CN112626194B - 一种非编码RNA生物标志物lnc-βFaar的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种非编码RNA生物标志物lnc‑βFaar的应用，具体包括：2型糖尿病的诊断引物及其用途，基于该诊断引物的诊断试剂盒及其用途，生物标志物lnc‑βFaar的检测方法，生物标志物lnc‑βFaar的用途。本发明可利用诊断引物/诊断试剂盒，通过检测非编码RNA分子标志物lnc‑βFaar来诊断2型糖尿病，检测方法操作简单，且灵敏度高，特异性强，对受检者的创伤性小，可用于早期和不同阶段2型糖尿病的诊断，具有明显的临床应用价值。

Description

一种非编码RNA生物标志物lnc-βFaar的应用

技术领域

本发明涉及一种非编码RNA生物标志物lnc-βFaar的应用，具体为 lnc-βFaar在诊断2型糖尿病中的应用，属于细胞生物学和生物医学技术领域。

背景技术

长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)是一种长度大于200bp 的非编码RNA，广泛存在于哺乳动物中，通过调节各种基因的表达，进而调节各种生理进程，细胞功能，以及信号通路^[1,2]；主要是通过对转录产物进行抑制进而抑制翻译过程，或者是引起目标mRNA的降解而达到基因沉默的目的，因为lncRNA具有和mRNA类似的polyA尾端，较为稳定，可以在组织、血清和尿液中检测出来^[3-5]。

LncRNA逐渐成为控制代谢组织发育和功能的重要调控元件^[6]。代谢和葡萄糖稳态的调节是基本的生化过程，通过服务于调节功能的不同组织/器官之间的相互信号传导进行协调和微调，包括从肠道吸收糖，从胰腺分泌胰岛素，在肝脏产生葡萄糖，以及脂肪，肌肉和其他组织对葡萄糖的摄取。胰岛通过分泌关键的内分泌激素，胰岛素和胰高血糖素，在调节全身性葡萄糖代谢中起关键作用，其中胰岛素是合成代谢的主调节剂，它控制周围以及中枢神经系统相关的代谢。对胰岛素作用的抗性是代谢障碍发展中的关键步骤。这些过程中任何一个失调都成为主要代谢疾病(包括肥胖症，2型糖尿病(T2D)，血脂异常和非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)的发病机理的基础。lncRNA的发现为调节网络增加了新的复杂性，影响了代谢稳态和疾病^[7]。有趣的是，一些GWAS研究报告了lncRNA被定位到糖尿病易感基因座^[8-11]，所有这些都暗示了lncRNA在胰岛素抵抗，糖尿病及其相关并发症中的关键作用。

胰岛是研究人员了解糖尿病的病理生理学的重要中心节点^[12]。Ding等人首先证明了lncRNA可能对胰岛发育和功能的调节，其中lncRNA H19被证明与妊娠糖尿病的世代传播有关，从而导致胰岛结构和功能受损。Yin等证明了体内lncRNA，TUG1的沉默增加了胰腺β细胞的凋亡并降低了胰岛素分泌，从而导致空腹血糖水平升高。据报道，另一种lncRNAMEG3在1型糖尿病 (T1D)和T2D小鼠模型的胰腺组织中被下调，其表达在MIN6和原代小鼠胰岛细胞中受到葡萄糖的动态调节^[13]。以上研究提示，lncRNA在维持胰岛细胞功能稳态发挥着重要作用，有可能成为诊断T2D的生物标志物。

发明人课题组长年致力于糖尿病相关lncRNA的研究，于2018.04.08申请发明专利《胰岛长链非编码RNA 1810019D21Rik及其应用》，并于2019.04.02 申请发明专利《一种2型糖尿病的诊断引物及试剂盒、以及非编码RNA分子标志物的应用》。发明人课题组以最新获得的研究成果申请本专利。

发明内容

本发明的主要目的是：针对现有技术存在的问题，基于发明人课题组的研究成果，提出一种非编码RNA生物标志物lnc-βFaar的应用，具体包括：2 型糖尿病的诊断引物及其用途，基于该诊断引物的诊断试剂盒及其用途，生物标志物lnc-βFaar的检测方法，生物标志物lnc-βFaar的用途。

