CN104628885B - 一种改性葡聚糖及其制备方法、葡聚糖胶束及其制备方法、载药颗粒及其制备方法和水凝胶 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种改性葡聚糖及其制备方法，具有式I或式II所示的结构。本发明提供了一种葡聚糖胶束及其制备方法，这种葡聚糖胶束可作为药物载体，具有较好的缓释性。本发明提供的葡聚糖胶束制备得到的载药颗粒能够缓慢释放，具有较好的药效；此外，本发明提供的载药颗粒粒径较小、大小均一，在水中的分散性和稳定性较好。本发明提供的水凝胶由载药颗粒和聚‑L‑赖氨酸均聚物交联而成，这种水凝胶可在病灶部位靶向缓慢释放，在肿瘤治疗领域具有明显优势；此外，这种水凝胶可以担载抗肿瘤药物，载药效果好；另外，这种水凝胶具有较好的生物降解性和生物相容性。

Description

一种改性葡聚糖及其制备方法、葡聚糖胶束及其制备方法、载 药颗粒及其制备方法和水凝胶

技术领域

本发明涉及葡聚糖技术领域，尤其涉及一种改性葡聚糖及其制备方法、葡聚糖胶束及其制备方法、载药颗粒及其制备方法和水凝胶。

背景技术

恶性肿瘤是一类严重威胁人类生命健康的疾病，因机体自身抗病能力不同，表现出各种临床症状，发病几乎可以遍及人体的各个部位、组织和器官。目前治疗恶性肿瘤有多种手段和方法，主要包括外科手术切除、化学治疗(化疗)、放射线治疗(放疗)、免疫治疗、单克隆抗体治疗、热疗、光动力学治疗等。化疗是一种常用的治疗方法，临床上常采用阿霉素和顺铂等化疗药物，这些药物在一些转移性肿瘤中已取得了较好的疗效。但这类化疗药物在临床上多以静脉滴注方式给药，其毒副作用大，容易引起肾毒性、肠道毒性、骨髓抑制、周围神经毒性等；而且药物经血液循环，代谢损失严重，达到肿瘤病灶部分剂量较小；为了提高化疗药物的药效和降低其毒副作用，可将其借以载体担载(保护)，制成能有效到达肿瘤部位的靶向制剂。

药物载体是利用天然或合成的高分子纳米材料、无机材料等，通过共价键合或非共价复合等方式制备的药物输送系统，将药物经体液循环传输到体内病灶部位。申请号为200810246720.0的中国专利公开了一种药物载体，其活性成分是聚乙二醇单甲醚-聚己内酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物形成的带正电荷的纳米颗粒。聚乙二醇单甲醚-聚己内酯-聚磷酸酯三嵌段共聚物是生物相容性的阳离子型两亲性嵌段共聚物，在水溶液中自组装形成具有疏水性核并带有正电荷的纳米颗粒，具有良好的稳定性，现有技术提供的这种药物载体的制备方法简单，可重复性高，可将疏水性抗癌药物包载进其疏水性内核中，和带负电的siRNA结合；从而形成同时输运抗癌药物和siRNA的给药体系；但是这种药物载体包裹药物后突释现象严重，影响药效的发挥。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种改性葡聚糖及其制备方法、葡聚糖胶束及其制备方法、载药颗粒及其制备方法和水凝胶，本发明提供的改性葡聚糖可用于制备药物载体，这种改性葡聚糖制备的药物载体具有缓释性，能够使药效更好的发挥。

本发明提供了一种改性葡聚糖，具有式I所示的结构或式II所示的结构：

z和y独立的选自50～600；R和R₁独立地选自-H或具有式1所示结构的基团：

本发明提供了一种改性葡聚糖的制备方法，包括：

将胆固醇甲酰氯和葡聚糖进行反应，得到改性葡聚糖，所述改性葡聚糖具有式I所示的结构：

式I中，z为50～600；R选自-H或具有式1所示结构的基团：

本发明提供了一种改性葡聚糖的制备方法，包括：

将具有式I所示结构的化合物进行氧化修饰，得到改性葡聚糖，所述改性葡聚糖具有式II所示的结构：

z和y独立的选自50～600；R和R₁独立地选自-H或具有式1所示结构的基团：

优选的，所述具有式II所示结构的改性葡聚糖的制备方法具体为：

将具有式I所示结构的化合物和高碘酸盐进行反应，得到改性葡聚糖。

本发明提供的改性葡聚糖及方法制备得到的改性葡聚糖可用于制备药物载体，采用本发明提供的改性葡聚糖制备得到的药物载体具有较好的缓释性，有利于药效的发挥。

本发明提供了一种葡聚糖胶束，由改性葡聚糖制备得到，所述改性葡聚糖为上述技术方案所述的改性葡聚糖或上述技术方案所述的方法制备得到的改性葡聚糖。

本发明提供了一种葡聚糖胶束的制备方法，包括：

将改性葡聚糖依次进行溶解、稀释、分散、透析、过滤和干燥，得到葡聚糖胶束，所述改性葡聚糖为上述技术方案所述的改性葡聚糖或上述技术方案所述的方法制备得到的改性葡聚糖。

本发明提供的葡聚糖胶束及方法制备得到的葡聚糖胶束可作为药物载体，这种葡聚糖胶束是由上述技术方案所述的改性葡聚糖制备得到的，因此这种葡聚糖胶束也具有较好的缓释性。

本发明提供了一种载药颗粒，由上述技术方案所述的葡聚糖胶束和药物制备得到或由上述技术方案所述的方法制备得到的葡聚糖胶束和药物制备得到。

本发明提供了一种载药颗粒的制备方法，包括：

将葡聚糖胶束和药物溶液混合，得到混合溶液；

将所述混合溶液依次进行透析和干燥，得到载药颗粒；

所述葡聚糖胶束为上述技术方案所述的葡聚糖胶束或上述技术方案所述的方法制备得到的葡聚糖胶束。

本发明提供的载药颗粒及其制备方法，由上述技术方案所述的葡聚糖胶束制备得到，这种载药颗粒中的药物释放缓慢，具有较好的药效。实验结果表明，本发明提供的载药颗粒中的药物10天释放了90％。

