CN112592899A - 一种杂交瘤细胞株及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种杂交瘤细胞株及其应用，该杂交瘤细胞株可分泌番茄斑萎病毒的单克隆抗体，该单克隆抗体用于制备免疫金标速测卡，其方法如下，步骤1、对番茄斑萎病毒重组蛋白进行纯化，步骤2、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，获得多克隆抗体，步骤3、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫小鼠，然后通过细胞融合、克隆化筛选制备得到该单克隆抗体，最后制备小鼠腹水，经过纯化得到鼠抗番茄斑萎病毒单克隆抗体，步骤4、通过配对筛选，得到配对的单克隆抗体和多克隆抗体用于所述免疫金标速测卡，借此，本发明具有可将该免疫金标速测卡应用于番茄斑萎病毒进行快速、现场和灵敏的检测的优点。
Description
技术领域
本发明属于番茄斑萎病毒技术领域，特别涉及一种杂交瘤细胞株及其应 用。
背景技术
番茄斑萎病毒(TSWV)的粒子呈球型，直径约85am，表面包裹有一层膜， 膜外层由突起层组成，突起层厚5nm，几乎连续。该病毒共有4种结构蛋白， 包括：糖蛋白G1，其分子质量为78.0kDa；糖蛋白G2，其分子质量为 58.0kDa；蛋白L，分子质量为200.0kDa；外壳蛋白N，其分子质量为 28.8kDa。粒子重量的20％～30％为脂类，粒子重量的7％为碳水化合物，病毒包裹3分子线形ssRNA，其基因组长约16600nt，核酸占病毒粒子总重量的1 ％～2％，各基因组RNA均由核衣壳蛋白(N)包被，形成拟核衣壳结构，每一 双层膜结构内包被3个核衣壳。大的RNA片段(L)为8897nt，编码RNA聚合 酶(331kD)，小RNA片段(S，2916nt)和中等大小RNA片段(M，4821nt)以 反义方式排列，小RNA编码核衣壳蛋白(30kD)及非结构蛋白(NS)，mRNA的 互补链编码G1和G2的前蛋白和一种非结构蛋白(NS)，病毒链编码运动蛋白 (M，33.6kD)。粗汁液钝化温度为40～46℃(10min)，稀释限点为2×10-3～ 2×10-2，离体病毒的体外存活期为室温下2～5h。
番茄斑萎病毒的寄主范围广泛，包括30多科双子叶植物和7科单子叶植 物的100多种植物可自然感病，汁液接种可传播50多科300多种植物。茄 科、葫芦科、菊科和豆科植物都受害严重。其重要的寄主植物很多，主要经济 作物有烟草、马铃薯、番茄、茄、花生、辣椒等。该病毒同时可感染一些常见 的杂草，如三叶鬼针草、蒲公英等；系统侵染的寄主有番茄、百日草、烟草和 莴苣等；局部侵染的寄主有矮牵牛、心叶烟及黄瓜等。据报道，该病毒能引起 严重的经济损失，番茄斑萎病毒侵染70科900多种植物，包括粮食、烟草、 蔬菜及花卉，因此受到国际植物病理学界的重视。既使是在同一寄主植物上， 因品种、年龄、营养状况和环境条件的不同，番茄斑萎病毒的危害症状也会有 很大差异。
目前常规检测TSWV的方法为PCR，需要专门的实验室场地，需要借助专门 的仪器设备，并且对操作人员要求较高，需要有相当的专业知识、技能和操作 经验，检测过程前处理复杂，所需时间很长。
以侧向流动为检测原理的金标卡检测方法已在很多领域中有过应用，包括 食品安全检测、植物转基因检测等，但针对茄科、豆科、十字花科、菊科和葫 芦科等作物上病毒检测较少。
发明内容
本发明提出一种杂交瘤细胞株及其应用，能够分泌番茄斑萎病毒的单克隆 抗体，并将其应用于检测试剂盒和免疫金标速测卡。
本发明的技术方案是这样实现的：一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为 CCTCC NO:C202055。
一种番茄斑萎病毒的单克隆抗体，该单克隆抗体由杂交瘤细胞株产生，单 克隆抗体亚型为IgG1，轻链类型为κ。
一种检测试剂盒，该检测试剂盒内包杂交瘤细胞株或所述的单克隆抗体， 所述检测试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶 联免疫试剂盒或荧光检测试剂盒中的一种。
一种免疫金标速测卡，包括标记垫和与标记垫相搭接的层析膜，标记垫含 有被胶体金标记的权利要求2所述的单克隆抗体，层析膜上的检测线含有番茄 斑萎病毒多克隆抗体，层析膜上的控制线含有羊抗鼠IgG二抗。
作为一种优选的实施方式，其制备方法如下：
步骤1、对番茄斑萎病毒重组蛋白进行纯化；
步骤2、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，获得多克隆抗体；
步骤3、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫小鼠，然后通过细胞融合、 克隆化筛选制备得到单克隆抗体细胞株，最后制备小鼠腹水，经过纯化得到鼠 抗番茄斑萎病毒单克隆抗体；
步骤4、通过配对筛选，得到配对的单克隆抗体和多克隆抗体用于所述免 疫金标速测卡。
作为一种优选的实施方式，标记垫上单克隆抗体的量为5ng-50ng，层析膜 上多克隆抗体的量为0.4μg-1.2μg。
作为一种优选的实施方式，步骤1中进行纯化的方法如下：
步骤5、选取病毒目标蛋白合成基因序列，并按照基因序列，合成原核表 达载体pET-30a-TSWV，转化BL21与Rosetta；
步骤6、固体平板上挑取pET30a-TSWV单克隆菌落接入LB液体培养基， 37℃培养12h-14h；
