CN112641724A - Cd44介导的智能响应型聚合物胶束及其制备和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种CD44介导的智能响应型聚合物胶束及其制备和应用。本发明公开了一种pH响应性聚合物胶束，包括聚合物形成的胶束，聚合物包括透明质酸，透明质酸通过化学键连接烷基胺和组氨酸。该pH响应性聚合物胶束可用于制备抗肿瘤药物载体。本发明提供了基于聚合物组氨酸‑透明质酸‑烷基胺的CD44靶向胶束，用来递送抗肿瘤药物，由于胶束的pH敏感性，抗肿瘤药物可从聚合物胶束中释放。

Description

CD44介导的智能响应型聚合物胶束及其制备和应用
技术领域
本发明涉及胶束领域，尤其涉及一种CD44介导的智能响应型聚合物胶束及其制备和应用。
背景技术
据统计，癌症已经成为人类死亡的主要原因之一。目前，药物治疗已经成为当今临床治疗肿瘤的重要手段。如今普遍的肿瘤治疗方法仍然以化疗手段为主，对患者的身体状况有不同程度的不良影响，容易出现呕吐、掉发等不良反应，易产生耐药性；且由于化疗药物缺乏对肿瘤的靶向性，使用过程中对正常细胞也有毒性。现已上市的白蛋白纳米粒等造价昂贵，肿瘤靶向性不理想，不能快速而有效的释放所负载的药物或基因。
胶束递送系统是一种最有潜力的纳米给药递送系统，在过去的二十年里作为抗肿瘤药物的递送载体得到了深度发展。与传统的抗肿瘤药物相比，载药聚合物胶束显示出多方面的优势，例如提高难溶性药物的溶解度，在到达靶向部位前增加药物在血液中的稳定性，通过增强渗透滞留(EPR)效应显著提高药物在肿瘤组织的蓄积。因此，胶束递送系统由于能够持续增强治疗效果和减少系统毒性，而成为了一种有效的抗肿瘤药物递送系统。
迄今为止，胶束给药系统依然面临两个亟待解决的问题：
(1)肿瘤靶向效率和细胞内吞效率低下。一方面，EPR效应仅实现纳米胶束在肿瘤部位的蓄积，而后续的入胞过程受胶束亲水外壳的影响，往往不尽如人意，这导致肿瘤细胞内药物浓度较低。
(2)药物的释放不受控制。入胞后，药物无法迅速从纳米胶束中释放并扩散至其靶部位，如细胞核。这些问题导致细胞内药物浓度过低而不能达到预期的抗肿瘤效果。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种CD44介导的智能响应型聚合物胶束及其制备和应用，本发明提供了基于聚合物组氨酸-透明质酸-烷基胺的CD44靶向胶束，用来递送抗肿瘤药物，由于胶束的pH敏感性，抗肿瘤药物可从聚合物胶束中释放。
本发明的第一个目的是提供一种pH响应性聚合物胶束，包括聚合物形成的胶束，聚合物包括透明质酸(HA)，透明质酸通过化学键连接含10-18个碳原子的烷基胺和组氨酸(His)。
进一步地，烷基胺选自十二胺(DA)、癸胺、十四烷胺、十六烷胺和十八烷胺中的一种或几种。优选地，烷基胺为十二胺。烷基胺作为疏水端，其碳原子数目越多，疏水性越强，毒性越低，但其在透明质酸的接枝率越低，因此应选择合适碳原子数目的烷基胺。
进一步地，透明质酸上，烷基胺的接枝率为25％-35％，组氨酸的接枝率为20％-30％。
进一步地，透明质酸的分子量为8000-12000。
优选地，聚合物为His-HA-DA，包括HA，HA通过化学键连接DA和His。
本发明的第二个目的是提供一种上述pH响应性聚合物胶束的制备方法，包括以下步骤：
(1)利用活化剂活化透明质酸，然后将活化的透明质酸与烷基胺在溶剂中于40-55℃下反应，反应完全后得到接枝烷基胺的透明质酸；
(2)利用活化剂活化接枝烷基胺的透明质酸，然后与组氨酸在40-55℃下反应，反应完全后得到聚合物；再将聚合物分散在水中，得到pH响应性聚合物胶束。
进一步地，在步骤(1)中，透明质酸和烷基胺的摩尔比为1:1。
进一步地，步骤(1)中的透明质酸和步骤(2)中的组氨酸的摩尔比为1:2。