此外，本发明提供的载药颗粒粒径较小、大小均一，在水中的分散性和稳定性较好。实验结果表明，本发明提供的载药颗粒分散在水中无团聚现象，载药颗粒的粒径为265nm～270nm。

本发明提供了一种水凝胶，由载药颗粒、聚-L-赖氨酸均聚物和溶剂制备得到；

所述载药颗粒由改性葡聚糖和药物制备得到，所述改性葡聚糖具有式II所示的结构：

式II中，y为50～600；R₁选自-H或具有式1所示结构的基团：

所述聚-L-赖氨酸均聚物具有式III所示的结构：

式III中，23≤n≤136。

优选的，所述载药颗粒在所述水凝胶中的质量含量选自0.5％～1％；

所述聚-L-赖氨酸均聚物在所述水凝胶中的质量含量选自2％～6％。

本发明提供的水凝胶由载药颗粒和聚-L-赖氨酸均聚物交联而成，这种水凝胶可在病灶部位靶向缓慢释放，在肿瘤治疗领域具有明显优势。实验结果表明，本发明提供的水凝胶中的药物10天释放了60％；本发明提供的水凝胶用于治疗裸鼠肺癌肿瘤20天，肿瘤体积由500mm³降低到100mm³，治疗效果良好。

此外，本发明提供的水凝胶可以担载抗肿瘤药物，尤其是蛋白类药物，载药效果好。另外，本发明提供的水凝胶具有较好的生物降解性和生物相容性。实验结果表明，本发明提供的水凝胶在磷酸盐缓冲液中21天降解了60％，具有较好的生物相容性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例1制备得到的改性葡聚糖的核磁共振氢谱图；

图2为本发明实施例3制备得到的载药颗粒的透射电子显微镜图；

图3为本发明实施例3制备得到的载药颗粒的粒径分布图；

图4为本发明实施例28制备得到的聚-L-赖氨酸均聚物的核磁共振氢谱图；

图5为本发明实施例29制备得到的聚-L-赖氨酸均聚物的核磁共振氢谱图；

图6为本发明实施例21制备得到的载药颗粒和实施例33制备得到的水凝胶中阿霉素的释放速度数据图；

图7为本发明实施例33制备得到的水凝胶在磷酸盐缓冲溶液中的降解时间的数据图；

图8为本发明实施例33制备得到的水凝胶治疗裸鼠肺癌肿瘤的效果图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供了一种改性葡聚糖，具有式I所示的结构或式II所示的结构：

z和y独立的选自50～600；R和R₁独立地选自-H或具有式1所示结构的基团：

在本发明的实施例中，z和y独立的选自60～560；在其他的实施例中，z和y独立的选自80～500；在另外的实施例中，z和y独立的选自200～400。在本发明的优选实施例中，式I中的R和式II中的R₁独立地选自具有式1所示结构的基团。在本发明的优选实施例中，所述改性葡聚糖为具有式II所示结构的化合物。

本发明提供了一种改性葡聚糖的制备方法：

将胆固醇甲酰氯和葡聚糖进行反应，得到改性葡聚糖，所述改性葡聚糖具有式I所示的结构。

在本发明的实施例中，胆固醇甲酰氯和葡聚糖进行反应的温度可以为30℃～40℃。在本发明的实施例中，胆固醇甲酰氯和葡聚糖进行反应的时间可以为12小时～24小时。在本发明的实施例中，所述胆固醇甲酰氯和葡聚糖的摩尔比可以为(0.05～0.2):1；在其他的实施例中，所述胆固醇甲酰氯和葡聚糖的摩尔比可以为(0.1～0.15):1。

在本发明的优选实施例中，所述具有式I所示结构的改性葡聚糖的制备方法可以为：在三乙胺的作用下，将胆固醇甲酰氯和葡聚糖进行反应，得到具有式I所示结构的改性葡聚糖。在本发明的实施例中，所述三乙胺和葡聚糖的质量比可以为(0.1～0.5)：1；在其他的实施例中，所述三乙胺和葡聚糖的质量比可以为(0.2～0.3)：1。

在其他优选实施例中，所述具有式I所示结构的改性葡聚糖的制备方法可以为：在三乙胺的作用下，将胆固醇甲酰氯和葡聚糖在溶剂中进行反应，得到具有式I所示结构的改性葡聚糖。在本发明的实施例中，所述胆固醇甲酰氯和葡聚糖反应的溶剂包括二氯甲烷和二甲基亚砜。在本发明的实施例中，所述二氯甲烷和二甲基亚砜的体积比选自(0.1～0.5)：1；在其他的实施例中，所述二氯甲烷和二甲基亚砜的体积比选自(0.2～0.3)：1。

在另外的优选实施例中，所述具有式I所示结构的改性葡聚糖的制备方法可以为：在三乙胺的作用下，将胆固醇甲酰氯的二氯甲烷溶液和葡聚糖的二甲基亚砜溶液进行反应，得到具有式I所示结构的改性葡聚糖。在本发明的实施例中，所述胆固醇甲酰氯的二氯甲烷溶液的质量浓度选自0.01g/mL～0.03g/mL。在本发明的实施例中，所述葡聚糖的二甲基亚砜溶液的质量浓度选自0.01g/mL～0.03g/mL。

在本发明的实施例中，所述胆固醇甲酰氯和葡聚糖反应完成后，将得到的反应产物依次进行沉降、过滤和干燥，得到具有式I所示结构的改性葡聚糖。在本发明的实施例中，所述沉降的试剂选自二氯甲烷。在本发明的实施例中，胆固醇甲酰氯和葡聚糖反应得到的反应产物的干燥方法选自真空干燥。

在本发明中，所述改性葡聚糖具有式I所示的结构与上述技术方案所述具有式I所示结构的改性葡聚糖一致，在此不再赘述。

本发明提供了一种改性葡聚糖的制备方法，包括：将具有式I所示结构的化合物进行氧化修饰，得到改性葡聚糖，所述改性葡聚糖具有式II所示的结构。在本发明的优选实施例中，所述具有式II所示结构的改性葡聚糖的制备方法可以为：将具有式I所示结构的化合物和高碘酸盐进行反应，得到具有式II所示结构的改性葡聚糖。在本发明的实施例中，所述高碘酸盐选自碱金属高碘酸盐；在其他的实施例中，所述高碘酸盐选自高碘酸钠。在本发明的实施例中，所述具有式I所示结构的化合物和高碘酸盐的质量比可以为1:(1～1.5)。