步骤7、次日，将步骤6中的菌种以1：50接入LB液体培养基，37℃培养 至OD＝0.4-0.6，加入IPTG，20℃-30℃诱导表达3h-7h后菌液离心，收集菌 体；
步骤8、将步骤7中的菌体进行超声波裂解，收集上清液和沉淀；
步骤9、将步骤8中的上清液利用树脂进行纯化，并用咪唑洗脱，收集洗 脱液后透析去除咪唑，得到纯化后的番茄斑萎病毒重组蛋白。
作为一种优选的实施方式，步骤2中多克隆抗体的制备方法如下：
步骤10、将纯化后的番茄斑萎病毒重组蛋白和等体积的弗氏佐剂混合乳化 均匀，呈油包水状态，以备免疫兔；
步骤11、将番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，皮下免疫3次，间隔4周，最 后经ELISA检测；
步骤12、将免疫兔血清离心后取上清液，在搅拌的条件下加入饱和硫酸 铵，继续搅拌后离心，取沉淀后溶于PBS，并透析过夜；
步骤13、将步骤12中的沉淀采用Protein G小柱进行传话，并保持PH 呈中性，即得到多克隆抗体。
作为一种优选的实施方式，步骤3中单克隆抗体的制备方法如下：
步骤14、将纯化后的番茄斑萎病毒重组蛋白和等体积的弗氏佐剂混合乳化 均匀，呈油包水状态，以备免疫小鼠；
步骤15、将番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，皮下免疫3次，间隔4周，最 后经ELISA检测；
步骤16、最后一次免疫后2周，腹腔注射抗原进行加强免疫，3天后进行 细胞融合；
步骤17、将融合好的细胞铺进孔板，用HAT培养液进行培养，3天后换 液，改用HT培养液培养；
步骤18、使用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，10天后检测，将阳性克 隆继续有限稀释法进行克隆化，直到得到的克隆都为阳性，可建立阳性细胞 株；
步骤19、提前1周在小鼠腹腔注射矿物油，将细胞株注射入小鼠腹腔后收 集腹水，离心后所得上清即为单克隆抗体腹水；
步骤20、将步骤19中的腹水离心后取上清液，在搅拌的条件下加入饱和 硫酸铵，继续搅拌后离心，取沉淀后溶于PBS，并透析过夜；
步骤21、将步骤20中的沉淀采用Protein G小柱进行传话，并保持PH 呈中性，即得到单克隆抗体。
作为一种优选的实施方式，该免疫金标速测卡的检测方法如下：
步骤22、加入待检样本；
步骤23、当样本中含有待检测物质时，检测线和控制线显色，当样本中不 含有待检测物质时，检测线不显色，控制线显色。
采用了上述技术方案后，本发明的有益效果是：
本发明筛选到一株杂交瘤细胞，能够分泌番茄斑萎病毒的单克隆抗体，该 单克隆抗体的灵敏度高，特异性强，效价高，具有良好的稳定性。
本发明提供的免疫金标速测卡可以应用于番茄斑萎病毒进行快速、现场和 灵敏的检测。本发明免疫金标速测卡主要应用于叶片样品的检测，样品前处理 操作简单，检测时间短、结果判定标准统一：阴性结果(仅出现1条C线)； 阳性(+)：C/T线同时显色。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施 例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述 中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付 出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为免疫金标速测卡的结构示意图；
图2为免疫金标速测卡的内部结构示意图。
图中，1-底板；2-层析膜；3-吸收垫；4-标记垫；5-样品垫；6-T线；7-C 线；8-壳体；9-加样孔；10-观察孔。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清 楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是 全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造 性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
结合图1和图2所示，一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株可分泌分泌番 茄斑萎病毒的单克隆抗体，该杂交瘤细胞株或单克隆抗体可应用于检测试剂盒 中，该检测试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、 酶联免疫试剂盒或荧光检测试剂盒中的一种。
同时，该番茄斑萎病毒的单克隆抗体可应用于免疫金标速测卡中。
一、番茄斑萎病毒重组蛋白的纯化制备
1、序列合成：
选取番茄班委病毒目标蛋白合成基因序列,
蛋白序列(SEQIDNO：1所示)如下：
MSKVKLTKENIVALLTQGKDLEFEEDQNLVAFNFKTFCLENLDQIKKMSIISCLTFLKNRQSIM KVIKQSDFTFGKITIKKTSDRIGATDMTFRRLDSLIRVRLVEETGNSENLNTIKSKIASHPLIQAYGL PLDDAKSVRLAIMLGGSLPLIASVDSFEMISVVLAIYQDAKYKDLGIDPKKYDTREALGKVCTVLKSK AFEMNEDQVKKGKEYAAILSSSNPNAKGSIAMEHYSETLNKFYEMFGVKKQAKLAELA
基因序列(SEQIDNO：2所示)如下
