CN111450265B - 一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡及其制备方法 - Google Patents

一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡及其制备方法，包括如下步骤：1)利用柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒，将纳米金与化疗药物多柔比星偶联起来；2)制备聚合物囊泡的同时将水溶液中的金药复合物包入聚合物囊泡的水相中；3)将多肽Angiopep‑2偶联在聚合物囊泡上，用超滤法除去游离的金药复合物及多肽Angiopep‑2，得到一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡。该方法简单易行，成功率高，降低化疗药物的毒副作用，增强疗效，为临床应用研究提供可靠的实验研究数据及理论基础。

Description

一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡及其制备 方法
技术领域
本发明涉及复合纳米递药系统技术领域，特别是涉及一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡及其制备方法。
背景技术
在抗肿瘤治疗中同时使用多种药物进行治疗是常用手段，但是不同的药物很可能在溶解性质(亲疏水性)上有很大差异。目前临床及研究中常用的一些纳米药物载体都不具备同时大量装载两种或两种以上亲疏水性不同的药物的能力。例如，固体纳米粒多采用生物降解性高分子材料或高级脂肪酸制备，水溶性药物的装载性差，而且容易被富含内皮网状组织(如肝、脾)摄取，这类组织以外的肿瘤靶向性不理想。高分子胶束是指两亲性高分子在水中形成疏水内核和亲水外壳结构的自组装纳米粒，主要装载疏水性药物。脂质体是由磷脂为基本骨架，利用磷脂分子在水中的定向排列，构成的具有类似生物膜结构的双分子层微小囊泡。脂质体内含有亲水区，因此可以包裹水溶性药物，但对疏水药物的装载能力较差。由于磷脂疏水端构成的疏水双层不稳定，容易导致脂质体在血液循环过程中药物的过早泄漏。并且由于受磷脂种类的限制，脂质体作为给药系统其各方面性质的可调性非常差。由于这些不足，尽管目前市场上已有抗肿瘤药物的脂质体产品，但总体研发速度非常缓慢。
脂质体纳米给药系统可以通过被动、主动或物理化学的作用机制实现肿瘤靶向给药，然而普通的纳米给药系统在释药行为上不具有特异性，药物载体虽然能够聚集在肿瘤部位，但包裹在载体内部的药物却往往不能及时释放出来，这使得治疗效果大打折扣。
聚合物囊泡是一种良好的选择，其不同于脂质囊泡，是双层膜结构，与细胞膜有良好的相容性和渗透性，给药途径广泛，能提高药物增溶量、药物生物利用度和贮存稳定性，引起了普遍关注。此外，由于实体瘤与周围正常组织在酸度上的差异，pH响应性聚合物胶束已被广泛关注和研究，并显示出它们在更高效递送和快速药物释放方面的巨大潜力。利用这些特征，如果能够设计合适的pH敏感聚合物囊泡作为抗肿瘤药物载体，负载多种用于肿瘤诊断以及治疗的药物，就有可能实现在肿瘤部位定点释放药物。但是囊泡在体内的稳定性以及如何对胶质瘤的靶向性定位问题，是目前胶质瘤诊断和治疗过程中需要解决的。
发明内容
本发明的目的是提供一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡及其制备方法，以解决上述现有技术存在的问题，制得的靶向pH敏感性聚合物囊泡可以同时兼具CT成像和放疗功能以及药物治疗作用，为以后临床应用研究提供可靠的实验研究数据及理论基础。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡，该聚合物囊泡的组成包含：以PCL-PEOz-MAL为膜材，外部偶联有靶标多肽Angiopep-2，以及负载金药复合物。
作为本发明的进一步改进，金药复合物物包含广谱化疗药物多柔比星(DOX)以及金纳米颗粒组成的复合药物。