在本发明的优选实施例中，所述具有式II所示结构的改性葡聚糖的制备方法可以为：将具有式I所示结构的化合物分散于水中，得到混合液；向所述混合液中加入高碘酸盐进行反应，得到具有式II所示结构的改性葡聚糖。在本发明的实施例中，所述具有式I所示结构的化合物和高碘酸盐反应完成后，将得到的反应产物依次进行透析和干燥，得到具有式II所示结构的改性葡聚糖。在本发明的实施例中，具有式I所示结构的化合物和高碘酸盐反应得到的反应产物透析的截留分子量选自3500道尔顿～7000道尔顿。在本发明的实施例中，所述式I所示结构的化合物和高碘酸盐反应得到的反应产物干燥的方法选自冷冻干燥。在本发明的实施例中，所述冷冻干燥的温度选自-75℃～-85℃。

在本发明中，所述具有式I所示结构的化合物和上述技术方案所述具有式I所示结构的改性葡聚糖一致，在此不再赘述。在本发明中，所述改性葡聚糖具有式II所示的结构与上述技术方案所述具有式II所示结构的改性葡聚糖一致，在此不再赘述。

本发明提供的改性葡聚糖及方法制备得到的改性葡聚糖可用于制备药物载体，采用本发明提供的改性葡聚糖制备得到的药物载体具有较好的缓释性，有利于药效的发挥。

本发明提供了一种葡聚糖胶束，由改性葡聚糖制备得到，所述改性葡聚糖为上述技术方案所述的改性葡聚糖或上述技术方案所述的方法制备得到的改性葡聚糖。

本发明提供了一种葡聚糖胶束的制备方法，包括：

将改性葡聚糖依次进行溶解、稀释、分散、透析、过滤和干燥，得到葡聚糖胶束；所述改性葡聚糖为上述技术方案所述的改性葡聚糖或上述技术方案所述的方法制备得到的改性葡聚糖。在本发明的实施例中，所述溶解的溶剂选自二甲基亚砜。在本发明的实施例中，所述溶解的温度选自35℃～45℃。在本发明的实施例中，所述溶解的时间选自6小时～12小时。在本发明的实施例中，可以在搅拌的条件下进行所述溶解。在本发明的实施例中，所述稀释的试剂选自去离子水。在本发明的实施例中，所述稀释试剂的体积为溶解溶剂体积的2倍～5倍。在本发明的实施例中，所述稀释的时间选自3小时～5小时。在本发明的实施例中，可以在搅拌的条件下进行所述稀释。

在本发明的实施例中，所述分散的方法可以选自超声分散。在本发明的实施例中，所述超声分散的温度选自35℃～40℃。在本发明的实施例中，将所述改性葡聚糖进行透析的截留分子量选自3500道尔顿～7000道尔顿。在本发明的实施例中，将所述改性葡聚糖进行透析的时间选自2天～3天。在本发明的实施例中，所述过滤的方法选自滤膜过滤。在本发明的实施例中，所述滤膜的孔径选自0.4微米～0.5微米。在本发明的实施例中，将所述改性葡聚糖进行干燥的方法选自冷冻干燥。在本发明的实施例中，所述冷冻干燥的温度选自-75℃～-85℃。

本发明提供的葡聚糖胶束及方法制备得到的葡聚糖胶束可作为药物载体，这种葡聚糖胶束载药后具有较好的缓释性。

本发明提供了一种载药颗粒，由上述技术方案所述的葡聚糖胶束和药物制备得到或上述技术方案所述的方法制备得到的葡聚糖胶束和药物制备得到。

本发明提供了一种载药颗粒的制备方法，包括：

将所述葡聚糖胶束和药物溶液混合，得到混合溶液；

将所述混合溶液依次进行透析和干燥，得到载药颗粒；

所述葡聚糖胶束为上述技术方案所述的葡聚糖胶束或上述技术方案所述的方法制备得到的葡聚糖胶束制备得到。

本发明将葡聚糖胶束和药物溶液混合，得到混合溶液。在本发明的实施例中，所述混合的温度选自30℃～40℃。在本发明的实施例中，所述混合的时间选自6小时～12小时。在本发明的实施例中，可以在搅拌的条件下进行所述混合。

在本发明中，所述葡聚糖胶束与上述技术方案所述葡聚糖胶束一致，在此不再赘述。在本发明的优选实施例中，所述葡聚糖胶束为由具有式II所示结构的改性葡聚糖制备得到的葡聚糖胶束；采用这种葡聚糖胶束制备的载药颗粒表面经过氧化修饰后带有醛基，对含氨基类抗肿瘤药物的载药率高。

在本发明的实施例中，所述药物溶液选自药物水溶液。在本发明的实施例中，所述药物溶液中的药物选自含氨基类抗肿瘤药物中的一种或几种；在其他的实施例中，所述药物溶液中的药物选自阿霉素、白介素和干扰素中的一种或几种。在本发明的实施例中，所述药物溶液中的药物可以为治疗乳腺癌的药物。

本发明得到混合溶液后，将所述混合溶液依次进行透析和干燥，得到载药颗粒。在本发明的实施例中，所述混合溶液透析的截留分子量选自3500道尔顿～7000道尔顿。在本发明的实施例中，所述混合溶液透析的时间选自12小时～24小时。在本发明的实施例中，所述混合溶液干燥的方法选自冷冻干燥。

本发明提供的载药颗粒，由上述技术方案所述的葡聚糖胶束制备得到或上述技术方案所述的方法制备得到的葡聚糖胶束制备得到，这种载药颗粒中的药物释放缓慢，具有较好的药效。此外，本发明提供的载药颗粒粒径较小、大小均一，在水中的分散性和稳定性较好。