ATGTCTAAGGTTAAGCTCACTAAGGAAAACATTGTTGCTTTGTTGACACAAGGCAAAGATCTTG AATTTGAAGAAGATCAGAATCTGGTAGCATTTAACTTCAAGACTTTTTGTCTGGAAAACCTTGACCAG ATCAAGAAGATGAGCATTATTTCATGTCTGACATTCCTGAAGAATCGTCAGAGTATAATGAAGGTTAT TAAGCAAAGTGATTTTACTTTTGGCAAAATCACTATAAAGAAAACTTCAGACAGGATTGGAGCCACTG ACATGACCTTCAGAAGGCTTGATAGCTTGATCAGGGTCAGGCTTGTCGAGGAAACTGGGAATTCTGAG AATCTCAATACTATCAAATCTAAGATTGCTTCTCACCCTCTGATTCAAGCCTATGGATTACCTCTTGA TGATGCAAAGTCTGTGAGGCTTGCCATAATGCTGGGAGGTAGCTTACCTCTTATTGCTTCAGTTGATA GCTTTGAGATGATCAGTGTTGTCTTGGCTATATATCAGGATGCAAAATACAAAGACCTCGGGATCGAT CCAAAGAAGTATGACACCAGGGAAGCCTTAGGAAAAGTTTGCACTGTGCTAAAAAGCAAAGCATTTGA AATGAATGAAGATCAGGTGAAGAAAGGGAAAGAGTATGCTGCTATACTTAGCTCCAGCAATCCTAATG CTAAAGGAAGTATTGCTATGGAACATTACAGTGAAACTCTTAACAAGTTCTATGAAATGTTCGGGGTT AAAAAACAGGCAAAACTTGCAGAACTTGCTTAA
按照基因序列，合成原核表达载体pET-30a-TSWV，转化BL21(B)与 Rosetta(R)；
2、蛋白的大量表达和纯化，步骤如下：
①菌种活化：固体平板上挑取pET30a-TSWV单克隆菌落接入5mL LB液体 培养基(卡那浓度50μg/mL)，37℃培养12h-14h。
②小试表达：次日，菌种以1：50接入800mL LB液体培养基(卡那浓度 50μg/mL)，37℃培养至OD＝0.4-0.6，加入浓度为0.8mM的IPTG，25℃诱导表 达6h后菌液8000rpm、4℃离心15min，收集菌体。
③菌种裂解：加100mL破碎液进行超声波裂解。裂解条件：温度冰浴、功 率60％、超声2s、间隔2s、时间15min。12000rpm、4℃离心15min，收集上清 和沉淀。
④上清纯化：收集的上清利用高亲和性NI树脂进行纯化，50mM咪唑洗 脱，收集洗脱液。将50mM咪唑洗脱液透析去除咪唑。经检测，最终目的蛋白 纯度大于90％，浓度2mg/mL。
二、番茄斑萎病毒多克隆抗体的制备
1、免疫原制备：将步骤一纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白与等体积的弗氏 佐剂混合乳化均匀，成油包水状态，以备免疫兔。
2、免疫策略：将重组蛋白免疫新西兰大白兔，皮下免疫3次，间隔4 周，最后经ELISA检测，抗血清效价达到1:243000以上。
3、抗体纯化
免疫兔血清离心15min(4000rpm，室温)，取上清，在4℃搅拌下逐滴 缓慢加入饱和硫酸铵至半饱和，继续搅拌30min，离心30min(13000rpm， 4℃)，弃上清；沉淀溶于适量PBS(0.01M，pH7.4)；在4℃搅拌下逐滴缓 慢加入饱和硫酸铵至33％(体积)，继续搅拌30min，离心30min(13000 rpm，4℃)，弃上清；沉淀溶于适量PBS(0.01M，pH7.4)，4℃透析过夜，测 定抗体含量，-20℃冻存备用。硫酸铵沉淀后继续采用Protein G小柱进行纯 化，新柱子先用5ml超纯水过柱，再用5ml 0.4M PB缓冲液(pH 7.0)平衡 纯化小柱；抗体过柱，过程中要求缓慢过柱，以求抗体蛋白更好的结合在结合 位点上；继续10ml 0.4M PB缓冲液(pH 7.0)平衡纯化小柱；5ml 0.1M甘 氨酸-盐酸缓冲液(pH 3.0)洗脱结合位点上的抗体，并加入1MTris-HCl (pH 8.0)中和甘氨酸，使pH保持为适合抗体保存的中性。
三、番茄斑萎病毒单克隆抗体的制备
1、免疫原制备：将步骤一纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白与等体积的弗氏 佐剂混合乳化均匀，成油包水状态，以备免疫小鼠。
2、免疫策略：将重组蛋白免疫4只Balb/c小鼠，皮下免疫3次，间隔4 周，最后经ELISA检测，四只小鼠的抗血清效价如下：
编号 效价
FL269-11:243000
FL269-2>1:243000
FL269-3>1:243000
FL269-4>1:243000
3、细胞融合：最后一次免疫后两周，腹腔注射抗原进行加强免疫，三天 后进行细胞融合。将小鼠断颈处死，70％质量分数乙醇浸泡30min消毒，在超 净台剪开腹腔，取出脾脏，磨碎，过80目筛网，得到脾细胞，加入SP2/0骨 髓瘤细胞，在PEG4000的作用下进行细胞融合，细胞融合为常规实验方法。
4、融合筛选：将融合好的细胞铺进96孔板，用HAT培养液进行培养，三 天后换液，改用HT培养液培养。10天后，取细胞培养上清进行检测。
5、克隆化与建株：使用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，10天后检测， 将阳性克隆继续有限稀释法进行克隆化，直到得到的克隆都为阳性，可建立阳 性细胞株。最终获得阳性细胞株15株。