本发明解决其技术问题的技术方案如下：

一种2型糖尿病的诊断引物，其特征是，包括lnc-βFaar正向引物SEQ ID NO:2以及lnc-βFaar反向引物SEQ ID NO:3。

上述诊断引物的lnc-βFaar正向引物和lnc-βFaar反向引物可以用以检测非编码RNA分子标志物lnc-βFaar的表达水平，从而为诊断2型糖尿病提供依据。

本发明还提出：

一种2型糖尿病的诊断试剂盒，其特征是，包括前文所述的诊断引物。

优选地，所述诊断试剂盒还包括：作为阳性对照的非编码RNA分子标志物，所述非编码RNA分子标志物为序列如SEQ ID NO:1所示的lnc-βFaar。

采用该试剂盒，可通过检测lnc-βFaar的表达水平为诊断2型糖尿病提供依据。

本发明还提出：

一种非编码RNA分子标志物的检测方法，其特征是，采用前文所述的诊断引物，或采用前文所述的诊断试剂盒；所述非编码RNA分子标志物为序列如SEQ ID NO:1所示的lnc-βFaar。

优选地，所述检测方法包括以下步骤：

S1.提取血清样本总RNA；

S2.采用S1提取到的总RNA，经lncRNA逆转录获得cDNA；

S3.采用诊断引物，以实时荧光定量PCR法检测S2所得cDNA中lnc-βFaar 的表达量；所述实时荧光定量PCR法采用染料法。

本发明还提出：

前文所述诊断引物的用途，其特征是，所述用途为用于制备预防或治疗2 型糖尿病的药物，或者为用于筛选预防或治疗2型糖尿病的药物，或者为用于制备或筛选诊断2型糖尿病的产品。

前文所述诊断试剂盒的用途，其特征是，所述用途为用于制备预防或治疗2型糖尿病的药物，或者为用于筛选预防或治疗2型糖尿病的药物，或者为用于制备诊断2型糖尿病的医疗工具。

一种非编码RNA分子标志物的用途，其特征是，所述非编码RNA分子标志物为序列如SEQ ID NO:1所示的lnc-βFaar；所述用途为用于制备预防或治疗2型糖尿病的药物，或者为用于筛选预防或治疗2型糖尿病的药物，或者为用于制备或筛选诊断2型糖尿病的产品，或者为用于制备诊断2型糖尿病的检测标志物。其中，所述产品包括前文所述诊断引物、或前文所述诊断试剂盒；所述药物的作用包括调节胰岛素分泌。

优选地，所述药物为原料药、药物制剂；所述产品为制剂、芯片、试剂、试剂盒。

发明人经调研发现，血液中存在着上万种非编码RNA，具有含量丰富、性质稳定、便于检测、且与特异性疾病存在着显著关联性等特点。血液中的非编码RNA由组织分泌，因此，血液中的非编码RNA的含量应能间接反映组织中的表达水平；在此基础上，通过无创性或低创性抽取血样的手段，以快速、灵敏、特异性的定量检测方法，筛选T2D患者血液中特异性表达或异常表达的循环非编码RNA作为分子标志物，应能作为糖尿病早期的辅助诊断技术手段，从而为遏制当前爆发性的糖尿病发病趋势贡献重要的社会价值。

发明人在实践研究中，首先通过高通量测序研究不同模型小鼠(db/-和 db/db)胰岛组织中差异表达的lncRNA，结果显示lncE130307A14Rik(命名为lnc-βFaar)在肥胖小鼠胰岛组织显著低表达；该lncRNA可以改善胰岛β细胞功能；之后，经大样本qRT-PCR检测T2D患者与血糖正常人的血清样本，最终发现lnc-βFaar在T2D病人血清样本中表达水平显著降低，表明lnc-βFaar 参与T2D的发生、发展，为临床检测诊断及治疗T2D提供新的生物靶标。在此基础上，发明人最终得出了前文所述的检测方法、诊断引物、诊断试剂盒以及相关的用途。

与现有技术相比，本发明可利用诊断引物/诊断试剂盒，通过检测非编码 RNA分子标志物lnc-βFaar来诊断2型糖尿病，检测方法操作简单，且灵敏度高，特异性强，对受检者的创伤性小，可用于早期和不同阶段2型糖尿病的诊断，具有明显的临床应用价值。