本发明提供了一种水凝胶，由载药颗粒、聚-L-赖氨酸均聚物和溶剂制备得到；

所述载药颗粒由改性葡聚糖和药物制备得到，所述改性葡聚糖具有式II所示的结构：

式II中，y为50～600；R₁选自-H或具有式1所示结构的基团：

所述聚-L-赖氨酸均聚物具有式III所示的结构：

式III中，23≤n≤136。

本发明提供的水凝胶由载药颗粒、聚-L-赖氨酸均聚物和溶剂制备得到。在本发明中，所述载药颗粒由具有式II所示结构的改性葡聚糖和药物制备得到。在本发明中，所述具有式II所示结构的改性葡聚糖与上述技术方案所述具有式II所示结构的改性葡聚糖一致，在此不再赘述。在本发明的实施例中，水凝胶中载药颗粒的制备方法与上述技术方案所述载药颗粒的制备方法一致，即由具有式II所示结构的改性葡聚糖制备得到葡聚糖胶束，再将制备得到的葡聚糖胶束和药物制备成载药颗粒。在本发明中，所述葡聚糖胶束的制备方法与上述技术方案所述葡聚糖胶束的制备方法一致，在此不再赘述。

在本发明的实施例中，所述载药颗粒可以为载有不同药物的多种载药颗粒，将载有不同药物的不同载药颗粒联合应用，能够增强本发明提供的水凝胶的治疗效果。

在本发明中，所述聚-L-赖氨酸均聚物具有式III所示的结构，式III中，23≤n≤136。在本发明的实施例中，式III中，50≤n≤100。在本发明的实施例中，所述聚-L-赖氨酸均聚物的制备方法可以为：

将正己胺和N(ε)-苯甲氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐进行聚合反应，得到中间产物；

将所述中间产物和酸性溶液进行反应，得到聚-L-赖氨酸均聚物；所述酸性溶液的溶质为三氟乙酸和氢溴酸；所述酸性溶液的溶剂为乙酸。

在本发明的实施例中，所述正己胺选自无水正己胺。

在本发明的实施例中，所述N(ε)-苯甲氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐的制备方法为：

将N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸和双(三氯甲基)碳酸酯进行聚合反应，得到N(ε)-苯甲氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐。

在本发明的实施例中，所述N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸和双(三氯甲基)碳酸酯的摩尔比为1:(6～8)；在其他的实施例中，所述N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸和双(三氯甲基)碳酸酯的摩尔比为1:7。在本发明的实施例中，N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸和双(三氯甲基)碳酸酯聚合反应的温度为50℃～60℃。在本发明的实施例中，N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸和双(三氯甲基)碳酸酯聚合反应的时间为3小时～5小时。

在本发明的实施例中，所述正己胺和N(ε)-苯甲氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐的质量比为1:(80～100)；在其他的实施例中，所述正己胺和N(ε)-苯甲氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐的质量比为1:(85～95)。

在本发明的优选实施例中，将正己胺和N(ε)-苯甲氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐在溶剂中进行聚合反应，得到中间产物。在本发明的实施例中，所述正己胺和N(ε)-苯甲氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐聚合反应的溶剂选自干燥的溶剂。在本发明的实施例中，所述正己胺和N(ε)-苯甲氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐聚合反应的溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺或氯仿。

在本发明的实施例中，得到中间产物后，将所述中间产物和酸性溶液进行反应，得到聚-L-赖氨酸均聚物，所述酸性溶液的溶质为三氟乙酸和氢溴酸；所述酸性溶液的溶剂为乙酸。在本发明的实施例中，所述中间产物和酸性溶液的反应时间为1小时～3小时。在本发明的实施例中，所述中间产物和酸性溶液的反应温度为25℃～35℃；在其他的实施例中，所述中间产物和酸性溶液的反应温度为30℃。

在本发明的实施例中，所述三氟乙酸和氢溴酸的摩尔比为1:(2.5～3)；在其他的实施例中，所述三氟乙酸和氢溴酸的摩尔比为1:(2.7～2.8)。在本发明的实施例中，所述酸性溶液的质量浓度为30％～35％；在其他的实施例中，所述酸性溶液的质量浓度为33％。本发明对所述酸性溶液的用量没有特殊的限制，采用不同用量的酸性溶液可制备得到不同分子量的聚-L-赖氨酸均聚物。

在本发明的实施例中，所述水凝胶中的溶剂为缓冲溶液、生理盐水或组织培养液。在本发明的实施例中，所述载药颗粒在所述水凝胶中的质量含量为0.5％～1％；在其他的实施例中，所述载药颗粒在所述水凝胶中的质量含量为0.6％～0.8％。在本发明的实施例中，所述聚L-赖氨酸均聚物在所述水凝胶中的质量含量为2％～6％；在其他的实施例中，所述聚L-赖氨酸均聚物在所述水凝胶中的质量含量为3％～4％。

在本发明中，所述水凝胶的制备方法为：

将载药颗粒、聚L-赖氨酸均聚物和溶剂混合，得到水凝胶。

在本发明的实施例中，所述混合的时间可以为1分钟～5分钟。在本发明的优选实施例中，所述水凝胶的制备方法可以为将载药颗粒和溶剂混合，得到载药颗粒溶液；将聚L-赖氨酸均聚物和溶剂混合，得到聚L-赖氨酸均聚物溶液；将所述载药颗粒溶液和聚L-赖氨酸均聚物溶液混合静置成胶，得到水凝胶。在本发明的实施例中，所述载药颗粒溶液的质量浓度可以为8mg/mL～12mg/mL。在本发明的实施例中，所述聚L-赖氨酸均聚物溶液的质量浓度可以为55mg/mL～65mg/mL。在本发明的实施例中，可以控制水凝胶的成胶时间在1分钟～5分钟的范围内，符合临床注射的要求。

本发明提供的水凝胶中含有上述技术方案所述的载药颗粒，使这种水凝胶具有较好的缓释性，载药颗粒能够在肿瘤病灶部位富集，提高水凝胶的治疗效果。此外，本发明提供的水凝胶是一种交联的高分子三维网络结构，形状稳定，能够选择性的作用于靶器官、靶组织或靶细胞内，包载蛋白类药物，减少体液对药物的干扰，降低药物的不良反应，增强药物的疗效。另外，本发明提供的水凝胶具有较好的生物降解性和生物相容性。