6、扩大培养：将建株的单克隆细胞扩大培养，并进行冻存。
7、验证筛选：将单克隆抗体进行配对筛选，其中11#单克隆抗体作为标记 抗体，多抗作为包被抗体的配对检测重组蛋白和实际样本效果最好，将产生11# 单克隆抗体的杂交瘤细胞进行保藏，其保藏的分类命名为：杂交瘤细胞株 FL269－09，保藏编号为：CCTCC NO：C202055，保藏地址为：中国武汉武汉大学 的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，该保藏物于2020年4月1日交由中国 武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心进行保藏，并于2020年6月9日检 测完毕，为存活。
验证方法如下：
A、包被：将15株纯化后的鼠单克隆抗体用pH9.6的碳酸盐缓冲液(包被 液，下同)按照1:100倍稀释，100μL/孔，4℃过夜
B、封闭：洗液清洗包被板3次，每次洗液用量300μL，时间为1min，10％ 小牛血清封闭(用PH9.6的碳酸盐缓冲液按照1:9倍稀释)，每孔150μL，恒温 37℃封闭3小时。
C、加样：加入浓度梯度为10、2、0ppb的TSWV重组蛋白(步骤(1)纯化 的)以及阳性叶片样本、健康叶片样本、提取液，100μL/孔，25℃，温育45 min。
D、加检测抗体：用稀释液按1：1000比例稀释步骤(二)制备获得的兔 多抗，充分混匀，每孔100μl，25℃，温育45min。
E、加酶：用稀释液按1：1000比例稀释羊抗兔酶标二抗(KPL，074- 1801)，充分混匀，每孔100μl，25℃，温育30min。
F、显色：洗液清洗包被板3次，每次洗液用量300μL，时间为1min， 每孔加TMB 100μL，25℃反应15min。
G、终止与检测：加入2M H2SO4，100μL/孔，450nm读取OD(吸光度) 值。
杂交瘤细胞株的腹水阳性筛选结果如下：
| 抗体编号 | 10ppb | 2ppb | 0 | 阳性样本 | 阴性样本 |
| FL269-1 | 3.795 | 2.243 | 0.194 | 1.574 | 0.259 |
| FL269-2 | 0.260 | 0.224 | 0.184 | 2.040 | 0.306 |
| FL269-3 | 0.138 | 0.184 | 0.184 | 2.103 | 0.277 |
| FL269-4 | 3.330 | 2.270 | 0.233 | 1.597 | 0.264 |
| FL269-5 | 0.457 | 0.201 | 0.255 | 0.259 | 0.253 |
| FL269-6 | 0.144 | 0.212 | 0.188 | 0.266 | 0.211 |
| FL269-7 | 0.611 | 0.427 | 0.472 | 0.291 | 0.275 |
| FL269-8 | 0.427 | 0.255 | 0.246 | 0.280 | 0.307 |
| FL269-9 | 1.857 | 0.722 | 0.247 | 1.833 | 0.270 |
| FL269-10 | 2.924 | 1.976 | 0.231 | 1.711 | 0.221 |
| FL269-11 | 1.034 | 3.976 | 0.216 | 2.411 | 0.306 |
| FL269-12 | 0.379 | 0.123 | 0.110 | 0.830 | 0.291 |
| FL269-13 | 1.966 | 0.447 | 0.344 | 2.576 | 0.362 |
| FL269-14 | 1.305 | 0.278 | 0.196 | 0.771 | 0.152 |
| FL269-15 | 2.455 | 0.532 | 0.358 | 0.332 | 0.167 |
四、番茄斑萎病毒单克隆抗体腹水的制备与纯化
1、取保藏编号为CCTCC NO：C202055的番茄斑萎病毒单克隆抗体杂交瘤细 胞株，在细胞培养瓶中扩大培养(该番茄斑萎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株进 行保藏的分类命名为：杂交瘤细胞株FL269－09，保藏编号为：CCTCC NO：C202055， 保藏地址为：中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，该保 藏物于2020年4月1日交由中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心进 行保藏，并于2020年6月9日检测完毕，为存活)；
2、腹水制备：提前一周在小鼠腹腔注射矿物油，将5x106左右的细胞注 射入小鼠腹腔，10天左右收集腹水，4000rpm离心，得上清即为单克隆抗体腹 水。
3、单克隆抗体纯化：腹水离心15min(4000rpm，室温)，取上清，在4 ℃搅拌下逐滴缓慢加入饱和硫酸铵至半饱和，继续搅拌30min，离心30min (13000rpm，4℃)，弃上清；沉淀溶于适量PBS(0.01M，pH7.4)；在4℃搅 拌下逐滴缓慢加入饱和硫酸铵至33％，继续搅拌30min，离心30min (13000rpm，4℃)，弃上清；沉淀溶于适量PBS(0.01M,pH7.4)，4℃透析过夜，测定抗体含量，-20℃冻存备用。硫酸铵沉淀后继续采用Protein G小柱 进行纯化，新柱子先用5ml超纯水过柱，再用5ml 0.4M PB缓冲液(pH 7.0)平衡纯化小柱；抗体过柱，过程中要求缓慢过柱，以求抗体蛋白更好的 结合在结合位点上；继续10ml 0.4M PBS缓冲液(pH7.0)平衡纯化小柱；5 ml 0.1M甘氨酸-盐酸缓冲液(pH 2.7)洗脱结合位点上的抗体，并加入1 MTris-HCl(pH 8.0)中和甘氨酸，使pH保持为适合抗体保存的中性。