附图说明

图1为本发明实施例1中的分析结果图，具体为：与野生型小鼠胰岛组织相比，在db/db小鼠胰岛组织中差异表达的lncRNA。

图2为本发明实施例1中lnc-βFaar在不同体重小鼠胰岛组织中的表达水平验证结果图。

图3为本发明实施例1中UCSC分析结果图。

图4为本发明实施例1中序列保守性分析结果图。

图5为本发明实施例2中lnc-βFaar在MIN6细胞系及胰岛原代细胞内的转染效率验证结果图。

图6为本发明实施例2中lnc-βFaar过表达或敲除48小时后，ELISA检测胰岛素分泌结果图。

图7为本发明实施例2中qRT-PCR检测糖尿病患者及正常人血清样本中 lnc-βFaar的表达差异结果图。

具体实施方式

下面参照附图并结合实施例对本发明作进一步详细描述。但是本发明不限于所给出的例子。

实施例1

本实施例为小鼠实验研究。

一、主要实验材料

小鼠：5-8周龄的C57BL/6J小鼠、8周龄db/db小鼠、8周龄db/-小鼠。其中，C57BL/6J小鼠经高脂喂养16周后，按不同体重进行分组(22-25g， 28-30g，33-35g，38-40g，42-45g，48-50g)，每组小鼠数量为3只。

主要试剂：HΒSS(10X)(Invitrogen公司)，胶原酶Ⅴ(sigma公司)，Trizol 裂解液(Invitrogen公司)，Rneasy plus universal mini kit(qiagen)。

二、实验方法

具体实验过程如下：

2.1、不同模型小鼠胰岛组织的提取。

脱颈椎处死小鼠，置于体视显微镜下，用胶带固定，于剑突下作横向切口，开口尽量大，暴露肝脏、胃、十二指肠和脾脏。镊子夹起十二指肠，向下翻转，暴露出十二指肠大乳头(白色凸起)和胆囊。夹起脾脏使胰尾充分暴露以免受到压迫影响灌注。从胆囊向下找到胆管、肝管和胰管交汇的Y型三角区。在Y型区靠近胰腺部位结扎一次，并在结扎处上方2mm处再次结扎防止灌注时漏液。在十二指肠大乳头处结扎胰总管，先不扎紧，留出进针的空间。用2.5mL注射器吸取2mL配好的胶原酶V，从十二指肠肠管进针，再从肠内壁刺入十二指肠大乳头，并轻轻插入胰总管约0.8-1cm，保持针头平直，扎紧胰总管的结扎线，将针头连同胰管一同扎紧，防止倒流。一人轻推注射器活塞将胶原酶注入胰腺导管，另一人双手拉紧进针处的结扎线防止液体倒流。此时胰腺应逐渐膨胀，胰尾开始充盈。注射完毕后，从胰尾开始轻轻分离胰腺包膜。将与胃体、十二指肠、小肠各部位相连的胰腺轻轻分离，置入3mL胶原酶V溶液中(用50mL离心管作容器)。于37℃，60rpm消化28min，至均匀细沙状(颗粒小于1立方毫米)终止消化。加入5mL含10％胎牛血清Hanks液终止消化。倒入10cm皿中，在倒置显微镜下手工挑取胰岛，置入Hanks液中，以10mL管作容器。用Hanks液离心洗涤2遍，1000rpm， 4℃，2min，取沉淀。沉淀重悬于4mL 25％Ficoll中(以10mL管作容器)，在其上沿管壁缓慢、均匀加入23％、21％、11％Ficoll溶液，各2mL。此时各浓度间应有明显分界面。用4℃离心机800g离心20min。吸出Ficoll溶液，胰岛主要集中于11％和21％浓度的Ficoll中，23％Ficoll中也有少量较大的胰岛。用Hanks液洗涤2遍，用适量Hanks液重悬胰岛后再次倒入10cm皿中进行精细的挑取并置入适当容器中，此时即可得到较纯净的胰岛。

2.2、胰岛组织RNA提取。

不同小鼠胰岛组织按照Rneasy plus universal mini kit(qiagen)试剂盒的要求提取：

(1)样本中加入900uL aiazol lysis reagent，室温静置5min，加入100ul gDNAEliminator solution剧烈混匀15s。

