120 125
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln
180 185 190
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala
210 215 220
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
245 250 255
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
275 280 285
Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp
290 295 300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
305 310 315 320
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg
325 330 335
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
340 345 350
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
355 360 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
370 375 380
Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
385 390 395 400
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
405 410 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
420 425 430
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly
435 440 445
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys
450 455 460
Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe
465 470 475 480
Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys
485 490 495
Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala
500 505 510
Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys
515 520 525
Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp
530 535 540
Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val
545 550 555 560
Glu
<210> 198
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P13轻链多核苷酸序列
<400> 198
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaca aactgttatc 60
atcacatgtc gaacaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag 120
ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca 180
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gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta gtacgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggacatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
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cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
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ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 199
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P13轻链多肽序列
<400> 199
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Gln Thr Val Ile Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Tyr Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Ser Thr Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 200
<211> 1707
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P13重链IgG2、RSPO2多核苷酸序列
<400> 200
gaggttcaac tgcagcagtc tggacctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcatttact gactacttta tgaactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggacgt tttaatcctt tcaatggtca aactttctac 180
aatcaggagt tcaagggcaa ggccacatta actgtagaca aatcctctag caccgcccac 240
atggagctcc ggagcctgac atctgaggac tctgcagtct attattgtgc aagaagagga 300
aggtacgacg tttactatgt tctggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
agcgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccat gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa aggtggtggt ggctcgggat ccggaggctc cggtggcggt 1380
ggcagcaacc caatttgcaa gggatgctta agctgtagca aggacaacgg atgttcacgg 1440
tgccagcaaa agctgttttt cttcctccgg cgggaaggaa tgcggcagta cggcgaatgt 1500
ctccactcct gcccctcggg gtattacgga caccgcgcgc ctgacatgaa ccgatgcgcc 1560
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ctggaggaga ctatggaatg cgtggag 1707
<210> 201
<211> 569
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P13重链IgG2、RSPO2多肽序列
<400> 201
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Phe Asn Pro Phe Asn Gly Gln Thr Phe Tyr Asn Gln Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala His
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Arg Tyr Asp Val Tyr Tyr Val Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro
450 455 460
Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg
465 470 475 480
Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln
485 490 495
Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg
500 505 510
Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp
515 520 525
Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr
530 535 540
Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro
545 550 555 560
Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu
565
<210> 202
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P5轻链多核苷酸序列
<400> 202
gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtag cctggtatca acagaaacca 120
ggacaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcttatc ggtacagtgg agtccctgat 180
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcaacaa tataacagct atccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 203
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P5轻链多肽序列
<400> 203
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 204
<211> 1704
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P5重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 204
caggtccagc tgcagcaatc tggacctgag ctggtgaggc ctgggacttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggcta taccttcctc acctactgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggacagg gccttgagtg gattggacag attttccctg caactggtat tacttactac 180
agtgagatgt tcaaggacaa ggccacattg actgaagaca catcctccac cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggcc actgctgtct atttctgtgc aagaagaagg 300
gcctaccata gtaacttttt tgactactgg ggccaaggca ccactctcac agtctccagc 360
gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 420
agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 600
tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 660
aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccatgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320
tccctgtctc cgggtaaagg tggtggtggc tcgggatccg gaggctccgg tggcggtggc 1380
agcaacccaa tttgcaaggg atgcttaagc tgtagcaagg acaacggatg ttcacggtgc 1440
cagcaaaagc tgtttttctt cctccggcgg gaaggaatgc ggcagtacgg cgaatgtctc 1500
cactcctgcc cctcggggta ttacggacac cgcgcgcctg acatgaaccg atgcgccaga 1560
tgccggatcg agaactgcga tagctgccgc agcaaggacg cctgcactaa gtgcaaagtc 1620
ggcttctacc ttcaccgggg cagatgtttt gacgaatgcc cggatggctt cgccccgctg 1680
gaggagacta tggaatgcgt ggag 1704
<210> 205
<211> 568
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P5重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 205
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Leu Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Phe Pro Ala Thr Gly Ile Thr Tyr Tyr Ser Glu Met Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Ala Tyr His Ser Asn Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val
210 215 220
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Ile
450 455 460
Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys
465 470 475 480
Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr
485 490 495
Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala
500 505 510
Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser
515 520 525
Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu
530 535 540
His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu
545 550 555 560
Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu
565
<210> 206
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2E12轻链多核苷酸序列
<400> 206
gatgttgtgg tgactcaaac tccactctcc ctgcctgtca gctttggaga tcgagtttct 60
atctcttgca ggtctagtca gagtcttgca aacagttatg ggaacaccta tttgtcttgg 120
tacctgcaca agcctggcca gtctccacag ctcctcatct atgggatttc caacagattt 180
tctggggtgc cagacaggtt cagtggcagt ggttcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcacaataa agcctgagga cttgggaatg tattactgct tacaaggtac acatcagcct 300
ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657
<210> 207
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2E12轻链多肽序列
<400> 207
Asp Val Val Val Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Phe Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Thr Ile Lys Pro Glu Asp Leu Gly Met Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly
85 90 95
Thr His Gln Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 208
<211> 1689
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2E12重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 208
gatgtacaac ttcaggagtc aggacctggc ctcgtgaaac cttctcagtc tctgtctctc 60
acctgctctg tcactggcta ctccatcacc agtggttatt actggaactg gatccggcag 120
tttccaggaa acaaactgga atggatgggc tccataggct acgatgatac caatcactac 180
aacccatctc tcaaaaatcg aatctccatc actcgtgaca catctaagaa ccagtttttc 240
ctgaagttga attctgtgac aactgaggac acagccacat attactgtgc aggtgactac 300
ccctttgctt tctggggcca agggactctg gtcactgtct ctgcagctag caccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc aggagcacct ccgagagcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta 600
gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag 660
tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccacggga ggagcagttc aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc 900
accgttgtgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc atgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaaggtggtg gtggctcggg atccggaggc tccggtggcg gtggcagcaa cccaatttgc 1380
aagggatgct taagctgtag caaggacaac ggatgttcac ggtgccagca aaagctgttt 1440
ttcttcctcc ggcgggaagg aatgcggcag tacggcgaat gtctccactc ctgcccctcg 1500
gggtattacg gacaccgcgc gcctgacatg aaccgatgcg ccagatgccg gatcgagaac 1560
tgcgatagct gccgcagcaa ggacgcctgc actaagtgca aagtcggctt ctaccttcac 1620
cggggcagat gttttgacga atgcccggat ggcttcgccc cgctggagga gactatggaa 1680
tgcgtggag 1689
<210> 209
<211> 563
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2E12重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 209
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Ser Ile Gly Tyr Asp Asp Thr Asn His Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Asp Tyr Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu
450 455 460
Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe
465 470 475 480
Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His
485 490 495
Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg
500 505 510
Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp
515 520 525
Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys
530 535 540
Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu
545 550 555 560
Cys Val Glu
<210> 210
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I13轻链多核苷酸序列
<400> 210
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60
atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agttatttag tatggtatca gcagaaacag 120
ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaacct tagcagaagg tgtgccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga agatcaacag cctgcagcct 240
gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat cattatggta cttggacgtt cggtggaggc 300
ataaagctgg aaatcaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639
<210> 211
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I13轻链多肽序列
<400> 211
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 212
<211> 1716
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I13重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 212
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc ccggaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gactatggaa tgcactgggt ccgtcaggct 120
ccagagaagg ggctggagtg ggttgcctac attagtagtg gcagtagtac catctactat 180
gcagacacag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgttc 240
ctacaaatga ccagtctaag gtctgaggac acagccatgt attactgttc aaggaaggga 300
gggtttggtg actacgagaa aagctatgct atggactact ggggtcaagg aacctcagtc 360
accgtctcca gcgctagcac caagggccca tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 420
agcacctccg agagcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 480
gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc 540
ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc 600
ggcacccaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660
acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac 900
agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccatg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa ggtggtggtg gctcgggatc cggaggctcc 1380
ggtggcggtg gcagcaaccc aatttgcaag ggatgcttaa gctgtagcaa ggacaacgga 1440
tgttcacggt gccagcaaaa gctgtttttc ttcctccggc gggaaggaat gcggcagtac 1500
ggcgaatgtc tccactcctg cccctcgggg tattacggac accgcgcgcc tgacatgaac 1560
cgatgcgcca gatgccggat cgagaactgc gatagctgcc gcagcaagga cgcctgcact 1620
aagtgcaaag tcggcttcta ccttcaccgg ggcagatgtt ttgacgaatg cccggatggc 1680
ttcgccccgc tggaggagac tatggaatgc gtggag 1716
<210> 213
<211> 572
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I13重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 213
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Lys Gly Gly Phe Gly Asp Tyr Glu Lys Ser Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
210 215 220
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
450 455 460
Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly
465 470 475 480
Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly
485 490 495
Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr
500 505 510
Gly His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu
515 520 525
Asn Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val
530 535 540
Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly
545 550 555 560
Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu
565 570
<210> 214
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I22轻链多核苷酸序列
<400> 214
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgttatc 60
atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag 120
ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatggt gcaacaaact tagcagatgg tgtgacatca 180
aggttcagtg gcagtggttc aggcacacag ttttccctca agatcgacag cctgcagtct 240
gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggta ctacgtggac gttcggtgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 215
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I22轻链多肽序列
<400> 215
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Thr Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asp Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Thr Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 216
<211> 1707
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I22重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 216
gaggttcaac tgcagcagtc tggacctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60
tcctgcaagg cttctggtta ctcatttact ggctacttta tgaactgggt gaagcagagc 120
catggaaaga gccttgagtg gattggacgt tttaatcctt tcaatggtca aactttctac 180
aatcaggagt tcaagggcaa ggccacatta actgttgaca aatcctctga caccgcccac 240
atggaactcc ggagcctgac atctgaggac tctgcagtct attattgtgc aagaagagga 300
aggtacgacg tttactatgc tctggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
agcgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccat gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa aggtggtggt ggctcgggat ccggaggctc cggtggcggt 1380
ggcagcaacc caatttgcaa gggatgctta agctgtagca aggacaacgg atgttcacgg 1440
tgccagcaaa agctgttttt cttcctccgg cgggaaggaa tgcggcagta cggcgaatgt 1500
ctccactcct gcccctcggg gtattacgga caccgcgcgc ctgacatgaa ccgatgcgcc 1560
agatgccgga tcgagaactg cgatagctgc cgcagcaagg acgcctgcac taagtgcaaa 1620
gtcggcttct accttcaccg gggcagatgt tttgacgaat gcccggatgg cttcgccccg 1680
ctggaggaga ctatggaatg cgtggag 1707
<210> 217
<211> 569
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I22重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 217
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Phe Asn Pro Phe Asn Gly Gln Thr Phe Tyr Asn Gln Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asp Thr Ala His
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Arg Tyr Asp Val Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro
450 455 460
Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg
465 470 475 480
Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln
485 490 495
Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg
500 505 510
Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp
515 520 525
Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr
530 535 540
Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro
545 550 555 560
Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu
565
<210> 218
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3A24轻链多核苷酸序列
<400> 218
gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60
gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt agtaatgtag cctggtttca acagaaacca 120
gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg tcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180
cgcttcacgg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaccaa tgtgcagtct 240
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacagct ttcctctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggaactgaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 219
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3A24轻链多肽序列
<400> 219
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Asn
20 25 30
Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ser Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 220
<211> 1683
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3A24重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 220
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgtaagg cttctggata cacattcact gactactaca taaactgggt gaggcagagt 120
catggaaaga gccttgagtg gattggacgt gttattccta gcaatggtgg tagtaactac 180
aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg acagtagaca aatccctcag tacagcctac 240
atgcacctca acagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aacccagctg 300
ggacggtggg gccaagggac tctggtcact gtctctgcag ctagcaccaa gggcccatcg 360
gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc 420
ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc 480
agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta cagtcctcag gactctactc cctcagcagc 540
gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc acccagacct acacctgcaa cgtagatcac 600
aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca 660
ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac 780
gaagaccccg aggtccagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840
acaaagccac gggaggagca gttcaacagc acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt 900
gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc 960
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa accaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020
tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080
gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140
aacaactaca agaccacgcc tcccatgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200
aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260
catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaaggt 1320
ggtggtggct cgggatccgg aggctccggt ggcggtggca gcaacccaat ttgcaaggga 1380
tgcttaagct gtagcaagga caacggatgt tcacggtgcc agcaaaagct gtttttcttc 1440
ctccggcggg aaggaatgcg gcagtacggc gaatgtctcc actcctgccc ctcggggtat 1500
tacggacacc gcgcgcctga catgaaccga tgcgccagat gccggatcga gaactgcgat 1560
agctgccgca gcaaggacgc ctgcactaag tgcaaagtcg gcttctacct tcaccggggc 1620
agatgttttg acgaatgccc ggatggcttc gccccgctgg aggagactat ggaatgcgtg 1680
gag 1683
<210> 221
<211> 561
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3A24重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 221
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Val Ile Pro Ser Asn Gly Gly Ser Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Leu Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Leu Gly Arg Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
115 120 125
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln
180 185 190
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala
210 215 220
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
245 250 255
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
275 280 285
Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp
290 295 300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
305 310 315 320
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg
325 330 335
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
340 345 350
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
355 360 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
370 375 380
Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
385 390 395 400
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
405 410 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
420 425 430
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly
435 440 445
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys
450 455 460
Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe
465 470 475 480
Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys
485 490 495
Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala
500 505 510
Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys
515 520 525
Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp
530 535 540
Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val
545 550 555 560
Glu
<210> 222
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3E20轻链多核苷酸序列
<400> 222
gacatcaaga tgacccagtc tccatcttcc atgtatgcat ctctaggaga gagagtcact 60
atcacttgca aggcgagtca ggacattaat agctatttaa gctggttcca gcagaaacca 120
gggaaatctc ctaagaccct gatctatcgt gcaaacagat tggtagatgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccatcagcag cctagagtat 240
gaagatatgg gaatttatta ttgtctacag tatgatgact tgtggacgtt cggtggaggc 300
accaagctgg aaatcaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639
<210> 223
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3E20轻链多肽序列
<400> 223
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asp Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 224
<211> 1707
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3E20重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 224
caggtccaac tgcagcagtc tggggctgaa ctggcaaaac ctggggcctc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggcta cacctttact agctactgga tacactgggt aaaacagagg 120
cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gcagtggtta tgctgagtac 180
aatcagaagt tcaaggtcag ggccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcaactaa gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagaaagt 300
tactatagtt tcgactatac tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
agcgctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420
gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600
acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660
cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccat gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa aggtggtggt ggctcgggat ccggaggctc cggtggcggt 1380
ggcagcaacc caatttgcaa gggatgctta agctgtagca aggacaacgg atgttcacgg 1440
tgccagcaaa agctgttttt cttcctccgg cgggaaggaa tgcggcagta cggcgaatgt 1500
ctccactcct gcccctcggg gtattacgga caccgcgcgc ctgacatgaa ccgatgcgcc 1560
agatgccgga tcgagaactg cgatagctgc cgcagcaagg acgcctgcac taagtgcaaa 1620
gtcggcttct accttcaccg gggcagatgt tttgacgaat gcccggatgg cttcgccccg 1680
ctggaggaga ctatggaatg cgtggag 1707
<210> 225
<211> 569
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3E20重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 225
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Ala Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Val Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Tyr Tyr Ser Phe Asp Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
435 440 445
Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro
450 455 460
Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg
465 470 475 480
Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln
485 490 495
Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg
500 505 510
Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp
515 520 525
Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr
530 535 540
Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro
545 550 555 560
Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu
565
<210> 226
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-6H3轻链多核苷酸序列
<400> 226
gatgttgtga tgacccagac tccactcact ttgtcggtta ccattggaca accagcctcc 60
atctcttgca agtcaagtca gagcctctta gatagtgatg gaaagacata tttgaattgg 120
ttgttacaga ggccaggcca gtctccaaag cgcctaatct atctggtgtc taaactggac 180
tctggagtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tttgggagtt tattattgct ggcaaggtac acattttcct 300
cacacgttcg gctcggggac aaagttggaa ataaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657
<210> 227
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-6H3轻链多肽序列
<400> 227
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 228
<211> 1689
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-6H3重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 228
caggcttatc tacagcagtc tggggctgag ctggtgaggc ctggggcctc agtgaagatg 60
tcctgtaagg cttctggcta cacattttcc cgtttcgata tgcactgggt aaagcagaca 120
cctagacagg gcctggaatg gattggagtt atttatccag gaaatggtga tacttcctac 180
aatcagaagt tcagggacaa ggcctcactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaagac tctgcggtct atttctgtgc aagctcctac 300
tatggtaacc cctggggcca aggcaccact ctcacagtct ccagcgctag caccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc aggagcacct ccgagagcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta 600
gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag 660
tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccacggga ggagcagttc aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc 900
accgttgtgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc atgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaaggtggtg gtggctcggg atccggaggc tccggtggcg gtggcagcaa cccaatttgc 1380
aagggatgct taagctgtag caaggacaac ggatgttcac ggtgccagca aaagctgttt 1440
ttcttcctcc ggcgggaagg aatgcggcag tacggcgaat gtctccactc ctgcccctcg 1500
gggtattacg gacaccgcgc gcctgacatg aaccgatgcg ccagatgccg gatcgagaac 1560
tgcgatagct gccgcagcaa ggacgcctgc actaagtgca aagtcggctt ctaccttcac 1620
cggggcagat gttttgacga atgcccggat ggcttcgccc cgctggagga gactatggaa 1680
tgcgtggag 1689
<210> 229
<211> 563
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-6H3重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 229
Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Phe
20 25 30
Asp Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Arg Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Ser Tyr Tyr Gly Asn Pro Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu
450 455 460
Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe
465 470 475 480
Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His
485 490 495
Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg
500 505 510
Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp
515 520 525
Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys
530 535 540
Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu
545 550 555 560
Cys Val Glu
<210> 230
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7B13轻链多核苷酸序列
<400> 230
gatattgtgc taactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtcagt 60
ctttcctgca gggccagtca aagtattagc aactacctac actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caaggcttct catcaagttt gcttcccagt ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcagtg gcagtggatc agggacggat ttcactctca ctatcaacag tgtggagact 240
gaagattttg gaatgtattt ctgtcaacag agtaacagct ggccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 231
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7B13轻链多肽序列
<400> 231
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 232
<211> 1689
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7B13重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 232
gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag gtggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgtaaga cttctggatt cacattcact gactactaca tgaactgggt gaagcagggt 120
catggaaaga gccttgagtg gattggacgt gttaatccta gcaatgatga tactaggtac 180
aatcagaagt tcaagggaaa ggccacattg acagtagaca agtccctcag cacagcctac 240
atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aaggtggttc 300
tactttgact actggggcca aggcactact ctcacagtct ccagcgctag caccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc aggagcacct ccgagagcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta 600
gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag 660
tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccacggga ggagcagttc aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc 900
accgttgtgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc atgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaaggtggtg gtggctcggg atccggaggc tccggtggcg gtggcagcaa cccaatttgc 1380
aagggatgct taagctgtag caaggacaac ggatgttcac ggtgccagca aaagctgttt 1440
ttcttcctcc ggcgggaagg aatgcggcag tacggcgaat gtctccactc ctgcccctcg 1500
gggtattacg gacaccgcgc gcctgacatg aaccgatgcg ccagatgccg gatcgagaac 1560
tgcgatagct gccgcagcaa ggacgcctgc actaagtgca aagtcggctt ctaccttcac 1620
cggggcagat gttttgacga atgcccggat ggcttcgccc cgctggagga gactatggaa 1680
tgcgtggag 1689
<210> 233
<211> 563
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7B13重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 233
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Gly His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Ser Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Leu Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu
450 455 460
Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe
465 470 475 480
Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His
485 490 495
Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg
500 505 510
Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp
515 520 525
Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys
530 535 540
Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu
545 550 555 560
Cys Val Glu
<210> 234
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7I20轻链多核苷酸序列
<400> 234
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60
atcacatgtc gaacaagtga gaatatttac agttatttag catggtatca gcagaaacag 120
ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaacct tagcaaaagg tgtgccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga agatcaacgg cctgcagcct 240
gaagattttg ggaattatta ctgtcaacat cattatggta ctccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagg tggaaataaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 235
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7I20轻链多肽序列
<400> 235
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Gly Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 236
<211> 1692
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7I20重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 236
gaggtgaagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtacagc ctgggggttc tctgagtctc 60
tcctgtgcag cttctggatt caccttcact gattactaca tgagctgggt ccgccagccc 120
ccagggaagg cacttgagtg gttggctttg attagaaaca aagctaatgg ttacacaaca 180
gagtacagtg catctgtgaa gggtcggttc accatctcca gggataattc ccaaagcatc 240
ctctatcttc aaatgaatgc cctgagagct gaggacagtg ccacttatta ctgtgcagtt 300
acctacgggg cttactgggg ccaagggact ctggtcactg tctctgcagc tagcaccaag 360
ggcccatcgg tcttccccct ggcgccctgc tccaggagca cctccgagag cacagcggcc 420
ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480
gctctgacca gcggcgtgca caccttccca gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540
ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc aacttcggca cccagaccta cacctgcaac 600
gtagatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagacag ttgagcgcaa atgttgtgtc 660
gagtgcccac cgtgcccagc accacctgtg gcaggaccgt cagtcttcct cttcccccca 720
aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 780
gtgagccacg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat 840
aatgccaaga caaagccacg ggaggagcag ttcaacagca cgttccgtgt ggtcagcgtc 900
ctcaccgttg tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 960
aaaggcctcc cagcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaagggca gccccgagaa 1020
ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 1080
acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg 1140
cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccatgctgg actccgacgg ctccttcttc 1200
ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc 1260
tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg 1320
ggtaaaggtg gtggtggctc gggatccgga ggctccggtg gcggtggcag caacccaatt 1380
tgcaagggat gcttaagctg tagcaaggac aacggatgtt cacggtgcca gcaaaagctg 1440
tttttcttcc tccggcggga aggaatgcgg cagtacggcg aatgtctcca ctcctgcccc 1500
tcggggtatt acggacaccg cgcgcctgac atgaaccgat gcgccagatg ccggatcgag 1560
aactgcgata gctgccgcag caaggacgcc tgcactaagt gcaaagtcgg cttctacctt 1620
caccggggca gatgttttga cgaatgcccg gatggcttcg ccccgctgga ggagactatg 1680
gaatgcgtgg ag 1692
<210> 237
<211> 564
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7I20重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 237
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Leu Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ala Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Val Thr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
225 230 235 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
245 250 255
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
260 265 270
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
275 280 285
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val
290 295 300
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
305 310 315 320
Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly
325 330 335
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
340 345 350
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
355 360 365
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
370 375 380
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
385 390 395 400
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
405 410 415
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
420 425 430
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly
435 440 445
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys
450 455 460
Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu
465 470 475 480
Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu
485 490 495
His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met Asn
500 505 510
Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys
515 520 525
Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg
530 535 540
Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met
545 550 555 560
Glu Cys Val Glu
<210> 238
<211> 693
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-8M24轻链多核苷酸序列
<400> 238
gaggttcagc tgcagcagtc tggggctgag cttgtgaggc caggggcctc agtcaagttg 60
tcctgcacag cttctggctt taccattaaa gacgactata ttcactgggt gaagcagggg 120
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gccccgaagt tccaggacaa ggccactata actgcagaca catcctccaa cacagcctac 240
ctgcagctca gcagcctgac atctgaggac actgccgtct attactgtgc tagaagttcc 300
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aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660
ggatccggct ccggacatca tcatcaccat cac 693
<210> 239
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-8M24轻链多肽序列
<400> 239
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Ile Lys Asp Asp
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Gly Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asp Asp Asp Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ser Met Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Ala Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Thr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Ser Gly Ser
210 215 220