五、单克隆抗体特异性分析
以TSWV、TMV、PVY、CMV、包被酶标版，以间接法对11#单克隆抗体进行 效价检测，从ELISA结果可以看出，所制备的单克隆抗体的效价较高，且特异 性很高，与一些常见植物病毒，如TMV、PVY、CMV等均不发生反应。
下表为杂交瘤细胞株的腹水特异性交叉实验结果
番茄斑萎病毒速测卡的制作
按以下结构制备免疫金标速测卡：
除抗体外，速测卡的结构为现有技术，如图1和图2所示，速测卡的结构 一般包括壳体8，壳体8内封装有底板1以及设于底板1上的试纸条，试纸条 包括样品垫5、标记垫4、层析膜2和吸收垫3，样品垫为玻璃纤维膜，大小为 3mm×15mm；标记垫大小为3mm×4mm；层析膜为NC膜，大小为3mm× 28mm；吸收垫为吸水纸，大小为3mm×19mm。
标记垫4处于样品垫5前端的下方，标记垫4与样品垫5的重合部位长度 为1mm-1.5mm。标记垫4的前端搭在NC膜2后端上方，标记垫4与NC膜2重 合部分的长度为1mm-2mm。吸收垫3的后端搭在NC膜2前端上方。
上述的前端和后端是指沿样品液行进方向区分前端和后端，以加样孔作为 试纸条的上方。
沿样品前进方向，NC膜2设有T线(检测线)6和C线(控制线)7，T线 由番茄斑萎病毒多克隆抗体固定形成，C线由二抗固定形成。标记垫4固定番 茄斑萎病毒单克隆抗体。壳体8在对应样品垫5的部位开设有加样孔9，加样 孔9大小为3mm×7mm，壳体8在对应NC膜T线6和C线7的部位设有观察孔 10，观察孔10大小为3mm×18mm。
组装时，在底板1上按照上述结构将试纸条固定，固定的时候可采用粘结 的方式，注意避免影响样品液流经路径，最后封装在壳体8内。
使用时，将速测卡水平放置，于加样孔9中加入100μL样品溶液。样品 溶液会沿样品垫5渗透至胶体金标记抗体的标记垫4，并与NC膜上的特异性抗 体形成双抗体夹心结构。8-10min后，于结果观察孔10中观察颜色变化，作出 判断。结果判断：阴性结果(出现1条C线7)；阳性(+)：C/T线6同时显 色。
一、包被
选取PALL170的硝酸纤维素膜(NC膜)用划膜喷金机将浓度为2.0mg/mL 的TSWV包被抗体溶液(即实施例1制备纯化的多克隆抗体)以1.0μL/cm划T 线6，作为检测线；浓度为1mg/mL的羊抗鼠二抗(羊抗鼠IgG)以1.0μL/cm 划C线7，作为质控线；37℃烘干24小时，待用；得到包被抗体的硝酸纤维素 膜。
二、胶体金制备
a)准备：将500mL烧杯、20mL小烧杯、转子、棕色瓶、玻璃棒等洗净后 放入酸缸中(重铬酸钾：浓硫酸：超纯水＝120g:200ml:1000ml)浸泡24小 时。取出先用自来水冲洗3-4次，再用超纯水冲洗3-4次，置于37℃烘箱中 烘干备用。
b)烧金溶液A的配置。用塑料称量匙称取1g氯金酸粉末(购于sigma)于 棕色瓶中，加入99ml超纯水充分溶解，4℃避光保存。
c)烧金溶液B的配置。称取1g柠檬酸三钠(购自sigma)溶解于99ml超 纯水中，混匀。
d)胶体金的制备：量取99ml超纯水于烧杯中，加入1ml烧金溶液A，置于 恒温磁力搅拌器上搅拌混匀，开启加热至溶液沸腾，迅速加入2ml新制备的烧 金溶液B，继续搅拌加热，溶液逐渐变为蓝黑色，然后紫黑，再加热出现红 色，继续沸煮出现透明的橙红色，继续沸煮7-10min，自然冷却至室温，加超 纯水定容至100ml。倒入棕色瓶，4℃避光保存；得到胶体金(粒径为25nm)。
三、抗体标记
a)抗体的标记：取1.5ml上述1)制取好的胶体金，用0.1M的K2CO3调 节pH值，分别加入TSWV标记抗体20ug(即实施例1制备纯化的10#单克隆抗 体)，混合均匀，室温反应40min。加入10％的BSA终止，静置30min。
b)标记抗体纯化：先用低速(1500r/min)离心，弃去由凝聚的金胶粒 形成的沉淀。然后用高速(8500r/min)离心30分钟。仔细吸去上清，沉淀 物用含1％BSA的0.1M PBS 50ul(PH7.4)复溶，4℃保存；得到标记胶体金抗 体溶液。
四、喷金
将上述3)制备的标记好的标记胶体金抗体溶液稀释到0.1mg/ml，以 1ul/cm喷于预处理过的金标垫，烘干待用，得到固定有胶体金标记的特异性单 克隆抗体的标记垫4。
五、大板组装
将各个组成按图2组装固定在底板1(PVC带胶底板1)上，然后置于37 ℃真空干燥30min。
六、切条组装
在上层的塑料卡壳(即壳体8)上有两个孔，加样孔9和观察孔10，加样 孔9大小为3mm×7mm，观察孔10大小为3mm×18mm。
将组装好的大板切成3mm宽的条子，装入塑料卡壳中。
七、番茄斑萎病毒免疫金标速测卡检测重组蛋白效果评价
1)加样孔9中加入100μL空白样品液(pH 7.4，10mmol/L PBS:8g氯 化钠、3.35g十二水合磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，双蒸水 溶解定容至1L)，在室温条件下反应8分钟后在结果观察孔10中观察显色结 果。结果表明，观察孔10中呈现明显的酒红色的控制线C线7，T线6不显 色。
2)加样孔9中加入100μL1μg/ml的番茄斑萎病毒重组蛋白溶液(采样 同上的PBS溶液稀释配成)，按照与空白样品同样的操作步骤。结果表明，观 察孔10中控制线C线7、检测线T线6显色。