进一步地，在步骤(1)和(2)中，活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC.HCl)、N-羟基丁二酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺中的一种或几种。
本发明以HA为骨架，在活化剂的催化下，连接烷基胺形成接枝烷基胺的透明质酸，其为两亲性聚合物；为得到具有pH敏感性的材料，通过具有咪唑基团的His对接枝烷基胺的透明质酸进行修饰，得到pH敏感型聚合物。
本发明的第三个目的是公开上述pH响应性聚合物胶束在制备抗肿瘤药物载体中的应用。
进一步地，抗肿瘤药物为疏水性抗肿瘤药物。
进一步地，抗肿瘤药物为阿霉素(DOX)、蛇床子素、紫杉醇、去氢骆驼蓬、喜树碱、奥拉帕利、达沙替尼和依托泊苷中的一种或几种。
本发明的第四个目的是提供一种pH响应性聚合物载药胶束，其包括聚合物形成的胶束以及包载于胶束内的抗肿瘤药物，聚合物包括透明质酸(HA)，透明质酸通过化学键连接含10-18个碳原子的烷基胺和组氨酸(His)。
进一步地，pH响应性聚合物载药胶束的粒径为100-150nm。
进一步地，pH响应性聚合物载药胶束的制备方法包括以下步骤：
将本发明的上述pH响应性聚合物胶束与抗肿瘤药物混合，得到pH响应性聚合物载药胶束。
本发明利用肿瘤细胞表面受体的目标配体进行修饰，使聚合物胶束具有主动靶向性，并通过配体-受体介导的内吞作用显著增加细胞摄取量。在发明中，制备基于聚合物组氨酸-透明质酸-烷基胺的新型CD44靶向胶束，用来递送含显著毒副作用的化疗药物。HA为基本骨架，同时作为亲水段和活性靶向配体。为了制备亲水性聚合物，亲水段HA与疏水段烷基胺相连接形成透明质酸-烷基胺，然后利用含有pH响应性基团的组氨酸修饰透明质酸-烷基胺得到最后的聚合物组氨酸-透明质酸-烷基胺。在生理条件下，聚合物能够自组装形成胶束并包裹进疏水抗肿瘤药物。该聚合物胶束在血液循环中保持相对稳定，通过EPR效应在肿瘤部位蓄积，从而通过CD44介导的内吞作用进入细胞。在细胞内含体/溶酶体中，由于胶束的pH敏感性，抗肿瘤药物从聚合物胶束中释放并逃出溶酶体。最后，游离的抗肿瘤药物扩散进入细胞核或其他靶部位达到抗肿瘤效果。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
本发明基于生物制药技术和肿瘤微环境特征，提供了一种基于聚合物组氨酸-透明质酸-烷基胺且CD44介导的智能响应型聚合物胶束，该聚合物胶束可作为抗肿瘤药物载体，由于胶束的pH敏感性，抗肿瘤药物可从聚合物胶束中释放。其合成过程简便，有利于实现肿瘤治疗的新突破。本发明以配体-受体介导和抗增殖治疗为理论基础，针对受体过表达的肿瘤，发展主动靶向作用新型高效递药系统。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合详细附图说明如后。
附图说明
图1是HA、HA-DA和His-HA-DA的1H-NMR测试结果；
图2是His-HA-DA在pH7.4和pH5.3下的临界胶束浓度(CMC)值；
图3是DOX/HHD在pH5.3和7.4下的粒径分布图；
图4是DOX/HHD在pH5.3和7.4下的zeta电位；
图5是DOX/HHD在pH5.3和7.4下的包封率(EE％)；
图6是DOX·HCl、DOX/HD和DOX/HHD在pH5.3和7.4下的体外释放图；
图7是DOX在不同剂型中的细胞摄取情况；
图8是不同胶束中DOX的亚细胞分布情况测试结果；
图9是不同剂型DOX下4T1细胞的存活率(A.24h,B.48h,n＝5)；
图10是胶束在小鼠体内的近红外荧光成像图；
图11是肿瘤组织的DiR荧光强度；
图12是不同剂型DOX在体内的分布情况；
图13是DOX聚合物胶束体内抗肿瘤效果。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
1、HA-DA的合成