本发明还提供了上述负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法，包括以下步骤：
步骤1.用柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒；
步骤2.用SH-PEG-NH2修饰步骤1得到的纳米金颗粒即AuNPs，离心，去上清液，将下层混匀4℃保存，所述离心转速为11000-13000rpm，优选12000rpm，温度为20℃，离心时间为10-15min；
步骤3.配制浓度为1mg/ml的多柔比星,取80ul加入步骤2反应完成的溶液中，振荡，室温反应，离心，去上清液，将下层混匀，4℃保存，冷冻干燥后得到Au-DOX粉末，所述振荡时间为2-5min，所述室温反应时间为11-13小时，所述离心为在11000-13000rpm，20℃条件下离心10-15min，其中通过腙键将纳米金与化疗药物多柔比星偶联起来；
步骤4.称量PCL-PEOz-MAL粉末溶于有机溶剂中，所述有机溶剂为二氯甲烷；
步骤5.将步骤4中得到的混合溶液进行蒸发，使其中的有机溶剂充分挥发，形成薄膜，并放置于干燥箱中干燥；
步骤6.取pH为7.0-8.2的磷酸盐缓冲液于烧杯中，加入步骤3得到的Au-DOX粉末，超声处理，形成溶液；
步骤7.将步骤6中得到的溶液加入步骤5形成的薄膜内，水化至薄膜脱落，可得负载金药复合物的聚合物囊泡溶液，利用薄膜水化法制备聚合物囊泡的同时将水溶液中的金药复合物包入聚合物囊泡的水相中；
步骤8.将Angiopep-2与步骤7所得产物避光搅拌反应，以超滤去除未反应的Angiopep-2以及游离的金药复合物，通过马来酰胺键将多肽Angiopep-2偶联在聚合物囊泡上，得到一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡。
作为本发明的进一步改进，步骤1所述柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒为将氯金酸溶液溶于超纯水中，加热，迅速加入柠檬酸钠溶液，持续加热，待溶液变成酒红色后继续加热10-30分钟，而后冷却至室温；其中氯金酸溶液体积浓度为1％，柠檬酸钠体积浓度为1％，其中氯金酸、柠檬酸钠、超纯水体积比为1:5:100。
作为本发明的进一步改进，步骤4PCL-PEOz-MAL粉末溶于有机溶剂二氯甲烷是按照10mg溶于4ml比例来进行添加。
作为本发明的进一步改进，步骤5中的蒸发为减压旋转蒸发，蒸发时间为10min-15min，温度为20℃-25℃。
作为本发明的进一步改进，步骤5干燥箱为40℃真空干燥箱，干燥时间为8h-12h。
作为本发明的进一步改进，步骤7水化时间为6h-8h，温度为55℃-60℃。
作为本发明的进一步改进，PCL-PEOz-MAL与Angiopep-2摩尔比为1∶1-1∶3，步骤8中，反应温度为20℃-25℃，反应时间为6h-12h。
本发明还提供一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡在制备抗肿瘤药物中的应用。
聚合物囊泡，是由具有双亲结构的嵌段共聚物自组装形成的一类高分子多聚体，具有稳定性高、通透性可设计以及可进一步功能化修饰等优点，此外，聚合物囊泡所具有疏水性的膜及巨大的亲水性的内腔，使其具有同时运载亲、疏水性药物的能力。由于聚合物囊泡的双层膜结构与细胞膜之间有良好的相容性，作为药物载体既可以降低药物的毒性和刺激性，又能保持药物的生理活性，达到低毒、高效、控释的目的，是理想的体内药物输送载体。PEOz是一种具有pH响应性的聚合物，其亲水链上包含一个叔酰胺基，该酰胺基易于与溶液系统中的氢离子结合，并与PEOz分子中的其他叔酰胺基形成氢键。在酸性条件下，大量氢键的形成将破坏核-壳结构，从而降低聚合物囊泡的稳定性并释放药物。由此可实现体内pH敏感递药。
纳米金具有放疗增敏的作用，可以提高电离辐射对肿瘤组织的杀伤力，提高肿瘤放射治疗的疗效。此外，作为高质子量物质，金元素有显著的X射线衰减系数，是良好的CT示踪剂。由此可见，纳米金可以作为胶质瘤放射治疗及CT成像方面的一种新型放射增敏剂及良好的CT示踪剂。