将本发明提供的改性葡聚糖进行核磁共振检测，检测结果为，本发明提供的改性葡聚糖具有式I或式II所示的结构。

将本发明提供的载药颗粒采用透射电子显微镜进行测试，测试结果为，本发明提供的载药颗粒大小均一，在水中分散均匀、稳定性好；本发明提供的载药颗粒的粒径为265nm～270nm，粒径较小。

将本发明提供的载药颗粒装入玻璃试管中，向所述玻璃试管中加入4mL的pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液，得到混合液；采用锡箔纸将玻璃试管完全包住，避免载药颗粒中的药物分解，将包裹锡箔纸的玻璃试管放入37℃的恒温震荡培养箱中，每隔30分钟，从玻璃管中取出2mL的混合液，同时向玻璃管中补加2mL的磷酸盐缓冲液；采用荧光光谱仪检测所述混合液中的药物含量，检测时的激发波长为472nm，发生波长为592nm，根据检测得到的药物含量计算出载药颗粒中药物的释放量；测试结果为，本发明提供的载药颗粒中的药物10天释放了90％。

将本发明提供的水凝胶装入玻璃试管中，向所述玻璃试管中加入4mL的pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液，得到混合液；采用锡箔纸将玻璃试管完全包住，避免水凝胶中的药物分解，将包裹锡箔纸的玻璃试管放入37℃的恒温震荡培养箱中，每隔30分钟，从玻璃管中取出2mL的混合液，同时向玻璃管中补加2mL的磷酸盐缓冲液；采用荧光光谱仪检测所述混合液中的药物含量，检测时的激发波长为472nm，发生波长为592nm，根据检测得到的药物含量计算出水凝胶中药物的释放量；测试结果为，本发明提供的水凝胶中的药物10天释放了60％。

将本发明提供的水凝胶和磷酸盐缓冲液按照质量比为1：10的比例混合，将得到的混合液置于37℃恒温震荡培养箱中，分别在1天、3天、5天、7天、10天、12天、14天、21天后将混合液中的水凝胶取出、擦干，称量水凝胶的重量，测试水凝胶的降解性和生物相容性；测试结果为，本发明提供的水凝胶在磷酸盐缓冲液中21天降解了60％，具有较好的生物相容性。

按照下述方法测试本发明提供的水凝胶的治疗效果：

将人肺腺癌A549细胞系接种在BALB/c裸鼠体内，接种第七天后，将本发明提供的水凝胶皮下注射于BALB/c裸鼠肿瘤旁，观察记录1天～21天内裸鼠肿瘤的体积V：

V＝a×b²/2；

其中a，b分别为肿瘤的长度和宽度；

以质量浓度为0.33mg/mL阿霉素水溶液作为药效参照，以注射水凝胶当天记作0天；以不含药物的水凝胶和磷酸盐缓冲液作为对照组，所述不含药物的水凝胶的制备方法为：

将100mg的本发明提供的葡聚糖胶束加入到10mL的磷酸盐缓冲溶液中，室温超声分散，得到混合溶液；将600mg的具有式III所示结构的聚-L-赖氨酸均聚物溶解于10mL的磷酸盐缓冲溶液中，得到均聚物溶液；取0.2mL的上述混合溶液和0.2mL的上述均聚物溶液置于玻璃试管中，涡旋混合静置成胶，得到不含药物的水凝胶。

测试结果为，本发明提供的水凝胶用于治疗裸鼠肺癌肿瘤20天，肿瘤体积由500mm³降低到100mm³，治疗效果良好。

本发明以下实施例所用的材料均为市售商品。

实施例1

将0.55g的胆固醇甲酰氯溶于20mL干燥的二氯甲烷中，得到胆固醇甲酰氯溶液；将1g的葡聚糖溶解在50mL的无水二甲基亚砜中，向其中加入0.34mL的三乙胺，得到混合溶液；将所述胆固醇甲酰氯溶液通过恒压漏斗逐滴加入到所述混合溶液中，在37℃恒温水浴中持续搅拌24小时进行反应，得到橘黄色反应产物；将所述反应产物用二氯甲烷沉降后分离、真空干燥，得到中间产物；将0.5g的上述中间产物分散在水相中，向所述水相中加入0.66g的高碘酸钠对所述中间产物进行12小时的氧化处理，将氧化处理后得到的产物采用MWCO3500型号的透析袋透析1天后，冷冻干燥，得到改性葡聚糖。

对本发明实施例1制备得到的改性葡聚糖进行核磁共振检测，检测结果如图1所示，图1为本发明实施例1制备得到的改性葡聚糖的核磁共振氢谱图，由图1可知，本发明实施例1制备得到的改性葡聚糖具有式2所示的结构：

式2中R₁为

y为550。

实施例2

将170mg的实施例1制备得到的改性葡聚糖溶解于85mL的二甲基亚砜中，在40℃恒温水浴中搅拌12小时，得到混合溶液；向所述混合溶液中逐滴加入200mL的去离子水，搅拌3小时后进行超声分散；将超声分散后的溶液移至MWCO 3500型号的透析袋中，采用去离子水透析3天；将透析后的溶液通过孔径为0.45微米的滤膜过滤后冷冻干燥，得到葡聚糖胶束。

实施例3

将实施例3制备得到的葡聚糖胶束与质量浓度为1mg/mL的阿霉素水溶液混合，在35℃下的水浴中搅拌12小时，得到混合溶液；将所述混合溶液在MWCO 3500型号的透析袋中进行24小时的透析；将透析后的溶液冷冻干燥，得到载药颗粒。

将本发明实施例3制备得到的载药颗粒分散在水中后，进行透射电子显微镜测试，测试结果如图2所示，图2为本发明实施例3制备得到的载药颗粒的透射电子显微镜图，由图2可知，本发明实施例2制备得到的载药颗粒大小均一，分散性较好，在水中的稳定性较好，无团聚现象。

通过图2所示的透射电子显微镜图，测试本发明实施例3制备得到的载药颗粒的粒径，测试结果如图3所示，图3为本发明实施例3制备得到的载药颗粒的粒径分布图，由图3可知，本发明实施例3制备得到的载药颗粒的粒径为265nm～270nm，粒径较小。