称取388mg(0.5mmol)的HA溶于30mL去离子水中，45℃下加入EDC·HCl(192mg,1mmol)和NHS(115mg,1mmol)活化HA的羧基基团1h。称取92mg(0.5mmol)DA溶于20mL无水乙醇中，缓慢滴加到HA溶液中，在45℃下反应24h。产物在蒸馏水中透析3-4h除去副产物，冻干即得HA-DA。
2、His-HA-DA的合成
称取194mg(0.5mmol)的HA-DA溶于10mL去离子水中，45℃下加入EDC·HCl(96mg,0.5mmol)和NHS(57.5mg,0.5mmol)活化羧基30min，然后加入His(155mg,1mmol)，在室温下反应12h。产物在蒸馏水中透析5-6次，冻干即得His-HA-HD。
His-HA-HD的合成路线如下：
Figure BDA0002834584200000041
3、载药胶束的制备
以HA-HD和His-HA-HD为载体材料，分别利用透析法制备载药胶束DOX/HD和DOX/HHD。具体步骤如下：
将5mg聚合物材料(HA-HD或His-HA-HD)溶于5mL去离子水中得到1mg/mL的胶束溶液，依次向溶液中加入100μL三乙胺和0.5mLDOX·HCl溶液(5mg/mL)，之后用透析袋在蒸馏水中透析4-5次，透析后的液体用0.22μm孔径的微孔滤膜过滤，即得载药胶束。
下面对该实施例中的化合物进行表征以及产物的性能测定：
1、载体材料的结构表征
取1-2mg的聚合物(HA，HA-DA或His-HA-DA)溶于适量D2O中通过1HNMR对其化学结构进行表征。如图1所示，δ3.0–4.0ppm代表HA骨架上H的化学位移，δ1.3ppm前后代表DA上-CH2上H原子的化学位移；δ7.2ppm代表His咪唑基团上H的化学位移。1HNMR结果表明两种聚合物已经成功合成，由特征峰的峰面积计算出His-HA-DA中DA和His的接枝率分别为32.5％和23.1％。
2、His-HA-DA在不同pH下的CMC值
通过芘探针法测定His-HA-DA空白胶束在不同pH下的CMC值。将芘溶液(10-6mol/L)加入离心管旋转蒸发除去有机溶剂，His-HA-DA溶于PBS(pH 7.4或5.3)中得到浓度从0.39到100μg/mL的溶液，将该溶液加入上述离心管超声10min。密封、常温放置24h后，通过多功能酶标仪测量其荧光强度(λex＝336nm,λem＝373、384nm)。如图2所示，在生理条件下(pH7.4)，His-HA-DA呈现出一个较低的CMC值6.37×10-4mg/mL，说明His-HA-HD在血液循环中能够抵制稀释自组装成聚合物胶束HHD，具有包载难溶性药物的潜能。然而，当pH下降到5.3时，HHD的CMC值增加到4.57×10-3mg/mL，表明His-HA-HD在酸性环境下难以形成聚合物胶束，其包载的药物可被迅速释放。
3、载药胶束的质量评价
载药胶束的粒径和zeta电位用动态激光粒径仪在不同pH下测得。包封率(EE％)在pH7.4下通过超滤法测得，取1mL的载药胶束置于超滤管中，3000r/min离心15min，通过多功能酶标仪测定下层溶液中的DOX含量(λex＝480nm，λem＝590nm)；载药量(DL％)测定是在载药胶束中加入过量乙醇，所包载的DOX的量通过多功能酶标仪测得。式(1-1)和式(1-2)为计算EE％和DL％的公式。
EE％＝被包载药物浓度/总药物浓度×100％ (1-1)
DL％＝被包载药物质量/(被包载药物质量+载体质量)×100％ (1-2)
如表1所示，DOX/HD和DOX/HHD有适宜的粒径、PDI和zeta电位。两种载药胶束均具有较高的EE％和DL％。DOX/HD的粒径、zeta电位、EE％和DL％均与DOX/HHD接近。相对来说，DOX/HHD的粒径更小，粒径分布更加集中，这有助于实现EPR效应。
表1载DOX胶束的表征
Figure BDA0002834584200000061