多柔比星为广谱抗肿瘤药，对机体可产生广泛的生物化学效应，具有强烈的细胞毒性作用。其作用机理主要是嵌入DNA而抑制核酸的合成。本发明利用聚合物囊泡进行包裹多柔比星，可以有效隔绝多柔比星与机体细胞接触，从而减轻多柔比星用药过程中的毒副作用，同时偶联的Angiopep-2能够实现通过血脑屏障及对胶质瘤的靶向性定位，使得给药快速，安全，准确。
本发明公开了以下技术效果：
本发明以pH敏感性聚合物囊泡作为运载工具，包载纳米金和化疗药物实现对胶质瘤的诊断和治疗高效性及安全性。负载Au-DOX的pH敏感性复合聚合物囊泡，兼具成像和治疗功能，偶联的Angiopep-2能够实现通过血脑屏障及对胶质瘤的靶向性定位，Au-DOX可实现对胶质母细胞瘤的放化疗联合治疗及可视化治疗。本发明制备方法简单易行，成功率高，用于抗肿瘤药物制备的应用可以降低化疗药物的毒副作用，增强疗效，实现了对肿瘤诊断和治疗的协同性和一致性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1用柠檬酸钠还原法制备的纳米金的电镜图；
图2为DLS测量实施例1的纳米金的粒径大小及分布图；
图3为DLS测量实施例1的Au-DOX的粒径大小及分布图；
图4为DLS测量实施例1的空白聚合物囊泡粒径大小及分布图；
图5为DLS测量实施例1负载金药复合物的聚合物囊泡粒径大小及分布图；
图6为透射电镜(TEM)观察实施例1空白聚合物囊泡大小和形貌特征；
图7为透射电镜(TEM)观察实施例1负载金药复合物的聚合物囊泡大小和形貌特征。
图8为实施例1ANG-PO@Au-DOX的稳定性曲线。
图9为实施例1ANG-PO@Au-DOX的pH敏感性释药曲线。
图10为共聚焦成像检测实施例1ANG-PO@Au-DOX的体外靶向性。
图11为实施例1ANG-PO@Au-DOX的体外杀伤效果。
图12为近红外成像检测实施例1ANG-PO@Au-DOX的体内靶向性。
图13为MRI监测实施例1ANG-PO@Au-DOX的体内抗肿瘤效果。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
本发明实施例中PCL-PEOz-MAL粉末、SH-PEG-NH2、购自西安瑞西生物科技有限公司，Angiopep-2多肽购自卡尔贝生物化工有限公司。
PCL-PEOz-Mal是一种带马来酰胺键的二亲嵌段共聚物，是由PCL(聚己内酯)和PEOz(聚(2-乙基-2-噁唑啉)Poly(2-ethyl-2-oxazoline))共聚而成，并加入了马来酰胺基团，马来酰胺基团可以在后期用于偶联靶向性多肽。该种二亲嵌段共聚物可自组装形成具有膜核的囊泡结构。优异性在于：稳定性及安全性高，并且PEOz被证实其主链上的叔胺质子化而具有PH敏感性，表明由该二亲嵌段共聚物自组装成的囊泡具有pH敏感性。
SH-PEG-NH2是一种两端都带有基团的聚乙二醇，一端为巯基，可以与纳米金形成金巯基键，另一端氨基可以与DOX上的羰基形成腙键。SH-PEG-NH2可以提高纳米金的稳定性，同时给纳米金提供一个氨基基团，可以与DOX合成腙键。
实施例1
1、Au-DOX粉末及其溶液的制备如下：
用柠檬酸钠还原法制备纳米金：将1ml1％的氯金酸溶于100ml的超纯水中，油浴锅加热并剧烈搅拌。迅速加入1％柠檬酸钠溶液5ml，待溶液变酒红色后继续加热15分钟，而后冷却至室温，取100ul 0.5mM的SH-PEG-NH2添加至1.2ml的AuNPs溶液中，振荡30s。12000rpm，20℃离心10min，取上清液，将下层混匀后4℃保存。配制DOX浓度为1mg/ml,取80ul加入体系中，振荡2min，室温反应12小时。12000rpm，20℃离心10min，取上清液，将下层混匀，4℃保存，冷冻干燥后得到Au-DOX粉末。
取pH为7.0的磷酸盐缓冲液10ml于烧杯中，加入得到的Au-DOX粉末，超声处理，形成溶液。
本实施例中用柠檬酸钠还原法制备的纳米金的电镜图见图1，本实施例中纳米金的粒径大小通过DLS测量，结果见图2，本实施例中Au-DOX的粒径大小通过DLS测量，结果见图3。
2、空白聚合物囊泡以及负载Au-DOX聚合物囊泡的制备方法如下：