实施例4

按照实施例1所述的方法制备得到改性葡聚糖，与实施例1不同的是，采用0.8g的中间产物替换0.5g的中间产物；采用0.53g的高碘酸钠替换0.66g的高碘酸钠。

实施例5

将180mg的实施例4制备得到的改性葡聚糖溶解于95mL的二甲基亚砜中，在40℃恒温水浴中搅拌12小时，得到混合溶液；向所述混合溶液中逐滴加入210mL去离子水，搅拌3小时后进行超声分散；将超声分散后的溶液移至MWCO 3500型号的透析袋中，采用去离子水透析3天；将透析后的溶液通过孔径为0.45微米的滤膜过滤后冷冻干燥，得到葡聚糖胶束。

实施例6

按照实施例3所述的方法制备得到载药颗粒，与实施例3不同的是，采用实施例5制备得到的葡聚糖胶束替换实施例2制备得到的葡聚糖胶束。

实施例7

按照实施例1所述的方法制备得到改性葡聚糖，与实施例1不同的是，采用0.16g的高碘酸钠替换0.66g的高碘酸钠。

实施例8

将200mg的实施例7制备得到的改性葡聚糖溶解于115mL的二甲基亚砜中，在40℃恒温水浴中搅拌12小时，得到混合溶液；向所述混合溶液中逐滴加入240mL去离子水，搅拌3小时后进行超声分散；将超声分散后的溶液移至MWCO 3500型号的透析袋中，采用去离子水透析3天；将透析后的溶液通过孔径为0.45微米的滤膜过滤后冷冻干燥，得到葡聚糖胶束。

实施例9

按照实施例3所述的方法制备得到载药颗粒，与实施例3不同的是，采用实施例8制备得到的葡聚糖胶束替换实施例2制备得到的葡聚糖胶束。

实施例10

将0.33g的胆固醇甲酰氯溶于15mL干燥的二氯甲烷中，得到胆固醇甲酰氯溶液；将0.8g的葡聚糖溶解在35mL的无水二甲基亚砜中，向其中加入0.25mL的三乙胺，得到混合溶液；将所述胆固醇甲酰氯溶液通过恒压漏斗逐滴加入到所述混合溶液中，在37℃恒温水浴中持续搅拌24小时进行反应，得到橘黄色反应产物；将所述反应产物用二氯甲烷沉降后分离、真空干燥，得到中间产物；将0.4g的上述中间产物分散在水相中，向所述水相中加入0.53g的高碘酸钠对所述中间产物进行12小时的氧化处理，将氧化处理后得到的产物采用MWCO 3500型号的透析袋透析1天后，冷冻干燥，得到改性葡聚糖。

实施例11

按照实施例2所述的方法制备得到葡聚糖胶束，与实施例2不同的是，采用实施例10制备得到的改性葡聚糖替换实施例1制备得到的改性葡聚糖。

实施例12

按照实施例3所述的方法制备得到载药颗粒，与实施例3不同的是，采用实施例11制备得到的葡聚糖胶束替换实施例2制备得到的葡聚糖胶束。

实施例13

按照实施例10所述的方法制备得到改性葡聚糖，与实施例13不同的是，采用0.5g的中间产物替换0.4g的中间产物；采用0.33g的高碘酸钠替换0.53g的高碘酸钠。

实施例14

按照实施例5所述的方法制备得到葡聚糖胶束，与实施例5不同的是，采用实施例13制备得到的改性葡聚糖替换实施例4制备得到的改性葡聚糖。

实施例15

按照实施例3所述的方法制备得到载药颗粒，与实施例3不同的是，采用实施例14制备得到的葡聚糖胶束替换实施例2制备得到的葡聚糖胶束。

实施例16

按照实施例10所述的方法制备得到改性葡聚糖，与实施例10不同的是，采用0.5g的中间产物替换0.4g的中间产物；采用0.16g的高碘酸钠替换0.53g的高碘酸钠。

实施例17

按照实施例8所述的方法制备葡聚糖胶束，与实施例8不同的是，采用实施例16制备得到的改性葡聚糖替换实施例7制备得到的改性葡聚糖。

实施例18

按照实施例3所述的方法制备得到载药颗粒，与实施例3不同的是，采用实施例17制备得到的葡聚糖胶束替换实施例2制备得到的葡聚糖胶束。

实施例19

将0.28g的胆固醇甲酰氯溶于20mL干燥的二氯甲烷中，得到胆固醇甲酰氯溶液；将1g的葡聚糖溶解在50mL的无水二甲基亚砜中，向其中加入0.34mL的三乙胺，得到混合溶液；将所述胆固醇甲酰氯溶液通过恒压漏斗逐滴加入到所述混合溶液中，在37℃恒温水浴中持续搅拌24小时进行反应，得到橘黄色反应产物；将所述反应产物用二氯甲烷沉降后分离、真空干燥，得到中间产物；将0.8g的上述中间产物分散在水相中，向所述水相中加入1.06g的高碘酸钠对所述中间产物进行12小时的氧化处理，将氧化处理后得到的产物采用MWCO3500型号的透析袋透析1天后，冷冻干燥，得到改性葡聚糖。

实施例20

将190mg的实施例19制备得到的改性葡聚糖溶解于110mL的二甲基亚砜中，在40℃恒温水浴中搅拌12小时，得到混合溶液；向所述混合溶液中逐滴加入225mL去离子水，搅拌3小时后进行超声分散；将超声分散后的溶液移至MWCO 3500型号的透析袋中，采用去离子水透析3天；将透析后的溶液通过孔径为0.45微米的滤膜过滤后冷冻干燥，得到葡聚糖胶束。

实施例21

按照实施例3所述的方法制备得到载药颗粒，与实施例3不同的是，采用实施例20制备得到的葡聚糖胶束替换实施例2制备得到的葡聚糖胶束。

将本发明实施例21制备得到的载药颗粒装入玻璃试管中，向所述玻璃试管中加入4mL的pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液，得到混合液；采用锡箔纸将玻璃试管完全包住，避免载药颗粒中的阿霉素分解，将包裹锡箔纸的玻璃试管放入37℃的恒温震荡培养箱中，每隔30分钟，从玻璃管中取出2mL的混合液，同时向玻璃管中补加2mL的磷酸盐缓冲液；采用荧光光谱仪检测所述混合液中的阿霉素含量，检测时的激发波长为472nm，发生波长为592nm，根据检测得到的阿霉素含量计算出载药颗粒中阿霉素的释放量。测试结果如图6所示，图6为本发明实施例21制备得到的载药颗粒和实施例33制备得到的水凝胶中阿霉素的释放速度数据图，其中曲线1为本发明实施例21制备得到的载药颗粒中阿霉素的释放速度数据曲线，由曲线1可知，本发明实施例21制备得到的载药颗粒中的阿霉素10天释放了90％。