为了研究DOX/HHD的pH响应性，测定其在不同pH下的粒径、zeta电位和DOX的体外释放。如图3所示，与pH7.4下相比，DOX/HHD在pH5.3下粒径明显增大。如图4所示，随着pH值从7.4降到5.3，DOX/HHD表面的zeta电位约从-25mv升到-18mv。以上结果说明，在酸性环境下聚合物胶束的His段发生了质子化，导致胶束结构膨胀以及表面电荷增加。接着，测定在不同pH值下DOX的荧光强度研究DOX/HHD胶束的包封率。如图5所示，pH5.3下DOX/HHD的包封率比pH 7.4下显著下降，说明在酸性环境下胶束结构不稳定，DOX从胶束中泄露出来。
4、载药胶束的体外释放
通过透析法研究DOX·HCl、DOX/HD和DOX/HHD的体外释放。取DOX盐酸溶液(250μg/mL)、DOX/HD和DOX/HHD各2mL置于透析袋中(MWCO＝3500D)，加入装有100mL PBS(pH5.3或7.4)的棕色瓶中，将棕色瓶置于37℃的恒温振荡箱中120r/min振荡，在预设时间点(0.5、1、2、4、6、8、12、24h)时取样1mL，样品通过多功能酶标仪(λex＝480nm，λem＝590nm)测定DOX的浓度。如图6所示，pH7.4生理条件下，两种载药胶束均缓慢释药，而在pH5.3(溶酶体的弱酸性环境)下迅速释药；pH5.3下，DOX/HHD的累计释放量达到了约70％，而DOX/HD的累积释放量仅有约40％。结合前述实验结果分析，DOX/HHD在生理条件下能够缓慢释药，减少DOX的系统毒性，当到达肿瘤组织的弱酸性环境时，His上的咪唑基发生质子化，导致胶束结构不稳定而造成DOX的释放。DOX/HHD这种灵活的释药行为有利于减少药物到达靶向位点前的释放，增加肿瘤细胞的迅速释药。
另外，对以上实施例制备的胶束进行以下细胞或活体实验：
1.细胞摄取与亚细胞分布
1.1细胞摄取
DOX胶束的细胞摄取量通过流式细胞仪测定。4T1细胞以105/孔的密度铺在六孔板中，孵育24h后，孔板中可另外加入游离的HA，或不加入游离的HA，加入不同剂型的DOX(DOX为10μg/mL)孵育2h，之后吸出溶液用PBS(pH 7.4)清洗2-3遍，通过流式细胞仪测定细胞内的DOX浓度。如图7所示，其中图7(A)为使用共聚焦显微镜测定带有或不带有游离HA的DOX负载胶束的细胞摄取情况。图7(B)为流式细胞术检测不同剂型DOX的细胞摄取情况。
1.2.亚细胞分布
通过激光共聚焦显微镜考察DOX在细胞内分布。将4T1细胞以105个/孔的密度铺到六孔板中，孵育24h后，盖玻片上细胞覆盖率约为80％。然后吸出培养基，用pH7.4的PBS清洗2-3遍，加入1mL的PBS，将六孔板分为三组，分别加入DOX、DOX/HD、DOX/HHD(DOX为10μg/mL)孵育2h或者6h，吸出溶液，用PBS清洗2-3遍，加入固定液(4％多聚甲醛)固定，10min后吸出、清洗，再加入染核试剂Hoechst33258(1mL，10μg/mL)，15min后吸出、清洗，取出盖玻片置于加有抗荧光猝灭剂的载玻片上，通过激光共聚焦显微镜观察。如图8所示，图8(A)为不同时间时DOX/HHD或DOX/HD在细胞内的分布情况；图8(B)为不同时间时空白HHD或HD胶束处理的细胞AO染色情况。
2.MTT细胞毒性实验
通过MTT法测定不同剂型DOX的细胞毒性。将4T1细胞以3000个/孔的密度铺到96孔板中(200μL/孔)，孵育24h后，吸出培养基，若需用HA预处理，每孔加入100μLHA(1mg/mL，pH7.4)孵育2h，吸出溶液，按照预设的DOX浓度梯度(20μg/mL到0.0390625μg/mL，最后一组为空白培养基)加入100μL的已过滤除菌的DOX·HCl、DOX/HD或DOX/HHD，孵育48h后，每孔加入20μL的MTT溶液(5mg/mL，pH7.4)孵育4h，吸出孔内培养基，加入150μL的DMSO，置于摇床上振荡10min，使结晶充分溶解，用酶联免疫检测仪在OD490nm处测量各孔的吸光值。细胞存活率的计算公式如下：
Figure BDA0002834584200000071
其中，A490(treated)为加药孔的吸光度值，A490(non-treated)为空白培养基孔的吸光度值，A0为无细胞孔的吸光度值。