称取PCL-PEOz-MAL粉末5mg置于50ml圆底烧瓶中，加入2ml二氯甲烷溶液，减压旋转蒸发，蒸发时间为10minmin，温度为25℃，去除有机溶剂至瓶壁上形成一层均匀薄膜。将烧瓶置于40℃真空干燥箱中干燥处理8h，除去残余有机溶剂。可得到空白聚合物囊泡。本实施例中空白聚合物囊泡粒径大小通过DLS测量，结果见图4，本实施例中空白聚合物囊泡透射电镜图见图6。
上述烧瓶中加入5ml浓度为60ug/ml Au-DOX溶液，60℃水浴中搅拌水化6h，可得负载金药复合物的聚合物囊泡溶液。负载Au-DOX聚合物囊泡溶液中加入500ug Angiopep-2，PCL-PEOz-MAL与Angiopep-2摩尔比为1∶1，20℃避光搅拌反应6h，最终产物以超滤去除未反应的Angiopep-2以及游离的金药复合物，收集纯化的Angiopep-2修饰的聚合物囊泡，得到一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡。
本实施例最终获得负载金药复合物的聚合物囊泡粒径大小通过DLS测量，结果见图5。
本实施例最终负载金药复合物的聚合物囊透射电镜图见图7。
对负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡即ANG-PO@Au-DOX进行稳定性评价。在4℃下进行4周的测量。在0小时，8小时，16小时，24小时，1天，7天，14天和21天时检测粒度和药物包封效率。绘制出稳定性曲线。如图8所示。
评价负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡即ANG-PO@Au-DOX的体外pH敏感性，将2ml ANG-PO@Au-DOX溶液放入透析袋(MWCO 1500)中，将其置于50mL不同pH值(pH7.4，pH 6.5，pH5.5)的磷酸盐缓冲液中，然后加入2ml透析液，在特定时间点拍摄并立即放回以保持培养基的体积。使用紫外/可见光谱在480nm下测量透析液中DOX的吸光度，绘制体外释放曲线。如图9所示。
用激光共聚焦成像评估负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的体外靶向性。如图10所示。
用CCK8试剂盒评估负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的体外治疗效果。如图11所示。
用近红外成像评价负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的体内靶向性。如图12所示。
用MRI成像监测负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的体内抗肿瘤效果。如图13所示。
实施例2
Au-DOX粉末的制备方法同实施例1。
取pH为7.5的磷酸盐缓冲液10ml于烧杯中，加入得到的Au-DOX粉末，超声处理，形成10ug/ml Au-DOX溶液。
称取PCL-PEOz-MAL粉末5mg置于50ml圆底烧瓶中，加入2ml二氯甲烷溶液，减压旋转蒸发，蒸发时间为10min，温度为20℃，除去有机溶剂至瓶壁上形成一层均匀薄膜。将烧瓶置于40℃真空干燥箱中干燥处理8h，除去残余有机溶剂。往烧瓶中加入浓度为10ug/ml Au-DOX溶液5ml，60℃水浴中搅拌水化6h，可得囊泡溶液。加入500ug Angiopep-2，其中PCL-PEOz-MAL与Angiopep-2摩尔比为1∶1，22℃避光搅拌反应6h，以超滤去除未反应的Angiopep-2以及游离的金药复合物，收集纯化的Angiopep-2修饰的聚合物囊泡。
实施例3
Au-DOX粉末的制备方法同实施例1。
取pH为8.0的磷酸盐缓冲液10ml于烧杯中，加入得到的Au-DOX粉末，超声处理，形成20ug/ml Au-DOX溶液。
称取PCL-PEOz-MAL粉末5mg置于50ml圆底烧瓶中，加入2ml二氯甲烷溶液，减压旋转蒸发，蒸发时间为15min，温度为25℃，除去有机溶剂至瓶壁上形成一层均匀薄膜。将烧瓶置于40℃真空干燥箱中干燥处理8h，除去残余有机溶剂。往烧瓶中加入浓度为20ug/ml Au-DOX溶液5ml，60℃水浴中搅拌水化6h，可得囊泡溶液。加入500ug Angiopep-2其中PCL-PEOz-MAL与Angiopep-2摩尔比为1∶2，23℃避光搅拌反应6h，以超滤去除未反应的Angiopep-2以及游离的金药复合物，收集纯化的Angiopep-2修饰的聚合物囊泡。