Gly His His His His His His
225 230
<210> 240
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-8M24重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 240
gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60
atcacctgtc ggatcagcga gaacatctac agcaacctgg cctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggccc ctaagctgct gatctacgcc gccatcaatc tggccgatgg cgtgccaagc 180
agattttctg gcagcggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatatctag cctgcagcct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcac ttttggggca cccctttcac ctttggccag 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 241
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-8M24重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 241
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ile Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ile Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 242
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9C3轻链多核苷酸序列
<400> 242
gatgttgtgg tgactcaaac tccactctcc ctgcctgtca gctttggaga tcaagtttct 60
atctcttgca ggtctagtca gagtcttgca aacagttatg ggaacaccta tttgtcttgg 120
tacctgcaca agcctggcca gtctccacag ctcctcatct atgggatttc caacagattt 180
tctggggtgc cagacaggtt cagtggcagt ggttcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcacaataa agcctgagga cttgggaatc tattactgct tacaagctac acatcagccg 300
tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657
<210> 243
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9C3轻链多肽序列
<400> 243
Asp Val Val Val Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Phe Gly
1 5 10 15
Asp Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Thr Ile Lys Pro Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala
85 90 95
Thr His Gln Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 244
<211> 1695
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9C3重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 244
caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60
acttgttctt tctctgggtt ttcactgagc acttcttata tgggtgtgag ctggattcgt 120
aagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt tctgggatga tgacaagcgc 180
tataacccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccag caaccaggta 240
ttcctcatga tcaccagtgt ggaaactgca gatactgcca catactactg tgggggtccc 300
tactatccgt ttacttactg gggccaaggg actctggtca ctgtctctgc agctagcacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc 600
aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttgagcg caaatgttgt 660
gtcgagtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc 720
ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg 780
gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 840
cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc 900
gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 960
aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg gcagccccga 1020
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1080
ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1140
gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccatgc tggactccga cggctccttc 1200
ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1260
tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1320
ccgggtaaag gtggtggtgg ctcgggatcc ggaggctccg gtggcggtgg cagcaaccca 1380
atttgcaagg gatgcttaag ctgtagcaag gacaacggat gttcacggtg ccagcaaaag 1440
ctgtttttct tcctccggcg ggaaggaatg cggcagtacg gcgaatgtct ccactcctgc 1500
ccctcggggt attacggaca ccgcgcgcct gacatgaacc gatgcgccag atgccggatc 1560
gagaactgcg atagctgccg cagcaaggac gcctgcacta agtgcaaagt cggcttctac 1620
cttcaccggg gcagatgttt tgacgaatgc ccggatggct tcgccccgct ggaggagact 1680
atggaatgcg tggag 1695
<210> 245
<211> 565
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9C3重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 245
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Tyr Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Lys Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Met Ile Thr Ser Val Glu Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Gly Gly Pro Tyr Tyr Pro Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn
180 185 190
Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser
435 440 445
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly
450 455 460
Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys
465 470 475 480
Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys
485 490 495
Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met
500 505 510
Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser Cys Arg Ser
515 520 525
Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly
530 535 540
Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr
545 550 555 560
Met Glu Cys Val Glu
565
<210> 246
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9M16轻链多核苷酸序列
<400> 246
gacatcaaga tgacccagtc tccatcttcc atgtatgcat ctctaggaga gagagtcact 60
atcacttgca aggcgagtca ggacattaat agctatttaa gctggttcca gcagaaacca 120
gggaaatctc ctaagaccct gatctatcgt gcaaacagat tggcagatgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccatcagcaa cctggagtat 240
gaagatatgg gaatttatta ttgtctacag tatgatgagt ttccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 247
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9M16轻链多肽序列
<400> 247
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 248
<211> 1686
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9M16重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 248
gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgtaagg cttctggata cacattcact gactactaca tgaactgggt gaagcagagt 120
catggaaaga gccttgagtg gattggacgt gttaatccta acaatggtgg ttctaactac 180
aaccagaaat tcaagggcaa ggccacattg acagtagaca aatccctcag cacagcctac 240
atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagtcgaaac 300
ttcgatgtct ggggcgcagg gaccacggtc accgtctcca gcgctagcac caagggccca 360
tcggtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg agcacctccg agagcacagc ggccctgggc 420
tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg 480
accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc 540
agcgtggtga ccgtgccctc cagcaacttc ggcacccaga cctacacctg caacgtagat 600
cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag acagttgagc gcaaatgttg tgtcgagtgc 660
ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 720
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc 780
cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 840
aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac agcacgttcc gtgtggtcag cgtcctcacc 900
gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc 960
ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaaaccaaag ggcagccccg agaaccacag 1020
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 1080
ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 1140
gagaacaact acaagaccac gcctcccatg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 1200
agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1260
atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1320
ggtggtggtg gctcgggatc cggaggctcc ggtggcggtg gcagcaaccc aatttgcaag 1380
ggatgcttaa gctgtagcaa ggacaacgga tgttcacggt gccagcaaaa gctgtttttc 1440
ttcctccggc gggaaggaat gcggcagtac ggcgaatgtc tccactcctg cccctcgggg 1500
tattacggac accgcgcgcc tgacatgaac cgatgcgcca gatgccggat cgagaactgc 1560
gatagctgcc gcagcaagga cgcctgcact aagtgcaaag tcggcttcta ccttcaccgg 1620
ggcagatgtt ttgacgaatg cccggatggc ttcgccccgc tggaggagac tatggaatgc 1680
gtggag 1686
<210> 249
<211> 562
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9M16重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 249
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Ser Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Leu Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Arg Asn Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys
115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
305 310 315 320
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly
435 440 445
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser
450 455 460
Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe
465 470 475 480
Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser
485 490 495
Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys
500 505 510
Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala
515 520 525
Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe
530 535 540
Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys
545 550 555 560
Val Glu
<210> 250
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-10C22轻链多核苷酸序列
<400> 250
gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gggcattgta catagtaatg gaaacatcta tttagaatgg 120
tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttcct 300
cccacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657
<210> 251
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-10C22轻链多肽序列
<400> 251
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Gly Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Ile Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 252
<211> 1704
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-10C22重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多核苷酸序列
<400> 252
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agttatggca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccagacaaga ggctggagtg ggtcgcaagt attagtagtg gtggtagtta tacctactat 180
ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgcccagaa caccctgtac 240
ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgt aagacatgag 300
gagtatggta aatccggatt tgcttactgg ggccaaggga ccctgattac tgtctctgca 360
gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 420
agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 600
tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 660
aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccatgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320
tccctgtctc cgggtaaagg tggtggtggc tcgggatccg gaggctccgg tggcggtggc 1380
agcaacccaa tttgcaaggg atgcttaagc tgtagcaagg acaacggatg ttcacggtgc 1440
cagcaaaagc tgtttttctt cctccggcgg gaaggaatgc ggcagtacgg cgaatgtctc 1500
cactcctgcc cctcggggta ttacggacac cgcgcgcctg acatgaaccg atgcgccaga 1560
tgccggatcg agaactgcga tagctgccgc agcaaggacg cctgcactaa gtgcaaagtc 1620
ggcttctacc ttcaccgggg cagatgtttt gacgaatgcc cggatggctt cgccccgctg 1680
gaggagacta tggaatgcgt ggag 1704
<210> 253
<211> 568
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-10C22重链IgG2、RSPO2（F105R/F109A）
多肽序列
<400> 253
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg His Glu Glu Tyr Gly Lys Ser Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Ile Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val
210 215 220
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Pro Ile
450 455 460
Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys Ser Arg Cys
465 470 475 480
Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met Arg Gln Tyr
485 490 495
Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly His Arg Ala
500 505 510
Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn Cys Asp Ser
515 520 525
Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly Phe Tyr Leu
530 535 540
His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe Ala Pro Leu
545 550 555 560
Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu
565
<210> 254
<211> 1695
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-1N15重链
IgG1 N297G多核苷酸序列
<400> 254
aacccaattt gcaagggatg cttaagctgt agcaaggaca acggatgttc acggtgccag 60
caaaagctgt ttttcttcct ccggcgggaa ggaatgcggc agtacggcga atgtctccac 120
tcctgcccct cggggtatta cggacaccgc gcgcctgaca tgaaccgatg cgccagatgc 180
cggatcgaga actgcgatag ctgccgcagc aaggacgcct gcactaagtg caaagtcggc 240
ttctaccttc accggggcag atgttttgac gaatgcccgg atggcttcgc cccgctggag 300
gagactatgg aatgcgtgga gggtggtggt ggctcgggat ccggaggctc cggtggcggt 360
ggcagcgagg tccagctgca acagtctgga cctgagctgg tgaagcctgg ggcttcagtg 420
aagatgtcct gtaaggcttc tggatacaca ttcactgact actacatgaa ctgggtgaag 480
cagagtcatg gagagagcct tgagtggatt ggacgtgtta ttcctagcaa tggtggtact 540
aactacaacc agaagttcaa gggcaaggcc acattgacag tagacaaatc cctcaccaca 600
gcctacatgc agctcaacag cctgacatct gaagactctg cggtctattt ctgtgcaaga 660
gggatggact actggggtcc aggaacctca gtcaccgtct ccagcgctag caccaagggc 720
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 780
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 840
ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 900
agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 960
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 1020
actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc 1080
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 1140
gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 1200
gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acggcagcac gtaccgtgtg 1260
gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 1320
gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1380
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1440
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1500
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1560
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1620
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1680
ctgtctccgg gtaaa 1695
<210> 255
<211> 565
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-1N15重链
IgG1 N297G多肽序列
<400> 255
Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys
1 5 10 15
Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met
20 25 30
Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly
35 40 45
His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn
50 55 60
Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly
65 70 75 80
Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe
85 90 95
Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln
115 120 125
Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys
130 135 140
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn Trp Val Lys
145 150 155 160
Gln Ser His Gly Glu Ser Leu Glu Trp Ile Gly Arg Val Ile Pro Ser
165 170 175
Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Leu Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu
195 200 205
Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Met Asp Tyr
210 215 220
Trp Gly Pro Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
245 250 255
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
260 265 270
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
275 280 285
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
290 295 300
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
305 310 315 320
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
325 330 335
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
340 345 350
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
355 360 365
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
370 375 380
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
385 390 395 400
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser
405 410 415
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
420 425 430
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
435 440 445
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
450 455 460
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
465 470 475 480
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
485 490 495
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
500 505 510
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
515 520 525
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
530 535 540
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
545 550 555 560
Leu Ser Pro Gly Lys
565
<210> 256
<211> 1719
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-1P13重链
IgG1 N297G多核苷酸序列
<400> 256
aacccaattt gcaagggatg cttaagctgt agcaaggaca acggatgttc acggtgccag 60
caaaagctgt ttttcttcct ccggcgggaa ggaatgcggc agtacggcga atgtctccac 120
tcctgcccct cggggtatta cggacaccgc gcgcctgaca tgaaccgatg cgccagatgc 180
cggatcgaga actgcgatag ctgccgcagc aaggacgcct gcactaagtg caaagtcggc 240
ttctaccttc accggggcag atgttttgac gaatgcccgg atggcttcgc cccgctggag 300
gagactatgg aatgcgtgga gggtggtggt ggctcgggat ccggaggctc cggtggcggt 360
ggcagcgagg ttcaactgca gcagtctgga cctgaactgg tgaagcctgg ggcttcagtg 420
aagatatcct gcaaggcttc tggttactca tttactgact actttatgaa ctgggtgaag 480
cagagccatg gaaagagcct tgagtggatt ggacgtttta atcctttcaa tggtcaaact 540
ttctacaatc aggagttcaa gggcaaggcc acattaactg tagacaaatc ctctagcacc 600
gcccacatgg agctccggag cctgacatct gaggactctg cagtctatta ttgtgcaaga 660
agaggaaggt acgacgttta ctatgttctg gactactggg gtcaaggaac ctcagtcacc 720
gtctccagcg ctagcaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 780
acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 840
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 900
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 960
acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaaa 1020
gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 1080
ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 1140
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 1200
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 1260
cagtacggca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 1320
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1380
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1440
cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1500
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1560
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1620
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1680
cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaa 1719
<210> 257
<211> 573
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-1P13重链
IgG1 N297G多肽序列
<400> 257
Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys
1 5 10 15
Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met
20 25 30
Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly
35 40 45
His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn
50 55 60
Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly
65 70 75 80
Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe
85 90 95
Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln
115 120 125
Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys
130 135 140
Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Phe Met Asn Trp Val Lys
145 150 155 160
Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Arg Phe Asn Pro Phe
165 170 175
Asn Gly Gln Thr Phe Tyr Asn Gln Glu Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala His Met Glu Leu Arg Ser Leu
195 200 205
Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Arg Tyr
210 215 220
Asp Val Tyr Tyr Val Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
225 230 235 240
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
245 250 255
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
260 265 270
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
275 280 285
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
290 295 300
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
305 310 315 320
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
325 330 335
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
340 345 350
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
355 360 365
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
370 375 380
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
385 390 395 400
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
405 410 415
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
420 425 430
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
435 440 445
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
450 455 460
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
465 470 475 480
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
485 490 495
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
500 505 510
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
515 520 525
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
530 535 540
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
545 550 555 560
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
565 570
<210> 258
<211> 1728
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-2I22重链
IgG1 N297G多核苷酸序列
<400> 258
aacccaattt gcaagggatg cttaagctgt agcaaggaca acggatgttc acggtgccag 60
caaaagctgt ttttcttcct ccggcgggaa ggaatgcggc agtacggcga atgtctccac 120
tcctgcccct cggggtatta cggacaccgc gcgcctgaca tgaaccgatg cgccagatgc 180
cggatcgaga actgcgatag ctgccgcagc aaggacgcct gcactaagtg caaagtcggc 240
ttctaccttc accggggcag atgttttgac gaatgcccgg atggcttcgc cccgctggag 300
gagactatgg aatgcgtgga gggtggtggt ggctcgggat ccggaggctc cggtggcggt 360
ggcagcgagg tccaactcgt agaatcaggt ggtggtttgg tcaaaccagg tggctctcgg 420
aagttgtcct gtgctgcctc tggatttaca ttcagtgact acggtatgca ctgggtccgt 480
caggctccag agaaggggct ggagtgggtt gcctacatta gtagtggcag tagtaccatc 540
tactatgcag acacagtgaa gggccgattc accatctcca gagacaatgc caagaacacc 600
ctgttcctac aaatgaccag tctaaggtct gaggacacag ccatgtatta ctgttcaagg 660
aagggagggt ttggtgacta cgagaaaagc tatgctatgg actactgggg tcaaggaacc 720
tcagtcaccg tctccagcgc tagcaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc 780
tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 840
gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg 900
gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc 960
agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg 1020
gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca 1080
cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 1140
atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 1200
gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 1260
cgggaggagc agtacggcag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1320
gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 1380
atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 1440
cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 1500
ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 1560
aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctacag caagctcacc 1620
gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1680
ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaa 1728
<210> 259
<211> 576
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-2I22重链
IgG1 N297G多肽序列
<400> 259
Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys
1 5 10 15
Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met
20 25 30
Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly
35 40 45
His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn
50 55 60
Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly
65 70 75 80
Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe
85 90 95
Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Arg Lys Leu Ser Cys
130 135 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Met His Trp Val Arg
145 150 155 160
Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Gly
165 170 175
Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
180 185 190
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln Met Thr Ser Leu
195 200 205
Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ser Arg Lys Gly Gly Phe
210 215 220
Gly Asp Tyr Glu Lys Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
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Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
260 265 270
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275 280 285
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435 440 445
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Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
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<210> 260
<211> 1719
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-2I22重链
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<210> 261
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-2I22重链
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-3A24重链
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<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-3E20重链
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aacccaattt gcaagggatg cttaagctgt agcaaggaca acggatgttc acggtgccag 60
caaaagctgt ttttcttcct ccggcgggaa ggaatgcggc agtacggcga atgtctccac 120
tcctgcccct cggggtatta cggacaccgc gcgcctgaca tgaaccgatg cgccagatgc 180
cggatcgaga actgcgatag ctgccgcagc aaggacgcct gcactaagtg caaagtcggc 240
ttctaccttc accggggcag atgttttgac gaatgcccgg atggcttcgc cccgctggag 300
gagactatgg aatgcgtgga gggtggtggt ggctcgggat ccggaggctc cggtggcggt 360
ggcagcgagg tccagctgca acaatctgga cctgaggtgg tgaagcctgg ggcttcagtg 420
aagatgtcct gtaagacttc tggattcaca ttcactgact actacatgaa ctgggtgaag 480
cagggtcatg gaaagagcct tgagtggatt ggacgtgtta atcctagcaa tgatgatact 540
aggtacaatc agaagttcaa gggaaaggcc acattgacag tagacaagtc cctcagcaca 600
gcctacatgc agctcaacag cctgacatct gaggactctg cggtctatta ctgtacaagg 660
tggttctact ttgactactg gggccaaggc actactctca cagtctccag cgctagcacc 720
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 780
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 840
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 900
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 960
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 1020
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 1080
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 1140
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 1200
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacgg cagcacgtac 1260
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1320
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1380
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1440
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1500
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1560
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1620
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1680
ctctccctgt ctccgggtaa a 1701
<210> 267
<211> 567
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-7B13重链
IgG1 N297G多肽序列
<400> 267
Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys
1 5 10 15
Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met
20 25 30
Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly
35 40 45
His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn
50 55 60
Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly
65 70 75 80
Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe
85 90 95
Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln
115 120 125
Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys
130 135 140
Lys Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn Trp Val Lys
145 150 155 160
Gln Gly His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Arg Val Asn Pro Ser
165 170 175
Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Leu Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu
195 200 205
Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Trp Phe Tyr Phe
210 215 220
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
225 230 235 240
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
245 250 255
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
260 265 270
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
275 280 285
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
290 295 300
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
305 310 315 320
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
325 330 335
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
340 345 350
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
355 360 365
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
370 375 380
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
385 390 395 400
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
405 410 415
Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
420 425 430
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
435 440 445
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
450 455 460
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
465 470 475 480
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
485 490 495
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
500 505 510
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
515 520 525
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
530 535 540
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
545 550 555 560
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
565
<210> 268
<211> 708
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-8M24重链
IgG1 N297G多核苷酸序列
<400> 268
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggcgaggc ctggggcttc agtgaagctg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcaca aattatggta taaactgggt gaagcagaga 120
actggacagg gccttgagtg gattggagag atttttccta gaagtgataa tactttctac 180
aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgcagaca aatcctccac cacagcgtac 240
atggagctcc gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagaaaaggc 300
agggactacg gtactagcca ctactttgac tactggggtc aaggcaccac tctcacagtc 360
tccagcgcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 660
gagcccaaat cttgtggatc cggctccgga catcatcatc accatcac 708
<210> 269
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-8M24重链
IgG1 N297G多肽序列
<400> 269
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Phe Pro Arg Ser Asp Asn Thr Phe Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Gly Arg Asp Tyr Gly Thr Ser His Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Gly Ser Gly Ser Gly His His His His His His
225 230 235
<210> 270
<211> 1698
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-9M16重链
IgG1 N297G多核苷酸序列
<400> 270
aacccaattt gcaagggatg cttaagctgt agcaaggaca acggatgttc acggtgccag 60
caaaagctgt ttttcttcct ccggcgggaa ggaatgcggc agtacggcga atgtctccac 120
tcctgcccct cggggtatta cggacaccgc gcgcctgaca tgaaccgatg cgccagatgc 180
cggatcgaga actgcgatag ctgccgcagc aaggacgcct gcactaagtg caaagtcggc 240
ttctaccttc accggggcag atgttttgac gaatgcccgg atggcttcgc cccgctggag 300
gagactatgg aatgcgtgga gggtggtggt ggctcgggat ccggaggctc cggtggcggt 360
ggcagcgagg tccagctgca acagtctgga cctgagctgg tgaagcctgg ggcttcagtg 420
aagatgtcct gtaaggcttc tggatacaca ttcactgact actacatgaa ctgggtgaag 480
cagagtcatg gaaagagcct tgagtggatt ggacgtgtta atcctaacaa tggtggttct 540
aactacaacc agaaattcaa gggcaaggcc acattgacag tagacaaatc cctcagcaca 600
gcctacatgc agctcaacag cctgacatct gaggactctg cggtctatta ctgtgcaagt 660
cgaaacttcg atgtctgggg cgcagggacc acggtcaccg tctccagcgc tagcaccaag 720
ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 780
ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 840
gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 900
ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 960
gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 1020
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 1080
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 1140
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 1200
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacggcag cacgtaccgt 1260
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1320
aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1380
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1440
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1500
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1560
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1620
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1680
tccctgtctc cgggtaaa 1698
<210> 271
<211> 566
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的RSPO2（F105R/F109A）、LP1-9M16重链
IgG1 N297G多肽序列
<400> 271
Asn Pro Ile Cys Lys Gly Cys Leu Ser Cys Ser Lys Asp Asn Gly Cys
1 5 10 15
Ser Arg Cys Gln Gln Lys Leu Phe Phe Phe Leu Arg Arg Glu Gly Met
20 25 30
Arg Gln Tyr Gly Glu Cys Leu His Ser Cys Pro Ser Gly Tyr Tyr Gly
35 40 45
His Arg Ala Pro Asp Met Asn Arg Cys Ala Arg Cys Arg Ile Glu Asn
50 55 60
Cys Asp Ser Cys Arg Ser Lys Asp Ala Cys Thr Lys Cys Lys Val Gly
65 70 75 80
Phe Tyr Leu His Arg Gly Arg Cys Phe Asp Glu Cys Pro Asp Gly Phe
85 90 95
Ala Pro Leu Glu Glu Thr Met Glu Cys Val Glu Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln
115 120 125
Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys
130 135 140
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn Trp Val Lys
145 150 155 160
Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Arg Val Asn Pro Asn
165 170 175
Asn Gly Gly Ser Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Leu Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu
195 200 205
Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Arg Asn Phe Asp
210 215 220
Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
245 250 255
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
260 265 270
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
275 280 285
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
290 295 300
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
305 310 315 320
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
325 330 335
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
340 345 350
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
355 360 365
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
370 375 380
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
385 390 395 400
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly
405 410 415
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
420 425 430
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
435 440 445
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
450 455 460
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
465 470 475 480
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
485 490 495
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
500 505 510
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
515 520 525
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
530 535 540
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
545 550 555 560
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
565
<210> 272
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗ASGR1重链多核苷酸序列
<400> 272
gaagtgcagc tgctggaatc cgggggcgga ctggtgcaac ccgggggatc cctcagactg 60
tcctgtgccg catcgggttt cactttctcc tcctacgcga tgtcatgggt cagacaggcc 120
cctggaaaag gcctcgaatg ggtgtcggct atctccggat cggggggatc tacttactac 180
gccgactccg tgaagggccg gttcactatc tcgagggaca actccaagaa taccctgtac 240
ttgcaaatga actccctgcg cgccgaggat accgcggtgt attactgcgc caaggacttc 300
agctcacgcc ggtggtacct tgagtactgg ggacagggaa cccttgtcac cgtgtcgagt 360
gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 420
agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 600
tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 660
aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccatgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320
tccctgtctc cgggtaaa 1338
<210> 273
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的抗ASGR1重链多肽序列
<400> 273
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Phe Ser Ser Arg Arg Trp Tyr Leu Glu Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val
210 215 220
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 274
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1F8 VL多肽序列
<400> 274
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Tyr Tyr Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 275
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1F8 VH多肽序列
<400> 275
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Ala Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Ile Gly Val Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Val Asp Tyr Tyr Asp Gly Ile Ser Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 276
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1N15 VL多肽序列
<400> 276
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser His