在pH7.4下,不同剂型DOX对4T1细胞的毒性影响如图9所示，半数抑制浓度(IC50)如表2所示，三种剂型DOX的细胞毒性具有浓度依赖性，与非敏感型胶束DOX/HD相比，DOX/HHD细胞毒性更高，IC50值更低，这可能是因为溶酶体中的低pH诱导了胶束结构变化，DOX迅速释放，并且通过质子海绵效应逃出溶酶体。在用HA进行预处理后，载药胶束的细胞毒性受到抑制，表明DOX/HHD是通过CD44受体介导的内吞作用进入细胞的，而预先加入的HA使细胞表面的CD44受体达到饱和，胞吞受抑。尽管DOX·HCl的细胞摄取量较低，但细胞毒性却是最大的，这可能是DOX·HCl与细胞核快速协同定位的原因。
表2不同剂型DOX对4T1细胞的半抑制浓度(IC50)
Figure BDA0002834584200000081
3.体内肿瘤靶向性实验
3.1近红外荧光成像研究肿瘤靶向性
肿瘤靶向性实验利用DiR作为荧光探针通过近红外荧光成像系统进行研究。通过溶剂挥发法制得载DiR胶束(DiR/HD和DiR/HHD)，当肿瘤体积长到100mm3时，小鼠分别尾静脉注射0.1mL的DiR/HD和DiR/HHD(60μg/mL)，在预设时间点(0、6、12、24、48h)通过近红外荧光成像系统考察DiR在荷瘤小鼠体内的分布。48h后断颈处死小鼠，取出主要脏器(心肝脾肺肾)和肿瘤组织离体成像。如图10、11所示，DiR/HD和DiR/HHD在肿瘤部位均有明显的蓄积，表明粒径适宜，表面含HA的两种聚合物胶束通过EPR效应以及HA-CD44受体介导的主动靶向作用达到理想的体内肿瘤靶向性。然而，在预先注射0.1mL的HA(10mg/ml)后，DiR胶束的肿瘤靶向性明显减弱，表明HA与肿瘤部位CD44受体的特异性结合是这些胶束产生靶向性的主要原因。两种聚合物胶束在肿瘤部位的荧光强度均随着时间的增加而增强，但DiR/HHD组的荧光强度更高，表明HHD胶束有更好的肿瘤靶向性，可能是其pH敏感性导致的更好的肿瘤组织穿透性。另外，由于网状内皮系统(RES)的捕获，在肝脏和脾脏中也有较强的DiR荧光。
3.2.DOX的体内分布
荷瘤小鼠尾静脉注射不同剂型的DOX(DOX为5mg/kg)，24h后处死小鼠，取出肿瘤组织和主要脏器，加入1mL生理盐水匀浆，然后加入2mL有机溶剂(三氯甲烷：甲醇＝3:1，v/v)进行萃取，离心(3000r/min，10min)取出有机层通过多功能酶标仪测量DOX浓度。如图12所示，24h后DOX在肿瘤部位有着明显的蓄积，其中，DOX/HHD递送的DOX量最多，与近红外荧光成像结果一致。DOX·HCl组作为对照组，由于缺乏肿瘤靶向性，在肿瘤部位蓄积最少而在脏器中蓄积较多。
4.体内药效学评价
当荷瘤小鼠的肿瘤体积约为100mm3时，将小鼠分为四组，每组5只，在第1、5、9、13天时分别尾静脉注射0.1mL生理盐水、DOX·HCl、DOX/HD、DOX/HHD(DOX给药量为5mg/mL)，给药期间，每2天测量小鼠的重量和肿瘤体积。第21天时，处死小鼠，取出肿瘤并称重。如图13所示，图13A为给药周期内肿瘤相对体积变化；图13B为21天时肿瘤取出图像；图13C为不同实验组的肿瘤重量；图13D为给药周期内小鼠体重变化。与生理盐水组相比，三种剂型的DOX对肿瘤生长均有一定的抑制效果，其中，两种DOX胶束的抗肿瘤效果比DOX·HCl好。而在两种DOX胶束中，由于肿瘤靶向性和细胞内pH敏感性释药的原因，pH敏感性DOX/HHD胶束具有更高的肿瘤抑制率。此外，DOX胶束产生的系统毒性比游离DOX的小，注射载药胶束的两组小鼠几乎没有体重减轻。
以上仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种pH响应性聚合物胶束，其特征在于：包括聚合物形成的胶束，所述聚合物包括透明质酸，所述透明质酸通过化学键连接含10-18个碳原子的烷基胺和组氨酸。