实施例4
Au-DOX粉末的制备方法同实施例1。
取pH为8.2的磷酸盐缓冲液10ml于烧杯中，加入得到的Au-DOX粉末，超声处理，形成40ug/ml Au-DOX溶液。
称取PCL-PEOz-MAL粉末5mg置于50ml圆底烧瓶中，加入2ml二氯甲烷溶液，减压旋转蒸发，蒸发时间为12min，温度为22℃，除去有机溶剂至瓶壁上形成一层均匀薄膜。将烧瓶置于40℃真空干燥箱中干燥处理8h，除去残余有机溶剂。往烧瓶中加入浓度为40ug/ml Au-DOX溶液5ml，60℃水浴中搅拌水化6h，可得囊泡溶液。加入500ug Angiopep-2其中PCL-PEOz-MAL与Angiopep-2摩尔比为1∶1，25℃避光搅拌反应6h，以超滤去除未反应的Angiopep-2以及游离的金药复合物，收集纯化的Angiopep-2修饰的聚合物囊泡。
实施例5
Au-DOX粉末的制备方法同实施例1。
取pH为8.1的磷酸盐缓冲液10ml于烧杯中，加入得到的Au-DOX粉末，超声处理，形成80ug/ml Au-DOX溶液。
称取PCL-PEOz-MAL粉末5mg置于50ml圆底烧瓶中，加入2ml二氯甲烷溶液，减压旋转蒸发，蒸发时间为15min，温度为25℃，除去有机溶剂至瓶壁上形成一层均匀薄膜。将烧瓶置于40℃真空干燥箱中干燥处理8h，除去残余有机溶剂。往烧瓶中加入浓度为80ug/ml Au-DOX溶液5ml，60℃水浴中搅拌水化6h，可得囊泡溶液。加入500ug Angiopep-2其中PCL-PEOz-MAL与Angiopep-2摩尔比为1∶3，25℃避光搅拌反应8h，以超滤去除未反应的Angiopep-2以及游离的金药复合物，收集纯化的Angiopep-2修饰的聚合物囊泡。
实施例6
Au-DOX粉末的制备方法同实施例1。
取pH为7.8的磷酸盐缓冲液10ml于烧杯中，加入得到的Au-DOX粉末，超声处理，形成160ug/ml Au-DOX溶液。
称取PCL-PEOz-MAL粉末5mg置于50ml圆底烧瓶中，加入2ml二氯甲烷溶液，减压旋转蒸发，蒸发时间为15min，温度为25℃，除去有机溶剂至瓶壁上形成一层均匀薄膜。将烧瓶置于40℃真空干燥箱中干燥处理8h，除去残余有机溶剂。往烧瓶中加入浓度为160ug/mlAu-DOX溶液5ml，60℃水浴中搅拌水化6h，可得囊泡溶液。加入500ug Angiopep-2其中PCL-PEOz-MAL与Angiopep-2摩尔比为1∶1，22℃避光搅拌反应10h，以超滤去除未反应的Angiopep-2以及游离的金药复合物，收集纯化的Angiopep-2修饰的聚合物囊泡。
实施例7
Au-DOX粉末的制备方法同实施例1。
取pH为7.2的磷酸盐缓冲液10ml于烧杯中，加入得到的Au-DOX粉末，超声处理，形成320ug/ml Au-DOX溶液。
称取PCL-PEOz-MAL粉末5mg置于50ml圆底烧瓶中，加入2ml二氯甲烷溶液，减压旋转蒸发，蒸发时间为15min，温度为25℃，除去有机溶剂至瓶壁上形成一层均匀薄膜。将烧瓶置于40℃真空干燥箱中干燥处理8h，除去残余有机溶剂。往烧瓶中加入浓度为320ug/mlAu-DOX溶液5ml，60℃水浴中搅拌水化6h，可得囊泡溶液。加入500ug Angiopep-2其中PCL-PEOz-MAL与Angiopep-2摩尔比为1∶1，20℃避光搅拌反应12h，以超滤去除未反应的Angiopep-2以及游离的金药复合物，收集纯化的Angiopep-2修饰的聚合物囊泡。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (9)

1.一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡，其特征在于，该聚合物囊泡的组成包含：以PCL-PEOz-MAL为膜材，外表面偶联有靶标多肽Angiopep-2，以及内部负载有金药复合物，所述金药复合物包含多柔比星以及金纳米颗粒；