实施例22

按照实施例19所述的方法制备得到改性葡聚糖，与实施例19不同的是，采用0.5g的中间产物替换0.8g的中间产物；采用0.33g的高碘酸钠替换1.06g的高碘酸钠。

实施例23

按照实施例5所述的方法制备得到葡聚糖胶束，与实施例5不同的是，采用实施例22制备得到的改性葡聚糖替换实施例4制备得到的改性葡聚糖。

实施例24

按照实施例3所述的方法制备得到载药颗粒，与实施例3不同的是，采用实施例23制备得到的葡聚糖胶束替换实施例2制备得到的葡聚糖胶束。

实施例25

将0.55g的胆固醇甲酰氯溶于35mL干燥的二氯甲烷中，得到胆固醇甲酰氯溶液；将2g的葡聚糖溶解在75mL的无水二甲基亚砜中，向其中加入0.75mL的三乙胺，得到混合溶液；将所述胆固醇甲酰氯溶液通过恒压漏斗逐滴加入到所述混合溶液中，在37℃恒温水浴中持续搅拌24小时进行反应，得到橘黄色反应产物；将所述反应产物用二氯甲烷沉降后分离、真空干燥，得到中间产物；将1.2g的上述中间产物分散在水相中，向所述水相中加入0.4g的高碘酸钠对所述中间产物进行12小时的氧化处理，将氧化处理后得到的产物采用MWCO 3500型号的透析袋透析1天后，冷冻干燥，得到改性葡聚糖。

实施例26

按照实施例8所述的方法制备得到葡聚糖胶束，与实施例8不同的是，采用实施例25制备得到的改性葡聚糖替换实施例7制备得到的改性葡聚糖。

实施例27

按照实施例3所述的方法制备得到载药颗粒，与实施例3不同的是，采用实施例26制备得到的葡聚糖胶束替换实施例2制备得到的葡聚糖胶束。

实施例28

将6.5g的N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐溶解于50mL的干燥的氯仿中，向所述氯仿中加入0.7mL的质量浓度为10％正己胺水溶液中，在30℃油浴、搅拌以及氮气保护条件下，进行3天的聚合反应；将得到的反应产物用乙醚进行沉降，将将沉降后的产物溶解于氯仿后用乙醚再次进行沉降，然后依次经过抽滤、减压干燥后，得到中间产物；将所述中间产物与30mL的三氟乙酸和氢溴酸的乙醇溶液进行反应，去除保护基团，得到聚-L-赖氨酸均聚物；所述三氟乙酸和氢溴酸的摩尔比为1:2.8，所述三氟乙酸和氢溴酸的乙醇溶液的质量浓度为33％。

将本发明实施例28制备得到的聚-L-赖氨酸均聚物进行核磁共振检测，检测结果如图4所示，图4为本发明实施例28制备得到的聚-L-赖氨酸均聚物的核磁共振氢谱图，由图4可知，本发明实施例28制备得到的聚-L-赖氨酸均聚物具有式3所示的结构：

式3中，n为23≤n≤136。

实施例29

按照实施例28所述的方法制备得到聚-L-赖氨酸均聚物，与实施例28不同的是，采用7.15g的N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐替换6.5g的N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐；采用1.54mL的正己胺水溶液替换0.7mL的正己胺水溶液。

将本发明实施例29制备得到的聚-L-赖氨酸均聚物进行核磁共振检测，检测结果如图5所示，图5为本发明实施例29制备得到的聚-L-赖氨酸均聚物的核磁共振氢谱图，由图5可知，本发明实施例29制备得到的聚-L-赖氨酸均聚物具有式4所示的结构：

式4中，n为23≤n≤136。

实施例30

按照实施例28所述的方法制备得到聚-L-赖氨酸均聚物，与实施例28不同的是，采用6.37g的N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐替换6.5g的N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐；采用0.27mL的正己胺水溶液替换0.7mL的正己胺水溶液。

实施例31

按照实施例28所述的方法制备得到聚-L-赖氨酸均聚物，与实施例28不同的是，采用5.2g的N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐替换6.5g的N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐；采用0.21mL的正己胺水溶液替换0.7mL的正己胺水溶液。

实施例32

按照实施例28所述的方法制备得到聚-L-赖氨酸均聚物，与实施例28不同的是，采用8.45g的N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐替换6.5g的N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸内酸酐；采用0.26mL的正己胺水溶液替换0.7mL的正己胺水溶液。

实施例33

将100mg实施例21制备得到的载药颗粒加入到10mL的磷酸盐缓冲溶液中，室温超声分散，得到载药颗粒溶液；将600mg的实施例30制备得到的聚-L-赖氨酸均聚物溶解于10mL的磷酸盐缓冲溶液中，得到均聚物溶液。

取0.2mL的上述载药颗粒溶液和0.2mL的上述均聚物溶液置于玻璃试管中，涡旋混合静置成胶，得到水凝胶。

倒置上述玻璃试管，以所述玻璃试管中载药颗粒溶液与均聚物溶液形成的混合溶液保持30秒内不流动作为成胶时间，本发明实施例33制备得到的水凝胶的成胶时间为10分钟。

将本发明实施例33制备得到的水凝胶装入玻璃试管中，向所述玻璃试管中加入4mL的pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液，得到混合液；采用锡箔纸将玻璃试管完全包住，避免水凝胶中的阿霉素分解，将包裹锡箔纸的玻璃试管放入37℃的恒温震荡培养箱中，每隔30分钟，从玻璃管中取出2mL的混合液，同时向玻璃管中补加2mL的磷酸盐缓冲液；采用荧光光谱仪检测所述混合液中的阿霉素含量，检测时的激发波长为472nm，发生波长为592nm，根据检测得到的阿霉素含量计算出水凝胶中阿霉素的释放量。测试结果如图6所示，图6中曲线2为本发明实施例33制备得到的水凝胶中阿霉素的释放速度数据曲线，由曲线2可知，本发明实施例33制备得到的水凝胶中的阿霉素10天释放了60％。