2.根据权利要求1所述的pH响应性聚合物胶束，其特征在于：所述烷基胺选自十二胺、癸胺、十四烷胺、十六烷胺和十八烷胺中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的pH响应性聚合物胶束，其特征在于：所述透明质酸上，烷基胺的接枝率为25％-35％，组氨酸的接枝率为20％-30％。
4.一种权利要求1-3中任一项所述的pH响应性聚合物胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用活化剂活化所述透明质酸，然后将活化的透明质酸与烷基胺在溶剂中于40-55℃下反应，反应完全后得到接枝烷基胺的透明质酸；
(2)利用活化剂活化所述接枝烷基胺的透明质酸，然后与组氨酸在40-55℃下反应，反应完全后得到聚合物；再将所述聚合物分散在水中，得到所述pH响应性聚合物胶束。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：在步骤(1)和(2)中，所述活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基丁二酰亚胺和二环己基碳二亚胺中的一种或几种。
6.权利要求1-3中任一项所述的pH响应性聚合物胶束在制备抗肿瘤药物载体中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述抗肿瘤药物为疏水性抗肿瘤药物。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述抗肿瘤药物为阿霉素、蛇床子素、紫杉醇、去氢骆驼蓬、喜树碱、奥拉帕利、达沙替尼和依托泊苷中的一种或几种。
9.一种pH响应性聚合物载药胶束，其特征在于：包括聚合物形成的胶束以及包载于所述胶束内的抗肿瘤药物。
10.根据权利要求9所述的pH响应性聚合物载药胶束，其特征在于：所述pH响应性聚合物载药胶束的粒径为100-150nm。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104548109A (zh) * 2013-10-24 2015-04-29 财团法人工业技术研究院 生物医学组合物
CN106265510A (zh) * 2016-08-17 2017-01-04 宁夏医科大学 一种肿瘤细胞内pH触发式释药的多级靶向聚合物胶束及其制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104548109A (zh) * 2013-10-24 2015-04-29 财团法人工业技术研究院 生物医学组合物
CN106265510A (zh) * 2016-08-17 2017-01-04 宁夏医科大学 一种肿瘤细胞内pH触发式释药的多级靶向聚合物胶束及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FANG LI等: "Enhanced Cellular Internalization and On-Demand Intracellular Release of Doxorubicin by Stepwise pH-/Reduction-Responsive Nanoparticles", 《ACS APPLIED MATERIALS & INTERFACES》 *
LIPENG QIU等: "Self-assembled pH-responsive hyaluronic acid-g-poly(L-histidine) copolymer micelles for targeted intracellular delivery of doxorubicin", 《ACTA BIOMATERIALIA》 *
朱梦琴等: "透明质酸自组装聚合物胶束的制备及表征", 《化工进展》 *

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