(2)加入180μL三氯甲烷，剧烈涡旋混匀15s，室温静置2-3min

(3)4℃12000g离心15min，吸上清。

(4)加入1倍体积(上清体积)的70％乙醇，充分混匀。

(5)分次将液体加入mini spin colum收集管，每次最大体积为700μL， 8000g室温离心1min。

(6)在吸附柱内加入700μLβuffer RWT，8000g室温离心1min。

(7)加入500μLβuffer rpe到吸附柱内，8000g室温离心1min，重复一次。

(8)将吸附柱放入一个新的收集管，加入30μL无RNA酶的水洗脱，即得总RNA提取物。

2.3、lncRNA逆转录获得cDNA。

1)在离心管中加入下列试剂盒中的试剂。

表1.1 lncRNA逆转录体系

2)在冰上混合好上述试剂后，按照顺序进行标准逆转录程序：25℃30min， 42℃30min，85℃5min。完成后4℃备用。

2.4、染料法检测非编码RNA分子标志物的含量。

1)按照以下表格配制qRT-PCR反应体系：

表1.2 Lnc-βFaar的qRT-PCR反应体系

2)上述试剂混合完毕后，于Roche480II型qRT-PCR仪上执行qRT-PCR 反应：预变性为95℃3min，变性为95℃12s，退火为62℃40s。退火时采集荧光信号。变性和退火两步进行35次循环。

注：此处的lncRNA引物为针对小鼠各lncRNA设计的正向引物和反向引物，以实现高通量筛选。例如，针对小鼠源lnc-βFaar的引物为：正向引物 tgccgcggagaggatattttt、以及反向引物tggggtctggtagacatcct。

三、实验结果与讨论

3.1筛选差异表达的lncRNA。

通过Cuffdiff(v2.2.1)分析db/-小鼠(即野生型小鼠)和db/db模型小鼠胰岛组织中差异表达的lncRNA，发现14个lncRNA在db/db小鼠胰岛组织中显著低表达，其中lnc-βFaar降低倍数最多(如图1所示)。

3.2不同小鼠体重胰岛组织中lnc-βFaar表达趋势验证。

通过分离不同体重C57BL/6J小鼠的胰岛细胞，提取其RNA并进行 RT-qPCR验证，发现lnc-βFaar的表达含量随体重的增加而降低(如图2所示)。

3.3讨论。

小鼠源lnc-βFaar位于10qB1仅有一个转录本，人源lnc-βFaar存在于6q21 有4个转录本，其中人源lnc-βFaar的转录本3在人胰岛β细胞中表达含量最高(如图3所示)，人源lnc-βFaar转录本3与小鼠源lnc-βFaar的序列同源性为35.14％(如图4所示)。注：图3为使用UCSC(http://genome.ucsc.edu/) 分析小鼠源lnc-βFaar与人源lnc-βFaar的染色体位置；图4为使用Mega6和 DNAman分析小鼠源lnc-βFaar与人源lnc-βFaar的序列保守性。

以上述事实为基础，发明人认为后续有必要继续研究人源lnc-βFaar在2 型糖尿病患者、正常人血清样本中是否有表达差异。

实施例2

本实施例为MIN6细胞以及胰岛原代细胞实验研究。

一、利用Lipofectamine 2000在胰岛β细胞系MIN6细胞以及胰岛原代细胞转染lnc-βFaar过表达载体或lnc-βFaar的敲除载体。

具体操作如下：

(1)将2μg的lnc-βFaar过表达载体、2μg的过表达对照质粒pcDNA3.1、 2μg lnc-βFaar-sgRNA、2μg CRISPRv2质粒与50μL高糖DMEM双无培养基孵育5min(a)；同时将2μL/孔的Lipofectamine 2000与50μL双无DMEM 培养基孵育5min(b)；

(2)5min后将(a)和(b)孵育液混匀，继续孵育20min；

(3)20min后，将100μL孵育液加入至MIN6细胞以及胰岛原代细胞，在37℃,5％CO₂条件下培养4h；

(4)4h后换成高糖DMEM完全培养基(15％FBS，50μM β-mercaptoethanol，1％双抗)继续培养48h；

(5)转染48h后收集细胞，按照实施例1的2.2操作，提取细胞总RNA；

(6)按照实施例1的2.3和2.4进行操作，通过qRT-PCR检测lnc-βFaar 的转染效率，结果显示过表达lnc-βFaar时，其表达水平升高约250倍，而敲除lnc-βFaar时，敲除效率约为80％(如图5所示)。