将本发明实施例33制备得到的水凝胶和磷酸盐缓冲液按照质量比为1：10的比例混合，将得到的混合液置于37℃恒温震荡培养箱中，分别在1天、3天、5天、7天、10天、12天、14天、21天后将混合液中的水凝胶取出、擦干，称量水凝胶的重量，检测本发明实施例33制备得到的水凝胶的生物相容性。测试结果如图7所示，图7为本发明实施例33制备得到的水凝胶在磷酸盐缓冲溶液中的降解时间的数据图，由图7可知，本发明实施例33制备得到的水凝胶在磷酸盐缓冲液中21天降解了60％，生物相容性较好。

将人肺腺癌A549细胞系接种在BALB/c裸鼠体内，接种第七天后，将本发明实施例33制备得到的水凝胶皮下注射于BALB/c裸鼠肿瘤旁，观察记录1天～21天内裸鼠肿瘤的体积V：

V＝a×b²/2；

其中a，b分别为肿瘤的长度和宽度；

以质量浓度为0.33mg/mL阿霉素水溶液作为药效参照，以注射水凝胶当天记作0天。以不含药物的水凝胶和磷酸盐缓冲液作为对照组，所述不含药物的水凝胶的制备方法为：

将100mg实施例20制备得到的葡聚糖胶束加入到10mL的磷酸盐缓冲溶液中，室温超声分散，得到混合溶液；将600mg的实施例30制备得到的聚-L-赖氨酸均聚物溶解于10mL的磷酸盐缓冲溶液中，得到均聚物溶液；

取0.2mL的上述混合溶液和0.2mL的上述均聚物溶液置于玻璃试管中，涡旋混合静置成胶，得到不含药物的水凝胶。

测试结果如图8所示，图8为本发明实施例33制备得到的水凝胶治疗裸鼠肺癌肿瘤的效果图，其中曲线1为磷酸盐缓冲液治疗裸鼠肺癌肿瘤效果曲线，曲线2为不含药物的水凝胶治疗裸鼠肺癌肿瘤效果曲线，曲线3为阿霉素水溶液治疗裸鼠肺癌肿瘤效果曲线，曲线4为本发明实施例33制备得到的水凝胶治疗裸鼠肺癌肿瘤效果曲线，由图8可知，采用本发明实施例33制备得到的水凝胶治疗裸鼠肺癌肿瘤20天，肿瘤体积由500mm³降低到100mm³。

由以上实施例可知，本发明提供了一种改性葡聚糖及其制备方法，具有式I或式II所示的结构。本发明提供了一种葡聚糖胶束及其制备方法，这种葡聚糖胶束可作为药物载体，具有较好的缓释性。本发明提供的葡聚糖胶束制备得到的载药颗粒能够缓慢释放，具有较好的药效；此外，本发明提供的载药颗粒粒径较小、大小均一，在水中的分散性和稳定性较好。本发明提供的水凝胶由载药颗粒和聚-L-赖氨酸均聚物交联而成，这种水凝胶可在病灶部位靶向缓慢释放，在肿瘤治疗领域具有明显优势；此外，这种水凝胶可以担载抗肿瘤药物，载药效果好；另外，这种水凝胶具有较好的生物降解性和生物相容性。

Claims (10)

1.一种改性葡聚糖，具有式I所示的结构或式II所示结构：

z和y独立的选自50～600；

R和R₁独立地选自-H或具有式1所示结构的基团：

2.一种改性葡聚糖的制备方法，包括：

将胆固醇甲酰氯和葡聚糖进行反应，得到改性葡聚糖，所述改性葡聚糖具有式I所示的结构：

式I中，z为50～600；R选自-H或具有式1所示结构的基团：

3.一种改性葡聚糖的制备方法，包括：

将具有式I所示结构的化合物进行氧化修饰，得到改性葡聚糖，所述改性葡聚糖具有式II所示结构：

z和y独立地选自50～600；R和R₁独立地选自-H或具有式1所示结构的基团：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述改性葡聚糖的制备方法具体为：

将具有式I所示结构的化合物和高碘酸盐进行反应，得到改性葡聚糖。

5.一种葡聚糖胶束，由改性葡聚糖制备得到，所述改性葡聚糖为权利要求1所述的改性葡聚糖或权利要求2～4中任意一项所述的方法制备得到的改性葡聚糖。

6.一种葡聚糖胶束的制备方法，包括：

将改性葡聚糖依次进行溶解、稀释、分散、透析、过滤和干燥，得到葡聚糖胶束；所述改性葡聚糖为权利要求1所述的改性葡聚糖或权利要求2～4中任意一项所述的方法制备得到的改性葡聚糖。

7.一种载药颗粒，由权利要求5所述的葡聚糖胶束和药物制备得到或由权利要求6所述的方法制备得到的葡聚糖胶束和药物制备得到。

8.一种载药颗粒的制备方法，包括：

将葡聚糖胶束和药物溶液混合，得到混合溶液；

将所述混合溶液依次进行透析和干燥，得到载药颗粒；

所述葡聚糖胶束为权利要求5所述的葡聚糖胶束或由权利要求6所述的方法制备得到的葡聚糖胶束。

9.一种水凝胶，由载药颗粒、聚-L-赖氨酸均聚物和溶剂制备得到；

所述载药颗粒由改性葡聚糖和药物制备得到，所述改性葡聚糖具有式II所示的结构：

式II中，y为50～600；R₁选自-H或具有式1所示结构的基团：

所述聚-L-赖氨酸均聚物具有式III所示的结构：

式III中，23≤n≤136。

10.根据权利要求9所述的水凝胶，其特征在于，所述载药颗粒在所述水凝胶中的质量含量选自0.5％～1％；

所述聚-L-赖氨酸均聚物在所述水凝胶中的质量含量选自2％～6％。