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Ile Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Pro Glu Tyr
65 70 75 80
Glu Glu Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 277
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1N15 VH多肽序列
<400> 277
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Glu Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Val Ile Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Leu Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Met Asp Tyr Trp Gly Pro Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 278
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P13 VL多肽序列
<400> 278
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Gln Thr Val Ile Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Tyr Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Ser Thr Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 279
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P13 VH多肽序列
<400> 279
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Phe Asn Pro Phe Asn Gly Gln Thr Phe Tyr Asn Gln Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala His
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Arg Tyr Asp Val Tyr Tyr Val Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 280
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P5 VL多肽序列
<400> 280
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 281
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-1P5 VH多肽序列
<400> 281
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Leu Thr Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Phe Pro Ala Thr Gly Ile Thr Tyr Tyr Ser Glu Met Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Ala Tyr His Ser Asn Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 282
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2E12 VL多肽序列
<400> 282
Asp Val Val Val Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Phe Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Thr Ile Lys Pro Glu Asp Leu Gly Met Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly
85 90 95
Thr His Gln Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 283
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2E12 VH多肽序列
<400> 283
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Ser Ile Gly Tyr Asp Asp Thr Asn His Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Asp Tyr Pro Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 284
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I13 VL多肽序列
<400> 284
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Ile Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 285
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I13 VH多肽序列
<400> 285
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Lys Gly Gly Phe Gly Asp Tyr Glu Lys Ser Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 286
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I22 VL多肽序列
<400> 286
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Thr Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asp Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Thr Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 287
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-2I22 VH多肽序列
<400> 287
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Phe Asn Pro Phe Asn Gly Gln Thr Phe Tyr Asn Gln Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asp Thr Ala His
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Arg Tyr Asp Val Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 288
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3A24 VL多肽序列
<400> 288
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Asn
20 25 30
Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ser Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 289
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3A24 VH多肽序列
<400> 289
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Val Ile Pro Ser Asn Gly Gly Ser Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Leu Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Leu Gly Arg Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ala
<210> 290
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3E20 VL多肽序列
<400> 290
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asp Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 291
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-3E20 VH多肽序列
<400> 291
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Ala Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Val Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Tyr Tyr Ser Phe Asp Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 292
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-6H3 VL多肽序列
<400> 292
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro His Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 293
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-6H3 VH多肽序列
<400> 293
Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Phe
20 25 30
Asp Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Arg Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Asp Lys Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Ser Tyr Tyr Gly Asn Pro Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 294
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7B13 VL多肽序列
<400> 294
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 295
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7B13 VH多肽序列
<400> 295
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Gly His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Ser Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Leu Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 296
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7I20 VL多肽序列
<400> 296
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Gly Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 297
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7I20 VH多肽序列
<400> 297
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Leu Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ala Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Val Thr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ala
115
<210> 298
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-8M24 VL多肽序列
<400> 298
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ile Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro His Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Ile Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 299
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-7I20 VH多肽序列
<400> 299
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Phe Pro Arg Ser Asp Asn Thr Phe Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Gly Arg Asp Tyr Gly Thr Ser His Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 300
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9C3 VL多肽序列
<400> 300
Asp Val Val Val Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Phe Gly
1 5 10 15
Asp Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser
20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Thr Ile Lys Pro Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala
85 90 95
Thr His Gln Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 301
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9C3 VH多肽序列
<400> 301
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Tyr Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Lys Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Met Ile Thr Ser Val Glu Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Gly Gly Pro Tyr Tyr Pro Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 302
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9M16 VL多肽序列
<400> 302
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 303
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-9M16 VH多肽序列
<400> 303
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Ser Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Leu Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Arg Asn Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 304
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-10C22 VL多肽序列
<400> 304
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Gly Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Ile Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 305
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的LP1-10C22多肽序列
<400> 305
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg His Glu Glu Tyr Gly Lys Ser Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Ile Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 306
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 306
Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala Trp Tyr
1 5 10
<210> 307
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 307
Asp Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 308
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 308
Phe Ala Phe Ser Asn Phe Ala Met Ile
1 5
<210> 309
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 309
Phe Ser Phe Ser Asn Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 310
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 310
Phe Thr Phe Asn Asn Phe Gly Met Ser
1 5
<210> 311
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 311
Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met Gly
1 5
<210> 312
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 312
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His
1 5
<210> 313
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 313
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp
1 5
<210> 314
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 314
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
1 5
<210> 315
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 315
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
1 5
<210> 316
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 316
Gly Thr Phe Ser Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 317
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 317
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Asp Ile Asn
1 5
<210> 318
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 318
Gly Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 319
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 319
Gly Thr Phe Ser Asn Tyr Ser Leu Ser
1 5
<210> 320
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 320
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 321
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 321
Gly Thr Phe Ser Thr Ser Gly Ile Thr
1 5
<210> 322
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 322
Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 323
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 323
Tyr Arg Phe Thr Ser Tyr Tyr Leu His
1 5
<210> 324
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 324
Tyr Thr Phe Ile Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 325
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 325
Tyr Thr Phe Arg Arg Tyr Pro Met His
1 5
<210> 326
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 326
Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr Phe Met His
1 5
<210> 327
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 327
Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 328
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 328
Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 329
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 329
Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 330
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 330
Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Ile Ser
1 5
<210> 331
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 331
Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Lys Met His
1 5
<210> 332
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 332
Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 333
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 333
Tyr Thr Phe Thr Arg His Tyr Met His
1 5
<210> 334
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 334
Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 335
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 335
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala Met His
1 5
<210> 336
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 336
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asp Ile Asn
1 5
<210> 337
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 337
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 338
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 338
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Leu His
1 5
<210> 339
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 339
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 340
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 340
Asp Pro Ala Asn Gly Lys
1 5
<210> 341
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 341
Asp Pro Glu Asn Gly Asp
1 5
<210> 342
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 342
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Asp Ala Ala Thr Tyr Ala
1 5 10
<210> 343
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 343
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Asp Ala Thr Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 344
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 344
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 345
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 345
Gly Ile Ile Asn Pro Asn Gly Gly Arg Thr Thr Tyr Ala
1 5 10
<210> 346
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 346
Gly Ile Ile Asn Pro Arg Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 347
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 347
Gly Ile Ile Asn Pro Arg Arg Gly Ser Thr Arg Tyr Ala
1 5 10
<210> 348
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 348
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Ala Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 349
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 349
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 350
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 350
Gly Lys Ile Asn Pro Ser Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 351
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 351
Gly Arg Ile Lys Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala
1 5 10
<210> 352
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 352
Gly Arg Ile Ser Pro Asn Arg Gly Gly Thr Lys Tyr Ala
1 5 10
<210> 353
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 353
Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr His Asp Tyr Ala
1 5 10
<210> 354
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 354
Gly Val Ile Asn Pro Gly Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Ala
1 5 10
<210> 355
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 355
Gly Trp Ile Asn Ala Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser
1 5 10
<210> 356
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 356
Gly Trp Ile Asn Pro His Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 357
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 357
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 358
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 358
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 359
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 359
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Arg Tyr Ala
1 5 10
<210> 360
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 360
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ala
1 5 10
<210> 361
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 361
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Lys Ser Ala
1 5 10
<210> 362
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 362
Gly Trp Ile Ser Ala Asp Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 363
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 363
Gly Trp Ile Ser Pro Asn Ser Gly Ala Thr Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 364
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 364
Gly Trp Met Asn Pro Lys Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 365
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 365
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly His Ala Gly Ser Ala
1 5 10
<210> 366
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 366
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala
1 5 10
<210> 367
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 367
Gly Trp Met Asn Pro Asn Thr Gly Gly Ile Lys Tyr Ser
1 5 10
<210> 368
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 368
Gly Trp Val Asn Pro Lys Asn Gly His Thr Gly Tyr Ala
1 5 10
<210> 369
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 369
Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Ile
1 5
<210> 370
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 370
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 371
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 371
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 372
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 372
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 373
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 373
Ser Gly Ile Ser Ala Ser Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 374
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 374
Ala Ile Tyr Tyr Leu Glu Ala Phe Asp Val
1 5 10
<210> 375
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 375
Cys Ala Lys Asp Leu Glu His Thr Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Ala Gly
1 5 10 15
Phe Asp Tyr Trp
20
<210> 376
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 376
Cys Ala Lys Asp Ser Gly Tyr Cys Ser Ser Thr Ser Cys Tyr Asp Gly
1 5 10 15
Gly Tyr Phe Asp Leu Trp
20
<210> 377