二、已葡萄糖刺激胰岛素分泌实验(GSIS)检测lnc-βFaar对胰岛素分泌的影响。

具体实施方法如下：

(1)体外分离胰岛后(30个胰岛/96孔板)，于含有10％血清的1640培养基内培养12h；

(2)MIN6细胞(20-30代)接种于48孔板(1x10⁶)在含有15％血清， 1％双抗，50μMβ-巯基乙醇的高糖DMEM培养基培养24h；

(3)利用脂质体转染法将miR-802mimics转染MIN6细胞或胰岛原代细胞，转染48h后弃完全培养基，用300μL洗涤液(2％血清，2.5mM葡萄糖的KRBH缓冲液)洗涤3次，弃洗涤液，将胰岛在200μL饥饿液中孵育12h (10％血清，2.5mM葡萄糖的KREB缓冲液)；

(4)饥饿12h后用洗涤液洗涤3次，分别用200μL 2.5mM葡萄糖，33.3 mM葡萄糖诱导2h；

(5)取细胞上清于12000rpm离心5min，用小鼠胰岛素ELISA试剂盒检测胰岛素的分泌，同时用胰酶将细胞全部消化，然后用BCA试剂盒定量总蛋白含量，将ELISA试剂盒检测获得的胰岛素含量除以细胞总蛋白量得到每微克总蛋白分泌胰岛素的能力。

结果显示，当过表达lnc-βFaar时胰岛素分泌显著升高，而敲除lnc-βFaar 时，胰岛素分泌降低，说明lnc-βFaar促进胰岛素分泌(如图6所示)。

实施例3

本实施例为人血清样本实验研究。

采用本发明的诊断引物、诊断试剂盒、以及检测方法。

各具体序列如下所示：

SEQ ID No:1：

cggaaggggcggcggagcaccgatctcatggatgggctccgaggggcttgcgggaggggggcgccagtgttcggggccgttttggcggctatgcaggattggcaggagctgcgatgctcacacttgcctcgccgaccgccatttcaca tccagcagaggaggcgggggcagccgctgagacggtttttcacaaggaaatgacctcattcttgatggctgctgctaa cttatggtgagatgctgggtccctgcccaataccacatggacatccaatcaatttacccagggacaagtccactcaaga gcatcatttagaagagggaaaaggcactggggttatttgtttttggagtatgtgcttaaggaaatctagagtattcccacg agcattctgctgagatgaacaatcagatgacctcgtgtgagatttggaggagagaaggaaatggagagcatgcgtctg ccgcttctgtggtttctgtcggtaagcacagtgatgaggtgctgagttttccccagaaggcctcccagtgtcctattacca gcttcacaagcgtcgagggcagggcatgggcatctattgttcaccagtggagatctatctggcacagaaccgatccaa ccattgcagtggtcacagcggtgttggctttctgattctcaaccttcctgaccgccagaggagacagcctctttggtggc cctgttctgtggtattgtgctaaccggtggtgggactaaaactgtctctataatgttttatttcttaaaaaaaaattctgaagc aaatgtgacaatatgttaacattcttaaaatctgggtagtgggaacatggatgttgttatttgtggtgtgtttgaaattgtgtc atattataaattttaaaaaaatgttttgactacaaaatctctatgtatatgcccagtttttgtagattgttgcttacgcttttcatat ttttacccaaggagtaatcaggaattctaaaagtcttatgtaacaggatttaaaataaaattacacagaatctcaactgtact atattttgaaaatatgaatgattaagattattttttatatttttattaatatagagaaaataatttctataaaatatgctttcagctaa tgggggatcccattccatatttttttctttttcttttttttttttatttctccaagaaaaactcattccagttcttttgcattaaattctct tataccaaaaaaattgtttcaaaagttgcttagttgttatagaagatgattgcttatatgataaagaaatgttaaggccttgat aatattcaaaagcttctgtataaaaacaataccatggaaattaatgacagagtaaactttctgaattaaagttctctttcaaa ctatgagtaagaggagaattagctggcttcttttttcttttttttgaggcagggtcttgctctgtcacccaggctcaatcaca gctcactgcagccttgacctcctgggctcaggtgattttcccaccttagcctcctgagtagctgggaccacaggcatga gccaccacacctggctaatttttgtattattttggtagagatgggatttcgccatgttgcccaagctggtcacaaacttcctg ccttggcctcccaaagtgctgggattacaggcatgagccactatgcccaacctcagttggatgggtttgtgtgtatgtgt gtgtgtgttttgtttgttttttagtttttgagacagagtctcactctgtcacccaggctggagtgcagtggcacaatcacggctcactgcagccatgacctcttgtgctcaggcagttctcctgcctcagcctccttagtagctggaaccacaggtatgtgcc accacacccggctaatttttgtatttttttgtagagatgggttttcgctatgttgcccaggctggtctcaaattcctgggctca aacaatccacccacctctgcctcccaaagtgctgggattacaggtgtgagccaccaagcccagcctagctcctctacct gaacttatttttcattatcctaaagtgataaaatagatcaagaagatcagaacaggcttaaattgatgctataaaaccaatta ctctgtattatctttgcaactcttttgtaagtctaaaattgtttgaaaataaaagtttattttaaaaatta。