3)加样孔9中加入100μL0.5μg/ml的番茄斑萎病毒重组蛋白溶液 (采样同上的PBS溶液稀释配成)，按照与空白样品同样的操作步骤。结果表 明，观察孔10中控制线C线7、检测线T线6显色。
4)加样孔9中加入100μL0.25μg/ml的番茄斑萎病毒重组蛋白溶液 (采样同上的PBS溶液稀释配成)，按照与空白样品同样的操作步骤。结果表 明，观察孔10中控制线C线7显色、检测线T线6颜色很浅。
5)加样孔9中加入100μL0.1μg/ml的番茄斑萎病毒重组蛋白溶液(采 样同上的PBS溶液稀释配成)，按照与空白样品同样的操作步骤。结果表明， 观察孔10中控制线C线7显色，检测线T线6不显色。
综上判定该速测卡对重组蛋白的检测灵敏度可以达到0.25μg/ml。
八、番茄斑萎病毒免疫金标速测卡检测叶片样本效果评价
叶片样本处理方法：将叶片组织置于一次性组织提取管的盖子与管身之 间，迅速盖住盖子，重复2次，得到2片圆形叶片组织；用杵将叶片置于提取 管的底部；将杵插入管中，旋转杵或枪头碾搅碎叶片，持续按压20～30秒。加 入1mL(约40滴)提取缓冲液(10mmPBS缓冲液)；重复碾碎步骤使样品与缓 冲液充分接触混合；静置沉淀或者离心得到上清液，即为叶片样本提取液。
加样孔9中加入100μL未侵染番茄斑萎病毒的健康叶片样本提取液，按 照与空白样品同样的操作步骤。结果表明，观察孔10中呈现明显的酒红色的 控制线C线7，检测线T线6不显色。
加样孔9中加入100μL实验室扩繁的番茄斑萎病毒阳性的叶片样本提取 液，按照与空白样品同样的操作步骤。结果表明，观察孔10中控制线C线7、 检测线T线6显色。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“纵向”、“横向”、“上”、“下”、 “前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”等指 示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本 发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、 以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。在本发明的描述 中，除非另有规定和限定，需要说明的是，术语“安装”、“相连”、“连接”应 做广义理解，例如，可以是机械连接或电连接，也可以是两个元件内部的连 通，可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，对于本领域的普通技术 人员而言，可以根据具体情况理解上述术语的具体含义。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的 精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的 保护范围之内。
序列表
<110> 中国农业科学院烟草研究所
<120> 一种杂交瘤细胞株及其应用
<141> 2020-08-25
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 258
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 1
Met Ser Lys Val Lys Leu Thr Lys Glu Asn Ile Val Ala Leu Leu Thr
1 5 10 15
Gln Gly Lys Asp Leu Glu Phe Glu Glu Asp Gln Asn Leu Val Ala Phe
20 25 30
Asn Phe Lys Thr Phe Cys Leu Glu Asn Leu Asp Gln Ile Lys Lys Met
35 40 45
Ser Ile Ile Ser Cys Leu Thr Phe Leu Lys Asn Arg Gln Ser Ile Met
50 55 60
Lys Val Ile Lys Gln Ser Asp Phe Thr Phe Gly Lys Ile Thr Ile Lys
65 70 75 80
Lys Thr Ser Asp Arg Ile Gly Ala Thr Asp Met Thr Phe Arg Arg Leu
85 90 95
Asp Ser Leu Ile Arg Val Arg Leu Val Glu Glu Thr Gly Asn Ser Glu
100 105 110
Asn Leu Asn Thr Ile Lys Ser Lys Ile Ala Ser His Pro Leu Ile Gln
115 120 125
Ala Tyr Gly Leu Pro Leu Asp Asp Ala Lys Ser Val Arg Leu Ala Ile
130 135 140
Met Leu Gly Gly Ser Leu Pro Leu Ile Ala Ser Val Asp Ser Phe Glu
145 150 155 160
Met Ile Ser Val Val Leu Ala Ile Tyr Gln Asp Ala Lys Tyr Lys Asp
165 170 175
Leu Gly Ile Asp Pro Lys Lys Tyr Asp Thr Arg Glu Ala Leu Gly Lys