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 377
Cys Ala Lys Ser Arg Ala Leu Lys Gly Ser Tyr Thr Ser Trp
1 5 10
<210> 378
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 378
Cys Ala Arg Asp Gly Leu Gly Val Asp Ala Phe Asp Ile Trp
1 5 10
<210> 379
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 379
Cys Ala Arg Asp Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
1 5 10
<210> 380
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 380
Cys Ala Arg Asp Lys Val Gly Ala Ile Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 381
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 381
Cys Ala Arg Asp Leu Met Val Arg Gly Gly Pro Pro Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 382
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 382
Cys Ala Arg Asp Pro Val Arg Gly Ile Ser Ala Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 383
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 383
Cys Ala Arg Asp Gln Gly His Asp Tyr Gly Asp Tyr Glu Ile Asp Tyr
1 5 10 15
Trp
<210> 384
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 384
Cys Ala Arg Asp Gln Lys Gly Lys Ser Ser Ser Trp Phe Arg Phe Asp
1 5 10 15
Pro Trp
<210> 385
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 385
Cys Ala Arg Asp Ser Trp Leu Arg Gly Ala Trp Gly Tyr Trp
1 5 10
<210> 386
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 386
Cys Ala Arg Glu Asp Tyr Asn Trp Asn Asp Gly Trp Phe Asp Pro Trp
1 5 10 15
<210> 387
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 387
Cys Ala Arg Glu Thr Arg His Gly Ser Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 388
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 388
Cys Ala Arg Gly Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
20
<210> 389
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 389
Cys Ala Arg Gly Gly Arg Ser Tyr Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp
1 5 10 15
<210> 390
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 390
Cys Ala Arg Gly Gly Arg Thr Thr Val Thr Thr Met Ala Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 391
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 391
Cys Ala Arg Gly Gly Ser Gly Trp Leu Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 392
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 392
Cys Ala Arg Gly Met Tyr Ser Ser Ser Trp Leu Arg Tyr Trp
1 5 10
<210> 393
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 393
Cys Ala Arg Gly Arg Gln Gly Val Trp Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 394
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 394
Cys Ala Arg Gly Arg Arg Ser Gly Leu Ser Pro Pro Ala Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 395
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 395
Cys Ala Arg Gly Arg Arg Ser Arg Gly Ser Ser Ser Leu Gly Tyr Tyr
1 5 10 15
Tyr Tyr Met Asp Val Trp
20
<210> 396
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 396
Cys Ala Arg Gly Arg Ser Gly Asn Trp Lys Phe Trp
1 5 10
<210> 397
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 397
Cys Ala Arg Gly Arg Val Val Arg Gly Val Ile Ile Ser Tyr Gly Met
1 5 10 15
Asp Val Trp
<210> 398
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 398
Cys Ala Arg Gly Ser Leu Gly Tyr Phe Asp Leu Trp
1 5 10
<210> 399
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 399
Cys Ala Arg Gly Ser Asn Gly Met Asp Val Trp
1 5 10
<210> 400
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 400
Cys Ala Arg Leu Arg Ala Asn Tyr Gly Met Asp Val Trp
1 5 10
<210> 401
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 401
Cys Ala Arg Arg Gln Tyr Ser Gly Tyr Asp Thr His Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 402
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 402
Cys Ala Arg Arg Arg Asp Gly Tyr Asn Trp Gly Tyr Trp
1 5 10
<210> 403
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 403
Cys Ala Arg Arg Thr Ser Ser Phe Ser Leu Trp
1 5 10
<210> 404
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 404
Cys Ala Arg Ser Phe Gly Val Ala Gly Thr Leu Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 405
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 405
Cys Ala Arg Ser Gly Ala Gly Met Trp Tyr Phe Asp Leu Trp
1 5 10
<210> 406
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 406
Cys Ala Arg Val Leu Arg Gly Ser Leu Gly Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 407
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 407
Cys Ala Arg Val Val Arg Ala Val Asp Ala Phe Asp Ile Trp
1 5 10
<210> 408
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 408
Cys Ala Arg Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Trp Pro Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 409
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 409
Cys Thr Arg Ala Arg Gly Gln Arg Ser Gly Tyr Ser Tyr Phe Asp Leu
1 5 10 15
Trp
<210> 410
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 410
Cys Val Gly Gly Arg Ser Gly Trp Ile Trp Tyr Phe Asp Leu Trp
1 5 10 15
<210> 411
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 411
Gly Gly Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr
1 5
<210> 412
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 412
Ser Arg Thr Thr Ala Leu Asp Tyr
1 5
<210> 413
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 413
Lys Ala Ser Gln Ser Val Arg Pro Ala Val Ala
1 5 10
<210> 414
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 414
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 415
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 415
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Arg Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 416
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 416
Arg Ala Gly Gln Ser Ile Ser Arg Phe Leu Asn
1 5 10
<210> 417
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 417
Arg Ala Ser Glu Asn Ile His Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 418
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 418
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His
1 5 10 15
<210> 419
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 419
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Ser Leu Asn
1 5 10
<210> 420
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 420
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Arg Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 421
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 421
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Arg Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 422
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 422
Arg Ala Ser Gln Phe Ile Ser Thr Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 423
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 423
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Asn Leu Asn
1 5 10
<210> 424
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 424
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 425
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 425
Arg Ala Ser Gln Asn Ile Arg Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 426
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 426
Arg Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Asp Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 427
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 427
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 428
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 428
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 429
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 429
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 430
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 430
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 431
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 431
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 432
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 432
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 433
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 433
Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 434
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 434
Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Ser Arg Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 435
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 435
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ala Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 436
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 436
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 437
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 437
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 438
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 438
Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Gly Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 439
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 439
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Arg Thr Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 440
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 440
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 441
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 441
Arg Val Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 442
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 442
Ser Gly Asp Ser Leu Gly Ser Tyr Tyr Val His
1 5 10
<210> 443
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 443
Thr Ser Ser Gln Ser Val Leu His Ser Ser Asn Lys Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 444
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 444
Ala Ala Ser Ala Arg Ala Ala
1 5
<210> 445
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 445
Ala Ala Ser Ser Leu His Ser
1 5
<210> 446
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 446
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg
1 5
<210> 447
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 447
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 448
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 448
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 449
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 449
Ala Ala Ser Thr Val Glu Ser
1 5
<210> 450
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 450
Ala Thr Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 451
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 451
Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr
1 5
<210> 452
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 452
Asp Ala Ser Ser Leu Glu Thr
1 5
<210> 453
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 453
Asp Ala Ser Ser Leu Pro Ser
1 5
<210> 454
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 454
Asp Ala Ser Ser Leu Gln Arg
1 5
<210> 455
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 455
Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 456
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 456
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 457
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 457
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 458
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 458
Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 459
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 459
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 460
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 460
Leu Ala Ser Asn Arg His Thr
1 5
<210> 461
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 461
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
<210> 462
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 462
Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser
1 5
<210> 463
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 463
Arg Asn Lys Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 464
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 464
Trp Ala Ser Thr Arg Ala Ser
1 5
<210> 465
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 465
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 466
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 466
Cys His Gln Tyr Phe Ser Pro Pro Met Thr Phe
1 5 10
<210> 467
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 467
Cys Leu Gln Asp Tyr Asp Tyr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 468
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 468
Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 469
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 469
Cys Met Gln Gly Thr His Trp Pro Arg Thr Phe
1 5 10
<210> 470
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 470
Cys Met Gln Gly Thr His Trp Pro Tyr Ala Phe
1 5 10
<210> 471
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 471
Cys Met Gln Ser Leu Glu Ala Pro Leu Ala Phe
1 5 10
<210> 472
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 472
Cys Met Gln Thr Leu His Thr Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 473
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 473
Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 474
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 474
Cys Gln Gln Ala Asn Thr Phe Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 475
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 475
Cys Gln Gln Ala Tyr Ser Phe Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 476
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 476
Cys Gln Gln Gly Ser Ser Phe Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 477
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 477
Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 478
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 478
Cys Gln Gln Ser Phe Ser Thr Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 479
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 479
Cys Gln Gln Ser Tyr Gly Ala Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 480
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 480
Cys Gln Gln Ser Tyr Arg Ser Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 481
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 481
Cys Gln Gln Ser Tyr Arg Thr Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 482
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 482
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Pro Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 483
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 483
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Pro Pro His Thr Phe
1 5 10
<210> 484
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 484
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Arg Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 485
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 485
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ser Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 486
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 486
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 487
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 487
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 488
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 488
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 489
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 489
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 490
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 490
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Ser Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 491
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 491
Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 492
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 492
Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 493
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 493
Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 494
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 494
Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Arg Thr Phe
1 5 10
<210> 495
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 495
Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Arg Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 496
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 496
Cys Gln Gln Tyr His Ser Thr Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 497
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 497
Cys Gln Gln Tyr Tyr Arg Ser Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 498
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 498
Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Asp Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 499
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 499
Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 500
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 500
Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 501
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 501
Leu Gln His Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 502
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 502
Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Leu Thr
1 5
<210> 503
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 503
Gln Thr Tyr Asp Trp Met Tyr Ser Ser Arg Val
1 5 10
<210> 504
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 504
Ala Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn
1 5 10
<210> 505
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 505
Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn
1 5 10
<210> 506
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 506
Phe Ser Leu Ser Thr Ser Tyr Met Gly Val Ser
1 5 10
<210> 507
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 507
Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Met His
1 5
<210> 508
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 508
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 509
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 509