SEQ ID No:2：gggcatctattgttcacca。

SEQ ID No:3：gaatcagaaagccaacacc。

采用大量的2型糖尿病患者群及正常人群血清样本及样本临床信息来自各医院，且符合相关规定。

具体实验过程：

1、按如下过程进行血清样本总RNA提取。

血清样本总RNA按照miRNeasy Serum/Plasma kit(Qiagen)试剂盒的要求提取：

(1)200μL血清样本中加入1000μL qiazol lysis reagent，室温静置5min，加入Eliminator solution并剧烈混匀15s。

(2)加入200μL三氯甲烷，剧烈涡旋混匀15s，室温静置2-3min。

(3)4℃12000g离心15min，吸上清。

(4)加入900μL的100％乙醇，充分混匀。

(5)分次将液体加入mini spin colum收集管，每次最大体积为700μL，8000g室温离心1min。

(6)在吸附柱内加入700μL Buffer RWT，8000g室温离心1min。

(7)加入500μL Buffer rpe到吸附柱内，8000g室温离心1min，重复一次。

(8)将吸附柱放入一个新的收集管，加入10μL无RNA酶的水洗脱，即得总RNA提取物。

2、后续处理如下：

向总RNA提取物加入2.5μl对照C.elegans spiked-in control cel-miR-39(AppliedΒiosystems)，最后加入20μl无RNA酶水洗脱。按照实施例1的2.3 和2.4进行操作(其中，采用的lncRNA引物为lnc-βFaar正向引物SEQ ID NO:2 以及lnc-βFaar反向引物SEQID NO:3)，最终通过qRT-PCR检测lnc-βFaar的表达差异，结果显示与正常人血清样本相比，lnc-βFaar在糖尿病人血清样本中显著降低(如图7所示)。

由以上结果可知：

对于未知的人血液样本，检测其中非编码RNA分子标志物lnc-βFaar的表达量，并与已获知的正常人血液样本中lnc-βFaar的表达量水平进行比较，根据比较结果可以诊断该样本是否为或是否可能为2型糖尿病患者。

除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。

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序列表

<110> 中国药科大学

<120> 一种非编码RNA生物标志物lnc-βFaar的应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2195