180 185 190
Val Cys Thr Val Leu Lys Ser Lys Ala Phe Glu Met Asn Glu Asp Gln
195 200 205
Val Lys Lys Gly Lys Glu Tyr Ala Ala Ile Leu Ser Ser Ser Asn Pro
210 215 220
Asn Ala Lys Gly Ser Ile Ala Met Glu His Tyr Ser Glu Thr Leu Asn
225 230 235 240
Lys Phe Tyr Glu Met Phe Gly Val Lys Lys Gln Ala Lys Leu Ala Glu
245 250 255
Leu Ala
<210> 2
<211> 777
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
atgtctaagg ttaagctcac taaggaaaac attgttgctt tgttgacaca aggcaaagat 60
cttgaatttg aagaagatca gaatctggta gcatttaact tcaagacttt ttgtctggaa 120
aaccttgacc agatcaagaa gatgagcatt atttcatgtc tgacattcct gaagaatcgt 180
cagagtataa tgaaggttat taagcaaagt gattttactt ttggcaaaat cactataaag 240
aaaacttcag acaggattgg agccactgac atgaccttca gaaggcttga tagcttgatc 300
agggtcaggc ttgtcgagga aactgggaat tctgagaatc tcaatactat caaatctaag 360
attgcttctc accctctgat tcaagcctat ggattacctc ttgatgatgc aaagtctgtg 420
aggcttgcca taatgctggg aggtagctta cctcttattg cttcagttga tagctttgag 480
atgatcagtg ttgtcttggc tatatatcag gatgcaaaat acaaagacct cgggatcgat 540
ccaaagaagt atgacaccag ggaagcctta ggaaaagttt gcactgtgct aaaaagcaaa 600
gcatttgaaa tgaatgaaga tcaggtgaag aaagggaaag agtatgctgc tatacttagc 660
tccagcaatc ctaatgctaa aggaagtatt gctatggaac attacagtga aactcttaac 720
aagttctatg aaatgttcgg ggttaaaaaa caggcaaaac ttgcagaact tgcttaa 777
Claims (10)
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏编号为CCTCC NO:C202055。
2.一种番茄斑萎病毒的单克隆抗体，该单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株产生，其特征在于，所述单克隆抗体亚型为IgG1，轻链类型为κ。
3.一种检测试剂盒，该检测试剂盒内包括权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述检测试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光检测试剂盒中的一种。
4.一种免疫金标速测卡，包括标记垫和与标记垫相搭接的层析膜，其特征在于，所述标记垫含有被胶体金标记的权利要求2所述的单克隆抗体，所述层析膜上的检测线含有番茄斑萎病毒多克隆抗体，所述层析膜上的控制线含有羊抗鼠IgG二抗。
5.根据权利要求4所述的免疫金标速测卡，其特征在于，其制备方法如下：
步骤1、对番茄斑萎病毒重组蛋白进行纯化；
步骤2、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，获得多克隆抗体；
步骤3、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫小鼠，然后通过细胞融合、克隆化筛选制备得到单克隆抗体细胞株，最后制备小鼠腹水，经过纯化得到鼠抗番茄斑萎病毒单克隆抗体；
步骤4、通过配对筛选，得到配对的单克隆抗体和多克隆抗体用于所述免疫金标速测卡。
6.根据权利要求4所述的免疫金标速测卡，其特征在于，所述标记垫上单克隆抗体的量为5ng-50ng，层析膜上多克隆抗体的量为0.4μg-1.2μg。
7.根据权利要求5所述的免疫金标速测卡，其特征在于，所述步骤1中进行纯化的方法如下：
步骤5、选取病毒目标蛋白合成基因序列，并按照基因序列，合成原核表达载体pET-30a-TSWV，转化BL21与Rosetta；
步骤6、固体平板上挑取pET30a-TSWV单克隆菌落接入LB液体培养基，37℃培养12h-14h；
步骤7、次日，将步骤6中的菌种以1：50接入LB液体培养基，37℃培养至OD＝0.4-0.6，加入IPTG，20℃-30℃诱导表达3h-7h后菌液离心，收集菌体；
步骤8、将步骤7中的菌体进行超声波裂解，收集上清液和沉淀；