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 510
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 510
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser
1 5
<210> 511
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 511
Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Thr Met Ser
1 5
<210> 512
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 512
Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 513
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 513
Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 514
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 514
Phe Thr Val Ser Ser Asn Tyr Met Ser
1 5
<210> 515
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 515
Gly Phe Ser Phe Asn Thr Tyr
1 5
<210> 516
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 516
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
1 5
<210> 517
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 517
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 518
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 518
His Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Gly
1 5
<210> 519
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 519
Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Phe Met Asn
1 5
<210> 520
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 520
Tyr Ser Phe Thr Gly Asn Tyr Met His
1 5
<210> 521
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 521
Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Met Asn
1 5
<210> 522
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 522
Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn
1 5 10
<210> 523
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 523
Tyr Thr Phe Leu Thr Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 524
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 524
Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Val His
1 5
<210> 525
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 525
Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 526
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 526
Tyr Thr Phe Ser Arg Phe Asp Met His
1 5
<210> 527
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 527
Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met His
1 5
<210> 528
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 528
Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Ile Asn
1 5
<210> 529
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 529
Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 530
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 530
Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr His Met His
1 5
<210> 531
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 531
Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 532
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 532
Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Ile Asn
1 5
<210> 533
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 533
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Ile Ser
1 5
<210> 534
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 534
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile His
1 5
<210> 535
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH1序列
<400> 535
Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 536
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 536
Ala Ala Ile Ser Gln Ser Gly Tyr Val Arg Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 537
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 537
Ala His Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn
1 5 10
<210> 538
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 538
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 539
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 539
Ala Leu Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser
1 5 10 15
<210> 540
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 540
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro
1 5 10
<210> 541
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 541
Ala Thr Ile Ser Ser Ile Gly Val Asn Thr Tyr Tyr Pro
1 5 10
<210> 542
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 542
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 543
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 543
Gly Glu Ile Phe Pro Arg Ser Asp Asn Thr Phe Tyr Asn
1 5 10
<210> 544
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 544
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 545
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 545
Gly Gly Ile Ile Pro Met Phe Gly Thr Val Lys Tyr Ala
1 5 10
<210> 546
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 546
Gly Gly Ile Ile Pro Val Phe Gly Ala Pro Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 547
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 547
Gly Ile Ile Asn Pro Arg Asn Gly Arg Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 548
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 548
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Gly Thr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 549
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 549
Gly Gln Ile Phe Pro Ala Thr Gly Ile Thr Tyr Tyr Ser
1 5 10
<210> 550
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 550
Gly Arg Phe Asn Pro Phe Asn Gly Gln Thr Phe Tyr Asn
1 5 10
<210> 551
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 551
Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
1 5 10
<210> 552
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 552
Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Tyr Asp Tyr Ala
1 5 10
<210> 553
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 553
Gly Arg Val Ile Pro Ser Asn Gly Gly Ser Asn Tyr Asn
1 5 10
<210> 554
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 554
Gly Arg Val Ile Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn
1 5 10
<210> 555
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 555
Gly Arg Val Asn Pro Asn Asn Gly Gly Ser Asn Tyr Asn
1 5 10
<210> 556
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 556
Gly Arg Val Asn Pro Ser Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Asn
1 5 10
<210> 557
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 557
Gly Ser Ile Gly Tyr Asp Asp Thr Asn His Tyr Asn
1 5 10
<210> 558
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 558
Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn
1 5 10
<210> 559
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 559
Gly Trp Ile Asn Pro Lys Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala
1 5 10
<210> 560
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 560
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 561
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 561
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala
1 5 10
<210> 562
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 562
Gly Trp Met Asn Pro Asn Thr Gly Asn Thr Ala Tyr Ala
1 5 10
<210> 563
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 563
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Ala Glu Tyr Asn
1 5 10
<210> 564
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 564
Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala
1 5
<210> 565
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 565
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 566
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 566
Ser Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 567
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 567
Ser Ser Gly Gly Asp Tyr
1 5
<210> 568
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 568
Ser Tyr Ile Ser Ser Tyr Asn Ser His Thr Asn Asp Ala
1 5 10
<210> 569
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 569
Cys Ala Gly Asp Tyr Pro Phe Ala Phe Trp
1 5 10
<210> 570
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 570
Cys Ala Lys Asp Arg Gly Tyr Arg Phe Asp Phe Asp Leu Trp
1 5 10
<210> 571
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 571
Cys Ala Lys Asp Arg Thr Ala Met Ala Pro Glu Gly Ala Phe Asp Ile
1 5 10 15
Trp
<210> 572
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 572
Cys Ala Lys Asp Ser Pro Ile Val Arg Arg Gly Glu Arg Gly Arg Tyr
1 5 10 15
Tyr Gly Met Asp Val Trp
20
<210> 573
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 573
Cys Ala Lys Ser Ser Phe Ser Tyr Leu Arg Ala Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 574
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 574
Cys Ala Lys Ser Ser Phe Thr Phe Gly Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 575
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 575
Cys Ala Lys Ser Trp Tyr Leu Pro Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 576
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 576
Cys Ala Arg Asp Gly Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp
1 5 10
<210> 577
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 577
Cys Ala Arg Asp His Leu Tyr Gly Met Asp Val Trp
1 5 10
<210> 578
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 578
Cys Ala Arg Asp Lys Asn Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
1 5 10
<210> 579
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 579
Cys Ala Arg Asp Arg Gly Ile Thr Met Val Arg Gly Val Met Asp Tyr
1 5 10 15
Trp
<210> 580
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 580
Cys Ala Arg Asp Thr Gly Ala Thr Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp
1 5 10 15
<210> 581
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 581
Cys Ala Arg Glu Ser Tyr Tyr Ser Phe Asp Tyr Thr Met Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 582
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 582
Cys Ala Arg Gly Met Asp Tyr Trp
1 5
<210> 583
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 583
Cys Ala Arg His Val Asp Tyr Tyr Asp Gly Ile Ser Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 584
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 584
Cys Ala Arg Lys Gly Arg Asp Tyr Gly Thr Ser His Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10 15
Trp
<210> 585
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 585
Cys Ala Arg Arg Gly Arg Tyr Asp Val Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 586
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 586
Cys Ala Arg Arg Gly Arg Tyr Asp Val Tyr Tyr Val Leu Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 587
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 587
Cys Ala Arg Arg Arg Ala Tyr His Ser Asn Phe Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 588
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 588
Cys Ala Arg Trp Ala Val Ala Ala Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Met Asp
1 5 10 15
Val Trp
<210> 589
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 589
Cys Ala Arg Trp Asn His Glu Glu His Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 590
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 590
Cys Ala Ser Ala Gly Gly Gly Tyr Trp
1 5
<210> 591
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 591
Cys Ala Ser Phe Gly Val Gly Ala Pro Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 592
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 592
Cys Ala Ser Arg Asn Phe Asp Val Trp
1 5
<210> 593
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 593
Cys Ala Ser Ser Tyr Tyr Gly Asn Pro Trp
1 5 10
<210> 594
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 594
Cys Ala Ser Trp Thr Arg Gly Ala Phe Asp Ile Trp
1 5 10
<210> 595
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 595
Cys Ala Thr Gln Leu Gly Arg Trp
1 5
<210> 596
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 596
Cys Ala Val Ser Asp Gly Tyr Asp Leu Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 597
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 597
Cys Ala Val Thr Tyr Gly Ala Tyr Trp
1 5
<210> 598
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 598
Cys Gly Gly Pro Tyr Tyr Pro Phe Thr Tyr Trp
1 5 10
<210> 599
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 599
Cys Asn Ala Arg Trp Gly Ala Gly Ser Leu Phe Ala Ser Trp
1 5 10
<210> 600
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 600
Cys Ser Arg Lys Gly Gly Phe Gly Asp Tyr Glu Lys Ser Tyr Ala Met
1 5 10 15
Asp Tyr Trp
<210> 601
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 601
Cys Thr Arg Trp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
<210> 602
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 602
Cys Val Arg His Glu Glu Tyr Gly Lys Ser Gly Phe Ala Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 603
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 603
Asp Phe Ser Ser Arg Arg Trp Tyr Leu Glu Tyr
1 5 10
<210> 604
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 604
Glu Gly Thr Gly Gly Met Asp Tyr
1 5
<210> 605
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRH3序列
<400> 605
Pro Arg Tyr Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 606
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 606
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser His Leu Ser
1 5 10
<210> 607
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 607
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 608
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 608
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Asn Val Ala
1 5 10
<210> 609
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 609
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 610
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 610
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 611
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 611
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 612
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 612
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 613
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 613
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 614
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 614
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 615
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 615
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Val
1 5 10
<210> 616
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 616
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ala Thr Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 617
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 617
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 618
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 618
Arg Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Thr Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 619
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 619
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 620
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 620
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 621
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 621
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu His
1 5 10
<210> 622
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 622
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 623
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 623
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 624
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 624
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 625
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 625
Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 626
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 626
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 627
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 627
Arg Ile Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 628
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 628
Arg Ser Ser Gln Gly Ile Val His Ser Asn Gly Asn Ile Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 629
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 629
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser
1 5 10 15
<210> 630
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 630
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly His Asn Tyr Leu Gln
1 5 10 15
<210> 631
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 631
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 632
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 632
Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 633
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 633
Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 634
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL1序列
<400> 634
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu His
1 5 10
<210> 635
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 635
Ala Ala Ile Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 636
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 636
Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 637
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 637
Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser
1 5
<210> 638
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 638
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 639
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 639
Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 640
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 640
Ala Ala Thr Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 641
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 641
Asp Ala Ser Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 642
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 642
Asp Ala Ser Asn Leu Arg Ser
1 5
<210> 643
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 643
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 644
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 644
Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 645