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

cggaaggggc ggcggagcac cgatctcatg gatgggctcc gaggggcttg cgggaggggg 60

gcgccagtgt tcggggccgt tttggcggct atgcaggatt ggcaggagct gcgatgctca 120

cacttgcctc gccgaccgcc atttcacatc cagcagagga ggcgggggca gccgctgaga 180

cggtttttca caaggaaatg acctcattct tgatggctgc tgctaactta tggtgagatg 240

ctgggtccct gcccaatacc acatggacat ccaatcaatt tacccaggga caagtccact 300

caagagcatc atttagaaga gggaaaaggc actggggtta tttgtttttg gagtatgtgc 360

ttaaggaaat ctagagtatt cccacgagca ttctgctgag atgaacaatc agatgacctc 420

gtgtgagatt tggaggagag aaggaaatgg agagcatgcg tctgccgctt ctgtggtttc 480

tgtcggtaag cacagtgatg aggtgctgag ttttccccag aaggcctccc agtgtcctat 540

taccagcttc acaagcgtcg agggcagggc atgggcatct attgttcacc agtggagatc 600

tatctggcac agaaccgatc caaccattgc agtggtcaca gcggtgttgg ctttctgatt 660

ctcaaccttc ctgaccgcca gaggagacag cctctttggt ggccctgttc tgtggtattg 720

tgctaaccgg tggtgggact aaaactgtct ctataatgtt ttatttctta aaaaaaaatt 780

ctgaagcaaa tgtgacaata tgttaacatt cttaaaatct gggtagtggg aacatggatg 840

ttgttatttg tggtgtgttt gaaattgtgt catattataa attttaaaaa aatgttttga 900

ctacaaaatc tctatgtata tgcccagttt ttgtagattg ttgcttacgc ttttcatatt 960

tttacccaag gagtaatcag gaattctaaa agtcttatgt aacaggattt aaaataaaat 1020

tacacagaat ctcaactgta ctatattttg aaaatatgaa tgattaagat tattttttat 1080

atttttatta atatagagaa aataatttct ataaaatatg ctttcagcta atgggggatc 1140

ccattccata tttttttctt tttctttttt ttttttattt ctccaagaaa aactcattcc 1200

agttcttttg cattaaattc tcttatacca aaaaaattgt ttcaaaagtt gcttagttgt 1260

tatagaagat gattgcttat atgataaaga aatgttaagg ccttgataat attcaaaagc 1320

ttctgtataa aaacaatacc atggaaatta atgacagagt aaactttctg aattaaagtt 1380

ctctttcaaa ctatgagtaa gaggagaatt agctggcttc ttttttcttt tttttgaggc 1440

agggtcttgc tctgtcaccc aggctcaatc acagctcact gcagccttga cctcctgggc 1500

tcaggtgatt ttcccacctt agcctcctga gtagctggga ccacaggcat gagccaccac 1560

acctggctaa tttttgtatt attttggtag agatgggatt tcgccatgtt gcccaagctg 1620

gtcacaaact tcctgccttg gcctcccaaa gtgctgggat tacaggcatg agccactatg 1680

cccaacctca gttggatggg tttgtgtgta tgtgtgtgtg tgttttgttt gttttttagt 1740

ttttgagaca gagtctcact ctgtcaccca ggctggagtg cagtggcaca atcacggctc 1800

actgcagcca tgacctcttg tgctcaggca gttctcctgc ctcagcctcc ttagtagctg 1860

gaaccacagg tatgtgccac cacacccggc taatttttgt atttttttgt agagatgggt 1920

tttcgctatg ttgcccaggc tggtctcaaa ttcctgggct caaacaatcc acccacctct 1980

gcctcccaaa gtgctgggat tacaggtgtg agccaccaag cccagcctag ctcctctacc 2040

tgaacttatt tttcattatc ctaaagtgat aaaatagatc aagaagatca gaacaggctt 2100

aaattgatgc tataaaacca attactctgt attatctttg caactctttt gtaagtctaa 2160

aattgtttga aaataaaagt ttattttaaa aatta 2195

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

gggcatctat tgttcacca 19

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gaatcagaaa gccaacacc 19

Claims (6)

1. 一种2型糖尿病的诊断引物，其特征是，由lnc-βFaar正向引物SEQ ID NO:2以及lnc-βFaar反向引物SEQ ID NO:3构成。

2.一种2型糖尿病的诊断试剂盒，其特征是，包括权利要求1所述的诊断引物。

3. 根据权利要求2所述的诊断试剂盒，其特征是，所述诊断试剂盒还包括：作为阳性对照的非编码RNA分子标志物，所述非编码RNA分子标志物为序列如SEQ ID NO:1所示的lnc-βFaar。

4.权利要求1所述诊断引物在制备诊断2型糖尿病的试剂盒中的应用。

5.权利要求1所述诊断引物在制备诊断2型糖尿病的芯片中的应用。

6.权利要求2或3所述诊断试剂盒在制备诊断2型糖尿病的医疗工具中的应用。

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