步骤9、将步骤8中的上清液利用树脂进行纯化，并用咪唑洗脱，收集洗脱液后透析去除咪唑，得到纯化后的番茄斑萎病毒重组蛋白。
8.根据权利要求4所述的免疫金标速测卡，其特征在于，所述步骤2中多克隆抗体的制备方法如下：
步骤10、将纯化后的番茄斑萎病毒重组蛋白和等体积的弗氏佐剂混合乳化均匀，呈油包水状态，以备免疫兔；
步骤11、将番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，皮下免疫3次，间隔4周，最后经ELISA检测；
步骤12、将免疫兔血清离心后取上清液，在搅拌的条件下加入饱和硫酸铵，继续搅拌后离心，取沉淀后溶于PBS，并透析过夜；
步骤13、将步骤83中的沉淀采用Protein G小柱进行传话，并保持PH呈中性，即得到多克隆抗体。
9.根据权利要求4所述的免疫金标速测卡，其特征在于，所述步骤3中单克隆抗体的制备方法如下：
步骤14、将纯化后的番茄斑萎病毒重组蛋白和等体积的弗氏佐剂混合乳化均匀，呈油包水状态，以备免疫小鼠；
步骤15、将番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，皮下免疫3次，间隔4周，最后经ELISA检测；
步骤16、最后一次免疫后2周，腹腔注射抗原进行加强免疫，3天后进行细胞融合；
步骤17、将融合好的细胞铺进孔板，用HAT培养液进行培养，3天后换液，改用HT培养液培养；
步骤18、使用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，10天后检测，将阳性克隆继续有限稀释法进行克隆化，直到得到的克隆都为阳性，可建立阳性细胞株；
步骤19、提前1周在小鼠腹腔注射矿物油，将细胞株注射入小鼠腹腔后收集腹水，离心后所得上清即为单克隆抗体腹水；
步骤20、将步骤19中的腹水离心后取上清液，在搅拌的条件下加入饱和硫酸铵，继续搅拌后离心，取沉淀后溶于PBS，并透析过夜；
步骤21、将步骤20中的沉淀采用Protein G小柱进行传话，并保持PH呈中性，即得到单克隆抗体。
10.根据权利要求5所述的免疫金标速测卡，其特征在于，其检测方法如下：
步骤22、加入待检样本；
步骤23、当样本中含有待检测物质时，检测线和控制线显色，当样本中不含有待检测物质时，检测线不显色，控制线显色。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113325182A (zh) * | 2021-05-26 | 2021-08-31 | 武汉华美生物工程有限公司 | 配对抗体的高效筛选方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1118983A (zh) * | 1993-01-29 | 1996-03-20 | 康乃尔研究基金会有限公司 | 西红柿斑点枯萎病毒 |
| CN104450623A (zh) * | 2014-11-10 | 2015-03-25 | 浙江大学 | 分泌抗番茄斑萎病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用 |
| CN111077317A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-28 | 贵州省烟草科学研究院 | 一种检测tswv的速测卡及其制备、使用方法 |
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2020
- 2020-10-27 CN CN202011163297.5A patent/CN112592899A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1118983A (zh) * | 1993-01-29 | 1996-03-20 | 康乃尔研究基金会有限公司 | 西红柿斑点枯萎病毒 |
| CN104450623A (zh) * | 2014-11-10 | 2015-03-25 | 浙江大学 | 分泌抗番茄斑萎病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用 |
| CN111077317A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-28 | 贵州省烟草科学研究院 | 一种检测tswv的速测卡及其制备、使用方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| INOUE T等: "Specificity of accumulation and transmission of tomato spotted wilt virus (TSWV) in two genera, Frankliniella and Thrips (Thysanoptera: Thripidae)", 《BULL ENTOMOL RES》 * |
| 潘慧等: "番茄斑萎病毒核衣壳蛋白N及膜多糖蛋白Gn的多克隆抗体制备及应用", 《福建农业学报》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113325182A (zh) * | 2021-05-26 | 2021-08-31 | 武汉华美生物工程有限公司 | 配对抗体的高效筛选方法 |
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