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 645
Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 646
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 646
Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 647
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 647
Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 648
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 648
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 649
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 649
Gly Arg Asn Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 650
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 650
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 651
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 651
Leu Gly Ser Tyr Arg Ala Ser
1 5
<210> 652
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 652
Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser
1 5
<210> 653
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 653
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu
1 5
<210> 654
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 654
Asn Ala Lys Thr Leu Ala Lys
1 5
<210> 655
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 655
Gln Ala Ser Asn Lys Asp Thr
1 5
<210> 656
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 656
Arg Ala Asn Arg Leu Ala Asp
1 5
<210> 657
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 657
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 658
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 658
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 659
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 659
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 660
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 660
Ser Ser Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 661
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL2序列
<400> 661
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 662
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 662
Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 663
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 663
Cys Lys Gln Ser Tyr Tyr Leu Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 664
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 664
Cys Leu Gln Ala Thr His Gln Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 665
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 665
Cys Leu Gln Gly Thr His Gln Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 666
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 666
Cys Leu Gln Tyr Asp Asp Leu Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 667
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 667
Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 668
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 668
Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 669
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 669
Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 670
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 670
Cys Met Gln Ala Thr His Trp Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 671
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 671
Cys Asn Ser Arg Asp Arg Arg Gly Tyr Ser Val Phe
1 5 10
<210> 672
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 672
Cys Asn Ser Arg Lys Ser Ser Ser Lys Asn Val Val Phe
1 5 10
<210> 673
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 673
Cys Asn Ser Arg Leu Arg Ser Gly Lys Met Val Val Phe
1 5 10
<210> 674
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 674
Cys Gln His Phe Trp Gly Ser Thr Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 675
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 675
Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 676
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 676
Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Thr Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 677
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 677
Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 678
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 678
Cys Gln His His Tyr Gly Thr Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 679
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 679
Cys Gln His Arg Arg Thr Phe
1 5
<210> 680
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 680
Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 681
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 681
Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Val Thr Phe
1 5 10
<210> 682
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 682
Cys Gln Gln Ala Tyr Asp Phe Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 683
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 683
Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 684
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 684
Cys Gln Gln Gly Tyr Thr Ile Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 685
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 685
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 686
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 686
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Val Thr Phe
1 5 10
<210> 687
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 687
Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 688
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 688
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 689
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 689
Cys Gln Gln Thr Tyr Ala Ile Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 690
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 690
Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 691
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 691
Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 692
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 692
Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Tyr Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 693
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 693
Cys Trp Gln Gly Thr His Phe Pro His Thr Phe
1 5 10
<210> 694
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 694
Asn Ser Leu Glu Arg Ile Gly Tyr Leu Ser Tyr Val
1 5 10
<210> 695
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 695
Gln Gln Trp Ser Gly Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 696
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hASGR1/2的结合剂的合成的CDRL3序列
<400> 696
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 697
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的针对hRNF43/ZNRF3的结合剂的合成的CDRH2序列
<400> 697
Ser Tyr Ile Ser Arg Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala
1 5 10
<210> 698
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的肽接头
<400> 698
Gly Gly Gly Gly
1
<210> 699
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的肽接头
<400> 699
Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 700
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的肽接头
<400> 700
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 701
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的肽接头
<400> 701
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 702
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的肽接头
<400> 702
Gly Gly Gly Gly Gly Lys
1 5
<210> 703
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的肽接头
<400> 703
Gly Gly Gly Gly Gly Lys Arg
1 5
<210> 704
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的合成的肽接头
<400> 704
Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 705
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequene）
<220>
<223> 在实验室中制备的CDRH1
<400> 705
Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr Thr Leu
1 5
<210> 706
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequene）
<220>
<223> 在实验室中制备的CDRH2
<400> 706
Val Ile Ser Gly Asp Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 707
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的CDRH3
<400> 707
Asn Phe Ile Lys Tyr Val Phe Ala Asn
1 5
<210> 708
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequene）
<220>
<223> 在实验室中制备的CDRL1
<400> 708
Ser Gly Asp Lys Leu Gly Lys Lys Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 709
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequene）
<220>
<223> 在实验室中制备的CDRL1
<400> 709
Ser Gly Asp Asn Ile Gly Ser Phe Tyr Val His
1 5 10
<210> 710
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的CDRL2
<400> 710
Glu Lys Asp Asn Arg Pro Ser Gly
1 5
<210> 711
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的CDRL2
<400> 711
Asp Lys Ser Asn Arg Pro Ser Gly
1 5
<210> 712
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的CDRL3
<400> 712
Ser Ser Phe Ala Gly Asn Ser Leu
1 5
<210> 713
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在实验室中制备的CDRL3
<400> 713
Gln Ser Tyr Ala Asn Thr Leu Ser
1 5
<210> 714
<211> 90
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 714
Lys Met Tyr His Thr Lys Gly Gln Glu Gly Ser Val Cys Leu Arg Ser
1 5 10 15
Ser Asp Cys Ala Ser Gly Leu Cys Cys Ala Arg His Phe Trp Ser Lys
20 25 30
Ile Cys Lys Pro Val Leu Lys Glu Gly Gln Val Cys Thr Lys His Arg
35 40 45
Arg Lys Gly Ser His Gly Leu Glu Ile Phe Gln Arg Cys Tyr Cys Gly
50 55 60
Glu Gly Leu Ser Cys Arg Ile Gln Lys Asp His His Gln Ala Ser Asn
65 70 75 80
Ser Ser Arg Leu His Thr Cys Gln Arg His
85 90
<210> 715
<211> 88
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 715
Lys Met Ser His Ile Lys Gly His Glu Gly Asp Pro Cys Leu Arg Ser
1 5 10 15
Ser Asp Cys Ile Glu Gly Phe Cys Cys Ala Arg His Phe Trp Thr Lys
20 25 30
Ile Cys Lys Pro Val Leu His Gln Gly Glu Val Cys Thr Lys Gln Arg
35 40 45
Lys Lys Gly Ser His Gly Leu Glu Ile Phe Gln Arg Cys Asp Cys Ala
50 55 60
Lys Gly Leu Ser Cys Lys Val Trp Lys Asp Ala Thr Tyr Ser Ser Lys
65 70 75 80
Ala Arg Leu His Val Cys Gln Lys
85

Claims (55)

1.一种组织特异性Wnt(“无翅相关整合位点”或“无翅和Int-1”或“无翅-Int”)信号增强分子或其药学上可接受的盐，其包括第一结构域和第二结构域，所述第一结构域特异性地结合选自锌指和环指3(ZNRF3)和环指蛋白43(RNF43)的一种或多种跨膜E3泛素连接酶，所述第二结构域特异性地结合脱唾液酸糖蛋白受体1(ASGR1)和/或脱唾液酸糖蛋白受体2(ASGR2)，其中：
(a)所述第一结构域包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：
(i)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或
(ii)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，
或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代；和/或
(b)所述第二结构域包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：
(i)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或
(ii)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，
或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。
2.根据权利要求1所述的分子，其中所述分子是肝特异性Wnt信号增强分子，并且所述第二结构域包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：
(i)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或
(ii)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，
或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。
3.根据权利要求1所述的分子，其中所述第一结构域包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括：
(i)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或
(ii)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，
或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。
4.根据权利要求1或权利要求2所述的分子，其中所述第一结构域包括R-脊椎蛋白多肽序列或其片段或者变体，其中R-脊椎蛋白任选地为R-脊椎蛋白-1、R-脊椎蛋白-2、R-脊椎蛋白-3或R-脊椎蛋白-4。
5.根据权利要求4所述的分子，其中所述第一结构域包括R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1序列和任选地野生型或突变的弗林蛋白酶结构域2或其片段或者变体，其中第一多肽序列与含富亮氨酸重复的G蛋白偶联受体4-6(LGR4-6)的结合相比于全长R-脊椎蛋白任选地有所降低。
6.根据权利要求4或权利要求5所述的分子，其中R-脊椎蛋白弗林蛋白酶结构域1与存在于SEQ ID NO:1-4中的弗林蛋白酶1结构域中的任何一个弗林蛋白酶1结构域具有至少90％的同一性。
7.根据权利要求1到6中任一项所述的分子，其中所述分子是融合蛋白，其中所述第一结构域和所述第二结构域是任选地通过接头部分连接的多肽。
8.根据权利要求7所述的分子，其中所述接头部分是肽基接头序列。
9.根据权利要求8所述的分子，其中所述接头序列包括选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸：甘氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸和丙氨酸。
10.一种核酸序列，其针对根据权利要求1到9中任一项所述的分子的至少所述第一结构域或所述第二结构域进行编码。
11.根据权利要求10所述的核酸序列，其中所述核酸序列是DNA或mRNA。
12.一种载体，其包括根据权利要求11所述的核酸序列。
13.根据权利要求12所述的载体，其中所述载体是表达载体，所述表达载体包括操作性地连接到所述核酸序列的启动子序列。
14.根据权利要求13所述的载体，其中所述载体是病毒，所述病毒包括操作性地连接到所述核酸序列的启动子序列。
15.一种宿主细胞，其包括根据权利要求14所述的载体。
16.一种用于产生根据权利要求7到9中任一项所述的融合多肽的方法，所述方法包括：在所述融合多肽由所述表达载体表达的条件下培养根据权利要求15所述的宿主细胞。
17.根据权利要求16所述的方法，其进一步包括分离产生的所述融合多肽的步骤。
18.一种药物组合物，其包括：
a)有效量的根据权利要求1到9中任一项所述的分子、根据权利要求10到11中任一项所述的核酸序列、根据权利要求12到14中任一项所述的载体或根据权利要求15所述的宿主细胞；以及
b)药学上可接受的稀释剂、佐剂或载体。
19.根据权利要求18所述的药物组合物，其包括所述有效量的根据权利要求1到9中任一项所述的分子和有效量的Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子。
20.根据权利要求18所述的药物组合物，其包括所述有效量的根据权利要求10到11中任一项所述的核酸序列和有效量的对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列，其中对所述Wnt多肽、所述Norrin多肽或所述Wnt信号传导激动剂分子进行编码的所述核酸序列任选地为DNA或mRNA。
21.根据权利要求20所述的药物组合物，其中根据权利要求13到14中任一项所述的核酸序列和/或对所述Wnt多肽、所述Norrin多肽或所述Wnt信号传导激动剂分子进行编码的所述核酸序列是经过修饰的mRNA。
22.根据权利要求18所述的药物组合物，其包括所述有效量的根据权利要求12到14中任一项所述的载体和有效量的包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列的载体，其中包括对所述Wnt多肽、所述Norrin多肽或所述Wnt信号传导激动剂分子进行编码的所述核酸序列的所述载体任选地为表达载体。
23.根据权利要求19到22中任一项所述的药物组合物，其中所述Wnt多肽是选自以下的哺乳动物Wnt多肽：Wnt1、Wnt2、Wnt2B、Wnt3、Wnt3A、Wnt4、Wnt5A、Wnt5B、Wnt6、Wnt7A、Wnt7B、Wnt8A、Wnt8B、Wnt9A、Wnt9B、Ant10A、Wnt10B、Wnt11和Wnt16以及前述Wnt多肽中的任何一个Wnt多肽的功能性变体和片段。
24.根据权利要求19到22中任一项所述的药物组合物，其中所述Norrin多肽是哺乳动物Norrin多肽或其功能性变体或片段。
25.根据权利要求19到22中任一项所述的药物组合物，其中所述Wnt信号传导激动剂分子是使卷曲蛋白(Fz)受体与Lrp5/6二聚化的水溶性Wnt信号传导激动剂。
26.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述Wnt信号传导激动剂分子包括多肽。
27.根据权利要求26所述的药物组合物，其中所述多肽包括对一种或多种Fzd蛋白具有亲和力的结合结构域和对Lrp5/Lrp6蛋白具有亲和力的结合结构域，并且其中所述结合结构域任选地直接连接或通过接头连接。
28.一种用于增加靶组织中的Wnt(“无翅相关整合位点”或“无翅和Int-1”或“无翅-Int”)信号传导的方法，所述方法包括使所述靶组织与以下接触：
a)根据权利要求1到9中任一项所述的分子；根据权利要求10到11中任一项所述的核酸；根据权利要求12到14中任一项所述的载体；或根据权利要求15所述的宿主细胞，其中所述第二结构域特异性地结合所述靶组织上的细胞特异性表面分子，并且其中根据权利要求1到12中任一项所述的分子结合所述靶组织并且螯合选自锌指和环指3(ZNRF3)和环指蛋白43(RNF43)的一种或多种跨膜E3泛素连接酶或增加其在所述靶组织中的内吞作用；和/或
b)Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子；对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列；包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列的载体；或包括表达载体的宿主细胞，所述表达载体包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列；其中对所述Wnt多肽、所述Norrin多肽或所述Wnt信号传导激动剂分子进行编码的所述核酸序列任选地为DNA或mRNA，任选地经过修饰的mRNA。
29.根据权利要求28所述的方法，其包括使所述靶组织与根据权利要求1到9中任一项所述的分子接触。
30.根据权利要求28所述的方法，其包括使所述靶组织与根据权利要求10到11中任一项所述的核酸接触。
31.根据权利要求28所述的方法，其包括使所述靶组织与根据权利要求12到14中任一项所述的载体接触。
32.根据权利要求28所述的方法，其包括使所述靶组织与对所述Wnt多肽、所述Norrin多肽或所述Wnt信号传导激动剂分子进行编码的所述核酸序列接触。
33.一种用于治疗或预防有需要的受试者的肝疾病或肝病状的方法，其中所述肝疾病或肝病症与减少的Wnt(“无翅相关整合位点”或“无翅和Int-1”或“无翅-Int”)信号传导相关或者将受益于增加的Wnt信号传导，所述方法包括向所述受试者提供有效量的根据权利要求18到27中任一项所述的药物组合物，任选地其中所述分子是根据权利要求2所述的分子。
34.根据权利要求33所述的方法，其进一步包括向所述受试者提供药物组合物，所述药物组合物包括：药学上可接受的稀释剂、佐剂或载体；以及有效量的：
a)Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子；
b)对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列，其中对所述Wnt多肽、所述Norrin多肽或所述Wnt信号传导激动剂分子进行编码的所述核酸序列任选地为DNA或mRNA；
c)包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列的载体，其中包括对所述Wnt多肽、所述Norrin多肽或所述Wnt信号传导激动剂分子进行编码的所述核酸序列的所述载体任选地为表达载体；或者
d)包括表达载体的宿主细胞，所述表达载体包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸。
35.根据权利要求34所述的方法，其包括向所述受试者提供包括有效量的根据权利要求1到9中任一项所述的分子的药物组合物和包括有效量的Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子的药物组合物。
36.根据权利要求34所述的方法，其包括向所述受试者提供包括有效量的根据权利要求10到11中任一项所述的核酸序列的药物组合物和包括有效量的对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列的药物组合物，其中所述核酸序列中的一个或两个核酸序列任选地为DNA或mRNA，任选地经过修饰的mRNA。
37.根据权利要求34所述的方法，其包括向所述受试者提供包括有效量的根据权利要求12到14中任一项所述的载体的药物组合物和包括有效量的载体的药物组合物，所述载体包括对Wnt多肽、Norrin多肽或Wnt信号传导激动剂分子进行编码的核酸序列，其中所述载体中的一个或两个载体任选地为表达载体或病毒载体。
38.根据权利要求34到37中任一项所述的方法，其中所述Wnt多肽是选自以下的哺乳动物Wnt多肽：Wnt1、Wnt2、Wnt2B、Wnt3、Wnt3A、Wnt4、Wnt5A、Wnt5B、Wnt6、Wnt7A、Wnt7B、Wnt8A、Wnt8B、Wnt9A、Wnt9B、Wnt10A、Wnt10B、Wnt11和Wnt16以及前述Wnt多肽中的任何一种Wnt多肽的功能性变体和片段。
39.根据权利要求34到37中任一项所述的方法，其中所述Norrin多肽是哺乳动物Norrin多肽或其功能性变体或片段。
40.根据权利要求34到37中任一项所述的方法，其中所述Wnt信号传导激动剂分子是使卷曲蛋白(Fzd)受体与Lrp5/6二聚化的水溶性Wnt信号传导激动剂。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述Wnt信号传导激动剂分子包括多肽。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述多肽包括对一种或多种Fzd蛋白具有亲和力的结合结构域和对Lrp5/Lrp6蛋白具有亲和力的结合结构域，并且其中所述结合结构域任选地直接连接或通过接头连接。
43.根据权利要求33到42中任一项所述的方法，其中所述肝疾病或肝病状选自由以下组成的组：所有原因的急性肝衰竭、药物诱导的急性肝衰竭、酒精性肝病、所有原因的慢性肝衰竭、肝硬化、所有原因的肝纤维化、门脉高压、所有原因的慢性肝功能不全、终末期肝病(ESLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)(脂肪肝)、酒精性肝炎、丙型肝炎病毒诱导的肝病(HCV)、乙型肝炎病毒诱导的肝病(HBV)、其它病毒性肝炎(例如，甲型肝炎病毒诱导的肝病(HAV)和丁型肝炎病毒诱导的肝病(HDV))、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、肝脏外科手术、肝损伤、肝移植、肝脏外科手术和移植中的“小肝(small forsize)”综合征、先天性肝疾病和病症、由遗传性疾病、变性、老化、药物或损伤引起的任何其它肝病症或缺陷。
44.根据权利要求33到43中任一项所述的方法，其中所述药物组合物被肠胃外地、口服地、肌内地或局部地提供给肝。
45.根据权利要求33到44中任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物，任选地人。
46.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其与RNF43或ZNRF3多肽结合、包括包含以下的序列：(i)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或(ii)针对表2A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。
47.根据权利要求46所述的抗体或其抗原结合片段，其包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区和/或轻链可变区包括与表2B或SEQ ID NO:78-150或165-170中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
48.根据权利要求47所述的抗体或其抗原结合片段，其包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区和/或轻链可变区包括表2B或SEQ ID NO:78-150或165-170中所示的氨基酸序列。
49.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其与ASGR1或ASGR2多肽结合、包括包含以下的序列：(i)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3序列；和/或(ii)针对表3A的抗体中的任何抗体所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，或所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述变体包括一个或多个氨基酸修饰，其中所述变体在所述CDR序列中包括少于8个氨基酸取代。
50.根据权利要求49所述的抗体或其抗原结合片段，其包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区和/或轻链可变区包括与表3B或SEQ ID NO:47-77、151-154、171-179或274-305中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
51.根据权利要求50所述的抗体或其抗原结合片段，其包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区和/或轻链可变区包括表3B或SEQ ID NO:47-77、151-154、171-179或274-305中所示的氨基酸序列。
52.一种抗体，其包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区和/或轻链可变区包括与表3C或SEQ ID NO:180-185中所示的氨基酸序列或其片段或者变体具有至少90％同一性的氨基酸序列。
53.一种抗体或其抗原结合片段，其与根据权利要求46到52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段竞争结合。
54.一种药物组合物，其包括根据权利要求46到53中任一项所述的抗体。
55.一种用于增加肝与体重之比、促进肝再生、增加肝细胞增殖或有丝分裂、任选地在慢性肝损伤后减少肝纤维化、增加肝细胞功能或减少肝中的凝血时间的方法，所述方法包括向受试者提供有效量的根据权利要求53所述的药物组合物，其中与ASGR1或ASGR2多肽结合的所述抗体或其抗原结合片段。
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