所述负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法包括以下步骤：步骤1.用柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒；步骤2.用SH-PEG-NH2修饰步骤1得到的纳米金颗粒即AuNPs，离心去上清液，将下层混匀低温保存；步骤3.配制浓度为1mg/ml的多柔比星,取80ul加入步骤2反应完成的溶液中，振荡，室温反应，离心去上清液，将下层混匀，低温保存，冷冻干燥后得到Au-DOX粉末。
2.一种如权利要求1所述的负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1.用柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒；
步骤2.用SH-PEG-NH2修饰步骤1得到的纳米金颗粒即AuNPs，离心去上清液，将下层混匀低温保存；
步骤3.配制浓度为1mg/ml的多柔比星,取80ul加入步骤2反应完成的溶液中，振荡，室温反应，离心去上清液，将下层混匀，低温保存，冷冻干燥后得到Au-DOX粉末；
步骤4.称量PCL-PEOz-MAL粉末溶于有机溶剂中，得到混合溶液；
步骤5.将步骤4中得到的混合溶液进行蒸发，使其中的有机溶剂充分挥发，形成薄膜，并放置于干燥箱中干燥；
步骤6.取pH为7.0-8.2的磷酸盐缓冲液于烧杯中，加入步骤3得到的Au-DOX粉末，超声处理，形成溶液；
步骤7.将步骤6中得到的溶液加入步骤5形成的薄膜内，水化至薄膜脱落；
步骤8.将Angiopep-2与步骤7所得产物避光搅拌反应，超滤去除未反应的Angiopep-2以及游离的金药复合物，获得最终产物。
3.根据权利要求2所述的一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法，其特征在于，步骤1所述柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒为将氯金酸溶液溶于超纯水中，加热，迅速加入柠檬酸钠溶液，持续加热，待溶液变成酒红色后继续加热10-30分钟，而后冷却至室温；
所述氯金酸溶液体积浓度为1％，所述的柠檬酸钠体积浓度为1％，其中氯金酸、柠檬酸钠、超纯水体积比为1：5：100。
4.根据权利要求2所述的一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法，其特征在于，所述步骤4中，PCL-PEOz-MAL粉末溶于有机溶剂二氯甲烷是按照10mg溶于4ml比例来进行添加。
5.根据权利要求2所述的一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法，其特征在于，步骤5中，所述蒸发为旋转蒸发，旋转蒸发时间为10min-15min，温度为20℃-25℃。
6.根据权利要求2所述的一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法，其特征在于，步骤5中，所述干燥箱为40℃真空干燥箱，干燥时间为8h-12h。
7.根据权利要求2所述的一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法，其特征在于，所述步骤7中，水化时间为6h-8h，温度为55℃-60℃。
8.根据权利要求2所述的一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法，其特征在于，PCL-PEOz-MAL与Angiopep-2摩尔比为1∶1-1∶3，所述步骤8中，反应温度为20℃-25℃，反应时间为6h-12h。
9.一种如权利要求1所述的负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡在制备抗肿瘤药物中的应用。
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